现代生物医学进展杂志
Progress in Modern Biomedicine 현대생물의학진전
- 主管单位： 黑龙江省卫生厅
- 主办单位： 黑龙江省森工总医院 哈尔滨医科大学附属第四医院
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1个月内
- 国际刊号： 1673-6273
- 国内刊号： 23-1544/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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VCA-IgA抗体检测联合CEA及SF检测在鼻咽癌诊断中的应用
目的:通过联合检测血清中EB病毒壳抗原免疫球蛋白A抗体(VCA-IgA),癌胚抗原(CEA)和铁蛋白(SF),探讨该联合检测在鼻咽癌(NPC)临床诊断中的价值.方法:利用免疫酶法和化学发光免疫分析技术,分别检测临床确诊的102例NPC患者和54例正常人血清中VCA-IgA和CEA,SF的表达水平.结果:NPC患者中VCA-IgA、CEA和SF单独检测敏感性分别为81.3％、68.6％和48％,正常组中敏感性分别为1.8％、3.7％和1.8％.两组中VCA-IgA、CEA和SF联合检测敏感性差异显著(P＜0.01),分别为93.8％和5.5％.结论:联合检测血清中VCA-IgA,CEA和SF的表达水平,在临床诊断NPC中具有很好的特异性,有一定的推广价值.
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Oct4在晚期浆液性卵巢癌中的表达及意义
目的:卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤,肿瘤干细胞理论认为卵巢癌中存在肿瘤干细胞,并且肿瘤干细胞是肿瘤复发、转移、耐药的罪魁祸首.Oct4是细胞干细胞特性的重要标志之一.本文旨在探讨Oct4蛋白在晚期浆液性卵巢癌的表达情况,并分析其表达水平与患者临床病理特征之间的关系.方法:采用免疫组化法检测101例晚期浆液性卵巢癌中Oct4蛋白的表达情况,并结合临床资料分析Oct4蛋白的表达水平在晚期浆液性卵巢癌患者中的意义.结果:晚期浆液性卵巢癌患者中Oct4阳性表达率为87.1％ (88/101),其表达水平和患者的年龄、病理分化程度、淋巴结转移情况及临床分期无明显相关性(P＞0.05),但是其高表达与化疗耐药明显相关(P=0.023).结论:我们的研究证明Oct4在晚期浆液性卵巢癌中有较高表达,并且Oct4的表达与卵巢癌化疗后复发有关；理论上支持在晚期浆液性卵巢癌中可能存在肿瘤干细胞,且比例较高,肿瘤干细胞的比率和卵巢癌化疗耐药相关.Oct4可能是晚期浆液性卵巢癌治疗的新靶点.
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乙状结肠扭转的CT表现
目的:乙状结肠扭转既往主要依靠腹部平片进行诊断,但腹部平片具有局限性,容易误诊、漏诊,CT可以弥补腹平片不足.探讨乙状结肠扭转的CT征象,以提高其术前诊断水平.方法:回顾性分析手术中证实为乙状结肠扭转的23例患者,分析其腹部CT扫描图和横断面扫描特征,后总结乙状结肠扭转的CT影像学特征.结果:在CT定位像上,敏感的表现是扩张的乙状结肠倒U征(21/23,91％),不成比例乙状结肠扩张(19/23,83％),其次为咖啡豆征(17/23,74％),Y征(12/23,52％).在横断面扫描上,敏感的是不成比例的乙状结肠扩张(21/23,91％)和圆腹征(20/23,87％),其次为近端结肠扩张(15/23,65％),漩涡征(15/23,65％),鸟嘴征(13/23,57％).在CT定位像和横断面扫描上,典型的乙状结肠扭转影像表现分别占57％(13/23)和83％(19/23).在定位像上,咖啡豆征与Y征在显著相关(p＜0.05).横断面扫描上肠管损害的CT征象与临床肠管损害显著相关(P＜0.05).结论:在定位像上,乙状结肠扭转的主要影像学表现为倒U征,特征性表现为Y征；在横断面扫描上,主要影像学表现为不成比例的乙状结肠扩张,特征性表现为漩涡征和鸟嘴征.多排螺旋CT是诊断乙状结肠扭转的可靠检查方法,具有重要的临床应用价值.
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强直性脊柱炎患者骨代谢生化指标和RANKL-RANK-OPG系统表达之间的相关性
目的:考察强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者骨代谢生化指标变化,并分析其与RNAKL-RANK-OPG系统表达之间的相关性.方法:研究对象为40名强直性脊柱炎男性患者,40名健康男性为对照组,记录强直性脊柱炎AS患者的病程,体重指数(body mass index,BMI),甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH),血钙,血磷,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)等临床指标,采用双能X线吸收法测定AS患者的骨密度(bone mineral density,BMD),利用免疫分析法检测血清中骨吸收指标骨钙素(bone glutamyl protein,BGP),Ⅰ型强胶原羧基肽(carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PICP),骨碱性磷酸酶(bonealkaline phosphatase,BALP),骨吸收指标抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)及sRANKL,OPG的表达.分析骨代谢指标,RANKL-RANK-OPG与各项临床指标的相关性.结果:AS患者PICP,BALP,TRAP及sRANKL、OPG的表达较正常对照组存在明显的差异,具有统计学意义.不同部位的骨密度发生不同程度的骨量减少和骨质疏松,股骨颈、大转子、转子间和股骨颈分别为28％、45％、40％和50％,与骨代谢指标存在一定的相关性,TRAP与大转子的骨密度成负相关(r=-0.369,P=0.019),PICP与大转子的骨密度成正相关(r=0.391,P=0.013),BGP与转子间的骨密度成负相关(r=-0.419,P=0.009),sRANKL/OPG与腰椎密度均呈现负相关(r=-0.134,P=0.011).骨代谢指标之间以及与临床指标也存在不同程度的相关性,sRANKL与OPG存在正相关(r=0.369,P=0.019)sRANKL/OPG与sRANKL、OPG存在负相关(r=-0.334,P=0.035；r=-0.983,P=0.000).结论:AS患者骨代谢发生异常,骨吸收增强.RANKL-RANK-OPG系统失衡可能是AS骨量减少和伴随发生骨质疏松的机制之一.
