糖化血清蛋白对糖尿病合并急性冠状动脉综合征的诊断意义

目的 观察糖尿病合并急性冠状动脉综合征(ACS)患者中糖化血清蛋白(GSP)水平的变化,探讨GSP对糖尿病合并ACS的诊断意义.方法连续选取海军总医院2008年1-12月收入院的2型糖尿病合并冠心病(CHD)患者共72例,按照合并CHD类型的不同将患者分为:对照组(n=27),合并稳定型心绞痛(SA);观察组(n=45),合并ACS.检测患者的空腹血糖(FPG)、GSP、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平的变化.以GSP=210tμmol/L作为分界点,将72例2型糖尿病患者分为暴露组(GSP>210μmol/L,n=40)和非暴露组(GSP≤210μmol/L,n=32),采用OR χ~2检验分析两组患者罹患 ACS 风险的差异.结果 两组TC、TG、LDL-C、HbA1c水平无明显差异(P>0.05).与对照组比较,观察组的FPG、GSP水平明显升高(P<0.05),HDL-C水平明显降低(P<0.05).暴露组患者GSP水平(275.1±57.9μmol/L)和ACS发生率(75.O%)均明显高于非暴露组(173.3±24.3,46.9%,P<0.05),前者罹患ACS的风险是后者的3.400倍(χ~2=6.000,OR=3.400,P=0.014,95%CI:1.254～9.216).结论 2型糖尿病合并ACS患者GSP的升高较HbA1c更加明显,测定GSP可能具有鉴别诊断及进行危险度分层的作用.

子宫肌瘤舌象特征的文献分析

目的 研究关于子宫肌瘤舌象特征的文献,探讨子宫肌瘤舌象的共性特征.方法检索CNKI(1999-2008)数据库,以"子宫肌瘤"及"舌"为关键词,检索出文献629篇.进一步筛选有舌诊记录的文献189篇,累计病例1 796例,并分析子宫肌瘤时出现的各种舌质与舌苔的百分比.结果 子宫肌瘤中暗舌出现率为57.07%,瘀点舌出现率为48.11%.从辨证的角度分析,气滞血瘀证的瘀点舌出现率为67.04%,暗紫舌出现率为54.93%;气虚血瘀证的淡舌出现率为81.03%,瘀点舌出现率为42.56%;痰湿内阻证的白腻苔出现率为82.44%,暗紫舌出现率为81.68%,胖大、齿痕舌出现率为67.18%;瘀血内阻证的瘀点舌的出现率为89.15%,暗红舌出现率为40.31%.结论 子宫肌瘤的舌象特征为暗舌和瘀点舌,且各种常见证型具有各自的舌象特征.这些舌象特征可运用于对子宫肌瘤的体质辨识和健康管理.

阿德福韦酯治疗HBeAg阳/阴性慢性乙型肝炎的病毒学应答研究

目的 探讨阿德福韦酯(ADV)治疗HBeAg阳性/阴性慢性乙型肝炎(e~+/e~- CHB)过程中的病毒学应答异同,为ADV在e~+/e~-CHB中的抗病毒治疗过程提供个体化指导.方法选取e~+CHB和e~-CHB患者各40例,两组均口服ADV片10mg,1次/d,连续服用52周,停药后观察12周.分别于治疗前,治疗期间第4、12、24、36、48、52周,停药后第12周对患者进行HBV DNA定量检测,同时监测肝功能、乙肝病毒血清标志物(HBVM)gt其他指标.结果 除第4、12周外,e~-CHB患者HBV DNA转阴率在各观察时间点均高于e~+CHB患者(P<0.01),e~+CHB患者HBV DNA转阴率在52周内持续升高,于第52周达到高峰55.3%(21/38),而e~-CHB患者在第24周即达到高峰97.5%(39/40),此后维持在84.6%(33/39);e~-CHB患者HBV DNA转阴率高峰出现的时间点早于e~+CHB患者,导致其治疗路线图不同.停药后第12周,e~+CHB组患者的HBV DNA复发率[5.3%(2/38)]明显低于e~-CHB组[23.1%(9/39),P<0.05].两组患者耐受性均良好,无明显肾功能损伤等不良反应.结论 ADV能有效抑制e~+/e~-CHB患者的病毒复制,52周内e~-CHB的总体治疗效果优于e~+CHB.

小儿上消化道异物的内镜治疗

目的 探讨小儿上消化道异物内镜治疗的特点与策略.方法 2004年1月至2009年6月沈阳军区总医院内窥镜科急诊救治的10岁以下上消化道异物患儿32例,回顾性分析其临床资料和治疗数据.结果 32例患儿治疗均取得成功,无并发症发生,死亡率为0%,其中2～4岁小儿病例数占53.1%(17/32).取出异物及相应患儿例数分别为:5角硬币7例,1元硬币10例,项链坠4例,戒指4例,钢钉1例,口腔科根管治疗针1例,桂圆核1例,铁拉锁头1例,铜钱币1例,鱼刺1例,指甲刀配件1例.32例患儿中应用水合氯醛灌肠法镇静麻醉10例,应用安定镇静1例.食管异物嵌顿18例,包括食管第一狭窄处5例,第二狭窄处7例,第三狭窄处6例;胃内异物14例.在患者配合良好的情况下,内镜下取出异物所需要的时间一般为2～5min;胃内异物取出因受食物干扰,所需时间达8min.结论 急诊内镜是治疗小儿上消化道异物的首选方法,安全、可靠.简单麻醉和特殊技巧的应用是进一步提高治疗水平的重要方法.

