中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人脐带间充质干细胞来源的外泌体对肝脏再生的影响
目的 观察人脐带间充质干细胞来源的外泌体(hucMSC-Ex)对小鼠大部分肝切除后肝脏再生和肝细胞增殖的影响,并探讨其机制.方法 建立小鼠大部分肝切除模型,比较hucMSC-Ex处理组(n=15)和对照组(n=15)术后24、48、72 h剩余肝重体重比、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),获取肝组织进行苏木素-伊红(HE)染色及细胞核增殖抗原(Ki-67)免疫组织化学染色观察肝脏再生.细胞计数试剂盒(CCK-8)检测hucMSC-Ex在体外对人L02肝细胞增殖的作用.结果 采用超速离心方法从hucMSCs条件培养基中成功分离出外泌体,Nasosight颗粒跟踪分析仪和透射电镜分析其直径范围在50 ～ 150 nm,大分布峰值为137 nm;Western blot检测到hucMSC-Ex中CD63、CD9及HSP90α等标志蛋白的阳性表达.术后48、72 h后hucMSC-Ex处理组剩余肝重体重比较对照组增高[(3.06±0.44)％比(2.67±0.23)％、(3.18±0.29)％比(2.75±0.24)％,P=0.047、0.013],术后24、48 h处理组比对照组的ALT[(165.0 ±29.7)比(1 596.0±711.9) U/L、(49.5±18.7)比(124.0 ±39.7)U/L]、AST[(285.0±31.1)比(3 030.0±1 249.0) U/L、(126.3 ±29.6)比(198.3±37.3) U/L]下降,差异均有统计学意义(P =0.014、0.014、0.011、0.030);术后24 h处理组的LDH较对照组下降[(457.0 ±41.0)比(4 605.0±2 941.0) U/L,P=0.033].与对照组比较,处理组肝组织HE染色脂肪变性、肝细胞肿胀以及坏死较少,Ki-.67免疫组织化学染色阳性表达的细胞增加.体外实验CCK-8检测100 μg/ml处理组的吸光度值比对照组显著增加(1.198±0.087比0.970±0.032,P=0.006).结论 hucMSC-Ex可以加快肝切除术后肝脏再生及肝功能的恢复,促进肝细胞增殖.
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激活态雪旺细胞联合脐血间充质干细胞移植修复脊髓损伤的研究
目的 观察激活态雪旺细胞(ASCs)与人脐血间充质干细胞(HUCBMSCs)局部联合移植后脊髓损伤局部神经标志物的变化,探讨ASCs与HUCBMSCs联合移植在促进大鼠脊髓损伤后轴突再生和功能恢复方面所起的作用.方法 采用前期实验方法获得ASCs及HUCBMSCs,并制作成年雌性Wistar大鼠胸10脊髓损伤模型.将80只大鼠随机分成4组:空白对照组[注射杜尔伯科改良伊格尔培养基(DMEM)];ASCs移植组;HUCBMSCs移植组;ASCs与HUCBMSCs联合移植组.分别将DMEM、ASCs、HUCBMSCs以及ASCs+ HUCBMSCs移植入对应组的脊髓损伤部位.术后采用Basso,Beattie和Bresnahan (BBB)评分对大鼠的后肢功能恢复情况进行评价.于脊髓损伤后1、2、3、4周取脊髓损伤中心组织进行Western blot半定量检测及实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测.12周后,从每组随机选取8只大鼠进行10％生物素葡聚糖胺(BDA)顺行示踪标记.标记2周后处死大鼠,将损伤段脊髓取出作5μm快速冰冻切片后,进行BDA显影、苏木素-伊红(HE)染色,神经丝蛋白-200(NF-200)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫组织化学染色.综合以上数据并进行统计学分析.结果 Western blot及FQ-PCR结果显示NF-200及MBP表达量在各组均有升高,但以联合移植组高(损伤后4周NF-200:4.581±0.588,MBP:3.922±0.259);损伤后8周,共移植组大鼠的BBB评分[(16.800 0 ±0.223 0)分]显著高于其余3组(P =0.000).BDA顺行示踪标记显示共移植组较ASCs移植组和HUCBMSCs移植组有较多的再生神经纤维通过损伤区,而空白对照组几乎未见再生神经纤维穿越.HE染色显示细胞共移植组损伤空洞明显小于其余3组(P =0.000).结论 ASCs联合HUCBMSCs移植治疗脊髓损伤可促进更多的HUCBMSCs向神经元方向分化,促进轴突再生,改善脊髓损伤后功能的恢复.
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通过数字基因表达谱和RNA测序技术鉴定自然杀伤/T细胞淋巴瘤的耐药相关基因
目的 筛选正常自然杀伤(NK)细胞及NK/T细胞淋巴瘤细胞株YTS、SNK-6差异表达基因,明确耐药相关基因表达.方法 通过数字基因表达谱(DGE)测序技术检测正常NK细胞和NK/T细胞淋巴瘤细胞株YTS和SNK-6的DGE谱,分析3种细胞株中的差异表达基因.SNK-6细胞株与正常NK细胞比较,高表达的基因数为3 184个,低表达的基因数为2 764个;YTS细胞株与正常NK细胞比较,高表达的基因数为3 978个,低表达的基因数为2 172个;SNK-6细胞株与YTS细胞株比较,低表达的基因数为2425个,高表达的基因数为1 068个.通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测常见耐药相关基因表达,建立正常NK细胞和两个NK/T细胞淋巴瘤细胞株的数字基因表达谱.结果 构建正常人NK细胞和两个NK/T细胞淋巴瘤细胞株的数字基因表达谱文库,筛选3个细胞株之间的明显差异表达基因;耐药相关基因多药耐药蛋白5(ABCC5)和红白血病病毒致癌基因同系物4(ERBB4)在NK/T细胞淋巴瘤细胞株中表达升高,其中,ABCC5基因在YTS及SNK-6细胞株中的mRNA水平(3.69±0.11 、5.22±1.66)明显高于正常NK细胞(1.00±0.00),差异有统计学意义(P=0.001、0.048);ERBB4基因在YTS及SNK-6细胞株中的mRNA水平(6.87±0.56、14.79±1.84)明显高于正常NK细胞(1.00 ±0.00),差异有统计学意义(P=0.003、0.006).结论 ABCC5和ERBB4的高表达与NK/T细胞淋巴瘤的耐药性明显相关.
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穿透肽介导的铜-锌超氧化物歧化酶1融合蛋白的抗氧化作用及对脂肪干细胞移植修复脊髓损伤的促进作用
目的 探讨穿透肽介导的铜-锌超氧化物歧化酶1融合蛋白(PEP-1-SOD1)在脊髓损伤早期的抗氧化作用及对脂肪干细胞(ADSCs)移植修复脊髓损伤的促进作用.方法 体外分离培养SD大鼠ADSCs,并以携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的腺病毒感染ADSCs.取成年SD大鼠96只,以改良Allen法制作脊髓损伤模型,随机分为3组:盐水治疗组、ADSCs治疗组、PEP-1-SOD1联合ADSCs治疗组(联合治疗组),术后1、3、7d各取8只大鼠分别行超氧化物歧化酶(SOD)活性检测及丙二醛(MDA)含量检测,术后7d各取4只大鼠行细胞凋亡检测;术后1、2、3、4周行Basso-Beattie-Bresnahan (BBB)评分,术后4周BBB评分后处死大鼠行神经元特异性核蛋白(NeuN)表达阳性细胞检测,对ADSCs治疗组及联合治疗组行脊髓损伤区域绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞检测.结果 术后7 d ADSCs治疗组SOD活性大于盐水治疗组(t=3.882,P=0.030),MDA含量小于盐水治疗组(t=10.392,P=0.002),联合治疗组SOD活性大于ADSCs治疗组(t=4.690,P=0.018),MDA含量小于ADSCs治疗组(t=3.464,P=0.031).术后7d联合治疗组细胞凋亡少于ADSCs治疗组(t=13.416,P=0.000),ADSCs治疗组细胞凋亡多于盐水治疗组(t=12.000,P=0.000).术后4周,联合治疗组BBB评分为(18.59±1.54)分大于ADSCs治疗组[(11.90±1.72)分,t=8.430,P=0.000];联合治疗组NeuN阳性细胞百分比为(61.65±12.65)％大于ADSCs治疗组的(31.45±5.76)％(t=154.214,P=0.000);联合治疗组GFP阳性细胞数大于ADSCs治疗组(t=64.325,P=0.000).结论 与单纯ADSCs移植比较,联合应用PEP-1-SOD1进一步增加损伤局部SOD活性,降低MDA含量,改善运动功能,PEP-1-SOD1发挥了协同效果,这可能与减少移植细胞凋亡有关.
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小干扰RNA介导雌激素β基因沉默对肺腺癌LTEP-a2细胞凋亡的影响
目的 观察小干扰RNA (siRNA)介导雌激素β(ERβ)基因沉默对ERβ高表达的肺腺癌LTEP-a2细胞凋亡作用及17-β雌二醇敏感性.方法 合成针对ERβ的siRNA,对生长期的ERβ高表达的LTEP-a2细胞进行转染,48 h后,收集细胞随机分为阴性对照组、空白对照组和转染组.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ERβ mRNA的表达,Western blot法检测ERβ蛋白的表达.噻唑蓝(MTT)比色法检测17-β雌二醇培养的转染细胞的存活,计算各组细胞的半数抑制率(IC50),流式细胞仪检测转染细胞的凋亡.结果 阴性对照组、空白对照组和转染组ERβ mRNA的表达强度分别为0.32±0.06、0.28±0.05和0.05±0.02.转染siRNA组ERβ mRNA表达明显低于阴性对照组(P =0.032)及空白对照组(P =0.015).阴性对照组、空白对照组和转染组ERβ蛋白的表达强度分别为0.18±0.04、0.28±0.03和0.06±0.01.转染siRNA组ERβ蛋白表达低于阴性对照组(P=0.038)及空白对照组(P=0.000);不同浓度的17-β雌二醇干预后,ERβ-siRNA转染组细胞与阴性对照组及空白对照组比较存活率显著下降.阴性对照组、空白对照组和转染组IC50值分别为(28.34±4.32)％、(27.66±3.04)％和(8.34±1.22)％,雌二醇干预对LTEP-a2细胞生长与阴性对照组及空白对照组比较,转染组生长明显抑制;转染组、阴性对照组与空白对照组细胞凋亡率分别为(35.68±1.58)％、(3.55±0.33)％和(1.30±1.45)％,转染siRNA组在雌二醇干预后LTEP-a2细胞的凋亡率显著增加,转染组与阴性对照组与空白对照组比较,差异有统计学意义.结论 siRNA介导的ERβ基因沉默可以抑制雌激素干预后肺癌细胞的增殖siRNA介导的ERβ基因沉默,可以增加雌激素干预后肺癌细胞的凋亡,ERβ可能在筛选女性性激素依赖性非小细胞肺癌中发挥重要作用.
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微小RNA-21、微小RNA-371-5p和微小RNA-378在3种消化道肿瘤的表达及其临床意义
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-21、miR-37 1-5p、miR-378在胃癌、肝癌和结直肠癌3种消化道肿瘤中的表达及临床意义.方法 收集100例胃癌患者、50例肝癌患者、50例结直肠癌患者术前血清、术后及随访终点血清,Luminex液相芯片检测血清miRNA的表达,分析3种miRNAs在消化道肿瘤中的表达及临床意义.结果 术前血清miR-21在胃癌、肝癌和结直肠癌复发组中表达中位数分别为5.55、6.39、5.46,显著高于未复发组(中位数分别为2.52、2.87、2.18),差异有统计学意义(均P=0.000).术前血清miR-371-5p在胃癌、肝癌复发组中表达中位数分别为7.29、2.11,显著高于未复发组(2.56、1.82),差异有统计学意义(均P=0.000);在结直肠癌中,复发组术前血清miR-371-5p表达中位数为0.33,显著低于未复发组(3.23),差异有统计学意义(P=0.000).术前血清miR-378在胃癌和结直肠癌复发组表达中位数分别为10.13、0.33,与未复发组中表达中位数(分别为3.23、0.45)比较差异有统计学意义(均P=0.000);肝癌中,术前血清miR-378在复发组和未复发组表达中位数分别为0.98、1.09,两者比较差异无统计学意义(P=0.410).3种miRNA的表达与3种消化道肿瘤M分期相关.miR-21表达随着3种肿瘤切除、复发而呈现动态变化,miR-371-5p、miR-378仅与胃癌呈现动态变化.miR-21、miR-371-5p的表达与3种肿瘤术后复发显著相关,miR-378的表达与胃癌和结直肠癌预后显著相关(均P=0.000).结论 检测miR-21有助于评估消化道肿瘤非特异性预后,检测miR-371-5p和miR-378有助于评估胃癌和结直肠癌患者的预后.