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参麦注射液辅助治疗慢性心衰患者的临床疗效观察
目的:评价参麦注射液辅助治疗慢性充血性心力衰竭(congestive heart failure,CHF)的临床疗效,并探讨其对患者血清超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hsCRP)及脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)水平的影响.方法:选择心功能Ⅱ～Ⅳ级(NYHA)的CHF患者120例,随机分为对照组和治疗组(每组60例),两组患者均予常规治疗,治疗组在常规治疗基础上静滴参麦注射液,两组均治疗15天,检测和比较两组治疗前后患者的血清hsCRP、BNP水平和心脏超声测定左心室射血分数(LVEF)及左心室舒张末期内径(LVEDd).结果:对照组和治疗组的心功能临床有效率分别为73.7％和88.7％,治疗组显著高于对照组(P＜0.05).治疗后,两组LVEF均较治疗前明显升高(P＜0.05),LVEDd均较治疗前明显缩小(P＜0.05),且治疗组与对照组相比有统计学差异(P＜0.05).而治疗后,两组血浆BNP和hsCRP水平均较治疗前显著下降(P＜0.01),且治疗组显著低于对照组(P＜0.05).两组治疗过程中均无明显不良反应发生.结论:参麦注射液辅助治疗CHF的疗效较常规治疗更好,可显著降低患者血清hsCRP、BNP水平,改善左室功能.
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腹腔镜早期子宫内膜癌手术临床疗效分析
目的:探讨腹腔镜下早期子宫内膜癌分期手术与开腹手术的临床疗效的差异.方法:回顾性研究2008年1月～2012年10月在我院行子宫内膜癌分期手术的84例患者临床资料,手术病理分期为ⅠA～Ⅱ期.其中腹腔镜分期手术40例,开腹分期手术44例,比较2组手术时间、术中出血量、淋巴结清扫数目、术后胃肠功能恢复时间、并发症、术后住院时间.结果:腹腔镜组手术时间长于开腹组,两者相比具有统计学意义(P＜0.05)；腹腔镜组术中出血量显著少于开腹组(P＜0.05)；淋巴结清扫总数显著多于开腹组(P＜0.05)；腹腔镜组在排气时间、尿管拔除时间、术后出院时间均显著早于开腹组(P＜0.05)；两者并发症方面无统计学差异(P＞0.05).结论:腹腔镜分期手术较开腹手术更具微创价值,是治疗早期子宫内膜癌稳妥可行的选择.
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交锁髓内钉与锁定钢板治疗肱骨中上段骨折的疗效对比研究
目的:分析交锁髓内钉与锁定钢板治疗肱骨中上段骨折的疗效.方法:选择2010年1月～2011年12月在我院就诊的肱骨中上段骨折患者90例,按照随机配对将其分为两组:交锁髓内钉组和锁定钢板组,每组各45例.观察和比较两组患者的手术时间、术中出血量、骨折愈合时间、住院时间、Constant肩关节评分、Mayo肘关节评分和并发症发生率.结果:两组患者均获随访,平均13(6～24)个月.锁定钢板组的治疗有效率为88.89％,而交锁髓内钉组的治疗有效率为93.33％,两组差异无统计学意义(P＞0.05).但交锁髓内钉组患者的手术时间、术中出血量、骨折愈合时间、住院时间、Constant肩关节评分均较锁定钢板组明显缩短、减少或降低(P＜0.05或＜0.01),而两组的Mayo肘关节评分差异无统计学意义(P＞0.05).锁定钢板组的并发症发生率为24.44％,明显高于交锁髓内钉组的6.67％(P＜0.05).结论:交锁髓内钉与锁定钢板内固定治疗肱骨中上段骨折的疗效接近,但交锁髓内钉组的具有创伤小,恢复快,并发症少的优点,而锁定钢板组对肩关节功能影响较小.
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2型糖尿病患者血糖波动与糖尿病视网膜病变的相关性分析
目的:探讨2型糖尿病(T2DM)患者血糖波动与糖尿病视网膜病变(DR)的关系.方法:T2DM患者进行眼底照相或眼底荧光造影,根据DR程度分为糖尿病背景期视网膜病变(BDR)组、糖尿病增殖期视网膜病变(PDR)组、无视网膜病变(NDR)组,记录年龄、性别、体重指数、病程、测量血压、糖化血红蛋白、空腹胰岛素、餐后2h胰岛素、空腹C-肽、餐后2hC-肽、血脂指标.选取三组中上述基线指标具有可比性的病例共106例(BDR组38例,PDR组35例,NDR组33例)纳入观察.采用动态血糖监测系统(CGMS)连续监测患者血糖72 h.结果:各组间平均血糖水平(MBG)、血糖标准差(SDBG)、平均血糖波动幅度(MAGE)及血糖波动大幅度(LAGE)相比较有统计学差异(P＜0.05).Spearman相关分析显示,糖尿病视网膜病变(DR)与MBG、SDBG、MAGE及LAGE呈正相关(P＜0.05).校正MBG后,糖尿病视网膜病变(DR)与SDBG、MAGE及LAGE的相关系数分别为0.297、0.396、0.284(P＜0.01).结论:血糖波动与糖尿病视网膜病变(DR)的发生发展有关,应尽早干预.