超声引导下经皮穿刺多支胆道外引流管置入在晚期肝门胆管癌中的应用

目的 探讨超声引导下经皮穿刺多支胆道引流管置入在晚期肝门胆管癌中的应用价值.方法选取2006年1月-2008年12月32例经超声、强化CT、磁共振(MRI)及经内镜逆行性胰胆管造影(ERCP)检查确诊为晚期肝门胆管癌的患者,制定合理的穿刺计划后,在超声引导下采用Seldinger技术(导丝导管交换技术)依次置入3或4支胆道外引流管,对肝内扩张胆管进行外引流,观察患者接受治疗后黄疸指数的变化及并发症发生情况,在患者生存期进行随访,对治疗效果进行综合评价.结果 32例行多支胆道外引流的患者,共置入外引流管109支,其中19例同时置入3支,13例同时置入4支.所有靶胆管均完成引流管置入,成功率100%.术后4～8周黄疽完全消失28例,明显减轻4例.出现并发症2例,对症处理后均好转.患者生存期短4个月,长15个月.结论 对于不能手术切除的晚期肝门胆管癌患者,超声引导下经皮穿刺多支胆道外引流管置入术是一种准确、安全、有效的方法,对解除恶性梗阻性黄疸有较高价值.

DeBakey Ⅰ型急性主动脉夹层围术期处理策略

目的 总结DeBakey Ⅰ型主动脉夹层围术期处理要点.方法纳入2004年2月-2008年1月解放军总医院完成DeBakey Ⅰ型主动脉夹层急诊手术的19例患者,其中男16例,女3例,年龄43.6±9.4岁.全部替换升主动脉,同期替换主动脉根部(Bentall)5例、主动脉瓣2例、右半弓11例、全弓6例(其中降主动脉内带膜支架4例、传统象鼻手术1例),同期行二尖瓣成形术1例.涉及主动脉弓部的手术均在深低温停循环下完成.16例经右腋动脉插管.围术期处理策略:入院后立即应用大剂量β受体阻断剂和硝普钠等将收缩压控制在90mmHg左右,2h内完成主动脉CT扫描三维重建、超声心动图、心电图、X线胸片和实验室检查等急诊术前准备.术中根据夹层和内膜破口的部位采取简便可行的手术方案,以挽救生命为第一目标.常规使用超滤以减轻水负荷和炎症反应.术毕将收缩压严格控制在90mmHg左右.术后强化镇静和呼吸机治疗,强调使用呼吸机呼气末正压(PEEP),待低氧血症纠正和肺水肿消退后方可脱离呼吸机.结果 19例患者体外循环时间215.9±73.6min,主动脉阻断时间138.2±55.7min,脑部停循环时间29.3±11.5min.呼吸机辅助通气时间156.1±112.8(11～460)h.死亡3例(15.8%);发生须行血液透析的一过性肾功能不全1例,慢性心包填塞行穿刺引流2例;发生低氧血症(氧合指数PaO_2/FiO_2≤300)10例,其中5例术前已存在低氧血症.结论 DeBakey Ⅰ型主动脉夹层手术风险大,完善的围术期处理是降低死亡率的重要保障.

脂联素对人脐静脉内皮细胞MCP-1和IL-8表达的影响

目的 探讨脂联素对肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌白细胞介素-8(IL-8)、单核细胞趋化因子-I(MCP-1)的影响.方法收集新生儿脐静脉并分离培养HUVECs,采用标记链霉素抗生物素-生物素法(LSAB法)荧光染色检测内皮细胞特有的Ⅷ因子相关抗原.将HUVECs随机分为对照组、TNF-α刺激组(分别以5、10、20、50μg/L TNF-α刺激)和脂联素干预组(以5、30、50mg/L脂联素进行干预,然后加入终浓度20μg/L的TNF-α).分别采用PCR及ELISA法检测各组IL-8及MCP-1的mRNA和蛋白表达水平.结果 荧光染色结果显示HUVECs胞质中Ⅷ因子相关抗原阳性,证实是血管内皮细胞.HUVECs经TNF-α刺激后,TNF-α刺激组IL-8及MCP-1的蛋白和mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.01),且随着TNF-α浓度的增加,MCP-1和IL-8的蛋白表达量也呈增加趋势.与20μg/L TNF-α刺激组相比,5mg/L的脂联素干预组IL-8及MCP-1的蛋白、mRNA表达均无显著差异;但30、50mg/L脂联素干预组IL-8及MCP-1的蛋白、mRNA表达明显减弱(P<0.01).结论 脂联素可能通过抑制血管内皮细胞趋化因子IL-8及MCP-1的表达来调节血管内皮细胞的炎症反应,从而发挥其抗炎、抗动脉粥样硬化的作用.

辅助腹腔复苏对休克大鼠肠系膜淋巴活性的影响

目的 探讨辅助腹腔复苏(IR)对失血性休克(HS)大鼠肠系膜淋巴活性的影响.方法采用股动脉放血法制作Hs大鼠模型,在HS或假休克(SS)后60min行传统方法(CR)或CR联合辅助腹腔复苏(CR+IR).实验大鼠分为6组:①SS组(n=4),②SS+CR组(n=4),③SS+CR+IR组(n=4),④HS组(n=4),⑤HS+CR组(n=5),⑥HS+CR+IR组(n=5).所有HS大鼠的平均动脉压(MAP)控制在40mmHg,SS大鼠仅行动脉插管不放血,CR处理时静脉给予乳酸林格液(80ml/kg),IR处理时在CR的基础上同时腹腔注射腹膜透析液20ml/只.复苏后2h剖腹收集肠系膜淋巴液,测定与淋巴液共培养后的中性粒细胞呼吸爆发活性.实验结束时处死大鼠,取回肠组织,光镜下观察肠黏膜绒毛形态,评价肠黏膜损伤程度.结果 HS组肠系膜淋巴活性显著高于SS组.与CR处理比较,CR+IR能显著抑制休克肠系膜淋巴介导的中性粒细胞的呼吸爆发作用(P<0.05),降低休克淋巴的活性水平.HS组肠黏膜绒毛顶端损伤增多,与SS组比较差异显著(P<0.01);与CR处理相比,CR+IR能明显减轻肠黏膜绒毛的损伤(P<0.01).结论 在CR基础上进行IR能有效保护肠道屏障的完整性,降低休克后肠系膜淋巴活性.

