现代免疫学杂志
Current Immunology 현대면역학
- 主管单位： 上海市教育委员会
- 主办单位： 上海市免疫学研究所,上海市免疫学会
- 影响因子： 0.40
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-2478
- 国内刊号： 31-1899/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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4-1BB在人外周血γδT细胞活化中的协同刺激作用
采用结核杆菌(Mtb)低分子多肽刺激人外周血单个核细胞,流式细胞术(FCM)检测不同活化时相γδT细胞膜表面4-1BB分子的表达;用阻断型4-1BB配体(4-1BBL)单抗阻断4-1BB /4-1BBL信号,FCM检测γδT细胞的增殖比率和细胞内产生IFN-γ的情况,同时与阻断CD28/B7-1信号相比较.结果显示,静止的γδT细胞膜表面不表达4-1BB分子,Mtb抗原刺激后6 h,4-1BB即有明显表达(29.71%),48 h达到高峰(49.79%);与未阻断组相比,阻断4-1BB/4-1BBL信号,γδT细胞的增殖效应和细胞内IFN-γ的产生均明显下降(P＜0.01),与CD28/B7-1信号阻断组相比,差异无显著性(P＞0.05).提示4-1BB /4-1BBL信号同CD28/B7-1信号一样,可为γδT细胞活化提供协同刺激作用.
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RNA干扰对过表达Hlrg的Hep G2细胞的影响
为观察RNA干扰对过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞的影响,构建了封闭Hlrg基因表达的shRNA表达载体pAVU6+27-Hlrg,将pAVU6+27-Hlrg稳定转染到过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞中;分别用相差倒置显微镜、FCM、SABC-FITC、RT-PCR、Western blot等观察细胞改变.测序结果表明pAVU6+27-Hlrg构建成功;针对Hlrg的RNA干扰已完成;相差倒置显微镜发现细胞突起增加;FCM显示干扰组G1期明显缩短.针对Hlrg的RNA干扰能促进过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞的生长.
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脂多糖对人近端肾小管上皮细胞IL-18及其受体复合物表达的影响
观察脂多糖(LPS)对体外培养人近端肾小管上皮细胞IL-18及其受体表达的影响,以初步探讨IL-18在肾小管-间质炎症损伤过程中的作用.以不同浓度LPS(0.01、0.1、1、5、10 μg/ml)处理人近端肾小管上皮细胞株(HK-2)24 h、36 h及48 h,然后应用RT-PCR及ELISA测定IL-18 及其受体α链(IL-18Rα)和β链(IL-18Rβ)mRNA及蛋白的表达水平变化.静息培养的HK-2细胞表达IL-18 m RNA和蛋白、IL-18Rα和IL-18Rβm RNA,LPS促进HK-2细胞IL-18 mRNA和蛋白的表达及IL-18Rα和IL-18RβmRNA的表达,并呈剂量和时间依赖趋势.肾小管上皮细胞可能既是IL-18的产生者,又是IL-18的靶细胞之一,炎症状态下肾小管上皮细胞通过IL-18自分泌方式参与肾小管-间质的炎症损伤过程.
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不明原因自然流产与蜕膜NK细胞表面活化性受体表达的相关性研究
探讨不明原因自然流产患者蜕膜NK细胞杀伤活性与其细胞表面活化性受体NKp46、NKp44、NKp30和NKG2D表达的相关性.选取21例早孕不明原因自然流产患者为病例组,25例正常早孕人流妇女为对照组,收集两组的蜕膜组织,Ficoll密度梯度离心分离淋巴细胞,MACS磁珠分选CD3- CD56+NK细胞.以K562细胞为靶细胞,用细胞染色及流式细胞技术检测两组蜕膜NK细胞杀伤活性,用流式细胞技术检测两组蜕膜CD56bright CD16-NK和CD56dim CD16+NK细胞上活化性受体NKp46、NKp44、NKp30和NKG2D的表达,并与NK细胞杀伤活性进行相关性分析.结果:(1)早孕蜕膜NK细胞具有杀伤活性;(2)病例组蜕膜NK细胞的杀伤活性较正常对照组显著增强(P=0.014);(3)病例组蜕膜CD56bright CD16-NK 细胞中NKp44的表达比正常对照组显著升高(P=0.021);病例组蜕膜CD56dim CD16+NK细胞中NKp46和NKp44的表达比正常对照组显著升高(分别P=0.026,P=0.041);其余活化性受体的表达两组未见明显差异;(4)蜕膜NK细胞杀伤功能与蜕膜CD56bright CD16-NK细胞中NKp44的表达呈显著正相关(r=0.677, P＜0.05),和蜕膜CD56dim CD16+NK细胞中NKp46 的表达呈显著正相关(r=0.634,P＜0.05).蜕膜NK细胞活化性受体NKp46和NKp44表达增加,从而使蜕膜NK细胞的杀伤功能增强可能在不明原因自然流产的发病中起重要作用.