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葡萄糖转运体9(GLUT9)基因启动子区的rs13124007(G/C)及rs6850166(G/A)位点的单核苷酸多态性(SNP)与汉族女性痛风相关性研究
目的:探讨葡萄糖转运体9(GLUT9)基因启动子区的rs13124007(C/G)及rs6850166(A/G)位点的单核苷酸多态性(SNP)与中国汉族女性人群痛风易感性之间的相关性.方法:选取185例痛风患者和300例正常对照者,提取基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR技术),特异性扩增GLUT9基因所需要的目的片段,对扩增的目的片段进行测序后,比较痛风组和正常对照组的基因型频率及等位基因频率分布情况.结果:女性痛风组中GLUT9基因的启动子区rs13124007和rs6805116两个位点的基因型频率分布与正常对照组相比,统计学上无明显的差异(X2=0.906,P=0.636；X2=3.335,P=0.189),rs13124007 SNP位点的C等位基因频率和rs6850166SNP位点的A的等位基因频率与正常对照组相比也无明显的统计学差异(X2=0.506,P=0.477；X=3.268,P=0.071).结论:葡萄糖转运体9(GLUT9)基因启动子区的rs 13124007(C/G)及rs6850166(A/G)位点的单核苷酸多态性(SNP)与中国汉族女性人群痛风易感性无明显的相关性.
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胺碘酮对急诊老年快速心房颤动患者的疗效观察
目的:通过与传统控制心室率的药物去乙酰毛花苷注射液进行对比,探讨胺碘酮注射液对老年快速型心房颤动患者的临床疗效.方法:选择2010年5月～2012年6月我院急诊科收治的老年快速房颤患者60例,按就诊先后顺序随机分为对照组与胺碘酮治疗组,每组30例.胺碘酮治疗组患者先给予胺碘酮注射液150 mg以生理盐水稀释后缓慢静脉注射,继以0.5 mg/min静滴；对照组患者先予去乙酰毛花苷注射液0.2 mg稀释后缓慢静脉推注,若20 min无效则再次给药,两组患者的院内观察周期均为24h,患者在观察过程中行全程心电监护,观察不同时间段(用药后0、0.5、2、12、24 h)患者的心室率,血压的变化；比较两种治疗方法的临床疗效及对患者复律情况的影响.结果:治疗前,两组患者的心室率比较无显著性差异(P＞0.05)；第一次用药后0.5h,两组患者的心室率都较治疗前显著下降(P＜0.01),且用乙酰毛花苷注射液治疗的对照组显著低于胺碘酮治疗组(P＜0.05)；用药后2和12h,两组患者的心室率比较均无显著性差异(P＞0.05)；用药后24h,胺碘酮治疗组患者的心室率较对照组显著降低(P＜0.01).对照组的临床有效率为40.0％,复律率为l6.7％；而胺碘酮治疗组的临床有效率为73.3％,复律率为43.3％,分别显著高于对照组(P＜0.01).与用药前比较,用药后0.5、2、12和24h患者的收缩压略有下降,但差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:与去乙酰毛花苷注射液比较,胺碘酮注射液可更有效地降低老年患者24h心室率,复律率和有效率更高,但在应用过程中需注意其不良反应.
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应用斑点成像及组织多普勒估测左室充盈压
目的:二尖瓣瓣环早期血流速度与组织多普勒(tissue doppler imaging,TDI)技术测量的二尖瓣环舒张早期速度的比值和肺动脉楔压(pulmonary capillary wedge pressure,PCWP)之间的相关性已被广泛应用于心脏各种状态的研究.本研究旨在探讨二维斑点成像(speckle tissue imaging,STI)技术左室整体应变率指标E/E’及组织多普勒技术在估测心衰患者左室充盈压方面的应用价值.方法:选择47例2010年3月～2012年10月于我院ICU证实为心衰的患者为研究对象,同时行超声检查及肺动脉楔压测量,依此分组为PCWP升高组(n=32)和PCWP正常组(n=15),并设立年龄匹配的正常对照组(n=33),记录二维斑点追踪技术指标和组织多普勒技术指标以及常规超声指标.结果:由STI技术测得的E/E’VEL-ST和E/E’SR-ST与PCWP有显著相关性,TDI技术测得的E/E’VEL-TD仅显示弱相关性.与对照组相比,PCWP升高的患者各变量值均有显著升高.结论:STI技术指标(E/E’SR-ST)是估测左室充盈压升高的强有力且无创的替代指标.在ICU患者中,E/E’SR-ST显示出与PCWP更好的相关性,比TDI的技术指标更精准.
