中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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流体剪切力下微小RNA-222调节人髓核细胞c-fos蛋白的表达
目的 探讨流体剪切力作用下微小RNA(microRNA)-222调节人原代髓核细胞c-fos水平.方法 分组:原代人髓核细胞(NPC,n=24)随机平均分为4组:空白对照组(未经任何处理的NPC),在12 dyn/cm2×45 min流体剪切力加载条件下microRNA-222未干扰组(Control组)、microRNA-222过表达组(minic 222组)和microRNA-222沉默组(inhibitor 222组).Western blot检测各组黏着斑激酶(FAK)-细胞外信号调节激酶5(ERK5)信号通路中磷酸化ERK5(p-ERK5)、磷酸化丝裂原细胞外激酶5(p-MEK5)、丝裂原细胞外激酶5(MEK5)及其信号通路下游c-fos的蛋白表达.通过mimic RNA-222及inhibitor RNA-222对microRNA-222进行过表达或沉默,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)验证过表达或沉默效率,并检测各组c-fos的mRNA水平.结果 流体剪切力加载后,与流体剪切力加载前比较,髓核细胞MEK5蛋白表达降低(空白对照组477.00±25.28,对照组268.83 ±31.78),p-MEK5(空白对照组226.50±25.55,对照组369.00±22.15)、p-ERK5(空白对照组48.17±5.53,对照组85.67±13.32)、c-fos蛋白表达升高(空白对照组646.67±32.59,对照组754.67±37.44).过表达microRNA-222,流体剪切力加载后,与流体剪切力加载前比较,髓核细胞MEK5蛋白表达升高(对照组268.83±31.78,minic 222组374.50±17.21),p-MEK5(对照组369.00±22.15,minic 222组317.50±32.67)、p-ERK5(对照组85.67±13.32,minic 222组65.67±9.94)、c-fos蛋白表达降低(对照组754.67±37.44,minic 222组730.17±21.75).抑制microRNA-222,流体剪切力加载后,与流体剪切力加载前比较,髓核细胞MEK5蛋白表达降低(对照组268.83±31.78,inhibitor 222组176.83±20.88),p-MEK5(对照组369.00±22.15,inhibitor 222组453.00±30.86)、p-ERK5(对照组85.67±13.32,inhibitor 222组109.17±10.30)、c-fos蛋白表达升高(对照组754.67±37.44,inhibitor 222组850.33±33.49),c-fos mRNA表达量(空白对照组545.00±11.75,对照组562.17±28.90,minic 222组548.17±5.53,inhibitor 222组545.33±35.64)、ERK5蛋白表达量(空白对照组328.33±25.87,实验对照组309.83±25.31,minic 222组314.17±24.00,inhibitor 222组309.33±29.66)在各组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 流体剪切力通过抑制microRNA-222促进c-fos蛋白表达并上调髓核细胞骨架关键通路FAK-ERK5活性,加速髓核细胞退变.
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IQ结构域三磷酸鸟苷酶激活蛋白1的表达对甲状腺癌细胞增殖和侵袭的影响
目的 观察IQ结构域三磷酸鸟苷(GTP)酶激活蛋白1(IQGAP1)在甲状腺癌细胞增殖和侵袭中的作用.方法 通过Western blot对IQGAP1在甲状腺癌细胞中的表达进行分析,然后敲低IQGAP1表达后检测17β-雌二醇(E2)条件下雌激素受体α(ERα)的转录活性,以及细胞增殖和细胞迁徙.结果 甲状腺癌细胞内IQGAP1表达明显上调,为正常细胞的5.0倍(P＜0.05).敲低IQGAP1表达后甲状腺癌细胞增殖能力明显降低,24 h增殖率为79.27％,48 h为57.49％,72 h为55.14％ (P＜0.05),细胞迁徙率明显减低(细胞浸润数从115个降至45个),E2条件下ERα的转录活性显著下调(1.45降至0.28,P＜0.05).敲低ERα可阻断IQGAP1过表达引起的磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达上调(相对值分别从1.95降至0.40,1.75降至0.35,P＜0.05).结论 IQGAP1可与ERα相互作用,调节甲状腺癌进展过程中ERα的转录活性,影响甲状腺癌细胞的增殖和侵袭.
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右美托咪定对反复缺血/再灌注脑损伤小鼠学习记忆能力的影响
目的 观察右美托咪定(Dex)对反复缺血/再灌注(IR)脑损伤小鼠学习记忆能力的影响.方法 无特定病原体(SPF)级成年C57BL/6J小鼠60只,按照随机数字表法分为4组,每组15只.低剂量Dex组(Dex-L组)和高低剂量Dex组(Dex-H组)小鼠分别经腹腔注射Dex 25、50 μg/kg,30 min后夹闭双侧颈总动脉,IR组小鼠建立反复IR脑损伤模型;假手术组(Sham组)小鼠只分离双侧颈总动脉,但不夹闭.采用Morris水迷宫实验测试小鼠术前及术后的学习记忆能力,随后处死小鼠,留取海马组织并测定其湿/干重比(W/D)和总含水量(TCW),伊文斯蓝(EB)法检测血脑屏障的通透性,原位缺口末端标记法(IUNEL)检测海马组织细胞凋亡指数(AI).酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定海马组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)含量,计算MMP-9/TIMP-1比值.结果 与Sham组比较,IR组小鼠术后3、7d时的逃避潜伏期[(54.72±8.24)s比(19.29±4.56)s、(46.71±8.59)s比(23.73±5.59)s]及游泳距离[(4 789.51±677.28) mm比(2 122.84±543.83) mm、(4 987.84±884.42) mm比(1 123.93±369.38) mm]均延长(P＜0.05).与IR组比较,Dex-L和Dex-H组小鼠术后3、7d时的逃避潜伏期[(28.47±7.89)s、(21.84±6.12)s比(54.72±8.24) s;(32.62±6.78)s、(24.62±6.95)s比(46.71±8.59)s]及游泳距离[(2 834.75±554.83) mm、(2 234.75±490.83)mm比(4789.51±677.28) mm;(1 952.62±528.48) mm、(1 140.48±389.81) mm比(4987.84±884.42) mm]均缩短(P＜0.05).与Sham组比较,IR组小鼠海马组织W/D(4.94±0.67比3.46±0.45)、TCW(3.94±0.76比2.46±0.48)、AI[(35.15 ±7.97)％比(2.89±0.99)％]和脑组织EB含量[(19.3±4.6) μg/g比(10.4±3.1)μg/g]均升高(P＜0.05).与IR组比较,Dex-L组和Dex-H组小鼠海马组织W/D(4.32±0.54、3.78±0.51比4.94±0.67)、TCW (3.32±0.44、2.78±0.41比3.94±0.76)、AI[(26.67±6.43)％、(20.51±5.43)％比(35.15±7.97)％]和脑组织EB含量[(14.9±3.9)μg/g、(12.3±3.1)μg/g比(19.3±4.6) μg/g]均降低(P＜0.05).与Sham组比较,IR组海马组织MMP-9含量[(68.6±8.4) pg/ml比(38.7±4.6)pg/ml]升高(P＜0.05),TIMP-1含量[(36.3±5.6) pg/ml比(37.3±6.5)pg/ml]无明显升高(P＞0.05),MMP-9/TIMP-1比值(1.89±0.32比1.04±0.22)升高(P＜0.05).与IR组比较,Dex-L组和Dex-H组海马组织MMP-9含量[(50.8±6.3) pg/ml、(43.6±5.9) pg/ml比(68.6±8.4) pg/ml]均降低(P＜0.05),TIMP-1含量[(47.8±7.3) pg/ml、(68.6±8.5) pg/ml比(36.3±5.6) pg/ml]均升高(P＜0.05),MMP-9/TIMP-1比值(1.06±0.22、0.64±0.14比1.89±0.32)均降低(P＜0.05).结论 Dex可能通过调节海马组织MMP-9/TIMP-1比值平衡,减轻血脑屏障损伤及抑制海马组织细胞凋亡而改善反复IR脑损伤小鼠的学习记忆能力.
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Krüppel样基因在肝癌组织的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭的影响
目的 检测Krüppel样基因6(KLF6)在人肝癌及其癌旁组织中的表达,探讨KLF6过表达对肝癌细胞增殖和侵袭的作用及其分子机制.方法 免疫组织化学法检测50例人肝癌及其癌旁组织中KLF6的表达水平.建立慢病毒介导的KLF6过表达载体转染肝癌细胞株SMCC-7721,Western blot检测KLF6、增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的蛋白表达水平.噻唑蓝(MTT)法和Transwell实验检测KLF6过表达对肝癌细胞增殖和侵袭的影响.结果 与癌旁组织(50％,25/50)比较,KLF6蛋白在肝癌组织(72％,36/50)的表达水平明显降低(P＜0.05).Western blot结果显示PCNA和MMP-9蛋白在KLF6组的表达分别下调了81.5％和58.2％(P＜0.01);MTT结果显示KLF6组的细胞相对增殖活性明显下降(P＜0.01);Transwell实验结果显示KLF6组侵袭转移细胞数明显减少[(58.33±6.45)个比(98.50±11.33)个;(58.33±6.45)个比(103.25 ±12.17)个,P＜0.01].结论 KLF6在人肝癌组织中低表达,过表达KLF6可抑制肝癌细胞的增殖和侵袭,其机制与下调PCNA和MMP-9表达有关.
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二氧化碳培养环境对A549细胞周期、肺泡表面活性蛋白C前体蛋白合成的影响
目的 观察CO2培养浓度对A549细胞周期、合成肺泡表面活性蛋白C前体蛋白(proSP-C)的影响.方法 A549细胞按CO2培养浓度分为:A组(5％CO2);B组(10％ CO2);C组(18％CO2).各组在CO2培养24、36、48 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;Western blot法检测细胞内proSP-C的水平.结果 (1)与A组MTT值(0.38±0.02、0.53±0.03、0.75 ±0.03)比较,B组各观测点的值(0.42±0.03、0.56±0.03、0.78±0.04)均增高(P＜0.01);C组的值(0.49±0.04、0.67±0.05)则在36、48 h降低(P＜0.01,P＜0.05).(2)与A组比较,B组G1峰率和凋亡率在24、36、48 h,差异无统计学意义(P＞0.05);C组G1峰升高在24、36 h(68.00±6.20、71.00±2.00)出现(P＜0.01,P＜0.05),并于36、48 h凋亡率(10.00±1.20、12.80±2.60)增加(P＜0.05).(3)B组(0.63±0.20、0.65±0.18、0.55±0.11)与A组细胞中pfoSP-C在各时点(0.58±0.15、0.63±0.09、0.55±0.11)差异无统计学意义(P＞0.05).C组proSP-C在36、48 h(0.31±0.14、0.23±0.02)出现明显下降(P＜0.05).结论 一定的CO2浓度升高增加A549细胞的活性,但不影响细胞周期及凋亡率;过高的CO2浓度可抑制proSP-C合成,降低细胞活性和增加凋亡率.
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沉默LASP-1对人胶质瘤细胞的黏附、迁移和侵袭能力的影响及其机制
目的 探讨LASP-1基因在胶质瘤细胞迁移和侵袭中的作用及其机制.方法 运用Control小干扰RNA (siRNA)(Ctrl组)、LASP-1 siRNA(siRNA组)分别转染人脑胶质瘤细胞U251、U87,Western blot检测LASP-1、磷酸化黏着斑激酶(p-FAK)、Src、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达量.检测沉默LASP-1基因对胶质瘤细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响.结果 与Ctrl组比较siRNA组U87和U251细胞中LASP-1蛋白表达量降低;U87和U251黏附能力下降了59.14％和62.37％,迁移能力分别下降55.61％和56.07％,侵袭能力分别下降48.62％和56.31％.干扰LASP-1表达后siRNA组p-FAK、Src、MMP-2和MMP-9蛋白表达量较Ctrl组均明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 干扰LASP-1基因通过p-FAK-Src信号通路,抑制MMP-2和MMP-9蛋白表达,从而抑制胶质瘤细胞的黏附、迁移和侵袭能力.
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大鼠单侧输尿管梗阻24h内肾脏水通道蛋白2表达变化
目的 观察大鼠单侧输尿管梗阻(UUO) 24 h内肾脏水通道蛋白2(AQP2)表达变化及其对肾脏功能的影响.方法 28只慕尼黑大鼠行单侧输尿管结扎术,分别于术后2h(UUO-2组)、6h(UUO-6组)、12h(UUO-12组)、24h(UUO-24组)收集血液和肾脏标本(n=7),检测血浆电解质和渗透压,Western blot检测肾脏AQP2蛋白水平.各组均设等量(n=7)假手术对照组(Sham-2、Sham-6、Sham-12、Sham-24组).结果 与Sham组比较,UUO-24 h血浆渗透压升高[(347.6±1.7)比(304.3±1.3) mosmol/kg H2O],UUO-2 h血浆肌酐[(39.6±5.8)比(10.5±4.3)μmol/L]、尿素[(9.2±0.4)比(6.9±0.3) mmol/L]和血钾[(5.3±0.2)比(4.3 ±0.1)mmol/L]升高,UUO-2、UUO-6、UUO-12组,24h血浆肌酐呈上升趋势.UUO-6、UUO-12组,24h血钠水平显著低于Sham组[(135.6±1.3)比(137.4±0.8),(126.3±1.3)比(136.5±1.2),(135.2±1.0)比(139.7±1.5) mmol/L].Western blot显示UUO-12 h和UUO-24 h导致AQP2在肾脏内髓表达分别下降到Sham组的69％和22％,各组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 单侧输尿管梗阻后12h开始出现肾脏AQP2蛋白表达显著下降,肾脏功能改变早于AQP2蛋白变化.
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微小RNA-195对结肠癌细胞奥沙利铂耐药逆转的影响及其机制
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-195对人结肠癌细胞株LoVo的耐奥沙利铂(L-OHP)株LoVo/L-OHP对L-OHP耐药逆转的影响及其机制.方法 培养L-OHP细胞株LoVo/L-OHP,采用脂质体介导法分别转染miR-195模拟物、miR-195抑制物、miR-阴性对照,以未转染LoVo/L-OHP为空白对照,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测各组细胞中miR-195基因表达;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞对L-OHP的半抑制率浓度(IC50值);Hoechst33258染色法检测各组细胞凋亡率;流式细胞术检测各组细胞周期变化;Western blot法检测各组细胞中P-糖蛋白(P-gp)、丝/苏氨酸蛋白激酶(Raf-1)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白表达.结果 miR-195模拟物组的IC50值为(61.7 ±12.8) μg/ml,miR-195抑制物组为(173.4±19.2) μg/ml,miR-阴性对照组为(117.6±16.9)μg/nl,空白对照组为(121.5±18.3)μg/ml,差异均有统计学意义(P＜0.01).Hoechst 33258染色法检测结果显示,miR-195模拟物组的凋亡率为(7.1±1.3)％,miR-195抑制物组为(2.2±0.7)％,miR-阴性对照组为(4.5±1.0)％,空白对照组为(4.3±0.9)％,差异均有统计学意义(P＜0.01).流式细胞术检测结果显示,miR-195模拟物组细胞G1期比例为(67.7±3.9)％和S期比例为(15.1±2.9)％,miR-195抑制物组分别为(37.4±4.8)％和(47.9±2.5)％,miR-阴性对照组分别为(47.2±5.7)％和(37.5±2.7)％,空白对照组分别为(45.6±5.2)％和(39.5±2.4)％(P＜0.01).Western blot法检测结果显示,miR-195模拟物组P-gp、Raf-1和bcl-2蛋白表达量分别为0.87 ±0.13、0.72 ±0.14和0.67±0.12,miR-195抑制物组分别为1.46 ±0.17、1.39±0.16和1.35±0.14,miR-阴性对照组分别为1.09±0.11、0.98±0.11和1.03±0.15,空白对照组分别为1.07±0.12、1.02 ±0.14和1.06 ±O.13,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 上调miR-195基因可增加LoVo/L-OHP细胞对L-OHP敏感性,可能与负向调控Raf-1信号通路有关.
