腺相关病毒介导的大鼠移植肝基因转移

目的研究腺相关病毒载体介导的移植肝基因转移的可行性和转导率.方法以绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因,在大鼠供肝冷保存前经门静脉注入不同剂量(1×1010 pfu/ml、5×1010 pfu/ml和1×1011 pfu/ml)的带有绿色荧光蛋白的腺相关病毒载体(AAV-GFP),保存后行异体肝移植,术后2、4及8周取供肝组织活检,运用免疫荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达,计算转导率,观察不同剂量的AAV-GFP及不同保存时间(1 h、4 h和10 h)对转导率的影响. 结果 3个剂量组肝移植术后第4周移植肝细胞内均可观察到GFP的表达,随着AAV-GFP剂量的增加,转导率也增加(6%、15%和34%);随着冷保存时间的延长, 转导率逐步提高(15%、32%和54%);除移植肝细胞外,脑、心、肺、肾、脾脏内均未见GFP 的表达;与对照组比较,移植肝功能的差异无显著性. 结论在模拟临床肝移植条件下,利用腺相关病毒可将目的基因转移入移植肝细胞内,且能高效表达;转导率随病毒剂量的增加、冷保存时间的延长而提高; 经冷保存途径腺相关病毒的转染具有嗜肝性;移植肝功能不受基因转导的影响.

雷帕霉素对环孢素A诱导的慢性肾毒性的影响

目的了解雷帕霉素(RPM)对环孢素A (CsA)诱导的慢性肾毒性的影响.方法对进低盐饮食的大鼠给予RPM与CsA溶剂、RPM(0.5 m g·kg-1·d-1与1 mg·kg-1·d-1)、CsA (4 mg·kg-1 ·d-1与8 mg·kg-1·d-1)以及两者联用,均用药28 d. 结果接受RPM 1 mg·kg-1·d-1的大鼠血糖明显升高,加重 CsA(4 mg·kg-1·d-1)诱导的慢性肾毒性作用;而亚治疗剂量的 RPM(0.5 mg·kg-1·d-1)与CsA(4 mg·kg-1·d-1) 联用只引起轻度的血糖上升及肾小管细胞受损与间质纤维化,与前者相比,P＜0.05 .治疗剂量的RPM(1 mg·kg-1·d-1)与CsA(8 mg·kg-1·d -1)联用则导致更为显著的肾功能受损、结构改变与高糖血症. 结论亚治疗剂量的RPM与CsA的联用可协同产生慢性肾毒性作用.

猪背驮式肝移植术中血清电解质的变化及其处理

目的了解猪背驮式肝移植实验中电解质的变化,并探讨处理措施.方法对猪施行背驮式肝移植,在恢复门静脉血流前10 min快速静脉滴注50 g/L碳酸氢钠2 ml/kg,测定麻醉后、无肝期、无肝期结束、门静脉开放新肝期开始后的外周静脉血以及门静脉开放即刻时门静脉血电解质浓度. 结果门静脉开放后外周血钾离子浓度呈进行性上升,门静脉血钾离子浓度明显较外周血钾离子浓度高(P＜0.01);门静脉开放前给予碳酸氢钠静脉滴注可以明显降低外周血和门静脉血钾离子浓度(P＜0.01). 结论门静脉开放前给予适量碳酸氢钠静脉滴注可以降低门静脉开放后一过性钾离子浓度升高.

大鼠胚胎睾丸异体异位移植的研究

目的探讨胚胎睾丸异位移植到成年大鼠体内是否能生长发育,并具内分泌功能.方法将胚胎睾丸分别移植至成年雄性Wistar大鼠颈部皮下和肾被膜下(移植实验组),并设实验对照组(摘除睾丸)和正常对照组,移植实验组于移植后第 5 d和10 d、25～35 d和35 d以上取出移植物,同时断头取血,经离心取上清液.常规染色观察移植物的生长发育情况;细胞化学染色、免疫组织化学染色和放射免疫法检测移植物功能状态. 结果移植的胚胎睾丸在成年大鼠体内可生长发育至成年状;睾丸间质3-β羟甾脱氢酶和油红O细胞化学染色呈阳性反应,睾丸间质细胞雄性激素及其受体、孕酮及其受体呈不同程度的阳性反应;血清睾酮、孕酮、卵泡刺激素和黄体生成激素接近正常值. 结论胚胎睾丸异位移植到成年大鼠体内后可正常发育,并具内分泌功能.

