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现代生物医学进展

现代生物医学进展杂志

Progress in Modern Biomedicine 현대생물의학진전

统计源期刊
  • 主管单位: 黑龙江省卫生厅
  • 主办单位: 黑龙江省森工总医院 哈尔滨医科大学附属第四医院
  • 影响因子: 0.75
  • 审稿时间: 1个月内
  • 国际刊号: 1673-6273
  • 国内刊号: 23-1544/R
  • 发行周期: 旬刊
  • 邮发: 14-12
  • 曾用名: 生物磁学
  • 创刊时间: 2001
  • 语言: 英文
  • 编辑单位: 现代生物医学进展编辑委员会
  • 出版地区: 黑龙江
  • 主编: 申宝忠
  • 类 别: 基础医学
期刊荣誉:
  • 新加坡综合护理干预对老年急性脑梗死患者康复的影响

    作者:童丽灵;戴小萍;邓颜梅;高小惠

    目的:探讨系统护理干预措施对老年急性脑梗死患者康复情况的影响.方法:将84例脑梗塞患者随机分为观察组(n=37)与对照组(n=37),对照组采用常规护理方法,观察组给予综合护理干预,分析比较两组病例采用不同的训练及护理方法患者症状的缓解情况.结果:观察组的总体有效率为95.23%(40/42),明显高于对照组的76.19%(32/42),两组有效率比较差异有统计学意义(P<0.05).观察组护理后的NIHSS评分为5.63±3.82,明显低于对照组的8.61±4.75,两组NIHSS评分比较差异有统计学意义(P<0.05).观察组护理后的ADL评分为50.62±15.37,明显高于对照组的33.85±12.16,两组ADL评分比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:脑梗死患者给予系统护理干预措施,有助于改善脑梗死患者的预后,提高其生活质量.

  • 我院自制5号粉对宫颈糜烂并HPV感染的临床疗效

    作者:匡丽君;贺冰;梁惠珍;刘奇英;殷燕

    目的:分析我院自制5号粉对宫颈糜烂并HPV(人乳头瘤病毒)感染是否具有临床疗效.方法:选择我院妇科就诊并自愿接受临床实验的90例宫颈糜烂并HPV患者(呈阳性),按照随机数表法,进行随机分组,分别是中药组与西药组,平均每组患者45例.对两组患者分别使用中药组方与西药两种不同药物进行治疗.治疗后,参照相关疗效评价标准,对两组患者治疗的总有效率及总计转阴率进行比较分析.结果:治疗后,发现中药组患者治疗的总有效率为84.33%,西药组治疗的总有效率为59%,中药组治疗的临床疗效明显优于西药组,两组比较有统计学意义(P<0.05).中药组患者的3个月,6个月,12个月的转阴率分别为45.7%,62.3%,75.7%,西药组治疗的转阴率为21.0%,37.7%,47.7%,中药组治疗的临床疗效明显优于西药组,两组比较有统计学意义(P<0.05).结论:通过临床观察分析得我院自制5号粉对宫颈糜烂并HPV(人乳头瘤病毒)感染具有临床治疗效果,可以提高HPV(人乳头瘤病毒)的转阴率,并且极大缩短转阴时间.

  • 窄谱中波紫外线联合复方甘草酸苷片治疗手部湿疹的疗效观察及对外周血IFN-γ、IL-4水平的影响

    作者:付昱;魏义花;张海蓉;陈智;杨静

    目的:探讨窄谱中波紫外线(NB-UVB)联合复方甘草酸苷片治疗手部湿疹的的疗效及其对外周血疗效观察IFN-γ、IL-4水平的影响.方法:选取手部湿疹患者160例,随机分为观察组与对照组,每组各80例.对照组给予尿素乳膏涂于患处,观察组采用NB-UVB皮损局部照射联合复方甘草酸苷片治疗,均连续治疗4周.治疗前后观察临床表现、EASI评分、血清IFN-γ、IL-4,记录不良反应.结果:治疗后,观察组与对照组总有效率分别为90.00%、72.50% (P<0.05),EASI评分均不同程度的降低(P<0.01或P<0.05),且观察组EASI评分低于对照组(P<0.05);观察组血清IFN-γ水平降低,IL-4升高(P<0.05),且与对照组相应指标比较,差异具有统计学意义(p<0.05).两组均未见明显的不良反应.结论:窄谱中波紫外线联合复方甘草酸苷片治疗手部湿疹具有较高的临床总有效率,改善了手部湿疹的皮损状况,调节了Thl/Th2细胞因子趋于平衡,且具有较高的安全性,对手部湿疹的临床治疗具有一定的指导意义.

  • 有生育要求女性子宫内膜不典型增生的微创治疗

    作者:赵蕾;李晓红;易金玲;马俊旗;丁岩

    目的:探讨对于有生育要求的子宫内膜不典型增生患者采用宫腔镜微创治疗保留子宫的疗效.方法:回顾性分析新疆医科大学第一附属医院2000年1月-2013年3月因子宫内膜不典型增生行子宫内膜电切术(TCRE)的30例患者的临床资料,术后口服高效孕激素(甲羟孕酮)160 mg qd 3月或置入宫内左炔诺孕酮宫内缓释植入系统(曼月乐),对两组患者月经及子宫内膜的病理进行随访.结果:两组患者TCRE手术均顺利完成,未发生严重并发症,术后月经过多、经期延长及贫血均得到明显改善,总有效率93.73%.其中口服高效孕激素组有效率为90.48%,置入曼月乐组有效率为96.30%.结论:对有随访条件的年轻的子宫内膜不典型增生患者,TCRE术联合孕激素或置入曼月乐是治疗的新选择,针对妇女的生育要求可以选择不同的术后用药.微创治疗提高了妇女的生存质量,并发症少.

