新生儿和成人PBMC中IL-4基因表达和NF-AT活性的比较

通过比较新生儿脐血单个核细胞(CBMC)和成人外周血单个核细胞(PBMC)中IL-4基因表达水平和活化T细胞核因子(NF-AT)活性,探讨新生儿IL-4基因表达水平低下的机制.用ELISA和RT-PCR法测IL-4及其mRNA水平;电泳迁移率转换试验(EMSA)测NF-AT活性.结果显示:抗CD3+PMA刺激后,CBMC培养上清液中IL-4水平较PBMC明显低下(P＜0.01);CBMC产生的IL-4 mRNA较PBMC明显减少;CBMC核蛋白内几乎测不出NF-AT活性,而PBMC核蛋白内NF-AT活性较强.表明在转录水平上缺乏NF-AT调控可能使新生儿IL-4基因转录减少,从而导致新生儿IL-4基因表达水平低下.

含Ⅰ-Adα和β链cDNA的三顺反子逆转录病毒载体构建及真核表达

为了协同表达MHCⅡ类分子的两个链α和β,利用脑心肌炎病毒和脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入位点,构建了含MHCⅡ类分子α和β链及选择标记新霉素磷酸转移酶基因的三顺反子逆转录病毒载体.经包装细胞包装成重组逆转录病毒后,感染NIH3T3、MM45T.Li、COS7细胞,经PCR、BT-PCR、Southern印迹、Northern印迹及流式细胞术在多水平上证实了α链和β链的基因表达和MHCⅡ类分子的正确组装.

奶牛乳腺肥大细胞的粘膜免疫学特征

应用改良甲苯胺蓝染色法(MTB)和阿尔辛蓝-番红鉴别染色法(AB-S)对静止期和活动期奶牛乳腺肥大细胞的粘膜免疫学性质进行了研究.MTB染色结果显示,静止期乳腺中的肥大细胞主要分布于各级输乳管上皮基膜区,小血管周围也有肥大细胞分布.在活动期,肥大细胞主要分布于腺泡上皮基膜附近,上皮内也有极少数肥大细胞分布,小叶间结缔组织中的肥大细胞则分布于小叶间导管或输乳管上皮基膜区.AB-S染色证实,乳腺肥大细胞只被阿尔辛蓝染成蓝色,而不被结缔组织型肥大细胞的标志性染料番红着染.这表明,乳腺肥大细胞是一种典型的粘膜型肥大细胞(MMC),并参与构成乳腺粘膜免疫的第一道防线.

大鼠皮肤移植排异反应中T淋巴细胞亚群的观察

为了了解在皮肤移植组织排异反应中浸润的不同T淋巴细胞亚群,分析其与排异反应的关系.采用HE及免疫组化方法观察大鼠Ⅲ度烫伤后20例同种异体-自体皮肤混合移植和15例大张同种异体皮肤移植组织在移植后4或5、7、14、21和28 d时CD4+和CD8+淋巴细胞的比例.结果表明同种异体-自体皮肤混合移植组7～14 d时CD8+淋巴细胞明显高于大张同种异体皮肤移植组(P＜0.05),在移植后4或5 d CD4+淋巴细胞明显高于CD8+淋巴细胞.大张同种异体皮肤移植组在移植后7～14 d CD4+淋巴细胞明显高于CD8+细胞,在植皮后7～28 d高于同种异体-自体皮肤混合移植组,21 d时差异有统计学意义(P＜0.05).在7～14 d时CD4/CD8比值高于同种异体-自体皮肤混合移植组(P＜0.05).提示同种异体-自体皮肤混合移植排异反应以CD8+淋巴细胞为主,而在大张同种皮肤移植排异反应中CD4+淋巴细胞起主要作用.

超抗原SEA和SEB对正常人TCRVβ基因的限制性取用

金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)作为一种超抗原,以MHC非限制性及TCR Vβ特异性的方式激活T细胞.本文用定量PCR方法,分析SEA和SEB刺激的正常人外周血淋巴细胞T细胞抗原受体Vβ的取用格局.揭示在不同HLA遗传背景下,SEA刺激的淋巴细胞均选择性地取用Vβ3和Vβ6两种基因片段,而SEB刺激的淋巴细胞则优势表达Vβ2、Vβ8和Vβ9.通过比较分析,Sigma产的SEB刺激淋巴细胞后则优势表达Vβ3、Vβ4、Vβ16和Vβ20,提示外周血淋巴细胞在超抗原作用下发生寡克隆扩增.

