现代免疫学杂志
Current Immunology 현대면역학
- 主管单位: 上海市教育委员会
- 主办单位: 上海市免疫学研究所,上海市免疫学会
- 影响因子: 0.40
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1001-2478
- 国内刊号: 31-1899/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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小分子干扰RNA抑制人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株中生存素的实验研究
探讨小于扰RNA(siRNA)对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生存素基因表达的抑制作用及对细胞凋亡、增殖和细胞周期的影响.将已构建的靶向生存素的siRNA表达质粒采用脂质体法转染A431细胞株.应用RT-PCR检测A431细胞生存素mRNA的表达,Western blot检测生存素蛋白的表达,流式细胞术检测Annexin标记的凋亡细胞和分析细胞周期,噻唑蓝(MTT)法分析细胞增殖.结果显示,与未处理的A431细胞株和转染空载体的A431细胞株比较,转染siRNA表达质粒可以明显抑制生存素基因在转录和翻译上的表达;siRNA表达质粒组的凋亡率明显增加达到21.3%;24、48、72和96h的细胞增殖抑制率也明显增加,并随着时间抑制效率变高;细胞周期分析发现抑制生存素表达使得A431细胞株出现明显的G2/M期阻滞现象.因此,靶向生存素的siRNA表达质粒可以特异性抑制生存素的表达,显著抑制肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡.靶向生存素的siRNA表达质粒为鳞状细胞癌的基因治疗提供了一种新思路.
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高致病性人禽流感H5N1透皮疫苗免疫佐剂的初步筛选
用不同的佐剂与高致病性人禽流感H5N1全病毒疫苗混合,通过透皮途径免疫BALB/c小鼠并评价其免疫应答效果,从而初步筛选出较好的透皮免疫佐剂.实验选用CT、CPG 0DN1826、CpG ODN2006、MF59四种不同的佐剂按适当的比例与高致病性人禽流感H5N1灭活全病毒抗原混合制成透皮疫苗,透皮免疫BALB/c小鼠,检测血清IgG抗体效价、血清中和抗体效价,以及肺、鼻灌洗液中特异性IgG和IgA抗体效价,并对脾淋巴细胞分泌的IFN-γ和IL-4细胞因子水平进行评估.结果显示,在CpG ODN1826单独使用或与CT合用组血清IgG抗体效价较无佐剂组均有显著升高(P<0.05),其中尤以CpG1826+CT+HA组血清IgG抗体效价高,同时血清中和抗体效价也验证了这一点,肺、鼻灌洗液中,均可检测到特异性IgA、IgG.佐剂组与无佐剂组、PBs组、空白对照组相比较,脾淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4的水平均见提高(P<0.05),并且CpG1826+CT+HA组与滴鼻组相比无统计学意义(P-0.2267).结果表明,在高致病性人禽流感H5N1病毒透皮疫苗的小鼠模型中,CT与CPG ODN1826是较好的的透皮免疫佐剂,能够诱导机体Th2型和Th1型免疫应答,同时诱导了黏膜免疫应答的产生,这为进一步研究提供了基础.
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HLA-G基因3'UTR区14bp的多态性与上海地区中国人群SLE的关联性
非经典HLAI类分子HLA-G基因位于SLE易感区域6p21.1-6q15内,为研究其3'端非翻译区(3'UTR)一段14 bp的缺失/插入多态性与SLE易感性的关联,我们抽提了受试者外周血基因组DNA,并通过双脱氧链终止测序法对286例中国人群正常人及486例SLE患者进行该多态性位点的分型,然后对该多态性位点的基因型及等位基因的分布频率进行病例-对照分析.发现总的SLE患者组及SLE各患者组的基因型及等位基因频率分布与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).因此,提示HLA-G可能为中国人群SLE的易感基因.
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中国汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性研究
分析苏皖地区、西北地区及东北地区汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因的多态性及基因型和单倍型特点.采用序列特异性引物PCR法(PCR-SSP)对苏皖地区人群102人,西北地区62人,东北地区71人进行KJR基因低分辨率检测,并根据Hsu等的标准进行基因型和单倍型分析.三个地区的人群中共检测出7种新基因型,其中新基因型NEW1(2,6),频率约4%;KIR2DS2和KIR2DL2在东北地区的汉族人群中的阳性率是5.63%,显著低于西北地区(21%)和苏皖地区(17.7%);KIR2DS4在东北地区汉族人群中的阳性率是88.7%,显著高于西北(72.6%)和苏皖地区(74.5%).三地区汉族人群KIR基因型和单倍型频率无显著性差异.中国汉族人群有其独特的KIR基因频率和基因型频率分布,不同地区汉族人群KIR分布有一定的差异.