  • HIF-1α和VEGF-c在胃癌组织中的表达及临床意义研究

    作者:贾淑薇;董蕾;贾辉;马丽;靳耀峰

    目的:探讨HIF-1α和VEGF-c在胃癌组织中的表达情况及临床病理意义.方法:选取2010年12月至2012年12月期间就诊于我院肿瘤外科需进行手术切除的胃癌标本及其配对的癌旁组织各73例进行研究分析,采用免疫组化SP(streptavidinperotridase)对胃癌组织以及癌旁组织中HIF-1α和VEGF-c的表达情况进行检测.结果:①HIF-1α和VEGF-c在癌旁组织几乎不表达,而在胃癌组织中的阳性表达率分别为83.56%、78.08%,显著高于癌旁组织,经分析,差异具有统计学意义(P<0.05);②HIF-1α和VEGF-c的阳性表达和浸润深度、淋巴结转移以及临床分期密切相关,差异具有统计学意义(P<0.05);③HIF-1α和VEGF-c在胃癌组织中的表达存在一定的相关性(r=0.654,P<0.05).结论:HIF-1α和VEGF-c的阳性表达可以作为胃癌侵袭转移的重要判定指标,这对于本病的临床治疗具有一定的指导性意义.

    关键词: HIF-1α VEGF-C 胃癌
  • 外周血CD4+、CD8+及CD56+细胞在肺癌靶向治疗患者中的表达意义

    作者:朱娅;文洽先;许彬;张振勇;严一旦

    目的:探讨埃罗替尼靶向治疗前后非小细胞肺癌患者外周血CD4+、CD8+和CD56+的表达及其临床意义.方法:流式技术检测30例EGFR突变的非小细胞肺癌患者埃罗替尼一线靶向治疗前后,外周血T细胞亚群的表达情况及疗效.结果:靶向治疗1个月后,与治疗前相比较非小细胞肺癌患者外周血T细胞亚群CD4+、CD8+以及CD56+表达数量有统计学差异(P<0.05).其中,CD4+表达上升,CD8+和CD56+表达下降.结论:埃罗替尼靶向治疗可以改善非小细胞肺癌患者细胞免疫功能,观察外周血T细胞亚群表达情况有助于评价埃罗替尼靶向治疗的疗效和预后.

  • 血清降钙素原在鉴别细菌性感染与自身免疫性疾病活动期中的应用价值

    作者:雷震山;杜剑强;吴少琴;张勤国;尹云华

    目的:探讨血清降钙素原(procalcitonin,PCT)在鉴别诊断自身免疫性疾病活动期与细菌感染中的应用价值.方法:选择析深圳市保健办2011年1月-2012年3月收治的30例自身免疫性疾病活动期和34例细菌感染患者为研究对象,测定其血清C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)和PCT的水平.结果:感染组患者CRP水平为(0.1162±0.0873)g/L,PCT水平(2.37±7.02)×10-3g/L,自身免疫活动期患者CRP水平(0.0639±0.0687)g/L,PCT浓度(0.09±0.08)× 10-3g/L.ROC曲线下面积(AUC)和95%可信区间(CI)分别为0.75和0.86,0.61-0.83和0.74-0.94,差异具有统计学意义(P<0.05).CRP联合PCT水平预测的AUC为0.82,其与单独PCT水平相比没有显著性差别(P=0.74).CRP的佳临界值为0.0722g/L,灵敏度为73.5%,特异性为69.2%;PCT的佳临界值为0.09× 10-3g/L,其灵敏度为82.1%,特异性为72.5%.结论:在鉴别活动期自身免疫疾病患者与细菌感染时,PCT的灵敏度与特异性比CRP高,但其联合CRP对此类诊断并无显著意义.

  • Wnt5a在增生性瘢痕中的表达及其临床意义

    作者:满艺;贺全勇;马峥;彭浩;彭程

    目的:探讨Wnt5a在增生性瘢痕中的表达及其临床意义.方法:选择12例增生性瘢痕患者,术中取成熟期增生性瘢痕6份,增殖期增生性瘢痕6份,正常皮肤组织6份.光镜下观察其形态学的差异,通过免疫组化技术检测和比较其Wnt5a阳性表达的细胞面积率.结果:与正常皮肤相比,增殖期增生性瘢痕中有大量的成纤维细胞,胶原纤维含量丰富,且排列紊乱,其间有大量的炎性细胞,成熟期增生性瘢痕也含有丰富的成纤维细胞和胶原,但炎性细胞很少.增殖期增生性瘢痕和成熟期增生性瘢痕组织中真皮浅层和真皮深层Wnt5a阳性表达的细胞面积率均显著高于正常皮肤组织(P<0.05),且增殖期增生性瘢痕组织中Wnt5a阳性表达的细胞面积率显著高于成熟期增生性瘢痕(P<0.05).但正常皮肤组织、成熟期增生性瘢痕、增殖期增生性瘢痕各组间真皮浅层与真皮深层Wnt5a阳性表达的细胞面积率比较均无显著性差异(P>0.05).结论:Wnt5a的表达上调可能在增生性瘢痕的形成中起重要作用,并可能与增生性瘢痕的增殖活性有关.

  • 米格列奈与瑞格列奈分别联合二甲双胍在新诊断2型糖尿病的临床价值比较

    作者:史伟;宋玉明;刘旭阳;钟成福;赵鹏台;付小伟

    目的:探讨米格列奈和瑞格列奈在治疗新诊断2型糖尿病的临床价值比较.方法:将2010年1月至2012年12月间我院新诊断的120例2型糖尿病患者随机分为A、B两组,其中A组患者60例,采用瑞格列奈联合二甲双胍进行治疗,B组患者60例,采用米格列奈联合二甲双胍进行治疗.对两组患者血糖水平及12周后相应指标进行统计分析.结果:治疗3天后两组患者的空腹血糖及餐后血糖水平明显低于治疗前,B组患者血糖降低幅度大于A组(P<0.05);治疗12周后,两组空腹血糖及餐后血糖水平显著减小,B组减小程度高于A组;患者空腹及餐后胰岛素水平有一定的增加,B组增加程度高于A组;B组患者HbA1c的降低程度高于A组;两组同时还可以降低HOMA胰岛素的抵抗指数以及增大胰岛素的敏感指数,其中B组效果好于A组;B组患者出现低血糖的人次少于A组.结论:米格列奈与瑞格列奈分别联合二甲双胍可以短期降低新诊断2型糖尿病患者的血糖水平,在中期治疗后米格列奈联合二甲双胍可以更有效的改善患者糖尿病的各项指标.