GRP78在HepG2细胞的亚细胞定位及真核表达

目的 构建GRP78的真核表达载体以检测GRP78在HEK293细胞中的表达和定位.方法采用激光共聚焦显微镜观察GILP78在HepG2细胞中的定位,用RT-PCR方法从HepG2细胞中扩增GRP78 cDNA序列,构建真核表达载体peDNA3.1-GRP78,转染HEK293细胞,分别用Western blotting和激光共聚焦显微镜检测GRP78在HEK293细胞中的表达和定位.结果 GRP78在HepG2细胞的胞膜和胞质均有表达,GRP78在细胞膜上均匀分布.双酶切鉴定和核酸序列分析证实pcDNA3.1-GRP78真核表达质粒构建成功,该表达质粒转染HEK293细胞后可以瞬时表达GRP78蛋白.结论 正常状态下,GRP78在HepG2细胞胞膜和胞质均有表达.pcDNA3.1-GRP78转染HEK293细胞后能瞬时表达GRP78蛋白,为进一步研究GRP78的功能提供了重要工具.

几种肠道疾病患者肠道菌群结构特征的DNA指纹图谱分析

目的 建立肠道疾病患者肠道细菌的DNA指纹图谱,并分析其肠道菌群结构特征的整体差异.方法选取消化科37例经结肠镜确诊的肠道疾病患者,包括溃疡性结肠炎(UC)患者20例、肠易激综合征(IBS)患者6例、急性胃肠炎患者11例,另取11名健康成人作为正常对照.提取粪便标本细菌总DNA,应用肠杆菌基因间重复共有序列基因扩增技术(ERIC-PCR)建立肠道菌群的DNA指纹图谱并分析其整体差异.结果 UC患者样本DNA条带明显少于其他肠道疾病患者和正常对照,提示UC、急性胃肠炎、IBS和正常对照的肠道菌群存在整体差异.17例UC患者标本DNA主带出现在0.7kb处,11例急性胃肠炎患者样本在0.8kb和1.1kb处显示2条DNA主带,而正常对照和IBS患者样本DNA主带均无统一趋势.结论 UC可能存在较单一的肠道优势菌群,其发病机制可能与特定的肠道细菌感染有关.

α-硫辛酸对高糖作用下血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的 观察α-硫辛酸对高糖作用下血管内皮细胞的细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法 实验分3组:正常对照组(NG,5.5mmol/L葡萄糖);高糖组(HG,30mmol/L葡萄糖);药物干预组[30mmol/L葡萄糖+不同浓度α-硫辛酸(50、100、200μmol/L)].脐静脉内皮细胞株在不同条件下孵育48h,采用黄嘌呤氧化酶法测定各组内皮细胞SOD活性,以硫代巴比妥酸为底物检测MDA含量,ELISA法测定各组内皮细胞ICAM-1蛋白浓度,RT-PCR法检测内皮细胞ICAM-1 mRNA表达水平.结果 与NG组相比,HG组内皮细胞SOD活性明显降低(P<0.01),MDA含量、ICAM-1蛋白及mRNA表达水平明显上升(P<0.01);与HG组相比,药物干预组内皮细胞SOD活性明显升高(P<0.01),MDA含量、ICAM-1蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05).结论 α-硫辛酸可改善高糖作用下血管内皮细胞的氧化应激,抑制内皮细胞ICAM-1的表达水平.

模拟HCV HVR1免疫7肽对免疫细胞分泌细胞因子的影响

目的 了解在模拟HCV HVR1免疫7肽(7P)的刺激下,正常人免疫细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素4(IL-4)的细胞频数变化,并探讨其作用机制.方法分离正常人外周血单核细胞(PB-MCs),分为CD4~+ CD8~- T细胞组、CD4~- CD8~+ T细胞组、NK细胞组、NKT细胞组四组,各组设阴性对照及豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯(PMA)阳性对照,与7P共同孵育后,应用IL-10、IFN-γ、TNF-α、IL4流式抗体进行细胞内因子检测,采用FAGS Calibur流式细胞仪及FACS Calibur软件进行检测分析.结果 与阴性对照组相比,分泌IFN-γ的细胞频数在NK细胞、NKT细胞以及CD4~+ CD8~-、CD4~-CD8~+ T淋巴细胞均明显增高(P<0.01);分泌IL-4的细胞频数变化不明显;分泌IL-10的细胞频数在CD4~+ CD8~-、CD4~- CD8~+ T淋巴细胞表现为升高(P<0.01,P<0.05),在NK细胞、NKT细胞表现为下降(P<0.01);分泌TNF-α的细胞频数在CD4~+ CD8~- T淋巴细胞表现为下降(P<0.01),在NK细胞表现为升高(P<0.01).结论 7P能够通过调节细胞因子分泌改变免疫细胞的免疫反应方式,这种调节在以NK、NKT细胞为代表的固有免疫细胞和以CD4~+ CD8~-、CD4~- CD8~+ T细胞为代表的适应性免疫细胞之间存在差异,可能有利于在清除病毒的同时缓解炎症反应.

抑制NRP2表达对淋巴管内皮细胞小管成型的影响

目的 探讨抑制神经纤毛蛋白质2(NRP2)基因表达对人淋巴管内皮细胞(LECs)体外形成小管能力的影响.方法从人新鲜包皮中分离纯化LECs,并进行鉴定.实验设NRP2-RNAi/LECs组、mock/LECs组和hECs组,三组分别转染pGensil-NRP2(携带NRP2 siRNA的真核表达载体)、pGensil-1(空载体)及正常LECs细胞.采用RT-PCR和Western blotting检测NRP2 mRNA和蛋白的表达;绘制细胞生长曲线以观察各组细胞生长的差异.对细胞进行三维胶培养,计数小管样结构的数量,并测量小管外径、内径和管壁厚度.结果 与hECs组和mock/LECs组比较,NRP2-RNAi/LECs组NRP2表达水平明显下调(P<0.05),而前两组间无显著差异(P>0.05).生长曲线显示三组细胞的增殖能力无显著差异,均于接种后3～5d进入对数生长期,6～7d进入停滞期.三维胶培养形成的管样结构在NRP2-RNAi/LECs组很少见,其管样结构的数量及小管外径、内径、管壁厚度都明显低于mock/LECs组和hECs组(P<0.05),而后两组间无显著差异(P>0.05).结论 抑制NRP2的表达可抑制LEGs在体外形成小管的能力,并可能抑制肿瘤淋巴管的生成.

