人胆囊组织蛋白质表达谱的建立

目的:建立胆固醇结石病人与正常人胆囊组织的蛋白质表达谱,用于比较胆囊组织的蛋白质组学研究,为阐明胆石成因提供实验依据.方法:提取胆固醇结石病人及正常人的胆囊壁组织总蛋白,构建相应的双向电泳表达图谱,应用ImageMaster图像分析软件对双向电泳图谱进行图像分析.结果:两组样本均获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,胆固醇结石组与正常组病人组内蛋白质平均匹配点数分别为632±61和606±64,各匹配率分别为73.46%和71.49%.组间蛋白质平均匹配点为474,匹配率为70.64%.胆固醇结石病人的28个蛋白点表达上调,7个点表达下调,与正常人间蛋白表达差异明显(P<0.05).结论:初步建立了胆固醇结石病人与正常人胆囊组织的差异蛋白质表达谱,分析两者间差异蛋白点,为胆石成因研究提供实验基础.

乳腺癌术后肌皮瓣重建术44例分析

目的:探讨乳腺癌术后一期乳房重建不同术式的疗效对比.方法:回顾分析本院2005年1月至2007年12月乳腺癌术后一期乳房再造44例.其中一期行背阔肌肌皮瓣移植者27例,横向腹直肌肌皮瓣移植者17例.结果:中位随访时间22.5个月,两种重建方式在客观效果评价、术后并发症和复发率方面均无统计学差异,但腹直肌肌皮瓣组的主观效果评价优于背阔肌肌皮瓣组(P =0.0462).结论:背阔肌肌皮瓣和腹直肌肌皮瓣移植仍是目前乳房重建的常用术式.而腹直肌肌皮瓣重建与背阔肌皮瓣相比具有一定的优势.

人源性乳腺移植模型:有效提高人源性乳腺癌细胞株在小鼠原位成瘤率的途径

目的:探索解决部分人乳腺癌细胞株在小鼠模型中成瘤率过低问题,以稳定提高乳腺癌小鼠模型的成瘤效率.方法:在雌性重症联合免疫缺陷症(severe combined immunodeficiency, SCID)小鼠的一侧胁腹皮下移植人源性正常乳腺组织,向移植组织内注射绿色荧光蛋白(GFP)标记的人乳腺癌细胞株MCF-7;同时以传统的小鼠乳腺脂肪垫(MFP)注射模型作为对照,即在雌性SCID小鼠一侧腹股沟MFP内注射同等数量GFP标记的MCF-7.从活体动物荧光成像仪和病理检测两个水平评估移植模型和MFP注射模型的原位成瘤率.结果:人源性乳腺移植小鼠模型的原位成瘤率在大体荧光观察下为95%(19/20例),在病理检测中为100%(20/20例);MFP注射模型的原位成瘤率在大体荧光观察下为0(0/20例),在病理检测中为15%(3/20例).人源性乳腺移植模型在大体(P<0.05)和镜下(P<0.05)两个水平的成瘤率都远高于传统的MFP注射模型.结论:人源性乳腺移植模型可显著提高人乳腺癌细胞株在小鼠模型上的原位成瘤率.

脾外伤回收血的变化及其对凝血功能的影响

目的:探讨脾外伤应用自体血回输技术,病人的回收血中血细胞及其相关指标的变化和其对凝血功能的影响.方法:2008年至2009年收治的24例单纯脾外伤行全脾切除的病人,分别在术前、回收血、回输后2 h采集血样,分析其血细胞计数、血红蛋白、凝血功能及血小板激活指标(P-选择素、血小板第4因子)的变化.结果:①回收血中红细胞计数、血小板计数、白细胞计数、血红蛋白、红细胞比容比循环血低;②回收血中P选择素、血小板第4因子增加;凝血因子Ⅶ活性、凝血因子Ⅻ活性降低,凝血酶原片段F1+2升高,凝血酶原时间、凝血酶时间、活化部分凝血活酶时间延长;纤维蛋白原减低;③回收血液中红细胞呈棘状细胞状;洗涤后,部分红细胞恢复至正常双凹圆盘状;④血液回输后与回收血相比, RBC计数及 Hct明显升高.结论:①回收血与循环血不同,表现为全血细胞数目不同,血小板被激活,循环血中凝血酶原片段F1+2水平升高,考虑凝血系统被激活;②回收血液并不会使循环血液内的血小板激活;③自体血液回收技术对RBC形态无明显影响.