  • 73例老年高血压脑出血外科手术方法的疗效比较

    作者:刘宏浩;王少雄;张杰伟;张全鹏

    目的:观察比较三种手术方法治疗老年高血压脑出血的临床疗效及安全性.方法:采取回顾性分析对2008年6月至2012年9月期间在我院接受手术治疗的73例患者,比较手术方式的优劣.结果:采用ADL分级评价治疗效果,神经内镜结合小骨窗组的临床疗效优于立体定向组和大骨瓣开颅血肿清除术组,有统计学差异(P<0.05).结论:神经内镜结合小骨窗治疗老年性高血压性脑出血疗效优于立体定向手术和大骨瓣开颅血肿清除术组,值得在脑出血临床治疗中推广应用.

  • 儿童急性淋巴细胞白血病特异性标记物的精准检测方法研究

    作者:刘丽晓;岳冬梅;杨贵生;赵辉;周晋;刘淑贤;贾昆;王宁

    目的:T细胞和免疫球蛋白重链基因重排是微小残留病灶水平的特异性标记物,而微小残留病灶的水平与儿童急性淋巴细胞白血病的复发强烈相关.应用传统的聚合酶链式反应方法来监测IgH/TCR基因重排不仅耗时、耗人力,而且敏感度较低.本研究旨在探索一种更为高效和敏感与实用的监测IgH/TCR基因重排的精准检测方法.方法:应用多重PCR技术检测26个患有急性淋巴细胞白血病的儿童的外周血样品中的标记物,这些儿童是在中国哈尔滨市近两年内被诊断的患者.分别应用基因扫描和毛细血管电泳方法检测IgH(FRⅠ,FRⅡ,FRⅢ)/YCR(TCRβ,TCRγ)基因重排和分析PCR产物的片段.结果:IgH/TCR基因重排和对IgH基因重排的阳性率分别为92.3%和75%,在26个病例中,4个复发病人的IgH的三个片段(FRⅠ,FRⅡ,FRⅢ)基因重排显示阳性.进一步分析显示复发与IgH基因重排呈线性相关.结论:实验与临床应用表明,基因扫描这种方法对于IgH/TCR基因重排的检测是可靠的、实用的,因而可用于儿童急性淋巴细胞白血病的诊断和随访.

  • 早期大剂量乌司他丁治疗急性肺挫伤的疗效观察

    作者:解鑫隆;吴佩君;宋岚;尹晓清;徐朝军

    目的:探讨早期大剂量乌司他丁治疗急性肺挫伤的临床疗效.方法:选择102例在湖南中医药大学第一附属医院胸外科治疗的急性肺挫伤患者,随机分为A组(对照组)、B组(常规剂量组)和C组(大剂量组),每组各34例.A组患者给予常规治疗;B组在对照组治疗基础上给予乌司他丁10万单位加入0.9%氯化钠100 mL静脉滴注,每8h1次,连用7d;C组在对照组治疗基础上给予乌司他丁40万单位加入0.9%氯化钠100 mL静脉滴注,每8h 1次,连用7d.分别测定和比较3组患者在治疗前、治疗第1天、治疗第4天、治疗第7天的动脉血氧分压(PaO2)、动脉二氧化碳分压(PaCO2)、氧合指数(PaO2/FiO2)、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的水平以及治疗期间3组患者急性呼吸窘迫综合征(ARDS)及肺部感染的发生率.结果:治疗后,B组的PaO2水平在第7天较A组升高,C组的PaO2水平在第1、4、7天较A组均有升高,在第1、4天较B组亦有升高(P<0.05);B、C两组PaCO2水平在第4天较A组均有升高(P<0.05);B组的PaO2/FiO2水平在第7天较A组升高,C组的PaO2/FiO2水平在第4、7天较A、B两组均有升高(P<0.05).B组的TNF-α水平在第7天较A组降低,C组的TNF-α水平在第4、7天较A组降低,在第4天较B组降低(P<0.05);B组的IL-6水平在第7天较A组降低,C组的IL-6水平在第4、7天较A、B组均降低(P<0.05).各组ARDS及肺部感染的发生率比较无统计学差异(P>0.05).结论:早期大剂量乌司他丁对急性肺挫伤具有明显的临床疗效.

  • 肝动静脉渡越时间对结直肠癌肝转移诊断及预测价值

    作者:何颖倩;张会萍;伍瑛;贾晓;杜联芳

    目的:探讨超声造影定量分析肝动静脉渡越时间对结直肠癌肝转移的预测价值.方法:研究对象包括58例明确诊断为结直肠癌肝转移的患者(转移组),48例具有结直肠癌史同时无肝内转移的患者(待查组)及39例健康志愿者(对照组).所有研究对象均行超声造影检查,分析肝动脉及肝静脉到达时间并计算其差值记为肝动静脉渡越时间(HAVTT).待查组患者在3-6个月后行超声造影检查及增强CT/MRI检查来判断是否发生肝内转移.结果:转移组HAVTT较正常组明显缩短(6.58 s Vs 10.75 s,P=0.0000).以HAVTT小于8秒为标准诊断结直肠癌肝转移,准确性、敏感性及特异性分别为97.93%、96.55%及100%.以HAVTT小于8秒为标准预测结直肠癌肝转移,准确性、敏感性及特异性分别为93.75%、66.67%及95.56%.结论:HAVTT可用来预测结直肠癌肝转移.HAVTT缩短者需进一步检查或密切随访.

  • 重组人生长激素治疗重型肝炎的疗效观察

    作者:李仕雄;吕日英;许超宇;朱宇佳;江波

    目的:观察重组人生长激素治疗重型肝炎的疗效.方法:回顾性分析我院住院治疗的60例重型肝炎患者并分组比较,对照组25例为包括血浆置换在内的综合内科治疗,治疗组35例为在对照组基础上联合重组人生长激素治疗;分析两组治疗前后的临床症状、体征和肝肾功能、凝血功能等指标变化,并对治疗结果进行分析,评价临床疗效.结果:治疗组临床症状改善有效率为93.3%,高于对照组(72.0%)(P<0.05);观察组肝功能指标好转率80.0%,优于对照组65.5%(P<0.05).结论:重组人生长激素治疗重型肝炎有较好的效果.