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调控自噬对脊髓损伤后神经保护作用及机制
目的 探索通过雷帕霉素调控自噬对脊髓损伤大鼠脊髓神经元凋亡的作用及机制.方法 将36只SD大鼠随机分为3组,每组12只.假手术组仅行椎板切除,生理盐水组和雷帕霉素组采用改良Allen's法损伤T10脊髓.术后1、3、7、14 d评价大鼠神经功能,术后14d采用免疫组织化学双标染色检测神经元自噬水平,检测自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)和Beclin-1 mRNA和蛋白的表达.结果 1、3、7、14 d生理盐水组和雷帕霉素组术后斜板实验(28.14 ±2.48)°、(30.65±3.58).、(34.85 ±4.12)°、(37.62 ±4.73)°;(29.02 ±2.64)°、(36.37±3.87).、(43.28±4.39)°、(50.06±4.52)°(P =0.430、0.021、0.016、0.005)和改良Tarlov评分(0.23±0.12)、(0.96±0.22)、(1.17 ±0.28)、(1.73±0.35)分;(0.29±0.15)、(1.34 ±0.23)、(2.26 ±0.30)、(3.68 ±0.41)分(P =0.390、0.037、0.028、0.013),均较假手术组显著降低,之后有增加趋势,自3d起两组差异有统计学意义.运动诱发电位(MEP)检测生理盐水组和雷帕霉素组潜伏期与波幅(17.08±0.39)、(13.85±0.31)、(9.26±0.23)、(8.24±0.25) ms;(1.86±1.05)、(2.37±1.26)、(3.84±1.75)、(4.27±1.49) μV和(12.63 ±0.34)、(9.88 ±0.29)、(7.59 ±0.22)、(6.48±0.21) ms;(3.75±1.88)、(4.72±2.14)、(5.43 ±2.29)、(5.96±2.31) μV(P=0.002、0.003、0.021、0.023和P=0.022、0.029、0.032、0.042),两组术后潜伏期明显延长且波幅降低,自1d开始潜伏期逐渐缩短而波幅增高,两组差异有统计学意义.免疫组织化学双标染色共聚焦显微镜检测LC3阳性神经元荧光强度,假手术组为103.26±5.49,生理盐水组为121.85±8.37(P =0.002),雷帕霉素组为156.17±10.62,P=0.001;同时实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LC3和Beclin-1的mRNA相对表达量,生理盐水组为1.28±0.09和1.23 ±0.12,雷帕霉素组为1.74 ±0.10和1.51 ±0.14(P=0.022、P=0.030);Western blot检测LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白的表达水平也是雷帕霉素组高,均与生理盐水组差异有统计学意义(P =0.033、P=0.041).结论 有效调控自噬可通过抑制凋亡而促进脊髓神经功能的修复.
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富白细胞血小板血浆联合兔滑膜干细胞促进膝关节软骨损伤修复的研究
目的 观察富血小板血浆(L-PRP)联合兔滑膜干细胞(SMSCs)对受损膝关节软骨修复的影响.方法 3个月龄清洁级新西兰兔60只,制备兔膝关节软骨损伤模型.分离、纯化和鉴定兔SMSCs,2次离心法制备L-PRP;运用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定全血和L-PRP中血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)的含量.造模后第12周,大体观察软骨损伤修复情况;苏木素-伊红染色光镜下观察损伤部位细胞修复情况;根据O'Driscoll组织学评分标准于造模后第12周时进行组织学评分.结果 L-PRP中血小板含量上升至(135.77 ±50.56)×104/μl为全血[(22.38 ± 3.20)×104/μl]的6倍(P=0.001),PDGF-BB、TGF-β1、bFGF和VEGF含量分别上升为(32.50±5.10) ng/ml、(124.26±32.30) ng/ml、(87.14±12.50) pg/ml、(174.50±31.22) pg/ml,显著高于全血[(6.28±1.11) ng/ml、(21.72 ±3.70) ng/ml、(25.85±4.52) pg/ml、(37.87±5.33) pg/ml],差异均有统计学意义(P值分别为0.005、0.003、0.008、0.002).术后第12周,膝关节软骨损伤后大体观察、苏木素-伊红染色组织学观察及组织学评分均显示L-PRP联合SMSCs组对软骨损伤的修复效果明显优于生理盐水组、L-PRP组、SMSCs组.结论 L-PRP、SMSCs均能促进膝关节软骨损伤的修复,且L-PRP联合SMSCs治疗组较单独应用L-PRP或SMSCs效果好.
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表皮生长因子联合顺铂对裸鼠肺癌移植瘤的作用
目的 观察表皮生长因子(EGF)联合顺铂(CDDP)对肺癌裸鼠移植瘤的疗效,探讨其作用机制.方法 建立裸鼠肺癌A549细胞株移植瘤模型,分为对照组、EGF组、化疗组及EGF+化疗组.比较各组成瘤及肿瘤抑制率,检测各组细胞核增殖抗原(Ki-67)的表达及肿瘤干细胞标志物CD133阳性细胞比例.结果 EGF+化疗组肿瘤抑制率明显高于化疗组,肿瘤抑制率分别为74.7％与48.5％,EGF+化疗组与化疗组肿瘤Ki-67表达水平分别为(45.38±7.98)％和(34.45±5.43)％,EGF+化疗组处于增殖期的肿瘤细胞增加,EGF+化疗组肿瘤干细胞标志物阳性比例明显高于化疗组,分别为(8.52±0.87)％和(4.19±0.56)％.联合治疗组与对照组及化疗组比较差异均有统计学意义(P值分别为0.000、0.031和0.019).结论 EGF可增强CDDP对肺癌细胞的敏感性,其机制可能与EGF诱导处于静止期肿瘤细胞增殖相关.
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NK4修饰骨髓间充质干细胞靶向治疗裸鼠肝癌
目的 探讨肝细胞生长因子拮抗剂NK4基因修饰骨髓间充质于细胞(MSCs)对裸鼠肝癌的治疗作用.方法 体外构建NK4慢病毒载体并感染MSCs,获得稳定表达NK4的MSCs(LV-NK4-MSCs),Western blot与酶联免疫吸附试验(ELISA)分析其NK4的表达.将LV-NK4-MSCs上清液作用于3组肝癌细胞SMMC-7721、MHCC-97H、HepG2,观察其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型,尾静脉注射LV-NK4-MSCs进行治疗,观察MSCs在体内迁移情况,测量荷瘤裸鼠的肿瘤体积、生存时间,ELISA检测瘤内及血浆中NK4浓度、免疫组织化学检测CD34、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞核增殖抗原(Ki-67)表达情况.结果 成功获得稳定表达NK4的LV-NK4-MSCs,能够表达和分泌NK4.NK4能够明显抑制3组肝癌细胞的增殖,促进凋亡形成.在裸鼠肝癌模型中,MSCs能靶向迁移至肝癌组织中,而几乎不出现在正常组织中.与对照组比较,LV-NK4-MSCs治疗组的瘤体内NK4水平明显高表达[(379.80±16.83) pg/ml比(29.68±5.59) pg/ml,P=0.021],肿瘤体积显著缩小[(211.40±14.13) mm3比(457.70±93.74) mm3,P=0.009],CD34、VEGF及Ki-67表达显著降低,生存时间明显延长.结论 NK4修饰MSCs能够抑制肝癌细胞的增殖,能在体内靶向迁移至裸鼠肝癌组织中,抑制裸鼠肝癌的生长,延长生存期.
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雌激素对糖原合成激酶-3β的影响及其机制
目的 观察雌二醇(E2)对糖原合成激酶-3β(GSK-3β)活性的影响并其机制.方法 E2作用于大鼠原代皮层神经元,噻唑蓝(MTT)法检测其对细胞活力的影响;放射免疫法测定其对GSK-3活性的影响,Western blot检测其对GSK-3β表达的影响;检测雌激素受体抑制剂ICI-182780和各种信号转导激酶抑制剂对E2诱导的GSK-3β磷酸化和对GSK-3活性的影响.结果 在1、10、100、200、500 nmol/L浓度范围内,相对于对照组,E2对大鼠皮层神经元的细胞活力分别为98.4％、107.5％、105.8％、95.6％和82.3％;1、10、100 nmol/L的E2能够剂量依赖性的降低GSK-3的活性,分别为对照组的85.6％ 、78.5％和65.4％;Western blot显示E2剂量依赖性的增加了GSK-3β磷酸化(9Ser),而对非磷酸化的GSK-3β无显著影响;雌激素受体抑制剂ICI-182780拮抗了E2对GSK-3β的磷酸化作用;E2诱导的GSK-3β的磷酸化作用能被丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的抑制剂PD98059、蛋白激酶C(PKC)抑制剂GF109203X所部分抑制,而Akt的抑制剂Akt-I对其无显著影响;E2降低GSK-3活性至对照组的65.4％ (P =0.000),加入ICI、PD98059、GF109203X和Akt-I后,E2诱导的GSK-3的活性分别为对照组的98.7％、89.6％、94.9％和67.3％,这与GSK磷酸化表达检测相一致.结论 E2能够降低GSK-3活性,表现为使GSK-3β磷酸化(9Ser)增加;E2对GSK-3β作用是雌激素受体依赖性的,其对GSK-3β的磷酸化作用可能是通过MAPK和PKC信号通路所介导的.
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外支架结合有限内固定与钢板治疗跟骨Sanders Ⅱ型骨折的有限元分析
目的 通过有限元分析法对比外固定支架结合有限内固定技术(EFLIF)与切开复位内固定技术(ORIF)治疗跟骨Sanders Ⅱ型骨折的稳定性及应力分布.方法 采用General Electrics16 层螺旋CT对志愿者右足自踝关节以上15 cm扫描至足底,所得数据以DICOM格式输入Mimics 15.01软件,建立跟骨的三维有限元模型,在此基础上进一步采用Mimics、Patran、Solidworks软件模拟临床上常见的Sanders Ⅱ型跟骨骨折,并采用EFLIF及ORIF两种不同的固定方式并对比其生物力学稳定性.进一步利用Abaqus 6.10软件对模型纵向加载700 N的压应力及模拟下肢非负重状态下跟骨受到跟腱的大拉应力160 N,记录骨折块之间位移,分析外固定支架、螺钉及钢板的应力分布.结果 当垂直加载700 N载荷情况下,EFLIF与ORIF治疗跟骨Sanders Ⅱ型骨折,模型相对位移大值分别为1.462 mm和2.174mm,骨折块之间相对位移大值分别为0.014 48 mn和0.326 20 mm,两者骨折块之间相对位移大值均小于1 mm.EFLIF模型应力主要集中在外固定钉与骨骼接触处,大值为102.2mPa,小于外固定支架的屈服强度;ORIF模型应力主要集中于骨折线处载距突螺钉上,大值为2 491 mPa,大于螺钉的屈服强度.在跟腱方向160N载荷情况下,EFLIF与ORIF治疗跟骨Sanders Ⅱ型骨折时,骨折块之间相对位移大值分别为0.333 5 mm和0.1808 mm,两者骨折块之间相对位移大值均小于1mm.外支架应力主要集中于外固定钉杆连接处,主应力大值为47.2 mPa;钢板应力主要集中在螺钉和钢板连接处,主应力大为141.9mPa,两者应力值均小于器械屈服强度.结论 EFLIF与ORIF都能够为跟骨SandersⅡ 型骨折提供足够的生物力学稳定性,采用EFLIF技术固定时骨折稳定性更佳,应力分布更为均匀,是更为合理的固定方式.ORIF模型存在应力集中现象,在700 N载荷下可能出现内固定失效.