索拉菲尼对肝癌细胞HepG2自噬的抑制作用

目的:研究化疗药物索拉菲尼(Sorafenib)对肝癌细胞HepG2自噬的作用及自噬与细胞增殖、细胞凋亡的关系.方法:常规细胞培养,以10 μmol/L的索拉菲尼作用不同时间,采用MDC染色,在荧光显微镜下观察自噬泡的情况;用Western印迹检测自噬相关蛋白LC3的动态变化;用3-MA抑制肝癌细胞中自噬的表达,并用CCK8法检测索拉菲尼及其联合3-MA对细胞生存率的影响,用AnnexinV/PI流式细胞仪检测抑制自噬后凋亡的变化.结果:HepG2经索拉菲尼作用后,自噬泡明显减少,LC3蛋白尤其是LC3-Ⅱ随着作用时间延长逐渐减弱;索拉菲尼联合3-MA可进一步抑制HepG2细胞中自噬的表达,抑制自噬后细胞死亡明显增加,特别是细胞凋亡明显增加.结论:索拉菲尼抗肝癌作用可能与抑制肝癌细胞自噬有关.

rFⅦa对重症急性胰腺炎术中凝血功能及出血量影响的临床研究

目的:前瞻性地观察使用重组活化凝血因子Ⅶ(rFⅦa,诺其)改善重症急性胰腺炎病人术中的凝血功能及减少术中出血量的有效性.方法:将南京军区南京总医院自2008年3月至2009年10月收治的40例重症急性胰腺炎实施胰周坏死组织清除引流术的病人随机分为两组,一组为rFⅦa组(研究组),一组为对照组,观察两组病人手术前后的凝血指标[包括凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)、国际标准化比值(INR)、纤维蛋白原(FIB)]和术中出血量.结果:研究组与对照组的PT、INR、术中出血量有显著差异(P<0.001),而APTT、FIB两组间差异无统计学意义(P>0.05).结论:rFⅦa能改善病人的外源性凝血功能,减少手术中的出血量.

胰腺癌细胞株PANC-1中肿瘤干细胞的体外耐药性研究

目的:根据肿瘤干细胞学说理论,探讨胰腺癌耐药的新机制.方法:通过胰腺癌肿瘤干细胞表面标记途径和侧群(side population, SP)细胞途径,分离出人胰腺癌细胞株PANC-1中的SP/NSP(非SP)细胞及CD44+CD24+/CD44-CD24-细胞亚群,用MTT检测上述各亚群细胞在体外对化疗药物耐受的差异,用Annexin V-PI双染法检测2种肿瘤细胞的抗凋亡能力,并采用实时荧光定量PCR检测两者耐药基因ABCG2、ABCB1和PLK-1表达的差异.结果:人胰腺癌细胞株PANC-1中的SP细胞比例为(7.64±0.96)%,CD44+CD24+细胞比例为(2.60±0.96)%.相对于NSP和CD44-CD24-细胞而言,SP和CD44+CD24+细胞具有更强的化疗耐受能力(P＜0.01)和抗凋亡能力(P＜0.01);荧光定量RT-PCR结果均提示,SP和CD44+CD24+细胞高表达耐药基因ABCG2、ABCB1和PLK1.结论:人胰腺癌细胞株PANC-1中SP及CD44+CD24+细胞具有更强的化疗耐受能力,研究胰腺癌肿瘤干细胞可为克服胰腺癌化疗敏感性差的现状提供新的实验基础和理论依据.