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小鼠趋化因子CCL19Ig融合蛋白表达载体的构建、表达及鉴定
通过特异引物扩增出去掉终止密码的mCCL19编码序列,经酶切、亚克隆、拼接构建了真核表达载体pcDNA3.1-mCCL19Ig,酶切和测序鉴定插入序列;将重组质粒转染CHO细胞进行体外表达,通过RT-PCR、Western blot 鉴定目的基因的表达,利用趋化小室法测趋化活性.结果测序证实重组表达载体含mCCL19编码序列和人IgG1 Fc段序列,其序列分别与GenBank中公布序列比对一致,IgG1 Fc段读码框未发生改变;Western blot结果证实转染了pcDNA3.1-mCCL19Ig的CHO细胞培养上清中有相对分子质量为38000的融合蛋白mCCL19Ig表达;体外趋化实验表明融合蛋白mCCL19Ig对小鼠脾细胞有趋化活性,且呈剂量依耐关系.
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炭疽中性蛋白酶部分片段的重组表达、纯化及免疫效果研究
构建表达炭疽杆菌中性蛋白酶基因部分片段N蛋白(位于248～532氨基酸),并对其免疫效果进行研究;设计引物采用PCR法自炭疽杆菌扩增中性蛋白酶部分片段N,T-A克隆后构建原核表达质粒pET28a(+)-N,通过Western blot检测重组蛋白的免疫原性.以Al(OH)3为佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠,用ELISA方法测血清总IgG水平,MTT比色法测定脾T淋巴细胞增殖,采用流式分选法对脾T淋巴细胞亚群分类;Western blot显示重组蛋白具有免疫原性,rN免疫BALB/c小鼠后,ELISA检测到免疫鼠体内有特异性抗体产生;T淋巴细胞亚群试验表明,重组N蛋白以诱发Th2型免疫反应为主;MTT试验表明,rN蛋白对小鼠脾细胞在体外有促进生长和增殖能力,说明该重组蛋白具有生物学活性.纯化的rN可诱导高水平的抗体反应,为进一步的功能研究奠定了基础.
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PBX1基因对系统性红斑狼疮易感基因IFI16表达的影响
探讨PBX1基因转染人单核细胞系THP1后,对IFI16基因表达的影响.以携带人PBX1基因表达序列的复制缺陷型5型腺病毒载体(pDC315-PBX1-EGFP)转染THP1细胞后,采用实时定量PCR(RT-PCR)和Western blot技术分别在mRNA水平和蛋白水平检测PBX1和IFI16表达的变化.结果,pDC315-PBX1-EGFP转染THP1细胞后,PBX1基因的表达水平都增高,同时发现IFI16基因的表达水平降低.PBX1作为一种转录因子,能调节干扰素诱导蛋白IFI16的表达.