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第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白的同源基因通过调控乳腺癌扩增性抗原1和磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制胆管癌细胞QBC939的增殖能力
目的 探讨第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白的同源基因(PTEN)对人胆管癌细胞QBC939增殖能力的抑制作用及其机制.方法 利用4μg PTEN质粒或小干扰RNA(siRNA)转染人胆管癌细胞株QBC939,转染72 h后,采用噻唑蓝(MTT)实验和Western blot检测上调或下调PTEN表达对QBC939细胞增殖能力、乳腺癌扩增性抗原1(AIB1)和磷酸肌醇3激酶(P13K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路中重要的分子标志物表达的影响.结果 人胆管癌细胞株QBC939经PTEN质粒转染72 h后,其吸光度(A)值(0.216 ±0.013)较对照组(0.243 ±0.002)降低(P=0.026),表明增殖能力减弱,同时AIB1蛋白和PI3 K/Akt信号通路中的磷酸化Akt (p-Akt)蛋白表达也明显减少.用siRNA下调PTEN表达,其A值(0.403 ±0.011)较对照组(0.490 ±0.033)降低(P =0.013),表明增殖能力减弱,同时上调AIB1蛋白和p-Akt蛋白表达.结论 PTEN可以通过调控AIB1和PI3K/Akt信号通路抑制胆管癌细胞QBC939增殖.
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微波消融联合索拉非尼治疗兔肝VX2原位种植瘤的研究
目的 探讨索拉非尼作为辅助性手段联合微波消融对兔肝脏VX2种植瘤的治疗价值.方法 37只建模成功的实验兔被随机分为不全微波消融组(n=11)、联合治疗组(n=14)、对照组(n=12).微波功率设定为20 W,1 min,可获得大小约1 cm消融灶.联合治疗组同时以索拉非尼30 mg/kg灌胃,每日1次,其余两组生理盐水灌胃.肿瘤生长曲线根据治疗前后肿瘤的体积变化绘制.治疗效果的评估采用超声造影、磁共振以及免疫组织化学检查.定量资料的分析采用独立样本t检验与单因素方差分析,分类资料的分析采用x2检验与Fisher精确检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 微波组治疗后肿瘤生长加速,在治疗后3、7、14 d微波组肿瘤体积均大于对照组与联合治疗组(P =0.007、0.001、0.001),而对照组与联合治疗组肿瘤的体积在治疗后3个时间点差异均无统计学意义(P=0.381、0.069、0.328);联合治疗组术后转移率低于微波组与对照组;超声造影显示联合治疗组多为短线状、环状低增强,且多位于病灶周边,而微波组多为团块状、网格状高增强,可从周边延伸至病灶内部.弥散加权成像(DWI)显示联合治疗组残癌表观扩散系数(ADC)大于对照组与微波组,差异有统计学意义(1.845±0.503比1.102±0.149,0.979±0.235).免疫组织化学提示微波组微血管密度(MVD)大于对照组(18.20±2.30比12.63±6.88),而联合治疗组小于对照组(5.33±3.11比12.63±6.88),差异均有统计学意义.结论 不完全热消融后残癌生长加速,索拉非尼可在一定程度上抑制残癌的血管生成以及肿瘤活性.
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富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体5基因沉默对结肠癌干细胞生物学行为的影响
目的 观察富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体5(LGR5)基因沉默对具有“干性”结肠癌球囊细胞生物学行为影响.方法 采用RNA干扰技术沉默LGR5基因表达.利用脂质体Lipofectamine RNAi MAX将LGR5小干扰RNA(LGR5-siRNA)转染至HT29结肠癌球囊细胞,而转染对照siRNA细胞和未转染细胞分别作为阴性对照组和空白对照组.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测转染48 h后球囊细胞LGR5 mRNA和蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)法转染1、2、3、4d球囊细胞增殖能力,球囊形成实验、Transwell小室实验、流式细胞术检测转染48 h后细胞自我更新、侵袭能力和细胞周期.结果 转染48 h后,实验组LGR5 mRNA表达量(0.32±0.02)较空白对照组(1.00±0.16)和阴性对照组(0.99±0.12)明显下降(P=0.000),蛋白表达亦显著下调(P =0.000);CCK-8实验结果显示,实验组细胞增殖能力明显减弱,4d时空白对照组、阴性对照组和实验组吸光度(A)值分别为0.540±0.010、0.528±0.016、0.390±0.022(P=0.000);球囊形成实验结果显示实验组形成子代球囊数目[(21.33 ±2.08)个]明显少于空白对照组[(72.33±3.06)个]和阴性对照组[(70.67 ±2.52)个,P=0.000];流式细胞术检测结果显示实验组细胞明显阻滞于G0/G1期(P=0.000);Transwell小室实验结果显示,实验组穿膜细胞数[(35.60±6.74)个]较空白对照组[(86.47 ±7.85)个]和阴性对照组[(83.53±8.58)个]明显减少(P=0.000).结论 LGR5基因沉默可抑制结肠癌球囊细胞增殖、自我更新及侵袭,LGR5对结肠癌干细胞生物学行为有重要调控作用.
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KM91104通过抑制核因子-κB信号通路抑制破骨细胞分化和骨吸收的研究
目的 探讨KM91104在破骨细胞分化和骨吸收中的作用.方法 体外骨髓单核巨噬细胞培养,研究KM91104(0～ 40 μmol/L)对破骨细胞前体细胞增殖、破骨细胞分化、破骨细胞骨吸收、破骨细胞特异性基因表达的影响,Western blot法研究破骨细胞作用的分子机制.结果 0、1.25、2.50、5.00 μmol/L的KM91104作用后破骨细胞计数分别为(116.670 ±9.713)、(79.670±16.166)、(62.330 ±21.825)、(27.330±13.650)个(F=16.268,P=0.001). 1.25、2.50、5.00 μmol/L的KM91104作用后的骨吸收区域显著降低,并呈现浓度依赖性趋势.0、1.25、2.50 μmol/L的KM91104作用后,激活T细胞核因子c1(NFATc1)基因相对表达量分别为0.767±0.010、0.509±0.012、0.425±0.009(F=1 773.069,P=0.000);抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)基因相对表达量分别为0.412 ±0.008、0.314 ±0.010、0.257±0.009(F=466.743,P=0.000);组织蛋白酶K(CtsK)基因相对表达量分别为0.875±0.011、0.756±0.007、0.553±0.009(F=1 868.721,P=0.000).0、1.25、2.50 μmol/L的KM91104作用后,磷酸化p65(p-p65)/p65蛋白灰度值分别为0.419±0.011、0.213 ±0.036、0.133 ±0.006(F =273.988,P=0.000);磷酸化核因子κB抑制蛋白-α(p-IκB-α)/核因子κB抑制蛋白-α(IκB-α)蛋白灰度值分别为0.846±0.021、0.512±0.053、0.388 ±0.011 (F=293.710,P=0.000).结论 KM91104可有效抑制破骨细胞分化和骨吸收,具有治疗骨质疏松症的潜能.
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硫化氢参与腰椎间盘突出症模型大鼠痛觉高敏
目的 探讨腰椎间盘突出模型大鼠痛觉高敏与背根神经节(DRG)中内源性硫化氢(H2S)合成酶[胱硫醚-β-合成酶(CBS)及胱硫醚-β-裂解酶(CSE)]的表达之间的关系及其机制.方法 将大鼠平均分为腰椎间盘突出症模型组(LDH)和假手术组(Sham),于术前1d、术后3、7、14、21、28、35 d分别检测模型组和假手术组大鼠疼痛行为学表现,并分离提取相应时间点造模同侧L5～L6 DRG,检测CBS及CSE的蛋白表达变化.另外,在手术后第7天鞘内注射CBS抑制剂羧甲基羟胺半盐酸盐AOAA,检测给药后0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、24.0 h后对模型大鼠痛阈值的影响.结果 大鼠造模同侧足底在术后3d即产生机械疼痛撤足反应[PWT:(8.30±1.28)g比(3.75±1.30)g,P=0.027]及双后肢负重差[WB:(7.14±1.11)g比(36.47 ±5.08)g,P=0.000),一直持续到术后28 d[(12.50 ±0.71)g比(8.73 ±1.16)g,P=0.022;(5.32 ±3.42)g比(34.83±1.66)g,P =0.000],与机械痛敏不同的是,热痛撤足反应仅在术后第7天下降明显[PWL,(13.76±1.32)s比(9.82±0.46) s,P =0.006],然后逐渐恢复.同时,与假手术组比较,模型组大鼠的DRG中CBS蛋白表达在术后3～28 d均显著上升(0.65±0.05比1.01 ±0.03,P =0.000),而CSE的表达没有变化(1.08 ±0.14比1.09 ±0.15,P =0.996).鞘内注射CBS的抑制剂AOAA能显著逆转大鼠痛觉高敏.结论 DRG中CBS的表达与腰椎间盘突出症疼痛密切相关.
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以主干血管及筋膜皮肤为蒂的兔逆行岛状皮瓣的研究
目的 探讨以主干血管及筋膜皮肤为蒂的逆行岛状皮瓣的皮肤筋膜蒂对皮瓣成活影响及其在皮瓣静脉回流中作用.方法 选用健康新西兰大白兔12只,以蒂部情况不同分为4组:A组皮瓣皮肤筋膜蒂宽设计为0 cm,B组皮瓣皮肤筋膜蒂宽设计为0.5cm,C组皮瓣皮肤筋膜蒂宽设计为1.5 em,D组皮瓣皮肤筋膜蒂宽设计为1.5 cm(蒂部仅含隐动脉,于旋转点处结扎伴行的隐静脉),蒂长均为3.0cm,以踝关节线上2.0cm为旋转点,皮瓣大小均设计为7.0 cm×3.0 cm.切取皮瓣,观察记录术后皮瓣成活情况.应用SPSS 17.0统计软件分析.并行亚甲蓝灌注观察研究不同蒂部处理方式的皮瓣的静脉回流.结果 蒂部不同处理方式的兔隐血管逆行岛状皮瓣共24例(每组6例).A组:3只皮瓣完全成活;3只皮瓣近端发生部分坏死,平均成活面积百分率为85.57％.B组:4只皮瓣完全成活;2只皮瓣近端发生部分坏死,平均成活面积百分率为88.10％.C组:6只皮瓣均完全成活.D组:4只皮瓣完全成活;1只皮瓣发生部分坏死,1例皮瓣全部坏死,平均成活面积百分率为73.83％.在A、B、C3组,随着蒂部筋膜皮肤组织宽度增加,皮瓣坏死例数逐渐降低,皮瓣成活面积比率递增.A、B、C、D4组间两两比较,差异无统计学意义.亚甲蓝灌注可见筋膜皮肤蒂部存在较多的“迷宫式”静脉吻合及静脉穿支间吻合.结论 隐血管蒂周围带一定宽度筋膜皮肤蒂对兔隐血管逆行岛状皮瓣的成活有一定的改善作用.静脉回流主要通过主干静脉的逆静脉瓣回流,筋膜皮肤蒂对皮瓣的静脉回流起部分作用.
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二甲双胍对胃癌细胞SGC7901和BGC823生长的影响及其机制
目的 观察二甲双胍对胃癌细胞SGC7901和BGC823增殖、凋亡的影响,并探讨其机制.方法 用细胞计数试剂盒(CCK-8)测定二甲双胍组与对照组的细胞增殖,流式细胞仪分析各组细胞凋亡及细胞周期,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot法测定二甲双胍对微小RNA(miRNA,miR)-let-7a、细胞周期蛋白D1(Cyclin Dl)、周期蛋白依赖性激酶2(Cdk2)、周期蛋白依赖性激酶4(Cdk4)和p21表达的影响.结果 不同浓度二甲双胍(0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mmol/L)作用72 h对SGC7901胃癌细胞增殖抑制率分别为(15.3±3.1)％、(24.7±6.8)％、(27.3±5.7)％、(31.0±9.6)％、(57.0±3.6)％、(69.0±2.0)％、(70.7±5.9)％(P=0.000).对BGC823胃癌细胞增殖抑制率分别为(37.7±7.5)％、(44.7±2.1)％、(53.7±4.7)％、(59.3±6.4)％、(68.0±5.3)％、(75.7±2.5)％、(81.0±1.0)％(P=0.000).二甲双胍对胃癌细胞增殖抑制呈剂量-时间依赖性;二甲双胍组和对照组中SGC7901胃癌细胞凋亡率分别为(7.68±0.42)％、(2.63 ±0.72)％ (P =0.000),BGC823胃癌细胞凋亡率分别为(14.19±0.72)％、(11.31±1.29)％ (P =0.028).二甲双胍将胃癌细胞增殖活动抑制在G1期,加药组胃癌细胞阻滞在G1期的百分率显著高于对照组[SGC7901:(57.3 ±0.6)％比(44.2±0.4)％(P=0.000);BGC823:(59.9±1.7)％比(52.6±1.7)％(P=0.007)],二甲双胍上调miR-let-7a、Cyclin D1、Cdk2、Cdk4表达,抑制p21表达.结论 二甲双胍可能通过上调let-7a表达,并调控细胞周期调节因子从而阻滞细胞周期进程,促进细胞凋亡,抑制SGC7901和BGC823胃癌细胞生长.