静息B细胞免疫诱导小鼠心肌移植物存活时间的延长

本文用小鼠耳后心肌移植作为模型观察静息B细胞在诱导延长移植物存活的作用.用C57BL/6新生小鼠的心脏移植给Balb/c成年雌性小鼠的耳后,受鼠在移植前1周事先尾静脉注射C57BL/6静息B细胞,同时观察了用静息B细胞免疫后的Balb/c小鼠脾细胞对C57BL/6小鼠脾细胞的CTL活性.结果显示单独使用静息B细胞免疫组受鼠的同种移植物平均存活时间为(16±1.34)d[空白对照组为(10±1.05)d],单独注射阿霉素组心肌平均存活时间为(14.6±1.74)d,静息B细胞预处理同时配合使用阿霉素组,心肌平均存活时间延长至(27.8±3.96)d(P＜0.001).而活化B细胞组的小鼠排斥反应强烈,在移植后8 d之内全部排斥.静息B细胞免疫鼠对同种细胞的杀伤率,明显低于用活化B细胞免疫的对照组.

川芎嗪和地塞米松对狼疮肾炎患者PBMC IL-12表达及合成Ig的影响

应用细胞培养技术,采用半定量RT-PCR法和ELISA检测等方法,以正常人为对照,观察川芎嗪(33 μg/ml)和地塞米松(10-5mol/L)对培养的狼疮肾炎(LN)活动期、静止期外周血单个核细胞(PBMC)表达IL-12和产生免疫球蛋白(Ig)的影响.结果表明,LN活动期、静止期较正常对照组IL-12蛋白、基因水平明显增高(P＜0.01),川芎嗪仅对活动期狼疮肾炎PBMCIL-12表达明显抑制,而地塞米松明显抑制狼疮肾炎PBMC IL-12表达(P＜0.01),两种药物对正常人对照IL-12表达及合成Ig无明显抑制作用(P＞0.05),川芎嗪和地塞米松均明显抑制狼疮肾炎活动期及静止期Ig合成(P＜0.01或＜0.05).提示:狼疮肾炎患者有高水平的II-12,川芎嗪、地塞米松通过下调狼疮肾炎IL-12表达及Ig的合成,减轻狼疮肾炎的发生和发展.

分泌高效价抗催产素单抗杂交瘤细胞系的建立

为进一步研究催产素分子的生理功能及空间结构,制备识别其特有表位的单抗.用改良的碳二亚胺二步法交联催产素和牛甲状腺球蛋白,用常规方法制备针对催产素分子的单抗,测定了抗体的亚类、亚型和相对亲和力,并采用竞争ELISA法,检测各株细胞分泌的单抗和几种催产素的拟似物的交叉反应程度.结果制备出了3株分泌高效价抗体的杂交瘤细胞4G11、2B11和3F1,其亚类均为IgG1,亚型均为k型,相对亲和力均较高.3株中4G11和2B11可以特异性地和催产素反应,而3F1与AVP、VAS及ASU有较强的交叉反应.催产素单抗可用于阻断催产素的生物学功能等研究.

抗OX-4O和抗IL-4抗体体外促进Th1细胞的初步探讨

将灭活的自身黑色素瘤细胞MEL-72与BCG混合免疫MEL-72黑色素瘤病人,10 d后手术方法获取局部引流淋巴结,制成淋巴细胞悬液,以抗CD3抗体体外培养,ELISA方法检测细胞上清中肿瘤特异性Th1、Th2细胞因子的表达.进一步用抗OX-40抗体与CD4+T淋巴细胞表面OX-40作用或用抗IL-4抗体阻断IL-4的分泌,观察肿瘤特异性免疫反应能否向Th1方向转换.结果表明:用灭活的自体肿瘤细胞免疫机体能诱导出该肿瘤细胞特异性的Th1和Th2.应用抗OX-40抗体与抗IL-4抗体作用后,Th1细胞因子分泌水平增加(TNF-β和IFN-γ),结果提示,应用抗OX-40和抗IL-4抗体可诱导肿瘤特异性Th1反应.

上海地区汉族人HLA-DQBI启动子多态性以及QBP-DQBI连锁分析

为分析上海地区汉族人HLA-DQBI启动子(QBP)多态性,以及QBP与DQBI的连锁不平衡,我们选用24个序列特异性寡核苷酸探针(SSO)检测QBP多态性.在目前已知的12种QBP等位基因中,我们仅检测到10种(未发现新的QBP类型),并且发现QBP与DQBI的某些等位基因之间存在一定的连锁格局.我们的结果与高加索人群研究结果比较发现,无论是QBP基因频率还是QBP-DQBI单元型频率,在两种不同人群中都存在明显差异.结果提示,由于不同的QBP等位基因功能不同,因此QBP-DQBI之间不同的单倍型组合可能是HLA与疾病关联的另一个因素.