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叶酸耦联白蛋白Cypate纳米粒的构建及体外膀胱癌靶向光热杀伤效应的研究
目的 构建一种新型光热纳米材料——叶酸耦联白蛋白Cypate (FA-BSA-Cypate)纳米粒,探讨其介导的靶向光热疗法对人膀胱癌5637细胞的体外杀伤效应及抗肿瘤机制.方法 透析法制备FA-BSA-Cypate纳米粒并进行电镜表征观察;观察不同浓度FA-BSA-Cypate纳米粒溶液(1、10、100 μg/ml)在808 nm激光(1.5 W/cm2)照射下温度随时间变化;噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度FA-BSA-Cypate纳米粒(0、25、50、100、250、500 μg/ml)对人膀胱癌5637细胞的毒性大小以及不同浓度FA-BSA-Cypate纳米粒(0、25、50、100、250、500 μg/ml)在808 nm激光(1.5 W/cm2,5 min)照射下对人膀胱癌5637细胞的靶向光热杀伤效应;将细胞分为4组:空白对照组、激光组、BSA-Cypate+激光组、FA-BSA-Cypate+激光组,采用Western blot法检测各组B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、生存素(Survivin)表达水平.结果 成功制备了具有良好的光热特性的FA-BSA-Cypate纳米粒,粒径为(95.0±8.7) nm;808 nm激光(1.5 W/cm2,5 min)照射下,纳米粒溶液高温度可达59 ℃,且具有浓度依赖性;不同浓度的FA-BSA-Cypate纳米粒作用于5637细胞24h后细胞存活率在95％以上,无明显生物毒性;在联合808 nm激光照射下(1.5 W/cm2,5 min),含不同浓度FA-BSA-Cypate纳米粒(0、25、50、100、250、500μg/ml)的细胞存活率分别为(98.60±5.25)％、(87.85±4.37)％、(80.72±3.61)％、(69.43±4.28)％、(59.28 ±4.51)％和(51.15±3.79)％,细胞存活率随着纳米粒浓度增加而下降,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示,FA-BSA-Cypate+激光组及BSA-Cypate+激光组bax、Caspase-3蛋白表达水平显著增高,而bcl-2、Survivin蛋白表达水平明显降低.结论 FA-BSA-Cypate纳米粒介导的靶向光热疗法对人膀胱癌5637细胞具有良好的杀伤效果,能有效抑制5637细胞的增殖并促进其凋亡.
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激光扫描共聚焦显微镜观察瘦素在小鼠日本血吸虫病肝纤维化中的作用
目的 观察小鼠感染日本血吸虫后不同时期肝脏瘦素长受体(OB-Rb)蛋白动态表达,探讨瘦素在日本血吸虫病肝纤维化发生发展中的作用及意义.方法 日本血吸虫尾蚴皮肤敷贴法感染小鼠构建日本血吸虫病肝纤维化模型,于感染后不同时间取肝脏标本.苏木素-伊红(HE)和Van Gieson(VG)染色对肝组织进行病理学检查,免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法动态观察OB-Rb及肝星状细胞(HSC)标志物α-平滑肌动蛋白(α-SMA)表达;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)联合免疫荧光双重标记技术进一步观察肝纤维化组织和虫卵OB-Rb和α-SMA蛋白表达.结果 α-SMA和OB-Rb阳性表达出现的时间、部位和进程类似,随病程发展呈进行性加重,两者共表达于肝纤维化胶原纤维沉积处.结论 HSC是日本血吸虫病肝纤维化发生发展过程中的关键细胞,瘦素在该过程中发挥重要的促肝纤维化作用,可望成为新的治疗靶点.联合应用LSCM和免疫荧光双重标记技术能对蛋白进行精确的定位研究.
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钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱδ通过Wnt/β-连环素通路调节前列腺癌细胞增殖和侵袭
目的 探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)对前列腺癌PC-3细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制.方法 利用CaMKⅡδ小干扰RNA(siRNA)转染前列腺癌PC-3细胞,Western blot和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测转染后细胞CaMKⅡδ基因沉默情况,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,划痕试验和Transwell侵袭试验分析PC-3细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关标志蛋白及下游靶蛋白的表达.结果 CaMKⅡδ siRNA能有效沉默CaMKⅡδ基因在前列腺癌PC-3细胞mRNA和蛋白表达,mRNA表达抑制率可达80％ (P＜0.01),蛋白表达抑制率可达78.5％(P＜0.01);RNAi沉默CaMKⅡδ抑制PC-3细胞增殖,沉默CaMKⅡδ后PC-3细胞划痕24h后空白对照(BC)、阴性对照(NC)及siRNA2转染组的划痕距离分别为(0.29±0.02)、(0.28±0.03)、(0.37±0.03)mm,BC、NC及siRNA2转染组发生侵袭的细胞个数分别为(75.25 ±6.35)、(67.23 ±4.32)、(35.00±3.35)个,siRNA2转染组与BC及NC组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).沉默CaMKⅡδ基因表达抑制细胞核内β-catenin(Nuclear β-catenin)、c-myc、周期素D1(Cyclin D1)、生存素(Survivin)、淋巴样增强因子1(Lef1)等表达,而轴蛋白抑制蛋白2(Axin2)表达上升,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 RNAi沉默CaMKⅡδ能抑制前列腺癌PC-3细胞增殖、迁移与侵袭能力,其机制可能与其对Wnt/β-catenin信号通路的抑制相关.
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人退变腰椎间盘长链非编码RNA表达谱变化
目的 观察成人退变腰椎间盘与正常腰椎间盘组织中长链非编码RNA (IncRNA)表达谱的变化,探讨椎间盘退变的机制.方法 收集鄂州市中心医院手术切除的患者无菌新鲜退变及正常椎间盘标本各3例,采用Traziol试剂提取总RNA,合成双链互补DNA后以第2条链cDNA为模板体外转录cRNA,将转录得到的cRNA为模板反转录合成cDNA,纯化后荧光标记并与lncRNA芯片进行杂交,计算机扫描并分析芯片荧光信号图像,筛选出相对表达量比值在2倍以上、且差异有统计学意义的lncRNA作为差异表达的lncRNA.结果 人退变腰椎间盘与正常腰椎间盘组织比较,IncRNA相对表达量比值在2倍以上变化的共235条.结论 人退变腰椎间盘与正常腰椎间盘组织比较,lncRNA表达谱发生了明显变化,可能与人腰椎间盘退变的发生发展密切相关.
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盐酸戊乙奎醚通过调控酪氨酸蛋白激酶2/信号转导子和转录激活子3通路发挥抗心肌缺血再灌注损伤作用
目的 观察盐酸戊乙奎醚(HPC)对缺血再灌注心肌的保护作用,探讨HPC通过调控酪氨酸蛋白激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)通路发挥抗心肌缺血再灌注损伤(IRI)作用.方法 36只健康雄性大鼠随机分为6组:(1)假手术组(Sham);(2)缺血再灌注组(IRI);(3)盐酸戊乙奎醚处理组(PHC);(4)盐酸戊乙奎醚处理+ AG-490组(PHC+AG);(5)AG-490组(AG);(6)二甲基亚砜组(DMSO).Sham组:左冠状动脉前降支(LAD)穿线并不阻断冠状动脉;IRI组:结扎LAD 30 min、再灌注120 min;PHC组和PHC+ AG组在缺血处理前30 min,经腹腔注射PHC(2 mg/kg),其余同IRI组;PHC+ AG组、AG组和DMSO组在再灌前10 min分别静脉注射JAK2抑制剂AG-490(3 mg/kg)及1％DMSO溶液(0.4mL/kg),其余同IRI组.用监护仪连续监测并记录缺血前纪录基础值、再灌后30、60、90 min记录心率(HR)、平均动脉压(MAP)和心率与收缩压的乘积(RPP).各组大鼠于再灌注开始90 min后处死,取出左心室心肌组织,提取总蛋白,用Western blot法分析心肌JAK2、STAT3和磷酸化JAK2(p-JAK2)、磷酸化STAT3(p-STAT3)的蛋白表达变化.结果 IRI组、PHC组、PHC+ AG组、AG组和DMSO组各组与组内缺血前基础值HR[(343±20)次/分]、MAP[(109±11) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)]和RPP (44 ±3)比较,再灌后HR[(280 ±12)次/分]、MAP[(84±15) mmHg]和RPP(29±5)降低(P＜0.05);与灌注后IRI组比较,PHC组HR[(320±15)次/分]、MAP[(90±11) mmHg]和RPP(34±6)增高(P＜0.05);与灌注后PHC组比较,PHC+ AG组HR[(301±14)次/分]、MAP[(83±11) mmHg]和RPP(29 ±4)降低(P＜0.05).心肌p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3的蛋白灰度分析显示:与IRI组(0.50±0.08、0.30 ±0.09)比较,PHC组蛋白表达(0.91 ±0.02、0.65±0.05)增高(P＜0.01);与PHC组比较,PHC+ AG组蛋白表达(0.28 ±0.04、0.25±0.08)降低(P＜0.01).结论 PHC预处理可激活JAK/STAT信号转导通路发挥心肌保护作用.应用JAK/STAT信号转导通路抑制剂AG-490可使PHC缺血预处理丧失心肌保护作用.
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灌注去细胞方法制备猪主动脉瓣去细胞支架
目的 观察灌注去细胞方法快速制备猪主动脉瓣去细胞支架的可行性,并研究其有效性及对细胞外基质的影响.方法 利用生物反应器、以0.1％十二烷基磺酸钠对猪主动脉带瓣管道进行灌注去细胞,并与普通振荡去细胞方法进行对比.行4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色和脱氧核糖核酸(DNA)含量检测判断去细胞的效果,行组织学染色观察去细胞方法对细胞外基质结构的影响,行胶原蛋白及弹性蛋白含量检测评估去细胞方法对细胞外基质成分的影响.结果 DAPI染色显示灌注去细胞10 h和普通振荡去细胞60h均可完全去除猪主动脉瓣的细胞核成分.灌注去细胞组瓣膜的残余DNA含量[(2.48 ±0.64) ng/mg]与普通振荡去细胞组[(2.25±0.74) ng/mg]差异无统计学意义(P＞O.05).组织学染色显示两种去细胞方法较好地保留了猪主动脉瓣的3层结构,但灌注去细胞组瓣膜的胶原纤维排列更为紧密,弹性纤维结构更为清晰.灌注去细胞组瓣膜的胶原含量[(528.02 ±57.18) μg/mg]与普通振荡去细胞组[(511.93 ±67.10) μg/mg)]差异无统计学意义(P＞0.05).灌注去细胞组的弹性蛋白含量[(83.72 ±4.35) μg/mg]显著高于普通振荡去细胞组[(72.70±6.04) μg/mg,P＜ 0.05].结论 灌注去细胞方法用于制备猪主动脉瓣去细胞支架是一种快速、有效且对细胞外基质损伤较小的方法.
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内脏神经-体神经端侧吻合对供体神经及其功能的影响
目的 利用神经形态学、肌电图技术检测内脏神经-体神经端侧吻合对供体神经及其功能影响.方法 选用24只成年雄性SD大鼠(230～250 g)随机分成两组:A组:正常对照组(n=12);B组:端侧吻合组(n=12).A组仅行L3～L6椎板切除术,B组行左侧腰6前根(L6VR)与腰4前根(L4VR)行端侧吻合.术后4、12、24周检测所有大鼠左侧胫骨前肌肌电图.术后24周处死大鼠取端侧吻合组L4神经吻合口后神经段及正常组大鼠L4神经甲苯胺蓝染色计数神经纤维.测量L4神经支配肌肉胫骨前肌肌肉湿重及苏木素-伊红(HE)染色观察肌肉形态.结果 术后4、12周B组都有不同程度的失神经肌电图改变,24周时已经恢复正常.24周时端侧吻合组左侧吻合口远端L4VR、正常大鼠左侧L4VR神经有髓神经纤维数量分别为(1 043 ±212)、(1 039±205)个,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05),两组肌肉形态比较差异无统计学意义(P＞0.05),两组肌肉湿重分别为(0.666 ±0.043)g和(0,670±0.050)g,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 体神经-内脏神经端侧吻合对供体神经无不良影响,对体神经支配肌肉功能无不良影响.
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急性创伤性凝血障碍大鼠凝血因子Ⅶ的表达及其调节因素
目的 探讨急性创伤性凝血障碍(ATC)大鼠体内凝血因子Ⅶ(FⅦ)的表达及其影响因素.方法 建立大鼠ATC模型,监测大鼠平均动脉压(MAP)、凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)的变化,检测大鼠FⅦ血液中的浓度以及在mRNA水平、蛋白质水平的表达,检测可能影响其表达的一氧化氮(NO)含量的变化.结果 成功建立大鼠ATC模型,PT、APTT较空白对照组(Sham组)明显延长(P＜0.01);ATC组大鼠血浆中FⅦ的浓度[(3.30 ±0.22) ng/ml]较Sham组[(5.35 ±0.10) ng/ml]明显降低(P＜0.01);ATC组大鼠肝脏组织中FⅦmRNA的相对表达水平明显降低(P＜0.01),Western blot检测显示肝脏FⅦ蛋白的相对表达水平显著降低(P＜0.01);ATC组大鼠血清NO含量[(4.96 ±0.26) μmol/L]与Sham组[(4.36 ±0.36) μmol/L]比较差异无统计学意义(P＞0.05),但肝脏中含量[(56.78 ±5.66)μmol/kg]较Sham组[(35.07±3.85) μmol/kg]明显升高(P＜0.01).结论 FⅦ低表达可能是ATC发病的重要因素,针对NO途径的靶向调控FⅦ的表达可能在治疗ATC中发挥作用.
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L5/S1轴向固定经皮椎弓根单向锁定研究
目的 通过对直肠后间隙入路L5/S1椎间隙轴向固定经皮椎弓根单向锁定的实验研究探讨其可行性和安全性.方法 选取成年尸体标本8具,轴向固定螺钉和单向锁定螺钉及锁定瞄准器等,模拟直肠后间隙入路L5/S1椎间隙轴向固定经皮椎弓根单向锁定手术.测量矢状面轴向固定螺钉与单向锁定螺钉相交头倾角以及轴向固定螺钉在椎体中的位置.水平面轴向固定螺钉的矢状面与单向锁定螺钉相交外展角以及轴向固定螺钉在椎体中的位置.观察经皮椎弓根单向锁定螺钉通道对周围毗邻重要组织结构有无损伤.结果 在矢状面轴向固定螺钉与单向锁定螺钉的头倾角平行且均为90.,轴向固定螺钉与椎体后纵韧带平行,多位于椎体中心.在水平面轴向固定螺钉的矢状面与单向锁定螺钉相交的外展角为45.9°～79.0°,平均68.9°,轴向固定螺钉居于椎体中心.单向锁定螺钉通道在L5多穿行横突、进入椎弓根峡部内与椎体中心轴向固定螺钉相交固定.在S1穿行髂棘后,再从关节突外缘进入椎弓根峡部内与椎体中心轴向固定螺钉相交固定.单向锁定螺钉通道与周围毗邻组织无重要结构损伤.结论 L5/S1轴向固定经皮椎弓根单向锁定只要单向锁定经过椎弓根峡部中心与椎体中心相交是安全可行的.
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自噬基因Beclin-1通过食管癌相关基因4通路抑制A549肺癌细胞增殖
目的 探讨自噬基因Beclin-1过表达对A549肺癌细胞自噬和增殖的影响以及其作用机制.方法 用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot的方法分别检测转染后各组A549肺癌细胞Beclin-1 mRNA和蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)法检测各组A549细胞生长增殖;单丹磺酰戊二胺(MDC)法检测各组A549细胞自噬的变化;Western blot方法检测各组A549细胞食管癌相关基因4(ECRG4)蛋白表达变化.结果 与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,A549细胞中Beclin-1 mRNA和蛋白表达显著增加(P＜0.05);与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,Beclin-1过表达组细胞群体平均倍增时间[(46.0±2.4)h]显著延长(P＜0.05);与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,自噬细胞阳性数量[(10.0±1.5)个]显著增加(P＜0.05);与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,ECRG4蛋白表达增加(P＜0.05).结论 自噬基因Beclin-1通过ECRG4通路抑制A549肺癌细胞增殖.
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p53和p21动态调控小鼠大部分肝切除后肝再生
目的 探讨p53、p21在小鼠大部分肝切除(PH)后肝再生中的动态变化及其对肝再生的调控意义.方法 采用小鼠2/3肝切除模型,术后不同时间点采集血液和肝组织标本.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肝切后不同时间点血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(A LB)的表达变化.采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)、免疫组织化学、Westernblot检测肝切后不同时间点小鼠肝脏组织中p53和p21 mRNA、蛋白水平表达变化.采用原位缺口末端标记法(TUNEL)免疫组织化学法检测肝细胞凋亡.结果 各组小鼠均顺利完成手术,ALT、AST、ALB术后24、36 h与0h比较,差异有统计学意义(P＜0.01);ALT术后72 h、AST术后48 h与0h比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与0h比较,肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)指数在术后24h为(10.28±1.08)％(P＜0.01);36 h达到高峰为(44.19±2.83)％ (P＜0.01).与0h比较,肝切后p53表达量低点在15 h(2-△△Ct=0.17±0.02,P＜0.01),高点在120 h(2-△△Ct=1.68±0.36,P＜0.05).P21在肝切后出现2个表达高峰分别在36 h(2-△△Ct=3.49±0.24,P＜0.01)和120 h(2-△△Ct=3.52 ±0.23,P＜0.01).p53和p21蛋白水平与mRNA变化趋势一致.肝切后120 h血管内皮细胞p53、p21蛋白免疫组化阳性率高达(98.29±1.57)％和(98.72±1.21)％.结论 小鼠2/3肝切除后,p53、p21动态变化调控肝再生过程.p53、p21有望成为多种肝病及肝叶切除术预后评估的检测指标.
