中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
不同浓度转化生长因子-β1对人骨髓间充质干细胞/海藻酸钠复合物体外软骨形成能力的影响
目的探讨人骨髓间充质干细胞(MSCS)体外定向分化为软骨样组织的可行性以及不同浓度TGF-β1对人MSCs/海藻酸钠复合物体外软骨形成能力的影响.方法将体外培养扩增的人骨髓间充质干细胞与海藻酸钠结合,制成MSCs/海藻酸钠复合物,诱导培养液中添加不同浓度TGF-β1,在培养的不同时间进行Ⅱ型胶原的免疫组织化学,原位杂交,蛋白多糖的特殊染色,以及蛋白多糖的定量检测.结果细胞在海藻酸钠中生长良好,可见细胞分裂增殖,形成同源细胞团.10 μg/L诱导组Ⅱ型胶原表达阳性,基质中有红染的黏多糖物质的堆积,蛋白多糖定量检测均高于其他实验组(P＜0.05).结论 TGF-β1浓度过低不能诱导软骨形成,而浓度过高则不利于软骨形成,10 μg/L是体外诱导软骨形成的适宜浓度.海藻酸钠是运载MSCs的理想载体和支架.
-
单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦系统联合化疗药物治疗前列腺癌
目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)系统联合几种临床常用的化疗药物对激素非依赖性人前列腺癌(HRPC)细胞PC-3m的杀伤效应.方法将HSV-TK基因导入PC-3m细胞,采用活细胞拒染法、四甲基偶氮唑盐酶反应比色法(MTT法)检测单独给予GCV(10 μmol/L)和顺铂(CDDP,10 μmol/L)、足叶乙甙(VP-16,10 μmol/L)、长春新碱(VCR,135 nmol/L)、氨甲喋呤(MTX,5 nmol/L)、5-氟尿嘧啶(5-Fu,1μmol/L)及苏拉明(100 μmol/L)等物质,以及GCV联合上述药物对PC-3m细胞的体外杀伤效应,并用流式细胞术(FCM)检测GCV联合5-Fu或苏拉明后细胞坏死和凋亡状况.结果 HSV-TK/GCV联合VP-16、VCR、5-Fu和苏拉明后杀伤PC-3m细胞的效应增强,联合CDDP后杀伤效应降低,联合MTX后则杀伤效应无明显改变.FCM检测显示,GCV联合5-Fu和苏拉明后72 h出现较大比例的细胞凋亡和细胞坏死,细胞凋亡比例分别为36.38%和35.51%,细胞坏死比例分别为33.05%和28.87%.结论 HSV-TK/GCV系统联合某些化疗药物后可对前列腺癌(Pca)细胞发挥协同的杀伤效应.
-
醛糖还原酶相似基因-1与人肝癌细胞药物敏感性的关系及相关基因的筛选
目的探讨醛糖还原酶相似基因-1(ARL-1基因)与人肝癌细胞药物敏感性的关系,及相关基因的筛选.方法线性化的ARL-1表达载体DNA转染至人肝癌细胞系(HepG-2细胞).含有活性醛基的表阿霉素、丝裂霉素作为实验用药,不含活性醛基的5-氟尿嘧啶作为阳性对照.采用MTT法和流式细胞仪研究ARL-1基因对肝癌细胞耐药性的影响,并运用cDNA芯片技术对相关基因进行筛选.结果 ARL-1基因成功转染至人肝癌细胞HepG-2后,加入含有活性醛基的表阿霉素和丝裂霉素后,实验组的细胞凋亡率明显低于对照组(P＜0.05),耐药水平明显高于对照组.加入不含活性醛基的5-氟尿嘧啶后,两组的细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05).cDNA芯片分析发现实验组8种基因的表达水平明显上调,9种基因的表达水平明显降低,涉及细胞的蛋白质代谢、信号传导、转移、耐药性等方面.结论转染ARL-1基因后,人肝癌细胞的耐药水平明显升高,而且基因的表达谱发生改变.为系统研究肝癌细胞的耐药性及其机制提供了有用的线索.
-
MDR1启动子调控CD∷尿嘧啶磷酸核糖转移酶重组腺病毒载体的构建及表达
目的构建由人MDR1启动子调控CD∷upp融合基因表达的重组腺病毒,为对耐药肿瘤体内外靶向基因治疗奠定基础.方法自行设计一对含XhoⅠ和HindⅢ酶切位点的MDR1引物,从外周血中提取人类基因组DNA,通过PCR扩增MDR1启动子并插入PGL3-enhancer载体上,获得PGL3-MDR1质粒.从PORF-CD∷upp质粒中切下CD∷upp基因,插入PGL3-MDR1中MDR1启动子下游,并从中切下目的基因MDR1-CD∷upp,克隆到腺病毒穿梭质粒中,将带目的基因的穿梭质粒pAdTrack-MDR1-CD∷upp.与含有pAdeasy-1的BJ5183菌电转化,筛选提取>30 kb的阳性克隆,经线性化后转染293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增出重组腺病毒中的目的基因MDR1、CD∷upp等方法加以鉴定.结果成功构建了含MDR1-CD∷upp靶向自杀基因的重组腺病毒载体Ad-MDR1-CD∷upp,病毒滴度为3.0×1010 pfu/ml.结论该重组腺病毒的构建为下一步研究其对MDR1耐药细胞系的特异性杀伤作用和对耐药肿瘤模型的靶向基因治疗提供基础.
-
腺病毒携带肝细胞生长因子基因不同途径转染对大鼠急性缺血心肌的影响
目的探讨腺病毒携带肝细胞生长因子基因(Ad-HGF)不同途径转染对大鼠缺血心肌的影响.方法将75只大鼠随机分为心肌内注射Ad-HGF组、注射携带绿色荧光蛋白(Ad-GFP)组、注射生理盐水空白对照组,心室腔注射Ad-HGF组、注射Ad-GFP组,各组分别于第3、7、14、21、28天各处死3只检查腺病毒的分布情况及进行血管计数.结果心肌内和心室腔注射Ad-HGF组第14、21、28天可见新生血管生成数量显著增加,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).心肌内注射Ad-GFP组术后3 d心脏绿色荧光强,14 d消失,心腔内注射Ad-GFP组术后3 d心脏可见到范围较小的微弱绿色荧光,7 d消失.结论 Ad-HGF可明显促进大鼠缺血心肌微小血管生成,心肌内直接注射途径仍优于心腔内给药.
-
微环境诱导肝细胞癌多药耐药的形成及机制
目的探讨微环境在肝癌多药耐药(MDR)表型形成中的作用,并初探其作用机制,为逆转肝癌耐药提供有效的新的分子靶点.方法模拟肝癌体内生长的局部微环境,使HepG2细胞分别在缺氧、低糖的微环境下生长或稳定整合HBX基因.应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术和Western blot技术分别检测这些局部微环境因素作用下的HepG2细胞内多药耐药相关基因mdr1、肺耐药相关蛋白基因(LRP)、多药耐药相关蛋白基因(MRP1)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的mRNA和蛋白水平的表达.同时运用免疫细胞化学技术检测肝癌耐药细胞株中HIF-1α蛋白的表达,以及检测转染了HIF-1α质粒的HepG2细胞中上述相关多药耐药基因的表达.结果在缺氧、低糖环境下生长或稳定整合了HBX基因的HepG2细胞均不同程度地高表达多药耐药相关基因和HIF-1α;在肝癌耐药细胞株中HIF-1α蛋白高表达;稳定转染了HIF-1α质粒的HepG2细胞显著高表达多药耐药相关基因.结论肝癌生长的微环境可通过核转录因子HIF-1α调控多药耐药相关基因的表达,从而诱导肝癌多药耐药表型的形成;HIF-1α有望成为逆转肝癌耐药的新的分子靶点.
-
聚丙烯延胡索酸酯/β-磷酸三钙合成和对骨髓基质细胞生物学行为的影响
目的制备聚丙烯延胡索酸酯/β-磷酸三钙(PPF/β-TCP)复合材料.在体外检测PPF/β-TCP材料对骨髓基质细胞(BMSC)的黏附、增殖、成骨能力的影响,对PPF/β-TCP生物材料的性能进行评价.方法二步反应法合成PPF单体,加入β-TCP后进行交联.骨髓基质细胞在PPF/β-TCP材料上培养2、4、6、8、10、12 h后胰蛋白酶消化,检测黏附细胞数.BMSC和PPF/β-TCP材料复合培养,用MTT法检测BMSC的增殖,绘制生长曲线,检测碱性磷酸酶的含量.结果BMSC在PPF/β-TCP材料上黏附,2～8 h细胞数增加,到10 h黏附数达高,约为68%.BMSC在PPF/β-TCP材料上生长,第4、5天为对数生长期,第7、8天进入平台期.BMSC种植在PPF/β-TCP后上表达ALP并不断增加.结论 PPF/β-TCP生物降解材料对BMSC的黏附、增殖、成骨功能无不良影响,是一种有前途的生物降解材料.
-
关节腔注射羧甲基壳聚糖预防膝骨关节炎软骨退变
目的观察羧甲基壳聚糖(CMCTS)关节腔注射对骨关节炎(OA)模型关节软骨退变及软骨基质金属蛋白酶(MMP-1,-3)及其组织抑制物(TIMP-1) mRNA表达的影响.方法 32只大耳白兔行单膝前交叉韧带切断术,随机分为A～D组,A、B组分别于术后立即关节腔注射高、低分子量2%CMCTS 0.3 ml,每2周1次;C组术后立即关节腔注射1%透明质酸钠(SH)0.3 ml,每周1次;D组术后不注射任何药物.术后6周处死动物,比较各组股骨内髁关节软骨的大体变化,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测软骨MMP-1,-3及TIMP-1 mRNA的表达水平.结果大体评分显示不注射组软骨退变明显重于CMCTS和SH注射组MMP-1,-3在CMCTS注射组软骨中的表达明显低于SH注射组和不注射组,不同分子量CMCTS注射组MMP-1,-3的表达没有显著差异,SH注射组软骨中MMP-1,-3的表达与不注射组比较差异无统计学意义(P＞0.05),TIMP-1在各组中的表达没差异有统计学意义(P＞0.05).结论 CMCTS能明显下调软骨MMP-1,-3的mRNA表达,明显减轻软骨退变的程度,软骨具有保护作用.
-
半乳糖受体介导的增殖细胞核抗原反义核酸对肝癌Bel-7402细胞增殖的靶向抑制作用
目的探讨半乳糖受体介导的增殖细胞核抗原(PCNA)反义核酸(ASODN)对肝癌Bel-7402细胞增殖的靶向抑制作用.方法选择来源于3个不同系统的肿瘤细胞:肝癌Bel-7402细胞、肺腺癌GLC-82细胞、慢性髓系白血病K562细胞,将半乳糖-聚乙烯亚胺(Gal-PEI)与PCNA反义核酸结合形成交联复合物Gal-PEI-ASODN,台盼兰拒染计数法观察不同浓度Gal-PEI-ASODN对这3种细胞增殖的影响;流式细胞仪检测3种细胞对羧基荧光素(FAM)标记的Gal-PEI-ASODN的摄取率及细胞内平均荧光强度;相差/荧光显微镜观察FAM标记的Gal-PEI-ASODN及ASODN进入3种不同细胞的情况.结果浓度从10 μmol/L到40 μmol/L的ASODN作用于Bel-7402细胞48 h后,可抑制其增殖,IC50为29.3 μmol/L.浓度从0.05 μmol/L到0.25 μmol/L的ASODN作用于Bel-7402细胞48 h后,均未显著抑制其增殖;相同浓度的Gal-PEI-ASODN作用于3种不同细胞48 h后,对GLC-82细胞、K562细胞的增殖未产生显著抑制作用,而Bel-7402细胞的增殖却受到明显抑制.对于Bel-7402细胞,Gal-PEI-ASODN的IC50为0.06 μmol/L,与单纯ASODN组相比,增敏倍数为488倍.FAM标记的Gal-PEI-ASODN或ASODN与不同细胞孵育0.5 h到2.0 h内,Gal-PEI-ASODN-Bel-7402细胞组所有时间点的细胞荧光摄取率、胞内平均荧光强度均显著高于ASODN-Bel-7402细胞组、Gal-PEI-ASODN-GLC-82细胞组和Gal-PEI-ASODN-K562细胞组.FAM标记的Gal-PEI-ASODN或ASODN与Bel-7402、GLC-82、K562细胞作用1 h后,Gal-PEI-ASODN-Bel-7402组的细胞荧光摄取率较高(反义核酸大量分布于细胞的胞浆内),其他各组细胞荧光摄取率较低.结论半乳糖受体介导的PCNA反义核酸能被肝癌Bel-7402细胞高效地摄取,抑制Bel-7402细胞的增殖,增强反义核酸的作用效果,具有靶向性.
-
肺癌磷酸酯酶蛋白与端粒酶逆转录酶表达的相关性研究
目的探讨10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶蛋白(PTEN)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)与肺癌发生发展中的关系.方法采用SP法检测80例肺癌、癌旁组织和正常肺组织标本中PTEN和hTERT的表达.结果 80例肺癌组织中PTEN表达的阳性率为40%,癌旁组织为95%,正常肺组织为100%.PTEN的水平与肺癌的分化程度、淋巴结转移和肿瘤大小相关.肺癌组织中hTERT表达的阳性率为90.0%,癌旁组织为18.75%,正常肺组织为0.hTERT表达的水平与肺癌的分化程度、淋巴结转移和肿瘤大小无明显的相关.肺癌PTEN的表达与hTERT呈明显的负相关.结论 PTEN和hTERT在肺癌中的表达密切相关,两者在肿瘤形成中可能存在着基因水平的内在联系.
-
吸入性损伤犬口腔黏膜移植于气管后的组织形态学观察
目的探讨吸入性损伤气管内黏膜移植的可行性.方法制备犬蒸汽吸入性损伤模型,共12只,随机分成实验组和对照组,每组6只;制取自体口腔黏膜片,移植于切除损伤黏膜后的气管内创面,对照组不作黏膜移植.术后2周、3周分别取标本,进行大体观察、光镜和透射电镜检查.结果实验组6例移植黏膜均成活,未见感染、坏死或瘢痕形成;对照组术后2例创面感染,4例肉芽或瘢痕形成.术后24 h血白细胞计数实验组和对照组分别为8.65±1.54、13.45±1.65(×109/L),差异有统计学意义(P<0.05),实验组创面愈合时间明显缩短.组织学显示,口腔黏膜移植于气管术后2周均可以成活并扩展,成活后仍表现为鳞状上皮,但结构有适应性变化.术后3周未观察到化生现象.结论局限于气管的吸入性损伤早期进行黏膜移植是可行的,有利于减少感染,促进创面愈合.
-
人类多形性胶质母细胞瘤中变异型IκBα基因抑制血管新生的研究
目的研究变异型IκBα(IκBαM)基因在人类多形性胶质母细胞瘤(GBM)中对血管新生的抑制作用.方法选用IκBαM基因转染的胶质瘤细胞株,通过制备血管新生及异位肿瘤生成两组动物模型,检测新生血管的数量及肿瘤中血管生长因子VEGF及IL-8的表达,分析IκBαM对肿瘤中血管新生的作用.结果 IκBαM基因转染的人类GBM细胞中,新生血管数量显著减少,诱导形成的异位胶质瘤中的VEGF及IL-8的表达量也显著降低.结论 IκBαM基因可有效抑制胶质瘤中的血管新生从而抑制肿瘤的生长,这可作为人类多形性胶质母细胞瘤抗血管治疗的理论基础.
-
黏附分子T-cadherin抑制C6胶质母细胞瘤增殖与p21表达相关
目的探讨T-cadherin分子表达抑制胶质母细胞瘤C6细胞增殖的分子机制.方法利用脂质体将pcDNA3和pcDNA3.T-cadherin表达质粒转染C6细胞,筛选出表达T-cadherin的C6克隆3、4和5以及转染空载体后不表达T-cadherin的C6克隆1和2,以Western Bolt检测各克隆的p21和p27的表达;同时,以pcDNA3和pcDNA3.T-cadherin表达质粒分别转染野生型(p21+/+)和p21缺失突变型(p21-/-)成纤维细胞,研究T-cadherin分子介导的细胞增殖抑制是否依赖细胞周期蛋白p21的表达.结果转染pcDNA3.T-cadherin质粒后表达T-cadherin分子的C6克隆3、4和5的p21表达水平明显升高,而p27的表达与C6细胞是否表达T-cadherin无关.另外,转染pcDNA3.T-cadherin质粒的野生型表达p21的成纤维细胞的增殖显著受抑,而转染pcDNA3.T-cadherin质粒对p21缺失突变的成纤维细胞的增殖不产生抑制作用.结论 T-cadherin分子抑制胶质母细胞瘤C6细胞的增殖与p21表达密切相关,且T-cadherin分子对成纤维细胞的增殖抑制作用依赖于p21的表达.
-
阿霉素预处理对大鼠供肝热缺血再灌注损伤的保护作用
目的探讨阿霉素预处理对无心跳大鼠供肝热缺血再灌注损伤的保护作用.方法根据阿霉素预处理与否及供肝获取前经历的供体心脏停搏时间30 min或45 min,将实验动物分为4组,即非预处理的30 min(N-30)组和45 min(N-45)组,阿霉素预处理的30 min(tN-30)组和45 min(tN-45)组行原位肝移植,观察存活状况,取材行光学显微镜及电子显微镜检查,移植术后1、3、7 d采集血样检测肝功能.结果 N-30组和N-45组的1周存活率分别为50.0%和16.7%,而tN-30组和tN-45组的1周存活率分别为83.3%和66.7%,预处理组移植肝脏的病理及肝功能明显好于非预处理组.结论阿霉素预处理能够减轻供肝的热缺血再灌注损伤,改善肝功能,减轻病理损害,提高大鼠肝移植的存活率.
-
苦参碱对肠癌HT-29细胞株增殖的抑制作用及其机制
目的观察苦参碱对肠癌HT-29细胞株增殖、凋亡的影响,探讨苦参抗肿瘤的作用机制.方法采用细胞培养、噻唑盐比色法(MTT)、流式细胞分析(FCM)、端粒酶重复片段扩增(TRAP)方法,分析测定苦参碱对肠癌HT-29细胞株增殖、凋亡及端粒酶活性的影响.结果用0、3、6、8、10 μg/L苦参碱培养HT-29 细胞24 h后,其增殖抑制率分别为:0、33.7%、59.0%、66.7%、69.0%.中效浓度(5 μg/L)苦参碱培养HT-29细胞0、24、48、72 h后:细胞凋亡百分比分别是0.85%、15.31%、17.99%、26.58%;端粒酶活性随苦参碱处理时间延长而明显降低.结论苦参碱通过抑制DNA合成、诱导细胞凋亡、抑制端粒酶活性等多方面、多途径抑制肠癌HT-29细胞株增殖,达到抗肿瘤的作用.
-
新型仿生活性人工骨诱导兔腰椎横突间脊柱融合研究
目的采用先进快速成形技术(RP)结合骨组织工程方法研制新型仿生活性人工骨,并探讨其在兔腰椎横突间脊柱融合的应用情况.方法首先采用RP制备薄块型聚乳酸-聚羟乙酸/磷酸三钙(PLGA/TCP)人工骨载体,进而高效复合牛骨形态发生蛋白(bBMP)以制备仿生活性人工骨,扫描电镜观察载体材料及人工骨超微结构.将健康新西兰兔28只(平均体重4.1 kg)随机均分为A、B两组(每组14只).A组:于兔腰4～5右、左侧横突间分别植入仿生活性人工骨(A1组)、自体髂骨(A2组);B组:于兔腰4～5右、左侧横突间分别植入复合自体新鲜红骨髓的PLGA/TCP载体材料(B1组)、单纯PLGA/TCP载体材料(B2组).于术后6周和12周,定期大体观察、手法检测、组织学[苏木素-伊红(HE)、三色法及四环素-钙黄绿素荧光检测]和影像学方法(X、CT)系统评价脊柱融合情况.结果 RP制备的PLGA/TCP载体具有规则的空间支架结构、相互贯通的孔隙及材料表面微孔特征,这些均有利于bBMP的高效复合.动物实验结果显示,A1组仿生活性人工骨植入具有强的诱骨活性及骨性融合能力,不仅成骨早、新骨形成量大,而且在新骨形成及改塑的同时载体材料逐渐降解,术后12周可形成较为典型的骨小梁及骨髓结构,骨代谢活性亦接近正常.A2组自体髂骨移植能达到良好骨性融合,但术后12周所形成的新骨结构尚须进一步塑形及完善.B1组、B2组术后12周仍遗有较多的载体材料有待降解,基本无成骨能力.术后12周,A1、A2、B1、B2 4组横突间融合率分别为100.0%、58.3%、18.2%和0%,A1组融合率高(P<0.01).结论先进RP制备的PLGA/TCP载体不仅具有良好的空间超微结构及孔隙特性,而且能高效复合bBMP以正确构建新型组织工程人工骨.该仿生活性人工骨诱导兔横突间脊柱融合获得成功,为生物制造脊柱外科所需的新型、高效人工骨移植材料奠定了重要基础.
-
基质溶解因子基因在人直肠癌中的表达及其临床意义
目的通过检测基质溶解因子(MMP-7)基因在直肠癌中的表达,探讨其在直肠癌进展中的作用.方法 86对直肠癌肿瘤组织与正常直肠黏膜组织标本自身配对分成肿瘤组与正常组,提取总RNA,采用实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(Quantitative-Real-Time RT-PCR)法检测MMP-7基因的表达.结果 MMP-7基因表达比值大于1的52例(62.7%,52/83),在肿瘤组的表达水平高于正常组(P＜0.01).MMP-7基因表达比值大于1的例数在Dukes C+D期与Dukes A+B期中分别为34例(72.3%,34/47)和18例(50.0%,18/36,P＜0.05).MMP-7基因表达与组织学分化程度(r=-0.635)和CEA水平(r=0.580)相关.结论 MMP-7基因在直肠癌中的表达上调.MMP-7在直肠癌的浸润与转移中具有重要作用.
-
中国人散发性大肠癌APC基因突变的研究
目的观察中国人大肠癌APC基因突变情况,并结合临床病理资料加以分析.方法应用常规酚、氯仿法提取48例散发性大肠癌组织及相应正常黏膜组织的DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增、单链构象多态性(SSCP)电泳和DNA直接测序,检测APC基因第15外显子MCR区段的突变情况.结果 APC基因突变率为37.5%(18/48),APC基因第15外显子MCR区段突变发生在codon1306～codon1442之间,突变类型有点突变(A→G、G→T、C→A、C→T、G→A)、移码突变(-A、-C、-G、-AG、+T、+A、+AACG).结论中国人大肠癌APC基因突变率为37.5%(18/48),以体细胞的错义突变为主,codon1309∽codon1356是大肠癌APC基因突变热区,而codon1356(CCT→TCT)是突变热点.散发性大肠癌APC基因突变与患者的年龄、性别、肿瘤的位置、浸润深度、组织类型、分化程度、远处转移、Dukes'分期和5年生存无关.
-
苯乙酸对结直肠癌HCT-8细胞增殖抑制及同源盒基因表达的影响
目的探讨苯乙酸(PA)对结直肠癌HCT-8细胞株细胞增殖及同源盒(HOX)基因表达的影响.方法应用噻唑蓝(MTT)比色法,以1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mmol/L的PA作用于HCT-8细胞,分别于24、48、72 h对细胞增殖进行检测.根据引物的不同,将已知的22种HOX基因分为3组(P1、P2、P3),应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测应用PA前后3组HOX基因mRNA的表达水平.HOX基因(组)表达水平用基因(组)与β肌动蛋白(β-actin)灰度比值表示.结果 1.0～5.0 mmol/L PA作用HCT-8细胞24～72 h,随着PA浓度的增加或作用时间的延长,细胞生长抑制率明显增加,PA作用24 h为5.1%～24.3%,48 h为16.7%～72.3%,72 h为30.2%～93.4%.RT-PCR法检测,结直肠癌HCT-8细胞中P1组HOX基因表达(0.770 1±0.088 3)明显强于P2组(0.122 1±0.078 2)、P3组(0.180 6±0.081 1,P<0.01).应用2.0 mmol/L PA作用72 h后,P1组HOX基因表达(0.578 1±0.083 6)显著减弱,P2、P3组HOX基因表达(0.394 1±0.081 9)、(0.560 1±0.073 6)显著增强,与用药前比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 PA可有效抑制结直肠癌HCT-8细胞的增殖;PA对HOX基因具有明显的调控作用,HOX基因有望成为结直肠癌基因治疗靶点.
-
内毒素预处理诱导大鼠供肝缺血再灌注交叉耐受机制的研究
目的探讨以内毒素耐受为基础诱导的移植肝脏对缺血再灌注损害(I/RI)交叉耐受的相关机制.方法雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、缺血再灌注组(I/R组)和内毒素耐受组(ET组).以未经任何处理的大鼠肝脏为正常对照;ET组供体第1天经尾静脉给予脂多糖0.1 mg/kg体重,第2、3、4、5天给予0.5 mg/kg体重;I/R组供体给予等体积0.5 ml无菌PBS液.第8天,切取供体,以未经任何处理的大鼠为受体,两袖套法建立大鼠原位肝移植模型.按门静脉血流恢复后第0、60及180 min分为3个亚组.逆转录-聚合酶链式反应及蛋白免疫印记法测定肝组织的白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)mRNA和蛋白表达水平;酶连免疫吸附法检测肝组织核因子-κB(NF-κB)活性及血清TNF-α含量.结果再灌注后0、60及180 min,I/R组与ET组的IRAK-4蛋白与mRNA表达水平,NF-κB活性以及TNF-α含量均高于正常对照组(P<0.01);再灌注后0 min,I/R组与ET组的NF-κB活性以及TNF-α含量差异无统计学意义(P>0.05),但IRAK-4蛋白与mRNA表达水平高于ET组(P<0.01);再灌注60 min及180 min,I/R组的上述各指标均明显高于后者(P<0.01).结论抑制IRAK-4表达是以内毒素耐受为基础诱导的移植肝脏对I/RI交叉耐受的相关原因,但能否以IRAK-4为减轻I/RI基因治疗的理想靶点尚有待进一步的研究.
-
人源抗肝癌单链抗体的构建及鉴定
目的构建人源抗肝癌单链抗体.方法从肝癌患者外周血中分离淋巴细胞,利用噬菌体展示技术,构建人源抗肝癌噬菌体抗体库并筛选人源抗肝癌单链抗体,用ELISA方法检验该抗体与抗原结合活性.结果成功构建了库容为4.0×106的人源抗肝癌单链抗体库,初步筛选到与肝癌细胞特异性结合的单链抗体.结论成功构建人源抗肝癌单链抗体,为进一步临床应用奠定基础.
-
原发性肝癌及其癌旁组织、Bel-7402人肝癌细胞株生长激素受体的定量研究
目的定量测定原发性肝癌(HCC)及其癌旁组织、国内常用Bel-7402人肝癌细胞株生长激素受体(GHR)的表达水平,探讨重组人生长激素(rhGH)在原发性肝癌患者中的适用性.方法采用放射配体分析法对45例原发性肝癌组织及其癌旁组织、8例正常肝组织、Bel-7402人肝癌细胞株进行GHR的检测,肝组织及肝癌细胞的GHR受体大结合量(RT)采用Scatchard法计算;并分析肝癌组织GHR的表达量与肝癌患者各临床病理参数的关系.结果在38例HCC组织与45例癌旁组织,以及7402肝癌细胞株均检测到GHR的存在,GHR受体结合容量(RT)在有GHR表达的肝癌组织为(19.673 00±3.876 6) fmol/mg蛋白,癌旁组织GHR的RT值为(33.628 3±3.621 8) fmol/mg蛋白,GHR在7402肝癌细胞位点数量(Site,103/cell)为7.348±0.891;同正常肝组织相比,肝癌与癌旁组织GHR的表达量均降低(P<0.05),肝癌组织GHR的表达量又低于癌旁组织;肝癌组织GHR的表达量与肿瘤大小、患者临床分期的延迟呈负相关,而与肿瘤分化程度、患者年龄、是否合并肝硬化无关;有7例肝癌组织未检测到GHR存在.结论大多数原发性肝癌组织及全部癌旁组织均表达一定水平的GHR,在它们受体功能未明的情况下,rhGH在肝癌患者中的应用可能需慎重.
-
胶原涂层聚羟基丁酸羟基戊酸酯体外构建组织工程半月板
目的观察Ⅰ型胶原涂层的聚羟基丁酸羟基戊酸酯(PHBV)对半月板纤维软骨细胞的吸附作用及对细胞生物学性状的影响,评价其作为半月板组织工程支架的可行性及价值.方法构建Ⅰ型胶原涂层的PHBV半月板假体,将体外培养的兔半月板纤维软骨细胞吸附于该支架上三维立体培养,通过相差倒置显微镜、组织学、扫描电镜及免疫组织化学检测支架对半月板纤维软骨细胞的表型、增殖及功能的影响.结果 PHBV能制成具有一定力学强度的半月板假体,通过Ⅰ型胶原涂层后增强了其细胞吸附能力,半月板纤维软骨细胞在支架孔壁贴附良好,维持表型稳定,分泌胞外基质.结论Ⅰ型胶原涂层的PHBV支架细胞相容性良好,能按半月板的大小、形状制成有一定力学强度的半月板假体,是比较理想的半月板组织工程支架材料.
-
糖尿病大鼠逼尿肌线粒体琥珀酸脱氢酶及其超微结构的改变
目的探讨能量代谢与糖尿病膀胱逼尿肌线粒体损伤的关系.方法建立2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,在高糖高脂饮食喂养第4、12、24周取大鼠膀胱逼尿肌制备匀浆测定琥珀酸脱氢酶活性,并电镜观测逼尿肌线粒体的形态改变.结果 T2DM组大鼠的琥珀酸脱氢酶活性在其发病早期就出现降低;随着T2DM大鼠病程的延长,逼尿肌线粒体超微结构的损伤明显加重.结论在糖尿病膀胱的发病过程中线粒体破坏所导致的逼尿肌能量代谢障碍可能是引起逼尿肌收缩功能障碍的始动因素.
-
乙醇预处理与HSP70的诱导及对肝脏缺血再灌流损伤的影响
目的探讨乙醇预处理对肝脏缺血再灌流损伤的影响以及与热休克蛋白70诱导的关系.方法雄性成年Wistar大鼠232只,胃饲乙醇浓度40%,剂量为5 g/kg体重,随机分为5组:正常对照组(N组)、胃饲乙醇组(E组)、缺血组(IR组)、生理盐水预处理组(NPC组)、胃饲乙醇预处理组(EPC组).动物手术采用门静脉转流下的肝脏缺血模式,肝门阻断时限为90 min,于再灌流0、1、3、6、12、24、72 h活杀留取血液及肝脏标本.结果 EPC组3、6 h血清ALT(1 230.88±132.50、888.88±126.67) IU/L、AST(1 866.38±61.77)、(1 433.88±42.74) IU/L均明显低于IR组及NPC组,肝脏病理改变较轻,而肝组织HSP70含量高于后者.结论乙醇预处理可以减轻大鼠肝脏90 min的缺血再灌流损伤,其肝脏保护作用与肝组织HSP70升高相一致,HSP70可能是其发挥肝脏保护的物质基础之一.
-
肝移植术中应用S-腺苷-L-蛋氨酸对供肝热缺血损伤的影响
目的探讨术中S-腺苷-L-蛋氨酸(SAMe)加入UW液和血浆冲洗液对热缺血损伤供肝及其恢复的影响.方法建立10 min热缺血大鼠肝移植模型,分为A组:UW液灌注+乳酸钠林格氏液冲洗、B组:UW液灌注+血浆冲洗、C组:SAMe加入UW液灌注+血浆冲洗和D组:UW液灌注+SAMe加入血浆冲洗4组,观察肝组织组织病理学变化和电子显微镜下超微结构变化,并检测血清AST和透明质酸.结果 C组和D组术后24 h血清AST均低于B组(P<0.05).A组术后3 h和24 h血清HA高于B组(P<0.05),B组复流后3 h及24 h血清HA均高于C组和D组(P<0.05).组织病理学表现B组复流后3 h和24 h肝细胞损伤和微循环紊乱较C组和D组明显;超微结构表现,A组复流后3 h线粒体肿胀,肝窦内皮细胞肿胀,细胞核不规则,可见内皮细胞凋亡,大部分区域肝窦状隙明显狭窄,内皮层结构模糊,红细胞淤积,受压变形,白细胞附壁,可见内皮层完整性破坏;复流后24 h,可见线粒体嵴断裂,核融解.B组内皮细胞损伤较A组轻,C组和D组超微结构表现微循环紊乱和肝细胞损伤表现较B组轻.结论供肝切取术中UW液中加入SAMe灌注保存,血浆冲洗液中加入SAMe可改善热缺血供肝微循环,减轻缺血再灌注损伤,并减轻肝细胞热缺血损伤,有利于10 min热缺血供肝功能的恢复.
-
血管内皮生长因子在骨折愈合中的自分泌作用
目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在骨折愈合中的自分泌作用.方法利用鼠股骨闭合性骨折模型,应用组织学和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,观察骨折不同的愈合修复阶段中骨痂的组织学变化,检测各种相应骨痂组织中VEGF及其受体VEGFR1(Flt-1)和VEGFR2(KDR/Flk-1)的mRNA的表达.结果骨折愈合是一个高度有序的组织学变化过程,骨痂内的膜内化骨,软骨形成,软骨内化骨等过程可同时或连续出现.VEGF(251 bp)及受体Flt-1(272 bp)和KDR/Flk-1(252 bp)在骨折后第7、14天的软骨性骨痂(软骨组织)和骨性骨痂(小梁骨-膜内化骨和软骨内化骨)中均同时清晰表达.表达信号均匀,强度较大.结论骨折愈合过程中的软骨性骨痂和骨性骨痂中的软骨-骨细胞系统共表达VEGF及其两种受体,提示VEGF自分泌作用参与骨折愈合过程.
-
E-钙黏附素基因甲基化与结直肠癌临床病理特征的关系
目的探讨E-钙黏附素(E-cadherin)基因甲基化与结直肠癌临床病理特征的关系.方法采用甲基化特异性巢式PCR技术(nMSP法)研究100例结直肠癌组织及100例癌旁组织E-cadherin基因甲基化与临床病理特征的关系.结果 100例结直肠癌组织中有33例呈E-cad基因甲基化阳性(阳性率33.0%),相应的癌旁组织无甲基化.Dukes分期中C、D期组织E-cad基因甲基化阳性率(72.7%)明显高于A、B期(27.3%)(P<0.05);伴肝转移的结直肠癌组织甲基化阳性率(81.8%)明显高于无肝转移者(18.2%)(P<0.01);在肿瘤细胞分化程度、大体类型、年龄、性别和肿瘤部位等其他病理特征,E-cad基因甲基化阳性组与阴性组差异无统计学意义(P>0.05).结论结直肠癌组织E-cad基因甲基化与淋巴结转移、肝转移和Dukes分期明显相关,E-cad基因甲基化可能是结直肠癌侵袭性增强的原因之一.
-
腺病毒介导反义基质金属蛋白酶-2抑制肝癌生长和血管生成的研究
目的探讨携带反义二型基质金属蛋白酶(MMP2)基因的重组腺病毒(Ad-MMP2AS)对人肝癌动物模型生长和血管生成的抑制作用.方法用我们构建的Ad-MMP2AS感染人肝癌细胞株(Bel-7402).Boyden Chamber检测Ad-MMP2AS对Bel-7402细胞降解人工基底膜(Matrigel)的抑制作用;Western blotting和明胶酶谱分析测定Ad-MMP2AS对Bel-7402细胞分泌MMP2的影响;用感染Ad-MMP2AS的Bel-7402细胞接种于裸鼠皮下观察其成瘤能力;Ad-MMP2AS瘤内注射,观察它对肝癌生长的抑制作用;肿瘤组织切片、HE染色观察瘤细胞生长情况;免疫组织化学分析肿瘤组织血管密度.结果 Ad-MMP2AS感染的Bel-7402细胞穿过Matrigel的Bel-7402细胞数下降52%、成瘤量下降4.3倍;瘤内注射Ad-MMP2AS使瘤体生长减少63%;肿瘤组织血管密度减少2.6倍.结论 Ad-MMP2AS能抑制肝癌的生长和肿瘤血管的生成,对肝癌有治疗潜力.
-
雌激素受体α上调前列腺癌细胞株LNCaP中L-Plastin启动子转录活性研究
目的鉴定雌激素受体在L-Plastin启动子上的结合位点,进一步阐明雌激素受体在激素依赖型前列腺癌中的作用机制.方法利用TF SEARCH软件分析L-Plastin启动子的序列,寻找可能调控L-Plastin表达的雌激素受体结合位点,利用PCR定点突变法构建删除该转录因子结合位点的重组子,检测切除该片段序列后荧光素酶活性,并用凝胶滞后实验和超滞后实验证实雌激素受体是否结合于该位点,研究雌激素受体在激素依赖型前列腺癌中调控L-Plastin表达的作用.结果 TF SEARCH软件分析表明,在L-Plastin启动子上距转录起始点-85～-70 bp处,含有雌激素受体结合位点ATTTCACTGTGACCT,删除该结合位点后L-Plastin启动子荧光素酶活性明显下降,凝胶滞后实验和超滞后实验表明雌激素受体α是结合于该位点的转录因子.结论雌激素受体α具有促进L-plastin在激素依赖型前列腺癌中表达的作用.
-
神经干细胞经枕大池移植后在损伤脑组织中的表达及分化
目的本实验将神经干细胞经枕大池移植到创伤性脑损伤模型大鼠蛛网膜下腔中,观察其向损伤脑组织迁移、存活及分化能力,探讨神经干细胞更安全、便捷及经济的移植途径.方法体外培养的神经干细胞(NSCs)取自胎鼠皮层,并用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记.采用Feeney's自由落体脑创伤模型制成大鼠脑损伤模型,伤后24 h将神经干细胞经枕大池移植到蛛网膜下腔,分别于移植后第1、2周处死取脑,行免疫组织化学染色检测BrdU、微管相关蛋白2(MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP).结果免疫组织化学染色表明,BrdU(+)神经干细胞迁移到脑内损伤灶,并分化成MAP2(+)神经元或GFAP(+)胶质细胞.结论神经干细胞具有从蛛网膜下腔迁移入脑内损伤组织、分化为神经元及神经胶质细胞.
-
人肠道产甲酸草酸杆菌的分离培养
目的探讨产甲酸草酸杆菌分离培养及鉴定方法.方法应用选择性培养基,在37 ℃厌氧环境下分离培养人肠道产甲酸草酸杆菌.通过观察菌落形态、细菌涂片染色镜检、离子色谱仪及核酸序列分析,对细菌进行鉴定.结果产甲酸草酸杆菌菌落形态为白色点状或梭状,大小约(0.1～0.5) mm×(1.0～3.0) mm;菌落周边出现直径约3.5～4.5 mm的清晰透明圈.该细菌为革兰氏阴性杆菌,大小约(1.0～1.6) μm×(3.0～6.5) μm.液体培养基中草酸浓度随细菌浓度增加而逐渐下降.与文献报道核酸序列比较,该细菌分解草酸的功能基因frc、oxc的核酸同源性分别为95.8%及93.6%.结论产甲酸草酸杆菌可通过选择性培养基、在厌氧环境下从人粪便中分离出来.
-
胸苷磷酸化酶和二氢嘧啶脱氢酶在原发性肝癌中的表达
目的探讨胸苷磷酸化酶(TP)和二氢嘧啶脱氢酶(DPD)在肝癌中的表达情况.方法选取肝癌手术切除标本20例,取肝癌和癌旁肝组织进行TP和DPD的免疫组织化学染色,运用图像分析系统对结果进行分析.结果 TP在肝癌组织中表达的平均阳性单位值为26.696,在癌旁肝组织中表达的平均阳性单位值为30.996,差异有统计学意义(P<0.05).DPD在肝癌组织中的表达的平均阳性单位值为11.408,在癌旁肝组织中表达的平均阳性单位值为13.843,差异有统计学意义(P<0.05).肝癌组织中TP与DPD表达的平均阳性单位值的比值为4.447,在癌旁肝组织中TP与DPD表达的平均阳性单位值的比值为4.152.TP与DPD的比值(TP/DPD)在肝癌组织中较癌旁高,差异无统计学意义(P>0.05).结论肝癌和癌旁肝组织中均有较高水平的TP酶和DPD酶表达,TP与DPD的比值在肝癌组织中较癌旁高.
-
甲状腺瘤组织中糖皮质激素受体-αmRNA的表达
目的检测糖皮质激素受体-α(GR-α)mRNA在甲状腺瘤和甲状腺正常组织中的定量表达,并探讨其在甲状腺瘤发生发展中的意义.方法我院住院手术治疗的22例甲状腺瘤患者.提取甲状腺瘤和甲状腺正常组RNA,应用实时荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)检测GR-α mRNA定量表达.结果 GR-α在甲状腺正常组织中(15.2±5.0)×105拷贝/μg比甲状腺瘤甲状组织中(2.4±4.9)×105拷贝/μg表达高,两组之间有明显差异(P＜0.05).结论正常甲状腺组织中存在糖皮质激素受体-α mRNA表达,生理量的糖皮质激素受体-α的基因效应减弱,可能是促进甲状腺瘤的发生发展的一个重要方面.
-
大鼠下尿路、腰骶髓脊髓排尿中枢逆行神经追踪研究
目的应用荧光金(FG)、快蓝(FB)、辣根过氧化物酶(HRP)逆行神经追踪技术研究盆神经节(MPG)、尿道外括约肌(EUS)与骶髓排尿中枢之间的神经通路.方法选用正常雄性SD大鼠,盆神经节、尿道外括约肌、尿道黏膜下、膀胱逼尿肌内注射神经追踪剂组织化学反应及荧光显微镜.结果标记神经元在脊髓L6部至S1侧角(以L6多见)可见FB阳性神经元,L6脊髓前角的腹外侧部,即Onuf's核,同时中间外侧柱(IML)、中央管周围出现FG阳性神经元.盆神经节在荧光显微镜下可发现HRP暗黑色阳性神经细胞和呈蓝色的荧光阳性神经细胞;脊髓L6部至S1灰质后联合核、中央管周围、IML区同时出现FG、FB细胞,但未发现FG、FB的双标细胞.结论大鼠脊髓内排尿中枢主要位于脊髓L6-S1节段,主要包括支配盆神经节的PGN和支配EUS的前角神经元.灰质后联合核、中央管周围、IML区内的亦可见少许神经元.盆神经节支配膀胱逼尿肌,是排尿反射的后一级神经元.
-
缺血预处理对兔肺缺血再灌注性损伤的蛋白质组学研究
目的观察缺血预处理对兔肺缺血再灌注性损伤的蛋白质变化,探讨其可能的肺保护机制.方法 12只家兔,随机分为预处理组和对照组,每组6只.对照组经历单纯的缺血再灌注损伤,预处理组在缺血再灌注前予以缺血预处理.以二维电泳分离肺组织中的全部蛋白质,应用PDQuest软件寻找差异表达的蛋白质点并以MALDI-TOF质谱仪和Mascot软件对其鉴定.结果研究发现了35个明显差异表达的蛋白质,包括磷酸肌醇3激酶Δ催化亚单位在内的17个蛋白质达到了鉴定.结论通过磷酸肌醇3激酶信号传导通路抑制炎性反应可能是缺血预处理的保护机制.
-
成熟与未成熟心肌雌激素受体α和β的表达及其意义
目的研究大鼠成熟与未成熟心肌雌激素受体(ER)α和β的表达及其意义.方法采用半定量逆转录聚合酶链反应和免疫荧光组织化学方法,测定新生和成年大鼠心脏各部的ERα和ERβ mRNA及其蛋白质的表达.结果半定量RT-PCR分析显示ERα mRNA在未成熟心肌表达较低,但在成熟心肌ERα mRNA的表达水平显著提高.相反,未成熟心肌ERβ mRNA表达水平较高,而成熟心肌ERβ mRNA表达水平明显降低.免疫荧光组织化学图像分析证实这种差别也体现在雌激素受体α和β的蛋白质表达上.结论在成熟和未成熟心肌雌激素受本α和β并存,但存在明显的表达差异;ERα是雌激素调控成熟心肌的优势受体,在稳定成熟心肌的基因表达型发挥重要作用;而ERβ在未成熟心肌细胞的生长发育过程中起主导作用.
-
生物陶瓷人工椎体系统重建椎体缺损的研究
目的检测由脊柱前路解剖型固定钢板,生物陶瓷与骨水泥等组成的生物陶瓷人工椎体系统临床应用的可行性.方法选健康2～4岁山羊14只,平均体重28.6 kg,经氯胺酮诱导,气管插管,安氟醚吸入麻醉后,取右下腹腹膜外斜切口,前路切除L4椎体后,应用钛合金解剖型固定钢板、骨水泥、磁性生物陶瓷组成的"生物陶瓷人工椎体"植入体内.结果一般情况:所有试验动物均成活,术后8 h即可恢复站立,行走(不使用任何外固定支架);24 h后恢复正常行走,进食.术后6个月,腹部彩色B超检查未见血拴形成,腹部大血管血供正常.定期X线检查,肉眼大体标本观察,光境观察,扫描电镜(SEM)观察,材料与骨实现"生物愈合".结论 "生物陶瓷人工椎体系统"是一个制约性固定结构,类似于"钢筋骨水泥",稳定性极强,能够保证生物材料与椎骨的"生物愈合",形成"生物固定",减少了长期固定"松动"发生的可能,整个系统操作简单,使用安全,具有极大的临床使用价值.
-
4′,5,7-三羟基黄酮,芹菜配基对人乳腺癌细胞生长和侵袭潜力的影响
目的探讨透明质酸酶(Hyaluronidase,Hyase)抑制剂4′,5,7-三羟基黄酮,芹菜配基(Apigenin)对人乳腺癌细胞生长、增殖及侵袭潜力的影响.方法通过体外侵袭模型观察Apigenin对人乳腺癌细胞穿透Matrigel(人工基底膜)能力的影响;MTT法和流式细胞仪检测Apigenin对人乳腺癌细胞株生长和增殖的影响.结果 8株人乳腺癌细胞的侵袭潜力存在明显差异,加用Apigenin后其侵袭潜力均明显降低(P<0.05),并与Apigenin存在量效关系;Apigenin对MDA-MB-435S和T47D细胞株的生长抑制作用均呈浓度依赖性;流式细胞仪显示Apigenin阻滞人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和ZR-75-30生长于G2/M期(P<0.05).结论 Apigenin可抑制人乳腺癌细胞的增殖和Hyase的表达,并可降低人乳腺癌细胞株的侵袭潜能.
-
肝后型门静脉高压症患者血浆前列环素含量及其影响因素分析
目的观察布-加综合征(B-CS)患者血浆中前列环素(PGI2)含量,探讨PGI2在肝后型门静脉高压症患者发病中的作用.方法采用放免法检测19例B-CS患者分流减压手术前后、21例B-CS患者口服肠道抗菌药物前后静脉血PGI2含量,光电比色法检测患者口服肠道抗菌药物前后静脉血内毒素含量.结果对照组患者血浆PGI2含量为(9.46±3.74) ng/L.分流减压手术前后,B-CS患者门静脉压力由(37.2±4.5) cm H2O下降至(25.8±4.2) cm H2O(P<0.01);血浆中PGI2含量由(17.71±6.93) ng/L下降至(12.43±3.54) ng/L(P<0.01),且其含量下降与门静脉压力下降呈正相关(r=0.54,P<0.05).口服肠道抗菌药物前、后,B-CS患者血浆内毒素含量由(0.328±0.188) Eu/ml下降至(0.226±0.147) Eu/ml(P<0.01);而血浆PGI2含量分别为(14.08±5.54) ng/L和(14.21±4.98) ng/L,差异无统计学意义(P>0.05),但高于对照组(P<0.01).结论布-加综合征患者血浆PGI2含量增高,且参与了门静脉的高压状态的维持.PGI2含量增高之原因部分地由于机体合成PGI2增多所致.增高的门静脉压力是刺激机体合成PGI2增多的原因之一,内毒素水平可能与机体合成PGI2增多无关.
-
聚β-羟基丁酸脂用于前脂肪细胞移植的大体及组织学观察
目的探讨聚β-羟基丁酸脂(PHB)支架材料用于前脂肪细胞移植的可行性.方法将SD(n=20)大鼠的前脂肪细胞体外纯化后转种于PHB支架上增殖,再将细胞支架移植于同一大鼠背部皮下组织内,术后3周取出部分(n=4)移植物行组织学观察,术后8周时(n=8)取出移植物,行大体及组织学观察.对照组(n=8)以无细胞的支架材料种植于对侧皮下.结果前脂肪细胞体外培养时在PHB支架材料上生长良好,植入体内后支架内细胞增多,体积、重量增加,组织学证实移植细胞成活,并有脂滴形成.结论前脂肪细胞可在PHB支架上黏附,增殖并分化为成熟的脂肪细胞.PHB材料作为前脂肪细胞的移植载体是可行的,值得进一步研究.
-
3-硝基丙酸预处理对缺血/再灌注胰腺的作用
缺血/再灌注(I/P)存在于临床许多疾病的发生发展过程中,影响组织的功能恢复.化学预处理是通过预先对组织进行氧化磷酸化的化学抑制,诱导其对随后发生的剧烈能量代谢破坏(如缺血、缺氧等)的耐受性,从而减轻I/P造成的损伤.本实验通过对I/P的大鼠胰腺进行3-硝基丙酸(3-NP)的预处理,观察I/P胰腺的细胞因子表达、MDA含量和病理学变化,探讨3-NP预处理对胰腺I/P的影响及其相关作用机制.
-
过氧化物酶体增殖物激活受体γ在肝门部胆管癌中的表达及其配体对胆管癌细胞生长的抑制作用
我们利用QBC939细胞系进行体外实验,探讨胆管癌细胞中是否存在PPAR-γ的表达以及其配体对胆管癌细胞的生长是否具有抑制作用,以寻找一新的胆管癌治疗点.
-
顺序特异性引物法检测人胰腺癌细胞株PCNA-1的K-ras基因点突变的方式
胰腺癌具有发病隐匿,症状不典型,病情发展快,生物恶性程度高,预后差等特点.胰腺癌的切除率一般只在20%左右,五年生存率低于5%[1].本研究旨在采用顺序特异性引物法(SSP)对胰腺癌细胞株的K-ras基因点突变方式.
-
机械扩张加肾上腺素冲击法复制Standford B型主动脉夹层模型
我们尝试设计一种新的方法来建立符合病理生理的Standford B型主动脉夹层模型,现报道如下:一、材料与方法1.材料:上海地区杂种犬8条,雌雄不限,质量16.0～18.0 kg体重,8×20 mm非适应性球囊(德国Optimed公司),6-0 Prolene 缝线(美国强生公司),肾上腺素(上海禾丰制药有限公司);电动呼吸器(SC-3,上海医疗仪器制造四厂).
-
抗人VEGF发卡状核酶对肝癌细胞SMMC-7721生物学特性的影响
我们设计了针对VEGF的发卡状核酶,观察其对肝癌细胞生物学特性的影响.一、材料和方法1.主要试剂和细胞系:Lipofectamine、G418购自Gibco公司;UNIQ柱式总RNA抽提试剂盒购自上海Sangon生物技术有限公司;人VEGF ELISA检测试剂盒购自晶美公司;人肝癌细胞系SMMC-7721由本室保存;引物由上海Sangon生物技术有限公司合成.
-
分化型甲状腺癌中脆性组氨酸三联体基因表达及其意义
脆性组氨酸三联体(FHIT)基因定位于3p14.2,跨越染色体脆性部位FRA3B及家族性肾透明细胞癌t(3;8) 3号染色体易断裂位点[1-4].我们采用免疫组织化学SP法检测FHIT蛋白在分化型甲状腺癌(DTC)中的表达并对其与细胞增殖及淋巴结转移的关系进行了研究.
-
环氧合酶-2和VEGF在肝细胞癌中的表达及NS-398对其的抑制作用
肝细胞癌(HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一,易发生肝内外转移,预后较差.研究表明,环氧合酶-2(COX-2)与肿瘤血管生成有关.我们采用免疫组织化学法检测COX-2与VEGF在HCC中的表达,并观察COX-2特异性抑制剂NS-398对肝癌细胞株VEGF表达的影响,探讨COX-2在HCC血管生成中的作用.
-
含钙镁生物敷料在氢氟酸烧伤创面的应用
氢氟酸烧伤可造成严重的皮肤损害,重症患者可危及生命.1996至2004年,我们在动物实验的基础上对46例氢氟酸烧伤局部治疗进行对比研究[1].
-
胃癌中微卫星不稳定性与错配修复酶的研究
胃癌是消化道常见的恶性肿瘤,近年研究发现错配修复酶(MMR)表达缺失与肿瘤发生关系密切.MRR家族有9种错配修复酶,尤以人类mut-s同系物1(hMLH1)功能重要,其在很多肿瘤中出现表达缺失或减少.微卫星(Mcrosatellite,MS)是由1～6个核苷酸串联排列的简单DNA重复序列,当MRR表达缺失或减少时,MS的复制错误不能被修复,从而产生微卫星不稳定(MSI).MSI可使整个基因组稳定性下降,随机突变率增高,导致一系列肿瘤相关靶基因改变,引起肿瘤的发生.我们应用Western blotting和PCR对胃癌及癌旁正常组织中两者表达及其与临床病理特征的关系进行了研究.
-
犬肝硬化模型形成中肝功能性血流量的变化
肝脏储备功能的评估通常运用Child-Pugh分级进行,但是该方法难以精确及时地反映肝脏储备功能变化.近年有报道运用D-山梨醇肝清除率法测量肝功能性血流量(FHF)用来评估肝脏储备功能是可行的[1,2].本动物实验通过制备犬肝硬化模型,动态观察模型形成过程中肝功能性血流量的变化,旨在为肝功能性血流量作为评估肝脏储备功能指标的可行性提供实验依据.
-
在体跟腱生物力学测试的实验研究
肌腱的损伤和紊乱造成运动系统的功能障碍是很常见的[1].正确处理这些紊乱需要懂得肌腱正常和损伤状态下的生物力学性质与行为[2].肌腱的生物力学测试可归纳为离体和在体测试,由于离体测试失去神经、肌肉及体内生物环境的支配,与真实的在体测试有一定的差异.我们应用改良环扣式传感器对在体肌腱的生物力学进行测试,旨在为临床肌张力的监测,肌腱损伤和紊乱的评估提供实验依据.
-
自体骨软骨移植修复软骨缺损的研究
把非负重区正常软骨移植到负重区病损软骨部位,让其在受区发挥作用、改善关节功能、减轻患者痛苦是目前研究的热点.拟在关节镜监视下,取非负重区软骨自体移植替代负重区病变软骨,探讨自体骨软骨移植修复软骨缺损的可行性、效果及并发症[1].
-
胆固醇结石与缩胆囊素受体及其基因的关系
缩胆囊素(CCK)与CCK受体结合发挥胆囊收缩功能.CCK受体是细胞膜上的一类糖蛋白,属G蛋白偶联受体超家族.CCK-1受体(CCK-1R)是CCK受体两个亚型之一[1],其基因定位于第4号染色体,由5个外显子和4个内含子组成.人类胆囊平滑肌细胞只有CCK-1R,它有三个结构域:N-端胞外域;跨膜区域和C-端胞浆域.已发现第四跨膜区结构域是决定与配体亲合力大小的关键[2].CCK的释放存在负反馈机制,肠腔内蛋白酶抑制CCK的释放.近年来发现的肠内CCK释放因子在小肠自发地分泌入肠腔,激活分泌CCK细胞膜Ca2+通道使Ca2+内流从而刺激CCK释放,这种作用呈浓度依赖性,能被硝苯地平阻断[3].CCK的生理功能是以神经途径为主导的,而给予大剂量的CCK则直接与其受体结合激发胆囊收缩过程.CCK-1R的细胞信号转导机制通过G蛋白途径实现,有Ca2+-CaM途径和DAG-PKC途径[4].两个途径并不同时发挥作用,主要决定因素在于胞浆中Ca2+浓度.CCK-1R的功能能够负反馈调节血浆CCK水平.
-
胆管癌基因研究现状及展望
国内、外胆道肿瘤发病率近年来均有显著上升趋势.随着分子生物学技术的发展,有资料表明胆管癌的发生发展伴随有一些基因和遗传学改变,并且发现与胆管癌相关的肿瘤基因不断增多,常见的癌基因有K-ras、c-myc、c-erbb-2、c-met、cox-2和fhit;抑癌基因有bcl-2、p53、p16、Rb、DPC4、ras及其配体基因等[1-3].现将主要基因研究现状作一简要概述.
-
我国胆道外科实验研究的现状及方向
胆道外科在过去的半个世纪里取得了令人瞩目的发展.步入21世纪后,伴随相关学科领域研究成果的渗透应用,胆道外科的前景会更加日新月异.面对结石和肿瘤这两种主要疾病,和围绕其诊断与治疗中出现的共性问题,以及新的诊疗技术开展应用中带来的新课题,应用已有技术和手段,进行系统的基础及临床研究,提高诊断和治疗水平,仍将是我国胆道外科实验研究发展的主方向.
-
肿瘤分子靶向治疗进展
随着对肿瘤细胞生长的分子调控机制了解的不断深入,以肿瘤细胞过度表达的某些标志性分子为靶点,选择针对性的阻断剂,能有效地干预受该标志性分子调控、并与肿瘤发生密切相关的信号传导通路,从而达到抑制肿瘤生长、进展及转移的效果,成为治疗肿瘤的一个新途径--分子靶向治疗.由于该治疗手段专门针对在肿瘤发生中起关键作用的靶分子及其调控的信号传导通路,因此,不但增强了抗癌治疗的特异性和选择性,而且避免了一般化疗药物的无选择性毒付作用和耐药性.
-
胆囊结石与胆囊黏膜及胆汁幽门螺杆菌、磷脂酶A2的关系
目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染与胆囊结石形成之间的关系.方法 PCR法和快速尿素酶法分别检测胆囊结石患者胆囊黏膜及胆汁Hp DNA和尿素酶,酸滴定法测定胆囊黏膜和胆汁磷脂酶A2(PLA2)活性,并做黏膜和胆汁普通、厌氧和Hp培养.结果黏膜Hp DNA阳性检出率45.24%,胆汁阳性检出率35.71%,其中胆汁Hp DNA检测结果阳性者,其黏膜检测结果均阳性.黏膜Hp DNA阳性组胆汁中PLA2的活性显著高于阴性组胆汁,分别为(480.92±164.21)U/L,(225.01±79.01)U/L;黏膜之间的PLA2活性差异无统计学意义(P＞0.05).黏膜及胆汁尿素酶检测均为阴性,普通、厌氧和Hp培养阴性.结论胆囊结石患者存在Hp感染因素,并可能通过PLA2促进胆囊结石形成.
-
幽门螺杆菌感染的成石胆汁促进人胆管癌细胞增殖的研究
目的探讨幽门螺杆菌感染的成石胆汁对人胆管癌细胞QBC939生长的影响,阐明幽门螺杆菌感染与胆管癌发生、发展的内在关系.方法应用噻唑蓝比色法检测20份幽门螺杆菌阳性胆管结石患者胆汁、20份幽门螺杆菌阴性胆管结石患者胆汁以及20份正常胆汁对QBC939细胞增殖的影响,运用流式细胞仪测定细胞周期与凋亡.结果与幽门螺杆菌阴性胆管结石患者胆汁和正常胆汁比较,幽门螺杆菌感染的成石胆汁明显促进QBC939细胞增殖(P<0.05),用幽门螺杆菌感染的成石胆汁处理48h的QBC939细胞增殖指数显著上升(P<0.01),S期细胞比例明显增高(P<0.05),G0/G1期细胞比例明显降低(P<0.05).结论幽门螺杆菌感染的成石胆汁具有强大的潜在促增殖活性,胆道幽门螺杆菌感染与胆管癌的发生、发展关系密切.
-
Fas和FasL在胆囊癌免疫逃逸中的作用
目的探讨Fas/FasL在胆囊癌免疫逃逸机制中的作用.方法(1)应用SP免疫组织化学法研究26例胆囊癌组织、18例胆囊腺瘤组织、3例胆囊上皮不典型增生组织和20例慢性胆囊炎组织中Fas蛋白和FasL蛋白的表达水平;(2)运用TUNEL法原位检测在上述4种组织中浸润的淋巴细胞的凋亡.(3)比较在不同的胆囊癌临床病理类型中Fas蛋白和FasL蛋白的表达情况和在原位胆囊癌组织浸润的淋巴细胞的凋亡情况.结果(1)Fas蛋白表达的阳性率在上述4种组织之间的差异无统计学意义.FasL蛋白表达的阳性率在胆囊癌组织显著高于慢性胆囊炎组织(χ2=4.89,P<0.05);(2)浸润的淋巴细胞的凋亡数量在高分化癌显著低于低分化癌(t=2.52,P<0.05),在腺瘤和慢性炎症组织中未见到浸润的淋巴细胞的凋亡.(3)浸润的淋巴细胞的数量在腺瘤组织显著低于癌组织(t=6.99,P<0.01),在慢性炎症组织显著低于腺瘤组织(t=3.66,P<0.01);在高分化癌显著低于低分化癌(t=5.31,P<0.01),在NevinⅠ、Ⅱ、Ⅲ期显著低于Ⅳ、Ⅴ期(t=3.76,P<0.01).结论胆囊癌细胞表达的FasL通过诱导在癌组织浸润的淋巴细胞的凋亡从而使癌细胞逃避机体的免疫监视,它的上调表达在胆囊癌的分化、浸润和转移过程中扮演重要角色.
-
转运蛋白多药耐药相关蛋白2在胆道再通大鼠肝脏中的表达及意义
目的探讨肝细胞毛细胆管面胆红素主要转运子多药耐药相关蛋白2(Mrp2)在胆道再通过程中的表达变化机制.方法对96只胆道梗阻及再通大鼠动物模型的286份肝组织样本进行放免检查TNF-α;进行免疫荧光和RT-PCR,在肝细胞毛细胆管面上染色定位Mrp2,计算机图像分析测定,半定量比较肝细胞毛细胆管面上Mrp2表达情况,并与肝组织匀浆TNF-α、血清胆红素作相关分析.结果 Mrp2转运蛋白特异性定位于肝细胞膜的毛细胆管面,荧光染色呈线条形勾勒出毛细胆管轮廓,CBDL术后1、3、7和14d其Mrp2表达(相对灰度)逐渐下降,由223.0±14.2降为211.0±13.7、167.0±8.7、112.0±11.2、78.0±7.2;RBF术后1、3、7和14d其Mrp2表达缓慢恢复,分别为102.0±9.7、143.0±8.1、177.0±12.4和212.0±15.4.并且随着肝组织匀浆TNF-α、血清胆红素的升高或降低而发生变化.结论胆道再通后肝细胞代谢胆红素的恢复与Mrp2转运蛋白的变化密切相关,且TNF-α可能是影响Mrp2变化的主要因素.
-
人RhoC基因正、反义真核表达载体的构建及对肿瘤增殖的影响
目的构建人RhoC基因正、反义真核表达载体,研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株增殖的影响.方法应用分子克隆技术,用KpnⅠ和BamHⅠ双限制性内切酶从RhoC 基因切下所需目的片段,然后将该片段正、反向定向克隆到真核表达载体pcDNA 3.1/Hyg(+)上,构建正、反义RhoC cDNA真核表达载体,以脂质体转染人胆管癌QBC939细胞,检测细胞生长曲线.结果经测序鉴定,将正、反义目的片段成功的连接到pcDNA3.1/Hyg(+)载体上.结果序列测定证实RhoC基因正、反义真核表达载体成功构建,反义RhoC基因抑制QBC939细胞增殖,正义RhoC基因促进QBC939细胞增殖.结论成功地将RhoC目的片段正、反向插入到pcDNA3.1/Hyg(+)中,构建了人RhoC正、反义表达真核载体,RhoC基因调控QBC939细胞增殖.
-
PCNA、p53及CyclinB1 mRNA在兔肝内胆管结石胆管组织中的表达
目的通过检测PCNA、p53及和CyclinB1 mRNA在兔肝内胆管结石胆管组织中的表达,探讨肝内胆管结石发生的分子机制.方法建立肝内胆管结石动物模型,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测30例胆管结石兔和20例正常兔胆管组织CyclinB1 mRNA的表达水平,采用免疫组织化学法检测胆管组织PCNA和p53的表达,应用流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡情况.结果胆管结石兔胆管组织PCNA表达阳性率40%,明显高于对照组0,两者相比差异有统计学意义(P<0.01),胆管结石兔胆管组织p53表达阳性率0,对照组p53表达阳性率0,两者相比差异无统计学意义(P>0.05),胆管结石兔胆管组织CyclinB1 mRNA表达水平(0.436±0.133)与正常对照组(0.178±0.085)比较差异有统计学意义(P<0.01),胆管结石兔胆管G1/S期细胞比例(50.11±6.34)%,与正常组(75.23±5.29)%比较差异有统计学意义(P<0.05),G2/M期细胞比例(35.59±4.68)%,与正常组(15.35±3.76)%比较差异有统计学意义(P<0.05),胆管细胞增殖指数(18.87±1.66),与正常组(5.32±0.41)比较差异有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡率(15.24±0.87)%,与正常组(2.33±0.36)%比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 PCNA、p53及 CyclinB1 mRNA表达与肝内胆管结石生物学行为密切相关,胆管细胞大量增殖在肝内胆管结石形成中发挥重要作用,但细胞增殖与恶性细胞的无限增殖有根本的区别.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