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抗苏丹红单链Fab抗体的构建、表达及功能鉴定
从分泌抗苏丹红I单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株SU211中克隆抗体轻链Lc基因和重链Fd基因,将Lc、Fd基因以及Linker克隆到载体pET24a(+)中,构建scFab表达载体并在E.cali BL21(DE3)获得表达,SDsPAGE和western blot分析表明其表达形式为包涵体,相对分子质量约为57 kD,与理论预期值相符.经复性后,ELISA鉴定结果表明复性抗体对苏丹红I具有很高的结合特异性.本研究为新型基因工程抗体的构建以及苏丹红新型免疫检测技术的建立奠定基础.
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T细胞疫苗免疫原性蛋白的免疫蛋白组学鉴定
为建立T细胞疫苗作用机制的免疫蛋白组学研究方法.以γ射线照射的活化小鼠卵清蛋白(ovaltmmin,OVA)特异性细胞系作为疫苗免疫同系BALB/c小鼠诱导抗活化态T细胞的体液免疫应答,加强免疫后,收集抗活化态T细胞抗血清.提取活化态T细胞蛋白进行双向电泳,结合二维western blot技术寻找能与抗活化态T细胞抗血清发生免疫反应的蛋白质.蛋白经胶内酶切后使用四极杆-飞行时间串联质谱(Q-TOF)鉴定了5个免疫反应蛋白点,对应于5种蛋白质.成功建立了T细胞疫苗的免疫蛋白组学研究方法,为寻找保护性抗原及研究T细胞活化调控机制的工作打下了基础.
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HVEM在人CD4~+CD25~+调节性T细胞上的表达及功能研究
研究单纯疱疹病毒侵入介质(herpesvirus entry mediator,HVEM)在人CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg)上的表达及对Treg功能的影响.分离人外周血单个核细胞,磁珠纯化获得T细胞及其不同亚群,流式细胞术检测Treg上HVEM 的表达.Treg按不同比例分别与去除Treg的CD3~+T细胞、CD4~+CD25~-T细胞或CD8~+T细胞混合培养,加入抗HVEM抗体或同型对照抗体,并用CD3抗体单独或联合CD28抗体刺激T细胞,MTT法检测T细胞增殖.结果显示,Treg上HVEM表达量为90%~95%(n=15).抗HVEM抗体组与对照组相比,降低了Treg对各类T细胞增殖的抑制作用(P<0.05),证明Treg表达的HVEM介导了其发挥抑制功能.
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人TRIM5α基因改构体的表达、纯化及其体外免疫活性研究
构建TRIM5α改构体TRIM5α H(R328-332)的原核表达载体pET28a.转化大肠杆菌BL21 codon plus(DE3),获得重组表达质粒pETTRIM5αH(R328-332),30 ℃下经IPTG诱导,该融合蛋白在大肠杆菌BL21codon plus(DE3)中表达.获得的重组的蛋白再经过纯化,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白,并用免疫共沉淀和ELISA等对重组蛋白进行功能研究.结果构建的重组质粒在大肠杆菌中获得表达,经纯化后的重组pETTRIM5αH(R328-332)蛋白纯度可达90%以上,并且证实其在体外与HIV-lgag有结合作用.
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流式细胞术检测慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者外周血Th1、Th2细胞的意义
检测慢性淋巴细胞甲状腺炎(CLT)患者外周血Th1、Th2细胞的水平,探讨Th1细胞占CD4~+T细胞比例(Th1%)、Th2细胞占CD4~+T细胞比例(Th2%)、Th1/Th2在各组间的差异和意义及分别与血清中针对甲状腺特异抗体的相关性.收集45例CLT患者外周血,分为甲状腺功能正常组15例和甲状腺功能减退组30例,20例健康人外周血作为对照组;采用胞内细胞因子染色流式细胞术检测Th1%和Th2%;应用电化学发光法检测甲状腺自身抗体--甲状腺球蛋白抗体(TgAb)和甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)水平.结果显示,两组CLT患者外周血Th1%、Th1/Th2均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),CLT两组间Th1%、Th1/Th2的差异无统计学意义;各组间Th2%差异无统计学意义;CLT患者外周血Th1%、Th1/Th2分别与血清TPOAb及TgAb阳性表达呈显著正相关(P均<0.01).进一步证实Th1细胞在CLT发病中起主导作用,Th1/Th2细胞失衡且向Th1细胞漂移与CLT发生发展密切相关,并且提示胞内细胞因子染色流式细胞术检测Th1/Th2细胞可成为研究自身免疫性甲状腺炎免疫状态的可靠方法.