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老年患者下呼吸道感染原因分析及防治
目的:分析引起老年患者院内下呼吸道感染的原因,制定相应预防措施,以控制院内感染的发生,提高医疗安全.方法:通过病例查找,回顾性分析我院112例老年患者住院过程中发生院内下呼吸道感染的相关因素,包括发病时间、发病率、住院时间、基础疾病、治疗措施、病原菌分布等数据.结果:本组老年患者院内下呼吸道感染发生率为7.6％,明显高于同期院内感染发生率(1.6％)；住院时间长(平均45± 5.9 d)；均有两种或两种以上基础疾病,其中以恶性肿瘤(53％)、慢性阻塞性肺病(48％)、脑血管疾病(43％)多见；均接授多种治疗措施,其中使用7天以上抗生素(53％)、雾化吸入(48％)、留置尿管(43％)、使用糖皮质激素(41％)为多；病原菌中以革兰阴性菌(54.0％)为主要致病菌,革兰阳性球菌(23.9％)、真菌(22.1％)、二重感染(19.0％)也常见.结论:老年患者容易发生院内下呼吸道感染,针对各种因素处理,可有效预防其发生.
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孕中期巨细胞病毒宫内感染与血Free-β-HCG水平的相关性研究
目的:通过检测孕中期妇女人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染、宫内感染以及血Free-β-HCG水平,分析血Free-β-HCG水平与HCMV宫内感染的相关性,初步探讨其可能影响机制.方法:通过酶免法测孕妇血HCMV-IgM和定荧光定量PCR对孕中期妇女血清和羊水中HCMV-DNA的检测以及DILFIA法(时间分辨免疫荧光法)定量检测孕中期妊娠妇女血Free-β-HCG的含量,研究HCMV感染状况与Free-β-HCG之间的相关性,探讨HCMV对母血Free-β-HCG水平的影响.结果:718例样本中共检出HCMV-IgM阳性和(或)HCMV-DNA阳性者共43例并进一步行产前诊断羊水HCMV-DNA阳性14例.孕中期HCMV活动性感染率为5.98％,HCMV宫内感染率为2.22％.孕中期感染组Free-β-HCG含量:7.32± 2.25 ng/ml,非感染组:8.47± 3.17 ng/ml,对照组:10.10± 3.67 ng/ml.结论:HCMV宫内感染组比非感染组孕中期外周血Free-β-hcG的测定水平降低,两者结果之间的差异具有统计学意义.HCMV可通过损伤胎盘绒毛滋养层细胞,使Free-β-hcG的分泌减少.
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二烯丙基二硫作用于K562细胞后凋亡相关基因的差异表达
目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide DADS)作用于人白血病K562细胞后凋亡相关基因的差异表达,为进一步探讨DADS诱导K562细胞凋亡的分子机制提供基础.方法:采用瑞士-吉姆萨和Hoechst33342染色观察细胞形态学变化.运用基因芯片技术检测40 mg/LDADS作用于K562细胞24h后凋亡相关基因的差异表达,选择其中上调基因GADD45A、下调基因HO-1运用RT-PCR技术进行验证.结果:40mg/L的DADS作用于K562细胞后出现凋亡所具有的典型形态学变化.40 mg/L DADS作用K562细胞24 h后有14个凋亡相关差异表达基因.GADD45A、HO-1基因表达情况与基因芯片结果一致.结论:DADS可能通过多个基因和多条信号转导通路共同作用诱导人白血病细胞K562凋亡.
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白介素18启动子区基因多态性与儿童EV71感染相关性研究
目的:研究白介素18基因启动子多态性与儿童EV71感染遗传易感性的关系.方法:收集EV71感染患儿177例,单纯HFMD组127例,HFMD并脑炎组50例,提取外周血DNA,用序列特异性引物-聚合酶链反应(SSP-PCR)技术及基因测序法检测IL-18启动子区-137G/C、-607A/C位点的基因多态性.结果:EV71感染患儿与健康儿童IL-18-607基因型以CA为主,AA、CC次之,EV71感染患儿AA基因型、A等位基因分布频率显著高于健康儿童.EV71感染HFMD并脑炎组患儿AA基因型分布显著高于单纯HFMD组患儿,差异有统计学意义.EV71感染患儿与健康儿童IL-18-137基因型以CC为主,CG次之,GG占少数.该位点基因型及等位基因在EV71感染组与健康儿童、单纯HFMD与HFMD并脑炎组的分布无显著差异.结论:IL-18基因多态性与EV71感染相关,IL-18-607AA基因型、A等位基因携带儿童更易感染EV71病毒,且AA基因型患儿易并发脑炎,-607AA基因型可能为EV71感染的易感基因型.-137C/G位点基因多态性与EV71感染无相关性.
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不同浓度的5-氮杂胞苷对RPMI 8226细胞系的诱导凋亡作用分析
目的:探讨不同浓度的5-氮杂胞苷对RPMI 8226细胞系的诱导凋亡作用.方法:对RPMI 8226细胞系采用5-氮杂胞苷0μmol/L、2μmol/L、5μmol/L、10 μrnol/L、20 μmol/L、50 μmol/L处理24 h、48 h、72 h,并对RPMI 8226细胞系处理后进行刮痕实验,12h后对细胞迁移进行比较.结果:在作用24h、48h时,随着作用浓度的增加,RPMI-8226细胞的抑制率出现明显的增加,但在作用72 h时,我们发现10 μmol/L、20μmol/L、50μnol/L其对RPMI-8226细胞的抑制效果无明显的差异性；刮痕实验后12h后其出现差异性,其中药物浓度越大其对RPMI-8226细胞的运动迁移能力越弱.结论:DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂胞苷可对RPMI-8226细胞的凋亡具有良好的诱导效果,同时可抑制RPMI-8226细胞的增殖以及迁移.