尼可地尔超极化心脏保存液保存兔心的效果

目的研究钾通道开放剂尼可地尔(nico randil)在心脏保存中的作用.方法 40个兔心随机分成4组,分别用含尼可地尔的KH液(超极化心脏保存液)、UW液、STH液和KH 液保存.采用Langendorff灌注模型和工作心模型,保存前、后测左室发展压、心室内压上升大速率、心室内压下降大速率、冠状动脉流量、肌酸激酶及乳酸脱氢酶,记录各组心跳停止和心电活动停止所需时间、心肌含水量、保存后心肌ATP含量. 结果尼可地尔组的各项指标(除心肌含水量外)均优于STH组和 KH组,达到了UW液的效果. 结论尼可地尔超极化心脏保存液保存兔心效果较好.

山莨菪碱对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨山莨菪碱对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法将雄性Wistar大鼠制成肝脏缺血再灌注模型,随机分为正常对照组、缺血再灌注组、生理盐水组和山莨菪碱组,观察肝脏缺血60?min再灌注1、3、6、 12及24?h后血浆和/或肝组织中内皮素-1(ET-1)、透明质酸(HA)、丙氨酸转氨酶(AL T)、丙二醛(MDA)和再灌注1?h后肝细胞内游离Ca2+([Ca2+]i)、A TP含量变化以及肝组织病理学改变. 结果肝脏缺血再灌注后血浆和/或肝组织中ET-1、HA、ALT、MDA 和肝细胞内[Ca2+]i含量均显著升高,而肝组织中ATP含量明显降低;肝脏缺血再灌注前应用山莨菪碱2.0?mg/kg者,血浆HA和肝细胞内[Ca2+]i含量明显降低,肝组织中MDA也有不同程度的降低,而肝组织中ATP含量明显升高,同时肝酶的漏出减少,肝组织病理学损害明显减轻. 结论山莨菪碱对肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用.

他克莫司与新型免疫抑制剂FK778或FK779联合应用预防大鼠心脏移植排斥反应

目的评价他克莫司(FK506)与FK778 或FK779联合应用预防大鼠心脏移植排斥反应的效果. 方法大鼠异位心脏移植后单独应用FK506、FK778和FK779进行免疫抑制治疗,并设联合用药组. 结果单独用药组与不用药对照组相比,移植心脏存活时间明显延长,FK779组尤其显著;联合用药组移植心脏存活时间不但比对照组明显延长,而且明显长于各药同剂量单用组,FK506与FK779合用组尤其显著. 结论 FK506、FK778和FK779均有很强的免疫抑制效应,FK506与FK7 78或FK779联合应用具有较强的协同效应.

不同器官保存液对大鼠肝脏透明质酸吸收率的影响

目的探讨不同器官保存液对大鼠肝脏透明质酸吸收率的影响,以评价它们对肝窦内皮细胞的保护作用. 方法大鼠肝脏原位灌洗后, 分别在UW液、Celsior液或Histidine -Tryptopan-Ketoglutarate液(HTK液)中低温保存16和24?h,然后用含透明质酸的Kreb -Henseleit液在37 ℃下连续循环灌注90?min,分别于灌注0、15、30、60和90?min时检测肝脏对外源性透明质酸的吸收率. 结果低温保存16 h,再灌注0、15、30、60和90?min时,3种保存液保存的肝脏对外源性透明质酸的吸收率均为负值,表明肝窦内皮细胞受到一定程度的损伤,但UW液和Celsior液对肝窦内皮细胞的保护作用较HTK液为优(P＜0.01);保存24?h者,UW液对肝窦内皮细胞的保护作用优于Celsior液和HTK液. 结论 UW液对肝窦内皮细胞具有较强的保护作用.