20例散发性激素耐药型肾病综合征儿童NPHS2和WT1基因突变分析

目的 初步分析散发性激素耐药型肾病综合征(SRNS)JL童的NPHS2和WT1基因突变及其特点.方法选择20例南方汉族散发性SRNS儿童作为实验组,另选50例尿检正常的南方汉族成年人作为对照组.应用PCR、DNA直接测序法、PCR/限制性片段长度多态性进行NPHS2和WT1基因突变分析.结果 对20例SRNS儿童NPHS2和WT1基因的全部外显子及其周围的部分内含子进行检测,未发现NPHS2和WT1致病突变,但检测到2个已报道的NPHS2基因多态性(102G>A和954T>C)和6个WT1基因变异(5'-UTR-7G>T、126C>T、IVS3+16G>A、WS5-64A>G、903A>G和IVS7-32C>A).其中,IVS5-64A>G为新发现的WT1基因多态性.与对照组比较,实验组的1个NPHS2基因多态性(102G>A)和6个WT1基因多态性的基因型频率和等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05).结论 NPHS2和wn基因突变不是本研究散发性SRNS儿童的主要致病原因.

新生小鼠视网膜光感受器前体细胞的体外培养及鉴定

目的 对新生小鼠视网膜光感受器前体细胞进行分离和鉴定.方法同窝新生小鼠14只,随机分为7组(P1-P7),每组2只,出生后连续7d每天取1组幼鼠,分离视网膜并进行体外培养,观察其生长状况.传代后培养2周,然后采用细胞荧光免疫组化法检测细胞中的5-溴-2'脱氧尿嘧啶(BrdU)、细胞神经上皮干细胞蛋白(Nestin)、神经视网膜亮氨酸拉链(Nrl)和视蛋白(Opsin)的表达情况,并对视网膜光感受器前体细胞性质进行分析.结果 在特定的培养基中,部分P1-P7各组新生小鼠视网膜细胞贴壁生长,荧光免疫组化标记显示传代后生长细胞大部分为BrdU阳性细胞.P1-P7组Nestin阳性率分别为31.0%、31.6%、32.3%、30.2%、31.2%、30.9%、29.5%.Nrl阳性细胞数出生后3d开始明显增多,随后小幅增加,P1-P7组阳性率分别20.6%、35.2%、65.5%、68.6%、71.6%、73.O%、73.3%.P1-P4组细胞不表达Opsin,P5-P7组少量细胞表达Opsin.结论 新生小鼠视网膜存在视网膜光感受器前体细胞,该细胞具有分裂增殖能力及向视网膜光感受器细胞分化和表达视蛋白的潜能,并于生后3d明显增多,此后逐渐分化为成熟的光感受器细胞.

SEA组件174-201位氨基酸对大鼠黏蛋白rMuc3羧基端酶切的影响

目的 探讨大鼠黏蛋白3(rMuc3)羧基端SEA组件内174-201位氨基酸对LSKGSIVV基序酶切的影响.方法采用Clustal X 1.83软件对包含SEA组件的蛋白质进行比对,选择SEA组件后续79个氨基酸中保守的氨基酸残基,利用定点突变技术将这些保守残基突变为终止密码子,分别命名为p20t1、p20t2、p20t3、p20t4,并测序验证.将不同长度的突变体转染COS-7细胞,用N端V5标签抗体行Western blotting,检测各突变体的酶切情况.结果 rMuc3羧基端第174位丝氨酸(S)、第201位半胱氨酸(C)、第212位酪氨酸(Y)、第223位酪氨酸(Y)在多种含SEA组件的蛋白质中非常保守.Western blotting检测结果表明,含rMuc3羧基端的p20及突变体p20t2、p20t3、p20t4的表达产物在LSKGSIVV基序处均能发生酶切,均可检测到30kD的酶切后片段,但p20tl的表达产物在LSKGSIVV位点处不能发生蛋白酶切.结论 rMuc3羧基端第174位S至第201位C残基对LSKGSIVV基序酶切的发生至关重要,是SEA组件在LSKGSIVV基序发生蛋白酶切的另一必要条件.

小鼠膜联蛋白A1真核表达载体的构建及其细胞内定位

目的 构建小鼠膜联蛋白A1(annexin-A1,ANXA1)真核表达载体,并检测其在NIH3T3细胞中的表达和定位.方法 采用PCR法从小鼠肝cDNA文库扩增ANXA1基因编码序列,并将其克隆至带有血凝素(HA)标记的真核表达载体pcDNA3-HA上,经PCR、酶切和测序鉴定后,将重组质粒pcDNA3-HA-ANXA1瞬时转染NIH3T3细胞,采用细胞免疫荧光法检测目的 基因表达情况.结果 菌液PCR、双酶切和DNA测序结果均表明重组质粒pcDNA3-HA-ANXA1构建正确,并可在NIH3T3细胞的胞质、胞核和胞膜中广泛表达.结论 成功构建了pcDNA3-HA-ANXA1真核表达载体,该载体中的HA-ANXA1融合基因能在哺乳动物中有效表达并正确定位,为下一步深入研究ANXAl相关的信号通路奠定了基础.