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左氧氟沙星对大鼠骨髓间充质干细胞的毒性作用研究
目的 观察左氧氟沙星对大鼠骨髓间充质干细胞是否具有细胞毒性作用.方法 采用大鼠骨髓间充质干细胞,设立正常对照组及梯度浓度的左氧氟沙星处理组(5、10、20、40、80 μg/ml)分别作用24、48 h.以噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,流式细胞膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙锭(PI)双染法检测细胞凋亡情况,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测对细胞基质促降解的基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及抑制降解的基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶抑制因子-13(TIMP-3)的mRNA水平的表达.结果 左氧氟沙星(5～ 80 μg/ml)作用48 h后,骨髓间充质干细胞细胞数分别减少至对照组的92.39％、88.26％、84.11％、78.71％和71.90％ Annexin V-FITC/PI双染流式细胞检测示,左氧氟沙星(5～80μg/ml)作用24 h后,细胞凋亡细数呈药物浓度依耐性升高(与对照组比较其P值分别为0.022、0.013、0.007、0.004、0.002).RT-PCR检测结果示,左氧氟沙星作用细胞24 h后,显著增高MMP-3(与对照组比较,P值分别为0.025、0.021、0.014、0.002、0.001)和显著增高MMP-13(与对照组比较,P值分别为0.015、0.009、0.004、0.003、0.001)表达,显著降低TIMP-1表达,并且该作用具有药物浓度依耐性(与对照组比较,P值分别为0.027、0.015、0.007、0.005、0.001).结论 左氧氟沙星对大鼠骨髓间充质干细胞具有明确的细胞毒性作用.
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缺血性脑损伤急性期Notch1活性变化对神经细胞凋亡的影响
目的 观察脑缺血急性期半暗带区Notch1活性的动态变化,探讨其与缺血后细胞凋亡的关系,为缺血性脑血管病临床治疗寻找可能的靶点.方法 采用线栓中动脉闭塞(MCAO)法建立局灶性脑缺血模型.SD雄性成年大鼠随机分为假手术组(Sham组)、MCAO+溶剂对照组(Vehicle组)、MCAO+ Notch1抑制剂组(DAPT组).原位缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡指数,Western blot法检测Notch1活性片段(NICD)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解片段、蛋白激酶B(Akt)和Bad磷酸化.结果 缺血后1、3、7 d NICD含量较Sham组分别增加2.1、4.6、3.8倍.持续侧脑室注射DAFT抑制NICD产生后,1、3、7d凋亡指数[分别为(32.71±5.20)％、(52.58±9.20)％、(49.53±8.40)％]较Vehicle组[分别为(23.21 ±4.66)％、(37.86±8.12)％、(34.87±7.30)％]增加,磷酸化Akt及Bad较Vehicle组明显下降.结论 脑缺血急性期半暗带区Notch1活性增加,可能具有抑制细胞凋亡的作用;抑制Notch1活化可加重缺血性脑损伤.
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热休克蛋白70调控内质网钙通道相关蛋白对心肌细胞凋亡的影响
目的 观察热休克蛋白70 (HSP70)在心肌内质网应激(ERS)诱导的细胞凋亡中的作用,探讨HSP70调控内质网应激诱导细胞凋亡、分泌和钙信号转导的分子机制.方法 应用转基因技术和反义寡核苷酸导入技术诱导和抑制HSP70基因在SD乳鼠心肌细胞的表达,建立细胞培养和缺氧模型,测定细胞凋亡率,提取内质网测定HSP70对ERS导致的内质网内外游离钙、活性氧(ROS)含量的变化及内质网钙三磷酸腺苷酶(SERCA)和钙敏感受体(CaSR)的表达.结果 空白组早期细胞凋亡率为(9.28±0.83)％、晚期细胞凋亡率为(28.60 ±1.83)％、ROS生成率为80.0％,HSP70基因转染组早期细胞凋亡率为(4.30±0.72)％、晚期细胞凋亡率为(11.6±1.66)％、ROS生成率为38.5％,HSP70反义寡核苷酸处理组早期细胞凋亡率为(29.3±2.54)％、晚期细胞凋亡率为(34.4±2.43)％、ROS生成率为77.0％,表明HSP70显著抑制细胞凋亡和ROS的产生;HSP70基因转染组CaSR蛋白表达水平明显小于HSP70反义寡核苷酸处理组,而SERCA差异无统计学意义,这表明HSP70显著抑制CaSR的表达,但并不影响SERCA的表达.结论 HSP70通过抑制Ca2电流从而抑制CaSR的表达,并且在ROS诱导的Ca2电流中起重要作用.
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神经肽基因转染干细胞联合自体骨移植治疗兔股骨头坏死
目的 探讨降钙素基因相关肽转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)联合自体骨移植治疗模型兔股骨头坏死(ONFH)的组织病理学改变.方法 采用骨内液氮冷冻法成功制作出家兔ONFH动物模型.将48只ONFH模型动物随机分为3组:A组:人降钙素基因相关肽α(hCGRPα)基因转染BMSCs组:将hCGRPα基因转染BMSCs联合自体骨移植于股骨头内;B组:空质粒组:植入干细胞为空质粒BMSCs联合自体骨移植;C组:无关序列组:植入干细胞为无关基因BMSCs联合自体骨移植.于实验第3、6个月末分批处死兔,观察兔股骨头的组织病理学变化.结果 实验3个月时,A、B、C组正常侧股骨头中,骨小梁面积分数分别为(40.89±1.12)％、(36.12±1.17)％、(36.33±1.53)％、(42.11±1.91)％,空骨陷窝计数分别为(11.34±1.58)％、(16.33 ±1.45)％、(17.21±1.23)％、(10.47±1.41)％.A组中股骨头内有大量骨细胞增殖生长,骨小梁较成熟,骨小梁面积分数高,空骨陷窝少,接近于正常侧,明显优于B、C组.而B、C组中骨小梁细小、不规则,骨小梁面积分数低,空骨陷窝多,骨修复不完整.6个月时,A组中骨小梁成熟,致密饱满,排列规则整齐,骨小梁面积分数与空骨陷窝计数均仍优于B、C组.结论 hCGRPα转基因BMSCs联合自体骨移植入动物模型股骨头中,能够显著促进细胞增殖,加速成骨,增强骨组织修复,获得治疗ONFH的良好效果.
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结核性胸膜炎大鼠胸水中基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-9浓度的变化
本研究旨在通过检测结核性胸膜炎大鼠胸腔积液中基质金属蛋白酶(MMP)-1和MMP-9的浓度变化,探讨其在结核性胸膜炎胸腔积液形成以及胸膜组织修复、重塑等不同时期中的作用.一、材料与方法将50只Wistar雄性大鼠经卡介苗接种5周后胸腔注入结核分支杆菌悬液1 ml,注入后第1、3、7、15、30天分批处死并测定各组大鼠胸水中MMP-1和MMP-9浓度,对应同时期胸腔改变行相关分析.
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提高大鼠内皮祖细胞水平改善脊髓损伤后功能恢复
我们通过提高循环血内皮祖细胞(EPCs)水平观察其对脊髓损伤(SCI)后的影响.一、材料与方法1.动物及模型:雄性Wistar大鼠48只(雌雄各半),体重250～300 g,由军事医学科学院提供,随机分为A组:重组人粒细胞集落刺激因子(G-CSF,R&D公司,USA,#NP_757373)处理组和B组:对照组,分别腹腔注射重组人G-CSF 100 μg/(kg·d)和等量生理盐水连续4d.后一次注射后24 h进行手术,10％水合氯醛0.3 ml/100 g麻醉,背部正中切口,切除T9～T11棘突,T10全部椎板和T9,T11上下各半个椎板,暴露硬脊膜,使用Allen's脊髓打击器以25 mm×10 g致伤力损伤脊髓,造成大鼠中度SCI.术后大鼠自由进食水,每天挤压膀胱排尿2～3次至膀胱功能恢复.
关键词： -
脂联素提高L6大鼠骨骼肌细胞胰岛素敏感性的研究
脂联素(APN)对2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗(IR)的改善机制尚未清楚.我们观察不同浓度APN刺激L6骨骼肌细胞胰岛素信号通路中蛋白激酶B(Akt)及葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)的表达.一、材料与方法1.材料:L6大鼠骨骼肌IR模型(大连大学实验中心);APN(上海生物工程公司);Akt、GLUT-4抗体及β-肌动蛋白(β-actin)抗体(Santa Cruz公司).
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胆管囊肿合并嗜血细胞综合征一例
患者女性,33岁,因高热、间断腹痛、黄疸3日就诊.查体:全身皮肤黏膜中度黄染,腹部未触及明显肿物,Mushy征(+).化验提示白细胞计数(WBC)9.97×109/L;总胆红素(TB)123.6 μmol/L;行腹部磁共振(MR)提示左右肝内胆管起始部及胆总管呈明显囊性扩张,胆总管多发高密度影,考虑结石.临床诊断为胆管囊肿(CCs)、TodaniⅣa型,合并胆道感染、胆石症.给予消炎及护肝、止痛治疗,效果不佳,入院第5天,患者黄疸明显加重,口唇苍白,且呈重度贫血貌,血压92/66 mmHg(1 mmHg =0.133 kPa),心率112次/分.急查WBC 38.38×109/L;TB 1 247.1 μmol/L,考虑胆道感染加重,伴感染性休克可能.
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胃癌患者术前血清肿瘤标志物监测
目的 探讨术前血清中肿瘤标志物水平与不同阶段胃癌的关系.方法 随机选择106例已经确诊的胃癌患者和106例正常人群作为对照组(两组研究对象的年龄、性别相匹配).研究时间为3年.主要调查内容为处于肿瘤不同阶段的标志物如癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA) 19-9和CA125、肿瘤的分化程度以及肿瘤存在的腹膜位置之间的关系.结果 与对照组比较,血清中的CA19-9在正常对照组[10.96(8.21,15.33) U/ml]以及胃癌组[15.00(5.54,18.37) U/ml]比较差异无统计学意义(P=0.103).对照组中CEA为[1.10(0.58,2.21) ng/ml]以及CA125为[6.90(2.44,8.39) U/ml],而胃癌组分别为[1.79(1.11,5.69) ng/ml]以及[11.60(5.40,15.88) U/ml],结果显示胃癌患者血清中CEA和CA125水平显著升高.血清中CEA的水平在转移期患者中明显升高,在胃癌患者中CA19-9和CA125水平分化显著升高,并且与腹膜转移呈正相关.结论 检测血清中肿瘤标志物水平有助于判断肿瘤的程度以及转移.