  • 喜炎平注射液联合利巴韦林治疗80例小儿病毒性发热临床疗效分析

    作者:周琴;洪斌;王青;朱学;周达

    目的:探讨喜炎平注射液联合利巴韦林治疗小儿病毒性肺炎和小儿病毒性肠炎伴发热患儿的临床治疗效果及应用价值.方法:选择我院儿科2012年1月~2013年1月收治的小儿病毒性肺炎和小儿病毒性肠炎患儿80例,所有患儿伴有不同程度的发热,将所有患儿随机分为2组,对照组40例给予单纯利巴韦林治疗,观察组40例在给予利巴韦林治疗的基础上给予患儿喜炎平注射液治疗,比较两种治疗方案对病毒性肺炎和病毒性肠炎的治疗效果及两组小儿的退热时间及住院时间.结果:观察组患儿病毒性肺炎和病毒性肠炎的治疗有效率分别为96%、93.33%明显高于对照组患儿70.83%和62.50%,差异有统计学意义(P<0.05).观察组患儿退热时间及住院时间均短于对照组,经统计学分析比较,差异有统计学意义(P<0.05).两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:采用喜炎平注射液联合利巴韦林治疗小儿病毒性肺炎和小儿病毒性肠炎伴发热疗效显著,能够缩短退热时间和住院时间,值得在临床大力推广使用.

  • 针灸配合补阳还五汤治疗脑梗死后遗症68例临床观察

    作者:苏浩;赵苡;黄昭;刘华;付杰;刘宏亮

    目的:观察针灸配合补阳还五汤治疗脑梗死后遗症的临床疗效.方法:将128例患者随机分为观察组和对照组,对照组60例采用常规西医处理,观察组68例在对照组基础上加用针刺和中药补阳还五汤治疗.结果:观察组基本痊愈34例,基本痊愈率50.00%,总有效率91.18%.对照组基本痊愈18例,基本痊愈率30.00%,总有效率79.33%.2组比较,基本痊愈率和总有效率差异均有显著性意义(P<0.05).2组神经功能缺损评分和日常生活能力得分与本组治疗前比较,差异均有显著性意义(P<0.05),与对照组治疗后比较,差异均有显著性意义(P<0.05).结论:针刺疗法配合补阳还五汤治疗脑梗死后遗症能减轻患者神经功能缺损程度,提高患者生活自理能力,临床疗效安全可靠.

  • Vero细胞微载体培养的化学成分明确无血清培养基的设计

    作者:刘红;陈天;李世崇;叶玲玲;王启伟;陈昭烈

    目的:设计适用于Vero细胞微载体培养的化学成分明确无血清培养基.方法:以商品化的DMEM/F12合成培养基为基础培养基,应用Plackett-Burman实验设计和响应面分析法设计支持Vero细胞微载体培养的化学成分明确无血清培养基.结果:以细胞密度为评价指标,在单因素实验的基础上采用Plackett-Burman实验设计考察10种培养基添加成分对Vero细胞生长的影响,确定了3种对Vero细胞生长起明显促进作用的培养基添加成分,为胰岛素、血清素和腐胺.继而利用响应面法分析了这3种添加成分的佳水平范围,设计了一种支持Vero细胞贴附培养的无血清培养基(VERO-SFM-A).在Belleo搅拌式培养瓶中采用VERO-SFM-A和Cytodex 1微载体培养Vero细胞,细胞密度由接种时的4× 105 cells/ml增加到培养6d后的22.3× 105 cells/ml,细胞活力保持在96%以上.结论:VERO-SFM-A能够有效地支持Vero细胞在微载体表面固定化生长并达到较高的细胞密度,具有实际应用于Vero细胞微载体规模化培养的应用潜力.

  • 四种液体不同作用时间对根管壁的影响

    作者:王海侠;于天亮;陈家亮;陈力;马肃

    目的:观察乙二胺四乙酸盐(Ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)、氯亚明(Chloramine)、丁克除(Desocclusol)和酚克除(Resosolv)等4种化学预备液根管内封药时对根管壁的影响.方法:选择因正畸拔除的健康前磨牙65颗,实验组60颗和对照组5颗.实验组随机分为A、B、C、D4组,每组15颗,各组又随机分为10d组、20d组和30d组,每组5颗.常规开髓、拔髓、干燥根管后丙烯酸树脂封闭根尖孔.根管内封药,磷酸锌暂封,4℃生理盐水中储存,对照组不做任何处理,相同条件下储存.丙烯酸树脂包埋,硬组织切片机切片,扫描电镜观察.结果:通过扫描电镜观察,在本实验周期内与对照组相比较,EDTA封药10天、20天和30天组,根管壁均有不同程度的脱矿,尤其是30 d组.氯亚明和丁克除封药10天、20天和30天组,根管壁均有不同程度的脱矿,尤其是30 d组,但脱矿部位主要位于根管壁内层,根管壁中外层脱矿较轻.酚克除封药3个时间组,根管壁均无脱矿.结论:EDTA根管内封药20天以内相对安全,不会造成根管壁的重度脱矿.氯亚明和丁克除根管内封药30天以内均不会造成根管壁的重度脱矿.酚克除对根管壁无影响.

  • 胰岛素对糖尿病兔牙槽骨缺损修复的影响

    作者:苏鑫;刘继乐;李新;毕良佳;侯传记;胡馨元

    目的:探讨胰岛素对糖尿病兔牙槽骨缺损修复治疗的效果,为糖尿病所致的牙周炎提供临床治疗的依据.方法:40只大耳白兔随机分为4组:A组制备健康兔的牙槽骨缺损;B组为胰岛素组,制备健康兔牙槽骨缺损后,用胰岛素治疗;C组为糖尿病组,制备糖尿病兔牙槽骨缺损;D组为糖尿病胰岛素治疗组,制备糖尿病兔牙槽骨缺损后,用胰岛素治疗.每组10只,缺损制备后4、8周各处死5只,对各组成骨情况进行组织学观察及测定.结果:组织学观察A、B、D组修复区可见大量新骨形成,以B组为显著;C组仅见少许成骨,多为纤维组织.新生骨面积比和成骨细胞数在4、8周时均为D组大于C组,B组大于A组,组间差异有统计学意义(P<0.05).证明应用胰岛素促进糖尿病兔缺损牙槽骨形成新骨的效果明显.结论:胰岛素能够促进糖尿病兔牙槽骨缺损的成骨,为临床上治疗糖尿病并发牙周炎提供一种新的手段.