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HuD蛋白对肛门直肠畸形子鼠直肠末端肠神经系统的影响
目的 检测HuD蛋白在肛门直肠畸形(ARM)子鼠直肠末端组织中的表达,探讨其可能对肠壁神经系统(ENS)发育的影响.方法 选用20只成年SD孕鼠,随机分为正常组和乙烯硫脲(ETU)实验组各10只,两组孕鼠在孕20d取出宫内所有子鼠,观察其大体形态及计算畸形率,并取出子鼠直肠末端采用苏木素-伊红(HE)染色观察直肠末端组织结构变化,免疫组织化学和Western blot检测HuD蛋白在直肠末端的表达.结果 正常组共产子鼠108只,存活率为100.0％,未见任何畸形发生;实验组共产子鼠94只,存活率为93.6％,存活子鼠中ARM发生率为96.8％.HE结果显示:正常组子鼠直肠末端组织结构分界清楚,胞质丰富,轴突清晰;ETU组中患ARM的子鼠各层组织结构分层不清,可见较多空腔,直肠末端黏膜下和肌间神经元数目较正常组明显减少[(143.60± 14.93)个比(335.90±10.46)个,P＜0.01].免疫组织化学和Western blot结果显示ARM组子鼠直肠末端蛋白含量明显低于正常组(312.90 ±53.40比456.40±57.13;0.24 ±0.05比0.45 ±0.06,P＜0.01).结论 HuD蛋白在ARM子鼠直肠末端表达差异有统计学意义,可能参与并影响ENS的发育与成熟.
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肾上腺髓质素对786-0肾细胞癌裸鼠移植肿瘤生长及肿瘤血管生成中的作用
目的 观察肾上腺髓质素(ADM)在786-0肾癌裸鼠移植肿瘤生长及血管生成方面的作用.方法 建立裸鼠人786-0肾癌移植瘤模型,实验分为对照组、ADM诱导组、ADM特异性受体抑制剂ADM22-52干预组.记录成瘤率,通过测量皮下移植瘤体积记录肿瘤生长,苏木素-伊红(HE)染色观察病理形态,免疫组织化学(IHC)染色法检测血管内皮细胞生长因子(VEGF-A)的表达,Western blot法检测ADM受体和VEGF-A蛋白的表达水平.结果 HE染色结果显示移植瘤呈典型的肾透明细胞癌生长特征,其中在ADM22-52干预组中有较多的坏死区域;与对照组比较,ADM诱导组肿瘤体积更大,16d后肿瘤体积为(2 123.50±349.61) mm3,且各组差异有统计学意义(P＜0.05);免疫组织化学染色结果显示对照组、ADM诱导组、ADM22-52干预组中VEGF-A染色分数分别为4.0、7.5和0.0分,差异均有统计学意义(P＜0.05);Western blot结果显示ADM受体(ADMR)在对照组、ADM组、ADM22-52组中表达量分别为0.22±0.03、0.28±0.03、0.06±0.01;VEGF-A蛋白在对照组、ADM组、ADM22-52组中表达量分别为0.35±0.11、0.51 ±0.04、0.09±0.01:可见ADM22-52组可显著下调ADMR和VEGF-A蛋白水平的表达,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 ADM有可能通过激活其自身受体促进786-0肾癌移植肿瘤的生长,并可能参与肾肿瘤血管生成的调节.
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抑制上皮-间充质转化对肾癌细胞转移和肾癌放疗的影响
目的 观察抑制上皮-间充质转化(EMT)与肾癌细胞转移的相关性及其在肾癌放疗中的作用.方法 实验设对照组、脂质体转染组(Lipofectamine组)、微小RNA(miRNA,miR)-200类似物转染组(miR-200组)和无义序列组(Negative-Mimics转染组).用miR-200类似物转染肾癌细胞,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测EMT相关分子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin) mRNA变化确定miR-200对EMT的抑制效果;Transwell迁移实验、划痕实验检测各组肾癌细胞迁移能力;用2Gy剂量X线照射各组细胞,微核实验、免疫荧光检测、p53结合蛋白1焦点数(53BP1 foci)实验检测肾癌细胞损伤程度,克隆存活实验检测细胞存活能力.结果 Real-time PCR结果证明E-cadherin、N-cadherin和Vimentin在对照组中的表达量为1.01 ±0.01、1.00±0.02、1.01 ±0.02;与对照组比较,这3个基因在Lipofectamine组和Negative-Mimics组的表达量为0.92±0.04、1.07±0.01、0.99 ±0.03;0.94±0.03、0.99±0.02、0.97 ±0.03,差异无统计学意义(P＞0.05);在miR-200组的表达量为3.16 ±0.07、0.75±0.07、0.22±0.03,差异有统计学意义(P＜0.05),证明miR-200能显著抑制肾癌细胞EMT过程.对照组、Lipofectamine组、Negative-Mimics转染组和miR-200类似物转染组Transwell迁移实验和划痕实验结果分别为(203 ±4)、(191 ±5)、(198±2)、(201 ±5)个细胞和(21.9±1.9)、(22.5±2.6)、(21.8±3.5)、(20.7±1.8)个细胞,组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05);X线处理后,对照组微核率和克隆存活率为(9.3±0.4)个、(1.02±0.03)％,53BP1 foci为(18.4±1.1)个;与对照组比较,Lipofectamine组和Negative-Mimics转染组微核和克隆存活率为(9.4±0.3)个、(1.09±0.05)％和(9.1±0.2)个、(0.94±0.02)％,53BP1 foci为(18.5±0.3)个和(17.9±0.4)个,差异无统计学意义(P＞0.05);miR-200类似物转染组微核率和克隆形成率为(15.2±0.2)个和(0.39 ±0.03)％,53BP1foci为(24.9±1.1)个,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 EMT抑制对肾癌细胞转移能力没有影响,但是能够增强放射治疗对肾癌细胞的杀伤作用.
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右美托咪定预处理对小鼠肺缺血-再灌注损伤时微小RNA-210表达的影响
目的 观察右美托咪定(Dex)预处理对小鼠肺缺血/再灌注损伤(PIRI)时微小RNA(miRNA,miR)-210表达的影响.方法 采用C57BL/6J小鼠在体单侧原位PIRI模型.按照随机数字表法将小鼠45只随机分为3组,每组15只:假手术组(Sham组)、缺血-再灌注组(I/R组)和Dex预处理组(Dex组).Dex组于缺血前30 min经腹腔注射Dex 25 μg/kg,Sham组和I/R组分别经腹腔注射等量生理盐水.各组实验结束后处死小鼠,留取左肺,分别检测肺组织湿/干重比(W/D)和总肺水含量(TLW),光镜观察肺组织形态学并测定肺泡损伤率(IAR),电镜观察肺组织超微结构改变,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测肺组织miR-210表达,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测肺组织细胞凋亡指数(AI).结果 与Sham组[4.34 ±0.25、3.33 ±0.24、(5.73±1.96)％、(4.86±0.97)％]比较,I/R小鼠组肺组织W/D (5.95 ±0.43)、TLW (4.68±0.42)、IAR[(40.47±5.93)％]和AI[(35.36±5.93)％]均升高(P＜0.05),肺组织miR-210表达(4.73±0.78比1.07 ±0.38)上调(P＜0.05),肺组织形态学结构及超微结构均发生损伤.与I/R组比较,Dex组肺组织W/D (5.36 ±0.14)、TLW (4.25 ±0.18)、IAR[(14.72±3.57)％]和AI[(16.49±2.51)％]均降低(P＜0.05),肺组织miR-210表达(1.53 ±0.45比4.73 ±0.78)下调(P＜0.05),肺组织形态学结构及超微结构损伤均减轻.结论 Dex预处理可能通过下调肺组织miR-210的表达,减少肺组织细胞凋亡,从而减轻小鼠I/R所致的急性肺损伤.
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多巴胺D1受体基因(-48A/G)多态性与额叶挫裂伤后认知障碍相关性
目的 探讨多巴胺D1受体(DRD1)(-48 A/G)基因多态性与额叶挫裂伤后认知功能障碍的关系.方法 应用洛文斯顿作业疗法认知评估量表(LOTCA)及威斯康星卡片分类测试(WCST)为120名健康体检人群及104例轻中度额叶挫裂伤病例组治疗后3～6个月时的认知功能进行测试;并提取受试者的基因组DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术进行DRD1基因(-48A/G)多态性检测.结果 就3种基因型的认知评定项目数量来看,AA型患者与同基因型健康人群比较,存在较多项目的认知功能障碍,AG型患者次之,GG型患者的认知功能障碍项目少.将等位基因A作为危险因子时,相对危险度(OR)=1.041,95％可信区间(CI):0.620～1.747.结论 DRD1(-48A/G)多态性与额叶挫裂伤后认知障碍存在一定的相关性,等位基因A可能是额叶挫裂伤患者认知功能障碍的危险因子之一.
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神经胶质瘤致病因子-1在肾癌细胞株769-P体外侵袭活性强化中的作用及其机制
目的 观察神经胶质瘤致病因子-1(Gli-1)在肾癌细胞株769-P细胞体外侵袭活性强化中的作用.方法 构建Gli-1-小干扰RNA (siRNA)慢病毒载体,将体外培养好的肾癌769-P细胞株分为3组:A组:Gli-1-siRNA和pGCL-绿色荧光蛋白(GFP)共转染组.B组:未转染组;C组:pGCL和pHelper 1.0共转染组.A组为实验组,B、C两组为对照组.应用基因转染方法,将A组肾癌769-P细胞转染Gli-1-siRNA慢病毒载体.检测Gli-1基因表达对肾癌细胞株769-P细胞的抗增殖作用和生物学功能的影响,通过Western blot和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测Gli-1-siRNA在769-P细胞中的表达水平,并通过噻唑蓝(MTT)法、划痕实验、流式细胞仪、显微镜等观察比较转染Gli-1-siRNA的769-P细胞的的迁移能力、黏附能力和凋亡等形态学改变.结果 (1)阴性对照组的Gli-1 mRNA表达量为98.2 ±6.6,Gli-1-siRNA转染组为53.8 ±4.6,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)阴性对照组的Gli-1蛋白表达量为94.9±7.9,Gli-1-siRNA转染组为42.6±3.2,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)划痕实验结果显示Gli-1-siRNA转染的769-P细胞株迁移能力低于正常769-P细胞株(P＜0.05).(4) MTT实验结果显示,Gli-1-siRNA对769-P细胞的活性抑制明显增强,相同作用时间不同比例之间差异有统计学意义(P＜0.05),同一比例不同作用时间之间差异有统计学意义(P＜0.01).(5)流式细胞术检测结果显示,B、C组769-P细胞12 h的凋亡率为(10.67±0.23)％和(6.84±0.16)％,A组细胞12h凋亡率为(45.40±5.79)％,24h凋亡率为(60.67±5.79)％,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).(6)A组Gli-1-siRNA转染成功的769-P细胞其胞质内出现颗粒状物,肾癌细胞逐渐模糊、消失.24h后769-P细胞数明显减少,48 h后癌细胞大部分凋亡,细胞漂浮,并且在培养液中出现细胞碎片.B、C组769-P细胞状况良好,未见明显细胞减少.结论 Gli-1-siRNA可抑制肾癌769-P细胞中Gli-1的表达,降低细胞增殖率和侵袭能力,提示Gli-1可能在肾癌的恶性进展中发挥重要作用.
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阿托伐他汀对动脉中膜钙化及骨保护素/核因子-κB配体的受体的影响
目的 观察他汀类药物对动脉中膜钙化的作用及其对骨保护素(OPG)/核因子(NF)-κB配体的受体(RANKL)系统的影响.方法 分别构建钙化的细胞模型和动物模型,每组均分为钙化组、他汀组和对照组.钙化细胞模型中使用β-磷酸甘油、维生素C对大鼠主动脉中膜平滑肌细胞(SMC)进行诱导钙化,他汀组在加入以上物质的同时再加入阿托伐他汀;钙化动物模型中使用华法令对普通大鼠进行灌胃诱导钙化,他汀组使用华法令的同时再加入阿托伐他汀;用钙离子含量测定,碱性磷酸酶(ALP)活性检测,骨钙素的Western blot检测来判定和动脉和细胞钙化的程度,用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测此过程中OPG、RANKL的表达.结果 加入他汀类药物后,动脉和细胞钙化的程度均有所减轻(钙离子含量、ALP活性、骨钙素在动物组中分别由(1.39±0.04) mg/g、72.46±14.78、1.05±0.05降到了(1.01±0.03) mg/g、48.39±9.27、0.56±0.04;在细胞组中分别由(120.66±7.63) μg/mg protein、98.02±9.56、0.95±0.03降到了(95.57±8.47) μg/mg protein、65.34±8.16、0.65±0.02,P＜0.05),同时动脉和细胞中OPG/RANKL的比值也明显上升(P＜0.05).结论 他汀类药物具有抑制动脉钙化的作用,其机制可能与其提高OPG/RANKL的比值有关.
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M2型巨噬细胞向M1型巨噬细胞的转化及其意义
目的 诱导人单核细胞向M2型巨噬细胞转化及探讨诱导M2型巨噬细胞向M1型巨噬细胞转化的可行性.方法 通过磁珠阳性分选法从健康成人新鲜血液中获得人单核细胞,经重组入巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导6d,应用流式细胞仪鉴定M2型巨噬细胞标志物CD163阳性表达率.对M2型巨噬细胞应用干扰素(IFN)-γ和脂多糖(LPS)诱导2～3d,应用流式细胞仪鉴定M1型巨噬细胞表面标志物CD16阳性表达率.结果 经重组人M-CSF诱导后的单核细胞,M2型巨噬细胞的CD163阳性表达率为(66.37±2.67)％,M1型巨噬细胞的CD16阳性表达率为(13.37 ±4.41)％,M2型巨噬细胞阳性表达率明显高于M1型巨噬细胞阳性表达率(P＜0.01).而M2型巨噬细胞再经IFN-γ和LPS诱导后,M1型巨噬细胞的CD16阳性表达率为(48.57 ±5.98)％,M2型巨噬细胞的CD163阳性表达率为(25.83±1.95)％,M1型巨噬细胞的阳性表达率明显高于M2型巨噬细胞的阳性表达率(P＜0.05).结论 人M2型巨噬细胞在IFN-γ和LPS诱导下可向M1型巨噬细胞转化.
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模拟血管分叉处血流的体外内皮细胞培养系统
目的 观察血管分叉顶点处的血流切应力(WSS)对内皮细胞的影响.方法 利用改进的灌流及T型流动腔装置,通过调节蠕动泵的转速和流量调节阀来控制冲击力大小,建立模拟血管分叉顶点处血流作用下的内皮细胞培养系统.对体外培养的内皮细胞加载流速为250 ml/min[相当于雷诺数(Re)=125]至500 ml/min(Re=250)的稳定剪应力冲击流,观察不同作用时间(3、6、12 h)内皮细胞层的形态学特征.结果 加载250 ml/min的流速下,作用3、6、12 h后冲击点及其周围的细胞仍维持着多边形.而加载流速500 ml/min,12h后,可见高WSS和高切应力梯度(WSSG)区的细胞密度下降且形态被拉长,排列与冲击流方向平行一致,部分细胞向下游迁徙;且内皮细胞形态学变化不受细胞增殖抑制剂影响,表明细胞从驻点向下游迁徙是流体作用的结果.结论 改进的细胞流体力学实验装置能模拟体内血流冲击环境,具有冲击力调控方便和安全可靠的优点,能作为研究血管分叉处(颅内动脉瘤好发部位)血流环境下内皮细胞功能及其调控机制的较理想的体外细胞培养模型.
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门静脉注射髓鞘碱性蛋白诱导免疫耐受的研究
目的 观察门静脉注射同种脑髓鞘碱性蛋白(MBP)诱导免疫耐受及肝脏Kupffer细胞在免疫耐受建立中的作用.方法 将32只雄性SD大鼠随机分为4组,每组8只,A组:假手术组;B组:生理盐水对照组;C组:MBP实验组;D组:氯化钆(GdCl3)预处理组(门静脉注射前24h经鼠尾静脉注射GdCl3溶液).造模后10d鼠尾静脉注射MBP致敏,致敏后24 h和48 h分别行酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测外周血MBP抗体浓度、转化生长因子-β1(TGF-β1)浓度;流式细胞术检测外周血CD4 +/CD8+T细胞比值;鼠尾静脉注射MBP致敏后48 h处死大鼠,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测肝组织Fas配体(FasL)表达含量.结果 与A、B、D组比较,C组致敏后24、48 h外周血MBP抗体浓度显著降低(P＜0.05),各组浓度分别为[(78.63 ±9.64)、(76.13 ±7.57)、(49.14±8.51)、(68.71 ±11.56)比(82.00 ±5.71)、(79.00 ±6.47)、(47.00 ±5.28)、(75.00±4.96) ng/ml]、外周血CD4+/CD8+T细胞比值降低(P＜0.05),24h表达量分别为(1.94±0.31、2.00±0.14、1.46±0.22、1.93±0.14);48 h表达量分别为(1.96±0.09、2.04±0.19、1.56±0.26、2.01±0.18);C组致敏后48 h肝组织FasL表达含量升高(P＜0.05),各组表达含量(×10-4)分别为(5.72±2.78、3.77±4.76、17.44±13.92、9.38±5.14).与A、B组比较,C组致敏后24、48 h外周血TGF-β1浓度升高(P＜0.05);D组致敏后24、48 h外周血TGF-β1浓度升高(P＜0.05);D组与C组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),各组浓度分别为[(24.05±4.96)、(24.74±1.98)、(37.51±6.12)、(31.64±6.20)比(23.11±5.26)、(22.57±2.85)、(34.76±4.88)、(30.10 ±7.17) ng/L].结论 门静脉注射MBP可诱导机体免疫耐受的建立,可降低免疫系统对脑组织MBP抗原的继发免疫攻击,从而具有保护受损脑组织的可能性;肝脏Kupffer细胞在肝脏诱导免疫耐受过程中可能发挥重要作用.
