IL-1R相关激酶-1和磷脂酰肌醇3-激酶协同调控IL-1诱导的NF-κB活化

为研究IL-1R相关激酶1(IRAK-1)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-激酶)在IL-1诱导NF-κB活化中的作用,本文采用Lipofectin介导反义IRAK-1寡核苷酸或反义PI3-激酶寡核苷酸转染HEpG2细胞后,用Western杂交检测IRAK-1和PI3-激酶表达水平,以SandwichELIA法检测NF-κB的活化.结果表明,①反义IRAK-1寡核苷酸和反义PI3-激酶寡核苷酸分别抑制IRAK-1和PIE-激酶表达;②反义IRAK-1寡核苷酸或反义PI3-激酶寡核苷酸部分抑制NF-κB活化;③与反义IRAK-1寡核苷酸或反义PI3-激酶寡核苷酸单独转染HEpG2细胞相比,反义IRAK-1寡核苷酸和反义PI3-激酶寡核苷酸共转染HEpG2细胞对NF-κB的抑制作用明显增强.表明IRAK-1或PI3-激酶调控NF-κB活化但不能完全激活NF-κB,IRAK-1和PI3-激酶在调控NF-κB活化时协同作用.

CD34+细胞免疫亲合柱的研制

本文建立了利用免疫亲合柱纯化CD34+细胞的方法.将亲合素交联于聚丙烯酰胺凝胶Bio-Gel上,装于塑料柱制成免疫亲合柱;将脐血单个核细胞与生物素化抗CD34单克隆抗体作用后,加到该免疫亲合柱上进行纯化,得到纯化的CD34+细胞.纯化后CD34+细胞纯度达48.8%±18.2%,细胞回收率为55.6%±14.5%,台盼蓝染色法显示活细胞达98%.利用该方法纯化CD34+细胞具有纯度高、回收率高、细胞活性好等优点,是一种方便有效的细胞纯化方法.

卵巢癌患者血清TGF-α、TNF-α含量分析

利用放免技术测定血清TGF-α与TNF-α水平,观察其在卵巢癌、卵巢良性肿瘤患者及正常对照组(各30例)中变化情况.结果卵巢癌组TGF-α增高与正常对照及卵巢良性肿瘤组差别显著(P<0.05);30例卵巢癌组中28例TNF-α增高与正常对照组及卵巢良性肿瘤组差别显著(P<0.05),2例低于同组水平;后两组TGF-α与TNF-α差别不显著(P>0.05).结果表明TGF-α、TNF-α增高与卵巢癌相关,卵巢癌患者TGF-α增高而TNF-α降低提示预后较差.

人绒毛膜促性腺激素β亚基的T细胞表位

本文根据人绒毛膜促性腺激素β亚基(β-Hcg)序列用多针同步固相多肽合成技术合成了一系列短肽,用T细胞增殖法进行T细胞表位的筛选.结果表明,合成的肽纯度高,结构正确.完全满足细胞表位筛选的要求.β-Hcg(19-30)、(37-48)、(85-96)、(136-145)段肽与对照相比有显著性差异,为免疫活性较高的区域.

金标免疫层析对弓形虫抗体的检测

采用金标免疫层析法与ELISA法检测1200份临床标本中的弓形虫抗体并进行比较.结果是ELISA法阳性率2.42%,金标免疫层析法阳性率2.33%,两者的符合率96.6%,两者无显著性差异.因此,免疫层析法是一种具有简便、快速、准确等特点的方法.

促肝细胞生长素及其S4组份对人PBMC表型的影响

本文采用生物素-链霉亲和素(BSA)免疫细胞化学法及流式细胞仪技术检测CD3+、CD4+、CD8+、HLA-DR+及CD25+细胞百分率,藉以研究促肝细胞生长素(Phgf)及其组分S4对免疫活性细胞的作用.结果表明,Phgf可使脐血中CD4+、CD8+及HLA-DR+细胞数有明显增长;对正常人及肿瘤患者PBMc的HLA-DR+细胞数亦有促进作用,与PHA的刺激作用相近似.用FPLC及HPLC等方法分离的单一成分S4对成人PBMC表面CD25抗原表达有明显促进作用.

抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素基因的融合及在大肠杆菌的表达

制备抗癌胚抗原(CEA)单克隆抗体的单链抗体,在保留抗原抗体结合位点的同时有效降低抗体的分子量不仅可减少人抗鼠抗体反应(HAMA),而且适合放射免疫显像.为纯化及核素标记抗体,将单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合并在大肠杆菌得到高效表达,表达量占菌体总蛋白的24%.SDS-PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为41kD,与其基因编码蛋白质的理论推算值相符.表明融合蛋白能特异性地与生物素结合,RIA表明表达产物具有结合其特异性抗原CEA的能力,以HRP标记的生物素作为抗体进行蛋白质印迹在41kD处可见表达条带.说明表达物不仅能与生物素结合且能特异性地与CEA结合.

人FasL胞外区cDNA的克隆及表达

应用RT-PCR技术从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中扩增FasL胞外区cDNA,克隆人PCR2.1,载体,测序验证后在大肠杆菌DH5α中表达,经亲和层析柱纯化,Westernblot鉴定所得表达产物为可溶性人FaaL胞外区蛋白.

口服基因疫苗预防柯萨奇B组病毒性心肌炎的实验研究

为研制防治病毒性心肌炎的口服基因疫苗,本文以减毒鼠伤寒杆菌SL7207作载体,将表达CVB3VPI基因的pcDNA3VP1重组质粒转化入该细菌中,制备成口服基因疫苗.经口服免疫小鼠后,检测其免疫效果,并用CVB3攻击小鼠,观察其免疫保护作用.结果表明小鼠经1次口服免疫后,血液中即产生了高滴度的抗体;病毒攻击后,免疫小鼠产生了明显的保护作用.

表皮生长因子单抗对人牙龈上皮细胞增殖的影响

本文采用体外人牙龈上皮细胞(HGEC)培养技术和四唑盐(MTT)比色法,探讨表皮生长因子(EGF)对HGEC的作用,并评价抗EGF受体(EGFR)单克隆抗体对它的影响.结果发现,从第2天开始,1μg/L的EGF对HGEC有明显的促增殖作用(P<0.05),第4天起,促增殖非常显著(P<0.01),并持续到第8天;EGFR抗体浓度在1:1000～1:10时,能显著地抑制EGF对HGEC的促增殖作用(P<0.01),1:100浓度抑制作用大,并持续作用至第8天(P<0.01).从而表明,EGF对HGEC有显著的促增殖作用,这种作用能被EGFR抗体所阻断.

氢化可的松对人外周血来源树突状细胞的诱导凋亡作用研究

旨在探讨氢化可的松对人外周血单核细胞来源树突状细胞(DC)的凋亡诱导作用及其表型、功能的变化;采用细胞因子体外诱导人外周血来源DC,加入不同浓度的氢化可的松进行培养;以细胞计数、PI染色测定细胞周期、间接荧光表型分析、ELISA法测定DC分泌的IL-12和3H-TdR掺入测定DC对T细胞的激发作用;实验结果表明,外周血贴壁的单核细胞在细胞因子的诱导下可以分化为成熟的DC,不同浓度(2μg/ml～50μg/ml)的氢化可的松可下调DC表达的CD80和HLA-DR分子(分别下降41.1%和10.9%),并使其分泌IL-12的能力明显下降(由38.1Pg下降为0),DC对自体T细胞的激发功能明显降低,而且一定浓度的氢化可的松还可以使DC发生凋亡(凋亡率可达56.6%).糖皮质激素不仅通过下调DC表达的协同刺激分子及其分泌的IL-12从而影响DC对T细胞的激发作用,而且可以直接诱导DC发生凋亡,从而下调免疫应答的发生.

不同长度疟原虫环子孢子蛋白重复序列DNA免疫的实验分析

本实验利用DNA免疫技术,将PCR得到的疟原虫环子孢子蛋白(CSP)不同长度的重复序列基因克隆到pcDNA3质粒中,对小鼠进行肌肉注射,经过免疫检测,结果证明不同长度CSP的重复序列能够单独诱发机体全面的细胞免疫和体液免疫,这为今后疟疾疫苗的发展提供了新的思路.

