TLR在小鼠胸腺中的表达及其在胸腺细胞发育中的可能作用

检测体外培养和体内发育过程中,胎鼠胸腺处于不同发育阶段时Toll样受体(TLR)的表达,阐明TLR表达量与胸腺细胞发育相关性,为TLR和胸腺细胞发育分化相关研究提供基础数据.无菌取15 d胎龄胎鼠胸腺进行体外培养(FTOC),在培养不同时间点(2 d,4 d,6 d),检测处于不同发育期胸腺TLR的表达;同时在孕期不同天数(15～19 d),分别取胎鼠胸腺,检测在体内发育过程中胸腺TLR的表达;在FTOC中加入二脱氧鸟苷培养6 d以制备胸腺基质细胞,检测基质细胞与胸腺细胞TLR表达情况.结果:小鼠胸腺中检测到多种TLR.FTOC培养中:培养第2天(F2)开始检测到各种TLR,到培养第6天(F6),TLR1,TLR3,TLR6,TLR7,TLR8明显上调,而TLR4,TLR5保持低水平,TLR4在培养第6天又下降;体内发育过程中:TLR6表达量随胎龄增加有较明显上调,TLR1,TLR3-8保持低水平表达;TLR2,TLR9体内体外都未检测到明显表达.在对胸腺细胞与基质细胞TLR表达比较中发现TLR1,TLR5,TLR6,TLR7高表达于胸腺细胞.胎鼠胸腺表达某些TLR,并且在发育不同阶段表达量有所改变,提示TLR可能参与胸腺细胞的发育过程.

调节性DC分泌的外体诱导免疫耐受功能的体外研究

为了探讨树突状细胞(DC)分泌的外体(Dex)在诱导T细胞免疫耐受中的作用,体外研究采用供体Dex降低同种异体移植排斥的可能性.从正常人外周血单个核细胞中诱导培养未成熟DC(imDC),用TGF-β1联合IL-10诱导调节性DC,LPS诱导DC成熟.采用流式细胞术方法观察TGF-β1和IL-10对DC表型、吞噬功能的影响;采用超速离心和超滤的方法提纯Dex;Western blot方法检测imDC分泌的Dex(imDex)与调节性DC分泌的Dex(rDex)表达的相关分子;通过CCK-8法分析异源iDex和mDex在混合淋巴细胞反应(MLR)中的生物学功能,并比较rDex与iDex诱导免疫耐受的能力.结果显示,TGF-β1和IL-10可下调DC表面的共刺激分子CD80、CD83、CD86的表达,并诱导调节性DC分泌更多的rDex;异源的mDC分泌的Dex(mDex)在mDC存在时增强MLR,而异源的imDex在imDC存在时一定程度上抑制MLR,rDex诱导的抑制T细胞增殖作用显著强于iDex;rDex表达更多的FasL,提示TGF-β1和IL-10诱导的调节性DC分泌的rDex在免疫耐受中发挥重要作用,有望应用于同种异体移植抗免疫排斥.

抗纤维化细胞因子对TGF-β1基因启动转录活性的影响

转化生长因子β1(transforming growth factor-β1)是一类现已明确的致纤维化细胞因子,具有广泛的生物学效应,对细胞外基质(ECM)基因表达、降解、细胞增殖分化、凋亡及免疫功能都具有重要调节作用.前期我们研究发现,TGF-β1启动调控序列中单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点509 C＞T与肝纤维化进展及血浆中TGF-β1浓度有明显的相关性.本研究旨在探讨抗纤维化细胞因子(IL-10、HGF、IFN-γ)对含TGF-β1基因-509 C＞T启动调控序列活性的影响.我们以特定-509 C＞T基因型患者DNA为模板,用PCR方法扩增得到一对长度为2.14 kb(-1 328～+812)含有-509 C＞T变异的TGF-β1上游基因片段,并将其与不含启动子的pCAT3-enhancer报告基因载体重组,构建重组体phTGF2.14C和phTGF2.14T.用脂质体转染法将两种重组体分别转染至正常人肝脏细胞中,分别用IL-10(4 ng/ml)、HGF(10 ng/ml)、IFN-γ(20 ng/ml)干预转染后细胞.ELISA法测定转染细胞的报告基因CAT活性.结果表明:肝细胞转染重组体phTGF2.14C细胞的CAT活性明显高于转染重组体phTGF2.14T(t=12.5882,P=0.0002).IFN-γ对TGF-β1基因启动子phTGF2.14C、phTGF2.14T均具有显著抑制作用.细胞因子IL-10和HGF对其调控作用不显著.TGF-β1基因-509 C＞T中C等位基因可明显增强TGF-β1基因上游启动调控序列的转录活性,IFN-γ作为一种抗纤维化细胞因子在基因转录水平对含有两种等位基因-509 C＞T的TGF-β1基因上游启动调控序列均具有抑制作用.而作为抗纤维化细胞因子的IL-10与HGF在2.14 Kb(-1328～+812)区域内对TGF-β1基因上游启动调控序列的作用不显著.