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芬太尼与布托啡诺联合镇痛机制的研究
目的 探讨芬太尼与布托啡诺联合镇痛的药理学性质为独立或相关联合作用及其药效学评价.方法 制备大鼠疼痛模型,采用累积疼痛评分法测定大鼠疼痛行为,以序贯法分别测定芬太尼与布托啡诺的半数有效剂量(ED50);然后将两药的半数有效剂量同时应用于50只SD雄性大鼠,以累积疼痛评分小于对照组50％为镇痛有效指标,根据Finney公式:Pe=P1+P2-P1P2(P1与P2分别代表第一药与第二药的质反应率;Pe为两药合并应用后的期望质反应率),求出两药物观察质反应率(P0),用期望质反应率Pe和观察质反应率P0差异的显著性检验来判断和分析两药对镇痛效应联合作用为独立联合作用或相关联合作用;后以芬太尼的1/4、1/2、3/4的ED50分别与布托啡诺联合应用,测得合并药为ED50时的布托啡诺剂量,以此制定两药的等效曲线判断两药联合应用的药效性质(相加、协同或拮抗作用).结果 由概率单位回归法计算得出芬太尼镇痛的ED50是3.9 μg/kg[95％可信区间(CI):2.5～4.9μg/kg],布托啡诺镇痛的ED50为292 μg/kg(95％ CI:198 ～ 373 μg/kg).芬太尼与布托啡诺的ED50合并应用的联合质反应率(P0)为84％,与期望质反应率(Pe=0.75)差异无统计学意义(P＞0.05).芬太尼的1/4、1/2、3/4的ED50分别与布托啡诺联合应用,测得合并用药为ED50时布托啡诺的剂量分别是152 μg/kg(95％CI:116～185 μg/kg)、109 μg/kg(95％ CI:84～133 μg/kg)、93 μg/kg(95％ CI:52～125 μg/kg),并由此得出两药的Loewe等效曲线图,表明两药在一定的剂量匹配范围内呈现出协同作用,随着芬太尼剂量的加大,两药呈现出拮抗作用.结论 芬太尼与布托啡诺联合镇痛时,可独立发挥作用,两药联合应用的药理学机制为独立联合作用.根据Loewe等效曲线图,芬太尼与布托啡诺对镇痛联合作用的药效学性质(协同、相加或拮抗)与两药的剂量匹配可能存在相关.
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颈椎两节段椎体次全切后前路椎弓根螺钉固定的生物力学有限元研究
目的 利用有限元研究方法,比较下颈椎前路椎弓根螺钉内固定系统与传统颈椎前路椎体螺钉内固定系统的生物力学性能.方法 采集1例22岁正常男性志愿者颈椎(C2～ T2) CT数据,应用有限元软件建立下颈椎(C3～T1)完整模型、两节段椎体次全切后颈椎前路椎弓根螺钉(ATPS)固定模型、传统前路椎体螺钉(ACCF)固定模型.在C3上分别施加1 N/m纯力偶矩,使模型产生前屈、后伸、左侧弯、右侧弯、左旋和右旋运动,记算ATPS模型及ACCF模型的整体活动度、钛网应力、终板应力及骨-螺钉应力,两组间结果进行比较.结果 实验建立了正常人下颈椎(C3～T1)有限元模型,包括单元245 363个,节点350 340个,其椎间节段活动力度(ROM)与既往实验数据吻合度较好.较正常组,ATPS及ACCF组在ROM方面均减小:前屈(-72.9％,-47.8％),后伸(-57.9％,-23.7％),侧弯(-78.6％,-49.5％),旋转(-58.5％,-41.0％).与ACCF模型比较,ATPS模型钛网应力:前屈(-33.3％),后伸(-23.2％),侧弯(-9.2％),旋转(-18.2％).较ACCF模型,ATPS模型C4下终板应力:前屈(-18.5％),后伸(-23.1％),侧弯(-13.6％),旋转(-22.0％).C7上终板应力:前屈(-31.8％),后伸(-44.6％),旋转(-55.2％),侧弯(-54.0％).ATPS与ACCF两种骨螺钉界面应力在侧弯旋转时无差异,前屈后伸工况下ATPS略小.排除个别差异,ATPS组在总体活动度、钛网应力、终板应力及骨-螺钉应力方面均优于ACCF组.结论 前路椎弓根螺钉重建两节段椎体减压植骨整体生物力学性能优于传统椎体螺钉固定,是一种良好的颈椎前路固定方式.
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人工关节炎性介质对滑膜细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响
目的 观察人滑膜细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及活性受钛合金颗粒、白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E2(PGE2)的调控表现,探讨滑膜细胞在钛合金材料关节假体周围骨溶解的机制.方法 用钛合金颗粒、IL-6、PGE2加载滑膜细胞(关节滑膜细胞来源于正常人严重创伤后捐献,体外培养5代),于12、24、48、72 h等时间节点收集上清液,检测MMP-9的活性(优化明胶酶谱法).结果 直径小的钛合金颗粒(≤5 μm)能刺激人滑膜细胞MMP-9蛋白表达是对照组的3.75倍;钛合金颗粒、IL-6、PGE2及其中两者联合作用致MMP-9高表达(P＜0.01),三者联合作用有协同效应(P＜0.01).钛合金颗粒、IL-6、PGE2能够刺激人关节滑膜细胞增加MMP-9蛋白活性,并具有协同叠加效应.结论 钛合金材料人工关节置换术后,磨损颗粒和IL-6、PGE2协同刺激滑膜细胞,胞外基质降解,导致假体的骨性静态支持结构力学性能下降,破骨细胞活性被激活,参与假体无菌性松动的发生.
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电休克通过上调tau蛋白过度磷酸化程度加重抑郁模型大鼠认知障碍
目的 观察不同电量和不同时程电休克(ECT)对嗅球切除抑郁模型大鼠海马ECT后认知能力的变化.方法 建立大鼠嗅球切除抑郁模型,采用随机单位组3×3析因设计:将每只大鼠视为1个单位,对每个单位施加2个处理因素,即电流(25、50、75 mA)和时程(3次、6次、9次ECT)的所有组合(共9组,n=6).电休克结束24 h内行Morris水迷宫、高效液相色谱法测谷氨酸(Glu)在海马组织中含量,Western blot法测磷酸化tau蛋白(p-AT8Ser202)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β1H8)表达.结果 随ECT电流加大,延长逃避潜伏期并缩短空间探索时间,随ECT时程延长,延长逃避潜伏期缩短空间探索时间,75 mA且行9次ECT组逃避潜伏期长[(100.51±6.64)s]、空间探索时间短[(10.02±1.20)s].随ECT电流加大,Glu浓度增加,随ECT时程延长,Glu浓度增加,75 mA且行9次ECT组Glu浓度高[(184.39±20.86)μmol/gprot].随ECT电流加大,目标蛋白表达增加,随ECT时程延长,目标蛋白表达增加,75 mA且行9次ECT组目标蛋白表达高(p-AT8Ser202:1771.50 ±278.26;GSK-3β1H8:1747.13±162.23).结论 ECT导致海马Glu浓度升高,加剧海马tau蛋白的磷酸化程度,诱发认知障碍.
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卷曲蛋白跨膜受体7基因启动子的构建及其肝癌特异性转录调控活性研究
目的 构建卷曲蛋白跨膜受体7(FZD7)基因启动子,并分析其肝癌特异性转录调控活性.方法 构建FZD7启动子及FZD7启动子变异体(Mut FZD7),并设计合成荧光报告载体pFZD7-绿色荧光蛋白(GFP)、Mut pFZD7-GFP.将各重组质粒载体转染至肝癌细胞HepG2、SMMC7721及正常肝细胞L02中,用荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达.在裸鼠肝癌移植瘤模型瘤体内注射各重组质粒后,制备肿瘤组织冰冻切片并在荧光显微镜下观察GFP表达.结果 转染pFZD7-GFP的肝癌细胞HepG2和SMMC7721中均有高强度荧光,且GFP表达率分别为(45.1±3.1)％和(25.3±2.5)％,显著高于L02细胞的GFP表达率[(0.4±0.3)％,P＜0.05];而转染Mut pFZD7-GFP的HepG2、SMMC7721和L02细胞中荧光强度明显较弱,且GFP表达率分别为(21.5±2.7)％、(12.3±2.1)％和(0.2±0.1)％,均显著低于转染pFZD7-GFP的各对应组(P＜0.05);对照组中,转染对照质粒pFZD7-Luc的肝癌细胞及L02细胞中未检测到GFP的表达,而转染对照质粒pEGFP-N1的各细胞株中均有大量细胞表达GFP.在裸鼠肝癌移植瘤中有相似的结果.结论 FZD7启动子具有高度的肝癌特异性活性,T细胞因子/淋巴增强因子(TCF/LEF)转录因子结合位点在其转录调控中发挥关键作用.
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含有WW结构域的氧化还原酶的基因在骨肉瘤化疗中的作用
目的 探讨外源性含有WW结构域的氧化还原酶的基因(WWOX基因)转染骨肉瘤细胞株MG63后对化疗药物的增敏作用和化疗后WWOX基因的表达.方法 用慢病毒转染法将WWOX重组真核表达质粒及空载质粒转染至MG-63细胞,分别建立稳定表达WWOX基因的MG63-WWOX过表达细胞株(WWOX-OE)及空载质粒细胞株(CON),然后细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞的增殖,膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)和碘化丙锭(PI)双染法检测各组细胞的凋亡;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测各组WWOX基因的mRNA和蛋白水平的表达.结果 WWOX-OE组与CON组在加入化疗药物(顺铂+多西他赛)处理后,结果显示WWOX-OE组与CON组比较增殖明显受抑制(24 h:2.595±0.088比2.658±0.132,P＞0.05;48 h:0.425±0.052比0.820 ±0.117,P ＜0.05;72 h:0.265±0.016比0.594±0.034,P＜0.05;96 h:0.112±0.011比0.265±0.016,P＜0.05),凋亡明显增多(29.500±2.450比17.460±1.561,P＜0.05).RT-PCR和Western blot法结果显示化疗药处理后的WWOX-OE组与CON组WWOX的表达均明显增高(RT-PCR结果:WWOX-OE组:51.29±10.20比259.90±36.33,P＜0.05;CON组:5.70±2.18比36.76±3.71,P＜0.05).且RT-PCR结果显示化疗药处理后的WWOX-OE组较CON组WWOX的表达量更高(259.90±36.33比36.76±3.71,P＜ 0.05).结论 在骨肉瘤细胞MG63中,上调WWOX基因的表达可以增加化疗的敏感性,这也为研究骨肉瘤化疗不敏感及耐药提供了新的思路.
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一氧化碳高压保存离体心脏的研究
目的 探索一种全新的器官保存方法,并通过检测实验指标探讨其对器官离体保存的作用与机制.方法 以BALB/c 7周雄性小鼠为供受体,将供体心脏取出后,离体保存24 h,通过颈部异位移植移植到受体BALB/c 7周雄性小鼠中.实验分为3个实验组,分别为一氧化碳(CO)高压保存24 h移植组(CO组);组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液(HTK)浸泡保存24 h移植组(HTK组);即刻移植组(正常组).移植后记录心脏的复跳率;24h取异位心脏检测.检测心肌组织中血红素加氧酶-1(HO-1)及诱导型一氧化氮合酶(iNOs)含量,原位细胞凋亡检测(TUNEL)及羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)检测.结果 Ho-1(ho-1/α-tubulin比值):CO保存组(0.245)表达明显高于HTK保存移植组(0.168)和即刻移植组(0.058,P＜0.05),而iNOs(即iNOS/α-tubulin值)的表达量高是HTK保存移植组(0.268),其次是CO保存移植组(0.124)及即刻移植组(0.082).心肌凋亡百分比中,HTK保存移植组凋亡百分比明显高于CO保存移植、即刻移植两组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 外源性的CO保存心脏,能通过有效的抗凋亡和减轻氧化损伤,减轻炎性反应等作用而对离体心脏起保护作用,而这种保护作用可能是通过调高心肌组织中的HO-1含量、抑制iNOs产生以及CO本身联合作用而形成.
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吻合神经的腹壁下动脉穿支皮瓣再造乳房感觉恢复
利用自体下腹部皮肤脂肪瓣重建乳房已成为治疗乳腺癌术后乳房缺失的首选术式,其中尤以腹壁下动脉穿支(DIEP)皮瓣再造乳房的效果较好[1].我们于2009年1月至2013年12月对收治的乳房缺失患者实施吻合感觉神经的DIEP皮瓣再造乳房术,并就其感觉功能的恢复状况与传统术式进行比较.一、资料与方法
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基于蛋白质组学高效富集肺癌组织转录因子
转录因子(TFs)影响从细胞周期、代谢到细胞分化几乎所有生物过程,与肺癌的发生发展密切相关[1-2].但由于其低丰度性,在蛋白质组水平上分析鉴定肺癌TFs有很高的挑战性.目前我们设计的转录因子富集技术(TFRE)可以高效富集肺癌组织的TFs[3].一、材料与方法1.材料:来自本院的肺腺癌和肺鳞癌标本各3例,均包括癌组织及癌旁组织.
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新型脊髓损伤打击器的结构与使用
我们设计发明了一种新型脊髓损伤打击器,现报道如下.一、材料与方法1.构成部件:激光定点系统:支架包括激光笔、底座、与底座固接的可弯曲杆.打击系统:包括无头钉或其他条形打击物、磁铁、吸管、套筒.高度调节系统:前述无头钉下方伸出吸管的长度可根据需要自行调节,无头钉下端到动物脊髓的垂直距离则为打击高度.吸管的长度亦可自行调节.2.原理及使用方法:本实验装置无头钉沿吸管垂直冲击下落,即可造成脊髓损伤[1].通过调整无头钉及吸管的高度和选用不同重量的无头钉,可以改变脊髓损伤的程度.
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X射线急性放射性皮肤损伤模型的建立
我们通过建立一种可靠的放射性皮肤损伤的动物模型,观察血管内皮细胞的损伤与凋亡,探讨放射性皮肤损伤的作用机制.一、材料与方法1.动物和分组:雄性SD大鼠72只(上海斯莱克公司),体重(350 ±25)g,随机分为对照(未照射)、3、5、7、10、12、14、21及21d后9组,每组8只.2.X射线皮肤损伤模型的制备:10％水合氯醛腹腔注射麻醉后(0.35 ml/100 g),4 MeV X射线照射大鼠臀部皮肤,非照射部位铅板屏蔽,照射面积为45 mm × 40 mm,吸收剂量率为600 cGy/min,总剂量为45 Gy.
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胶原三股螺旋重复蛋白1和骨形成蛋白4在先天性肾盂输尿管连接部梗阻组织中的表达
肾盂输尿管连接部梗阻(UPJO)是小儿泌尿外科的常见疾病,然后有关肾盂输尿管连接处梗阻分子生物学机制目前尚未彻底阐明[1].本研究旨在探究胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)和骨形成蛋白4(BMP4)在肾盂输尿管连接部梗阻(UPJO)组织中的表达,探讨CTHRC1和BMP4异常表达是否与UPJO调控作用机制有关.
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双节段尿培养在结石性肾积脓治疗中的意义
结石梗阻性肾积脓的治疗可采取Ⅰ期或分期经皮肾镜碎石术(PCNL)以通畅引流并清除结石[1],围术期合理应用抗生素可防止感染蔓延,但临床经验用药有较大盲目性[2].2007年8月至2013年6月我们收集59例结石性肾积脓患者的膀胱中段尿和肾盂穿刺尿进行双节段尿细菌培养以指导临床用药,现报道如下.
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黏蛋白差异性表达在胆囊结石成因的作用
我们采用多种方法检测胆囊黏膜中黏蛋白(Muc)表达,探讨胆囊结石的成因.一、资料与方法1.一般资料:经昆明医科大学伦理委员会批准,收集昆明医科大学第一附属医院30例胆结石患者(A组)和27例非结石(B组)患者的胆囊黏膜组织做为对照组.2.Muc-1、Muc-3、Muc-5ac的检测:采用免疫组织化学法、实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、Western blot等方法检测两组中Muc-1、Muc-3、Muc-5ac的表达.