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重组人可溶性gp130的纯化及生物学活性鉴定
采用转瓶培养可溶性gp130基因转染细胞.运用免疫亲和层析法,将抗人可溶性gp130的单克隆抗体偶联于CNBr活化的Sepharose 4B.收获基因转染细胞的培养上清,经抗gp130单抗/Sepharose 4B亲和层析柱吸附,用pH 2.8、 0.1 mol/L甘氨酸溶液洗脱,获取可溶性gp130重组蛋白纯品.基因转染细胞培养上清中可溶性gp130的表达量为100～120 μg/ml,纯化后的回收率为70%～75%,SDS-PAGE电泳后出现一条蛋白曲带.经Western blot分析,纯化的可溶性gp130能与特异性抗体结合.将可溶性gp130(终浓度为5 μg/ml)与IL-6依赖性生长细胞株XG2共同培养,细胞的生长与增殖出现抑制.提示经免疫亲和层析法纯化的可溶性gp130具有良好的生物学活性.
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环孢素A对人蜕膜免疫细胞分泌IL-10与IFN-γ的调控作用
探讨环孢素A(CsA)对人早孕期母胎界面主要组成细胞IL-10与IFN-γ分泌的调节作用,为反复自然流产等妊娠疾患的治疗提供新线索.收集6～10孕周行人工流产术的正常妊娠妇女绒毛和蜕膜组织;分离、培养蜕膜免疫细胞、滋养细胞与蜕膜基质细胞;ELISA法检测给予环孢素A(0 μmol/L,1 μmol/L)24、48、72 h后蜕膜免疫细胞、滋养细胞及蜕膜基质细胞培养上清中IL-10与IFN-γ分泌水平.结果显示,(1)1 μmol/L CsA可以明显促进人早孕期蜕膜免疫细胞分泌IL-10(P＜0.01),并抑制其产生IFN-γ(P＜0.01);1 μmol/L CsA不影响原代培养的人早孕期滋养细胞与蜕膜基质细胞IL-10的分泌(P＞0.05);不论是否给予CsA处理,原代培养的人早孕期滋养细胞与蜕膜基质细胞均不产生IFN-γ. 结果表明,CsA通过促进蜕膜免疫细胞分泌IL-10,并抑制其产生IFN-γ,从而有利于母胎界面形成Th2型免疫优势.
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人TLR-2胞外肽段的分段表达及其活性鉴定
为深入研究TLR-2胞外肽段不同区域在配基识别过程中的功能,对TLR-2a(7M-225E)、TLR-2b(185L-392L)、TLR-2c(436E-595C)三个小片段进行克隆及原核表达,其中TLR-2a和TLR-2c得到成功克隆和表达,活性鉴定结果显示TLR-2a与商品抗TLR-2(179L-204I)多抗和抗His单抗反应良好,TLR-2c可以与抗His单抗反应,在配基结合实验中TLR-2a和TLR-2c都可与PGN和LTA结合,提示TLR-2对配基的识别为构像识别.
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突变型和野生型MBL基因在COS7细胞中的瞬时表达
采用PCR技术,从质粒pMBLm52、pMBLm54和pMBLm57中分别获取含CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA点突变的人甘露聚糖结合凝集素(MBL)突变体全长编码区cDNA序列,将其分别插入质粒pcDNA4/HisMax C中,构建成相应的3种真核表达载体.将各突变型MBL基因的真核表达载体和野生型MBL基因真核表达载体以脂质体法分别转染COS7细胞.72 h后,以双抗体夹心ELISA技术检测各细胞培养上清中目的蛋白的含量分别为0.980 μg /ml、0.971 μg /ml、0.900 μg /ml和1.047 μg /ml;用One-way ANOVA分析这些目的蛋白的含量无显著性差异(P＞0.05).因此,MBL结构基因的点突变并不影响MBL蛋白的合成与分泌.
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一株新的鼠抗人2IgB7-H3功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定
研制功能性鼠抗人2IgB7-H3单克隆抗体.以人2IgB7-H3基因转染细胞L929/2IgB7-H3为免疫原,常规免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠;利用B淋巴杂交瘤技术,将免疫小鼠脾脏细胞和骨髓瘤细胞株SP2/0融合,L929/2IgB7-H3细胞为抗原筛选阳性细胞;经间接免疫荧光标记法对杂交瘤细胞进行反复筛选和多次克隆化培养;采用快速定性试纸法鉴定单抗Ig亚类;利用竞争抑制性实验分析该单抗识别的抗原表位;采用MTT法分析该单抗在体外阻断DC对T细胞的促增殖效应.结果:获得了1株持续稳定分泌鼠抗人2IgB7-H3单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为7D7),该单抗可特异识别L929/2IgB7-H3分子和介导有效的共刺激信号.该单抗的成功获得和其生物学特性的初步鉴定,为进一步研究B7-H3两个异构体在DC细胞及肿瘤细胞上的作用机制奠定了物质基础.