胸腺注射转染供者主要组织相容性复合物基因的T淋巴细胞诱导免疫耐受的实验

目的探讨受者胸腺内注射可表达供者主要组织相容性复合物(MHC)基因的受者T淋巴细胞诱导的免疫耐受的效果. 方法将携带供鼠(C57BL/6, H-2b)k位点基因cDNA的逆转录病毒载体质粒PXN(N2-B19-H-2Kb)经包装细胞PA317细胞包装为重组病毒后,感染体外培养的受鼠(Balb/c, H-2d)T淋巴细胞,再将此可表达供者MHC抗原的受者T淋巴细胞(H-2Kd b)回输受鼠胸腺内,然后将供鼠(H-2b)的皮肤移植给受鼠(H-2 d),观察免疫耐受的诱导情况. 结果外源性MHC基因(H-2Kb)整合到靶细胞(H-2d)染色体DNA,并有效地转录,在细胞膜上有H-2Kb分子表达;对照组移植皮肤平均存活时间(M ST)为9 d;注射单克隆抗体对照组MST为11 d;第三供者组MST为11.5 d;实验组( 胸腺回输H-2Kdb嵌合体T淋巴细胞)MST为35 d;实验组脾细胞对刀豆素A(ConA) 的增殖反应在正常范围,单向混合淋巴细胞反应对第三供者的脾细胞反应正常,但对特异供者的脾细胞无反应. 结论自身T淋巴细胞在胸腺内表达供者MHC抗原可在成年动物诱导出对供者移植物的特异性免疫耐受,无非特异性免疫抑制.

大鼠门静脉回流、胰液内引流术式胰腺移植模型的制作

目的建立大鼠门脉回流、胰液内引流的胰腺移植动物模型.方法以近交系雄性Wistar大鼠为供、受者,供胰门静脉与受者的肠系膜上静脉在低位相吻合,形成门静脉回流;供者的十二指肠与受者的近端空肠相吻合 . 结果 67只药物诱导的糖尿病大鼠移植术后存活超过7?d者46只, 其中42只非禁食情况下血糖正常;46只存活的大鼠血胰岛素浓度正常. 结论该模型符合正常生理特点,可以用于胰腺移植的免疫和生理研究.

雷帕霉素的研究进展

雷帕霉素(rapamycin,RPM)是1975年由加拿大Ayerst研究室从太平洋Easter岛的土壤样品中分离的链霉菌AYB-P44所产生的代谢产物.初,RPM作为低毒性抗真菌抗生素,197 8年发现它对自身免疫性疾病有免疫抑制作用.受此启发,1989年Morris正式开始把RPM作为器官移植抗排斥的新型免疫抑制剂进行试用,现在RPM不但已进行了III期临床试验,美国食品药品管理局已批准其应用于临床,而且已完成其化学结构的全合成.

肾移植术后并发格林-巴利综合征一例

患者,男性,25岁.因慢性肾炎、尿毒症于1999年12月30日行同种异体肾移植术,术后一般情况良好,服用霉酚酸酯(3个月后改为硫唑嘌呤)、环孢素A、泼尼松三联免疫抑制治疗.

肾移植术后骨髓增生异常综合征转化的急性单核细胞白血病一例

患者,男,54岁.7年前因慢性肾小球肾炎肾功能不全而行肾移植术,术后恢复良好.免疫抑制治疗采用环孢素A 12mg/d、硫唑嘌呤50mg/d和泼尼松10mg/d.1年后环孢素A的用量为4mg/d,硫唑嘌呤为75mg/d,泼尼松为10mg/d维持治疗.随访3年,血尿素氮及肌酐正常,尿量2 000～2 500ml/d,血液常规及生化检查均未发现异常.近3年每3 个月检查血常规1次.

肾移植术后并发颅内血肿二例

例1 男性,24岁.1996年5月21日行同种异体肾移植术.术后恢复良好, 给予环孢素A、硫唑嘌呤和泼尼松进行免疫抑制治疗.术后4个月,患者与家人发生激烈争吵后出现左侧头痛、恶心,无呕吐,无偏瘫失语,无抽搐及大小便失禁,次日因头痛加重入院,无头部外伤史 .

肾移植后带肾存活10年以上78例临床分析

我们自1979年10月至1990年5月共行尸体肾移植255例294次,其中移植肾有功能存活10 年以上者78例,长时间达20年,现将该78例情况报告如下.

抗独特型抗体抑制排斥反应的实验研究

我们运用抗独特型抗体诱导的方法,在移植受者体内诱导产生与移植物抗原具有相同抗原性的抗独特型抗体,观察其对排斥反应的抑制作用.

移植肾急性排斥反应时尿中表皮生长因子的变化及意义

表皮生长因子(EGF)是多肽生长因子中研究较多又较重要的一种,除颌下腺外,人体内以肾脏产生的EGF多,主要产生的部位在肾小管(髓袢及远端小管).尿中EGF的主要来源是肾脏.该生长因子的确切生理作用尚不完全清楚,但目前的研究表明,EGF在肾脏疾患病程中可能有其重要作用.为了解肾移植后急性排斥反应时尿中EGF的变化,我们对29例肾移植患者发生急性排斥反应前后尿EGF的变化进行了观察,并探讨其临床意义.