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LIM结构域蛋白2基因在基质-上皮细胞微环境中对前列腺上皮细胞迁移能力的影响
本研究旨在观察LIM结构域蛋白2(LM02)基因在基质-上皮细胞微环境中对前列腺上皮细胞迁移能力的影响.一、材料与方法参照文献[1]方法原代培养前列腺外周带基质细胞(pZs)、移行带基质细胞(TZs);含LM02全长基因的慢病毒载体感染WPMY-1细胞组(WPMY-1-LM02)和空载体组(WPMY-1-NC)本课题组前期已构建.Western blot、免疫荧光检测细胞内蛋白表达;细胞迁移实验检测细胞迁移能力.应用SPSS 17.0进行统计学分析,计量资料采用均数±标准差((x)±s),两样本均数的比较采用双侧t检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.
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Wnt信号通路激动剂促进大鼠小体积肝移植物再生
我们采用Wnt信号激动剂(Wnt Ag)预处理移植供肝,观察其对小体积肝移植物Wnt信号通路、肝细胞增殖、肝再生的影响,旨在寻求促进小体积移植物再生的有效方法.一、材料与方法1.动物模型:选取雄性SD大鼠,体重250～320 g,建立30％体积肝移植大鼠模型,肝右叶、三角叶和尾状叶作为移植物(占标准肝体积27％ ～ 34％),移植物于4℃乳酸林格氏液中保存2h后植入受体大鼠.
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阿托伐他汀促进脑外伤小鼠血管再生改善其神经功能
本研究旨在观察阿托伐他汀治疗脑外伤小鼠神经功能变化和血管再生,探讨阿托伐他汀在脑外伤中的作用.一、材料与方法1.材料:雄性C57/BL6小鼠90只,体重20～25 g,由北京华晨生物公司提供.分为假手术组、生理盐水组和阿托伐他汀组,各30只.液压冲击装置(美国NEWSUN公司MODEL01-B)、Morris水迷宫(荷兰NOLDUS公司ETHOVISION)等设备.2.动物模型:以前囟点后2mm,矢状缝右侧2mm为圆心,磨一直径2 mm骨孔.生理盐水组和阿托伐他汀组打击压力为1.6 ～ 1.8 atm.阿托伐他汀组在造模后1h至第14天予阿托伐他汀灌胃1 mg/(kg·d),生理盐水组予等量生理盐水灌胃.3.改良神经功能缺损评分(mNSS)评分:造模后1、4、7、14、21 d对小鼠行为功能进行评价.
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红花提取花青苷对体外胃癌细胞的侵袭抑制作用
红花系菊科,为我国传统中草药,花青苷类物质是其发挥药理作用的物质基础[1].本研究旨在观察红花单体提取物抗肿瘤效应.一、材料与方法采用高速逆流色谱法分离提取中药红花中高纯度的花青苷[2],配置终质量浓度分别为0、80、100、150、200、250 mg/L的含花青苷培养液,四唑盐(MTS)比色法检测不同浓度花青苷对胃癌细胞SGC-7901生长能力的影响,采用Transwell法观察不同浓度花青苷对胃癌细胞侵袭能力的影响.
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老年性高血压脑出血患者术后肠内营养与并发症研究
老年性高血压脑出血患者术后易引起并发症,除依赖肠外营养疗法外尚得配合肠内营养(EN)支持.本研究旨在探讨老年性高血压脑出血患者术后肠内营养与并发症研究.一、资料与方法1.一般资料:收集我科近6年间收治的老年性高血压脑出血并接受肠内营养支持的患者90例,入院后均在CT定位下行锥颅钻孔血肿腔穿刺置管+尿激酶冲洗外引流术.所有患者排除相关并发症,将之随机分为甲、乙、丙3组,每组30例,各组间年龄、性别、出血量、格拉斯哥(GCS)评分比较,差异无统计学意义(P＞0.05).
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A型肉毒毒素对佐剂关节炎大鼠神经源性炎症机制的研究
本研究希望在分子生物学层面观察关节腔注射A型肉毒毒素(BoNT/A)是否可以减轻关节炎炎性因子的水平,并探讨其在神经源性炎症中的作用.一、材料与方法1.材料:取成年Wistar雄性大鼠120只,体重250 ～ 300 g,适应性饲养1周后进行模型制作.抗白细胞介素(IL-) 1β一抗(ab9722)购自Abcam公司;弗式完全佐剂剂(CFA)购自Sigma公司;奥林巴斯倒置显微镜,UVP凝胶成像分析系统(美国UVP公司).
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高位腰椎间盘突出症的诊疗特点
我们应用Oswestry功能障碍指数(ODI)评分探讨术后与术前ODI的关系.一、材料与方法1.一般资料:选取36例单侧高位节段突出(L1 ～ L2、L2～L3及L3～L4)患者为A组,36例L4～L5及L5 ～S1单侧突出患者为B组.术前均有明确的手术指征:进行性神经功能减退、难治性的和(或)复发性的疼痛、CT或磁共振成像(MRI)提示单侧突出或脱出.2.手术方式:均行同侧的经椎间孔椎体间融合术(TLIF)及椎弓根内固定.
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腹腔热灌注化疗对Ⅲ期胃癌腹腔游离癌细胞的杀灭作用及其对预后的影响
目的 观察术中腹腔热灌注化疗(HIPEC)对Ⅲ期胃癌腹腔游离癌细胞(IFCCs)的杀灭作用及其对预后的影响.方法 40例Ⅲ期胃癌患者接受了胃癌根治术及术中腹腔热灌注化疗,收集热灌注化疗前腹腔灌洗液标本,分别采用脱落细胞学检测、肿瘤标志物检测、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测癌胚抗原(CEA) mRNA、角蛋白20(CK20) mRNA等3种方法检测腹腔游离癌细胞,随访患者预后,研究上述检测结果与预后的关系.结果 脱落细胞学、腹水肿瘤标志物、RT-PCR检测IFCCs的阳性率分别为40.0％、52.5％和62.5％.40例患者总生存期为48.3个月[95％可信区间(CI):33.6 ～ 63.0个月],1、3、5年生存率分别为100.0％、63.4％、30.4％.脱落细胞学检测、肿瘤标志物检测、RT-PCR检测腹腔游离癌细胞阳性、阴性患者总生存期差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 HIPEC可通过作用于IFCCs,延长Ⅲ期胃癌患者生存期.
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微小RNA-27a在肝癌组织的表达及其机制
目的 检测微小RNA(miRNA,miR)-27a在肝癌中的表达,探讨miR-27a在肝癌细胞中的功能和作用机制.方法 采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-27a在肝癌组织中的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖实验检测miR-27a对肝癌细胞的增殖影响,荧光素酶报道载体系统验证miR-27a对Sprouty2(Spry2)基因3'非翻译区的作用,Real-time PCR检测miR-27a对Spry2基因mRNA的抑制作用.结果 miR-27a在肝癌组织的表达量(0.62±0.54)比癌旁组织(0.26±0.13)显著上调(P＜0.01),而且肝癌肿块越大的患者miR-27a的表达越高(＞5cm组0.92±0.66,≤5 cm组0.37±0.27,P＜0.05),提示miR-27a的表达与肿瘤大小呈正相关.CCK-8结果显示miR-27a可显著促进肝癌细胞的增殖(0、24、48、72 h的吸光度值分别为:对照组0.54±0.01、0.74±0.04、0.94±0.03、1.23±0.07,miR-27a转染组0.55±0.01、0.71±0.02、1.02±0.08、1.59±0.09,P＜0.01).荧光素酶报道载体结果说明miR-27a直接作用于Spry2基因的3'非翻译区(miR-27a野生型组抑制率约40％,突变型组约5％).Real-time PCR检测结果说明miR-27a对Spry2基因的mRNA有显著的抑制作用(miR-27a转染组0.0065±0.0005,对照组0.0120±0.001 0,抑制率约47％,P＜0.05).结论 miR-27a在肝癌中高表达,可通过抑制抑癌基因Spry2的表达促进肝癌细胞的增殖.
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血清胰岛素样生长因子-1对钙化性主动脉瓣狭窄及左室重构的影响
目的 探讨血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对钙化性主动脉瓣狭窄程度及左室重构的影响及临床意义.方法 选取钙化性主动脉瓣狭窄患者60例和健康体检者20例,根据主动脉瓣狭窄程度(A、B、C)和左室构型[左室正常构型(LVN)、向心性重构(LVCR)、向心性肥厚(LVCH)、离心性肥厚(LVEH)]分组.用实时三维超声心动图(RT-3DE)分析左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期容积(LEDV)、左室质量指数(LVMI)和左室重构指数(LVRI),用酶联免疫吸附法(ELISA)测血清IGF-1浓度.多组间均数比较用单因素方差分析,相关性分析用Pearson分析法.结果 (1)A、B、C、D组血清IGF-1浓度分别为(97.1±13.9)、(115.9±25.8)、(117.3±42.8)、(72.25±11.1)ng/ml,A、B、C均显著高于对照组(P＜0.05),B、C组高于A组(P＜0.05),但B、C组之间差异无统计学意义(P＞0.05).(2) LVCR、LVCH、LVEH组和LVN组血清IGF-1浓度分别为(112.6±51.9)、(135.6 ±42.8)、(127.7±41.2)、(81.5±22.5)ng/ml,前3组均显著高于LVN组(P＜0.05),LVN组与对照组[IGF-1:(72.3±11.1) ng/ml]差异无统计学意义(P＞0.05),LVCR组高于LVN组而低于LVCH和LVEH组(P＜0.05),LVCH组和LVEH组之间差异无统计学意义(P＞0.05).(3) IGF-1与LVMI和LVRI呈正相关(r=0.570,P＜0.01;r=0.682,P＜0.01).结论 IGF-1促进主动脉瓣钙化,在左室重构中起重要作用.
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体外膜肺氧合在器官移植供体支持中的应用
目的 探讨在器官移植前体外膜肺氧合(ECMO)对呼吸循环不稳定供体支持的作用.方法 分析4例脑死亡器官捐献(DBD)患者,紧急行ECMO支持,辅助9.5 ～78.0 h待肝肾功能得到一定改善及相关程序完毕后手术获取供肝和供肾.结果 4例患者分别辅助78.0、32.0、9.5、14.0h,内环境稳定,肝肾功能得到一定改善.获得的2个肾脏因实变弃用,其余10个器官均顺利移植,术后2例出现移植肾功能延迟恢复,10例受者痊愈出院.结论 ECMO对移植供体可以提供有效的呼吸循环支持,改善器官功能,为移植赢得充足时间,有效弥补了我国器官移植供体紧缺的现状.
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右美托咪定对原位肝移植术患者β-淀粉样蛋白和术后认知功能障碍的影响
目的 观察右美托咪定对原位肝移植术(OLT)患者β-淀粉样蛋白和术后认知功能障碍(POCD)的影响.方法 OLT患者60例,年龄18 ～60岁,美国麻醉医师协会评分标准(ASA)分级Ⅰ～Ⅲ级,按随机数字表法随机分为两组:右美托咪定组(DX组)和对照组(NS组),各30例.DX组患者气管插管后经静脉输注右美托咪定负荷剂量0.5 μg/kg(10 min),继之以维持剂量0.3μg/(kg·h)输注至术毕,NS组静脉输注等量生理盐水.术前1d和术后7d使用神经心理测验评估两组患者的认知功能.分别于术前(T1)、无肝期0.5 h(T2)、新肝期2.0 h(T3)、术毕(T4)、术后1 d(T5)、术后7 d(T6)采集两组患者静脉血,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分析β-淀粉样蛋白含量并比较.结果 DX组患者机械通气时间少于NS组,差异有统计学意义(P＜0.05).DX组患者POCD发生率低于NS组,分别为13.3％和40.0％,差异有统计学意义(P＜0.05).组间比较,DX组患者T4～T6时点β-淀粉样蛋白含量显著低于NS组相应时点,差异有统计学意义(P＜0.01);组内比较,与术前T1时点比较,两组患者T2～T5时点β-淀粉样蛋白含量均逐渐升高,于T5时点达峰后回落,DX组T6时点与T1时点比较差异无统计学意义(P＞0.05),而NS组T6时点仍高于T1时点(P＜0.01).结论 右美托咪定降低原位肝移植术患者β-淀粉样蛋白含量,降低术后认知功能障碍发生率.
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N-myc下游调节基因-1在前列腺癌组织和癌细胞株的表达及其临床意义
目的 探讨N-myc下游调节基因1(NDRG1)在前列腺癌(PCa)组织和不同PCa细胞株的表达及其意义.方法 应用免疫组织化学染色法检测NDRG1在46例PCa和42例良性前列腺增生(BPH)组织的表达,Western blot技术检测NDRGI在正常前列腺上皮细胞RWPE1、癌细胞株LNcap和PC-3的表达.结果 NDRG1蛋白在BPH组织中阳性表达率95.2％ (40/42),在PCa组织中阳性表达率43.5％ (20/46),组间差异有统计学意义(P＜0.05).NDRG1表达与PCa病理分级和临床分期呈负相关,不同组间差异有统计学意义(P＜0.05).NDRG1蛋白在PC-3和LNcap癌细胞株的表达量均低于其在RWPE1的表达(P＜0.05).结论 NDRG1在PCa组织和不同癌细胞株中的表达均降低,NDRG1的缺失表达可能与前列腺癌的发生、发展有关.
关键词： N-myc下游调节基因 前列腺癌 -
膜联蛋白A1在胃间质瘤组织的表达及意义
目的 观察膜联蛋白A1(Annexin A1)在胃间质瘤及瘤旁正常组织中的表达,并分析其与胃间质瘤临床病理参数间的关系.方法 采用免疫组织化学、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测64例胃间质瘤患者瘤组织及距瘤组织10 cm处的正常胃黏膜组织中Annexin A1的表达,并分析其与胃间质瘤临床相关病理参数间的关系.结果 64例胃间质瘤患者瘤组织中Annexin A1的阳性表达率、mRNA表达水平、蛋白表达水平(76.56％;0.3649 ±0.006 1;0.434 7±0.005 9)均高于其在瘤旁正常组织中的表达(6.25％;0.1457±0.0210;0.121 1±0.0191).瘤组织中Annexin A1的阳性表达率与是否有淋巴结转移有关,Annexin A1 mRNA及蛋白表达水平均随美国国家卫生研究院(NIH)标准分级的升高而上升.结论 Annexin A1的阳性表达与胃间质瘤的发生及转移有关.
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活动期与缓解期溃疡性结肠炎患者黏膜主要菌群研究
目的 比较活动期与缓解期溃疡性结肠炎(UC)之间的黏膜微生态(MAM).方法 收集21例正常对照、41例活动期UC和9例缓解期UC的结、直肠黏膜.采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测MAM主要菌群的数量.结果 与健康对照比较,UC黏膜总菌数无显著改变.球形梭菌(C.coccoides)、普拉梭菌在(F.prausnitzii)活动、缓解期UC结肠和直肠溃疡中显著减少(8％比22％,10％比22％,10％比22％,10％比22％,P＜0.05;4％比13％,7％比13％,4％比13％,4％比13％,P＜0.05).柔嫩梭菌(C.leptum)在活动、缓解期结肠溃疡,活动期直肠溃疡与非溃疡中显著减少(9％比22％,11％比22％,9％比22％,16％比22％,P＜0.05).大肠杆菌(E.coli)在活动、缓解期结肠溃疡以及活动期直肠溃疡与非溃疡中显著增加(21％比6％,21％比6％,P＜0.05;11％比6％,21％比6％,P＜0.05).缓解期结肠C.leptum显著高于活动期结肠(11％比9％,P ＜0.05),缓解期直肠普氏菌属(Prevotella)数量显著高于活动期直肠(2％比0％,P＜0.01).结论 活动与缓解期UC的MAM与健康对照不同,活动与缓解期之间黏膜主要菌群差异无统计学意义;MAM益生菌的减少及条件致病菌的增多,提示它们可能参与UC的发病与炎症的维持.
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“蚕食法”结合“局部揭盖法”治疗黄韧带骨化型胸椎管狭窄症
目的 探讨黄韧带骨化型胸椎管狭窄症患者的椎管扩大减压手术策略.方法 收治129例胸椎管狭窄症患者,其中男78例,女51例,年龄31 ～ 76岁,平均54.5岁.病程为1～21个月,平均7.3个月.病变累及节段:T1 ～ T7患者50例、T8 ～T11患者79例.术前脊髓损伤程度分级(Frankel分级)49例患者为B级、45例患者为C级、35例患者为D级.日本骨科协会(JOA)评分为(18.05±2.15)分.通过影像学检查手段对黄韧带骨化型胸椎管狭窄症进行分类,单纯黄韧带骨化60例,黄韧带骨化合并上关节突肥大69例,对患者均采用“蚕食法”结合“局部揭盖法”实施压迫节段的椎管扩大减压术同时进行椎弓根螺钉内固定术.术后3、6个月、1、2、5年进行随访,平均随访4.5年.对随访结果采用JOA评分评价,针对术后每个阶段的状态展开分析与评价,评价治疗效果.结果 手术耗时2.5 ～5.0h,出血量为300 ～1 600 ml,平均700 ml.有3例患者术后出现脊髓水肿的症状,对症治疗后短期恢复,其余126例患者接受手术治疗后,脊髓功能恢复效果良好.末次随访中,全体患者的神经功能均有显著改善.末次随访JOA评分为(24.37±1.94)分.治疗后Frankel分级:13例为C级,26例为D级,90例为E级.治疗后,129例患者均取得较好的骨性融合,均未发生固定物松动或者断裂等问题.结论 “蚕食法”结合“局部揭盖法”治疗黄韧带骨化型胸椎管狭窄症是一种安全有效的手术方法,能够降低黄韧带骨化型胸椎管狭窄症患者的手术风险.