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α-黑素细胞刺激素基因修饰的树突状细胞延长小鼠移植心脏的存活时间
为观察α-黑素细胞刺激素(α-MSH)基因修饰的树突状细胞(DC)抑制同种异型基因小鼠心脏移植排斥反应的效果,以腺相关病毒(AAV)为载体将α-MSH基因导入BALB/c小鼠骨髓来源的未成熟DC,制备了α-MSH基因修饰的DC(α-MSH-DC).在小鼠心脏移植前7 d,将α-MSH-DC输至受者C57BL/6小鼠体内,通过免疫组化方法观察供者α-MSH-DC在受者脾脏内存在的情况,用混合淋巴细胞反应(MLR)测定受者脾脏T细胞对供者同种抗原的反应性.通过颈部Cuff法小鼠异位心脏移植模型,观察心脏移植物存活时间,并用ELISA方法测定受者血清细胞因子水平的变化.结果显示,α-MSH-DC在受者脾脏内存在时间延长,能诱导受者脾脏T细胞的抗原特异性低反应性,使移植心脏存活天数延长至(19.3±2.35) d,较PBS对照组的(7.0±0.33) d明显延长(P＜0.01).使受者小鼠血清IL-2和IFN-γ水平显著降低(P＜0.01),明显升高IL-4、IL-10水平 (P＜0.01).表明移植前输入供者α-MSH基因修饰的DC能延长同种异型基因心脏移植的存活时间.
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早期和非早期类风湿关节炎患者外周血CD4+ T细胞基因表达差异
为了探讨早期、非早期类风湿关节炎(RA)患者与健康人外周血CD4+ T细胞的基因表达差异.采集早期、非早期RA患者及健康人空腹静脉血,纯化得到CD4+ T淋巴细胞,利用基因芯片检测和分析技术,探索早期、非早期RA患者与健康人外周血CD4+ T淋巴细胞基因表达差异.结果:非早期与早期RA患者比较,外周血CD4+ T淋巴细胞有83条基因表达存在显著性差异,其中上调3条,下调80条,主要涉及信号转导.与健康人比较,有45条基因异常表达,其中13条基因在RA的早期和非早期较正常对照组表达降低,30条在早期高表达;只有2条与早期与非早期比较差异表达的83条基因重复;差异基因涉及信号转导和免疫应答,以及相关的信号转导途径.早期与非早期RA患者外周血CD4+ T淋巴细胞基因表达谱存在明显差异,与健康人比较的差异基因与RA早期和非早期比较的差异基因不一致.
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高亲和力单克隆抗体CL15识别的表位
鉴定抗磷脂综合征患者来源的抗纤溶酶单抗CL15所识别的结构域,并运用生物信息学和计算机辅助设计对CL15进行表位分析.使用分子克隆的方法克隆并纯化了纤溶酶的结构域,ELISA方法检测CL15对天然纤溶酶和微小纤溶酶的结合能力.根据CL15的抗体的互补区(CDR)的已知序列,在PBD蛋白库中进行同源比较,获得了同源性较高的单抗1MFA的Fab段的晶状结构,用计算机软件把CL15的CDR区序列优化进入1MFA后,根据结构域的空间结构与CL15进行对接.结果,高亲和力结合纤溶酶的单抗CL15识别纤溶酶的结构域,通过对CL15的晶体结构的同源模建,计算机模拟与微小纤溶酶结合,CL15在纤溶酶的酶活性区的606～789中的部分氨基酸序列有明显的相互作用,存在表位为空间构象,能将纤溶酶的丝氨酸活化中心屏蔽.CL15能识别微小纤溶酶,抗原表位在纤溶酶的丝氨酸的活性中心区域.CL15能阻断丝氨酸蛋白酶的活性中心的关键氨基酸,降低纤溶酶的活性,可能是终导致抗磷脂综合征病人血栓形成的原因之一.