人前列腺癌细胞株PC-3中类肿瘤干细胞的培养分离和初步鉴定

目的 从人前列腺癌细胞系PC-3中分离前列腺癌类干细胞并进行初步鉴定,为前列腺癌干细胞的进一步研究奠定基础.方法分别用含血清及无血清培养基培养前列腺癌PC-3细胞,流式细胞仪检测两种不同培养条件下前列腺癌类干细胞的比例,细胞免疫荧光鉴定前列腺癌类干细胞,MTT法测定并比较前列腺癌类干细胞与前列腺癌PC-3细胞的增殖能力及倍增时间,观察前列腺癌类干细胞诱导分化过程及其分化后细胞的双重免疫荧光表达.结果 少量PC-3细胞能在添加了人表皮生长因子(EGF)、人碱性成纤维生长因子(bFGF)和人白血病抑制因子(LIF)的无血清培养基中存活并形成悬浮细胞球团,无血清培养基中前列腺癌类干细胞比例(1.43%)显著高于含血清培养基(0.41%,P<0.05).前列腺癌类干细胞的增殖能力(培养7d的细胞数为9.6×10~5个)强于前列腺癌细胞(培养7d的细胞数为3×10~5个,P<0.000 5),倍增时间(21.90h)短于前列腺癌细胞(28.38h,P<0.000 5),免疫荧光显示前列腺癌类干细胞表达CD133;前列腺癌类干细胞球可在含血清培养基中贴壁分化,且双重荧光检测显示其同时低表达CD44和CD133.结论 体外培养的前列腺癌细胞系PC-3中含有少量能表达前列腺癌干细胞表面标志物的前列腺癌类干细胞,并可通过无血清培养基富集这类类肿瘤干细胞.

AIF、Bax和Bcl-2在中子及γ射线照射致肠道损伤中的表达

目的 探讨AIF、Bax和Bcl-2在中子及7射线照射致肠道损伤中的表达变化及意义.方法 290只BALWc雄性小鼠,随机分为对照组(24只)、2.5Gy中子照射组(80只)、4.0Gy中子照射组(60只)、5.5Gy γ射线照射组(72只)及12.0Gy γ射线照射组(54只),分别采用5.5和12.0Gy γ射线以及2.5和4.0Gy的中子照射,并于照射后6h,1、2、3、5、10d活杀,取空肠组织,用免疫组织化学和图像分析技术定量分析MF、Bax及Bcl-2蛋白的表达变化.结果 对照组小鼠空肠绒毛及隐窝上皮细胞质AIF呈强阳性,Bax和Bd-2呈弱阳性.中子和γ射线照射后6h～1d,隐窝细胞核中AIF呈强阳性,表达明显增加(P<0.01);4.0Gy中子照射后Bax强阳性持续至照射后3d,表达明显增加(P<0.01).5.5、12.0Gy γ射线及2.5Gy中子照射后6h～5d,Bcl-2于上述部位呈强阳性,表达明显增加(P<0.01).4.0Gy中子照射后6h～3d,Bcl-2于上述部位呈弱阳性,表达无改变(P>0.05).结论 中子及γ射线照射后空肠隐窝上皮细胞核中AIF表达增加,参与了肠上皮细胞凋亡的过程.中子照射时的Bax表达强于γ射线照射时,γ射线照射时的Bcl-2表达强于中子照射时,二者变化规律不同,提示中子和γ射线致肠道损伤具有不同的分子机制.

囊性纤维化跨膜调节因子氯离子通道在人肺泡上皮细胞损伤中的保护作用

目的 探讨人肺泡上皮细胞囊性纤维化跨膜通道调节因子(CFTR)氯离子(Cl~-)通道对肺泡上皮细胞损伤的保护作用.方法采用全细胞膜片钳法,在OmV钳制电压下,对正常A549细胞或H_2O_2处理(氧化损伤)的A549细胞分别按照不同方式给予4-氯苯[F]异喹啉(CBIQ)、二苯胺-2-羧酸(DPC)及钙通道阻断剂尼卡地平,观察细胞从-90mV至50mV经步阶电压(20mV)刺激后CFTR Cl~-电流随时间变化的曲线,并绘制电流-电压(I-V)曲线.结果 正常及H_2O_2损伤后的细胞中均记录到典型的CFTR Cl~-电流,均可被相对特异性的CFTR Cl~-通道阻断剂DPC抑制.H_2O_2损伤细胞的CFTR Cl~-电流较正常细胞明显减小.CBIQ对H_2O_2损伤细胞的CFTR Cl~-电流以及被DPC+尼卡地平阻断后的正常细胞中的CFTR Cl~-电流均有激动作用.结论 氧化应激可导致CFTR Cl~-通道功能异常,CBIQ可以抑制这种作用.CFTRCl~-通道激活剂CBIQ可能通过调节CFTR Cl~-通道和Ca~(2+)通道发挥保护受损细胞的作用.

组蛋白去乙酰化酶抑制剂与紫杉醇联合应用对肺癌细胞的毒性作用

目的 评价组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)联合紫杉醇(TAX)对肺癌细胞株H1299的抑制作用.方法以不同浓度TSA和(或)TAX处理H1299细胞,MTT法检测细胞存活率,计算TAX的半数抑制浓度(IC_(50))并绘制细胞生长曲线.随后将H1299细胞分成4组:对照组,常规培养细胞36h;TAX 组,TAX (10nmol/L)处理细胞24h;TSA 组,TSA (300nmol/L)处理细胞12h;TF组,TSA(300nmol/L)处理细胞12h后,加入TAX(10nmol/L)处理24h.采用流式细胞术观察细胞周期分布和细胞凋亡率;对细胞进行Hochest 33342染色后,在荧光显微镜下观察细胞核形态的改变;Western blotting 检测人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)剪切蛋白和p21蛋白表达.结果 TSA预先作用12h可以使TAX对H1299细胞的IG_(50)由110.6±38.7nmol/L下降至63.7±11.8nmol/L(P<0.05).与对照组比较,TAX和TF组细胞存在明显的G_0/G_1期阻滞,但4组的细胞凋亡率均很低(P>0.05).TSA、TAX 及TF组可见以死亡为主的细胞核改变现象,凋亡小体很少.4组均未检测到PARP剪切蛋白.与对照组比较,TSA、TAX及TF组的p21蛋白表达均有明显增加(P<0.05);与TAX组比较,TSA组和TF组的p21蛋白明显增加(P<0.05),且后两组间无显著差异(P>0.05).结论 联合HDAC抑制剂TSA可提高TAX对肺癌细胞H1299的毒性,促进细胞死亡,但其机制与细胞凋亡无关.