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果糖-1,6-二磷酸酶在肝癌组织的表达及其对预后的影响
目的 检测果糖-1,6-二磷酸酶(FBP1)在肝癌患者肿瘤组织及癌旁组织中的表达,探讨其对肝癌患者预后的影响.方法 应用免疫组织化学法检测90例肝癌患者肿瘤组织及对应的癌旁组织中FBP1表达.采用配对秩和检验比较肝癌组织与癌旁组织中FBP1的表达水平,应用x2检验分析FBP1表达与临床病理特征的关系.应用Kaplan-Meier法和Log-rank检验分析FBP1表达水平与患者生存期的关系.结果 肝癌组织中FBP1的表达水平明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(Z =7.952,P＜0.01),FBP1在＞3 cm的肝癌组织中表达显著低于≤3 cm的肝癌组织(P＜0.01).美国肿瘤联合会(AJCC)分期中,Ⅲ～Ⅳ期肝癌组织FBP1表达水平低于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.01),且FBP1低表达的肝癌患者平均生存期显著低于FBP1高表达组[15.29个月比50.17个月,95％可信区间(CI):19.71 ～38.30,P＜0.05].结论 肝癌组织中FBP1表达水平显著下降,FBP1低表达患者预后较差,FBP1与肝癌预后相关,可作为判断肝癌患者预后的参考指标.
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细胞外信号调节激酶5在结肠癌组织的表达及意义
目的 观察细胞外信号调节激酶5(ERK5)在结肠癌及癌旁正常组织中的表达并分析其与临床相关病理参数间的关系.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(SP)技术及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测106例结肠癌组织及距离病灶10 cm处的正常结肠黏膜组织中ERK5及其mRNA的表达,并且分析ERK5的表达与临床相关病理参数间的关系.结果 106例结肠癌组织中ERK5的阳性表达率及其mRNA的表达水平(75.47％;1.44±0.01)均高于癌旁正常组织(11.32％;0.54 ±0.02).结肠癌组织中ERK5的表达水平与病灶侵袭深度、分化程度、临床分期及是否有淋巴结转移有关.ERK5阳性表达患者的24个月生存率(22.20％)与阴性表达患者(43.67％)比较降低.结论 ERK5的阳性表达与结肠癌的发生有关.
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含HECT和锚蛋白结构域的E3泛素化连接酶-1在肝癌中表达的意义及其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响
目的 观察含HECT和锚蛋白结构域的E3泛素化连接酶-1(HACE1)在肝癌中的表达水平与预后的关系及其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 免疫组织化学检测100例肝癌和癌旁组织HACE1的表达,Kaplan-Meier和Log-rank分析HACE1表达水平与患者预后的关系;利用脂质体质粒转染建立Huh7-HACE1细胞株,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)观察HACE1过表达对Huh7细胞增殖的影响,应用Transwell检测HACE1过表达对Huh7细胞侵袭能力的影响.结果 肝癌组织中HACE1表达低于和高于癌旁组织的患者分别为68和32例,两者5年生存率对比(70.8％比90.3％)和5年复发率对比(59.7％比30.6％)差异有统计学意义(P＜0.01).细胞增殖实验结果显示4d后Huh7-HACE1组吸光度(A)值显著低于对照组(P＜0.05);Transwell结果显示Huh7-HACE1组侵袭能力显著低于对照组(P＜0.05).结论 HACE1基因在肝癌组织表达水平显著低于癌旁组织,其表达水平与肝癌预后相关;过表达HACE1可抑制肝癌Huh7细胞的增殖和侵袭能力.该基因可能在肝细胞肝癌的发生发展中起重要作用.
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CD57+自然杀伤细胞及CD68+巨噬细胞浸润密度对食管癌患者预后的影响
目的 探讨食管癌上皮组织中CD57+自然杀伤细胞(NK)及CD68+巨噬细胞浸润密度与临床病理特征的相关性及对食管癌患者预后的影响.方法 应用免疫组织化学方法检测138例Ⅱ～Ⅲ期食管癌患者组织中CD57+ NK及CD68+巨噬细胞的浸润水平,采用x2检验分析其浸润密度与临床病理特征的相关性,拟合多因素Cox模型分析上述指标对食管癌患者生存时间及预后的影响.结果 CD57+ NK及CD68+巨噬细胞浸润水平与人口学及临床病理特征无明显相关;在调整了性别、年龄、肿瘤大小及TNM分期的影响后,食管癌肿瘤组织中CD57+ NK细胞浸润水平高的患者具有更低的死亡风险[风险比(HR)=0.615,95％可信区间(CI):0.405～0.933,P＜0.05];CD68+巨噬细胞浸润水平高的食管癌患者具有更高的死亡风险(HR=1.499,95％CI:1.008～2.230,P ＜0.05);CD57+ NK细胞浸润水平低并且CD68+巨噬细胞浸润水平高的食管癌患者具有更高的死亡风险(HR=2.573,95％ CI:1.408 ～4.701,P＜0.01);联合CD57、CD68阳性细胞浸润密度构建的Cox模型具有更好的拟合优度.结论 食管癌组织中CD57+ NK和CD68+巨噬细胞浸润密度均为独立预后因素,两者联合检测具有更优的预后判断能力.
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中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白在非小细胞肺癌组织的表达
目的 探讨中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及意义.方法 以130例NSCLC患者切除肿块标本作为实验组,肿块边缘5 cm以上的远癌组织作为对照组,其中腺癌60例,鳞癌70例.通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的方法检测NSCLC组织中NGAL mRNA的表达;免疫组织化学技术检测NGAL蛋白的表达,并分析NGAL蛋白的表达与患者临床特征的关系.结果 (1)腺癌组织NGAL mRNA的FQ-PCR结果与β-肌动蛋白(β-actin)的ACt值之差(-2.9±1.4),与鳞癌组织(-2.4±1.1)比较,差异无统计学意义(P＞0.05);腺癌组织与鳞癌组织较癌旁组织(-1.5±1.4)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)NSCLC中,鳞癌组织中NGAL蛋白阳性表达率为55.71％ (39/70),腺癌组织阳性表达率为78.33％(47/60),远癌组织为31.53％ (41/130),三者阳性表达率差异有统计学意义(x2=5.942,P＜0.05).(3) NSCLC组织中NAGL蛋白的表达和患者年龄、性别、是否吸烟及有无淋巴结转移无相关(P＞0.05).结论 NGAL在NSCLC组织内呈高表达,并与NSCLC分型相关,可能成为早期诊断NSCLC的一个标志物.
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三角形四肽重复干扰素诱导蛋白2在食管癌组织中表达及临床意义
目的 观察三角形四肽重复干扰素诱导蛋白2(IFIT2)在食管癌组织中的表达,探讨IFIT2与食管癌患者临床指标及预后的关系.方法 采用免疫组织化学法检测99例食管癌组织芯点及4例正常食管组织中的IFIT2表达,并分析其临床意义,运用Cox模型分析其与食管癌患者死亡的相关性.结果 IFIT2主要表达于食管癌细胞及食管正常组织的细胞质和细胞核,在食管癌肿瘤细胞中呈低表达为主,在正常的食管上皮细胞中呈高表达为主.男性患者IFIT2染色H-score≥50的比率显著高于女性患者(x2=9.349,P＜0.01);IFIT2染色强度与年龄、T分期、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、肿瘤大小等预后相关因素的关系差异均无统计学意义(P＞0.05).Log-rank生存分析结果显示,IFIT2高表达组[57.16(50.83 ～63.50)个月]比低表达组[41.58(31.36 ～51.80)个月]平均术后生存时间显著延长15.58个月,差异有统计学意义(x2=6.531,P＜0.05).食管癌组织多因素Cox模型分析显示,IFIT2是食管癌独立的正性预后因素[风险比(HR) =0.41,95％可信区间(CI):0.19 ～0.88,P＜0.05].结论 IFIT2在食管癌中呈低表达,其对食管癌的预后判断具有潜在价值.
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白细胞介素-33在非小细胞肺癌患者中的表达及其临床意义
目的 探讨人非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清和组织中白细胞介素-33(IL-33)的表达及意义.方法 收集80例NSCLC患者、46例肺良性疾病(LBD)患者血清,并选取30例健康体检者血清作为对照组(HC),采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清中IL-33含量,并分析其与患者临床病理特征的相关性,同时应用受试者工作特征曲线(ROC)和二元Logistic回归分析比较IL-33和癌胚抗原(CEA)对NSCLC的诊断价值;采用免疫组织化学染色法检测肺癌组织芯片中90例癌组织及配对的癌旁组织中IL-33蛋白的表达,并采用x2检验分析IL-33蛋白表达与临床病理特征的关系,应用Kaplan-Meier法及Log-rank检验分析IL-33表达与患者总生存期(0S)的关系;同时用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)验证免疫组织化学结果.结果 NSCLC患者血清IL-33含量显著高于LBD患者(P＜0.01)和HC组(P＜0.01),差异均有统计学意义.NSCLC患者血清IL-33含量与患者性别(P＜0.01)、病理类型(P＜0.05)、TNM分期(P＜0.05)、分化程度(P＜0.05)均呈显著相关,而与其他临床病理特征无明显相关.IL-33在肺癌诊断中的敏感性(93.67％)和准确性(85.32％)均高于CEA的20.00％和39.09％,但特异性低于CEA.两者联合检测诊断NSCLC的敏感性、特异性和准确性均处于较高水平.免疫组织化学结果显示,IL-33蛋白在癌旁组织中的阳性表达率为51.36％ (45/88),显著高于肺癌组织的17.24％(15/87,P＜0.01);肺癌组织中IL-33表达水平和患者的性别、年龄、肿瘤大小、病理分级、TNM分期、淋巴结转移、远处转移均无明显相关(P＞0.05).根据生存曲线结果,IL-33表达阴性患者的总生存期与IL-33表达阳性患者的总生存期比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-33和CEA联合检测有助于NSCLC诊断.
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辛伐他汀在脓毒症和严重脓毒症患者中对血液白细胞介素-6水平的影响
目的 观察比较辛伐他汀在脓毒症患者和严重脓毒症患者中对血液白细胞介素-6(IL-6)水平的影响.方法 54例脓毒症患者和47例严重脓毒症患者为研究对象,两种类型的患者均随机分为对照组和辛伐他汀组.辛伐他汀组患者接受每天40 mg辛伐他汀治疗至少15d,其他治疗与对照组差异无统计学意义.在入院第1、5、10、15天分别采集患者抗凝血,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血浆IL-6水平,通过Wileoxon秩和检验比较不同组间IL-6水平的差异.结果 在脓毒症患者中,与对照组比较,辛伐他汀治疗组患者血浆IL-6水平显著降低,且随着辛伐他汀治疗时间延长有下降趋势,入院第1、5、10、15天,辛伐他汀治疗组血浆IL-6水平中位数分别为133、68、48、35 pg/ml,对照组血浆IL-6水平中位数分别为136、96、67、62 pg/ml;入院第10、15天,辛伐他汀治疗组和对照组患者血浆IL-6水平之间差异有统计学意义(P＜0.05).在重症脓毒症患者中,入院第1、5、10、15天,辛伐他汀治疗组血浆IL-6水平中位数分别为284、158、92、72 pg/ml,对照组患者血浆IL-6水平中位数分别为276、163、97、78 pg/ml;辛伐他汀治疗组患者血浆IL-6水平虽然随着辛伐他汀治疗时间的延长有下降趋势,但与对照组比较,血浆IL-6水平无明显变化.结论 他汀类药物在脓毒症患者和严重脓毒症患者中对血浆IL-6的影响不同.
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碘钠同向转运体在分化型甲状腺癌组织的表达及临床意义
目的 采用免疫组织化学方法对滤泡细胞来源的不同甲状腺组织进行染色并观察碘钠同向转运体(NIS)的表达.方法 收集甲状腺手术切除标本存档蜡块共187例,癌旁甲状腺组织30例为对照,采用链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测NIS在不同甲状腺组织中的表达.结果 分化型甲状腺癌组织NIS阳性率为12.69％,甲状腺腺瘤NIS阳性率为30.43％,癌旁甲状腺组织NIS阳性率为46.67％,原发性甲状腺机能亢进症组织NIS阳性率为100.00％,甲状腺腺瘤和癌旁甲状腺组织两组比较差异无统计学意义(P＞0.05),其余两两比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 NIS蛋白在分化型甲状腺癌的细胞膜上的表达从阴性到强阳性均有分布,NIS蛋白在分化型甲状腺癌的细胞膜上的阳性表达水平可间接预测分化型甲状腺癌细胞的摄碘能力和131I放射治疗的效果.
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N-myc下游调节基因-1在肾癌组织的表达及其临床意义
目的 探讨N-myc下游调节基因1(NDRG1)在肾细胞癌(RCC)组织中的表达及其与RCC临床病理学特征的相关性.方法 采用免疫组织化学PV-6000法检测128例手术切除RCC组织及20例癌旁肾组织中NDRG1蛋白的表达,分析NDRG1阳性表达与肾癌病理类型、组织学分级和临床分期等参数之间的关系.结果 NDRG1在正常肾组织中和RCC组织的阳性表达率分别为100％(20/20)和54.7％ (70/128),组间差异有统计学意义(P＜0.05).随着RCC临床分期、组织学分级的增加,NDRG1阳性表达程度逐渐减低,各组间差异均有统计学意义(P＜0.05),NDRG1在淋巴结转移组阳性表达率显著低于无转移组(P＜0.05).结论 NDRG1蛋白在RCC的表达程度降低且与其分期、分级等病理参数关系密切,提示NDRG1在RCC发生、发展中可能发挥抑癌基因的作用.
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神经调节蛋白1在恶性肿瘤中的研究进展
神经调节蛋白1(NRG1)是一类重要的信号蛋白,隶属于表皮生长因子(EGF)家族,其在多种组织中表达,可作为配体结合并活化受体酪氨酸激酶家族(ErbBs)成员,介导细胞间多种信号转导.国内外多项研究表明,NRG1与肿瘤的多种病理过程相关.现对NRG1在恶性肿瘤发生发展中的作用及机制进行综述.
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抗凝治疗与肝纤维化研究进展
肝纤维化是各种慢性肝脏疾病的共同病理过程,患者的凝血状态会发生一系列的变化,既往认为低凝状态是肝纤维化的特点,但近期研究结果发现,肝纤维化患者的血液可呈高凝状态,并且是促进肝纤维化发展的重要因素,而抗凝治疗也成为防治纤维化的有效途径,但抗凝治疗在药物选择、用药剂量、用药时间及指标监测等方面的问题仍有待解决.
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肝激酶B1抑制肿瘤机制的新进展
1998年,在研究黏膜息肉黑斑综合征(PJS)的过程中人们首次鉴定出抑癌基因肝激酶B1(LKB1)也被称为丝氨酸、苏氨酸激酶11(STK11).从那以后,人们针对LKB1进行了大量的研究.有关LKB1功能的研究进展提示:LKB1在调节能量代谢、细胞生长与增殖、凋亡、分化、细胞极性等方面发挥重要作用.我们将对过去有关LKB1的研究做一下简单的总结.
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乳腺癌分子分型的研究进展
乳腺癌是一种高度异质性疾病,根据免疫组化雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人类表皮生长因子受体-2(Her-2)的表达水平可以将乳腺癌分为Luminal A型、Luminal B型、Her-2阳性型、基底细胞样(Basal-like)型4个主要亚型.随着肿瘤临床个体化治疗的开展以及乳腺癌基因表达谱的深入研究,其在临床中的应用越来越广泛.
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脂肪酸转位酶与缺血再灌注心肌损伤的研究进展
心肌缺血再灌注损伤(MIRI)是体外循环心内直视手术常见的并发症,也是术后影响心功能恢复的主要原因.研究结果证实,心肌胰岛素抵抗(IR)是其发生机制之一,而在心肌IR的发生过程中,心肌的能量底物脂肪酸代谢异常紊乱.脂肪酸转位酶(FAT/CD36)作为广泛表达于各种组织细胞的膜糖蛋白,在许多生物效应中发挥着重要作用,与脂肪酸转运、胰岛素抵抗、细胞凋亡残物的清理、动脉粥样硬化、油味觉等有着密切的联系,同时,FAT/CD36还可能参与了心肌缺血再灌注损伤IR的过程.因此,本综述主要介绍近年来FAT/CD36的生物学特性、与脂肪酸转运的关系、表达和转位的调控机制以及在心肌IR发生发展中的作用的研究进展,并就MIRI的可能新机制和治疗方法作一展望.