  • 低氧诱导因子和角质细胞生长因子双基因重组腺病毒的构建及其在肺泡上皮细胞中的表达

    作者:哈小琴;姜东红;邓芝云;董菊子;赵勇;彭俊华;张玉;张玉琴;王鲲

    目的:构建同时携带低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和角质细胞生长因子(KGF)的腺病毒载体(pAdxsi-GFP-HIF-KGF),观察其在防治肺损伤潜在的应用前景.方法:低氧处理A549细胞后提取总RNA并逆转录为cDNA作为模板,依据GeneBank公布的HIF-1α cDNA设计引物,并分别引入KpnI和BamHI酶切位点,PCR扩增后将目的基因HIF-lα连接到载体pShuttle-CMV-EGFP上,构建重组质粒pShuttle-GFP-HIF.然后以质粒pIRES2-EGFP-KGF为模板,用引入NheI和PmneI酶切位点的引物PCR扩增KGF基因并克隆到重组质粒pShuttle-GFP-HIF上,获得穿梭质粒重组质粒pShuttle-GFP-HIF-KGF.采用细菌内重组方法将目的序列重组到pAdxsi病毒骨架载体上构建携带HIF-1α和KGF双基因的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-HIF-KGF.检测重组腺病毒滴度后,转染人肺泡上皮细胞A549,检测目的基因的转染表达.结果:通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实携带HIF-1α和KGF双基因的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-HIF-KGF构建成功,且构建的重组腺病毒纯度好、滴度高.用pAdxsi-GFP-HIF-KGF以100 MOI转染A549细胞后24h后在荧光显微镜下可观察到细胞有较强的绿色荧光表达,48h时荧光更强;转染48h ELISA法检测培养上清中HIF-1蛋白表达水平为(56.36±4.53)ng/mL,KGF蛋白表达水平为(60.20± 2.92)ng/mL.结论:成功构建了腺病毒载体pAdxsi-GFP-HIF-KGF,其转染效率及目的基因的蛋白表达水平较高,具有潜在的进一步在肺损伤局部应用的前景,为后期制备可以同时发挥KGF、HIF-1作用的基因治疗药物打下基础,同时为高海拔地区应激性急性肺损伤的有效防治提供实验基础.

  • 院前明胶海绵栓塞治疗肾血管损伤的动物研究

    作者:余晓凡;梁明;孙景阳;曹志强;姚天明;李菲;韩雅玲

    目的:探讨在新型综合手术救治方舱中明胶海绵栓塞治疗肾血管损伤的可行性和疗效.方法:在新型综合手术救治方舱中构建3例动物肾腹(背)干动脉损伤模型、3例肾段动脉损伤模型,先用1mm× 1mm× 1mm明胶海绵颗粒对损伤血管进行栓塞治疗,若未能止血,改用2mm× 2mm× 2mm颗粒栓塞,观察栓塞后15分钟、1月后的肾动脉造影,栓塞后1月的组织病理表现.结果:3例肾段动脉和1例肾腹干动脉使用1mm× 1mm× 1mm明胶海绵颗粒一次栓塞成功;1例肾腹干动脉和1例肾背干动脉用1mm× 1mm× 1mm颗粒栓塞未能完全止血,改用2mm× 2mm× 2mm颗粒栓塞成功.6例动物术后生命体征平稳,全部存活,一个月后造影复查见栓塞动脉未再通,但其余分支动脉血供得到保留.大体标本观栓塞侧肾明显缩小,未见脓腔和脓性分泌物,病理切片示栓塞后局部肾组织有不同范围缺血性梗死.结论:野战方舱中明胶海绵栓塞治疗出血效果明确,对于一般肾血管损伤定位准确,止血迅速、彻底,有良好的可行性和疗效.

  • 脊髓缺血损伤合并脓毒症后脊髓ZnT1表达的研究

    作者:范倩倩;周青山;苏斌虓;董海龙;曾毅

    目的:研究脊髓缺血损伤合并脓毒血症后大鼠脊髓的病理改变及脊髓组织中锌转运体1(zinc transporter 1,ZnT1)的表达规律.方法:将32只wistar大鼠随机分为假手术组(S组,n=8)、腹主动脉阻断组(I/R组,n=8)、内毒素组(LPS组,n=8)和腹主动脉阻断+内毒素组(I/R+LPS组,n=8).用HE染色的方法检测脊髓组织病理损害,用免疫组织化学的方法检测脊髓组织中ZnT1的表达规律.结果:1.病理结果改变:除S组外,I/R组、LPS组、I/R+LPS组三组大鼠HE染色切片中均可见脊髓组织损伤,各组脊髓损伤的严重程度有以下规律:S组<I/R组<LPS组<I/R+LPS组.2.免疫组化结果:脊髓损伤组ZnT1的表达较假手术组均增加(P<0.05).结论:1.脊髓缺血损伤合并内毒素攻击可导致严重的脊髓损伤.2.腹主动脉阻断合并内毒素攻击所致脊髓损伤早期脊髓组织中ZnT1表达上调,可能通过调节脊髓损伤早期脊髓组织中锌稳态平衡进而在脊髓损伤后脊髓神经元的病理生理活动中发挥重要作用,这一实验结果可为寻找早期脊髓损伤预防措施提供新的思路.

  • 傣药“雅糯妙”(肾茶)正丁醇部位的化学成分研究

    作者:樊飞飞;李晓波;邱明丰;张丽丽;赵应红;王梦月;彭崇胜

    目的:对肾茶正丁醇部位进行系统分离和化合物鉴定,为探索肾茶药理活性物质基础研究奠定基础;方法:采用多种分离纯化技术(硅胶柱层析色谱、反相硅胶柱色谱、Sephades LH-20、半制备型高效液相色谱等)对肾茶正丁醇部位化学成分进行系统的分离纯化,得到单体化合物;运用电喷雾质谱(ESI-MS)、核磁共振氢谱(1HNMR)、核磁共振碳谱(13C NMR/DEPT)和二维核磁共振谱(HSQC,HMBC)对所得单体化合物进行结构鉴定.结果:从肾茶正丁醇部位中共分离得到9个化合物,分别鉴定为:原儿茶酸甲酯(1)、原儿茶醛(2)、原儿茶酸(3)、3,4-二羟基苯乙酸甲酯(4)、3,4-二甲氧基乙酸甲酯(5)、2,5-二羟基苯甲醛(6)、苯甲酸(7)、咖啡酸(8)、迷迭香酸(9).结论:肾茶正丁醇部位主要化学成分为酚醛、芳香酸及其衍生物,除分离得到之前献报告的咖啡酸、迷迭香酸等外,还首次分离鉴定4个化合物(1,4,5,6),其中化合物6为首次从植物中分离得到,并首次对该化合物核磁数据进行了归属;化合物1、4、5均为首次从肾茶属植物中分离得到.