微波辐射致睾丸早期损伤的蛋白质组学研究

目的 探讨微波辐射早期睾丸蛋白质表达谱的改变及其意义.方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=6)和辐射组(n=18).辐射组接受30mW/cm~2微波辐射,并分别于辐射后6、24、72h处死6只大鼠;对照组不接受辐射,于72h时间点处死.观察两组大鼠睾丸组织的病理学改变;采用双向凝胶电泳(2-DE)-基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MAIDI-TOF-MS)-生物信息学分析比较蛋白质组学技术检测辐射72h后睾丸组织蛋白质表达谱的改变.结果 微波辐射后72h内,辐射组大鼠睾丸出现不同程度的损伤性改变,主要表现为生精细胞变性、坏死和脱落,精子减少或缺失,生精小管腔内红细胞和血浆蛋白积聚,间质水肿,血管淤血.对照组、辐射组(辐射后72h)睾丸组织蛋白质点分别为1 379±166、1 509±243个,匹配的蛋白质点为1 178±102、1 217±135个,匹配率为85.4%、80.6%.对两组进行匹配分析,发现差异表达的蛋白质点共136个,其中28个在辐射组上调,108个在辐射组下调.对其中的26个差异蛋白质点的鉴定结果显示,蛋白功能涉及细胞骨架、能量代谢、分子伴侣、离子结合运输、应激、信号转导等.结论 微波辐射可导致睾丸组织一系列蛋白表达发生改变,这些蛋白可能参与了生精细胞损伤的病理生理过程.

HGF和FGF4在诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化中的作用

目的 评估肝细胞生长因子(HGF)和成纤维细胞生长因子4(FGF4)在诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化中的作用.方法 CCl_4经腹腔注射复制小鼠肝损伤模型,48h后处死小鼠取肝组织,分离肝脏组织制备肝损伤条件培养液进行培养.以正常小鼠肝组织制备的培养液作为对照组.ELISA法测定培养0、1、5、3、6、12、24、48h后肝组织培养液中的HGF和FGF4含量.用肝损伤条件培养液培养骨髓间充质干细胞,分别加入HGF抗体和(或)FGF4抗体,以封闭培养液中的HGF和(或)FGF4因子,未添加细胞因子抗体的培养液作为对照组;ELISA法检测肝细胞特异性白蛋白(ALB)水平,免疫荧光法检测细胞内ALB、甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白19(CK19)的表达,评价骨髓间充质干细胞向肝细胞的分化状况.结果 与对照组比较,肝损伤小鼠肝细胞培养液中HGF和FGF4表达量均升高(P<0.05);在培养3h时HGF、FGF4上升达峰值,随后下降;FGF4在培养12h达低谷后再次升高.抑制HGF和(或)FGF4第14天后,ELISA和荧光标记染色法检测均显示ALB表达下降,与对照组比较差异显著(P<0.05);荧光标记染色显示封闭后AFP及CK-19表达均有下降(P<0.05).结论 HGF、FGF4是诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的重要因子,且可能有其他因子参与诱导肝细胞的定向分化.

人结肠癌HCT116细胞系肿瘤干细胞特性研究

目的 探讨结肠癌HCT116细胞系的肿瘤干细胞相关特性,为结肠癌干细胞功能研究奠定基础.方法取HCT116细胞在无血清条件下培养,观察细胞在无血清培养基中的增殖分化情况,采用限量稀释法计数细胞的克隆球形成率,并观察细胞及克隆球的生长、增殖、分化情况.取HCT116细胞(5×10~3、5×10~4个)接种4周龄雌性NOD-SCID小鼠,观察3～8周,分析其致瘤性和病理学特征.采用流式细胞仪和免疫荧光染色法分别检测HCT116细胞CD133、CD44、ABCG2的表达,RT-PCR和Western blotting 检测CD133的mRNA和蛋白表达.采用免疫组化法检测分化过程中HCY116克隆球上CK20的表达.结果 41.47%±1.28%的HCT116细胞能在无血清培养基中形成克隆球,第二代克隆球形成率仍保持在较高水平(32.53%±2.32%).HCT116细胞在无血清条件下培养72h可形成克隆球,且至少可传15代以上.5×10~3个HCT116细胞接种至小鼠皮下5～6周后即可形成移植瘤.大部分HCT116细胞为CD133~+ CD44~+,并表达ABCG32蛋白.HCT116细胞的克隆球分化至第4天即可检测到CK20表达.结论 大部分HCT116细胞具有肿瘤干细胞特性,可作为肿瘤干细胞研究的理想对象.

腹膜假性黏液瘤1例分析

1 临床资料患者女性,62岁,因"腹胀1个月"于2004年5月6日入我院消化科.查体:左侧锁骨上窝触及数个粟粒大小淋巴结;腹部略膨隆,以上腹显著,叩诊移动性浊音阳性.辅助检查:CA12517.8U/ml,CA199 2 560U/ml,CEA 158μg/ml.彩超:子宫右后方见囊性回声,范围约7.56cm×5.83cm×8.26cm,内见数个分隔光条,子宫前后方及腹腔内可见液性暗区,内见细小光点沉积.余化验检查未见异常.初步诊断:腹水待查.腹腔穿刺抽取腹水为淡黄色澄清液体.

全麻术中恶性高热1例

恶性高热(malignant hyperthermia,MH)是临床麻醉中一种较为罕见的以体温异常迅速增高为特征的高代谢、高死亡率的临床综合征.本病发生率低,但发病突然,进展迅速,死亡率高.现将北京军区总医院2009年7月14日手术中发生的1例恶性高热报道如下.