RNA激发的DC体外诱导EBV特异性CTL的研究

本研究采用酶切等方法将质粒Psvtp1中LMP2a(latentmembraneprotein2a)的编码基因克隆至Pgem-3Zf+,再经体外转录系统转录获得EBV-LMP2aRNA,将以此RNA激发的DC所诱导生成的CTL作为效应细胞分别与含EBV基因之一EBNA1、EBNA2、EBNA3c、LMP2a的重组病毒感染的正常人成纤维细胞混合后,采用LDH释放法检测细胞毒活性.结果显示,经体外转录的LMP2aRNA激发的DC所诱导的淋巴细胞对表达LMP2a抗原的成纤维细胞产生特异性的细胞毒活性,证实了这种BNA激发的DC能有效地诱导EBV特异性CTL的生成,为EBV相关肿瘤的免疫治疗提供了新的实验依据.

恶性疟原虫抗原-痘苗病毒重组活疫苗株的实验室评价

以恶性疟原虫保护性抗原复合基因-痘苗病毒重组活疫苗候选株为研究对象,探索其免疫血清及IgG的体外抗疟原虫能力、保护性细胞免疫反应及换人血猕猴模型动物抗攻击能力试验.结果表明,受检免疫血清及IgG具有一定的体外抑制恶性疟原虫增殖作用.家兔及大白鼠免疫后4～6周血清中可产生明显的IL-12活性,免疫后6周家兔、大白鼠及小白鼠血清IFN的活性水平比免疫前明显升高.免疫后1个月攻虫,免疫猴从第3天一直到第12天血检中均未发现疟原虫;而非重组痘苗病毒免疫猴第3天后原虫感染率上升,第6天原虫感染率高达到6.0%,而后原虫感染率逐渐下降,持续13d;空白对照猴第3天后原虫感染率也上升,第8天原虫感染率高达到2.5%,而后原虫感染率逐渐下降,持续12d.结果初步表明该候选疫苗株具有一定的诱发体液免疫、细胞免疫反应及抗虫体攻击能力,值得做进一步的研究.

CD28单抗对CD3AK细胞增殖及表型的影响

CD3AK细胞是用小剂量CD3单抗交联CD3分子而活化的T细胞,它具有较强的细胞增殖和细胞毒效能.CD28分子则是T细胞激活过程中所需的协同刺激分子,可提供T细胞活化所需的第二信号.本文利用CD28单抗作为CD28分子的配体,观察了CD28信号途径的激活对CD3AK细胞的影响.结果显示CD28单抗可增强CD3AK细胞的增殖活性和趋化团聚形成集落的能力,并优先引起CD4+T细胞的增殖.

应用胞内染色技术分析抗TNF-α单链抗体的活性

本文用TPA和LPS刺激培养的HL60细胞作为靶的,通过胞内染色技术和流式细胞仪分析了抗TNF-α单链抗体(ScFv)的活性.结果表明,抗TNPF-αScFv和其亲本单克隆抗体(mAb)与TNF-α竞争作用显示平均荧光强度(MFC)为22.7%,而mAb与TNP-α结合显示MFC为69.5%,抗TNF-αScFv-E-tag与TNF-α结合显示MFC为48.8%,空白和阴性对照的MFC分别为1.1%和2.5%.相对于mAb,ScFv的抑制率是78.37%,抗原相对结合力是68.17%.本文的结果说明抗TNF-αScFv具有与其亲本单抗相同表位的结合活性,也为定量和直观测定ScFv的活性提供了实验依据.

34例急性白血病免疫表型与疗效关系

为提高急性白血病(AL)疗效和生存期,探讨AL免疫表型与疗效关系,对34例AL进行了免疫表型检测;采用单克隆抗体(Mcab)和流式细胞仪(FCM)检测;在急性非淋巴细胞白血病中所检测的各种抗原的阳性表达率依次为CD33>CD13>CD11b>CD14,干/祖细胞分化抗原CD34的表达率为28%,M3不表达CD34和HLA-DR.CD34+的完全缓解(CR)率明显低于阴性组;免疫表型的检测和研究将有助于指导临床治疗及判断预后.