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玻璃化法与低温冷冻法保存兔关节软骨异体移植的实验对比研究
目的:观察玻璃化法保存同种异体软骨移植修复兔关节软骨缺损的效果,并与低温冷冻法作比较.方法:18只健康成年日本大白兔,其中6只用于异体骨软骨柱的制备,另外12只随机分成2组,每组各6只.软骨移植物标本取材后,采用低温冷冻法和玻璃化法保存2w.同种异体骨软骨移植物相应复温后移植于兔膝关节软骨缺损模型的相应软骨缺损区.移植术后12w处死动物,移植区软骨组织后固定、切片、脱钙及石蜡包埋.采用苏木精-伊红染色及蕃红-O染色后进行组织学观察及Mankin评分.结果:玻璃化组软骨移植区颜色与周围正常软骨组织基本一致,软骨完整,无坍陷及裂纹；镜下观察可见其组织深层透明软骨样组织,浅层软骨区可见纤维样软骨组织,细胞成熟,大量分泌软骨基质.低温冷冻组软骨移植区表面欠光整,存在裂隙及轻度坍陷;镜下观察可见少量纤维样软骨组织,大部分为纤维结缔组织,细胞排列相对紊乱,软骨基质分泌量少.两组的组织学Mankin评分分别为9.6± 2.4和3.0± 1.0,低温冷冻组显著高于玻璃化组(t=2.014,P=0.000).结论:采用玻璃化法保存兔同种异体软骨移植物是一种可行的方法.相比低温冷冻法,玻璃化法保存的同种异体软骨其移植术后,软骨修复区的组织更接近正常软骨.
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PLGA人工抗原提呈细胞载体的制备
目的:目前常用的载体材料,在体内很难降解,限制了其在体内的应用,本文通过用PLGA微球制备人工抗原提呈细胞(AAPC)载体,对其功能进行验证.希望此方法能弥补传统方法的不足.方法:将软脂酸偶联到亲和素上,然后按照传统的复乳法来制备PLGA微球,并且通过使用荧光素(FITC)标记、生物素化的牛血清蛋白(BSA)对其功能进行验证.结果:通过该方法可以得到表面固定生物素的PLGA微球,并且证明软脂酸修饰并未影响到亲和素分子和生物素的结合,生物素化的BSA分子可以有效的结合到微球的表面.结论:PLGA微球表面很难引进合适的化学基团,导致其不能像聚苯乙烯微球那样通过化学反应来将亲和素分子固定在微球的表面上,通过将软脂酸偶联到亲和素分子上,可改变其表面很难引进合适的化学基团的不足,用其微球可用于制备AAPC载体.人工抗原提呈细胞是免疫学研究领域的新思路,可在基础免疫研究和临床治疗方面发挥较大的作用,但作为一门新兴技术,在制备、效果评价及应用方面需要逐渐完善和成熟,用PLGA微球为载体构建,弥补了磁珠、聚苯乙烯不能在体内降解的不足,且安全无毒,可供参考.
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基于新一代测序技术的mtDNA突变检测方法学的建立
目的:大量研究证实线粒体DNA(mtDNA)突变与肿瘤发生及进展密切相关,但使用传统测序方法难以高通量、高精确度的检测mtDNA突变,为此本研究建立了基于新一代测序技术的mtDNA突变检测方法.方法:提取肝癌患者癌、癌旁组织以及外周血细胞总DNA,利用PCR技术对线粒体基因组进行富集并对PCR产物进行平末端、粘性末端连接或对PCR引物进行氨基修饰,构建mtDNA测序文库.经Illumina HiSeq 2000平台测序后利用生物信息学方法与人类mtDNA参考序列进行比对,并进行测序数据分析.结果:通过对不同质量基因组DNA进行评估后,发现三对引物法适用于大部分DNA样本的mtDNA富集.进一步我们发现PCR引物的氨基修饰可显著提高测序数据覆盖均一性,降低测序成本.结论:本研究利用新一代测序技术通过对线粒体DNA富集方法以及测序覆盖度均一性进行优化,建立了一套灵敏、特异、高通量的mtDNA突变检测策略,为mtDNA突变与疾病研究提供了新方法.
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免疫球蛋白G(IgG)对急性颈髓损伤大鼠模型神经炎症反应的抑制效应
目的:探讨免疫球蛋白(immunoglobulinG,IgG)对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)模型神经炎症的抑制效应.方法:60只雌性Wistar大鼠接受C7-T2椎板切除术后随机分为三组,空白对照组,盐水安慰剂组,IgG治疗组,每组各20只动物.创建盐水安慰剂组和IgG治疗组动物的C7-T1节段脊髓损伤模型,空白对照组动物不进行SCI模型的创建.盐水安慰剂组以单剂量0.4g/kg体重在SCI模型重建后15 min静脉注射入动物体内,而安慰剂组动物静脉注射lmL无菌盐水.实验动物SCI模型创建后4h处死动物进行细胞因子和趋化因子的酶联免疫检测,24 h处死动物采用westem blot技术进行MMP-9的蛋白表达检测分析.结果:SCI后4h,相比空白对照组,盐水安慰剂组动物的TNF-α,IL-1β及IL-6等炎性介质的表达水平显著升高,IgG治疗组的炎性介质水平也有一定程度升高,但均显著低于盐水安慰剂组,差异有统计学意义(P＜0.05)；盐水安慰剂组和IgG治疗组的MCP-1和CINC-1的蛋白表达水平均显著高于空白对照组(P＜0.05),但相比IgG治疗组,盐水安慰剂组的MCP-1的蛋白表达水平显著更高(P＜0.05)而CINC-1的蛋白表达水平在安慰剂组和IgG治疗组间差异无统计学意义(P＞0.05).SCI后24 h,安慰剂组动物的MMP-9水平显著升高,而空白对照组动物标本中未检测到MMP-9表达.而IgG治疗组动物的MMP-9水平显著低于盐水安慰剂组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:SCI大鼠采用IgG治疗后会显著降低TNF-α,IL-1β,IL-6,MCP-1以及MMP-9等介质的表达水平,表明IgG在SCI中可能具有神经保护效应.