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正常妊娠和原因不明习惯性流产者HLA-G基因14 bp缺失多态性研究
为研究HLA-G基因3'非翻译区14 bp缺失多态性在习惯性流产患者和正常妊娠妇女中的差异,分别提取患者蜕膜和正常女性外周血DNA.PCR扩增HLA-G基因第8外显子,产物经9%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并经EB染色后在凝胶成像仪下观察.显著性检验用SAS软件包进行四格表χ2分析.结果显示:(1)-14 bp和+14 bp等位基因频率在两组间无显著性差异;(2)与正常对照组相比,RSA患者组中-14 bp/+14 bp杂合子的比例显著升高(χ2＝4.7690,P=0.0290).结果提示,中国人群HLA-G 14 bp缺失多态性在维持正常的妊娠中可能有重要作用.
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CD4+ CD28- T淋巴细胞与自身免疫性疾病
CD4+ CD28- T细胞是一个具有特殊生物学效应的细胞亚群,高频出现于某些自身免疫性疾病中,具有细胞毒样的侵蚀特性、T细胞活化的不平衡性及抗凋亡特征,与疾病的发生、发展及转归密切相关.
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MHC I类链相关蛋白A的表达调控与抗肿瘤免疫
MHC I类链相关蛋白A(MICA)是非经典的HLA I类分子,是活化性受体NKG2D的配体,在感染、肿瘤及细胞应激情况下表达上调,其表达量及形式的变化,直接影响多种免疫效应细胞功能表现.本文就近年来对MICA的表达调控以及与抗肿瘤免疫关系方面进行综述.
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Toll样受体的研究进展
Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)是近年来备受关注的一种病原体识别受体,它在固有免疫中通过对病原体相关的分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP)的识别发挥作用,通过刺激信号的级联反应导致细胞因子的产生和协同刺激因子的表达,在天然免疫和获得性免疫中起到了桥梁的作用.鉴于TLR在免疫学,分子生物学以及临床研究中的重要意义,自发现至今,众多相关的研究不断展开.本综述将回顾TLR发现以来主要的研究进展,探讨TLR的临床联系以及展望未来TLR可能的研究方向.
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蜕膜NK细胞及其分泌的细胞因子与妊娠
蜕膜NK细胞是妊娠早期出现多的淋巴细胞.它与外周血NK细胞表型存在差异,功能不尽相同.在母胎界面处,蜕膜NK细胞一般处于抑制状态,分泌多种细胞因子参与正常妊娠维持.本综述了蜕膜NK细胞的主要特征及其分泌的细胞因子,并主要阐述这些细胞因子在母胎界面处的免疫调控和正常妊娠维持中可能起到的作用.
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抗体组学和抗体组药物研究进展与展望
抗体组学是在基因组学和蛋白组学基础上,结合鼠、兔、人杂交瘤技术及基因工程抗体技术,经过抗体靶标高通量筛选、建立大规模抗体库、大规模高通量筛选、优化,终应用于研究、诊断及治疗的抗体一门新兴学科.抗体组药物以高通量、整体化、信息化和系统化为特点,大大提高了抗体药物的研发速度,缩短了药物的研发周期;由于抗体组药物的筛选利用了基因芯片、蛋白芯片和组织芯片等高通量技术,减少了研发成本和风险,同时既可获得广谱的抗体药物,又可获得个性化的抗体药物.本文通过对抗体组学、抗体组药物研究的进展介绍与展望,回顾了单克隆抗体技术的发展,提出目前抗体组药物靶标筛选、抗体及全人抗体库制备、高效抗体组药物筛选和抗体组药物优化等技术的重要意义,介绍了转基因小鼠技术、噬菌体显示技术和人-人杂交瘤技术制备人及全人抗体的方法,并对当前抗体组药物的研发现状及药物市场进行分析.作为生命科学的主要发展方向,抗体组药物将成为治疗肿瘤、传染性疾病、自身免疫性疾病新的研究热点.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