自身免疫性甲状腺疾病胰岛素样生长因子及其结合蛋白的改变

为探讨胰岛素样生长因子(IGF)、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)在自身免疫性甲状腺疾病(AITD)中的变化及其影响,本研究检测了56例AITD患者与24例正常对照血清IGF-1、IGFBP-1～3及甲状腺功能,发现IGF-1在GD、HT与GD控制组明显低于正常对照(P＜0.01),IGFBP-1、IGFBP-2在GD组明显高于正常对照(P＜0.01,0.05),IGFBP-3在HT组明显低于正常对照(P＜0.05);IGF-1与甲状腺激素间无相关,IGFBP-1～3均与TT4相关(r=0.34、0.38、0.31;P＜0.05).提示机体甲状腺激素、免疫状态均可能影响IGF、IGFBP水平,而后者有可能参与调节AITD的进程.

CD154 cDNA克隆、单克隆抗体制备及特异性鉴定

本研究目的是获得特异性抗人CD154单克隆抗体.利用特异引物,通过RT-PCR从人外周血淋巴细胞中扩增出编码CD154分子的cDNA全长,将其克隆在谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白表达载体pGEX4T-3中,转染大肠杆菌Jm109经诱导获得GST-CD154表达.融合蛋白经分离纯化后,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术,通过ELISA双筛,得到2株抗CD154单抗(1D3和5H4).其亚型分别是IgG2a和IgG1.又将CD154 cDNA全长构建真核表达载体pcDNA3-CD154,并转染COS细胞,以G418筛选后,经RT-PCR结果证实pcDNA3-CD154已成功转染COS细胞.所获单抗对转染CD154的COS细胞和刺激活化的人淋巴细胞有特异性结合反应,为进一步研究单抗功能奠定了实验基础.

卵巢恶性肿瘤患者红细胞CR1密度相关基因多态性与NK细胞活性相关性研究

对51例卵巢癌、43例良性肿瘤和40例正常妇女采用PCR-PFLP方法测定红细胞CR1(ECR1)密度相关基因多态性,采用K562细胞毒试验测定NK细胞活性.发现卵巢癌患者NK细胞活性明显低于正常人和良性卵巢肿瘤患者(P＜0.01).ECR1密度相关基因多态性高表达型(HH)的NK细胞活性明显高于ECR1中表达型(HL)的NK细胞活性,而ECR1密度相关基因组HL型的NK细胞活性明显高于ECR1低表达型(LL)的NK细胞活性.这些结果表明红细胞增强NK细胞活性与红细胞CR1密度相关基因组多态性型别密切相关.

沙培林乳剂栓塞治疗原发性肝癌患者后免疫变化的初步临床观察

评价原发性肝癌患者免疫栓塞治疗前后的免疫指标变化.经肝动脉灌注沙培林碘化油乳剂治疗肝癌患者16例,治疗前后用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞亚群的比例,并与单纯栓塞组(19例)比较.结果,治疗前患者的CD3+、CD4+细胞比例、CD4+/CD8+比值低于正常,而CD8+细胞比例则高于正常.治疗后CD3+、CD4+、NK细胞比例、CD4+/CD8+比值均较治疗前升高,并且较单纯栓塞组更为显著.在原发性肝癌患者的细胞免疫状态低下,免疫栓塞治疗可显著改善肝癌患者的细胞免疫状态.

抗CD28单抗对T细胞体外抗瘤作用的影响

采用健康人外周血T淋巴细胞分别与BEL-7402人肝癌细胞和抗CD28混合培养,检测淋巴细胞活化增殖能力、CTL细胞的杀伤活性、培养上清IFN-γ和TNF-α的水平.结果发现,在BEL-7402刺激细胞存在时,抗CD28促进增殖的佳浓度为6 μg/ml,而单一抗CD28不能刺激T细胞增殖.BEL-7402细胞和抗CD28共刺激后IFN-γ和TNF-α分泌均比单纯BEL-7402高,同时其诱生的CTL细胞杀伤BEL-7402的能力也强于对照组,其差异均具有显著性(P＜0.01).上述结果提示,抗CD28单抗共刺激诱导CD4+和CD8+T细胞参与抗肿瘤免疫,使IFN-γ、TNF;-α的分泌增多,增强了体外T细胞抗瘤作用.