EB病毒潜伏膜蛋白2A抗原表位的融合表达及其意义

为了探讨含有EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)抗原表位片断表达的融合蛋白在鼻咽癌血清学检测中的应用意义,通过重叠延伸PCR方法,合成了3对相互重叠的寡核苷酸引物,涵盖LMP2A的主要的4个抗原表位,将它们拼接在一起构建一个多肽融合基因,克隆到PGEX-4T-2载体中表达融合蛋白,以GST亲和层析柱法纯化融合蛋白,鉴定后以此为抗原检测鼻咽癌患者的血清.结果表明,获得了含EB病毒LMP2A主要的4个抗原表位的融合蛋白(EC2A),蛋白纯度达90%以上,ELISA结果显示鼻咽癌患者血清的检出率为77.9%,正常人群血清为阴性,与常规的VCA-IgA法进行比较,有9份(13.3%)血清VCA-IgA为阴性而EC2A-IgG检出阳性,为鼻咽癌的临床检测提供了新思路,也为后续的单克隆抗体制备奠定了基础.

粉尘螨-壳聚糖疫苗经鼻免疫治疗小鼠过敏性哮喘的实验研究

探讨粉尘螨壳聚糖疫苗经鼻粘膜免疫治疗过敏性哮喘的疗效.用粉尘螨(Dermatophagoides farinae,Df)提取液致敏、激发BALB/c小鼠,复制哮喘模型,24只BALB/c小鼠随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)、粉尘螨对照组(C组)粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗组(D组).检测各组气道高反应性;通过HE(haematoxylin and eosin)染色观察小鼠肺部炎症;观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞分类;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF、脾细胞培养上清的细胞因子和血清中Df特异性的IgE、IgG2a抗体.粉尘螨和粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗组肺部变态反应性炎症病理变化较模型组明显减轻,气道高反应性Penh值下降;BALF中的细胞总数、嗜酸粒细胞(EOS)计数、IL-4、血清抗原特异性IgE抗体和脾细胞分泌IL-4均明显低于模型组,而且总体作用粉尘螨壳聚糖疫苗治疗组要强于粉尘螨对照组.粉尘螨-壳聚糖疫苗经鼻腔免疫可以治疗小鼠过敏性哮喘,且作用强于单独应用粉尘螨的对照组.

人巨细胞病毒IE1蛋白促进巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α及凋亡

为了研究HCMV IE1-GFP融合蛋白瞬时高表达对巨噬细胞分泌活性及其凋亡的影响,将真核表达载体pEGFP/IE1转染至巨噬细胞(Mψ),转染48 h后,用荧光显微镜观察GFP-IE1融合蛋白或GFP的表达与定位.ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β或TNF-α的含量以及用RT-PCR检测其mRNA的表达情况,并收集Mψ经PI染色后流式细胞术(FCM)检测其凋亡率.结果发现,GFP-IE1融合蛋白在Mψ内瞬时表达且定位于细胞核,GFP定位于整个细胞中.GFP-IE1融合蛋白在Mψ内瞬时高表达使Mψ分泌IL-1β和TNF-α量及其mRNA表达量均增加且Mψ凋亡率明显上升,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),而GFP表达对Mψ分泌及其凋亡无影响(P＞0.05).HCMV IE1瞬时高表达可上调Mψ分泌细胞因子IL-1β和TNF-α并促进Mψ凋亡.