  • 过表达CREG抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

    作者:田孝祥;陶杰;张剑;孙鸣宇;彭程飞;闫承慧;韩雅玲

    目的:探讨EIA激活基因阻遏子(Cellular repressor of ElA-stimulated genes,CREG)在高糖引起的人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)损伤中的作用,为寻找糖尿病血管病变新的治疗靶点提供实验依据.方法:采用胶原酶消化法分离原代HUVECs,并用内皮细胞标志物CD31免疫荧光染色进行鉴定.分别用含有5.5 mmol/1葡萄糖(正常糖对照组)、5.5 rnmol/l葡萄糖+27.5 mmol/l甘露醇(渗透压对照组)或33 mmol/l葡萄糖(高糖组)的培养液培养HUVECs 48 h.Western Blot检测剪切体caspase-3表达;Annexin V/PI双染后流式细胞术检测细胞凋亡.通过感染表达CREG基因的腺病毒获得CREG过表达的HUVECs,Western Blot及流式细胞术评价CREG过表达对HUVECs凋亡的影响.结果:高糖处理48 h后,HUVECs内剪切体caspase-3的蛋白表达增加,细胞凋亡率增加;过表达CREG后,高糖处理的HUVECs内剪切体Caspase-3表达和凋亡细胞比例均明显降低,但仍高于正常糖对照组.结论:CREG过表达可抑制高糖引起的HUVECs凋亡.

  • 血源性兔VX2肿瘤脑及脑膜转移瘤动物模型的建立及MRI检测

    作者:孙朋朋;郑林丰;姜兴岳;王悍;胡运胜;张贵祥

    目的:研究MRI对血源性脑及脑膜转移瘤动物模型转移灶的检出效果.方法:18只新西兰大白兔随机分为3组,分别从左颈总动脉内接种VX2瘤细胞,A组:20%甘露醇注入5min后接种VX2瘤细胞;B组:20%甘露醇注入5 min后,加入肝素再接种VX2瘤细胞;C组,对照组,单纯注入等量生理盐水.术后2周后行MRI检查.病理取材HE染色光镜下观察.结果:平扫:A组,1只(1/6)发现脑内结节并脑膜结节样增厚,T1WI为等信号,T2WI为稍高信号.B组,2只(2/6)为脑内多发结节,TlWI为等信号,T2WI为稍高信号.2只(2/6)脑膜结节样增厚.增强扫描:A组,2只(2/6)脑内见强化结节灶;直径在1.5 mm-7.0 mm之间.4只(4/6)脑膜线样增厚或结节样增厚强化.B组,6只(6/6)脑内见直径在1.5 mm-5.0 mm的高信号结节,其中5只为脑内多发结节灶;4只(4/6)脑膜线样或结节样增厚强化,左侧为主,其中2只(2/6)为双侧脑膜增厚.增强扫描A、B组间脑内病灶差异有统计学意义(Fisher's确切概率值为0.04).C组平扫及增强扫描均未见异常信号.结论:上述方法制成的动物模型可为医学影像学研究提供可靠的动物模型,加入肝素可提高瘤灶的形成几率,并证实血脑屏障对脑转移瘤的形成起重要作用.MRI增强检查是检出脑内及脑膜转移瘤的首选方法.

  • 人脐带间充质干细胞对低氧环境下的肾小管上皮细胞中肝细胞生长因子(HGF)表达的影响

    作者:邹翔宇;杜涛;程中良;琚官群;苗帅;朱英坚;刘国华

    目的:肾脏的急性缺血缺氧性损伤是泌尿外科常见病,以肾小管间质纤维化为主要病理特点,成体干细胞在急性肾脏损伤动物模型中可以促进肾脏结构修复、改善肾脏功能,肝细胞生长因子作为抗纤维化的主要生长因子,在成体干细胞干预的急性肾脏损伤动物模型实验中起重要作用,然而以往的研究对象主要以动物模型为主,成体干细胞对肝细胞生长因子的具体调节机制尚不清.本实验通过体外分离、培养人的脐带间充质干细胞,来干预离体低氧预处理后的大鼠近端肾小管上皮细胞,探讨在体外培养条件下人脐带间充质干细胞对低氧预处理大鼠近端肾小管上皮细胞肝细胞生长因子表达的影响,为今后研究间充质干细胞治疗肾功能损害提供可靠的理论依据.方法:采用贴壁培养的方法无菌条件下分离、培养、传代人脐带间充质干细胞,细胞融合达90%时更换无血清培养基(serum-free medium,SFM)培养24 h,收集细胞上清液即为人脐带间充质干细胞条件培养基(condition medium,CM);大鼠近端肾小管上皮细胞(tubular epithelial cells,TECs)于低氧环境处理1h后,随机分为对照组与CM干预组,分别培养24 h和48 h后检测TECs中大鼠肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的mRNA水平、收集上清液测定大鼠HGF蛋白的含量,同时收集CM干预组中0h,12h、24h、48h的上清液,测定其中人来源HGF蛋白的含量,并对TECs在CM干预24 h和48 h后行免疫组化定性人的HGF蛋白的表达.结果:在低氧预处理的培养环境下,CM干预组中,TECs中大鼠来源的HGF mRNA表达水平在24 h和48 h时明显高于对照组(P<0.05);上清液中大鼠HGF蛋白的含量在24 h和48 h,CM干预组显著高于对照组(P<0.05);上清液中人的HGF蛋白的含量随时间进行性增高,免疫组化染色显示在24 h和48 h大鼠TECs中能检测人的HGF蛋白的表达.结论:在低氧预处理的体外培养环境下,脐带间充质干细胞的条件培养基可以显著的上调大鼠自身的HGF水平,并可诱导大鼠TECs合成和分泌人的HGF蛋白,并为探究脐带间充质干细胞治疗肾功能损害提供可靠的理论依据.