识别猪SLA的特异性人T细胞系TCR BV基因取用格局和CDR3结构多样性分析

不同T细胞克隆TCR分子的序列不同,所识别的抗原特异性也不同.其中第三互补决定区(CDR3)变异大,是TCR主要的抗原结合部位.本文采用荧光标记半定量PCR技术,用DNA测序仪作程序分析,了解猪细胞抗原致敏前后的人T细胞群和5个T细胞系24个TCR BV基因家族取用格局,并以TCE α链C区的基因片断作为内参对取用情况作定量估计.发现首次抗原致敏后培养2周的T细胞除了BV24、BV8和BV10未能检测出,其它BV基因都有不同程度的取用.然而,5个细胞系的TCR BV基因呈现十分有限的取用格局,其中两个CD4+T细胞系都取用BV12和BV14;3个CD8+T细胞系中都优势取用BV1,有两个还取用BV19.CD4+T细胞系和CD8+T细胞系之间TCR BV无交叉取用,提示两类细胞识别的抗原表位存在差异.进一步用变性凝胶扫描分析上述T细胞系取用TCR BV中的CDR3的多样性,发现未经抗原致敏的T细胞BV的CDR3结构为多峰型且呈正态分布,表明涉及多种结构不同的细胞克隆;而抗原特异性T细胞系CDR3除了一个CD8+T细胞系BV1有两个主峰外其它无例外地都显示单峰或者仅一个主峰,这从另一个角度证明建系T细胞的单克隆性.

大鼠脑缺血-再灌注的C3、C4和NO变化及复方水蛭合剂对其影响

本文探讨大鼠脑缺血-再灌注的免疫损伤及复方水蛭合剂对其影响.检测Wistar大鼠脑缺血-再灌注模型的脑匀浆、血清补体C3、C4和NO含量及其病理改变.结果显示模型组脑匀浆、血清补体C3、C4和NO含量较正常组高(P＜0.01,0.001),出现明显病理改变;药物组脑匀浆、血清补体C3、C4和NO含量明显低于模型组(P＜0.01,0.05),病理损伤比模型组轻.认为复方水蛭合剂可降低脑缺血-再灌注大鼠补体C3、C4和NO含量,有抗脑缺血-再灌注免疫损伤作用.

SLE与细胞因子

系统性红斑狼疮(SLE)是一种多基因遗传疾病,是以B淋巴细胞高度活化,产生多种自身抗体、形成多种免疫复合物而导致组织损害为特征的自身免疫性疾病.其中T辅助细胞在诱导B细胞增殖活化及免疫调节中起重要作用,SLE存在多种细胞因子的异常,本文就IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ等T淋巴细胞因子在SLE发病中的作用做一综述.

IL-18的生物学活性及其制备

白细胞介素18(IL-18)在体内分布广泛,具有多种生物学活性,可调节多种细胞的发育及细胞因子的分泌,对包括肿瘤在内的许多疾病的治疗和免疫病理反应的干预有重要意义.本文从细胞分子水平对此进行了综述,并对其制备进行了初步探讨.

肾移植排斥反应病人血清sE-选择素与淋巴细胞CD62L的关系

为探讨肾移植排反应病人血清SE-选择素(sCD62E)与其淋巴细胞表面配体CD62L的关系和意义,我们利用单克隆抗体-流式细胞仪荧光免疫技术和双搞体夹心酶联免疫法,测定10例肾移植排反应病人术后不同时间外周血淋巴细胞CD62L的表达及血清sE-选择素水平,并对其相关性进行分析.

红细胞血型研究的进展

在人类血液的各种成分中,已知存在着大量的遗传多态性,特别是红细胞的血型抗原.由抗体识别的血型抗原是红细胞表面分子的一部分,有着不同的结构,包括蛋白、多糖、糖蛋白、糖脂和脂蛋白等,由于抗体反应能跨越5～10个氨基酸区域或3～5个糖苷单位,因此通常能以血清学手段,区分出大量的血型抗原多态性的微小差别.

细胞因子在肠道粘膜免疫中的重要作用

粘膜组织是一个巨大的外环境表面,在人体中估计为400m2,是机体和环境进行交流的场所.所以粘膜表面可成为引起许多疾病的共同通道.在所有粘膜组织中,肠道、呼吸道及泌尿生殖道的疾病为常见.尤其在幼年期,或由于系统性感染导致机体免疫力下降,或由于处于有害的环境中,往往有较高的发病率及死亡率.

<上海免疫学杂志>被列为中国生物医学核心期刊