FOXP3和GITR/GITRL mRNA在类风湿关节炎和结直肠癌患者外周血中的表达研究

探讨FOXP3和糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor,GITR)及其配体(GITRL)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)和结直肠癌患者中的表达变化及GITR与FOXP3表达的相关性.运用实时荧光定量RT-PCR方法,检测55例健康体检者、55例RA患者、50例结直肠癌患者的外周血单个核细胞(peripheral blood monocytes,PBMC)中FOXP3、GITR和GITRL的基因表达水平.结果:在RA患者组FOXP3、GITR和GITRL均显著低于健康对照组(P＜0.01),经过转换后的mRNA表达水平分别为对照组的18.5%、7.5%和1.7%,GITR和FOXP3的表达水平呈显著正相关(r=0.86,P＜0.01);而在结直肠癌患者组,FOXP3的表达水平显著高于对照组(P＜0.01),表达水平为对照组的173.7%,GITR和GITRL的表达水平显著低于对照组(P＜0.01),mRNA表达水平为对照组的45.7%和50.1%,GITR和FOXP3的表达有一定的相关性(P=0.046).RA和结直肠癌患者均存在调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)异常.在RA中,GITR表达趋势与FOXP3一致,均反映Treg数量或功能降低.但在结直肠癌患者中,两者表达不尽一致.

同种异体NK细胞对不同肿瘤细胞的体外杀伤活性及其机制的初步探讨

为了观察同种异体NK细胞对不同肿瘤细胞的体外杀伤活性,并初步探讨其分子机制.以K562细胞为对照,应用LDH释放法检测不同效靶比时同种异体NK细胞杀伤CNE2、KG1a和U251细胞的活性.应用RT-PCR和流式细胞仪分别检测4种细胞MHC Ⅰ类链相关分子(MICA/B)和人巨细胞病毒糖蛋白UL16结合蛋白(ULBP1～3)基因和分子的表达情况.效靶比20∶1时用AMO-1、BMO-1、M295、M310和M551单抗分别阻断肿瘤细胞表面MICA、MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3分子,观察NK细胞对其杀伤活性的变化.结果:NK细胞对K562、CNE2和KG1a细胞均有杀伤活性,对U251细胞无杀伤活性.在mRNA水平4种细胞均表达MICA/B和ULBP1～3基因.K562细胞表达MICA/B和ULBP1～3全部分子;KG1a和U251细胞均不表达5种分子;CNE2细胞表达MICA/B和ULBP2,不表达ULBP1和ULBP3.CNE2、KG1a和U251细胞均高表达HLA Ⅰ分子,而K562细胞不表达.用单抗分别阻断靶细胞表面相应的NKG2D配体分子,NK细胞对KG1a和U251细胞的杀伤活性无变化.NK细胞对K562和CNE2细胞的杀伤活性可部分被封闭.同种异体NK细胞在体外对不同肿瘤细胞的杀伤活性不同,其杀伤机制也不完全相同.

HIV-1 Gag抗原HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位预测及改造分析

初步筛选HIV-1 Gag抗原的HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,预测并初步鉴定修饰后的表位与HLA-A*0201之间亲和性的变化.采用超基序、蛋白酶解预测等相结合的办法筛选HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,通过氨基酸置换适当修饰,并以T2细胞株测定肽与HLA-A*0201分子的亲和力和稳定性试验来评价修饰后表位与HLA-A*0201之间亲和性.结果:筛选出3个低亲和性CTL候选表位,经修饰后的表位与HLA-A*0201之间的亲和性均有不同程度的提高.YIYKRWIIL(259-267Y1),YQANFLGKI(429-437Y1)和YTNNPPIPV(249-257Y1)与HLA-A*0201呈高亲和力结合,荧光系数(flurorescene index,FI)分别为2.68、2.54和2.35,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(dissociation complex50,DC50)均大于8 h.预测的低亲和力表位经过修饰可能会成为潜在的HLA-A*0201限制性表位.

抗ABCA1自身抗体在SLE患者动脉粥样硬化发病机制中的意义

检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中抗三磷酸腺苷结合盒转运子(ABCA1)抗体及探讨其致SLE早发动脉粥样硬化(AS)的机制.采用免疫印迹法检测75份SLE患者血清中抗ABCA1自身抗体.75份性别年龄匹配正常人血清为对照.观察抗ABCA1抗体阳性患者血清IgG对细胞胆固醇流出的影响.结果显示,SLE患者血清中存在抗ABCA1抗体,阳性率为29.3%,正常人中无一阳性(P＜0.05).SLE有斑块组的抗ABCA1抗体阳性率高于SLE无斑块组(43.8%和16.3%,P＜0.05).纯化的抗ABCA1抗体阳性SLE患者IgG体外可抑制THP-1细胞内胆固醇的流出,抑制率高可达28.7%,正常人IgG抑制率相比有显著性差异.实验表明,SLE患者血清中抗ABCA1抗体阳性率明显高于正常人,且纯化的抗ABCA1抗体阳性患者IgG在体外能抑制细胞内胆固醇的流出,从而促进SLE患者早发动脉粥样硬化的发生.