军队飞行员皮肤病患病情况调查

目的 调查不同地区军队飞行员常见皮肤病患病情况,为其科学防治提供依据.方法 2007年10月-2008年9月对驻扎在北京、天津、湖北及陕西地区不同部队的255名飞行员的皮肤病患病情况进行调查,通过临床检查确定皮肤病种类和感染例数(次),并分别比较各地区军队飞行员和不同年龄阶段飞行员皮肤病发病情况,对皮肤病发病相关因素进行分析.结果 255名飞行员中,现患皮肤病47种,共430例次患病,浅部真菌病的患病率高,为69.8%,患两种以上皮肤疾病者占72%.北京、天津及陕西地区飞行员中慢性单纯苔藓的患病率均高于湖北地区,而手足癣的患病率则均低于湖北地区(P<0.05);服役年限≤7年的飞行员痤疮发病率高于服役年限>7年者(P<0.05).工作训练紧张、出汗多、饮食酸辣、卫生条件差、吸烟饮酒等不良嗜好均与皮肤病的发病率有一定的相关性.结论 皮肤病是军队飞行员常患疾病之一,应高度重视并依据本调查结果对不同地区患病率较高的皮肤病采取科学措施进行有效防治.

抗CD25单克隆抗体对肾移植受者CD4~+ CD25~(high)调节性T细胞的影响

目的 评价抗CD25单克隆抗体对肾移植受者术后早期CD4~+ CD25~(high)调节性T细胞(CD4~+ CD25~(high)Treg)的影响.方法 2007年2-9月接受初次亲属活体供肾移植的受者41例,根据是否使用抗CD25单克隆抗体(商品名daclizumab)分为抗体组(21例)和对照组(20例).其中抗体组在肾移植术前2h及术后第14天分别给予抗CD25单抗各50mg.在移植前及移植后第13、17、60天分别留取肝素抗凝外周血15ml.应用流式细胞仪测定两组受者外周血CD4~+T细胞和CD4~+ CD25~(high)Treg比例的变化,半定量RTPCR检测CD25 mRNA的表达变化.结果 肾移植术后13、17、60d抗体组的CD25~+ T细胞占CD4~+ T细胞的比例(20%±8%、13%±7%、24%±9%)低于对照组(45%±6%、41%±5%、40%±6%),差异有统计学意义(P<0.05).抗体组术后第17天CD4~+ CD25~(high)Treg占CD4~+ T细胞的比例为4.40%±0.26%,明显低于对照组(8.56%±0.36%,P<0.01);而术后13、60d抗体组CD4~+ CD25~(high)Treg所占比例分别为7.00%±0.47%、3.75%±0.19%,与对照组(分别为8.04%±0.32%、3.66%±0.31%)比较差异无统计学意义(P>0.05).抗体组CD25 mRNA相对表达水平在给予第二次抗体前(术后第13天)为1.65±0.22,术后第17天为1.84±0.27,两者间差异无统计学意义(P>0.05).对照组术后第17天CD25 mRNA相对表达水平为1.70±0.23,与抗体组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 两剂共100mg抗CD25单抗仅一过性地降低CD4~+ CD25~(high)Treg,不会影响其活化扩增,无损于术后早期的免疫耐受诱导及维持.

HLA-G~+调节性T细胞在肾移植受者外周血中的比例及其功能研究

目的 确定人类白细胞抗原-G(HLA-G)区别于CD4~+ CD25~+ FoxP3~+ 调节性T细胞的细胞表型特征,观察HLA-G~+ T细胞在混合淋巴细胞培养中的免疫调节作用及其在移植免疫调节中的活性和意义.方法采用流式细胞术检测肾移植受者外周血CD4~+ HLA-G~+ GD8~+ HLA-G~+ T淋巴细胞的含量,分选HLA-G~+ T淋巴细胞,分析细胞表型,采用RT-PCR检测调节性T细胞的特异性标志FoxP3在HLA-G~+ T淋巴细胞的表达情况,以淋巴细胞分离液分离的PBMC、CD4~+ CD25~(high)、CD4~+ CD25~-细胞作为对照.取5对活体肾移植供受者的淋巴细胞进行混合培养,分别加入流式细胞术分选纯化后的HLA-G~+ 、HLA-G~- T淋巴细胞,对照组只加入供、受者淋巴细胞,MTT法观察细胞增殖和抑制情况.结果 肾移植受者外周血CD4~+ HLA-G~+ 、CD8~+HLA-G~+ T淋巴细胞表达率分别为1.95%±0.34%、3.13%±0.56%.流式细胞术分选HLA-G~+ T淋巴细胞后纯度可达55.0%～75.1%.RT-PCR 结果证明上述细胞CD25、FoxP3均为阴性表达.与HLA-G~- 组、对照组比较,混合淋巴培养3d后HLA-G~+ 组细胞增殖率明显受到抑制(P<0.05).结论 在肾移植受者外周血中存在CD4~+ HLA-G~+ 、CD8~+HLA-G~+ T淋巴细胞,这类细胞不同于CD4~+ CD25~+ FoxP3~+调节性T细胞,它们不表达CD25和FoxP3而表达免疫耐受分子HLA-G,在混合淋巴培养体系中,能显著抑制反应性细胞增殖,具有免疫调节功能.