  • 双向凝胶电泳在先天性肛门直肠畸形中的初步应用

    作者:王建尧;刘磊;姚君;叶明;王斌;叶晓硕;冯奇;宋雪倩;邹沙芹

    目的:寻找先天性肛门直肠畸形患儿直肠末端组织中异常表达的蛋白质.方法:通过二维凝胶电泳分离先天性肛门直肠畸形患儿直肠末端组织及正常新生儿直肠末端组织,用Image Master2D Platium 6.0软件比较电泳图谱中的异常蛋白质点.结果:筛选出19个表达差异的蛋白质点,其中有12个蛋白质点表达上调,7个蛋白质点表达下调,差异具有统计学意义.结论:先天性肛门直肠畸形可以导致血清中多种蛋白的异常表达.这些差异表达的蛋白可以为先天性肛门直肠畸形的进一步研究提供了依据.

  • 一个Ⅰ型神经纤维瘤病家系的基因突变分析

    作者:李丹丹;王进;梁婷;马兰茗;刘明

    目的:Ⅰ型神经纤维瘤病是一种常见的常染色体显性遗传病,主要累及皮肤和神经系统.其临床表现多样,主要以“咖啡牛奶斑”、皮肤神经纤维瘤、虹膜Lisch结节、腋窝和腹股沟斑点为特征,Ⅰ型神经纤维瘤病由NF1基因突变所致,神经纤维瘤蛋白是NF1基因编码蛋白,是一种肿瘤抑制蛋白,可抑制细胞的过度生长.NF1基因突变不仅可导致细胞过度生长,还可增加良性及恶性肿瘤的发生风险.本研究中,我们通过基因突变分析,确定中国东北地区一个伴有先天性白内障的Ⅰ型神经纤维瘤家系NF1基因的突变位点.方法:通过聚合酶链反应(PCR)和NF1基因直接测序分析对家系中的3名患者及2名健康成员进行基因突变检测,以确定其突变位点.结果:此家系呈常染色体显性遗传.通过基因序列分析发现NF1基因第1140密码子第二个碱基呈杂合子点突变C→G,导致一个无义突变S1140X,家系中健康成员和正常对照未检测到此突变存在.结论:通过NF1基因测序分析,我们发现NF1基因的S1140X突变是引起该家系NF1疾病的致病原因,该突变导致NF1基因终止密码提前,神经纤维瘤素蛋白截短.本研究丰富了我国关于Ⅰ型神经纤维瘤病在眼科的临床表现.

  • siRNA抑制stathmin表达对高级别胶质瘤血管内皮细胞迁移的影响

    作者:乔万臣;杨阿敏;慕璐岩;秦向英;刘晓谦

    目的:探讨siRNA抑制Stathmin表达对高级别胶质瘤微血管内皮细胞侵袭性的影响.方法:利用结合CD105单克隆抗体的免疫磁珠内皮细胞分选系统特异性分选出22例高级别胶质瘤微血管内皮细胞(其中8例Ⅲ级胶质瘤,14例Ⅳ级胶质瘤,13例男性和9例女性组成).应用siRNA技术抑制高级别胶质瘤血管内皮细胞中Stathmin表达,Transwell侵袭实验检测Stathmin基因沉默对高级别胶质瘤血管内皮细胞迁移的影响.结果:采用RNA干扰Stathmin的高级别胶质瘤微血管内皮细胞中Stathmin的mRNA和蛋白表达均较对照组显著下降,而迁移细胞数也显著低于对照组(P<0.01).结论:通过siRNA抑制高级别胶质瘤血管内皮细胞中Stathmin表达可抑制其迁移.

  • CD4+CD25+调节性T细胞在CD46途径下诱导IL-10生成的研究

    作者:徐亚青;王峻;韩静静;林丹丹;赵杨

    目的:炎症抑制因子IL-10在过敏及自身免疫性疾病的发生过程中有着重要意义,补体调节蛋白CD46作为一种新的T细胞活化辅助因子可以诱导CD4+T细胞生成IL-10.另外有研究表明,CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+ Tregs)作为一种重要的免疫抑制细胞可以通过促进周围细胞分泌IL-10,使其抑制作用得到放大.本研究探讨在CD46辅助刺激途径下,CD4+CD25+Tregs诱导周围CD4+CD25-T细胞产生IL-10的能力.方法:分离纯化CD4+CD25+ Tregs和CD4+CD25+T细胞,采用CD3/CD46或CD3/CD28刺激,分别进行单独培养或按1:10的比例共培养,同时以CD4+T细胞组作为比较.用氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测定细胞增殖速率,ELISA方法测定各培养组上清IL-10的水平.结果:在CD46或CD28刺激下,CD4+CD25+Tregs/CD4+CD25+T细胞共培养组、CD4+T细胞组的IL-10水平均显著高于CD4+CD25+T细胞单独培养组.在CD46刺激下,CD4+CD25+T细胞组、CD4+CD25+ Tregs/CD4+CD25+T细胞共培养组、CD4+T细胞组IL-10的水平均较CD28刺激下明显增高,各组细胞的增殖能力均较CD28刺激下显著降低.结论:在CD46或CD28刺激下,CD4+CD25+ Tregs均能够诱导CD4+CD25-T细胞分泌IL-10,CD46作为一种新的T细胞共刺激分子,与传统的CD28分子相比,能够刺激IL-10分泌增加.本文阐述了CD46途径下CD4+CD25+ Tregs诱生IL-10的功能,进一步研究CD46途径下各类免疫细胞的活化反应,对于明确此途径下免疫细胞的功能改变与某些疾病发病机制的关系具有重要意义.

  • 帕罗西汀血药浓度检测方法研究进展

    作者:孙秀佳;林治光;任娟娟;蒋平;崔慧茹;刘红梅;张岳春;李婷;李春波

    帕罗西汀为5-羟色胺(5-HT)阻断药,具有起效快、疗效好、不良反应低等优点,为目前临床上常用抗抑郁症药物.帕罗西汀疗效和不良反应与该药血药浓度密切相关,并且个体差异性较大.因此,研究开发专一性强、灵敏度高的血药浓度检测方法十分必要,具有重要的临床和实践意义.本文综述帕罗西汀血药浓度检测时血样的前处理方法,同时对高效液相色谱法和气相色谱法检测帕罗西汀血药浓度进展进行论述,为该领域的临床合理用药和相关领域的研究提供借鉴.