肾移植术后并发肺结核感染的诊断和治疗

由于肾移植术后应用免疫抑制剂,所以继发感染是肾移植的常见并发症,且有很高的死亡率,其中结核感染的诊断较为困难.1989年1月至1999年1 月我科共遇到13例肾移植后并发肺结核感染.

他克莫司和霉酚酸酯在肾移植术后早期肝功能不良者的应用

目的分析和评价肾移植术后早期肝功能不良患者使用他克莫司(FK506)和霉酚酸酯(MMF)的有效性和安全性. 方法 20例肾移植患者术后早期发生肝功能不良,17例(85.0% )丙氨酸转氨酶(ALT)升高,9例(45.0%)胆红素升高.发生肝功能不良时,停用环孢素A(CsA)和硫唑嘌呤(Aza),采用FK506、MMF和泼尼松三联用药,常规使用保肝及利胆治疗. 结果 20例肾移植术后肾功能全部恢复正常,未发生急性排斥反应;治疗2周后,82.4%患者(14/17)ALT恢复正常,4周后全部患者的ALT恢复正常. 结论 FK506和MMF用于肾移植术后早期肝功能不良患者是安全的, 不加重肝功能损害.

肾移植患者低密度脂蛋白受体TaqⅠ位点基因多态性及血脂水平检测

目的探讨肾移植患者脂代谢紊乱的一般特征及低密度脂蛋白受体(LDLR)TaqⅠ基因多态性对血脂水平的影响. 方法选择105例肾移植患者为病例组,60例血脂正常的健康人作为对照.检测空腹血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(DLC)、载脂蛋白及脂蛋白(a)[Lp(a)]水平.采用聚合酶链反应-限制性长度片段多态性方法检测LDLR TaqⅠ基因多态性.结果病例组于移植后3个月血脂水平即显著增高,于移植后6个月及1年时进一步升高;移植前血清TC、TG高于正常者仅占2.9%和7.6%,移植后3个月增高至28.6%和46.7%(P＜0.01),移植后6个月升高至40.0%和59. 0%,1年时升高至42.9%和62.9%,较3个月时显著升高(P＜0.05). 以TaqⅠ+/-型人数多,TaqⅠ+/+型少;对照组Taq基因型分布与病例组的差异无显著性(P＞0.05);不同基因型的受者血脂水平有所不同, 多数指标依TaqⅠ-/-、TaqⅠ+/-和TaqⅠ+/+顺序递减;对照组因LDLR TaqⅠ基因型的不同,血清TC、LDLC水平的差异具有显著性,病例组除TC和LDLC外,TG、HDLC和Lp(a)的差异也有显著性. 结论肾移植术后易发生脂代谢紊乱,等位基因LDLR TaqⅠ是脂代谢紊乱发生的危险因子.

前列腺素E1在肾移植中的应用

目的探讨前列腺素E1(PGE1)对移植肾功能恢复的影响.方法对96例肾移植受者术中及术后每天给予PGE1 90 μg,与同期内83例未使用前列腺素E1的肾移植受者进行对比,比较两组术后尿量、血肌酐、内生肌酐清除率、B型超声波下移植肾血流阻力指数以及两组肾功能恢复延迟和急性排斥反应的发生率. 结果应用前列腺素E1的患者术后尿量及内生肌酐清除率均明显高于对照组,而血肌酐、血流阻力指数和肾功能恢复延迟发生率则明显低于对照组,但两组急性排斥反应发生率的差异无显著性. 结论前列腺素E1有利于肾移植术后移植肾功能的恢复,但不降低急性排斥反应发生率.

他克莫司、霉酚酸酯和血浆置换联合应用治疗肾移植术后急性体液性排斥反应

目的探讨他克莫司(FK506)、霉酚酸酯和血浆置换联合应用治疗急性体液性排斥反应的效果. 方法 6例肾移植后发生急性体液性排斥反应的患者,术后采用环孢素A、霉酚酸酯和激素行免疫抑制治疗,发生急性体液性排斥反应时经甲泼尼龙和抗胸腺细胞球蛋白治疗无效,行血浆置换4～6次,并给予FK506(0.2 mg·kg-1·d -1)及霉酚酸酯(由2 g/d加至3 g/d)治疗. 结果经4～6次血浆置换和FK506、霉酚酸酯治疗,排斥反应得到逆转,6例患者肾功能均恢复良好,随诊3～18个月,患者的血肌酐水平为(125.2± 26.5) μmol/L. 结论 FK506、霉酚酸酯和血浆置换联合应用能有效地逆转急性体液性排斥反应.