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部分股骨移植:一个新的带血管的骨髓移植模型
目的:大鼠后肢移植是带血管的骨髓移植的主要模型,同时含有骨髓和骨髓微环境,有利于免疫耐受的诱导.但其成分复杂,为研究其中骨髓的作用,构建一个成分相对单一的带血管的骨髓移植模型.方法:以MHC不相符的近交系Lewis和BN大鼠分别作为供体或受体,将含血管蒂的供体2/3股骨移植到受体腹股沟区,显微吻合供受体间的股动静脉.实验分为3组:同基因移植组Lewis→Lewis；排斥组Lewis→BN;免疫抑制组Lewis→BN,术后给予环孢素A.通过大体和病理学检查观察各组移植物存活情况,外周血流式监测排斥组和免疫抑制组的嵌合水平.结果:术后7d,排斥组排斥反应显著,骨髓细胞明显减少、坏死,外周血嵌合水平几乎为0,而同基因移植组股骨存活良好,骨髓HE染色大致正常,可见髓腔内有大量的嗜碱性骨髓细胞；术后60 d,同系移植组和免疫抑制组的大体观察及组织病理学大致相同,均证实移植物存活良好,同时流式可见免疫抑制组术后7、28、60 d外周血中存在供体特异性的嵌合.结论:带血管蒂的部分股骨移植物是一个简便可靠的带血管的骨髓移植模型,嵌合分析表明其具有诱导耐受的潜能,有利于阐明异体复合组织中骨髓对免疫耐受诱导的作用和机制.
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脑缺血激活N-SMase诱导IL-1β释放的相关研究
目的:探讨脑缺血再灌中性鞘磷脂酶(N-SMase)活性变化及其对IL-1β的调节作用.方法:采用成年清洁级雄性SD大鼠,建立四动脉阻断前脑缺血模型,缺血再灌注不同时间(0.5,1,6,12,24 h).观察N-SMase和A-SMase活性变化.侧脑室给予N-SMase活性抑制剂GW4869(10,20μM),实时定量PCR (Real-time PCR)检测IL-1β的mRNA水平变化.结果:(1)缺血再灌注30 min,N-SMase活性开始升高(P＜0.05),而A-SMase活性没有明显变化(P＞0.05)；(2)缺血再灌注30 min,给予GW4869能够显著抑制IL-1β的mRNA水平(P＜0.05).结论:缺血再灌注能诱导N-SMase而不是A-SMase活性升高,通过生成神经酰胺刺激IL-1β的转录合成,参与了缺血后神经细胞损伤调控.
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孕期大鼠暴露PFOS对胎鼠肝脏毒性的影响
目的:研究在孕期暴露PFOS对胎鼠的肝脏毒性的影响.方法:将孕期为12天的16只SD雌性大鼠,随机分为4组给予不同剂量的PFOS[0(对照),5,10,20 mg·kg-1],连续灌胃7天,在GD19天时对母鼠和胎鼠的体重、胎鼠肝脏的生化指标、母鼠血清的生化指标进行了相应的检测.结果:与对照组相比,母鼠体重在20 mg·kg-1组显著下降(P＜0.001)；胎鼠的体重和体长在20mg·kg-1组显著下降(P＜0.001)；胎鼠的肝脏重量降低,呈剂量依赖性,并伴有肝细胞浊肿、变性甚至坏死；10 mg· kg-1组胎鼠肝脏中的酶活性(ALT、AST、GGT和ALP等)显著升高(P＜0.001)；母鼠血清的大部分生化指标未发生明显变化.结论:孕期大鼠暴露在PFOS的环境下会严重损伤胎鼠的肝脏功能.
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中国汉族人群肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因-238G/A和-308G/A多态性与强迫症的关联分析
目的:探讨在中国汉族人群中强迫症与TNF-a基因-238G/A和-308G/A多态性之间的关联.方法:我们的研究所招募的161例强迫症患者和325.名健康对照中,应用PCR-RFLP比较了OCD组和对照组之间的TNF-α基因在-238G/A(rs361525)和-308G/A(rs1800629)位点的基因型和等位基因频率多态性.结果:在中国大陆汉族人群TNF-α基因的OCD组与对照组之间-308 G/A等位基因频率及-238G/A的基因型频率和等位基因频率无显着差异,而-308G/A基因型频率有显著不同.在-308G/A位点,女性强迫症患者和对照组之间的基因型频率关联分析有增高的趋势.结论:我们的研究结果表明,肿瘤坏死因子-α在-308G/A点位多态性可能会影响在中国大陆汉族人群强迫症的发展.