  • β3-肾上腺素受体在心力衰竭时能量代谢重构中作用

    作者:孔一慧;高艳辉;刘忆梅;张莉;刘广钟;李为民

    在心力衰竭(heart failure,HF)的发生发展过程中,心肌细胞往往发生了能量和底物代谢的改变,并直接或间接地促进了心肌重构的发展,即心肌的能量“代谢重构”.β3-肾上腺素受体(β3-adrenergic receptor,β3-AR)主要分布于脂肪组织,与能量代谢密切相关,参与脂肪分解、葡萄糖转运、以及胰岛素分泌等过程,心肌也有少量β3-AR表达,HF时心肌β3-AR表达大量上调,介导负性肌力作用,同时脂解作用增强、调节脂肪酸氧化的PPARα下降,导致脂肪酸堆积,心肌优先利用葡萄糖代谢,出现能量代谢重构,现简述β3-AR在HF时能量代谢重构中的作用.

  • Hedgehog信号通路靶基因与肿瘤的关系之研究进展

    作者:程萍;郭传勇;徐选福

    Hedgehog(HH)蛋白属于分泌蛋白家族,广泛表达于哺乳动物,非哺乳动物等多个物种,参与调控多种肿瘤形成,器官成熟、血管生成,干细胞分化,免疫细胞以及胚胎发育.文章主要就近几年来国内外对hedgehog信号通道下游靶基因在肿瘤干细胞,肿瘤细胞的转移,增殖,凋亡及胚胎发育等方面的研究进展进行综述,重点阐述hedgehog信号通路下游靶基因与肿瘤及发育的关系,以期能为与hedgehog信号通道参与调控的相关疾病提供一些靶向性临床诊疗的新思路.

  • 小球藻的营养及药用价值

    作者:黄燕娟;王小芬;陈向凡

    微藻因具有丰富的营养价值和产油能力,因而已被广泛研究.小球藻属于单细胞绿藻,分布广泛,种类多达十余种,在食品、医药、饲料、能源和环保等多个领域具有广泛的应用价值.小球藻不仅可以光自养生长,还可以利用有机碳源进行异养生长.小球藻细胞壁坚厚,胞内含有丰富的蛋白质、必需氨基酸、多糖、色素、脂肪酸,并富含多种维生素,以及铁、钙、锌、钾等矿物元素,具有全面而均衡的营养价值.小球藻属中的蛋白核小球藻已被我国卫生部列为新资源食品.小球藻特有的促生长因子(CGF)具有提高免疫力、抗肿瘤等多种特殊功效,近年来研究证明小球藻在临床上可作为治疗多种疾病的辅助药物,被认为是绿色天然的营养保健食品.本文从小球藻的生物学特性、营养价值、药理和保健作用等方面进行了论述.

  • 关于神经病学PBL教学中心理因素的思考

    作者:严为宏;方洁;方晶;曹晨昱;刘建仁

    神经病学是涉及多个基础学科的临床专门学科,其内容复杂抽象,令学生望而生畏.PBL是学生自主学习建构知识和教师引导的教学模式,有利于学生克服畏难情绪,提高学习效率.根据我们的实践体会,教师与学生的心理是影响PBL教学效果的重要因素.只有把握好教学过程中的心理因素,才能使PBL的优势真正得以体现.

    关键词: 神经病学 PBL 心理
  • 动脉粥样硬化斑块中脂肪沉积的扫频光热波成像

    作者:汪天仪;Jake Mancuso;Xiankai Li;Ayou Hao;Li L.Ma;Marc D.Feldman;Thomas E.Milner

    动脉粥样硬化和易损斑块破裂在全球范围内具有高的死亡率,超过传染病和癌症导致的死亡率的总和.动脉粥样硬化斑块是由一层很薄的“纤维帽”和导致血栓形成的脂质核心构成.光热波成像是基于对被目标发色团(本文中指脂肪沉积)吸收的光信号强度进行周期调制,从而实现对目标发色团释放的热(红外)信号的调制.这里,我们利用光热波成像来检测来自兔子动脉硬化模型的粥样硬化斑块中脂肪沉积的三维分布.波长为1210纳米的激光被用来靶向检测脂肪.动脉粥样硬化斑块组织在0.1到5赫兹连续扫频的激光的激发下发出光热波,光热波传播到样品表面形成红外辐射温度并被红外相机以25.6帧/秒的速度接收并录制20秒.红外相机上的每一个像素(总共256× 256像素)在进行时域傅里叶变换以后得到强度和相位的频域光热波图像.某一特定频率的强度和相位光热波图像对应着脂肪沉积在动脉粥样硬化斑块样品中的横向和纵向分布.对强度和相位光热波图像的分析指出:光热波成像能够用来检测脂肪在动脉粥样硬化斑块中的三维分布,并且脂肪的分布和动脉粥样硬化斑块的形状特征有着紧密联系.

  • 利用DNA芯片技术高效合成Ostreococcus Tauri叶绿体基因组

    作者:柳伟强;刁文一;钟云鹏;冯爱华;薛高旭;齐金才;周祯祯;贾延凯;廖国娟

    目的:21世纪以来,随着合成生物学的高速发展及其所遇到的问题,开发下一代DNA合成技术已经成为了必然趋势.基因芯片技术和DNA大片段组装技术是建立下一代DNA合成平台的关键技术力量.方法:为了开发具有工业化标准的DNA芯片-基因组合成平台,我们首次利用电化学DNA芯片和DNA大片段组装技术合成了72kb的Ostreococcus tauri的全叶绿体基因组.结果:首先,我们使用电化学DNA芯片合成仪合成了564条150bp的Oligo Mix,并成功扩增分离了其中96%的Oligo序列,剩下的基因组序列是通过传统的固相亚磷酰胺三脂合成法合成.在此基础上,我们利用DNA重组技术将564条150bpOligo片段分三步克隆到了一个pGSYN系统.通过高通量测序,我们证实叶绿体基因组被成功地人工合成.整个合成成本大约是目前传统基因合成成本的10%-20%.结论:研究证实基因芯片技术和DNA大片段组装技术的应用是能够明显的降低现阶段基因组合成工艺的成本.新技术的成熟推广和成本的有效控制也会进一步加速科学家对基因组功能的深入研究以及合成生物学的质的飞跃.

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