TNF-αRⅠ、Ⅱ的mRNA在正常及病理肝组织中表达的研究

本研究运用RT-PCR的方法在5例正常人肝组织、5例肝癌组织、5例肝癌癌旁组织以及5例重症肝炎穿刺肝组织标本中扩增出了TNFRⅠ、TNFRⅡ基因转录产物Cdna的特异性片段,并初步分析了TNFRⅠ、TNFRⅡ在各组标本中的表达情况,结果显示正常人肝组织中有TNFRⅠ、TNFRⅡ的低水平表达,而在病理状态下,TNFRs的表达有明显的上调,这种上调作用可能对TNF-α介导的肝损伤有重要作用.

大蒜对老龄BALB/c小鼠血浆IL-1β、IL-6水平影响的研究

本文研究大蒜对老年小鼠血浆IL-1β、IL-6水平变化的影响.小鼠经饮用大蒜液后2周,继用5μgLPS/鼠腹腔注射4h后,取血用ELISA测血浆中细胞因子水平.老年小鼠血浆IL-1β基础水平明显高于青年小鼠(P<0.05),经LPS刺激后,老年小鼠血浆IL-1β、IL-6水平无明显增高,而饮用大蒜液后,老年小鼠的IL-1β、IL-6血浆基础水平有所降低,但在LPS刺激下,血浆IL-1β、IL-6较基础水平明显上升(P<0.05),提示大蒜能明显改善老年小鼠的细胞因子紊乱状况.

Th1、Th2型细胞因子与免疫排斥反应及免疫耐受

本文就Th1、Th2型细胞因子在排斥反应和免疫耐受中的表达、作用以及它们和排斥反应以及免疫耐受之间的关系加以综述.

多发性硬化患者血清可溶性Fas的检测

多发性硬化(MS)病因及发病机制至今未明,目前认识它是一种与中枢神经系统髓鞘成分有关的自身免疫性疾病.Fas分子是死亡因子Fas配体(FasL)的受体,Fas/FasL是细胞凋亡的重要调节剂[1],aFas受体被认为能阻止淋又巴细胞凋亡[2],Fas/FasL功能异常可能是自身免疫疾病的发病机制之一.本文检测了MS患者血aFas受体.旨在讨论aFas受体在MS发病中的作用.

HLA-DQA1基因多态性与重症肌无力遗传易感性

重症肌无力(MG)是器官特异的自身免疫性疾病,确切发病机制不详.MG与HLA基因关系的研究为揭示其遗传和免疫机制提供了重要线索.国外资料表明,与白人MG相关的HLA抗原主要是A1、B8、DR3,近年来DNA水平上的研究进一步揭示MG与HLAⅡ类基因特别是DQ亚区相关[1～3].为探讨中国汉人MG的易感性与HLA基因的关联,我们采用PCR-RFLP方法对来自江浙沪的汉籍MG患者HLA-DQA1等位基因进行研究.

抗钙调素抗体对K562细胞增殖的抑制作用

钙调素(cahnodulin,CaM)是普遍存在于真核细胞内的Ca2+受体蛋白,是细胞内信号传导系统的重要成分,可缩短细胞周期,促进细胞增殖.近年来发现CaM也存在于细胞外,细胞外CaM能促进K562细胞、Bwkin细胞的增殖[1,2].

CD4细胞在ConA诱导的急性肝损伤中的作用

ConA性肝损伤模型是一种新型肝损伤模型[1].本文旨在探讨CD4细胞在此模型中的作用.

大鼠巨噬细胞移动抑制因子的基因克隆及原核表达

世纪之交话过敏性疾病

过敏性疾病包括特应性皮炎、食物过敏、过敏性哮喘等.对它的认识可追溯到19世纪,1819年John Bostock首先描述了枯草热,1873年Charles Blokley认识到花粉是枯草热的致病因子,1921年Prausnitz和Kustner发现在过敏性疾病患者血清中存在着一种可转移至正常人组织使之过敏的致敏因子,直至1967年瑞典的Johansson和美国的Ishizaka都证实了此种致敏因子为IgE,为此后提出的肥大细胞-IgE轴的I型变态反应是此病的发病机理奠定基础,即认为变应原进入体内与结合在肥大细胞表面的IgE抗体相互作用,通过一系列酶的激活释放介质引起靶组织功能改变.