血红素加氧酶-1对重症急性胰腺炎小鼠模型保护作用的实验研究

目的:探讨血晶素(hemin)诱导血红素加氧酶-1(hemeoxygenase-1, HO-1)过表达对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)大鼠的胰腺和肝脏功能的保护作用及其可能的机制.方法:将70只雄性SD大鼠随机分为4组,正常组10只;SAP模型组(经胰管逆行注射3%牛磺胆酸钠)20只;HO-1促进剂组(造模后30 min腹腔注射血晶素75 μg/kg) 20只;HO-1抑制剂组(造模后30 min腹腔注射锌原卟啉,Zn-protoporphyrin, Zn-PP,20 μmol/kg)20只.造模后24 h,每组各处死10只大鼠,另10只观察自然存活时间.采用ELISA法检测血清IL-10、HO-1、TNF-α含量;用多功能生化分析仪检测ALT、AST、TBIL、BUN、CREA含量;用免疫组化法检测胰、肝组织NF-κB p65蛋白表达的情况;用HE染色法观察胰、肝组织病理学改变.结果:与SAP模型组相比,HO-1促进剂组大鼠的血HO-1、IL-10含量均显著增高(P<0.05),血TNF-α含量显著下降(P<0.05),肝肾功能指标显著改善(P<0.05),胰腺和肝脏病理改变有所减轻.而HO-1抑制剂组与HO-1促进剂组的指标变化相反.结论:HO-1过表达可改善SAP时的胰腺、肝脏病变及肝肾功能,其作用机制可能与促进IL-10表达、抑制NF-κB及TNF-α的表达有关.

乳果糖对门静脉高压鼠肠道屏障功能的影响

目的:研究乳果糖对门静脉高压大鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白的表达、细菌易位及内毒素血症的影响.方法:用50只雄性SD大鼠建立CCl4橄榄油复合法门静脉高压模型,并行影像学检验.造模后大鼠随机分为治疗组、对照组和单纯模型组.治疗组即乳果糖组,灌服乳果糖每次5 mL/kg,每日2次,直至大鼠排稀便(共7 d);对照组仅灌服相同浓度的葡萄糖水.8 d后处死大鼠,取血、肝、脾、肾和肠系膜淋巴结组织匀浆后作细菌培养,测细菌易位率;取小肠组织行HE、Masson染色和超微病理的观察研究;测定血内毒素;用免疫组织化学方法测定小肠紧密连接蛋白表达水平.结果:与对照组及模型组比较,治疗组细菌易位发生率明显降低(P<0.05),其肝功能得到显著改善(P<0.01),血清内毒素水平(0.18±0.09)EU/mL亦有明显降低(P<0.01),紧密连接蛋白表达亦有显著差异(P<0.01).结论:乳果糖灌胃可增加门静脉高压大鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白的表达,维持肠上皮紧密连接,减少肠道细菌易位,减轻内毒素血症,并在一定程度上改善肝功能.为临床门静脉高压病人的治疗提供新的思路和理论基础.

放大肠镜在重症急性胰腺炎早期的结肠黏膜损害中的诊断价值

目的:探索放大肠镜在重症急性胰腺炎(SAP)早期肠黏膜屏障功能障碍导致的结肠黏膜损伤诊断中的价值. 方法:对35例早期SAP病人进行放大肠镜检查,观察结肠黏膜有无损害,并取活检进行病理学光镜和电镜检查,同时对其进行APACHE Ⅱ评分、胃肠功能评分、胰周组织感染发生率统计.结果:71.4%(25/35)的早期SAP病人在放大肠镜检查中发现有结肠黏膜损伤,包括黏膜水肿、出血、糜烂.77.1%(27/35)的病人活检组织病理检查发现异常,包括黏膜上皮脱落、紧密连接缩短、细胞间分离.放大肠镜发现结肠黏膜损伤的病人其病理检查异常率、APACHE Ⅱ评分、胃肠功能评分、胰周感染发生率均高于未发现结肠黏膜损伤的病人.结论:对早期SAP病人进行放大肠镜检查,能够评估病人疾病的严重程度,预测病程进展中发生胰周感染的概率.