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蛋白酶体抑制剂MG-132对TGF-β_1诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响
TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞转分化是肾小管间质纤维化的重要细胞过程.泛素-蛋白酶体系统在此过程中起重要的调控作用.通过体外观察蛋白酶体抑制剂MG-132对TGF-β_1诱导的HK-2细胞株转分化作用的影响,并探讨其分子机制.RT-PCR法检测Smurf1、Smurf2和Smad7 mRNA的表达,免疫印迹法检测Smurf1、Smurf2和Smad7蛋白的表达,免疫组织化学法检测胞浆中FN和α-SMA的分泌.结果显示:MG-132干预组细胞Smurf1、Smurf2、Smad7 mRNA表达下降,而Smad7蛋白表达增加,胞浆中FN和α-SMA分泌减少.结果表明,MG-132可通过抑制TGF-β1诱导的HK-2Smurf1、Smutrf2的表达,抑制Smad7在26S蛋白酶体中的降解,减轻FN和α-SMA的分泌和沉积,从而抑制HK-2转分化,延缓肾小管间质纤维化的发展.
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TNF受体胞外区在RBL-2H3肥大细胞中表达及分泌后的生物活性
检测TNF受体胞外区在RBL-2H3细胞中表达及分泌后的生物活性.用I型TNF受体(TNFR1)胞外区的表达载体转染RBL-2H3细胞,用免疫荧光技术检测TNFR1的亚细胞定位,通过诱导IgE受体交联诱导细胞脱粒,用免疫沉淀结合SDS-PAGE检测TNFR1,用TNF-α敏感细胞株WEHI细胞检测分泌的TNFR1的生物活性.免疫荧光结果显示RBL-2H3细胞的分泌型溶酶体中存在TNFR1,免疫沉淀结果显示TNFR1在RBL-2H3细胞脱粒中释放,对WEHI细胞的TNF-α毒性实验显示分泌的TNFR1具有降低TNF-α细胞毒的作用.提示在RBL-2H3细胞中表达及分泌的TNFR1具有结合TNF-α的生物活性,能够降低TNF-α的细胞毒作用.
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变应性鼻炎患者NKT细胞数量和功能分析
为了研究NKT细胞是否参与变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)发病或通过细胞因子调控而影响该疾病发生,本研究通过分析AR患者外周血NKT细胞数量和增殖和产生细胞因子格局的动态变化来探索NKT在AR发病中的调节作用.通过用流式细胞仪分析其特异性NKT细胞表面标志发现,AR患者和正常人的外周血NKT细胞数量无明显差异.继之用NKT细胞特异性刺激剂α-GalCer进行NKT细胞增殖的动态分析,结果也提示AR患者和正常人的外周血NKT细胞增殖格局无明显差异.但是,用ELISA分析了AR患者外周血NKT细胞受α-Galcer刺激后分泌细胞因子格局后发现:AR患者的NKT细胞分泌IL-4和IL-5在72 h、96 h时比正常对照组明显增加,而分泌IL-12和IFN-γ的量则明显低于正常对照组.提示AR患者的NKT细胞可能通过分泌IL-4和IL-5上调Th2细胞功能,同时分泌IL-12和IFN-γ能力降低,提示AR患者的NKT细胞诱导Treg和自身的调节能力均降低.这些因素的综合可能是NKT细胞参与AR发病的重要途径之一.
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兔抗人Argonaute2蛋白多克隆抗体制备及鉴定
为了制备兔抗人Argonautez(AGO_2)的多克隆抗体,并鉴定其特异性,应用组织芯片初步探讨其在人类正常及肿瘤组织中的分布.采用合成特异性AGO_2多肽,以马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏大白兔,制备兔抗人AGO_2多克隆抗体,然后用亲和层析法纯化抗体.用ELISA和Western blot方法进行抗体验证,并应用人组织芯片进行AGO_2的免疫组化研究.结果显示,通过构建AGO_2多肽-KLH载体复合物致敏大白兔,我们制备了兔抗人AGO_2蛋白多克隆抗体,经ELISA及Western blot证实兔抗人AGO_2抗体可特异性识别AGO_2多肽,在人组织芯片中通过免疫组化染色显示该抗体在很多正常组织上皮细胞及肿瘤细胞胞浆中呈阳性染色.成功制备兔抗人AGO_2多克隆抗体,为进一步研究AGO_2在微小RNA/RNA干扰通路中的作用及在人类疾病中的意义提供了有利工具.