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周期性张应力对面颌肌细胞Na+/K+-ATPase功能活性影响
目的:本研究在成功构建面颌肌细胞体外培养一力学刺激模型的基础上,探讨机械张应力对细胞内Na+水平和面颌肌细胞Na+/K+-ATPase功能活性的影响.方法:本实验采用Blua法,对SD大鼠乳鼠面颌肌细胞进行体外原代培养、鉴定并绘制生长曲线；取第3代细胞接种于细胞加力板上,采用Forcel四点弯曲加力装置,对细胞分别施加1h、2h、4h、8h、12h、16h、24 h和48 h的张应力刺激,后测定细胞内Na+水平变化和Na+/K+-ATPase功能活性改变.结果:(1)Na+水平变化:与对照(不加力)组相比,加力1h细胞内Na+显著增加(P＜0.05),并随加力时间延长逐渐降低,加力至12h时降到正常水平,再延长加力时间Na+无明显变化.(2) Na+/K+-ATPase功能活性变化:分别施加不同时间的周期性张应力后,Na泵的活性在加力8小时后才开始增加(0.5725mmolPi/mgPr.hr),随加力时间延长进一步增加,48小时后达到大值(0.8963mmolPi/mgPr.h).结论:周期性张应力刺激会引起细胞内Na+的改变,并可以增加骨骼肌细胞Na+/K+-ATPase的活性.
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幽门螺杆菌23s rRNA基因突变与克拉霉素耐药性关系的研究
目的:通过对幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,HP)23s rRNA基因突变位点分析,观察23s rRNA各突变点与克拉霉素耐药的关系.方法:分离培养HP、提取DNA、扩增其23s rRNA基因片段及测序；运用Clustalw软件进行序列比对找出突变点.选用GenBank中已全基因组测序的35株HP,根据其mutY、ppa、efp和ureI4个管家基因建立Neighbour-joining树,根据进化树结果将35株HP分为欧非和东亚菌群；观察各突变点与菌群分布的关系.结果:与耐药有关的A2143G突变率为32.8％,T2182C突变率为90.6％但与耐药无关,其碱基分布具有菌群差异:东亚菌群以c碱基为主,欧非菌群以T为主(P＜0.05),其他可能与耐药有关的各位点分别为A2223G(6.25％)、T2190C(1.6％)、C2195T(1.6％).结论:青岛地区HP克拉霉素耐药率为32.8％并表现为23s rRNA基因A2143G突变,而2182位点突变是由于菌群分布差异导致的与克拉霉素耐药无关.
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氧化应激及炎症反应在Graves病中的研究进展
Graves病是一种常见器官特异性自身免疫性疾病,是甲状腺功能亢进症中常见的原因.Graves眼病是Graves病的常见表现之一.Graves病的发病机制涉及遗传因素、环境因素及自身免疫因素三个方面,一般认为Graves病是以遗传易感因素为背景,在感染、精神等因素作用下,诱发体内的自身免疫功能紊乱,但是Graves病的确切发病机制及病理进展目前仍不清楚.有研究发现炎症反应和氧化应激产物在Graves病的发病及病理进展中起重要作用.氧化应激及炎症反应在Graves病及Graves眼病的发生发展中共同作用,互为因果.因此,抗氧化应激及抗炎症反应药物对治疗Graves病中有广泛的应用前景.
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Bryan人工椎间盘置换术治疗颈椎病的研究进展
Bryan人工椎间盘置换术是治疗颈椎椎间盘退行性变的有效手段,与传统的颈前路植骨融合内固定术比较,颈椎人工椎间盘置换的大优势在于在有效减压的同时重建节段的运动功能,使整个颈椎运动学特征大程度地接近于置换前的生理状态,减少传统融合术后由于融合节段运动功能丧失所造成的相邻节段过度运动和应力集中,从而避免相邻节段退变的发生和发展.但没有统一的适应症标准、缺乏远期的临床观察、昂贵的费用等问题阻碍了其在临床上的广泛应用,该文着重进行颈椎人工椎间盘的生物力学特点、适应症与禁忌症、临床疗效以及并发症的文献综述.
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Sirtl在免疫调节中的研究进展
沉默信息调节因子1(Sirt1),属于Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶,是依赖于NAD+的去乙酰化酶,具有高度保守的催化结构域,通过对多种底物进行去乙酰化作用在机体内参与一系列生物学活动.Sirt1去乙酰化调节多种转录因子活性,介导包括细胞凋亡、自噬、代谢、蛋白质内稳态、炎症等多种功能.近年研究发现,Sirt1在免疫调节中也具有重要作用,Sirtl可调节巨噬细胞功能,参与T细胞增殖、分化,在维持T细胞耐受中也具有一定作用,Sirt1还可能通过CD38介导的相关途径调节B细胞功能.大量文献报道多种疾病的发生与Sirt1活性水平有关,Sirt1活性受损可增加炎症和自身免疫性疾病的发生.本文通过综述Sirtl对NF-κB、AP-1信号通路的调节机制,来明确Sirt1在天然免疫和获得性免疫应答中的作用,为临床治疗自身免疫性疾病提供理论依据和可能的治疗靶点.
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转移性肾癌生物治疗研究进展
转移性肾癌(mRCC)作为一种高度恶性的疾病,以进展快、病死率高为特点,且一直以来临床上对其治疗效果并不理想.联合化疗和(或)放疗也不能显著提高反应率或改善生存.在分子靶向药物诞生之前,临床上应用以细胞因子为基础的免疫治疗作为mRCC的一线治疗.分子靶向药物的问世,彻底打破了传统细胞因子免疫治疗mRCC的局面,使mRCC患者获得较好的临床治疗效果.本文将系统阐述mRCC的免疫治疗与靶向治疗的进展,详细介绍目前靶向治疗的临床应用情况,以期为mRCC治疗药物的合理选择提供参考.