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后内侧入路建立兔膝关节软骨缺损动物模型
目的 以膝关节后内侧入路手术方法建立兔膝关节软骨缺损动物模型.方法 选择成年12个月龄新西兰大白兔20只,雌雄不限,随机编为5组.组1:进行兔膝关节运动规律研究确定股骨髁主要负重区;组2:无痛处死实验兔后取双膝关节离体标本,解剖观察膝关节周围主要肌肉、神经分布;组3:利用血管造影及三维重建观察兔膝关节周围主要血管分布情况;组4:无痛处死实验兔后取双膝关节离体标本,分别选择髌前内侧入路和膝关节后内侧入路显露股骨髁,比较术野显露差异;组5:活体兔膝关节后内侧入路构建股骨内侧髁软骨缺损.结果 关节负重区中点与股骨髁上中点连线与股骨干轴线夹角平均为90° ～130°,提示兔股骨膝关节主要负重区位于股骨髁后部;后内侧拟行手术切口处主要组织有浅表的股薄肌筋膜,深面有半膜肌、半腱肌,切开股薄肌筋膜及半膜肌于股骨远端止点后于胫侧副韧带、半腱肌、腓肠肌内侧头组成的三角间隙内切开关节囊,即可显露股骨内侧髁后部;膝后主要神经支离手术切口短距离平均为(0.45 ±0.11) cm,兔膝关节离后内侧切口近的动脉为膝降动脉,短距离平均为(0.31 ±0.06) cm;离体标本与活体实验证明后内侧手术切口可很好地显露股骨内侧髁主要负重区软骨.结论 后内侧人路构建兔膝关节内侧股骨髁主要负重区软骨缺损是一种较为理想的动物实验手术方式.
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从当今乳腺癌基础研究的现状展望未来的研究方向
2015年对乳腺癌基础研究是重要的一年,研究者们在乳腺肿瘤的发生、转移、耐药机制、化疗与免疫治疗、基因组学以及生物化学技术等领域均取得了丰硕的成果,为个体化的基因治疗奠定了坚实的基础.本文从当前乳腺癌研究领域的热点及重要进展来展望未来乳腺癌研究的发展方向.
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微小RNA-711对乳腺癌增殖和侵袭的影响
目的 探讨微小RNA-711(miR-711)对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响.方法 应用miR-711模拟物和miR-711抑制剂转染乳腺癌细胞;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞侵袭力;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测20例高转移乳腺癌组织和30例低转移乳腺癌组织中的miR-711的表达水平.结果 miR-711模拟物能促进乳腺癌细胞增殖(0.20±0.14比0.32±0.25,P＜0.05)和侵袭[(201.00±10.10)个比(395.00±7.23)个,P＜0.05].而miR-711抑制剂能抑制乳腺癌细胞的增殖(0.21 ±0.16比0.13 ±0.09,P＜0.05)和侵袭[(212.00±6.43)个比(109.00± 10.50)个,P＜0.05].miR-711在高转移乳腺癌中高表达(5.6±0.6比1.5±0.5,P＜0.05).结论 miR-711与乳腺癌的转移密切相关,可促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭.
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在三阴性乳腺癌组织中环氧合酶-2、核因子-κB及血管内皮生长因子的表达
目的 探讨环氧合酶-2 (COX-2)、核因子-κB(NF-κB)及血管内皮生长因子(VEGF)在三阴性乳腺癌(TNBC)组织中的表达及临床意义.方法 选取100例乳腺癌患者,其中三阴性乳腺癌50例,非三阴性乳腺癌50例,采用免疫组织化学法检测乳腺癌组织中NF-κBp65、COX-2及VEGF的表达,分析相关临床病理资料.结果 COX-2在三阴性与非三阴性乳腺癌中的表达分别为76％(38/50)和70％ (35/50),差异无统计学意义(P＞0.05),VEGF在三阴性乳腺癌病变和非三阴性乳腺癌病变中阳性表达率分别为60％ (30/50)和36％ (18/50),表达差异有统计学意义(P＜0.05).NF-κB在三阴性乳腺癌病变和非三阴性乳腺癌病变中阳性表达率分别为66％ (33/50)和32％(16/50),表达差异有统计学意义(P＜0.05).三阴性乳腺癌组织中乳腺癌中NF-κB与VEGF,COX-2与VEGF表达显著呈正相关.结论 三阴性乳腺癌病变中,COX-2、NF-κB及VEGF均呈现高表达,与非三阴性乳腺癌病变组织比较,NF-κB及VEGF表达差异有统计学意义.且NF-κB与VEGF,COX-2与VEGF表达呈明显正相关.
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乳腺癌组织中Yes相关蛋白的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系
目的 观察Yes相关蛋白(YAP)在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况,探讨其与乳腺癌侵袭转移的关系.方法 收集我院2008年1月至2009年1月手术治疗的乳腺癌患者资料以及石蜡标本共177例.采用免疫组织化学的方法观察YAP、基质金属蛋白酶(MMP)-2在乳腺癌组织及癌旁组织的表达情况,探讨YAP与乳腺癌侵袭转移的关系.结果 (1)YAP在乳腺癌组织中的表达率仅为29.8％ (28/94),显著低于YAP在癌旁组织中的表达率(74.7％,62/83),差异有统计学意义;发现YAP的低表达与组织学类型(x2=20.897,P＜0.01)和肿块的大小(x2=6.623,P＜0.05)有关;YAP在乳腺癌组织内的表达主要在胞质,而在正常乳腺上皮组织中的表达主要在细胞核内.(2)乳腺癌组织中YAP与MMP-2的表达呈负相关(r=-0.253,P＜0.05).YAP的低表达与组织学类型肿块大小有关,MMP-2的高表达与淋巴结是否发生转移有关.结论 YAP在乳腺癌组织可能扮演抑癌基因的角色,其可能抑制肿瘤的侵袭转移.
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RNA干扰乳腺癌耐药蛋白基因表达改变乳腺癌耐药细胞耐药性的研究
目的 利用RNA干扰技术抑制乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因的表达并提高对阿霉素(ADR)的敏感性.方法 针对BCRP的mRNA序列,设计两条RNA干扰链(BCRP-A和BCRP-B),构建出小干扰RNA(siRNA)表达载体pG-BCRP-A siRNA-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和pG-BCRP-B siRNA-EGFP.实验分为4组:A、B、C3组分别转染BCRP-A、BCRP-B、HK-siRNA(对照组);D组转染过程中未加入任何质粒(空白组).通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测siRNA阻断BCRP基因表达的效率,应用噻唑蓝(MTT)法分析siRNA干扰后MCF-7/ADR的耐药性变化.结果 RT-PCR和Western blot法检测结果表明BCRP-A和BCRP-B两条干扰链干扰效率不一,前者较后者对BCRP mRNA和蛋白质表达抑制率均明显优于后(P＜0.05);MTT法分析结果说明BCRP-A组对ADR的药物敏感性明显提高,其IC50为(184.6±25.3) ng/ml,与BCRP-B干扰组和对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 RNA干扰技术可用于抑制BCRP基因的表达,并提高对ADR的敏感性,但不同干扰链的干扰效率差异较大.
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二脂酰甘油酰基转移酶在乳腺癌组织的表达及其临床意义
目的 探讨二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT1)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 收集手术切除的乳腺癌及癌旁乳腺组织各64例,采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测DGAT1的表达,并分析DGAT1在乳腺癌及正常乳腺组织中的表达差异,以及乳腺癌组织中DGAT1的表达与患者年龄、病理组织学分级、肿瘤大小、TNM分期、人类表皮生长因子受体-2(Her-2)/雌激素受体(ER)/孕激素受体(PR)表达之间的关系.应用SPSS 22.0统计软件分析,不同组间比较采用x2检验.结果 癌旁乳腺组织标本中,DGAT1阳性表达率为37.50％,乳腺癌组织标本中,阳性表达率为73.44％,DGAT1蛋白在乳腺癌组织中及癌旁乳腺组织中的表达差异有统计学意义(P＜0.01),DGAT1在乳腺癌组织中的表达显著高于其在癌旁乳腺组织.病理组织学分级Ⅰ级组阳性表达率为58.33％,Ⅱ级组阳性表达率为86.84％,Ⅲ级组阳性表达率为85.71％;TNM分期:Ⅰ期组阳性表达率为41.67％,Ⅱ期组阳性表达率为73.68％,Ⅲ期组阳性表达率为85.71％.DGAT1的表达与病理组织学分级、TNM分期明显相关(P＜0.05),病理组织学分级高、TNM分期高者DGAT1高表达.＜50岁组阳性表达率为82.14％,≥50岁组阳性表达率为86.11％;肿瘤大小(长径)≤2 cm组阳性表达率为68.42％,2～5 cm组阳性表达率为83.33％,≥5 cm组阳性表达率为80.95％;Her-2阴性组阳性表达率为80.00％,Her-2阳性组阳性表达率为84.21％;ER阴性组阳性表达率为66.67％,ER阳性组阳性表达率为80.00％;PR阴性组阳性表达率为64.00％,PR阳性组阳性表达率为76.92％;DGAT1的表达与患者年龄、肿瘤大小、Her-2、ER、PR的表达无明显相关(P＞0.05).结论 DGAT1可能促进了乳腺癌的癌变及进展.
关键词： 二脂酰甘油酰基转移酶 乳腺癌 -
乳腺癌异黏蛋白的表达对紫杉醇药物敏感性的影响
目的 观察异黏蛋白(MTDH)基因转染乳腺癌细胞上调和沉默前后对紫杉醇药物敏感性的影响.方法 通过RNA 干扰(RNAi)的方法使高表达MTDH细胞株人乳腺癌细胞MCF-7/ADR MTDH基因沉默,同时通过脂质体转染法对MTDH低表达细胞株人乳腺癌细胞MDA-MB-231进行MTDH基因转染;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot验证两种细胞株的沉默及转染效果,噻唑蓝(MTT)比色法绘制两种细胞株转染前后的生长曲线及对紫杉醇药物敏感性的影响,流式细胞术测定紫杉醇作用转染前后乳腺癌细胞的凋亡.结果 MTDH-小干扰RNA(siRNA)-2为沉默效果佳的siRNA;Real-time PCR及Western blot结果显示,使MCF-7/ADR细胞MTDH基因沉默后MTDH mRNA和蛋白表达水平分别为1.026±0.126、0.227±0.021和1.419±0.012、0.037 ±0.013(P ＜0.05),证明MTDH沉默成功;而转染高表达MTDH质粒进入MDA-MB-231后,MTDH mRNA和蛋白表达水平分别为1.00 ±0.00、3.25 ±0.02和0.48 ±0.07、1.27 ±0.08(P＜0.05),证明转染成功;噻唑蓝(MTT)显示沉默MTDH后使MCF-7/ADR细胞增殖受到明显抑制,同时沉默前后8 mg/L的紫杉醇在24 h对MCF-7/ADR的抑制率分别为(40.72±3.11)％和(70.44±3.84)％(P＜0.05),凋亡率分别为(1.36±0.14)％和(17.21±1.35)％(P＜0.05);MTDH基因转染后对MDA-MB-231细胞增殖起到促进作用,同时转染前后8 mg/L的紫杉醇在24 h对MDA-MB-231细胞的抑制率分别为(58.00±0.38)％和(40.52±0.03)％(P＜0.05),凋亡率分别为(24.88±0.37)％和(13.97±0.50)％(P＜0.05).结论 MTDH基因对乳腺癌细胞的增殖具有促进作用,MTDH基因高表达可能与降低乳腺癌细胞对紫杉醇药物的敏感性有关.
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Fascin和c-Met在乳腺癌中的表达及其临床病理因素的关系
目的 探讨Fascin和c-Met在乳腺癌组织中的表达水平及两者与其临床病理因素的关系.方法 收集95例乳腺癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织标本,采用免疫组织化学法检测以上组织石蜡切片中Fascin和c-Met的表达水平.结果 Fascin在乳腺癌组织中阳性表达率为44.21％,在癌旁组织中阳性表达率为10.53％,两者差异有统计学意义(P＜0.01),Fascin表达水平与乳腺癌乳腺癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移明显相关(P＜0.05);c-Met在乳腺癌组织中阳性表达率为55.79％,在癌旁组织中阳性表达率为8.42％,两者差异有统计学意义(P＜0.01),c-Met表达水平与乳腺癌肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移明显相关(JP＜0.05).结论 检测Fascin及c-Met的表达可能有助于判断乳腺癌的恶性程度及侵袭能力.
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低氧诱导因子-1α短发卡RNA逆转乳腺癌阿霉素耐药的研究
目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)短发卡RNA(shRNA)沉默HIF-1α基因的表达对人耐阿霉素乳腺癌细胞MCF-7/ADR耐药能力的影响.方法 应用HIF-1αshRNA重组载体质粒转染MCF-7/ADR细胞,荧光显微镜观察细胞转染过程,G418筛选稳定表达HIF-1 αshRNA重组载体质粒的细胞,倒置显微镜观察低氧24、48 h细胞生长情况,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α基因的表达情况,细胞计数试剂盒(CCK-8)实验鉴定细胞株的耐药性.结果 荧光显微镜下可见细胞内荧光显示,镜下可见低氧培养细胞典型凋亡,转染后的MCF-7/ADR细胞阿霉素敏感性增加(P＜0.05),对阿霉素半数抑制浓度(IC50)下降6.68倍.结论 HIF-1α shRNA可以有效阻断MCF-7/ADR细胞HIF-1α的表达,抑制细胞生长,调控HIF-1α表达水平可能影响其细胞耐药特性,增加对化疗药物阿霉素的敏感性.
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三阴性乳腺癌中p53蛋白产物的表达及其临床意义
目的 探讨三阴性乳腺癌的免疫组织化学和临床病理特征,并探索其与抑癌基因p53蛋白产物的关系.方法 分析24例三阴性乳腺癌患者.所有的患者均在临床医院的组织病理学实验室中进行确诊.标准的免疫组织化学检测,包括激素受体水平、人类表皮生长因子受体-2(Her-2)水平、细胞核增殖抗原(Ki-67)、p53蛋白产物、基底角蛋白.结果 患者年龄29 ～ 77岁,14例患者(59％)中可见阳性转移淋巴结.19例患者为低分化(79％).在19例患者中可见p53蛋白产物过表达,所有p53阴性的患者均是低分化肿瘤,并与局部阳性转移淋巴结相关;而与p53阴性患者负相关,只有9/19 (47％)具有淋巴结阳性转移(P＜0.05),p53蛋白产物与核分级(P＜0.05)、有丝分裂指数(P＜0.01)、淋巴管-血管浸润(P＜0.05)、增殖指数Ki-67(P＜0.01)呈明显相关.结论 三阴性乳腺癌分化较差,与年轻患者关系密切.其中大部分患者过表达p53蛋白产物,并与淋巴结转移呈负相关.
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核因子-κBp65和细胞间黏附分子-1在浆细胞性乳腺炎中的表达意义
目的 探讨核因子-κBp65(NF-κBp65)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在浆细胞性乳腺炎(PCM)中的表达意义.方法 收集存档石蜡标本72例,其中PCM 35例(PCM组),乳腺纤维腺瘤20例(BFN组),正常乳腺组织17例(NBT组).采用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法,检测NF-κBp65和ICAM-1在各组中的表达.利用HPIAS-2000图像分析系统测定NF-κBp65和1CAM-1在各组中表达的平均吸光度值和平均阳性面积率.结果 PCM组中NF-κBp65平均吸光度值及阳性面积率(0.626 0±0.012 5、0.585 2±0.005 4)均高于BFN组(0.4560±0.0137、0.319 2±0.006 5,P ＜0.05)和NBT组(0.4420±0.0065、0.3826±0.0163,P＜0.01),后两组组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).ICAM-1平均吸光度值及阳性面积率BFN组(0.2552±0.0064,0.2328 ±0.008 3)、NBT组(0.1698±0.0208,0.2083±0.0086)均低于PGM组(0.613 3±0.017 2、0.4672±0.0138,P＜0.01),前两组组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 NF-κBp65和ICAM-1在PCM发生发展过程中发挥重要作用,诱导浆细胞在乳腺导管周边的表达.