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脑钠肽及氮端脑钠肽在窒息新生儿心肌损伤中的应用
目的 探讨血浆脑钠肽(BNP)及氮端脑钠肽(NT-proBNP)水平对窒息新生儿心肌损伤的临床应用价值.方法 按患儿就诊顺序编号每间隔一例选取收治的106例窒息患儿为观察组,按照是否有心肌损伤分为心肌损伤组46例和非心肌损伤组60例,同时选取同期收治的无窒息史及心血管系统疾病的63例新生儿为对照组,除外水电解质紊乱和肝肾功能障碍,两组患儿均要求入院日龄＜3d.对所有入选患儿在入院2h内及入院2周测定血浆BNP、NT-proBNP、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平.结果 入院2h内心肌损伤组血浆BNP和NT-proBNP水平明显高于非心肌损伤组及对照组(经Log转换后,t=7.928,P=0.030;t =72.530,P=0.001),非心肌损伤组高于对照组(t=43.314,P=0.020).心肌损伤患儿经过治疗,2周时血浆BNP和NT-proBNP水平较入院2h内明显下降,差异有统计学意义(=26.523,P=0.001).心肌损伤患儿BNP的Cut-off值为108.15 pg/ml时,受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.754,敏感度75.2％,特异度64.6％,阳性预测值56.5％,阴性预测值72.4％;心肌损伤患儿NT-proBNP的Cut-off值为3 615.5 pg/ml时,ROC曲线下面积为0.810,P=0.001,敏感度为83.4％,特异度为80.6％,阳性预测值82.9％,阴性预测值79.5％.窒息患儿血浆BNP与CK-MB呈正相关(r=0.212,P=0.030).NT-proBNP与CK-MB呈显著正相关(r =0.406,P=0.007).结论 血浆BNP及NT-proBNP水平均能反映窒息患儿心肌损伤情况,可用于窒息新生儿心肌损伤的早期诊断,NT-proBNP有更高的特异性和敏感性.
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极性蛋白PARD3对结直肠癌转移的影响
目的 观察极性蛋白PARD3在结直肠癌转移中的作用.方法 应用免疫组织化学和Western blot检测38例结直肠癌组织标本中PARD3的表达,探讨PARD3与临床病理特征的相关性.实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot分别检测结直肠癌细胞中PARD3中的表达.通过RNA干扰技术敲除PARD3后,检测上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达变化及Transwell实验检测细胞迁移能力的改变.结果 结直肠癌组织中PARD3表达水平明显低于正常切缘组织(0.33±0.03比0.47±0.03).PARD3低表达与患者性别、年龄及肿瘤浸润程度无明显相关(P =0.209、0.405、1.000),而与淋巴结转移明显相关(P=0.013).PARD3在结直肠癌细胞株中均表达,其中SW620和LoVo中PARD3表达水明显低于其他结直肠癌细胞.SW480和LoVo细胞敲除PARD3后,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达降低,N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达升高.Transwell实验显示小干扰RNA (siRNA)转染组中细胞穿过膜的数量明显多于对照组(214.00±35.93比66.00±13.45、521.00±26.27比146.00 ±23.29).结论 PARD3表达下调促进结直肠癌转移.
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选择性脑灌注结合远端灌注与选择性脑灌注在主动脉夹层体外循环管理中的效果比较
目的 通过比较与单纯顺行性选择性脑灌注(aSCP)技术在治疗Standord A型主动脉夹层动脉瘤的体外循环管理内容,探讨aSCP结合远端灌注体外循环管理特点.方法 回顾分析治疗主动脉弓部手术患者78例,根据体外循环方式不同分为常规组和改良组,分别记录两组患者的一般资料、体外循环时间、主动脉阻断时间、辅助循环时间、停循环、脑灌注时间及术后清醒时间、气管插管时间、重症监护室(ICU)停留时间、用血量、术后并发症、胸腔纵膈引流量、术后在院时间.结果 常规手术组出现3例术后死亡,改良组全部治愈出院,体外循环转流时间常规组[(239.45±48.78) min],改良组[(233.69±53.61) min]、主动脉阻断时间常规组[(131.73±24.05) min],改良组[(148.77±39.81) min]两组差异无统计学意义(P=0.161,0.050).术后清醒时间常规组[(42.65±9.67)h],改良组[(30.43±8.34)h]、气管插管时间常规组[(58.82±12.90) h],改良组[(46.33±11.82) h]、用血量常规组[(1203.25±242.91) ml],改良组[(953.33±127.43) ml]、术后前2d引流量常规组[(827.16±239.80) ml],改良组[(688.00±85.62) ml]、ICU停留时间常规组[(6.48±1.08)h],改良组[(5.80±0.94)h]及术后在院时间常规组[(23.95±1.94)d],改良组[(18.80±2.11)d],改良组明显好于常规组(P =0.029、0.050).结论 经右侧锁骨下动脉行aSCP结合远端灌注比单纯经右侧锁骨下动脉行aSCP在主动脉夹层手术体外循环管理效果上有明显优势.
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健康国人腰椎椎弓根轴线与关节突高点连线矢状面成角的三维重建测量
目的 评估健康国人腰椎椎弓根轴线与该椎体上下关节突高点连线矢状面成角.方法 宝石CT扫描全腰椎患者数据中,筛选骨质及序列正常患者共132例,其中男78例,女54例;根据年龄,20～ 29岁共31例,30～ 39岁44例,40 ～50岁57例.提取数据构建数字三维模型;基于此模型,寻找椎弓根理论轴线a,该椎体上下关节突高点连线b,通过棘突定位标准矢状面,将a、b投影至矢状面获得a’、b’并测量其夹角.结果 L1 ～ L5椎弓根轴线与上下关节突高点连线的夹角依次为(85.13±4.18)°、(88.20 ±4.24)°、(83.56±3.62)°、(82.72±5.88)°、(73.42±7.83)°;L1～L5数据在不同性别组间差异(P1=0.038,P2 =0.041,P3=0.036,P4=0.070,P5=0.104),年龄组间差异(P’1=0.041,P'2 =0.044,P’3=0.036,P’4=0.058,P’5=0.078).结论 腰椎椎弓根螺钉技术的关键之一为矢状面成角,本研究证实,以上下关节突连线作为解剖参照估计术中置钉角度,具有较好的实用性和可靠性,了解这一解剖特点,有助于准确置入椎弓根螺钉.
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CYP1A1基因多态性对多西他赛联合卡培他滨治疗转移性乳腺癌疗效的影响
目的 在经多西他赛联合卡培他滨治疗的复发转移性乳腺癌(MBC)患者中,探讨细胞色素P450(CYP450)酶基因的单核苷酸多态性(SNP)和患者治疗疗效个体化差异的关系.方法 研究入组69例接受多西他赛联合卡培他滨方案治疗的MBC患者,治疗前通过飞行时间质谱和直接测序法对CYP450基因上中国人群中小等位基因频率(MAF)≥10％的79个多态性位点进行基因分型,并分析这79个SNP位点和多西他赛联合卡培他滨治疗的反应率以及预后的相关性.结果 79个SNP位点中只有CYP1A1的rs1048943 (Ile462Val)位点与无进展生存期(PFS)显著相关(P=0.000),其他SNP位点与治疗反应率以及总生存期(0S)无明显相关.进一步分析,将rs1048943(Ile462Val)位点纳入COX风险比例模型校正后,表明该位点是影响PFS独立的预测指标(P=0.004).结论 检测CYPlA1的多态性位点rs1048943 (Ile462Val)对接受多西他赛联合卡培他滨方案方案治疗的MBC患者有助于评估预测预后.
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嗅觉介导素1表达下调与肝细胞癌预后不良相关
目的 探讨嗅觉介导素1(OLFM1)在肝癌组织中的表达及其与肝癌患者临床病理特征和预后的关系.方法 通过Western blot方法检测71例人肝癌标本(肝癌组织和对应的癌旁肝组织)OLFM1的蛋白表达水平,分析肝癌组织中OLFM1的表达水平与患者临床病理特征的关系,及其与肝癌切除术后患者预后的关系.结果 OLFM1蛋白在肝癌组织中的相对表达量为0.42 ±0.33,在癌旁肝组织中的相对表达量为1.11 ±0.53;OLFM1蛋白在肝癌组织中的表达水平显著低于癌旁肝组织,差异有统计学意义(P=0.001).肝癌组织中OLFM1低表达与肿瘤多发、肿瘤直径大、肿瘤无包膜、血管侵犯及肿瘤低分化等恶性生物学特性密切相关,差异有统计学意义(P =0.024、0.034、0.010、0.002、0.024、0.001).OLFM1低表达组的无瘤生存率和总体生存率显著低于OLFM1高表达组,差异有统计学意义(P =0.009、0.013).结论 OLFM1在肝癌组织中低表达与肝癌恶性程度高、预后差密切相关;OLFM1可能在肝癌发生发展及侵袭转移过程中发挥重要作用.
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胸腹腔镜食管癌根治术与开放食管癌根治术对患者肺功能、免疫功能及应激反应的影响
目的 观察胸腹腔镜微创手术与传统开胸手术对食管癌患者肺功能、免疫功能及应激反应的影响.方法 选取我院收治的食管癌患者70例,根据治疗方法不同分为实验组(n=37)和对照组(n=33).实验组行胸腹腔镜微创食管癌根治术,对照组行传统开放食管癌根治术.比较两组术后1个月肺功能指标[肺活量占预计值百分比(VC％)、用力呼气量占预计值百分比(FEV％)、第1秒用力呼气量占预计值百分比(FEV1％)、用力肺活量占预计值百分比(FVC％)、每分钟大通气量占预计值百分比(MVV％)]及术后1、5d免疫功能[肿瘤坏死因子-α(TNF-α);白细胞介素-6(IL-6)]、应激反应指标[白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、皮质醇]水平变化.结果 实验组手术时间为(240.86±13.96) min、出血量为(204.84±12.47) ml、住院时间为(10.62±1.42)d,均低于对照组,且差异有统计学意义(t=-3.318、-6.739、-6.763,P=0.000、0.000、0.001).实验组患者术后1个月肺功能VC、FEV、FEV1、FVC水平分别为(81.8±4.5)％、(79.1±4.6)％、(76.0±6.2)％、(79.4±5.7)％,均较对照组高,差异有统计学意义(t=3.857、6.231、3.608、3.302,P=0.000、0.000、0.001、0.003).实验组患者术后1、5d的TNF-α水平分别为(3.02±0.47)、(1.35±0.31) mg/ml,均明显低于对照组(t=-3.251、-4.542,P=0.002、0.000);实验组患者术后ld的IL-6水平为(216.51±49.19) pg/ml,低于对照组(t=-2.251,P=0.028).实验组术后第1、5天的WBC、CRP水平分别为(12.16±2.00)×109/L、(10.42±1.75)×109/L;(93.71±18.74)、(23.84±12.09) mg/L,与对照组比较差异均无统计学意义(t=-1.930、-0.278,P =0.058、0.782;t=-1.841、-0.717,P=0.070、0.476);实验组术后第1天皮质醇水平为(862.60±195.83) nmol/L,与对照组比较差异有统计学意义(t=-2.148,P=0.035).结论 与传统开胸手术比较,胸腹腔镜微创手术能有效减少手术创伤和炎性因子的释放,对患者肺功能影响更小,有利于改善患者预后,但对机体应激反应无明显影响.
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关节腔灌注氨甲环酸对关节置换术后失血膝关节功能恢复的影响
目的 观察膝关节腔灌注氨甲环酸(TXA)联合引流管夹闭3h对人工全膝关节置换术(TKA)后失血及术后膝关节功能恢复的影响.方法 对拟行初次单侧全膝关节置换术的110例膝骨性关节炎患者随机分3组.A组30例将2 g氨甲环酸稀释于100ml的生理盐水后在松止血带前经引流管向关节腔灌注(氨甲环酸组);B组39例将100ml生理盐水在松止血带前经引流管向关节腔灌注(对照1组);前两组灌注结束后立即夹闭引流管3h.C组41例同时点同样方式等量生理盐水关节腔灌注(对照2组),不夹管.3组患者性别、年龄、体重指数(BMI)等比较,差异均无统计学意义.结果 对比3组术中的出血量、术后的引流量、隐性失血量、总失血量、输血量和输血率的差异,术后膝关节肿胀程度、下肢瘀斑面积＞1％的发生率及术后5d、1个月的膝关节活动度和膝关节协会评分系统(KSS)功能评分,差异均有统计学意义.术后静脉血栓栓塞症的发生率差异无统计学意义(P =0.971).结论 将2 g氨甲环酸(TXA)稀释于100 ml生理盐水后在松止血带前向关节腔灌注并夹管3h,可以显著减少初次单侧人工全膝关节术(TKA)后的失血量、输血量与输血率,并且不增加血栓形成等并发症的发生风险.在TKA中关节腔灌注TXA还有利于患者术后膝关节早期的功能恢复.