氧化型DHA抑制NF-κB信号通路达到化疗增敏作用

目的:比较氧化型DHA和非氧化型DHA对于NF-κB通路的不同作用,并比较对于NF-κB信号通路下游基因MMP-2、COX-2、CyclinD1的影响,探索DHA达到化疗增敏作用的机制研究.方法:细胞水平培养胃癌肿瘤细胞系MGC-803,设立多组对照试验,共分4组:对照组(不加药空白组)、5-FU化疗组、氧化型DHA联合化疗组(5-FU+氧化型DHA)、非氧化型DHA联合化疗组(5-FU+非氧化型DHA).使用敏感可靠的信号通路报告基因的检测方法,比较各组间肿瘤细胞NF-κB信号通路的激活情况,并检测NF-κB信号通路下游调控基因MMP-2、COX-2、CyclinD1的mRNA表达的差异.结果:化疗组(5-FU)较空白组NF-κB信号通路激活明显,氧化型DHA联合化疗组可抑制化疗引起的NF-κB信号通路激活.同样,氧化型DHA在抑制NF-κB信号通路激活的同时,也抑制了NF-κB下游调控基因MMP-2、COX-2、CyclinD1的mRNA的表达.非氧化型DHA的作用则相反,会进一步激活NF-κB信号通路.结论:氧化型DHA可通过抑制NF-κB通路来达到化疗增敏的作用,这为临床联合化疗用药提供了新的思路.

胰腺癌细胞解离中紧密连接蛋白claudin-1的表达和定位变化

目的:探讨claudin-1的表达及定位与胰腺癌细胞解离状态的关系.方法:利用免疫细胞化学和Western blot分别检测胰腺癌高、低转移株细胞中claudin-1、丝裂原活化蛋白激酶激酶2(MEK2)和磷酸化MEK1/2(p-MEK1/2)的表达变化,并观察其及相应细胞的形态学变化,探讨MEK2信号通路在胰腺癌细胞解离中的作用.结果:细胞解离因子能诱导胰腺癌低转移株细胞(PC-1、Capan-2)中MEK2和p-MEK1/2表达增加和细胞解离,并破坏claudin-1在细胞膜的定位.相反,U0126 (MEK1/2抑制剂)可诱导胰腺癌高转移株(PC-1.0、AsPC-1)细胞膜claudin-1的表达和细胞克隆形成,并明显抑制MEK2和p-MEK1/2的表达.结论:claudin-1表达及定位与胰腺癌细胞解离状态密切相关,其可能的分子机制是激活了MEK2信号通路.

葡萄糖诱发小鼠胰岛β细胞氢离子流改变的测定

目的:实时记录C57BL/6J小鼠胰岛β细胞原位状态下的氢离子(H+)流,观察其在葡萄糖刺激下的改变,以了解其在胰岛素分泌过程中的作用.方法:取8周龄雄性C57BL/6J小鼠,急性分离胰岛,置于含10%小牛血清的RPMI 1640培养基中孵育12 h,应用非损伤微测技术检测20 mmol/L葡萄糖对胰岛β细胞H+流的影响.结果:胰岛原位β细胞有基础性H+外流存在,检测48个胰岛的β细胞H+流,测得基础流速为(0.0205±0.0019) pmol/(cm2·s),葡萄糖刺激后的流速增加为(0.0519±0.0063) pmol/(cm2·s),差异显著(t=33.128, P<0.05).结论:通过非损伤微测技术,首次实时记录到胰岛β细胞原位状态下的H+外流,并发现其在葡萄糖刺激下的流速增加,为进一步研究胰岛β细胞H+流在胰岛素分泌过程中的作用提供了实验基础,对于深入探讨糖尿病的发生机制具有重要作用.

严格审核研究生的学位论文

在目前外科临床研究队伍中,研究生是一支重要的生力军,他们为外科的持续发展作出了很大的贡献.因此,如何培养好研究生是一项具有深远意义的任务.