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白细胞介素-22及白细胞介素-22结合蛋白表达与乳腺癌发生发展的关系
目的 观察乳腺癌患者外周血及组织中白细胞介素(IL)-22及IL-22结合蛋白(IL-22BP)表达水平对乳腺癌发生发展的影响.方法 采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测95例乳腺癌患者和20例乳腺良性肿瘤患者血清IL-22和IL-22BP表达水平,用免疫组织化学(IHC)方法检测两者在乳腺癌组织和癌旁组织表达.结果 乳腺癌患者外周血IL-22为(64.5±22.1)pg/ml,显著高于乳腺良性肿瘤患者外周血IL-22水平[(23.7±11.4) pg/ml,P＜0.01];乳腺癌患者外周血IL-22BP为(260.6±70.9)pg/ml,显著低于乳腺良性肿瘤患者外周血IL-22BP水平[(472.1±156.3)pg/ml,P＜0.01].IL-22在乳腺癌组织阳性表达率为71.57％,在癌旁组织阳性表达率为24.21％,两者差异有统计学意义(x2=42.71,P＜0.01).IL-22BP在乳腺癌组织中的阳性表达率为27.37％,在癌旁组织中的阳性表达率为74.74％,两者差异有统计学意义(x2=42.65,P＜0.01).IL-22在细胞组织学Ⅲ级、有淋巴结转移、肿瘤大径＞2 cm、临床分期Ⅲ期、人类表皮生长因子受体-2 (Her-2)过表达和细胞核增殖抗原(Ki-67)阳性率≥14％组明显升高(P＜0.01或P＜0.05).而IL-22BP在上述组中明显降低(P＜0.01或P＜0.05).结论 IL-22的高表达或其拮抗蛋白IL-22BP的低表达,与乳腺癌的发生、发展及转移关系密切.
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原发性小乳症雌激素受体α基因多态性与其转录活性的关系
目的 探讨雌激素受体(ER)α基因多态性的转录活性差异与原发性小乳症的关系.方法 选取女性原发性小乳症患者70例(术前测量乳房组织总量小于200 g,经乳晕切口、腋窝切口行隆乳术)为小乳组,以乳房大小形态正常的健康女性69例作为对照组,利用报告基因技术分析两组人群第1内含子多态性对ERα基因转录水平的差异.并利用双荧光素酶报告基因技术对基因突变进行转录调节能力研究.结果 (1)荧光素酶的相对活性小乳组为1.97 ±0.79显著低于正常对照组的2.66± 1.41 (P ＜0.01);(2)结合ERα XbaI多态性的基因型,xx基因型的ERα基因启动转录表达活性显著低于xX和XX基因型(P＜0.01),小乳组xx基因型ERα基因启动转录表达活性1.73±0.68,显著低于正常对照组的2.24±0.71(P＜0.01);(3)结合ERα PvuⅡ多态性的基因型,PP基因型的ERα基因启动转录表达活性显著低于pP和PP基因型(P ＜0.05,P ＜0.01).PP基因型ERα基因启动转录表达活性小乳组为1.51 ±0.70显著低于正常对照组的2.60±0.55 (P＜0.05).结论 ERα1号内含子多态性可导致ERα基因转录表达的启动水平的差异,结合对小乳症患者ERα基因多态性的研究,推测xx和PP这两个基因型的ERα基因低水平启动转录表达可能是小乳症形成的部分原因.
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川陈皮素通过下调磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路诱导凋亡抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖
目的 体外观察川陈皮素对乳腺癌细胞增殖的抑制作用并探讨机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法观察川陈皮素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖影响;Hoechst 33342染色观察川陈皮素处理后细胞形态的变化;膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)/碘化丙锭(PI)检测川陈皮素对MCF-7细胞凋亡的影响;Western blot检测川陈皮素处理后MCF-7细胞中蛋白表达的改变.结果 10 μmol/L川陈皮素能明显的抑制MCF-7细胞生长(P＜0.05),抑制作用呈剂量、时间依赖关系;10、20、40 μmol/L川陈皮素处理24 h后,MCF-7细胞出现细胞核皱缩,凋亡小体,并且细胞凋亡率(13.5％、37.7％、49.96％)随着川陈皮素作用浓度的增加而上升;川陈皮素能引起B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)/B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)比率上升(P＜0.01),磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白表达下降(P＜0.01).结论 川陈皮素在体外能抑制乳腺癌细胞增殖,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路从而诱导细胞凋亡有关.
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靶向纳米复合物抗乳腺癌细胞增殖作用研究
目的 通过构建具有CD44特异性靶向作用的基因载体硫代适体-聚乙二醇-聚酰胺胺(TA-PEG-PAMAM),携带具有抗乳腺癌细胞增殖作用的基因微小RNA(miRNA,miR)-145,观察载体系统的转染效率及其对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用.方法 运用核磁共振(NMR),鉴定TA-PEG-PAMAM基因载体的结构;利用粒径电位仪对TA-PEG-PAMAM/miRNA纳米复合物进行表征;利用基因转染实验观察TA-PEG-PAMAM/miRNA纳米复合物在乳腺癌细胞MDA-MB-231(CD44+)和MCF-7(CD44-)上的表达效果;利用细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖抑制实验,观察TA-PEG-PAMA M/miRNA-145对乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移的抑制作用.结果 通过结构鉴定确定TA-PEG-PAMAM合成成功.定性定量转染效率实验考察证明,PEG修饰后的PAMAM对乳腺癌细胞转染效率差异无统计学意义(P＞0.05),经TA进一步修饰后对MDA-MB-231细胞转染效率增加,差异有统计学意义(P＜0.05),证明TA的靶向作用.CCK-8细胞增殖实验证明,TA-PEG-PAMAM/miRNA-145纳米复合物的半数抑制浓度(IC50)值[(121.3±14.9)nmol/L]低于阴性对照组[(261.5±30.2)nmol/L],差异有统计学意义(P＜0.05),说明其对乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移具有明显的抑制作用.结论 TA-PEG-PAMAM/miRNA-145有望成为今后靶向治疗乳腺癌的基因药物.
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微小RNA-98可抑制乳腺癌细胞的浸润及迁移
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-98对乳腺癌细胞浸润转移及增殖能力的影响.方法 应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A以及不同转移能力乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和SKBR-3中miR-98的表达水平.应用瞬时转染法上调MDA-MB-231细胞miR-98的表达或抑制MCF-7细胞miR-98的表达,然后应用Transwell法检测miR-98对乳腺癌浸润和迁移能力的影响,噻唑蓝(MTT)检测对乳腺癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测对乳腺癌细胞凋亡能力的影响.结果 miR-98在高侵袭细胞株的表达显著高于低侵袭细胞株.在乳腺癌MDA-MB-231细胞中转入miR-98模拟物(mimics)可阻断80％的乳腺癌浸润和迁移功能.而在MCF-7细胞中转染miR-98抑制物(inhibitor)显著抑制乳腺癌细胞miR-98的表达可使乳腺癌细胞的迁移和浸润能力约增加1.6倍.miR-98不影响乳腺癌细胞的凋亡及增殖能力.结论 miR-98可促进乳腺癌细胞的浸润及迁移能力,而不影响乳腺癌细胞的增殖及凋亡能力.
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盐酸吗啡对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞生长增殖的影响
目的 观察盐酸吗啡对人乳腺癌MCF-7细胞生长增殖的影响.方法 人乳腺癌MCF-7细胞培养至对数生长期,采用随机数字表法,将其随机分为4组:空白对照组(C组)、0.01 μmol/L吗啡组(M1组)、0.10 μmol/L吗啡组(M2组)、1.00μmol/L吗啡组(M3组).M1、M2、M3组分别在培养液中加入吗啡,使吗啡的终质量浓度分别为0.01、0.10、1.00 μmol/L;对照组(C组)不加入任何药物.噻唑蓝(MTT)法和克隆形成实验观察细胞生长增殖的变化,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.结果 与C组比较,M1、M2、M3组人乳腺癌MCF-7细胞的生长速度减慢,其克隆形成率分别为(0.76 ±0.09)％、(0.74±0.12)％和(0.78±0.08)％,低于C组的(1.25±0.28)％(P＜0.05),细胞凋亡率分别为(5.33 ±0.09)％、(5.21±0.15)％和(5.09±0.08)％,较C组的(1.25±0.16)％升高(P＜0.05),而且细胞周期G2/M期的比例增加,S期比例减少(P＜0.05);M1组、M2组、M3组两两比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 盐酸吗啡促进人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡,使细胞周期停滞于G2/M期,从而抑制乳腺癌细胞的生长增殖,且其抑制作用有封顶效应.
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低毫安电化学疗法抑制磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通道抗人乳腺癌细胞株MDA-MB231侵袭迁移的机制
目的 探讨电化学疗法(ECT)对人乳腺癌MDA-MB231细胞株抗侵袭迁移的作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测1～15 C的ECT和(0.05～ 1.00) μmol/L MK2206作用MDA-MB231细胞24h后的生长抑制率;Transwell实验检测5 C ECT对细胞侵袭、迁移能力改变;用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测1～10 C ECT作用MDA-MB231细胞24h后血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)、蛋白激酶B(Akt)基因mRNA和蛋白的表达.结果 Transwell实验证实5 C ECT作用后MDA-MB231细胞侵袭、迁移能力下降;RT-PCR结果显示5C、10C的ECT组与空白对照组比较,随着ECT电量的提高,侵袭基因VEGF、MMP-2的表达量逐渐降低,5 C ECT组VEGF基因的相对表达量为0.591±0.038,MMP-2基因为0.601 ±0.045,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);磷酸肌醇3激酶(PI3 K)/Akt信号通路中的PTEN基因表达量逐渐增高而Akt基因的表达量逐渐降低;相同抑制率的ECT组(1 C)和MK2206组(0.05 μmol/L)比较,两组降低VEGF、MMP-2、Akt基因表达量的差异无统计学意义(P＞0.05),MK2206组能增高PTEN基因的表达量.Western blot检测结果显示3C、5C、10C不同库仑剂量的ECT治疗组与空白对照组比较,随着ECT库仑剂量的提高VEGF、MMP-2蛋白表达量逐渐降低[3 C ECT组VEGF的相对表达量为0.426±0.072,MMP-2的相对表达量为0.214±0.016,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)],PI3K/Akt信号通路中的磷酸化Akt (p-Akt)蛋白表达量逐渐降低,PTEN蛋白表达量逐渐增高,总Akt基因表达量无明显变化;相同抑制率的ECT组1C和MK2206组0.05 μmol/L比较,ECT组更能降低VEGF、MMP-2的蛋白表达量且更能增高PTEN的蛋白表达量,但MK2206组更能降低p-Akt的蛋白表达量,对总Akt蛋白表达量两组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ECT具有抗乳腺癌侵袭性转移的作用,其机制可能是与抑制PI3K/Akt信号通道相关.
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散发性乳腺癌患者乳腺癌易感基因1 mRNA与蛋白的表达变化差异及意义
目的 探讨散发性乳腺癌患者乳腺癌易感基因1(BRCA1) mRNA与蛋白的表达变化及差异.方法 应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测正常乳腺组织(n=40)与散发性乳腺癌组织(n=80)中BRCA1 mRNA的表达量变化;用免疫组织化学方法检测BRCA1蛋白表达变化及定性观察BRCA1蛋白亚细胞定位的变化,分析BRCA1与散发性乳腺癌发生发展的相关性.结果 (1)散发性乳腺癌组织中BRCA1 mRNA表达水平(0.759±0.440)低于正常乳腺组织(1.530±0.810),差异有统计学意义(P＜0.05),原位癌伴微小浸润组(0.956±0.340)与浸润癌组BRCA1(0.561±0.443)表达差异有统计学意义(P＜0.01),原位癌组表达水平高于浸润性乳腺癌组.(2)BRCA1蛋白在正常乳腺组织高表达,在乳腺癌组织中表达降低,其阳性率分别为95％和46％,差异有统计学意义(x2=27.040,P＜0.01);浸润性乳腺癌组织中BRCA1蛋白表达水平低于导管原位癌伴微小浸润组织,差异有统计学意义(x2=4.037,P＜0.05).本研究还观察到BRCA1蛋白在正常乳腺组织中表达于细胞核,在乳腺癌组织中可以见到BRCA1蛋白在细胞核与细胞质中均表达,且在细胞核上的表达率降低.结论 BRCA1 mRNA与蛋白在散发性乳腺癌疾病进展过程中表达变化存在差异.
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乳腺癌中人表皮生长因子受体-2的表达对雷帕霉素靶蛋白表达的影响
目的 探讨乳腺癌组织中人表皮生长因子受体-2(Her-2)的表达状况的对哺乳动物雷帕霉索靶蛋白(mTOR)表达的影响,并探讨其临床意义.方法 收集新疆医科大学附属肿瘤医院2010年9月至2015年3月经手术治疗且病理检查证实为乳腺癌的初治乳腺癌标本180例.经免疫组织化学及荧光原位杂交技术(FISH)检测,其中Her-2过表达标本100例,Her-2非过表达标本80例.采用免疫组织化学和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,分析Her-2过表达型乳腺癌组织、癌旁组织及Her-2非过表达型乳腺癌组织中mTOR的表达情况.结果 免疫组织化学结果显示,Her-2过表达型乳腺癌与Her-2非过表达型乳腺癌组织中mTOR阳性表达率分别为66.3％和33.7％,差异有统计学意义(P＜0.01);且随着组织学分级增加,mTOR阳性率明显升高,Ⅰ～Ⅱ级阳性率为59.4％,Ⅲ级阳性率为40.6％,差异有统计学意义(P＜0.01).RT-PCR结果显示,Her-2过表达型乳腺癌与癌旁组织比较,Her-2过表达的乳腺癌组织中mTOR的表达水平显著增高(P＜0.05).结论 乳腺癌组织中mTOR的表达与Her-2表达密切相关,这可能与Her-2过表达导致磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/mTOR信号通路激活相关.
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微小RNA参与调控乳腺癌肿瘤相关巨噬细胞分化及功能的作用机制
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)参与调控肿瘤相关巨噬细胞(TAM)分化及合成分泌白细胞介素-10(IL-10)的作用.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对比12例乳腺癌患者TAM和外周血单个核细胞(PBMC)、体外诱导TAM前后miR-21、miR-27a和miR-146a表达差异.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测过表达上述miRNAs后TAM分泌IL-10的变化.随后在共培养体系中研究IL-10对MDA-MB-231细胞的影响.结果 与PBMC比较(相对表达量设为1.00),miR-146a、miR-27a在乳腺癌TAM中含量明显降低(相对表达量分别为0.36 ±0.28、0.26±0.17),而miR-21在TAM中含量较PBMC显著增高(相对表达量为3.20±1.06,P＜0.01).这与体外诱导TAM结果一致.过表达miR-21的TAM分泌IL-10水平显著高于对照组(P＜0.01);而miR-27a或miR-146a则抑制TAM表达IL-10,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).TAM在体外不仅诱导MDA-MB-231表达上调IL-10受体,还激活其胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及酪氨酸蛋白激酶(JAK)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路.结论 IL-10在诱导TAM分化、构建肿瘤免疫抑制微环境及促进肿瘤增殖等发面发挥重要作用.TAM分化及表达IL-10受miRNA网络调控.
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细胞周期蛋白依赖性激酶11在乳腺癌细胞增殖中的作用及其机制
目的 探讨细胞周期蛋白依赖性激酶11(CDK11)在乳腺癌细胞增殖中的作用与机制.方法 将不同浓度(10、20、40nmol/L)的CDK11小干扰RNA(siRNA)转染乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-468沉默CDK11基因,并以转染非特异性siRNA为阴性对照.72 h后,应用噻唑蓝(MTT)方法检测细胞的增殖活性改变,分别应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测转染细胞内CDK11 mRNA和蛋白的变化,应用细胞免疫荧光技术观察细胞增殖及CDK11蛋白表达的变化.流式细胞术检测CDK11沉默后细胞凋亡与细胞周期的变化.结果 MTT结果显示,转染10、20、40 nmol/L的CDK11 siRNA后,MCF-7细胞的490 nm处吸光度(A490)值由1.47±0.06分别降至1.12 ±0.05、0.87 ±0.09、0.52±0.08 (P＜ 0.05),MDA-MB-468细胞的A490值由1.81 ±0.10分别下降至0.88 ±0.06、0.62±0.04、0.34 ±0.03(P ＜0.05),伴随细胞内CDK11 mRNA和蛋白表达浓度依赖性的降低.细胞免疫荧光结果证实CDK11蛋白主要亚定位于细胞核,转染40 nmol/L的CDK11 siRNA后细胞的增殖能力显著下降,伴随细胞内CDK11蛋白表达水平的降低.流式细胞术结果表明,20 nmol/L的CDK11 siRNA沉默CDK11表达后,MCF-7细胞的凋亡率由(1.6±0.3)％增加至(11.5±0.6)％(P＜0.01),MDA-MB-468细胞的凋亡率由(2.8±0.4)％增加至(16.1±0.3)％(P＜0.01),MCF-7细胞G0/G1期细胞数由(46.9 ±4.4)％增加至(68.1±4.3)％(P＜0.01),MDA-MB-468细胞G0/G1期细胞数由(36.9±13.9)％增加至(70.5±6.6)％(P＜0.01).结论 CDK11在MCF-7和MDA-MB-468细胞的增殖中具有重要作用,其可能通过加速细胞周期进程,抑制细胞凋亡促进细胞增殖.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