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长链非编码RNA-ARA在三阴性乳腺癌组织的表达及其临床意义
目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA)-ARA在不同亚型乳腺癌组织的表达及其与三阴性乳腺癌(TNBC)患者临床病理特征的关系及对生存的影响.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测我院55例TNBC、20例管腔型(Luminal型)阳性与20例人表皮生长因子受体2(Her-2)阳性型乳腺癌癌组织中的lncRNA-ARA的表达量及TNBC癌组织和癌旁组织中的lncRNAARA表达水平,分析lncRNA-ARA与TNBC患者临床病理特征的关系;应用Kalpan-Meier方法观察lncRNA-ARA对TNBC患者的预后的影响.结果 TNBC亚型中lncRNA-ARA的表达量(10.35±2.29)明显高于Luminal型(2.14±0.71)和Her-2阳性型(3.32±0.90)乳腺癌(P =0.000),且癌组织中表达水平明显高于癌旁组织(10.35±2.29比2.21±0.71,P=0.000);lncRNA-ARA的表达水平与TNBC肿瘤大小及细胞核增殖抗原(Ki-67)表达量明显相关(P =0.034、0.016);lncRNA-ARA高表达的TNBC人群无病生存(DFS)率明显低于ARA低表达组(37.6％比67.2％,P=0.013).结论 lncRNA-ARA在TNBC亚型中呈高表达,且高于癌旁组织,与TNBC的肿块大小及增殖指数相关,并提示较差预后.
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环状RNA与肿瘤的研究进展与展望
环状RNA作为非编码RNA的一种,近年来在肿瘤等领域中展现出其独特的作用.环状RNA与肿瘤的产生、进展、转移、放化疗耐受等病理过程关系密切,并展现了其作为肿瘤的诊断标志物、预后评价指标、治疗靶点甚至药物的前景.该文将就环状RNA与肿瘤的相关研究做一综述.
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前列腺癌肿瘤免疫的研究进展
前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤之一,其发病与年龄、遗传、饮食、环境和性激素等多项因素有关.随着对前列腺癌肿瘤免疫学和肿瘤微环境研究的不断深入,使得免疫治疗有望成为继手术、放疗、化疗和分子靶向治疗后,肿瘤治疗领域中的新武器.肿瘤免疫也是近年来国际上的研究热点,现就前列腺癌免疫逃逸机制及免疫治疗策略进行综述,为临床预防、诊断、治疗前列腺癌提供帮助.
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Par3在肿瘤中的表达及作用
细胞极性的破坏被看作是肿瘤的特征之一.研究结果表明,多种肿瘤存在极性蛋白异常表达和异常分布,对肿瘤的增殖、侵袭和迁移等生物学行为产生影响.Par3蛋白作为支架蛋白,作为极性蛋白家族中重要的成员,不仅参与调控细胞极性,同时对肿瘤发生发展具有重要的作用.本文主要就Par3蛋白作一综述,阐述其在肿瘤发生、增殖、侵袭和迁移等方面发挥的作用以及其中的分子机制.
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微小RNA-221通过靶基因细胞因子信号抑制因子1表达水平调控前列腺癌细胞的侵袭力
目的 观察前列腺癌细胞中微小RNA(miRNA,miR)-221的表达及其对前列腺癌细胞侵袭力的影响.方法 应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-221在前列腺正常细胞株与前列腺癌细胞株中表达的差异,利用细胞转染构建miR-221过表达和抑制细胞株,再通过细胞迁移实验检测细胞侵袭力的变化;使用荧光素酶报告实验验证miR-221与细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)基因的直接调控关系,再采用Western blot检测细胞中SOCS1基因表达水平的变化.结果 RT-qPCR检测细胞株可见miR-221在PC3、LNCaP和DU145 3种前列腺癌细胞株中表达量(6.51、7.52和8.03)均比前列腺正常细胞株表达量(12.12)低(F=235.852,P=0.000),其中两两比较差异也有统计学意义.细胞迁移实验结果显示,过表达miR-221的前列腺肿瘤细胞迁移速度显著慢于对照组(25.3 h比17.8h).荧光素酶报告实验显示,miR-221能明显抑制SOCS1-3'UTR的荧光素酶活性(P =0.006).过表达miR-221后,PC3细胞中SOCS1的蛋白表达下调(P=0.035).结论 miR-221负调控SOCS1能抑制前列腺癌细胞的迁移.
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白细胞介素-17及一氧化氮在透明质酸诱导大鼠间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征中的作用
目的 观察白细胞介素-17(IL-17)及一氧化氮(N0)在透明质酸酶诱导的大鼠间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征(IC/BPS)中的作用.方法 将60只成年雌性SD大鼠(200 ～250 g),采用随机数字表法随机分为对照组15只(膀胱灌注生理盐水),模型组15只(膀胱灌注透明质酸酶),黏膜保护组15只(透明质酸钠),IL-17拮抗组15只(IL-17中和性抗体).采用长期(1个月)间歇灌注透明质酸酶(4g/L)构建大鼠IC/BPS模型,尿流动力学检测膀胱功能,VonFrey刷检测泌尿生殖区疼痛变化,硝酸还原酶法测定膀胱组织NO的含量,Western blot检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达.结果 模型组膀胱NO含量为(9.82 ±2.21) μmol/g;排尿时间间隔为(131.62 ±37.55)s;膀胱容量为(0.39 ±0.06) ml.对照组膀胱组织NO含量为(0.32±0.12) μmol/g;排尿时间间隔为(438.90±29.44)s;膀胱容量为(1.28±0.09) ml.与对照组比较,模型组大鼠膀胱NO含量明显升高(P =0.001),排尿时间间隔缩短(P =0.001),膀胱容量降低(P=0.001),膀胱iNOS蛋白表达均显著升高(P =0.001),疼痛评分明显上调(0.07 g,P=0.002;0.40 g,P=0.001;1.00 g,P=0.001).与模型组比较,黏膜保护组及IL-17拮抗组大鼠的膀胱组织NO含量减少(均P=0.001),分别为(3.46±0.43)和(4.45±1.48) μmol/g;排尿时间间隔及膀胱容量明显增加(P=0.001),分别为(400.13 ±51.27)s及(408.02±52.18)s、(1.07±0.16) ml及(1.10±0.19) ml,而膀胱iNOS蛋白表达均显著降低(P值分别为0.002和0.010),疼痛评分也明显下调(黏膜保护组:0.07 g:P=0.002;0.40 g:P =0.002;1.00 g:P =0.002;IL-17拮抗组:0.07 g:P =0.002;0.40 g:P =0.005;1.00 g:P =0.002).结论 间质性膀胱炎时,膀胱组织中由iNOS催化产生的内源性NO水平明显增加,而通过拮抗IL-17,可明显降低iNOS的表达及NO的产生,并改善透明质酸酶诱导的IC/BPS大鼠的尿频及疼痛症状.
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前列腺干细胞抗原基因单核苷酸多态性与前列腺癌风险的关系
目的 探讨前列腺穿刺患者的前列腺干细胞抗原(PSCA)基因单核苷酸多态性(SNP)与前列腺癌(PCa)的关系.方法 检测296例经直肠前列腺穿刺活检患者的PSCA rs1045531的SNP,比较PCa和良性前列腺增生(BPH)患者间rs1045531基因型分布频率的差异,并分析其与PCa风险和前列腺特异性抗原(PSA)等参数的关系.结果 PCa组(n=138)与BPH组(n=158)患者的PSCA rs1045531基因型分布频率差异有统计学意义(P=0.000).与CC型比较,AC型显著增加PCa的患病风险[比值比(OR)=2.612,95％可信区间(CI):1.607～4.245,P=0.000].在所有穿刺患者中,AC型患者PSA明显高于CC型[(53.49±29.24) ng/ml比(22.42±18.74) ng/ml,P=0.001];在PCa患者中,AC型患者PSA也明显高于CC型患者[(69.89±43.00) ng/ml比(24.34±11.73) ng/ml,P=0.025].rs1045531 SNP与Gleason评分密切相关(x2=10.370,P=0.006).结论 PSCA rs1045531 SNP可用于前列腺穿刺患者的PCa风险预测和危险评估.
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6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3基因对前列腺癌细胞增殖的影响
目的 观察6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3(PFKFB3)在前列腺癌组织中的表达及其对PC3和DU145前列腺癌细胞增殖的影响.方法 采用免疫组织化学染色(抗体浓度1∶50)方法,观察PFKFB3基因在前列腺癌组织及癌旁组织中的表达.实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR,40个循环,188 bp)、Western blot法[30μl,10％十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)]检测PFKFB3 mRNA和蛋白在前列腺癌细胞及前列腺上皮细胞中的表达.采用平板克隆形成实验(40 μmol/L H2O2)与细胞生长实验[20μl噻唑蓝(MTT)]对比观察敲除PFKFB3基因前后前列腺癌细胞的生长.结果 PFKFB3基因在前列腺癌组织中的表达(2.42±0.16)明显高于癌旁组织(1.38±0.10),差异有统计学意义(P=0.031);前列腺癌细胞中PFKFB3 mRNA和蛋白表达水平均高于前列腺上皮细胞,分别为2.0～2.6倍和2.5 ～4.5倍(P =0.015);敲除PFKFB3基因后,平板克隆形成实验结果显示细胞克隆形成率为敲除前的22％ ～35％ (P=0.018),细胞生长实验结果显示前列腺癌细胞的增殖在第4天受抑制,为对照组的28％ ～30％(P=0.026).结论 PFKFB3基因在前列腺癌细胞和组织中高表达,PFKFB3基因对前列腺癌细胞的增殖有一定的促进作用.
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肝细胞核因子3β在前列腺癌组织的表达及临床意义
目的 检测肝细胞核因子3β(Foxa2)在前列腺癌组织及良性前列腺增生组织的表达,探讨其与临床病理的相关性.方法 收集经手术病理明确的48例前列腺癌组织和10例良性前列腺增生组织,并运用免疫组织化学技术检测Foxa2蛋白在其表达水平,然后结合临床分期、Gleason评分、有无远处转移、术前前列腺特异抗原(PSA)水平等进行相关分析.结果 Foxa2蛋白表达水平在前列腺癌组织中弱阳性(+)、阳性(++)、强阳性(+++)的比例分别为18.7％ (9/48)、56.3％(27/48)、25.0％(12/48),显著高于良性增生组织中90.0％(9/10)、10.O％(1/10)、0.0％ (0/10)(P=0.000).Foxa2蛋白表达水平与Gleason评分分组:2～4分组60.0％(3/5)、40.0％(2/5)、0.0％(0/5),5～7分组14.3％(4/28)、67.8％ (19/28)、17.9％(5/28),8～ 10分组13.3％ (2/15)、40.0％(6/15)、46.7％ (7/15),差异有统计学意义(P=0.023);远处转移分组:未转移组22.6％(7/31)、64.5％ (20/31)、12.9％(4/31),转移组11.8％ (2/17)、41.2％ (7/17)、47.0％(8/17)正相关,差异有统计学意义(P =0.032).Foxa2蛋白表达水平与临床分期:T1～T2期22.7％(5/22)、68.2％(15/22)、9.1％ (2/22),T3～T4期15.4％(4/26)、46.1％(12/26)、38.5％(10/26),差异无统计学意义(P =0.064);术前PSA分组:PSA≤10 ng/ml组12.5％ (1/8)、87.5％(7/8)、0.0％ (0/8),10 ～ 20 ng/ml组28.6％(4/14)、57.1％(8/14)、14.3％(2/14),≥20 ng/ml组15.4％(4/26)、46.2％(12/26)、38.4％(10/26),差异无统计学意义(P=0.115);2年生化复发组:复发组25.0％(1/4)、50.0％ (2/4)、25.0％(1/4),无复发组28.6％(2/7)、57.1％(4/7)、14.3％(1/7),差异无统计学意义(P =0.906).结论 Foxa2与前列腺癌发生、进展呈正相关.