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BXSB狼疮性肾炎小鼠白细胞介素18的动态表达
为了观察IL-18在BXSB狼疮性肾炎小鼠的动态表达,并探讨IL-18在LN发生发展中的作用,将C57BL/6小鼠(正常对照)和BXSB小鼠(LN模型)各24只分别随机分为4组,观察至10、12、16、20周,PASM染色法观察不同周龄小鼠肾组织病理变化,直接免疫荧光法检测肾组织IgG的沉积,ELISA法检测小鼠血清IL-18水平,RT-PCR法检测肾组织和脾组织IL-18 mRNA表达水平,免疫组化法检测肾组织IL-18表达水平,并分析LN小鼠系统和肾脏IL-18表达与肾组织病理和免疫病理的相关性.结果显示,LN组小鼠肾组织IgG沉积随时间进展逐渐增多,肾组织病理损伤评分、血清IL-18水平和肾小管IL-18表达量在12周后进行性升高,肾小球IL-18表达量在16周后进行性升高,且均较正常对照组明显升高(P<0.05);不同周龄LN小鼠肾组织和脾组织IL-18 mRNA表达与正常对照组之间无统计学差异,LN小鼠血清IL-18水平、肾小球及肾小管IL-18表达量与肾小球损伤评分及肾组织IgG沉积评分呈正相关.推测IL-18可能在LN发生发展中发挥重要作用,且转录后过程对于系统和肾脏局部1L-18的高表达起主要作用.
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木犀草素对活化T细胞p65入核的影响
T细胞在机体应对外来抗原的免疫应答过程中处于其中心环节.木犀草素(luteolin)有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗变应性、抗病毒和细胞保护作用.研究中,以佛波醇酯(PMA)+离子霉(Ion)素刺激小鼠淋巴细胞来源的T细胞,以不同终浓度的木犀草素与T细胞共培养,MTT法检测发现,.PMA+Ion刺激48 h后,小鼠T淋巴细胞增殖显著高于对照组;木犀草素(10、20、30μmol/L)可显著降低PMA+Ion引起的细胞增殖;Western blot检测发现,PMA刺激T细胞30 min时能显著促进胞浆中的p65进入核,木犀草素(10、20、30μmol/L)能抑制PMA刺激的T细胞p65入核,以30 μmol/L的木犀草素抑制作用强.研究表明,木犀草素能通过抑制NF-Bκp65的入核,抑制小鼠T细胞的增殖和活化,调节机体免疫功能.
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人源化抗体的演进发展及应用现状
抗体的制备在经历了多克隆抗体、单克隆抗体后,进入了以人源化为目标的基因工程抗体阶段.嵌合抗体(chimericantibody)属于第一代人源化抗体,是应用DNA重组技术将鼠源性的可变区(V区)基因与人抗体的恒定区(C区)基因相连接构成嵌合基因的表达产物.在此基础上产生的第二代人源化抗体,即CDR移植抗体((2DR-grafted antibody),仅保留了3个CDR是鼠源性的,人源性可达90%以上.以上两者仍保留了鼠源性的成分,可诱发人抗鼠抗体(HAMA)反应.20世纪90年代以后产生的噬菌体抗体库技术,融合了噬菌体展示和抗体组合文库技术,突出了基因型与表型的统一,使抗体工程技术进入了一个新的发展阶段,全人源化抗体的生产和应用逐渐走向成熟.人源化抗体在肿瘤、器官移植排斥反应、自身免疫病等疾病的临床诊断和治疗中显示出了广阔的应用前景.
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新型抑制性细胞因子IL-35研究进展
IL-35是一种新发现的抑制性细胞因子,是EB病毒诱导基因3(EBl3)产物和IL-12的p35亚基形成的异二聚体.IL-35可由CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg)特异性产生,是Treg发挥抑制作用所必需的细胞因子.在体外,IL-35既可以扩增Treg的数量,又可以抑制CD4~+CD25~-效应性T细胞的增殖和Th17细胞的分化.在体内,IL-35能有效减轻胶原诱导关节炎(CIA)小鼠的症状.因此,深入研究IL-35的生物学功能和作用机制对寻找自身免疫性疾病和肿瘤新的治疗手段具有重要价值.
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嗜碱粒细胞在过敏性哮喘发病中的作用进展
嗜碱粒细胞曾被认为是炎症反应的效应细胞,但近年来随着高表达嗜碱粒细胞动物模型的建立,嗜碱粒细胞干祖细胞的确定、特异性单克隆抗体的出现及活化标志(CD63、CD203c等)的应用,发现嗜碱粒细胞的活化除经典的IgE依赖方式外,还存在非IgE依赖方式,活化后能够不依赖T细胞而快速产生IL-4和IL-13,介导Th2型免疫反应,故其还具有免疫调节功能.本文对嗜碱粒细胞及其在过敏性哮喘发病中作用的研究进展作一综述.
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Th17细胞在自身免疫性疾病中的作用
一直以来人们认为Th细胞只有Th1和Th2两个亚群,然而近人们又发现了一个具有与Th1和Th2细胞亚群不同分化机制和功能特性的新的Tb细胞亚群Th17.研究显示,Th17在多种疾病尤其是自身免疫性疾病中发挥着重要作用,因此Th17细胞的发现让我们不得不重新认识T细胞介导的免疫反应.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 06 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 |
2008 | 01 02 03 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |