中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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微小RNA-451靶向巨噬细胞游走抑制因子调控甲状腺癌细胞增殖、凋亡的机制
目的 探讨微小RAN(miR)-451靶向巨噬细胞游走抑制因子(MIF)对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及机制.方法 反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测甲状腺癌组织及滤泡状(PTC-133)、乳头状(K1)及未分化(8505C)甲状腺癌细胞株中miR-451的mRNA表达;miR-NC、miR-451 模拟物(mimics)、miR-451抑制物(inhibitor)转染K1甲状腺癌细胞,Western blot检测MIF蛋白表达,3组共转染组miR-NC+miR-451、Wt-MIF+miR-451 mimics、Mut-MIF+miR-451 mimics转染K1甲状腺癌细胞,检测荧光素酶活性,以此证实MIF是否为miR-451靶基因;后续实验分为miR-NC、miR-451 mimics、miR-451 mimics+pcDNA3.1-MIF及 miR-NC+pcDNA3.1-MIF 4组,各组细胞培养48h后,细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达.结果 甲状腺癌组织中miR-451的mRNA表达(0.889±0.367)显著低于癌旁组织(6.214±0.884)(t=28.883,P=0.004),甲状腺癌细胞中K1细胞的表达低,选择作为后续研究;MIF是 miR-451的靶基因;与miR-NC组比较PI3K(0.562±0.051);p-Akt(0.134±0.022);Cleaved Caspase-3(0.052±0.014);细胞凋亡率(5.16±0.77)%,miR-451 mimics和miR-451 mimics +pcDNA3.1-MIF组PI3K(0.133±0.021、0.223±0.026)、p-Akt(0.034±0.011、0.062±0.013)蛋白表达显著降低(与miR-451 mimics组比较:tPI3K=30.157,P=0.003;tp-Akt=46.626,P=0.001.结论 MIF是miR-451的靶基因,miR-451可通过靶向MIF抑制PI3K/Akt信号通路抑制K1甲状腺癌细胞增殖及促进细胞凋亡.
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他莫昔芬对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨他莫昔芬在大鼠脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用及其机制.方法 将SD雄性大鼠80只,随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、脑缺血再灌注损伤+溶剂治疗组,脑缺血再灌注+他莫昔芬治疗组,每组20只,分别于再灌注后24h对大鼠进行神经功能评分,采用Western blot法检测他莫昔芬对凋亡相关蛋白裂解的(cleaved)-半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和核内转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达的影响,原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测神经细胞的凋亡,并检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量.结果 与模型组比较,他莫昔芬可改善神经功能评分[(1.25±0.51)、(3.87±0.94)分,P=0.000],上调胞核内Nrf2蛋白的表达 (0.98±0.12、0.45±0.19,P=0.000),增强SOD的活性[(69.22±6.23)、(51.98±3.24)U/mg蛋白,P=0.000],减少神经细胞的凋亡(11.2±1.7,28.8±2.9,P=0.000).结论 他莫昔芬可以在大鼠脑缺血再灌注损伤中发挥显著神经保护作用,其机制可能与上调Nrf2信号通路的活性相关.
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Stomatin样蛋白2基因调控Wnt/β-连环蛋白信号通路对胃癌细胞增殖凋亡的机制
目的 探讨人Stomatin样蛋白2(SLP-2)基因调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制.方法 Western blot检测SLP-2基因在人胃癌组织中的表达;将NC-小干扰RNA(siRNA)、SLP-2-siRNA1、SLP-2-siRNA2转染人胃癌SGC-7901细胞,未转染任何siRNA的作为对照组,Western blot检测转染后各组细胞中SLP-2蛋白表达;细胞转染48h后,流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测活化的的Cleaved含半胱氨酰的天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)、β-catenin、c-Myc、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达.结果 胃癌组织中SLP-2的蛋白表达(0.283±0.016)显著高于癌旁组织(0.082±0.016)(t=7.789,P=0.003);SLP-2-siRNA2组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;LP-2-siRNA组(16.62±1.32)%细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3蛋白表达(1.421±0.210)均显著高于对照组(1.56±0.56)%、(0.510±0.083),β-catenin(0.157±0.024)、c-Myc(0.039±0.016)、Cyclin D1(0.052±0.012)蛋白表达显著低于对照组(0.311±0.036、0.137±0.026、0.183±0.021)(t凋亡率=9.324,P凋亡率=0.001;tβ-catenin=8.868,Pβ-catenin=0.003;tc-Myc=9.112,Pc-Myc=0.002;tCyclin D1=9.987,PCyclin D1=0.001).结论 SLP-2在胃癌中高表达,沉默SLP-2的表达能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖和促进细胞凋亡,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关.
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转移消失蛋白B与微囊蛋白-1在肝细胞癌中的相互作用
目的 探讨转移消失蛋白B(MIM-B)与微囊蛋白-1(caveolin-1)在肝细胞癌细胞中的相互作用.方法 构建携带MIM-B与FLAG融合基因的pcDNA3.1载体,脂质体法转染Hep3B、SMMC7721细胞.通过细胞免疫荧光以及共聚焦显微镜检测MIM-B蛋白与caveolin-1蛋白共定位;应用内、外源免疫共沉淀确认相互作用;以Hep3B、SMMC7721 以及MHCC97H细胞为研究模型,分成空载体组、MIM-B与FLAG融合基因组,进行免疫共沉淀实验.结果 成功构建携带MIM-B与FLAG融合基因的pcDNA3.1载体,pcDNA3.1-MIM-B-FLAG转染效率为90.0%以上,显著表达MIM-B.共聚焦显微镜结果显示MIM-B能沉淀caveolin-1;MIM-B与caveolin-1共定位;内、外源免疫共沉淀结果显示MIM-B与caveolin-1相互作用.结论 MIM-B与caveolin-1在肝癌细胞中共定位并相互作用.
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微小RNA-371-5p对人结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-371-5p对人结直肠癌LoVo和SW620细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建miR-371-5p过表达慢病毒载体和稳定沉默miR-371-5p基因载体[miR-371-5p/短发卡RNA(shRNA)],并转染LoVo和SW620细胞,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定miR-371-5p的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)、平板克隆形成实验、软琼脂集落形成实验、流式细胞仪检测LoVo和SW620细胞的增殖和凋亡.结果 LoVo和SW620细胞转染miR-371-5p后miR-371-5p表达(14.25±0.25、10.01±0.19)高于阴性对照组和空白对照组(1.03±0.02、1.04±0.03;1.00±0.00、1.00±0.00;F=21.426、8.957,P=0.000、0.003),LoVo和SW620细胞转染miR-371-5p/shRNA后miR-371-5p表达(0.08±0.00、0.11±0.01)低于阴性对照组和空白对照组(0.97±0.02、1.04±0.03;1.00±0.00、1.00±0.00;F=15.231、8.537,P=0.000、0.005).LoVo和SW620细胞转染后3d和7d,转染miR-371-5p的细胞增殖水平低于阴性对照组和空白对照组(F=5.932、19.324、7.256、35.846,P=0.003、0.000、0.000、0.000);转染miR-371-5p/shRNA的细胞增殖高于阴性对照组和空白对照组(F=37.342、43.254、43.242、105.231,P=0.003、0.000、0.000、0.000).转染miR-371-5p的LoVo和SW620细胞克隆个数低于阴性对照组和空白对照组(F=5.432、4.023,P=0.004、0.022);转染miR-371-5p/shRNA的LoVo和SW620细胞克隆个数高于阴性对照组和空白对照组(F=3.976,4.732,P=0.015、0.011).转染miR-371-5p的LoVo和SW620细胞集落个数低于阴性对照组和空白对照组(F=5.647、4.023,P=0.007、0.015);转染miR-371-5p/shRNA的LoVo和SW620细胞集落个数高于阴性对照组和空白对照组(F=4.231、4.231,P=0.012、0.013).转染miR-371-5p和miR-371-5p/shRNA的LoVo和SW620细胞凋亡率和阴性对照组和空白对照组比较差异均无统计学意义(F=0.883、1.017、1.165、0.954,P=0.742、0.474、0.483、0.621).结论 miR-371-5p抑制人结直肠癌LoVo和SW620细胞的增殖,对细胞凋亡无明显影响.
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血管内皮生长因子微针给药对超长皮瓣抗水肿及缺血的影响
目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)微针给药技术对大鼠超长随意皮瓣成活率的影响.方法 在40只SD大鼠背部制作McFarlane皮瓣模型并随机分为4组,10只作为对照组不治疗,10只给予VEGF局部皮下注射,10只给予相等剂量VEGF微针技术给药,10只给予微针刺激无给药.大体观察各组间不同时间点的皮瓣成活状态,组织学观察术后7d皮瓣远端组织苏木素-伊红(HE)染色血管计数.结果 术后7d对照组(S)、VEGF(V)局部治疗组、VEGF联合微针组(VM)和微针刺激组(M)的皮瓣成活率分别为(51.24±3.53)%、(73.32±2.79)%、(91.17±4.66)%和 (56.10±4.64)%,组间差异有统计学意义(F=403.561,P=0.010).VEGF联合微针组大鼠皮瓣硬质痂壳少于其他组,镜下观VEGF联合微针组皮下组织水肿轻于其他各组,而血管扩张和纤维组织增生明显.对照组、VEGF局部治疗组、VEGF联合微针组和微针刺激组的新生血管计数分别为(16.18±4.29)、(28.84±5.20)、(34.58±4.31)、(17.29±2.73)个/mm2,组间差异有统计学意义(F=48.293,P=0.010).结论 VEGF联合微针技术给药能更有效地促进大鼠超长皮瓣的新生血管构建,提高随意皮瓣远端组织成活率.
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长链非编码RNA-p21通过调节Warburg效应促进前列腺癌细胞侵袭
目的 观察缺氧诱导的长链非编码RNA(lncRNA)-p21对前列腺癌侵袭能力的影响以及其机制研究.方法 使用去氧酶Oxyrase培养前列腺癌细胞LNCaP和DU145,观察缺氧情况下lncRNA-p21的表达变化,同时观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达水平.使用小干扰RNA(siRNA)干扰lncRNA-p21的表达,Transwell小室检测缺氧情况下前列腺癌细胞迁移、侵袭功能变化.缺氧处理后,检测前列腺癌细胞Warburg效应.干扰lncRNA-p21后,检测HIF-1α mRNA和蛋白表达变化,以及上皮-间充质转化(EMT)信号通路蛋白表达水平.结果 缺氧状态下,前列腺癌LNCaP和DU145细胞内lncRNA-p21 mRNA(LNCaP:t=4.721,P=0.009,DU145:t=11.930,P=0.000)、HIF-1α mRNA(LNCaP:t=4.882,P=0.008,DU145:t=11.953,P=0.000)和蛋白在表达上调;葡萄糖摄取(LNCaP:t=12.850,P=0.000,DU145:t=5.376,P=0.006)和乳酸水平(LNCaP:t=33.320,P=0.000,DU145:t=26.610,P=0.000)显著高于常氧状态下水平.干扰lncRNA-p21表达后,前列腺癌细胞迁移能力显著被抑制(LNCaP:t=6.277,P=0.003,DU145:t=9.449,P=0.001),缺氧条件下增强的Warburg效应被逆转,EMT通路中波形蛋白(Vimentin)和Twist-1蛋白下调,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达上调.干扰lncRNA-p21表达,缺氧环境下,HIF-1α较对照组显著下降.结论 缺氧诱导的lncRNA-p21通过结合HIF-1α增强前列腺癌细胞Warburg效应,促进前列腺癌细胞侵袭能力.
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低温机械灌注对大鼠心脏死亡器官捐献供肝移植的保护作用
目的 建立稳定的大鼠心脏死亡器官捐献(DCD)供肝低温机械灌注后肝移植模型,探讨低温机械灌注(HMP)对大鼠DCD供肝移植的保护作用.方法 雄性SD大鼠90只,分为3组,HMP组DCD 30min后的肝脏用4℃ HTK液冷保存(SCS)2h、低温机械灌注2h后行同种异体肝移植,SCS组DCD 30min后的肝脏用4℃ HTK液冷保存4h后行同种异体肝移植,正常对照组供肝不经过热缺血经灌洗后用4℃ HTK液保存45min后行同种异体肝移植,观察低温机械灌注与冷保存对大鼠DCD供肝移植的影响.结果 HMP组肝移植术后16h血清ALT含量为(2.04±0.41)IU/g liver,低于SCS组(4.51±1.07)IU/g liver,差异有统计学意义(P=0.001);HMP组肝移植术后16h血清AST含量为(2.61±0.59)IU/g liver,低于SCS组(6.35±1.21)IU/g liver,差异有统计学意义(P=0.001);HMP组低温机械灌注2h后Krüpple样转录因子2(KLF2)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达较灌注前明显增多,SCS组在后2h冷保存前后KLF2和eNOS蛋白表达无明显变化.结论 低温机械灌注可使KLF2和eNOS蛋白表达增加,保护大鼠肝细胞,有利于提高供肝质量.
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类载脂蛋白C-Ⅰ对胃癌细胞株体外影响及生物学特性
目的 观察类载脂蛋白C-Ⅰ对胃癌细胞株的生长抑制作用.方法 使用荧光素标记的类载脂蛋白C-Ⅰ与HGC-27、MGC-803细胞悬浮液混合进行孵育,于荧光显微镜下观察目标蛋白的摄取.5组加入含不同浓度类载脂蛋白C-Ⅰ(0.1、0.5、1.0、1.5、2.0μg/μl)的培养基,另设对照组与空白组.取3个不同时间点(24、48、72h),细胞计数试剂盒(CCK-8)试剂孵育1.5h,采用450nm 波长处检测吸光度值.结果 随浓度增加(0.1、0.5、1.0、1.5、2.0μg/μl)类载脂蛋白C-Ⅰ对胃癌细胞株HGC27的抑制率(24h:5.29%、15.11%、53.40%、82.12%、90.43%,P=0.002;48h:8.82%、21.91%、58.94%、86.45%、94.46%,P=0.002;72h:11.08%、29.72%、68.51%、87.91%、95.72%,P=0.003)和MGC803的抑制率(24h:4.03%、13.35%、43.32%、78.84%、91.44%,P=0.001;48h:7.56%、29.72%、63.22%、86.62%、93.45%,P=0.001;72h:9.32%、35.77%、74.81%、86.90%、98.74%,P=0.004)差异有统计学意义.结论 类载脂蛋白C-Ⅰ对胃癌细胞株具有杀伤作用,可能作为一种新型的蛋白类抗肿瘤药,成为胃癌治疗的新型药物,也可能在其他类型肿瘤的治疗中发挥重要作用.
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红芪多糖调控磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶信号通路抑制结肠癌细胞增殖及促进凋亡的机制
目的 探讨红芪多糖调控磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路抑制结肠癌细胞增殖及促进凋亡的机制.方法 25、50、100、200、400mg/L的红芪多糖干预人结肠癌SW480细胞24、48、72h,细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖,计算半数抑制浓度(IC50)值;190mg/L的红芪多糖干预SW480细胞48h,不加药物的作为对照组,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blot检测细胞核增殖抗原(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、β-连环蛋白(β-catenin)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、PI3K、Akt、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-Akt)蛋白表达.结果 不同浓度的红芪多糖处理HepG2细胞24、48、72h 后细胞抑制率均受到不同程度的抑制,且对细胞的抑制作用随着时间的延长逐渐增强,与对照组[48h(1.18±0.42)%]比较差异均有统计学意义(48h:t25mg/L=6.002,P25mg/L=0.007;t50mg/L=7.452,P50mg/L=0.005;t100mg/L=8.236,P100mg/L=0.003;t200mg/L=9.113,P200mg/L=0.002;t400mg/L=10.221,P400mg/L=0.001).结论 红芪多糖可抑制结肠癌细胞增殖及促进细胞凋亡,其机制与PI3K/Akt信号通路的调控有关.
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RNA干扰中性粒细胞相关载脂蛋白基因的表达对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响
目的 探讨RNA干扰中性粒细胞相关载脂蛋白(NGAL)基因的表达对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响及机制.方法 提取人脑胶质瘤组织及人脑胶质瘤SHG-44、U87、U251细胞中的蛋白,Western blot检测NGAL的表达;将siRNA-NC、NGAL-siRNA1、NGAL-siRNA2、NGAL-siRNA3转染U251细胞,未转染任何siRNA的作为对照组,各组细胞转染48h后,Western blot检测NGAL的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞转染48h的细胞凋亡,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Notch1、发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白表达.结果 脑胶质瘤组织中NGAL的mRNA和蛋白表达(0.458±0.042)显著高于瘤旁组织(0.098±0.015)(tmRNA=7.113,PmRNA=0.003;t蛋白表达=8.532,P蛋白表达=0.002),U251细胞中NGAL的蛋白表达高,选择作为后续研究;NGAL-siRNA组细胞凋亡率[(15.62±1.94)%]及leaved Caspase-3(0.094±0.021)蛋白表达显著高于对照组[(2.18±0.67)%,0.032±0.015],Notch1(0.204±0.028)、Hes1(0.103±0.019)蛋白表达显著低于对照组(0.453±0.041、0.215±0.029)(t凋亡率=9.995,P凋亡率=0.001;tCleaved Caspase-3=5.898,PCleaved Caspase-3=0.006;tNotch1=8.112,PNotch1=0.003;tHes1=8.824,PHes1=0.003).结论 NGAL基因在人脑胶质瘤组织及细胞中高表达,通过RNA干扰沉默NGAL表达可抑制人脑胶质瘤细胞增殖及促进细胞凋亡,其机制与Notch信号通路有关.
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微小RNA-125a通过Notch通路抑制肺癌细胞侵袭、迁移和增殖
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-125a在肺癌细胞侵袭、迁移和增殖能力的影响及其机制.方法 miR-125a类似物(miR-125a-mimic)过表达miR-125a,聚合酶链反应(PCR)检测过表达效率;Transwell侵袭实验检测miR-125a-mimic对肺癌细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-125a-mimic对肺癌细胞迁移能力的影响;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测miR-125a-mimic对肺癌细胞增殖能力的影响;Western blot检测miR-125a-mimic处理后,肺癌细胞Notch-1、Notch细胞内结构域(NICD)-1和分裂酶(Hes)-1蛋白的表达;荧光素酶报告基因检测miR-125a与Notch-1的相互作用;裸鼠皮下成瘤实验检测miR-125a-mimic对肺癌成瘤大小以及体积的影响,免疫组织化学检测对照组和miR-125a-mimic组中Notch-1的表达.结果 miR-125a-mimic可以显著提高miR-125a的表达水平(0.22±0.03比0.89±0.13,P=0.008);miR-125a-mimic可以抑制肺癌H1975细胞的侵袭、迁移和增殖能力[24h:(0.38±0.02)%比(0.19±0.01)%, P=0.025;48h:(0.72±0.05)%比(0.38±0.04)%, P=0.035;72h:(0.86±0.08)%比(0.43±0.04)%, P=0.019];miR-125a-mimic可以下调Notch-1、NICD-1和Hes-1蛋白的表达;Notch-1是miR-125a的直接靶点;与NC组比较,miR-125a-mimic组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显变小[体积:(2.73±0.13)cm3比(0.34±0.03)cm3,P=0.039;重量:(2.19±0.13)g比(0.36±0.03)g,P=0.028],免疫组织化学结果显示与NC组比较,miR-125a-mimic组中Notch-1表达明显降低.结论 miR-125a通过Notch通路抑制肺癌细胞侵袭、迁移和增殖能力.
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Beagle犬静脉注射异氟醚注射液的长期毒性研究
目的 经犬静脉单次给予异氟醚注射液连续30d后,评价异氟醚注射液是否对犬各脏器、系统产生损害及其损害程度和可逆程度.方法 将24条Beagle犬随机分为生理盐水对照组(生理盐水2.0ml/kg)、溶媒对照组(30%脂肪乳2.0ml/kg)、实验A组(异氟醚注射液1.31ml/kg)和实验B组(异氟醚注射液1.31ml/kg).每组6条,雌雄各半.生理盐水对照组、溶媒对照组和实验A组每天静脉给药1次,连续30d;实验B组每3d给药1次,共10次.实验期间记录犬体重及观察其他一般状况;间断行心电图和尿液常规检查;给药期结束时(后一次给药结束后24h)所有犬进行血液学、生化、电解质检查及骨髓涂片检查;同时每组放血处死一半犬取各脏器及给药局部组织行病理学检查.剩余犬观察2周后重复上述检查.结果 (1)恢复期结束时(后一次给药结束后2周)实验A组和实验B组凝血酶原时间(PT)与溶媒对照组比较,差异有统计学意义,分别为:(5.2±0.3)比(6.1±0.3)s(P=0.025),(5.2±0.3)比(6.1±0.3)s(P=0.029);与生理盐水对照组比较差异无统计学意义,分别为:(5.2±0.3)比(5.7±0.7)s(P=0.115),(5.2±0.3)比(5.7±0.7)s(P=0.180).(2) 给药期结束时实验A组血清尿素(UREA)浓度与溶媒对照组比较,差异有统计学意义[(4.9±0.9)比(6.9±2.3)mmol/L,P=0.036];与生理盐水对照组比较差异无统计学意义[(4.9±0.9)比(5.8±0.8)mmol/L,P=0.314].(3) 给药期结束和恢复期结束时均未发现犬各器官有特异性组织病理学损害.结论 长期静脉注射异氟醚注射液对犬各脏器和系统未产生明显毒性损害.
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奥曲肽对小鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨奥曲肽预处理对小鼠肾脏缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及机制.方法 将24只C57BL/6小鼠编号后应用随机数字表分成3组:假手术组(Sham组)、肾脏缺血再灌注组(I/R组)和奥曲肽预处理+肾脏缺血再灌注组 (OPC+ I/R组),每组8只.收集小鼠肾脏缺血再灌注24h后的血清及肾脏组织.采用相应试剂盒测定各组血清肌酐(SCr)及尿素氮(BUN)水平,苏木素-伊红(HE)染色比较肾脏组织损伤,试剂盒检测各组小鼠肾脏内丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot检测肾脏组织内核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)及核因子-κB(NF-κB)的蛋白表达.结果 I/R组SCr及BUN[(113.38±18.39)μmol/L、(32.31±6.66)mmol/L]均显著高于Sham组[(27.61±7.77)μmol/L、(11.82±2.56)mmol/L;t=12.153,P=0.000;t=8.124,P=0.000].OPC+I/R组SCr及BUN[(72.39±11.97)μmol/L、(22.12±3.75)mmol/L]均低于I/R组(t=5.285,P=0.000;t=3.774,P=0.003);HE染色检测肾小管坏死评分,OPC+I/R组[(2.13±0.64)分]较I/R组[(4.13±0.84)分]显著降低(t=5.736,P=0.000);OPC+I/R组MDA水平[(3.92±0.69)μmol/g]低于I/R组[(5.94±1.23)μmol/g,t=5.004,P=0.002],OPC+I/R组SOD活性[(34.64±6.77)kU/g]与I/R组[(24.05±6.15)kU/g]比较明显升高(t=3.276,P=0.006);Western blot检测结果显示OPC+I/R组Nrf2和HO-1相对表达量(4.60±0.88、4.76±0.87)高于I/R组(2.35±0.50、2.67±0.54;t=6.294,P=0.000;t=5.737,P=0.000),OPC+I/R组NF-κB相对表达量(2.51±0.21)低于I/R组(5.02±0.75;t=7.434,P=0.000).结论 奥曲肽可激活肾脏Nrf2/HO-1通路提高抗氧化应激能力以及抑制NF-κB通路减轻炎性反应从而对小鼠肾脏I/R损伤起到保护作用.
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携带人肝细胞生长因子第一结构域基因溶瘤腺病毒的构建及其对胃癌细胞的杀伤作用
目的 构建携带具有抗肿瘤细胞和抗血管生成作用的人肝细胞生长因子第一结构域(HGFK1)基因的肿瘤特异性启动子调控的溶瘤腺病毒,研究其对胃癌细胞选择性杀伤作用.方法以人端粒酶反转录酶启动子(hTERT)和缺氧调控元件序列(HRE)分别调控溶瘤腺病毒复制必要的E1a和E1b基因,基因组插入HGFK1基因,构建HGFK1溶瘤腺病毒(TH-Ad-HGFK1-EGFP)和无HGFK1溶瘤腺病毒(TH-Ad-EGFP),空斑计数法滴定病毒浓度;病毒分为3组:实验A组(TH-Ad-HGFK1-EGFP)、实验B组(TH-Ad-EGFP)和对照C组(Ad-EGFP),分别感染胃癌细胞SGC7901和正常人成纤维细胞(HF);半数细胞培养物感染量法(TCID50)检测病毒扩增倍数;噻唑蓝(MTT)法检测病毒杀伤抑制作用;双重荧光染色检测病毒促凋亡作用.结果 溶瘤腺病毒TH-Ad-HGFK1-EGFP、TH-Ad-EGFP经测序及聚合酶链反应(PCR)鉴定确认构建成功,滴度都为2×1010pfu/ml;病毒扩增结果显示:A、B组病毒在SGC7901细胞中的扩增倍数分别为1.47×104、1.60×104倍,远大于对照C组病毒,在HF细胞中为110倍和124倍,远小于对照C组病毒;MTT结果显示:当感染复数(MOI)=100时,A组病毒对SGC7901细胞72、96h后的抑制率为(71.34±8.27)%、(74.56±1.78)%,B组为(30.58±3.83)%、(31.84±6.62)%,C组为(23.40±2.29)%、(21.18±2.32)%.A组与B组两时间点分别比较差异有统计学意义(P=0.002、P=0.003),A组与C组分别比较差异有统计学意义(P=0.003、P=0.000).A、B组病毒对HF细胞在96h后的抑制率为(18.94±0.88)%、(22.84±3.34)%,C组为(53.25±3.50)%,A、B两组与C组分别比较差异有统计学意义(P=0.003、P=0.001);凋亡结果显示:A组SGC7901细胞的凋亡率为(18.66±4.04)%,远高于其余各组.结论 溶瘤腺病毒TH-Ad-HGFK1-EGFP能在胃癌细胞SGC7901中复制增殖并对其有杀伤抑制、促凋亡作用.
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微小RNA-143下调Wnt/β-连环蛋白抑制食管癌侵袭转移的机制
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-143下调Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)在抑制食管癌侵袭转移中的作用机制.方法 体外培养食管癌细胞株EC109-H、TE-1及食管正常上皮细胞株Het-1A并随机分为实验组(EC109-H、TE-1)和阴性对照组(Het-1A);采用Transwell迁移实验、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot法检测各组细胞的侵袭能力,miR-143及Wnt/β-catenin调控因子Wnt、β-catenin、CD44的表达量,并进行miR-143与Wnt/β-catenin通路调控蛋白的相关性分析;通过在线软件预测miR-143的相关靶点;利用miRNA抑制物及相似物改变细胞中miR-143含量,并构建CD44-3'端非编码区(3'UTR)载体及CD44-3'端非编码区(突变型)(3'UTRM)载体,应用双荧光素酶实验验证预测靶点.结果 各组细胞株侵袭能力比较,EC109-H的侵袭能力强(156.86±0.83,P=0.003);miR-143在EC109-H中的表达量低(1.01±0.12,P=0.000);高侵袭能力的EC109-H细胞株中Wnt、β-catenin、CD44表达量均高于其他组(0.51±0.11,P=0.005;0.65±0.12,P=0.007;0.80±0.09,P=0.001),且miR-143与上述蛋白表达均呈负相关(rCD44=-0.827,P=0.000;rwnt=-0.907,P=0.017;rβ-catenin=-0.810,P=0.028);靶点预测CD44可能为miR-143的调控靶点,双荧光素酶实验结果显示miR-143可以靶向CD44的3'UTR区(0.32±0.28,P=0.000).结论 miR-143可能通过靶向Wnt/β-catenin信号通路调控食管癌细胞的侵袭转移能力.
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同源异型核基因1过表达诱导上皮-间充质转化促进乳腺癌细胞转移能力的研究
目的 观察同源异型核基因1(Prrx1)过表达对乳腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)作用及迁移能力的影响.方法 用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)从MCF-7、MDA-MB-468、BT-549乳腺癌细胞中筛选出Prrx1低表达细胞株.用Prrx1过表达慢病毒载体感染筛选出的Prrx1低表达乳腺癌细胞株,Western blot验证感染成功后,观察感染前后乳腺癌细胞形态变化.Real-time PCR检测感染对乳腺癌细胞E-钙黏蛋白及波形蛋白表达的影响.Transwell细胞迁移实验检测Prrx1对乳腺癌细胞迁移能力的影响.结果 乳腺癌MCF-7、MDA-MB-468、BT-549细胞的Prrx1 mRNA的相对表达量分别为15.05±0.18、11.78±0.42、7.98±0.37,因此3种乳腺癌细胞中MCF-7细胞Prrx1表达量低,Prrx1过表达慢病毒载体感染成功后,MCF-7细胞形态由多角形变为长梭形.Real-time PCR实验结果显示,感染后Prrx1 mRNA在实验组、空白对照组、病毒对照组的相对表达量分别为2.16±0.07、10.18±0.07、10.20±0.07,Prrx1 mRNA水平是感染前的259.57倍(t=227.100,P=0.000) ,两对照组比较差异无统计学意义 (t=1.315,P=0.202) .感染后E-钙黏蛋白mRNA在实验组、空白对照组、病毒对照组的相对表达量分为别4.00±0.02、3.56±0.02、3.51±0.05,E-钙黏蛋白mRNA水平是感染前的0.71倍(t=6.007,P=0.000),而两对照组比较差异无统计学意义(t=0.730,P=0.476).感染后波形蛋白mRNA在实验组、空白对照组、病毒对照组的相对表达量分别为8.79±0.42、10.18±0.06、9.97±0.05,波形蛋白mRNA水平是感染前的2.27倍(t=11.900,P=0.000),两对照组比较差异无统计学意义(t=2.052,P=0.057).Transwell实验显示Prrx1过表达组发生迁移的细胞数[(73.40±10.21)个]高于病毒对照组[(44.60±8.24)个]及空白对照组[(45.60±6.62)个],差异有统计学意义(t=6.837,P=0.000),空白对照组和病毒对照组差异无统计学意义(t=0.295,P=0.772).结论 Prrx1基因过表达可诱导乳腺癌细胞发生EMT使其迁移能力增强.
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丙泊酚麻醉对创伤性脑损伤大鼠神经元再生和神经功能的影响
目的 观察丙泊酚麻醉对创伤性脑损伤(TBI)大鼠的影响.方法 将SD大鼠分为假手术组、模型组、丙泊酚低剂量组[36mg/(kg·h)]和丙泊酚高剂量组[72mg/(kg·h)],每组20只.于TBI术前30min至术后1.5h静脉注射给药,观察大鼠术后的死亡率,神经功能和神经元再生状况.结果 术后28d,丙泊酚低剂量组大鼠死亡率显著高于模型组大鼠死亡率,差异有统计学意义(χ2=7.648,P=0.024);丙泊酚高剂量组大鼠死亡率显著高于模型组大鼠死亡率,差异有统计学意义(χ2=9.152,P=0.018);在术后1~7d,模型组大鼠平均体重为(365.4±2.4)g,丙泊酚低剂量组大鼠平均体重为(347.2±2.5)g,丙泊酚高剂量组大鼠平均体重为(314.9±2.35)g,使用丙泊酚麻醉的大鼠体重均低于模型组,到终点后丙泊酚高剂量组大鼠体重显著低于模型组(t=8.363,P=0.026);模型组大鼠进入目的洞时间显著高于假手术组(t=6.783,P=0.047);各组大鼠经巴恩斯迷宫实验检测结果显示,大鼠进入目的洞时间假手术组为(138.3±1.5)s,模型组为(145.6±1.4)s,丙泊酚低剂量组为(144.2±1.6)s,丙泊酚高剂量组为(169.4±1.7)s,模型组大鼠进入目的洞时间显著高于假手术组(t=6.783,P=0.047),丙泊酚低剂量组与模型组比较差异无统计学意义(t=1.863,P=0.064),而丙泊酚高剂量组大鼠的时间显著长于模型组(t=9.483,P=0.014);同时,丙泊酚低剂量组大鼠脑部神经元新生显著低于模型组(t=7.824,P=0.038),丙泊酚高剂量组大鼠脑部神经元新生显著低于模型组(t=6.575,P=0.041).结论 高剂量丙泊酚麻醉对于TBI大鼠具有恶化作用.
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ABT-737通过上调NIX介导的线粒体自噬缓解大鼠低氧性肺动脉高压
目的 观察ABT-737对大鼠低氧性肺动脉高压(PAH)肺血管重构的作用,并从NIX介导的线粒体自噬方面探讨其可能的机制.方法 采用随机数表法将18只SD大鼠平均分为3组(n=6):对照组、缺氧组(其中死亡1只)、处理组.后两组大鼠置于低氧环境饲养4周,每天8h.处理组大鼠低氧饲养前,腹腔注射15mg/kg ABT-737,另外两组注射等量溶剂.4周后,检测右室收缩压(RVSP)及右室肥厚指数(RVHI),并作肺血管组织学分析,计算中层厚度指数(WTI).Western blot法检测大鼠肺组织NIX、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ及外膜转运酶(Tom)20蛋白的表达.结果 对照组、缺氧组、处理组大鼠RVSP分别为(15.76±1.27)、(43.16±4.34)、(29.77±2.21)mmHg(1mmHg=0.133kPa),RVHI分别为0.28±0.04、0.37±0.02、0.29±0.03,WTI分别为(6.51±2.46)%、(14.60±2.33)%、(10.20±3.24)%.与对照组比较,缺氧组大鼠RVSP、RVHI及WTI显著增高(P值分别为0.000、0.002和0.000).处理组较缺氧组大鼠RVSP、RVHI及WTI显著降低(P值均为0.000),但RVSP及WTI仍较对照组增加(P值均为0.000).缺氧组NIX蛋白表达(0.93±0.11)比对照组(0.60±0.13)上调(P=0.001),而处理组(1.25±0.12)更高(P=0.000).处理组大鼠LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(1.59±0.53)较对照组(0.71±0.32)和缺氧组(0.94±0.20)均显著上调(P=0.006,P=0.032).缺氧组Tom20蛋白表达(1.20±0.23)较对照组(0.84±0.15)显著升高(P=0.009),ABT-737干预能显著降低Tom20蛋白(0.97±0.08,P=0.040).结论 低氧导致大鼠肺循环压力升高、肺血管重构并且Tom20蛋白表达增加,而 ABT-737 可以通过上调NIX的表达,促进线粒体自噬,降解Tom20,缓解低氧诱导的PAH.
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Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1在大鼠肝纤维化不同阶段表达及意义
目的 观察Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)在大鼠肝纤维化过程中不同阶段的表达.方法 72只200~250g雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组36只、肝纤维化模型组36只.正常对照组即正常饲养,模型组即腹腔注射四氯化碳,2次/周,剂量2ml/kg.分别在3、6d、2、4、6、8周时间点随机选取6只大鼠处死,苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏组织的病理学变化,观察肝纤维化程度.免疫组织化学方法检测ROCK1的组织定位及表达.利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测不同时间段ROCK1基因mRNA转录水平的变化.结果 免疫组织化学结果显示,给药后3、6d、2、4、6、8周,正常对照组ROCK1阳性表达率分别为11%、15%、13%、11%、17%、14%;模型组ROCK1阳性表达率分别为14%、15%、52%、65%、75%、80%;差异有统计学意义(P=0.001).Real-time PCR检测显示ROCK1表达量(以对照组为1),模型组表达分别为1.018759、1.381913、1.831238、2.515323、2.257623、2.188587.结论 ROCK1在四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的过程中,其组织表达水平逐渐升高,说明Rho/ROCK通路可能是肝纤维化发生的另一条重要信号通路.
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胆管癌单胺氧化酶A对CD8+T细胞抗肿瘤免疫功能的影响
目的 观察胆管癌细胞株单胺氧化酶A(MAOA)对CD8+T细胞抗肿瘤免疫功能的影响.方法 采用Tet-on 3G诱导表达系统在人胆管癌细胞株中过表达MAOA;从正常人外周血中分离CD8+T细胞,分别与过表达MAOA及低表达MAOA的胆管癌细胞混合培养48h,流式细胞仪检测CD8+T细胞表达颗粒酶B、穿孔素、程序性死亡受体(PD)-1、细胞毒T淋巴细胞相关抗原(CTLA)-4的水平,检测各组CD8+T细胞的坏死和凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CD8+T细胞分泌干扰素(IFN)-γ的水平;CD8+T细胞分别与上述胆管癌细胞株混合培养48h进行肿瘤杀伤试验,检测各组肿瘤细胞释放乳酸脱氢酶(LDH)的水平.结果 与过表达MAOA胆管癌细胞组比较,低表达MAOA胆管癌细胞组的CD8+T细胞表达颗粒酶B、穿孔素减少(分别为44.2%比51.5%,P=0.000和51.8%比74.3%,P=0.000),表达PD-1及CTLA-4水平较高(分别为81.70%比21.30%,P=0.000和16.00%比8.49%,P=0.000),分泌IFN-γ减少[(7562.0±927.5)pg/ml比(10107.0±1162.0)pg/ml,P=0.229],CD8+T细胞凋亡比例较高(26.43%比13.35%,P=0.000),肿瘤细胞释放LDH水平较低[(12.70±1.49)%比(22.88±2.93)%,P=0.036],提示该组CD8+T细胞肿瘤杀伤能力降低.结论 胆管癌MAOA表达下调可抑制CD8+T细胞抗肿瘤免疫功能,MAOA可望作为调控胆管癌肿瘤免疫的新靶点.
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成人非恶性食管-气管/支气管瘘八例分析
非恶性食管气管瘘(TEF)发病率较低,是极具挑战性的临床疾病,病因复杂,包括感染、食管憩室破裂、外伤、医源性手术创伤、继发于机械通气等[1].我们分析8例成人非恶性食管-气管/支气管瘘施行手术的综合治疗结果,对成人非恶性食管-气管/支气管瘘的临床表现、诊断方法、手术治疗等进行评价.一、资料与方法我科2007年9月至2015年5月收治的非恶性食管-气管/支气管瘘8例,男5例,女3例;平均年龄38.4(22~52)岁.8例患者均反复咳嗽、咳痰及发热,先后被诊断为肺炎、支气管扩张和肺囊肿合并感染,长期反复行抗感染治疗,效果不佳.其中1例患者有肺部手术史.入院后行胸部CT检查,3例患者发现食管-气管间可疑瘘道,追问病史发现,8例患者均有长期进食或饮水呛咳史,遂行上消化道造影、气管镜、胃镜检查.选用泛影葡胺造影剂,口服后平卧位并反复翻身变换体位,8例患者均可见泛影葡胺造影剂溢入呼吸道内.
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阿托伐他汀对冠状动脉心脏病患者的非调脂作用
他汀类药物是较为广泛的降脂药物,其中以阿托伐他汀(ATV)具代表性,其不仅能有效降低三酰甘油(TC)和低密度脂蛋白(LDL)-C,对抗动脉粥样硬化外,还能通过改善内皮功能、对抗炎性因子和脂质氧化及改变斑块组成来改善冠状动脉粥样硬化患者的临床及预后.同时,亦有抗炎、抗氧化应激、改善内皮功能、调节免疫应答活性等作用来延缓动脉粥样硬化的进程[1-2].本研究旨在探讨阿托伐他汀在冠状动脉心脏病(以下简称冠心病)患者治疗中的非调脂作用.
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慢病毒介导RNA干扰抑制野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1基因对胆管癌细胞生长的影响
野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)和野生型p53关系密切,在恶性肿瘤的发生发展中具有重要作用.本研究中,我们拟探讨慢病毒介导RNA干扰抑制野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1基因对胆管癌细胞生长的影响.
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肝癌组织中结缔组织生长因子的表达及其对肝癌细胞生长的影响
肝癌组织中结缔组织生长因子(CCN2)为转化生长因子-β1 诱导的上皮细胞间质转化产生的下调介质,和多种恶性肿瘤的关系也比较密切.一、材料与方法1.材料:选择丽水市人民医院2011年1月至2015年12月肝细胞癌患者42例作为肝癌组及健康体检者42例作为对照组;收集42例肝细胞癌患者的肝癌癌组织和癌灶周围结缔组织,42例正常肝组织标本作为对照组织.
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肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂联合SB203580对心肌成纤维细胞增殖的影响
本研究旨在探索肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)能否通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路影响心肌成纤维细胞的增殖,以进一步揭示TWEAK促进心肌纤维化的作用机制.一、材料与方法1.动物及材料:出生1~3d的无特定病原体(SPF)级Wistar大鼠,体重为25~35g,由上海交通大学实验动物中心提供.重组人TWEAK(rhTWEAK)购自美国B&D公司;细胞计数试剂盒(CCK-8)、二喹啉甲酸(BCA)试剂盒均购自碧云天生物技术研究所;基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)单克隆抗体及辣根过氧化物标记的二抗均购于美国 Abcam公司.
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Noblp人类同源基因在食管癌组织中的表达及对食管癌细胞凋亡的影响
酵母基因Noblp人类同源基因(NOB1)与多种肿瘤的发生有关.NOB1蛋白在胃癌、肝癌、卵巢癌等多种癌症组织中表达异常上调.本研究中我们旨在探讨NOB1在食管癌中的作用.一、材料与方法选取2010年7月至2013年9月在郑州大学附属南阳中心医院确诊切除的食管癌患者食管癌组织及对应的癌旁组织各47例,提取组织蛋白,Western blot检测NOB1水平.人食管癌细胞Eca-109 用含有10%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液培养,用0.25%的胰蛋白酶消化传代.将NOB1小干扰RNA组(NOB1 siRNA)和对照组(siRNA control)用转染试剂Lipofectamine 2000转染至细胞中,同时设置对照组,对照组细胞中只加入转染试剂.培养48h后,Western blot检测细胞中NOB1、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡.
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人胚肾细胞株对脂多糖刺激的反应及关键基因的表达
人胚肾细胞株是研究Toll样受体(TLR)常使用的细胞[1].为更好地认识其特性,我们进行了相关研究.一、材料与方法1.细胞培养及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR):人胚肾细胞株293T、293A、HEK293采用杜尔伯科改良伊格尔培养基(DMEM)进行常规培养,总RNA抽提后行RT-PCR,引物均为自行设计.2.核因子-κB (NF-κB)活性检测及细胞因子表达:293T细胞转染500ng pGL4.32[luc2P/NF-κB-RE/Hygro]质粒和100ng pRL-TK质粒,脂多糖(5ng 24h)刺激后,双荧光素酶测定NF-κB 活性,液相芯片检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8的表达.
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沉默缺氧诱导因子-1α对结直肠癌SW480细胞生长增殖、侵袭迁移能力的影响
缺氧诱导因子(HIF)-1α可以通过调节恶性肿瘤细胞的增殖、血管生成、代谢、凋亡及转录等使恶性肿瘤适应缺氧的环境[1],HIF-1α在肾细胞癌等恶性肿瘤中表达增加,RNA干扰在恶性肿瘤的研究中被广泛应用[2].本研究中我们拟探讨沉默缺氧诱导因子-1α对结直肠癌SW480细胞生长增殖、侵袭迁移能力的影响.
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血栓弹力图在肝肾联合移植术中的应用(附八例报道)
肝肾联合移植手术(CLKT)是终末期肝病、肾病的佳治疗方法.由于肝脏对机体的凝血功能影响极大,肝移植术中凝血功能的调控尤为重要,血栓弹力图(TEG)能及时、准确、动态地反映肝移植术不同时期的凝血状况,指导血制品及各种治疗药物的应用[1].本研究对我院8例CLKT患者使用TEG监测凝血功能的变化,进一步探讨肝移植围手术期凝血调控的特点.
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小干扰RNA下调肠癌细胞SW480中Ezrin基因表达对细胞增殖和迁移能力的影响
Ezrin为膜细胞骨架连接蛋白,是ERM家族成员之一.研究已证实Ezrin蛋白参与细胞形态改变、细胞膜结构组建及细胞运动、黏附等相关信号的传导[1].Ezrin可在多种实体肿瘤如肺癌、胃癌、食道癌等肿瘤细胞运动、黏附、侵袭中发挥重要作用.近年来相关报道提示Ezrin基因的异常表达与多种恶性肿瘤的发生、发展及侵袭转移有关.本研究旨在观察小干扰RNA下调肠癌细胞SW480中Ezrin基因表达对细胞增殖和迁移能力的影响.
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微小RNA-22靶向调控异黏蛋白抑制人脑胶质瘤细胞增殖及促进细胞凋亡
本研究中旨在探讨微小RNA(miRNA,miR)-22靶向MTDH对脑胶质瘤细胞增殖凋亡的影响及机制.一、材料与方法1.一般资料:选取我院2014年5月至2016年5月神经外科手术切除的人脑胶质瘤组织及瘤旁组织保存的石蜡包埋标本30例,经病理检查证实为人脑胶质瘤.人脑胶质瘤U87细胞购自于中国科学院细胞库;miR-22 mimics、miR-22 inhibitor、miR-NC均购自广州锐博生物科技有限公司;B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(cleaved-Caspase-3)单克隆抗体购自美国Abcam公司.
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唑来膦酸治疗对骨质疏松相关腰椎骨折患者血管内皮生长因子表达和骨密度的影响
血管内皮生长因子(VEGF)参与骨发育和形成,增加成骨细胞的数量、类骨质和骨量[1].我们通过VAS疼痛评分、检测VEGF的表达和骨密度(BMD)值,观察唑来膦酸在骨质疏松(OP)相关腰椎骨折内固定术后的疗效.一、资料与方法1.材料:我院87例OP相关腰椎骨折内固定术后的患者资料(纳入标准[2]);VAS疼痛评分表;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(上海广锐生物科技有限公司);HOLOGIC双能X线骨密度仪(Discovery-Wi).
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成人微切口超选择性精索静脉高位结扎术42例
精索精脉曲张(VC)可引起不育[1].2012年1月至2016年4月,我们采用腹股沟内环口上方2~3cm切口对42例成年VC行超选择性精索内静脉高位结扎术,现报道如下.一、资料与方法1.临床资料:本组42例,男性,平均年龄26.6岁.左侧精索静脉曲张38例,右侧4例,病程1~8年.15例以疼痛(阴囊坠胀、睾丸痛、下腹会阴部胀痛、腹股沟区抽痛等)为主,9例诉阴囊皮肤潮湿,10例不育就诊,8例无症状.21例精液常规检查见液化异常、精子总数减少或活动力下降等.42例经彩色多普勒血流显像仪(CDFI)证实为原发性VC,其中11例精索精脉内径2.1~2.9mm,28例为3.0~3.9mm,3例>4.0mm.排除标准:双侧VC、重度肥胖和VC术后复发者.
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雌激素与肿瘤标志物联合检测女性肺腺癌患者
目的 观察女性肺腺癌患者血清中雌激素(E2)与肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)和细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)水平,并结合细胞实验探讨联合检测的意义.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测120例女性肺腺癌患者术前及术后1~3个月血清中雌激素E2以及肿瘤标志物CEA、CA125和CYFRA21-1的水平,并通过检测雌激素及其抑制剂转染的A549细胞中CEA、CA125和CYFRA21-1水平,分析联合检测的意义.结果 手术后1~3个月患者血清中E2与CEA、CA125、CYFRA21-1含量均较术前下降[(26.51±14.53)比(14.63±8.62)pg/ml;(41.53±18.43)比(7.66±1.88)ng/ml;(60.46±17.87)比(18.01±1.90)U/ml;(10.02±4.36)比(2.37±1.03)ng/ml],差异有统计学意义(P=0.001);且E2水平与CEA、CA125、CYFRA21-1水平变化呈正相关(P=0.001).细胞实验共分为4组:空白对照组、E2组、氟维司群组(雌激素受体拮抗剂,简称Ful组),E2+Ful组,结果显示4组中CEA、CA125、CYFRA21-1水平依次为E2组>E2+Ful组>空白组>Ful组,E2组较其余3组差异有统计学意义(P=0.001),E2+Ful组与空白组较Ful组差异有统计学意义(P=0.003).结论 联合检测血清中雌激素与肿瘤标志物水平有助于女性肺腺癌患者早期诊断及评价短期预后.
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谷氨酰胺免疫营养对有营养风险肝切除术患者肝功能、淋巴细胞计数及C反应蛋白的影响
目的 观察免疫制剂谷氨酰胺对有营养风险肝切除术患者肝功能、淋巴细胞计数及C反应蛋白的影响.方法 采用队列研究的方法,连续定点采集2011年1月至2015年12月于广州军区武汉总医院行肝切除术的患者,用营养风险筛查工具NRS2002评分标准,对NRS≥3分的患者纳入研究.观察并分析肝切除术患者术前、术后3、7d谷丙转氨酶(AST)、谷草转氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PAB)、胆碱酯酶(CHE)和淋巴细胞计数(LY)、C反应蛋白(CRP)以及术后感染性并发症发生率和住院天数等临床结局指标.结果 筛选出符合研究条件的患者143例,Gln组84例,对照组59例.两组肝功能相关指标ALT、AST、ALB、PAB、CHE比较,术前,术后3d差异均无统计学意义(P=0.833,0.661,0.326,0.453,0.276).术后7d,两组AST、CHE比较差异无统计学意义.术后7d,Gln组ALT、ALB、PAB[(54.5±38.0)U/L、(38.2±4.3)g/L、(175.7±17.6)mg/L]与对照组[(71.1±55.9)U/L、(34.6±5.2)g/L、(156.4±21.9)mg/L]比较差异有统计学意义(t=-2.116,4.503,5.827,P=0.036,0.019,0.001).Gln组与对照组CRP、LY术前,术后3d比较,差异均无统计学意义(P=0.173,0.248).术后7d,Gln组CRP[(32.4±15.4)mg/L]与对照组[(59.5±21.4)mg/L]比较差异有统计学意义(t=-6.180,P=0.012).两组术后7d LY比较差异无统计学意义(t=2.558,P=0.124).Gln组和对照组患者感染性并发症发生例数分别为3、7例(χ2=3.665,P=0.056),平均住院天数分别为(11.44±4.48)、(13.60±6.10)d(t=-2.439,P=0.016).结论 Gln免疫制剂有益于缓解肝切除术患者术后急性炎性反应,提升肝功能及淋巴细胞计数,减少感染性并发症发生率,缩短住院时间,改善患者预后.
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肾上腺髓质素2在心脏瓣膜术围术期的表达及预测心肌缺血再灌注损伤的影响
目的 观察肾上腺髓质素2(ADM2)在体外循环心脏瓣膜术围手术期表达及其在心肌缺血再灌注损伤(I/R)中的作用.方法 检测体外循环心脏瓣膜置换术20例患者在手术开始前(T0)、升主动脉阻断后30min(T1)、升主动脉开放后30min(T2)、升主动脉开放后6h(T3)、升主动脉开放后24h(T4)、升主动脉开放后48h(T5)及升主动脉开放后72h(T6)的ADM2浓度、肌钙蛋白T(cTnT)浓度.结果 cTnT在围手术期的表达与I/R心肌损伤一致(T0=0.010±0.000、T1=0.327±0.454、T2=1.702±1.679、T3=1.234±1.072、T4=0.926±0.706、T5=0.759±0.560、T6=0.532±0.359).ADM2在围手术期的表达变化特点:T0可检验出表达(T0=14.026±8.641),而后呈T1先下降(T1=4.489±3.701)、T2再升高(T2=26.635±12.542)、T3~T6再下降的变化过程(T3=17.090±7.810、T4=7.309±5.120、T5=9.442±5.828、T6=3.628±2.919);T6低于T0(P=0.001).结论 ADM2参与了体外循环心脏瓣膜手术心肌I/R病理生理过程.
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急性等容血液稀释在脊柱肿瘤手术中的应用
目的 探讨急性等容血液稀释(ANH)在脊柱肿瘤手术大出血中的应用价值.方法 选择择期全身麻醉下行脊柱肿瘤切除术患者100例,其中男52例,女48例,年龄39~62岁,根据美国麻醉医师协会(ASA) 麻醉病情评估分级为Ⅰ或Ⅱ级,随机分为两组:ANH(A)和对照组(C)每组50例.A组全身麻醉下行ANH,目标红细胞压积(Hct)32%,A组放血同时相同体积的羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液稀释,C组不做ANH,为对照组,记录ANH前(T1)、ANH后10min(T2)、肿瘤切除后大出血止血完成后(T3)、ANH自体血回输完成后10min(T4)4个时间点快速血栓弹力图(r-TEG)指标的动态变化[包括凝血因子活性(ACT)、反映纤维蛋白原功能:K、Angle;血小板大聚集率(MA)、MA后30min血栓纤溶百分比(EPL/LY30)].结果 A、C两组T1、T2时r-TEG指标无明显变化,差异无统计学意义;A组:T1与T3.T4比较,ACT值T1(101.0±8.0)
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四肢静脉血管畸形组织中67000层粘连蛋白受体基因的检测及其临床意义
目的 检测67000层粘连蛋白受体(67LR)基因在四肢静脉血管畸形组织中的表达,探讨67LR基因与四肢静脉血管畸形发生和进展的关系.方法 收集12例新鲜四肢静脉畸形组织标本,单纯性大隐静脉曲张组织标本12例做为对照组,采用Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测67LR的表达.结果 静脉畸形组和对照组67LR蛋白及mRNA的相对表达量分别为0.859±0.388、0.219±0.202和5.31×10-3±8.82×10-4、(4.93±5.41)×10-4;眼部静脉畸形组织中半乳糖凝集素-3在mRNA及蛋白水平上的表达量明显高于对照组(P=0.041,0.019),并随着病变侵及深度及范围的加重有递增的趋势.结论 67LR基因在四肢受累严重的组织中表达高于轻度病变或表浅者,其表达异常与静脉畸形局部侵袭发展关系密切,对该基因表达异常的检测,可用于判断局部侵犯程度.其四肢静脉血管畸形的发病机制可能与67LR基因的参与密切相关.
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长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18在人胃癌组织表达及其意义
目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(HCG18)在人胃癌组织表达及临床意义.方法 收集人胃癌和配对正常胃黏膜组织,采用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测组织中HCG18表达水平,分析其表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、组织分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期及脉管内有无癌栓等临床病理因素的关系.结果 在108例胃癌组织中HCG18阳性率为77.78% (90/108),而正常胃组织HCG18阳性率为2.78%(3/108).χ2=142.9,P=0.000,差异有统计学意义.进一步分析HCG18与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、组织分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期及脉管内有无癌栓等临床病理因素的关系.HCG18表达量与患者性别(χ2=1.122,P=0.289)、年龄(χ2=2.233,P=0.135)、肿瘤位置(χ2=0.302,P=0.960)、组织分化程度(χ2=1.218,P=0.544)均无明显相关,但与肿瘤直径(χ2=10.072,P=0.002)、肿瘤浸润深度(χ2=9.874,P=0.002)、淋巴结转移(χ2=5.214,P=0.022)、远处转移(χ2=4.800,P=0.028)、TNM分期(χ2=12.115,P=0.007)以及脉管内有无癌栓(χ2=7.902,P=0.005)均显著相关.结论 检测HCG18有助于胃癌基因诊断.
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长链非编码RNA SH3PXD2A-AS1在胃癌术后肝转移诊断中的预测价值
目的 探讨长链非编码RNA SH3PXD2A-AS1在胃癌术后肝转移诊断中预测价值.方法 收集37例胃癌及其配对正常胃黏膜组织,采用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测组织中SH3PXD2A-AS1表达水平,分析其表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、组织分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、肝转移数目及肝转移发生时间等临床病理因素的关系.并作统计学分析处理.结果 在37例胃癌组织中SH3PXD2A-AS1阳性率为89.19% (34/37),而正常胃组织SH3PXD2A-AS1阳性率为5.41% (2/37).两者差异有统计学意义(χ2=55.392,P=0.000).SH3PXD2A-AS1表达量与患者性别(χ2=1.718,P=0.190)、年龄(χ2=0.560,P=0.756)、肿瘤位置(χ2=2.839,P=0.242)、组织分化程度(χ2=0.924,P=0.336)均无明显相关,但与原发灶直径(χ2=4.788,P=0.029)、肿瘤浸润深度(χ2=8.815,P=0.012)、淋巴结转移(χ2=6.801,P=0.009)、肝转移数目(χ2=10.157,P=0.001)、肝转移发生时间(χ2=6.903,P=0.032)均显著相关.结论 SH3PXD2A-AS1在胃癌术后肝转移诊断中具有预测价值.
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右美托咪定对非体外循环下冠状动脉旁路移植术患者的心肌保护作用
目的 观察右美托咪定对非体外循环下冠状动脉旁路移植术患者的心肌保护作用.方法 择期行非体外循环下冠状动脉旁路移植术患者57例,年龄43~74岁,性别不限,美国纽约心脏病学会(NYHA)分级Ⅰ~Ⅱ级,美国麻醉师协会(ASA)分级Ⅱ~Ⅲ级,近期无急性心肌梗死、心力衰竭史,无心脏手术史,无明显肝、肾、肺功能异常.采用计算机随机软件将患者分为两组:对照组(Control组)和右美托咪定组(Dex组).常规麻醉诱导前,Dex组静脉泵注1μg/kg负荷剂量的右美托咪定,10min泵注完毕.随后以0.5μg/(kg·h)泵注至手术结束;Control组以同样方式泵注等量生理盐水替代Dex,其余麻醉用药均相同.分别于入室后(T0)、负荷剂量注射完毕后(T1)、麻醉诱导前(T2)、气管插管后(T3)、血管吻合完毕(T4)、手术结束即刻(T5)记录患者动脉收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、心率(HR);于T0、手术结束后3h(T6)、手术结束后24h(T7)留取静脉血样本5ml,检测高敏肌钙蛋白T(hs-cTnT)浓度;记录患者手术时间、重症监护室(ICU)停留时间,并随访术后14d内心律失常发生率、心肌梗死发生率及患者死亡率.结果 在T3、T4、T5时点SBP,Dex组[(127.70±10.40)、(121.60±7.33)、(121.30±7.24)mmHg(1mmHg=0.133kPa)]较Control组[(139.00±13.09)、(137.20±10.50)、(142.00±9.00)mmHg]显著降低(P=0.000),T4、T5时点DBP,Dex组[(82.43±8.79)、(82.87±6.61)mmHg] 较Control组[(96.93±10.17)、(101.3±9.89)mmHg]显著降低(P=0.000);T2至T5时点HR,Dex组[(67.97±5.08)、(66.93±4.76)、(68.43±4.47)、(66.53±4.59)次/分]均显著低于Control组[(77.33±7.28)、(77.87±8.25)、(77.40±7.40)、(75.43±7.27)次/分](P=0.000).在T6、T7时点hs-cTnT浓度,Dex组[(124.3±55.8)、(101.3±41.8)ng/L]较Control组[(152.2±52.5)、(122.5±47.6)ng/L]均有一定程度降低,但差异无统计学意义(P=0.057、0.079).结论 右美托咪定可维持非体外循环下冠状动脉旁路移植术患者围术期血流动力学稳定、减轻心肌缺血再灌注损伤,具有心肌保护作用.
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R.E.N.A.L.评分系统在肾部分切除术中的应用
目的 探讨肾脏肿瘤测量评分系统(R.E.N.A.L.评分系统)在肾部分切除术中的临床应用价值,并分析影响肾部分切除术危险因素.方法 分析83例行肾部分切除术患者的临床资料,采用R.E.N.A.L.评分系统将肾癌患者分为低难度组、中难度组、高难度组,比较分析各组间手术时间、术中出血量、热缺血时间、术后住院时间、术后血肌酐、术后并发症等围手术期指标差异,并分析R.E.N.A.L.评分与术后并发症的关系,同时运用Logistic回归分析影响肾部分切除术效果的可能危险因素.结果 83例患者中低难度组29例(34.94%),中难度组43例(51.81%),高难度组11例(13.25%);在手术时间、术中出血量、热缺血时间、术后并发症方面R.E.N.A.L.评分低的患者低于R.E.N.A.L.评分高的患者(F/χ2=17.300、28.980、7.160、12.860、P=0.000、0.000、0.001、0.073);随着R.E.N.A.L.评分升高,肾部分切除术患者术后并发症的Clavien分级发生率呈上升趋势,但差异均无统计学意义(P=0.788、0.081、0.368、0.133);Logistic回归分析显示术前低蛋白血症、手术时间、肿瘤大小和住院时间是影响肾部分切除术手术效果的危险因素.结论 R.E.N.A.L.评分系统是一种肾肿瘤手术难度评价的有效方法,术前采用R.E.N.A.L.评分系统区分肿瘤复杂程度有助于术者选择合适的手术方式.影响肾部分切除术效果的因素主要有术前低蛋白血症、手术时间、肿瘤大小、住院时间等.
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不同类型脂肪乳剂对胃癌根治术患者术后疗效的影响
目的 观察不同类型脂肪乳制剂对胃癌根治术患者营养状况、肝肾功能及预后的影响.方法 输注结构脂肪乳218例患者设为结构甘油三酯(STG)组,输入中长链脂肪乳194例患者设为中/长链甘油三酯(MCT/LCT)组.分析两组患者营养状况[体重指数(BMI)、营养风险筛查(NRS2002)评分、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)和前白蛋白(PA)]、肝肾功能[谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、血尿素(Urea)和血肌酐(Cr)]及预后指标.结果 两组基线资料[性别、年龄、BMI、NRS2002评分、手术时间及术中出血量]比较差异均无统计学意义(P=0.750,0.266,0.585,0.555,0.058,0.134).两组TP、ALB、PA、AST、ALT于术前、术后3d及7d在一定趋势内变化,STG组检测指标变化趋势分别为:(63.67±7.97)g/L~(62.51±6.98)g/L、(37.23±5.57)g/L~(34.92±4.55)g/L、(174.87±58.23)g/L~(144.60±41.54)g/L、(28.59±16.10)U/L~(29.59±19.22)U/L、(24.08±28.75)U/L~(25.96±21.73)U/L;MCT/LCT组分别为:(64.28±8.22)g/L~(61.00±6.56)g/L、(37.55±5.42)g/L~(33.09±3.89)g/L、(179.08±59.79)g/L~(132.10±42.39)g/L、(29.11±15.39)U/L~(40.04±46.13)U/L、(24.46±28.17)U/L~(35.30±41.87)U/L,两组变化趋势比较差异均有统计学意义(P=0.024,0.001,0.009,0.038,0.030).两组TBIL、Urea和Cr于术前、术后3d及7d变化趋势比较差异均无统计学意义(P=0.560,0.242,0.954).两组患者的术后肛门排气时间、术后7d体重变化比较,差异有统计学意义(P=0.030,0.023),而吻合口漏、切口感染率及住院时间比较差异无统计学意义(P=0.900,0.250,0.696).结论 胃癌根治术患者应用结构脂肪乳肠外营养支持比物理混合中/长链脂肪乳更有优势,前者加快合成代谢,改善机体营养状况,保护肝功能,促进胃肠道功能恢复,促进胃癌患者术后恢复.
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卷曲螺旋结构域67蛋白和B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义
目的 观察甲状腺乳头状癌(PTC)及癌旁甲状腺组织中卷曲螺旋结构域蛋白67(CCDC67)与B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)表达水平.方法 应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测57例PTC癌组织及癌旁组织石蜡切片CCDC67蛋白、bcl-2蛋白的表达,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测57例PTC组织石蜡切片凋亡指数(AI).结果 CCDC67蛋白在PTC组织的表达率为43.86%(25/57),在癌旁组织中高表达(96.49%,55/57),bcl-2蛋白在PTC组织表达率为57.89%(33/57),在癌旁组织中的表达率为15.79%(9/57).CCDC67蛋白在PTC组织中的表达与肿瘤大小、TNM分期、病理分级、淋巴结转移因素中表达率有关(χ2=3.944、4.711、6.068、7.143,P=0.047、0.030、0.014、0.008).bcl-2蛋白在PTC组织中的表达与TNM分期、病理分级、淋巴结转移因素中表达率差异有关(χ2=8.757、4.765、8.449,P=0.003、0.029、0.004).CCDC67蛋白和bcl-2蛋白在PTC组织中的表达明显相关(r=0.400,P=0.003).PTC组织中CCDC67蛋白阳性表达组AI高于CCDC67蛋白阴性表达组(t=12.812,P=0.000).结论 CCDC67蛋白和bcl-2蛋白和PTC的发生发展密切相关.CCDC67基因抑癌功能可能与其产物促进肿瘤细胞凋亡有关.
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Pokemon红系髓性致癌因子在结直肠腺瘤及结直肠癌组织的表达
目的 检测结直肠癌、结直肠腺瘤及正常结直肠黏膜中Pokemon的表达,探讨结直肠腺瘤恶变过程中Pokemon的作用及价值.方法 收集结直肠癌60例、结直肠腺瘤80例、结直肠正常组织40例.采用免疫组织化学技术及荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测Pokemon在结直肠癌、结直肠腺瘤及正常结直肠黏膜中的表达.结果 免疫组织化学技术结果显示正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤、结直肠癌中Pokemon的阳性表达率分别为25.0%、51.2%、80.0%,三者之间差异有统计学意义(P=0.000).结直肠管状腺瘤、结直肠混合性腺瘤、结直肠绒毛状腺瘤中Pokemon的阳性表达率分别为33.3%、53.3%、75.0%,差异有统计学意义(P=0.015).Pokemon的表达与淋巴结转移(P=0.040)、肿瘤的分化程度(P=0.004)、Dukes分期(P=0.014)有关,而与年龄(P=0.947)、性别(P=0.795)无明显相关.荧光定量PCR显示Pokemon特异性扩增,Pokemon在正常结直肠黏膜、结直肠管状腺瘤、结直肠混合性腺瘤、结直肠绒毛状腺瘤、结直肠癌组织中的表达分别为0.981±0.189、2.024±0.226、3.357±0.262、5.006±0.281、6.450±0.216,F=432.884,P=0.012.结论 Pokemon参与了结直肠腺瘤、结直肠癌的发生与发展.
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肝纤维化与转化生长因子-β1关系的研究进展
转化生长因子-β1(TGF-β1)是强的肝纤维化促进剂.它既能抑制肝细胞、内皮细胞、上皮细胞的增殖,促进细胞外基质(ECM)的合成,又可以诱导肝细胞的凋亡,促进肝星状细胞(HSC)活化.了解TGF-β1致肝纤维化的作用机制,对肝纤维化的诊断和治疗有重要意义.
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3D打印技术在股骨头坏死治疗中的应用
3D打印技术是一种快速成型技术,通过重建的三维数字模型,将其分割成为层状后逐层堆积成为实体模型.本文主要讨论3D打印技术在股骨头坏死治疗中的应用及与股骨头坏死常规治疗方法进行比较.后根据3D打印的技术特点,分析3D打印未来的发展趋势.
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生物分子材料在骨再生修复中的应用
骨折愈合是机体内复杂反应过程,多种因子参与其中,实现骨的再生修复.相关生物分子材料的临床应用很好解决了临床工作中诸如骨不连、骨缺损、供骨区并发症等问题,但也存在一定的局限性.本文检索相关生物分子新应用进展,并予以综述.
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人工合成水凝胶修复脊髓损伤的研究现状及展望
目前对脊髓损伤后神经轴突的再生及功能重建尚无有效的方法.随着神经组织工程及再生医学的发展,发现水凝胶材料能够为神经元及轴突生长提供结构支持,同时可作为载体搭载各种药物(促神经再生活性因子及基因等)及种子细胞(神经干细胞、施旺细胞、骨髓间充质干细胞等)促进脊髓损伤区域神经轴突的再生及突触连接的重建,为脊髓损伤的治疗带来了新希望.其中,人工合成水凝胶生物材料是当前脊髓损伤修复及重建领域的研究热点.本文就人工合成水凝胶材料的类型、制备方法及在脊髓损伤修复及重建中的作用研究现状及发展趋势作一述评.
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雌激素对铁蓄积小鼠骨代谢的影响及机制
目的 观察雌激素对铁蓄积小鼠骨量、骨转换指标及氧化应激的影响.方法 建立高铁小鼠模型,将小鼠随机分为对照组(Con组)、雌激素正常的高铁组(F组)、雌激素缺乏的去势组(OVX组)、雌激素缺乏的高铁去势组(F+OVX组).Con组及OVX组注射生理盐水,余两组注射枸橼酸铁胺(FAC),4周后对股骨远端行普鲁士蓝铁染色,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清铁蛋白(Fer)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素、骨转换指标Ⅰ型胶原C端肽(CTX)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP-5b)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);股骨远端微计算机断层扫描技术(Micro-CT)三维分析,提取各组小鼠股骨骨髓细胞进行破骨细胞培养,TRAP-5b染色观察破骨细胞分化.结果 F组[(335.30±44.10)μg/L]及F+OVX组[(324.80±38.60)μg/L]血清铁蛋白含量明显升高(P=0.000),且股骨远端铁染色着色明显.ELISA结果示:雌激素正常的F组与Con组比较,CTX、TRAP-5b、MDA、SOD组间差异无统计学意义,F组ALP及骨钙素表达量较Con组明显降低(P=0.000、0.002);而雌激素缺乏的两组,铁剂干预后,MDA、TRAP-5b、CTX明显升高(P=0.004、0.000、0.000),SOD、ALP、骨钙素则降低(P=0.000、0.000、0.002).Micro-CT分析结果表明:雌激素存在时,对照组与铁干预组骨密度及相关指标差异无统计学意义;雌激素缺乏时,与OVX组比较,F+OVX组骨量下降更为严重(P=0.000).TRAP染色显示雌激素正常时,各组小鼠破骨细胞数差异无统计学意义(P=0.501);雌激素缺乏时,F+OVX组破骨细胞数明显高于OVX组(P=0.000).结论 雌激素存在情况下,FAC对骨量、骨吸收影响甚微;雌激素缺乏情况下,FAC能显著增强破骨细胞活性,使骨量下降.
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牵张应力通过钙离子途径影响小儿骨髓间充质干细胞早期反应基因的表达
目的 探讨牵张应力和小儿体外骨髓间充质干细胞内钙离子变化的关系.方法 原代培养骨髓间充质干细胞,检测其体外增殖能力.利用不同牵张应力对骨髓间充质干细胞进行干预,采用流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化,通过Western blot和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测c-Fos、c-Jun、c-Myc蛋白和mRNA的表达.结果 (1)对不同时间牵张应力作用下小儿骨髓间充质干细胞游离钙离子浓度进行检测显示,在刺激5min时钙离子浓度达到大值(P=0.021),之后逐渐下降.(2)Real-time PCR检测结果显示,c-Fos、c-Jun、c-Myc基因mRNA表达水平在牵张应力刺激0.5h时显著升高,分别为对照组的(3.28±0.56)、(4.39±0.42)和(6.34±0.46)倍(P=0.000),之后随时间延长逐渐减弱,整体呈现出先增强,持续,再减弱的状态.干预 4h,各基因表达水水平基本恢复至干预前的水平.(3)Western blot检测结果显示,牵张应力刺激 1h 后,细胞内c-Fos(P=0.000)、c-Jun(P=0.015)、c-Myc(P=0.000)蛋白表达均呈现出明显增强,实验组明显强于对照组.结论 牵张应力会对小儿体外骨髓间充质干细胞内钙离子浓度以及各早期反应基因蛋白的表达产生一定的影响,钙离子通道可能会对各早期反应基因蛋白的活化予以调控.
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γ-分泌酶抑制剂对毛囊干细胞诱导分化为血管内皮细胞效率的影响
目的 观察Notch信号通路的特异性阻断剂——γ-分泌酶抑制剂(DAPT)对毛囊干细胞(rHFSCs)诱导分化为血管内皮细胞(ECs)效率的影响.方法 运用改良的rHFSCs分离培养、纯化鉴定的方法得到种子细胞,并用透射电镜观察其内部结构.用10μg/L血管内皮生长因子165(VEGF165)作为诱导因子进行诱导,流式细胞仪检测分化效率.用不同浓度DAPT(0.5、1.0μmol/L)进行抑制,将他们分为诱导组和抑制组.两组细胞均处理1周,用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot法分别检测两组 CD31、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin) mRNA和蛋白表达,联合DiL标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)吞噬功能检测和体外成血管实验形成实验进行对比,综合评价DAPT在抑制Notch信号通路后对rHFSCs诱导分化为ECs的影响.结果 改良分离、培养、纯化的rHFSCs克隆能力好,活力强.流式细胞仪检测β1、α6整合素、细胞角蛋白15(CK15)、p63呈高表达,分别为98.9%、97.9%、68.1%和98.5%;低弱表达CD31、VE-cadherin,分别为13.6%和17.9%;透射电镜显示细胞处于原始状态.诱导1周后,流式细胞仪检测高表达内皮细胞标志物CD31和VE-cadherin,分别为61.5%和95.9%.抑制Notch信号通路后两组FQ-PCR结果显示,CD31变化差异无统计学意义(P=0.136)、VE-cadherin mRNA 变化差异有统计学意义(P=0.003),Western blot法得到CD31、VE-cadherin蛋白表达明显降低(P=0.000),体外Dil-ac-LDL吞噬功能,成血管形成能力明显减弱.结论 DAPT通过阻断Notch信号通路,虽没有显著影响 CD31、VE-cadherin mRNA水平,但能较好抑制CD31、VE-cadherin蛋白表达,体外吞噬和成血管的能力,从而减低rHFSCs诱导分化为ECs的效率.
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唑来膦酸抑制破骨细胞分化抗辐射后小鼠骨量丢失
目的 观察唑来膦酸(ZA)对破骨细胞(OC)分化、增殖和骨髓微环境的影响,探讨ZA抗辐射(IR)后小鼠骨量丢失的机制.方法 50只雄性BALB/c小鼠经6.0Gy 60Co γ射线一次性全身辐射后,随机分成辐射组10只,高、中、低剂量治疗组30只和骨髓输注组10只.治疗组分别按0.00025、0.00050、0.00100mg/g进行尾静脉注射ZA,骨髓输注组4h内尾静脉回输异体骨髓细胞2×106个.4周后应用小动物成像仪测定小鼠骨密度,流式细胞术检测骨髓中破骨原始细胞(CD34+CD115+细胞)、破骨前体细胞[CD34+CD115+核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)+细胞]及其活化细胞[CD34+CD115+RNAKL+CXC趋化因子受体4(CXCR4)+细胞]的百分比,骨及骨髓病理分析骨小梁及破骨前体细胞的变化,小动物五分类血细胞分析仪检测外周血破骨前体细胞(单核细胞)的百分比及绝对值.流式微球阵列(CBA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中OC活化相关因子的含量.结果 辐射组,低、中、高剂量治疗组,骨髓输注组小鼠骨密度分别为(0.51±0.06)、(1.26±0.17)、(2.24±0.29)、(1.27±0.20)、(2.52±0.23)g/cm3.辐射组显著低于各治疗组和骨髓输注组(P均为0.000),中剂量治疗组高于低剂量治疗组和高剂量治疗组(P=0.000、0.942),与骨髓输注组接近(P=0.004).中剂量治疗组CD34+CD115+细胞、CD34+CD115+RANKL+细胞、CD34+CD115+RANKL+CXCR4+细胞的百分比分别为(4.09±0.97)%、(4.11±1.64)%、(18.71±6.23)%,显著低于辐射组[(7.19±1.11)%、(9.01±4.06)%、(40.16±10.31)%],差异有统计学意义(P=0.000、0.000、0.000).与骨髓输注组[(10.14±2.13)%、(2.86±0.82)%、(11.86±3.39)%]接近,差异有统计学意义(P=0.000、0.241、0.056).辐射组小鼠骨病理组织表现为骨小梁变细、中断、疏松,分布不均匀,含大量脂肪空泡充填,局部出现囊性区,原始细胞比例显著下降,骨髓间质血窦充血,局部可见多核细胞.经ZA治疗后,各治疗组小鼠骨小梁增多增粗,髓腔内原始细胞数量升高,变性组织明显减少,其中以中剂量治疗组为明显.骨髓输注组小鼠骨小梁致密丰满,排列整齐,原始细胞比例明显增多,造血组织结构尚完整.结论 ZA可改善骨髓微环境,刺激骨髓的自我修复,原始细胞数量增加,并抑制其向OC增殖分化,改善IR后小鼠骨量丢失情况.
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铁调素基因敲除后对铁蓄积小鼠骨代谢指标的变化
目的 观察铁调素基因敲除后铁蓄积小鼠骨代谢指标变化.方法 C57背景小鼠分为野生型(WT)及铁调素基因敲除小鼠(KO),每组各5只雄性,检测小鼠血清铁蛋白、血清成骨指标碱性磷酸酶(ALP)、血清破骨指标抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP-5b)、股骨远端micro-CT扫描、骨组织相关基因.结果 血清铁蛋白WT组(4.88±0.74)μg/L,KO组血清铁蛋白(17.62±0.84)μg/L,KO组显著升高(P=0.013);WT组血清ALP(9.42±0.74)ng/ml,KO组血清ALP(5.41±0.63)ng/ml,KO组显著降低(P=0.038);WT组血清TRAP-5b(72.36±1.85)ng/ml,KO组血清TRAP-5b(132.64±2.16)ng/ml,KO组显著升高(P=0.018);micro-CT三维重建显示KO组骨量丢失;骨组织实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)结果显示KO组核心结合蛋白因子2(Runx2)基因表达显著下降,TRAP-5b基因表达显著上升.结论 铁调素基因敲除后铁蓄积小鼠模型骨量丢失,成骨指标受抑制,破骨指标活跃.
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色素上皮衍生因子对高剂量地塞米松作用下MC3T3-E1细胞成脂转分化及骨保护素/核因子-κB受体活化因子配体表达的影响
目的 观察色素上皮衍生因子(PEDF)对高剂量地塞米松(DEX)作用下MC3T3-E1细胞成脂转分化及骨保护素(OPG)/核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响.方法 将体外培养的MC3T3-E1细胞分为5组,分别为对照组、DEX(10-6mol/L)组、PEDF干预DEX组,PEDF干预DEX组又按照加入的PEDF分为3个浓度组,依次为2、10、50nmol/L组.各组细胞培养14d时采用倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,进行细胞染色[碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色]及通过免疫荧光法检测OPG及RANKL的表达,并运用Western blot检测细胞OPG及RANKL蛋白的表达.结果 成骨细胞 ALP染色呈阳性,免疫荧光化学检测RANKL、OPG表达阳性.在高剂量DEX作用下,MC3T3-E1细胞发生明显成脂转分化,而PEDF的干预明显地抑制了这种转分化.与对照组(0.790±0.020)比较,高剂量DEX组(0.910±0.015)明显地上调了RANKL的表达水平(P=0.008).加入PEDF后,RANKL的表达水平随着PEDF呈剂量依赖性下调.而OPG的表达水平随着PEDF呈剂量依赖性地增高.对比各组OPG/RANKL的表达水平,与 DEX组(0.560±0.012)比较,PEDF干预DEX各亚组的OPG/RANKL的表达水平(0.821±0.025、1.290±0.018及1.405±0.120)随着PEDF的加入出现显著上调(P=0.003、0.000、0.019).结论 PEDF可有效地逆转高剂量DEX导致的成骨细胞成脂转分化,并且上调成骨细胞的OPG/RANKL的表达水平,从而保护成骨功能.
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全反式维甲酸和骨形态发生蛋白-9对骨肉瘤细胞143B细胞株增殖的影响
目的 观察全反式维甲酸(ATRA)和骨形态发生蛋白-9(BMP-9)对骨肉瘤细胞143B细胞株增殖能力的影响.方法 选择人骨肉瘤细胞143B细胞株作为研究对象分为ATRA组(单用ATRA)、BMP-9组(单用BMP-9)、联合组(联合应用ATRA和BMP-9)和对照组(二甲基亚砜),采用噻唑蓝(MTT)和流式细胞仪分析细胞增殖,采用Western blot分析细胞增殖及不同组别处理方案之后143B细胞株BMP-9蛋白的表达.结果 ATRA组在10μmol/L浓度下24、48、72h的增殖率为(94.1±1.6)%、(93.0±1.4)%、(86.5±1.7)%,在20μmol/L浓度下24、48、72h的增殖率为(82.6±2.3)%、(76.5±2.1)%、(68.4±2.4)%,在40μmol/L浓度下24、48、72h的增殖率为(72.4±3.5)%、(65.3±3.1)%、(60.2±2.2)%,在60μmol/L浓度下24、48、72h的增殖率为(64.9±2.9)%、(53.7±4.1)%、(41.5±4.9)%,ATRA能够有效抑制143B细胞的增殖,呈浓度依赖性,且随着药物作用时间增加抑制作用增强(P=0.015),浓度为20μmol/L时ATRA已经能明显抑制143B细胞的生长(P=0.009);处理48h后,ATRA组在20μmol/L浓度下BMP-9 mRNA表达水平和BMP-9蛋白表达水平分别为2.1±0.2、1.4±0.1;在40μmol/L浓度下BMP-9 mRNA表达水平和BMP-9蛋白表达水平分别为2.7±0.3、2.0±0.3;在60μmol/L浓度下BMP-9 mRNA表达水平和BMP-9蛋白表达水平分别为2.9±0.5、2.3±0.6,无论何种浓度下的ATRA组都会表现出143B细胞中BMP-9表达水平的增高(P=0.027),且呈浓度依赖性;BMP-9组24、48、72h的细胞增殖率为(117.4±3.5)%、(119.4±2.4)%、(116.9±3.0)%,ATRA组(40μmol/L)24、48、72h的细胞增殖率为(72.4±3.5)%、(65.3±3.1)%、(60.2±2.2)%,联合组24、48、72h的细胞增殖率为(51.2±2.4)%、(43.9±2.7)%、(36.5±4.1)%,BMP-9能够促进143B细胞的增殖(P=0.000),但联合ATRA应用后被翻转,增强了ATRA的抗增殖效果.结论 ATRA能够抑制骨肉瘤143B细胞的增殖,同时上调内源性BMP-9水平,单独引入外源性的BMP-9会促进骨肉瘤143B细胞增殖,但联合应用ATRA和BMP-9则能够翻转BMP-9的作用,增强ATRA对143B细胞增殖抑制的效果.
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转基因小鼠脊髓源神经干细胞移植于脊髓损伤模型后的成活、分化、迁移
目的 将从绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠胚胎脊髓分离培养的神经干细胞(NSCs)移植到小鼠脊髓损伤模型损伤处,观察小鼠运动恢复和NSCs在脊髓内的存活、迁移和分化,探讨NSCs在临床治疗脊髓损伤的作用.方法 采用简单随机化分组方法将小鼠随机分为空白组(n=10)、损伤组(n=30)、细胞移植组(n=30),制备损伤模型并在损伤处进行NSCs移植,于时间节点进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分、斜板实验和免疫组织化学检测.结果 击打后小鼠双后肢均瘫痪,BBB评分为0分,移植2周后评分开始出现差异,移植组提高到(4.50±1.04)分,损伤组为(2.17±0.75)分(P=0.023);4周时移植组为(8.17±1.47)分,损伤组为(5.33±1.03)分(P=0.015);6周时移植组为(10.8±1.47)分,损伤组为(8.33±0.81)分(P=0.017);8周时差异大,移植组为(15.50±1.37)分,损伤组为(11.17±1.16)分(P=0.016).斜板实验中在1周时移植组为(17.17±3.18)°,损伤组为(14.83±3.06)°;2周时移植组为(23.33±4.27)°,损伤组为(18.17±2.40)°;4周后两组比较差异有统计学意义,移植组为(33.83±6.30)°,损伤组为(23.50±1.76)°(P=0.024),6周时较4周变化不大,移植组为(37.50±8.50)°,损伤组为(27.67±3.56)°(P=0.029),8周时显著提高,移植组为(46.83±6.05)°,损伤组为(36.33±7.23)°(P=0.019).荧光检查结果显示移植的NSCs会在体内存活并迁移,部分保持未分化状态,少量分化为胶质细胞,向神经元分化较少.结论 NSCs对脊髓损伤的恢复有促进作用,这种作用是通过移植细胞后形成一个有利于恢复的微环境,增加向神经元分化的比例来促进恢复.
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炎性因子相关椎间盘退变基因表达谱芯片的生物信息学研究
目的 研究炎性因子相关退变椎间盘基因表达谱芯片数据,应用生物信息学方法挖掘炎性因子作用后退变椎间盘的关键差异表达基因,探讨其相关信号通路及相互作用网络.方法 选择同一芯片平台的两组椎间盘退变患者的基因表达谱数据集:GSE41883[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作用于退变椎间盘细胞]和GSE27494[白细胞介素-1β(IL-1β)作用于退变椎间盘细胞],采用R语言分别筛选两组数据集中的差异表达基因,经Excel软件交集,选择两组数据集中共有的差异表达基因,利用DAVID、STRING软件对其进行初步功能聚类、信号通路及相互作用关系分析.结果 TNF-α、IL-1β分别作用于退变椎间盘细胞后共同发生变化的差异表达基因255条,其中上调141条,下调114条;基因本体注释分析表明这些差异表达基因主要与细胞因子活性、生长因子活性、炎性反应、损伤后反应等相关;信号通路分析表明这些差异表达基因主要涉及到细胞因子相互作用、凋亡、NOD样受体等信号通路相关;相互作用网络分析表明前列腺素内过氧化物酶2(PTGS2)、细胞间黏附分子1(ICAM1)、肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)等基因可能在椎间盘退变中起关键作用.结论 应用生物信息学方法分析炎性因子作用后退变椎间盘基因表达谱发现,ICAM1等基因可能通过炎性反应在椎间盘退变的发生发展中起一定作用,生物信息学方法可发现一些潜在靶基因.
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细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶抑制剂4a信号通路对人骨骼肌成肌细胞衰老的诱导及对线粒体膜电位的调控
目的 观察细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶抑制剂4a(INK4a)信号通路对线粒体功能的影响.方法 重组慢病毒载体pLVX-p16INK4a被构建出并感染第3代人骨骼肌成肌细胞,用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法与Western blot鉴定p16INK4a基因转录与蛋白表达,7d后,用衰老相关β-半乳糖苷酶染色鉴定细胞衰老程度.同时,用JC-1染料染色和流式细胞仪分别检测线粒体膜电位水平.结果 成功转染了p16INK4a的成肌细胞出现明显衰老表型,其细胞线粒体膜电位为(-40.287±12.663)mV,较阳性对照(CV)及阴性对照(NC)组的(-9.267±1.332)mV和(-6.967±2.031)mV明显下降(P=0.000),而p16INK4a蛋白和mRNA相对表达量分别为45.25±8.21和33.89±7.87,明显高于CV组的10.18±2.69和5.26±1.92及NC组的9.41±1.70和7.16±1.86(P=0.000).结论 INK4a信号通路的上调导致了人骨骼肌成肌细胞的衰老,INK4a通路是人骨骼肌成肌细胞衰老的直接诱因;另外,INK4a通路能对线粒体通路产生作用,使线粒体膜电位下降,激发线粒体通路,间接加速成肌细胞的衰老.
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转化生长因子-β1基因修饰的间充质干细胞移植修复兔关节软骨损伤的研究
目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)基因转染间充质干细胞(MSCs)能否提高关节软骨缺损的修复质量.方法 将TGF-β1基因转入关节软骨种子细胞MSCs中,并与涂覆多聚赖氨酸的复合外消旋聚乳酸(PDLLA)可降解多孔仿生基质材料复合移植,修复同种异体兔关节软骨缺损.以单纯空载体转染MSCs为对照,通过组织学、电镜及免疫组织化学等方法检测.结果 (1)转基因细胞-仿生基质材料体外复合培养扫描电镜观察证实TGF-β1基因修饰的MSCs的增殖分化活性明显优于对照组,差异有统计学意义(χ2=5.203,P=0.013).(2)体内实验组织学及透射电镜结果显示实验组新生组织为透明样软骨,关节面平整,软骨下骨完全再生,与宿主骨软骨结合紧密,未见免疫排斥反应,对照组则新生软骨质量欠佳,与宿主骨整合欠佳,有不同程度的免疫排斥反应.(3)免疫组织化学结果显示转基因细胞可继续表达TGF-β1,至少4周以上.(4)术后第24周实验组的大负荷、抗弯强度及载荷/位移比对照组分别提高了65.12%、40.78%及35.29%,差异有统计学意义(t=7.418、5.131、2.838,P=0.001、0.003、0.036).而实验组弹性模量与对照组比较提高了13.59%,差异无统计学意义(t=1.455,P=0.112).结论 TGF-β1基因修饰的MSCs-仿生基质材料能有效提高关节软骨缺损,特别是创伤和骨关节炎关节软骨缺损的修复质量.
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去铁胺对去势伴铁蓄积小鼠骨量的作用及机制
目的 探讨铁螯合剂甲磺酸去铁胺(DFO)对去势后枸橼酸铁铵干预的雌性小鼠骨量的影响及其作用机制.方法 选取2月龄C57BL/6雌性小鼠24只,随机分为去势(OVX)组、去势+铁剂干预组(OVX+Fe组)、去势+铁剂+去铁胺组(OVX+Fe+DFO组).3组均行双侧卵巢切除术,后两组在去势后1周采用每周0.12g/kg的枸橼酸铁铵干预6周,干预方法为腹腔注射,每周干预3次,OVX组采用同样方式和频次的生理盐水干预.随后OVX+Fe+DFO组采用每周4000mg/kg DFO干预2周,干预方法为腹腔注射,一日两次,其他两组给予同样方式和频次的生理盐水干预.干预结束后处死小鼠,微计算机断层扫描技术(Micro-CT)观察股骨远端骨微结构,普鲁士蓝染色观察股骨局部铁蓄积,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测骨组织骨保护素(OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的表达,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测小鼠血清铁蛋白、OPG和RANKL水平.结果 血清铁蛋白水平方面,OVX+Fe组[(408.90±17.20)μg/ml]明显高于OVX组[(87.53±3.73)μg/ml]和OVX+Fe+DFO组[(162.30±10.58)μg/ml,P=0.000].普鲁士蓝染色结果显示股骨铁蓄积OVX组＜OVX+Fe+DFO组＜OVX+Fe组.OVX+Fe组[(0.09±0.02)mg/mm3]比OVX组[(0.13±0.01)mg/mm3]的骨密度低(P=0.000),OVX+Fe+DFO组[(0.12±0.01)mg/mm3]比OVX+Fe组[(0.09±0.02)mg/mm3]的骨密度高(P=0.000).OVX+Fe组(0.75±0.15)骨组织OPG基因表达水平低于OVX组(1.00±0.20)和OVX+Fe+DFO组(0.89±0.15,P=0.019、0.012),OVX+Fe组(2.20±0.12)骨组织RANKL基因表达水平高于OVX组(1.00±0.13)和OVX+Fe+DFO组(1.30±0.20,P=0.000),OVX+Fe组(2.8±0.4)骨组织RANKL/OPG的表达比值高于OVX组(1.0±0.5)和OVX+Fe+DFO组(1.4±0.3,P=0.000).OVX+Fe组[(1.22±0.18)μg/L]血清OPG含量低于OVX组[(2.33±0.33)μg/L]和OVX+Fe+DFO组[(2.18±0.25)μg/L,P=0.000、0.015],OVX+Fe组[(484.30±22.87)ng/L]血清RANKL含量高于OVX组[(216.40±21.18)ng/L]和OVX+Fe+DFO组[(289.70±20.76)ng/L,P=0.000、0.017].结论 铁蓄积可能通过影响RANKL/核因子-κB受体活化因子(RANK)/OPG轴促进去势小鼠骨量丢失,DFO可以减少小鼠全身及骨组织局部铁蓄积从而恢复骨量.
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CD105+滑膜间充质干细胞的磁珠分选及成软骨能力研究
目的 使用磁珠分选技术(MACS)对滑膜间充质干细胞(SMSC)进行分选,对比分选和未分选SMSC的成软骨能力.方法 体外培养大鼠原代SMSC,用形态学观察和三系分化进行细胞鉴定.以CD105为一抗进行MACS,对筛选出的细胞进行免疫荧光和流式细胞学鉴定.用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测分选和未分选SMSC诱导后的Ⅱ型胶原(ColⅡ)、蛋白聚糖(Agg)、性别决定区Y 框蛋白9(SOX9)等成软骨指标,进行成软骨能力评价.结果 体外培养的SMSC可进行成骨、成脂、成软骨三系分化.MACS所得到的细胞免疫荧光和流式细胞学鉴定均为CD105阳性.与未分选组比较,成软骨诱导培养后CD105+SMSC阿利新蓝染色更深,并且ColⅡ(4.932±0.660比4.016±0.348;t=2.558,P=0.043),Agg(2.965±0.246比2.103±0.388;t=4.144,P=0.006),SOX9(2.836±0.316比2.143±0.347;t=2.953,P=0.026)各项成软骨指标表达均增高,差异有统计学意义.结论 磁珠分选法是一种有效分离出CD105+SMSC的方法,并且分选后的干细胞具有更强的成软骨能力.
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