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携带超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A基因低免疫原性病毒的构建
目的 构建具备表达超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因的低免疫原性慢病毒载体,以期发挥高效激活T细胞抗肿瘤作用.方法 应用聚合酶链反应(PCR)获取大小分别为851 bp的人端粒酶反转录酶(hTERT)-CMV启动子序列及774 bp的SEA目的基因,将目的基因构建到慢病毒载体质粒中,基因测序正确后,转入感受态细胞DH5α中扩增、收集.利用穿梭质粒和包装质粒共转染293FT细胞中包装病毒,超速离心浓缩法收集病毒上清液,荧光滴度法检测病毒滴度.感染复数(MOI)=10病毒上清转染膀胱肿瘤细胞BIU-87细胞株,收集PCR产物测序目的基因,Western blot法检测SEA基因表达.结果 载体质粒大小为10 458 bp,基因测序正确,无明显碱基突变.荧光滴度法检测病毒滴度为(4.30 ±2.00)×109 TU/ml.PCR产物测序目的基因证实目的基因正确,分光光度计检测24、48、96 h总RNA产物分别为742、803、726 mg/L.Western blot结果显示SEA基因成功表达.结论 成功构建携带超抗原SEA基因低免疫原性病毒.
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FK1706对内脏神经-体神经端侧吻合大鼠神经再生的作用
目的 通过神经形态学观察FK1706对内脏神经-体神经端侧吻合大鼠内脏神经再生作用.方法 30只成年雄性SD大鼠随机分为3组:FK1706组、端侧吻合组和对照组(n=l0).FK1706组:将大鼠左侧腰6前根(L6VR)与腰4前根(L4VR)进行端侧吻合,术后皮下注射FK1706(0.3 mg/kg),连续8周,每周5d;端侧吻合组:单纯将内脏神经(L6VR)与体神经(L4VR)进行端侧吻合,术后未给予FK1706;对照组:离断左侧腰6后根(L6DR)、骶1前根(S1VR)和骶1后根(S1DR),保持L6VR的完整.术后4个月,取FK1706组和端侧吻合组吻合口远端L6VR延续而成的节前盆副交感神经(PPN),制备半薄切片和超薄切片,计数有髓轴突数量,观察髓鞘形态及厚度并进行比较.结果 术后4个月,FK1706组与端侧吻合组吻合口远端L6VR生长良好,两组大鼠吻合口远端再生PPN有髓轴突数量分别为515.6±43.3和328.4±46.4,两者比较差异有统计学意义(P =0.000).FK1706组和端侧吻合组大鼠再生PPN的髓鞘厚度分别为(0.6724±0.1101) μm和(0.466 8±0.076 3)μm,两者比较差异有统计学意义(P =0.000).结论 FK1706能够提高内脏神经-体神经端侧吻合后内脏神经再生效果,促进外周神经损伤的修复.
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草酸诱导HK-2细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎症小体的激活在草酸钙肾结石形成中的作用及机制
目的 探讨高浓度草酸作用于人肾小管上皮细胞HK-2后核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎症小体在草酸钙肾结石形成过程中的激活作用机制.方法 通过测定细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)的含量、4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法分析草酸对HK-2细胞的毒性及损伤;使用相差显微镜观察高浓度草酸作用于HK-2细胞后细胞表面晶体黏附;通过Westernblot法和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分别检测高浓度草酸作用于HK-2细胞后NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)及白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白和mRNA表达量的影响,同时检测高浓度草酸作用于HK-2细胞后对透明质酸合酶1(HAS1)、透明质酸合酶2(HAS2)、透明质酸合酶3(HAS3)、骨桥蛋白(OPN)以及CD44mRNA表达的影响,并采用二氯荧光黄二乙酸酯(DCFH-DA)检测活性氧自由基(ROS);Western blot和FQ-PCR法分别检测使用ROS抑制剂N-乙酰基半胱氨酸(NAG)预处理HK-2细胞后高浓度草酸作用于细胞后NLRP3的蛋白及mRNA的表达水平变化;使用RNA干扰技术,将NLRP3-小干扰RNA(siRNA)和阴性对照(NC)转染HK-2细胞后,相差显微镜观察晶体黏附变化,FQ-PCR法分别检测HAS1、HAS2、HAS3、OPN以及CD44 mRNA表达水平变化.结果 使用不同浓度的草酸处理HK-2细胞24h,测定LDH含量结果显示当草酸浓度为0.8 mmol/L时,细胞培养基中LDH开始比草酸浓度为0.6 mmol/L时显著增加[(528.37±25.65)比(300.55±17.18) mmol/L,P=0.001],DAPI染色法显示不同浓度草酸侧细胞数量分别为:55.67±3.30、52.33 ±6.13、52.33±2.05、58.00±9.09、50.00±1.63、47.33±2.05、33.67±3.30、20.33±2.05,当草酸浓度为1.0 mmol/L时,细胞数量开始比草酸浓度为0.8mmol/L时明显减少(33.67±4.04比47.33±2.52,P=0.008);相差显微镜观察高浓度草酸+一水草酸钙(COM)作用于HK-2细胞后晶体黏附数量明显多于对照组[(7.34±0.82)％比(5.29±0.73)％,P=0.001];高浓度草酸作用于HK-2细胞后24 h,通过Western blot和FQ-PCR发现,NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白水平(1.82±0.04比1.00±0.02,P=0.000;1.62±0.23比1.00±0.06,P=0.021;1.37±0.16比1.00±0.18,P=0.029)和mRNA表达(1.29±0.24比0.84 ±0.11,P=0.011;2.16 ±0.29比1.04±0.14,P =0.009;1.80±0.02比1.00±0.15,P=0.002)均分别高于对照组,且HAS1、HAS2、HAS3、OPN以及CI44 mRNA(1.35 ±0.25比0.81 ±0.11,P =0.049;2.46 ±0.29比0.84 ±0.14,P =0.002;0.90±0.02比0.60±0.15,P=0.039;1.68±0.27比1.00±0.22,P=0.049;2.03±0.47比1.00±0.15,P =0.040)表达水平亦均高于对照组;采用DCFH-DA检测ROS,发现草酸可引起细胞内发生氧化应激产生ROS(736.67±80.21比208.67±35.73,P=0.001),并且ROS抑制剂NAC作用后NLRP3的蛋白表达水平明显降低(1.53±0.31比4.50±0.40,P=0.001),而空白组与NAC组分别为0.90±0.10比1.00 ±0.26(P =0.288);与NC组比较,NLRP3-siRNA组细胞表面晶体黏附数量显著减少[(1.87±0.21)％比(3.57±0.12)％,P=0.003],且细胞内HAS1、HAS2、HAS3、OPN以及CD44mRNA(1.06±0.07比2.44 ±0.47,P=0.015;0.87±0.07比1.48 ±0.22,P=0.021;1.24±0.16比1.72±0.10,P=0.026;1.03 ±0.15比1.45±0.09,P=0.026;0.63 ±0.07比1.31±0.12,P=0.002)表达水平也明显下降.结论 高浓度草酸通过HK-2细胞内ROS的产生激活NLRP3炎症小体,进而通过改变细胞表面黏附性来促进草酸钙肾结石的形成.
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脂氧素A4在大鼠肾缺血再灌注损伤中的内源性保护作用及其机制
目的 探讨脂氧素A4(LXA4)在大鼠肾缺血再灌注(I/R)诱发肾损伤中的内源性保护作用及机制.方法 清洁级成年雄性SD大鼠24只,按照随机数字表法分为4组(n=6):假手术组(Sham组)、肾缺血再灌注组(I/R组)、LXA4预处理组(LXA4组)和脂氧素A4受体(ALXR)抑制剂Boc-2预处理组(Boc-2组).采用切除右肾后短暂夹闭左肾肾动脉的方法建立肾I/R损伤模型.Sham组仅切除右肾;I/R组切除右肾后,短暂夹闭左肾肾动脉再灌注;LXA4组分别在肾I/R前12、24、36 h经尾静脉注射LXA4(200μg/kg);Boc-2组分别在肾I/R前12、24、36 h经尾静脉注射Boc-2(100 mg/kg),6h后再经尾静脉注射LXA4(200 μg/kg).在I/R后24h时检测静脉血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)、肾皮质超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平;Western blot检测凋亡相关因子活化半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)以及线粒体损伤相关蛋白线粒体融合蛋白2(Mfn)、电压依赖性阴离子通道1(VDACl)和细胞色素C(cytochrome C)的表达变化.结果 与Sham组比较,I/R组Scr[(57.67±5.43) μmol/L]、BUN[(18.16±2.61)mmol/L]、SOD[(6.06±1.13) U/mgprot]升高(P=0.000),MDA[(50.51±5.91) nmol/mgprot]降低(P =0.000);cleaved Caspase-3(1.80 ±0.19)和cytochrome C(1.55±0.28)表达上调(P =0.000),bcl-2 (0.70±0.07)、Mfn2 (0.82±0.17)和VDAC1 (0.81±0.09)表达下调(P =0.000).与I/R组比较,LXA4组Scr[(39.01±4.81)μmol/L,P=0.000]、BUN[(10.47±2.79) mmol/L,P=0.000]和SOD[(3.65±0.83) U/mgprot,P=0.003]降低,MDA[(70.60±8.46) nmol/mgprot]升高(P=0.000);cleaved Caspase-3(1.08±0.12,P=0.000)和cytochrome C(1.01 ±0.21,P =0.002)表达下调,bcl-2(1.21±0.12,P=0.000)、Mfn2(1.15 ±0.17,P=0.02)和VDAC1(1.09 ±0.13,P=0.001)表达上调.与LXA4组比较,Boc-2组Scr[(48.12±2.72) μmol/L,P=0.003]、BUN[(15.10±2.30) mmol/L,P =0.004]和SOD[(5.30±0.97) U/mgprot,P=0.004]升高,MDA[(54.44±7.22) nmol/mgprot,P=0.04]降低;cleaved Caspase-3(1.64±0.21,P=0.000)和cytochrome C(1.43±0.26,P=0.014)表达上调,bcl-2(0.80±0.07,P=0.000)、Mfn2(0.74±0.11,P =0.003)和VDAC1 (0.79 ±0.09,P=0.001)表达下调.结论 LXA4与大鼠肾缺血再灌注诱发肾损伤时内源性保护机制相关,通过ALXR抑制肾小管细胞凋亡、缓解线粒体损伤而降低大鼠肾缺血再灌注诱导的急性肾损伤.
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促红细胞生成素对输尿管梗阻解除后大鼠肾功能的保护作用及机制
目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对解除输尿管梗阻后(BUO-R)肾脏功能保护作用及其机制.方法 大鼠随机分为BUO、BUO-R、BUO-R+ EPO组和假手术(Sham)组(各组n=8).实验组大鼠行双侧输尿管结扎,BUO组梗阻24 h后处死;BUO-R组和BUO-R+ EPO组梗阻24 h后解除梗阻,BUO-R+ EPO组分别于解除梗阻后1、12、24、36、48 h腹腔注射EPO,BUO-R组在相同时间点腹腔注射生理盐水,72 h后处死.检测大鼠尿液渗透压和肾功能.免疫组织化学和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测肾组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-6表达及mRNA水平.结果 Sham组尿液渗透压高[(1 835±98) mosm/kg],BUO-R组低[(715±76) mosm/kg],3组比较差异有统计学意义(P=0.000).BUO组血尿素氮和肌酐浓度[(58.40±4.63) mmol/L和(277.30±11.26) μmol/L]均高于其他3组,差异有统计学意义(P =0.000).免疫组织化学显示BUO组TNF-α和IL-6阳性染色强,BUO-R组强于BUO-R+ EPO组,Sham组表达弱.Real-time PCR检测,BUO组TNF-α表达多,BUO-R组次之,Sham组表达少;IL-6在BUO组表达多,BUO-R组多于BUO-R +EPO组,Sham组少.结论 EPO可通过抑制炎性反应促进输尿管梗阻解除后大鼠肾脏功能的恢复.
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Regucalcin在大鼠肾草酸钙结石形成过程中的表达
目的 观察Regucalcin(RGN)在草酸钙结石大鼠肾脏和肾小管上皮细胞中的表达特点,探讨其在草酸钙结石形成过程中的作用及机制.方法 采用1％乙二醇+1％氯化铵自由饮用的传统方法构建大鼠肾草酸钙结石模型,通过偏光显微镜观察大鼠肾组织的晶体,并使用Western blot、实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)、免疫组织化学(IHC)法检测RGN在草酸钙结石模型大鼠中的表达变化.使用不同浓度的一水草酸钙晶体(COM)刺激大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,通过Western blot和FQ-PCR方法检测RGN的表达.结果 偏光显微镜观察显示:造模组全部大鼠肾组织切片肾小管内均有草酸钙晶体沉积,而对照组大鼠肾脏未发现晶体.Western blot法检测大鼠肾皮质RGN的表达发现,造模组大鼠肾组织RGN表达明显低于正常对照组,其mRNA的相对表达量为6％(t=21.459,P=0.000);IHC法也同样显示造模组大鼠肾皮质RGN的表达降低,而且以晶体黏附处的肾小管上皮细胞降低尤为明显.使用COM处理大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E后,检测RGN的表达发现,在不同浓度(0、25、50、100 μg/cm2)COM晶体处理后,RGN的表达均明显降低.COM 100 μg/cm2组mRNA的相对表达量为47.4％(t=4.285,P=0.013).结论 RGN有可能参与了大鼠肾草酸钙结石的形成和进展的调控.