肾移植后诱导活化高表达CD25的CD4~+ CD25~(high)调节性T细胞的表型特点与免疫调节功能

目的 探讨肾移植受者活化并表达不同强度CD25的CD4细胞的表型特征和功能特点.方法依据CD25的表达水平,应用流式细胞仪将9例行初次亲属活体肾移植受者的外周血CD4~+ T细胞分为CD25~-、CD25高表达(CD25~(high))和CD25低表达(CD25~(low))3群,并比较3群细胞叉头翼状螺旋转录因子(FoxP3)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)表达强度.经免疫磁珠法和CD4~+ CD25~+调节性T细胞分选试剂盒分选得到受者外周血CD4~+ CD25~-、CD4~+ CD25~(high) T细胞,分别作为反应细胞,以Co~(60)γ射线照射灭活的供者外周血单个核细胞(PBMC)作为刺激细胞,建立体外单向混合淋巴细胞培养系统.采用半定量RT-PCR检测系统中IL-2 mRNA的表达.结果 在肾移植术后受者3群细胞中,FoxP3的表达以CD4~+ CD25~(high)细胞高(93.7%±3.58%),其次是CD4~+CD25~(high)细胞(16.4%±6.8%),CD4~+ CD25~-细胞低(1.8%±1.1%),三者间差异均有统计学意义(P<0.01);CTLA-4表达以CD4~- CD25~(high)细胞高(80.8%±7.9%),其次是CD4~- CD25~(low)细胞(22.9%±6.5%),CD4~- CD25~-细胞低(4.1%±2.4%),三者间差异均有统计学意义(P<0.01).在混合淋巴细胞培养中,CD4~- CD25~(high)细胞受移植抗原刺激后不表达IL-2 mRNA;按照1:2比例加入CD4~- CD25~(high)细胞后,CD4~-细胞表达的IL-2 mRNA平均被抑制了60%.结论 肾移植受者所有活化T细胞的表面均有CD25表达,高表达CD25的细胞群具有调节性T细胞的表型特点,为CD4~+ CD25~(high)曲调节性T细胞.

Nrp1~+T细胞对淋巴细胞增殖的调节作用以及对同种异体移植物的影响

目的 探讨表达神经纤毛蛋白质1(Nrp1)的T细胞(Nrp~+ T细胞)对体内外反应性淋巴细胞增殖的调节作用以及对同种异体移植物的影响.方法采用流式细胞术分选近交系C57BL/6j小鼠脾脏中的Nrp1~+ T细胞作为调节细胞,在刀豆蛋白A(Co-hA)的刺激下与标记了羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)的C57BL/6j小鼠脾脏单个核细胞等比例共培养5d,对比观察反应细胞的增殖情况.采用流式细胞术分选C57BL/6j小鼠脾脏的Nrp1~+T细胞、CD4~+ CD25~+ Treg细胞和CD4~+ CD25~- T细胞各1×10~6个,分别经尾静脉注入到以Balb/C小鼠作为供者,以C57BL/6j小鼠作为受者行皮肤移植的小鼠体内,另外建立供、受体均为C57BL/6j小鼠的同品系对照组(注入等体积的RPMI 1640培养基).对比观察各组移植皮肤的存活情况.结果 加入Nrp1~+ T细胞的实验组增殖指数为50.92%±2.30%,明显低于未加入调节性T细胞的对照组(90.31%±1.83%,P=0.0169).实验组移植皮肤存活时间注入Nrp1~+ T细胞者为20.66±1.1ld,注入Nrp1~- T细胞者为13.20±0.76d,注入CD4~+ CD25~+ Treg者为17.67±1.0d,均明显高于对照组(9.70±1.23d,P<0.01).结论 Nrp1作为一种新型的T细胞表面分子,在淋巴细胞增殖体系中起着重要作用;与注入CD4~+ CD25~+ Treg相比,注入Nrp1~+ T细胞可明显延长小鼠移植皮肤的存活时间.

IL-17在小鼠皮肤移植受者外周血及移植物中的表达

目的 探讨小鼠皮肤移植后IL-17蛋白及mRNA在外周血及移植物中的表达.方法建立三组小鼠皮肤移植动物模型:同基因组(BALBc→BALB/c)、异基因组(C57BL/6→BALB/c),脾细胞组(C57BL/6→BALB/c),每组40只.各组分别于移植后1、3、5、7d处死10只动物,采用ELISA法检测小鼠血清内IL-17水平,RT-PCR检测移植皮肤中的IL-17 mRNA的表达情况.结果 三组小鼠皮肤移植后第1天IL-17蛋白及mRNA表达有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).术后第3、5、7天异基因组IL-17蛋白及mRNA表达明显高于同基因组、脾细胞组(P<0.01),而后两组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 IL-7在小鼠皮肤移植后早期发生急性排斥反应时呈高表达,有望作为预测和纠正排斥反应的观察指标.受体输注供体脾细胞可明显减轻异基因皮肤移植的排斥反应.

基因芯片技术在辐射生物学领域的应用

辐射能引起机体分子水平的复杂调控,不同组织细胞、同一组织来源不同性状的细胞,其基因对不同剂量的辐射反应各异.不同剂量辐射后可引起细胞或组织多种差异基因表达上调或下调.本文综述了其中某些与细胞凋亡、DNA损伤修复和应激、细胞周期、信号转导、免疫反应和防御等相关的重要基因的新研究进展.

不安腿综合征与昼夜节律的关系研究进展

不安腿综合征(restless legs syndrome,RLS)是临床较为常见的睡眠行为障碍.RLS早由英国医生Thomas Willis在17世纪提出,随后由瑞典神经科医生Ekbom进行总结,所以又称"Ekbom综合征".临床表现是主要确诊依据.

调节性T细胞与器官移植免疫耐受的研究进展

CD4、CD25和叉头翼状螺旋转录因子(FoxP3)阳性(CD4~+ CD25~+FoxP3~+)的调节性T细胞(Treg)是具有免疫调节功能的T细胞亚群,在移植后诱导和维持免疫耐受方面发挥重要作用.在移植物发生排斥反应时,CD4~+ CD25~+ FoxP3~+ Treg的数量增加.因此可将其用于预测移植物的转归及判断移植受者的免疫状态.联合监测效应性T细胞(Teff)与Treg间的平衡有助于更好地判断移植受者的免疫状态.由于不同免疫抑制剂对CD4~+ CD25~+ FoxP3~+ Treg的影响不同,所以免疫抑制剂对诱导移植免疫耐受的潜在作用应引起重视.

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