课题申请书撰写中要注意的几个方面

医学院的教师、研究人员和附属医院的医师都面临着申请科研课题的问题.上海交通大学医学院每年都有大量的申请书递交到国家和上海市各级有关部门,而能够得到批准的申请只占其中一小部分.申请书没有中标的原因很多,但大多数是因为申请书本身书写的技术问题.本文根据对众多申请书的阅读,谈一些心得体会.

临床科研的选题与相关社会科学问题

由于医学教育发展的需要,当今国内的大中型医院基本都成为医学院校的附属医院或教学医院,临床医师的日常工作也由单纯的医疗扩展到了教学和科研两个新的内容.

APACHE O评分系统对急性胰腺炎预后的评估价值

急性胰腺炎是一种常见的外科急腹症, 病情复杂,预后差,APACHE Ⅱ评分系统是目前一较全面的多因素预后评分系统[1],但仍存在一定局限性.APACHE O评分系统(APACHE Ⅱ评分加肥胖指标评分)是近年提出的一种急性胰腺炎预后评分系统[2],本文旨在通过比较APACHE O评分与APACHE Ⅱ评分对急性重症胰腺炎的判断能力,对急性胰腺炎局部、全身并发症及死亡率的预测价值,旨在明确APACHE O评分系统对急性胰腺炎预后的评估价值.

痔上黏膜环切术(PPH)治疗老年人重度痔23例

1998年,Longon[1]首次报道通过直肠下端黏膜及黏膜下层组织环形切除治疗脱垂内痔的新方法,即吻合器痔上黏膜环切术 (procedure for prolapse and haemorrhoids,PPH),并取得了满意疗效,此后PPH在国内外迅速得到了推广.本研究分析我院2004年9月至2008年4月23例采用PPH治疗的Ⅳ度环状内痔老年病人(＞65岁)的临床资料,现报道如下.

进展期胃癌术中行区域性缓释化疗的安全性观察

我院于2009年1月至6月收治73例进展期胃癌病人,其中39例在胃癌根治术中行腹腔低渗温热灌注加区域性缓释化疗,并与行常规手术的对照组进展期病人比较,观察5-FU区域性缓释化疗的不良反应及并发症并进行分析.

血清CD40和CD40L的检测在胃癌病人中的表达

CD40分子是与T细胞和B细胞功能有关的一种表面抗原,属于肿瘤坏死因子受体(Tumor Necrosis Factor Receptor,TNFR)超家族成员.

乳晕旁单切口处理乳腺良性疾病的临床研究

近年,困扰女性的乳腺疾病发病率逐渐上升,尤其是乳腺癌,已成为严重影响妇女身心健康的"红颜杀手".大多乳腺疾病需通过外科手术治疗,故乳腺外科医师不仅需有扎实的理论基础,还需有美学的理念,特别是皮肤切口设计和缝合技巧的原则且乳腺重建形态应符合美学要求,不仅要不影响乳腺的功能,还应以美学的标准原则保持乳头、乳晕位置和形态,以保证术后有良好的美学效果.

多烯紫杉醇用于进展期胃癌的研究进展

多数胃癌病人在确诊时即已发生局部进展(T3,T4)和(或)远处转移(N3,M1),失去了手术机会.对Ⅲ期以上的胃癌病人而言,即便施行了肿瘤切除术,但近半数病人术后仍可能发生复发转移.

基因芯片数据挖掘与肿瘤分子分型研究

当前,飞速发展的基因组、转录组、蛋白质组、代谢组等"组学"技术产生了海量研究数据.以基因表达谱芯片为例,常用商用芯片的探针数约为43 000个,加上科学研究中对样本数量与重复次数的要求,一次实验实际产生的数据量异常巨大.

Peutz-Jeghers综合征伴小肠套叠、癌变一例报道

黑斑息肉综合征又名 Peutz - Jeghers 综合征(PJS),是一种临床少见的常染色体显性遗传病,表现为黏膜皮肤色素沉着与肠息肉形成,其发病率约为1/20 万[1].本病临床并不常见,我院曾收治1例PJS病人,该病人因肠梗阻入院,经手术证实发生癌变,现报道如下.

《外科理论与实践》杂志稿约