医用生物蛋白胶及其主体成分纤维蛋白原的免疫原性研究

研究医用生物蛋白胶及其主体成分纤维蛋白原的潜在免疫原性.采用SDS-PAGE电泳、Western blot分离确定主体胶成分中的纤维蛋白原蛋白,建立间接ELISA法检测抗体条件;新西兰白兔创伤实验及BALB/c小鼠实验考察医用生物蛋白胶及纤维蛋白原的免疫原性.结果表明,生物蛋白胶主体成分以0.5 μg/ml包被时,可有效检测抗纤维蛋白原抗体.新西兰白兔创伤实验中,实验组兔血清1周后出现抗体,2周后抗体水平明显升高,6周后抗体水平下降,呈先升后降的动态变化趋势;小鼠实验中,NBT试验未发现阳性中性粒细胞,MTT检测到T细胞呈现弱增殖能力.研究表明,医用生物蛋白胶主体胶成分中的纤维蛋白原在兔出现一过性抗体,医用生物蛋白胶对小鼠未表现出明显的免疫原性.

天花粉蛋白合成肽通过激活抑制性CD8+T细胞诱导免疫抑制

为了探讨天花粉蛋白合成肽(M-Tk)诱导免疫抑制的机制,应用小鼠针对可溶性抗原OVA的增殖系统,检测M-Tk处理后对淋巴细胞增殖的抑制作用和细胞因子格局的变化,以及M-Tk激活的T淋巴细胞亚群的表型及功能.结果表明,M-Tk可诱导一群CD8+T抑制性细胞,其表型为CD8+CD28-CTLA4+,采用双层非接触共培养系统发现,该群抑制性细胞主要依赖于细胞因子IL-10、IL-4和细胞间接触发挥免疫抑制作用.

ARIP2在小鼠巨噬细胞系RAW264.7中对IL-1β分泌的抑制作用

研究ARIP2在巨噬细胞中对IL-1β分泌的调节作用,探讨激活素A与巨噬细胞活化的可能关系及其作用机制.为了分析ARIP2在小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞中的表达及其生物学作用,实验采用RT-PCR方法检测RAW264.7细胞中ARIP2 mRNA的表达,ELISA方法观察过表达ARIP2对RAW264.7细胞分泌IL-1β的影响.RAW264.7细胞能够表达特异性ARIP2 mRNA,其RNA表达受激活素A刺激呈剂量依赖性增加.ELISA检测结果显示过表达ARIP2可以抑制RAW264.7细胞分泌IL-1β.上述资料提示ARIP2不仅具有抑制激活素诱导的特异基因转录活性,其自身也具有多种生物学活性,可能在激活素A抑制LPS活化巨噬细胞分泌IL-1方面,发挥关键性信号转导调控作用.

活性氧-适应性免疫应答的调节分子

在免疫系统中,吞噬细胞是活性氧(ROS)的主要来源,淋巴细胞也能经线粒体和NADPH氧化酶途径生成活性氧.活性氧不仅参与固有免疫应答的抗感染防御过程,也参与适应性免疫应答,包括抗原提呈及淋巴细胞活化、增殖、分化和凋亡等各个环节.活性氧的具体效应与其存在的位置及其量的多少密切相关.过氧化氢可作为第二信使,参与胞内信号通路.本文综述近年来关于活性氧参与免疫应答的研究进展,旨在为氧化应激相关疾病的治疗提供新的思路.

PTPN22单核苷酸多态性在自身免疫性疾病中的研究进展

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)是基因组中一种常见的遗传变异,可作为新一代遗传标记,成为定位疾病相关基因的有力工具.近年研究发现,蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22(the protein tyrosine phosphatase nonreceptor 22,PTPN22)单核苷酸多态性作为自身免疫病的易感基因,在自身免疫性疾病中发挥着重要的作用.

MHC Ⅱ类分子的非经典生物学活性

补体系统与树突状细胞的相互关系

树突状细胞和补体系统是天然免疫的两个重要组成部分,两者有着极其紧密的联系.树突状细胞是补体产生的重要来源,其合成分泌的补体成分能调节自身的分化和发育,进而影响获得性免疫应答.

科帕卡巴纳海滩拾贝——13届国际免疫学大会汇集了什么新进展和新思路?

巴西滨海城市里约热内卢的Copacabana海滩闻名于世,去年8月其旁举行的第13届国际免疫学大会与历届同类会议一样,汇集了免疫学各个领域的前沿信息.