同种异体肝移植术的麻醉处理及术中监测

目的探讨成人同种异体肝移植术的麻醉处理及术中生理及血清电解质的变化.方法所有患者选用静脉复合麻醉,术中监测动脉压、中心静脉压、心电图、血液气体、电解质、体温等. 结果无肝期开始和新肝期开始均出现血压明显下降(P＜0. 05,P＜0.01),无肝前期体温低,静脉转流开始后血液经变温器加温后体温逐步升高,且能维持在正常范围,停机后体温又逐步下降,术毕体温为(36.1±1.1 )℃;术中动脉血氧分压和二氧化碳分压均在正常范围,pH和剩余碱等代谢性指标变化较大;无肝期钾离子有上升趋势,新肝期开始10min内血钾偏高,以后明显下降,需快速补钾才能维持血钾浓度在正常范围内. 结论原位肝移植术的麻醉好选择静脉复合麻醉,选用对肝、肾功能影响小的药物,同时要保持循环稳定,纠正低温、低钾、高钾,保护肾功能.

去甲肾上腺素对肝移植术后早期血流动力学的影响

目的研究去甲肾上腺素对肝移植术后早期异常血流动力学状态(高排低阻)的影响. 方法对肝移植术后即刻周围血管阻力＜10 Mn·s·cm-5 的患者通过微量注射泵持续24 h给予去甲肾上腺素,观察其血流动力学和氧合代谢指标. 结果给予去甲肾上腺素的治疗组自治疗1 h起平均动脉压和周围血管阻力即明显高于治疗前和对照组(常规治疗者)相应时刻数值,但未超出正常值范围, 氧摄取率也自治疗1 h起明显升高;治疗组的心率、心输出量、肺血管阻力和每小时尿量等均未发生明显变化. 结论去甲肾上腺素可纠正肝移植术后早期高排低阻的异常血流动力学状态,改善组织缺氧.

同种异体原位肝移植的肝动脉重建

目的总结同种异体原位肝移植术中肝动脉吻合的经验.方法回顾性分析20例原位肝移植术中影响肝动脉吻合的因素和处理技巧. 结果 16例行供、受者肝固有动脉端端吻合,3例供者肝总动脉与受者肝固有动脉吻合,1例供者肝总动脉与受者脾动脉吻合;术后彩色多普勒超声监测显示肝动脉血流通畅, 均未发现有血栓形成或肝动脉狭窄, 全部病例未发生胆道并发症,现存活15 例.结论合理选择吻合用血管是避免术后发生血栓形成和动脉狭窄的关键.

在体移植免疫实验研究应注意的几个问题

近年来我国的移植工作者在努力做好临床工作的同时,越来越重视基础研究工作,并已取得不小的进步,但同时也暴露了一些问题.不少研究者的想法相当不错,但是在实施过程中缺乏必要的基础知识和设计技巧,或实验体系存在明显缺陷,降低了结果的可信度;或无法获得预期结果;或对结果的解释不够客观,终导致事倍功半,论文质量差强人意.笔者以为,在体移植免疫实验研究应从以下几方面予以充分重视.

可溶性白细胞介素2受体在急性移植物抗宿主病诊断中的意义

目的研究造血干细胞移植后细胞因子及其受体水平的变化与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系,以探讨预测aGVHD的临床指标 . 方法 30例血液病患者行异基因造血干细胞移植,采用双夹心酶联免疫吸附法(ELISA)动态监测血清中可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)、白细胞介素6、白细胞介素8、干扰素及肿瘤坏死因子水平的变化. 结果 30例患者均获得造血重建,10例发生Ⅰ度GVHD,5例发生Ⅲ～Ⅳ度GVHD;sIL-2R在发生aGVHD组于移植后第2周上升,第3周达峰值,其升高早于aGVHD症状的出现,与疾病的严重程度显著相关,随症状的缓解而下降;其它细胞因子水平的变化不显著,与aGVHD的发生无明显关系. 结论造血干细胞移植后aGVHD的发生伴随某些细胞因子水平的变化 ,sIL-2R在aGVHD症状出现前明显上升,可作为预测aGVHD的指标.

骁悉(霉酚酸酯)问答