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细胞红蛋白在缺氧性脑损伤中的研究进展
细胞红蛋白(CYGB)是2002年德国科学家Burmester在小鼠和人体内发现的第四种携氧球蛋白,与肌红蛋白(MB),血红蛋白(HB),脑红蛋白(NGB)属于同一家族,是血红素蛋白家族的新成员.它广泛分布于各个组织器官,跟其他携氧蛋白一样具有携氧,贮氧,氧感受器的功能.研究发现其在脑特定区域神经细胞的细胞质和细胞核都有分布,能够受脑缺氧的诱导,体内、外实验均表明其在缺氧情况下表达上调,能增加脑组织对缺氧的耐受能力,抵抗氧化应激所致损伤.缺氧所导致的脑损伤发生率很高,而且此类脑损伤严重影响了人类的健康和生活.所以,对细胞红蛋白进行深入的研究和探讨对于缺氧缺血性脑病,脑卒中,脑肿瘤等缺氧性脑疾病的预防和治疗有重大意义.此综述,通过概括细胞红蛋白的结构,脑内的分布,对缺氧的反应等说明其对缺氧性脑损伤潜在的保护作用.
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溶酶体组织蛋白酶D与中枢神经系统疾病
组织蛋白酶D(cathepsinD,carD)是溶酶体内天门冬氨酸蛋白内切酶,广泛分布于人体组织,在脑组织中则主要定位于神经元和脉络丛上皮细胞,其表达、分布及活性的变化影响着中枢神经系统疾病的发生发展,而平衡catD表达与活性及稳定其基因多态性有利于减少疾病发展的风险.在早期的研究中,catD的功能主要与乳腺癌的浸润和转移有关,而后将其作为雌激素依赖的肿瘤标志物来观察.但近几年的研究发现其在神经元的损伤中发挥着重要作用,说明catD与神经系统疾病也有着非常重要的关系.
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膜联蛋白A1及其与肿瘤关系的研究进展
膜联蛋白A1 (Annexin A1,ANXA1)是一种来源于脊柱(哺乳)动物的钙依赖性磷脂结合蛋白,是介导细胞内糖皮质激素抗炎作用的效应分子,在组织中广泛表达,参与细胞生长周期的各个阶段.其既可以可溶性形式存在,也可稳定或可逆结合于细胞骨架蛋白,调控细胞与细胞外基质的相互作用.大量的研究发现,AnnexinA1的表达在不同肿瘤组织中有差异,并且同一肿瘤不同类型中表达也不一样,其异常表达及细胞内定位改变可能跟多种恶性肿瘤的分化及转移相关.Annexin A1与肿瘤的密切关系,或许可使其发展为一个新的肿瘤标志物,为肿瘤的早期诊断、治疗及预后提供新的判断标准.因此,探讨Annexin A1与肿瘤的关系极具临床应用前景.
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肾脏去交感神经支配术在心衰治疗中的作用
心脏和肾脏通过一系列神经体液调节机制相互作用,这种作用维持正常状态下的循环稳态.然而,调节机制在充血性心衰时变的异常,充血性心衰患者中,肾功能不全常常会进一步进展.肾交感传出神经激活引起肾素释放,钠水潴留,以及肾血流量减少,都是充血性心衰时肾脏表现.由肾脏部分调节释放的血管紧张素Ⅱ水平增加,作用于中枢神经系统后可增加全身交感神经活性,临床上肾脏交感神经活性可通过去甲肾上腺素分泌进行评估,充血性心衰时去甲肾上腺素分泌增加提示预后不良.除传出交感神经激活外,心衰时肾脏传入神经的激活可反射性引起交感神经活性的增加,进而引起外周血管阻力增加、血管重塑、心室重塑及左室功能障碍.在心衰动物模型中,外科肾脏去交感神经支配术可以改善肾脏和心室功能,但有创性操作过程以及相关并发症限制了其应用.近期出现的经导管射频消融去肾脏交感神经支配术可特异性阻断肾传出、传入神经,已成功应用于顽固性高血压的治疗.目前评估心衰患者肾脏去交感神经支配术安全性及有效性的临床试验正在进行中.
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LC-MS/MS定量测定人体血浆中阿托伐他汀浓度
目的:建立定量测定人体血浆中阿托伐他汀浓度的HPLC-MS/MS的方法.方法:以吲哚美辛为内标,采用Shim-packVP-ODS柱(150× 2.0 mm I.D.,5μm,日本Shimadzu Technologies Inc.公司)为固定相；乙腈-0.5％甲酸溶液(90:10,v/v)为流动相,流速为0.3 ml/min;通过电喷雾离子源(ESI),以正离子多反应监测模式进行检测.阿托伐他汀与内标用于检测的离子对分别为m/z 559.4 m/z 250.3和m/z 358.3 rn/z 139.2.结果:阿托伐他汀在0.10～20.00 ng/ml范围内与峰面积比值线性范围良好(r=0.9962),定量下限为0.10 ng/ml,日内日间精密度的RSD均小于12％,平均回收率大于71％.结论:所建方法准确度高,方法灵敏,专属性强且操作简便,可适用于阿托伐他汀的血药浓度测定和临床药代动力学研究.