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表没食子儿茶素没食子酸酯抑制肾草酸钙结晶形成的研究
目的 比较不同剂量的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)干扰的草酸钙结石模型大鼠肾组织中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)含量及草酸钙结晶沉积量的差异.方法 50只SD大鼠随机平均分为5组,分别为空白对照组,肾草酸钙结石模型组和不同剂量EGCG干预组.其中对照组自由饮用纯净水;肾草酸钙结石模型组进行采用1％乙二醇及2％氯化铵进行配制成的造石液每天给予2ml灌胃;EGCG干预组在模型组处理基础上,每天给予不同剂量[10、30、50 mg/kg]的0.1％ EGCG溶液灌胃.28 d后处死大鼠,右肾制备成匀浆,应用硫代巴比妥酸(TBA)法测定MDA含量;用黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性,紫外分光光度法测定CAT活性;5,-二硫代双(2-硝基苯甲酸)[DTNB]比色法测定GSH-Px活性;左肾进行常规病理制片苏木素-伊红(HE)染色,偏光显微镜观察结晶沉积.结果 空白对照组的MDA浓度(2.74±0.47) μmol/L,SOD浓度(541.71±10.61) Nu/g,CAT浓度(44.49 ±3.45) U/g及GSH-Px浓度(41.61 ±2.50)×103 U/g蛋白.与空白对照组比较,肾草酸钙结石模型组中的MDA浓度(5.36 ±0.54) μmol/L显著升高,而SOD浓度(332.44 ±12.01) Nu/g、CAT浓度(32.15 ±1.99) U/g及GSH-Px浓度(21.36±1.58)×103 U/g蛋白显著降低(P=0.009);低剂量EGCG干预组,SOD、CAT及GSH-Px水平,分别为(517.41±28.37) Nu/g、(34.42±2.55) U/g及(23.94±2.95)×103 U/g蛋白;中剂量EGCG干预组,SOD、CAT及GSH-Px水平,分别为(545.04±23.84) Nu/g、(35.42±2.61) U/g及(25.10 ±2.64)×103 U/g蛋白;高剂量EGCG干预组,SOD、CAT及GSH-Px水平,分别为(550.58±16.55) Nu/g、(35.40 ±2.39) U/g及(26.67 ±1.93) ×103 U/g蛋白;与肾草酸钙结石模型组比较,不同剂量EGCG干扰后的SOD、GSH-Px及CAT水平增加(P =0.005);肾组织结晶与EGCG干扰剂量之间呈负相关(r=-0.483,P=0.008).结论 不同剂量干扰的EGCG中的肾草酸钙结石模型大鼠中的MDA、SOD及SH-Px含量之间有差异,EGCG可通过降低过氧化损伤抑制草酸钙肾结晶的形成.
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二十二碳六烯酸诱导前列腺癌细胞凋亡的信号通路研究
目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)改变凋亡信号通路,引起前列腺癌细胞凋亡的机制.方法 利用RT2 Profiler Array-Apoptosis方法,寻找DHA诱导前列腺癌细胞凋亡的作用靶点,可见10个上调和5个下调基因,然后利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法,验证和筛选结果.结果 与对照组比较,DHA处理24h后,DU145细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-1、Caspase-3和Caspase-9转录水平,分别上调了2.06、4.88和12.10倍;促细胞凋亡的B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)基因上调了2.93倍,并且bax与B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)比值增加;细胞死亡诱导相关基因CIDEA和DFFA,分别上调了2.34和3.21倍;肿瘤坏死因子相关基因LTA和肿瘤坏死因子(TNF),分别上调了2.04和2.24倍;基因警察TP53的mRNA表达上调了2.97倍.另外,DU145细胞线粒体相关凋亡诱导基因(AIFM1)、蛋白激酶(Akt1)、BH3位点死亡诱导基因BID和BIRC6、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)转录水平的表达,均发生下调.不同浓度DHA刺激24 h后,在前列腺癌DU145细胞Caspase家族中,Caspase-1、Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12表达均明显增加,其中Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12的表达,与DHA刺激浓度有剂量依赖性关系;前列腺癌DU145细胞bax、CIDEA、DFFA、TNF和肿瘤蛋白P53(TP53)基因表达均明显增加;其中bax、CIDEA和TNF的表达与DHA刺激浓度有剂量依赖性关系;前列腺癌DU145细胞AIFM1、Akt1、BID、BIRC6和XIAP基因表达均明显下降;其中AIFM1、BID和XIAP的表达与DHA刺激浓度有剂量依赖性关系.结论 DHA通过改变Caspase家族等凋亡信号通路相关基因的表达,诱导前列腺癌细胞发生凋亡.
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膀胱癌组织微环境中CD163+/CD206+单核巨噬细胞的特性及临床意义
目的 探讨膀胱癌组织微环境中CD163 +/CD206+单核巨噬细胞的表达特性.方法 收集膀胱癌组织标本8例及癌旁组织标本3例,利用荧光显微镜观察肿瘤组织中CD163+细胞表达;通过流式细胞检测技术观察膀胱癌组织和癌旁组织中浸润的CD45+ CD14+ CD163+细胞亚群表达,并分析与免疫和血管生成相关的分子表达;利用小鼠膀胱癌细胞株MB49皮下接种C57/BL6小鼠,构建荷瘤小鼠模型15只,以流式细胞技术检测不同时期荷瘤小鼠CD11b+F4/80+ CD206+单核巨噬细胞表达的动态变化.结果 肿瘤癌灶浸润的CD45+ CD14+ CD163+单核巨噬细胞亚群比例较癌旁组织显著增高,两者比较差异有统计学意义(P=0.015);膀胱癌组织中,CD40在CD45+CD14+ CD163-单核巨噬细胞亚群上表达率[(19.10 ±2.51)％]则显著低于CD45+ CD14+ CD163+亚群[(33.91±2.80)％](P=0.000);同样,癌旁组织中,CD40在CD45+ CD14+ CD163-单核巨噬细胞亚群上表达率[(24.71±2.54)％],显著低于CD45+ CD14+ CD163+亚群表达率[(67.90±5.66)％](P=0.000);荷瘤小鼠实验发现,随着肿瘤生长CD11b+F4/80+ CD206+单核巨噬细胞比例逐渐上升,差异有统计学意义(P=0.015).结论 膀胱癌组织微环境中CD163 +/CD206+单核巨噬细胞异常增高,且该群细胞与肿瘤进展密切相关,CD40可能是该亚群发挥生物学功能的重要分子.
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微小RNA-200c对膀胱癌T24细胞增殖和细胞周期的影响
目的 观察微小RNA-200c(miR-200c)对膀胱癌细胞T24增殖和细胞周期的影响并探讨其机制.方法 运用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测膀胱癌5个细胞株中miR-200c的表达水平.借助细胞转染技术,将miR-200c模拟物(mimics)及无义对照序列转染处于对数生长期的膀胱癌T24细胞,分别构建miR-200c过表达(MU组)及阴性对照组(NC组),并通过Real-time PCR技术进行验证转染效率.用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测两组细胞转染24、48及72 h的细胞增殖率,流式细胞术观察细胞周期分布变化,Western blot法检测细胞周期相关蛋白表达水平的变化.结果 (1) miR-200c在膀胱癌细胞株EJ(13.204 ±0.946)、T24(18.259 ±0.776)、253J(8.333±0.543)、5637(6.594±0.326)、RT4(11.348 ±0.513)中表达量均显著高于正常尿路上皮细胞SV-Huc(1.053±0.078),差异有统计学意义(P=0.000).(2)MU组在转染miR-200c mimics 48、72 h后吸光度值(1.485±0.131、2.396±0.110)均显著高于NC组(1.158±0.182、1.893±0.216),差异有统计学意义(P =0.050、0.023).(3)与NC组比较,MU组细胞周期分布G1期比例下降[(54.65 ±0.60)％比(64.51±0.63)％,P=0.004],S期比例上升[(31.43±0.77)％比(27.99±0.53)％,P=0.034],G1/S比值下降(1.74±0.06比2.31±0.07,P=0.013).(4)转染miR-200c后细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)2(1.44±0.10比0.86±0.15,P=0.005)、CDK4(3.05 ±0.17比1.24±0.07,P=0.001)、E2F3(1.81±0.22比1.18±0.20,P=0.021)表达水平均升高.结论 miR-200c通过调控细胞周期相关蛋白促使膀胱癌T24细胞周期由G1向S期转变,从而促进膀胱癌细胞增殖.
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头孢曲松相关泌尿系结石大鼠模型的建立
目的 建立头孢曲松相关泌尿系结石大鼠模型,探讨应用不同剂量头孢曲松后大鼠泌尿系结石的成石状况.方法 8周龄雄性Wistar大鼠32只,随机分为A、B、C、D4组,每组8只.A组为对照组;B组给予100 mg/kg头孢曲松腹腔注射;C组给予150 mg/kg头孢曲松腹腔注射;D组给予200 mg/kg头孢曲松腹腔注射.给药时间为10 d.分别收集给药前1d和处死前1d大鼠的24 h尿液,行生化分析和草酸测定.处死各组大鼠后采集大鼠血标本行生化分析,切取大鼠肾脏,观察肾脏变化及肾盂内成石,肾组织行Von Kossa染色,观察肾实质内含钙结晶.比较各组大鼠肾脏重量、肾脏成石以及24 h尿和血生化指标的差异.结果 对照组大鼠肾脏未见结石形成,Von Kossa染色未见黑色含钙结晶颗粒.实验组大鼠肾脏均无肉眼可见结石形成.100 mg/kg头孢曲松实验组中,有4只大鼠(50.0％,4/8)可见Von Kossa染色阳性;150mg/kg头孢曲松实验组中有5只大鼠(62.5％,5/8)可见Von Kossa染色阳性;200 mg/kg头孢曲松实验组中有5只大鼠(62.5％,5/8)可见Von Kossa染色阳性.其中150 mg/kg及200 mg/kg头孢曲松组各有1只大鼠(12.5％,1/8)肾脏切片Von Kossa染色可见大量含钙结晶.150 mg/kg头孢曲松组24h尿钙排泄量较对照组明显增加,差异有统计学意义(P =0.047),经计算得出尿中钙/肌酐(uCa/Cr)比值,150 mg/kg头孢曲松组较对照组明显升高,差异有统计学意义(P=0.016).结论 头孢曲松可以导致大鼠肾脏形成含钙结晶,数量和剂量明显相关.头孢曲松可以使大鼠尿钙排泄增加,可能是导致其形成结石的机制之一.
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一种肝脏原位混合型肝细胞-胆管细胞癌小鼠模型的建立
目的 建立一种肝脏原位混合型肝细胞-胆管细胞癌小鼠模型.方法 提取E13.5d小鼠胚胎肝细胞,使用标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)分离出肝祖细胞,使用反转录病毒使之组成性表达c-Myc(T58A突变),进而采用脾注射的方法将1×l06基因操作后的肝祖细胞通过门脉系统递送到受体鼠肝脏汇管区(实验组,6只).脾注射相同数量的野生型小鼠肝祖细胞作为对照(对照组,6只).脾注射8周后处死所有12只小鼠,病理学检查肿瘤发生情况,厚4μm组织切片行免疫组织化学、免疫荧光检查鉴定肿瘤表型.结果 实验组成瘤率66.7％ (4/6),对照组成瘤率0％(0/6);组织学表现符合人类混合型肝细胞-胆管细胞癌特征.免疫组织化学及免疫荧光检查提示肿瘤组织肝细胞标志物白蛋白(ALB)和胆管细胞标志物细胞角蛋白19(K19)的共定位表达.结论 脾注射组成性表达c-Myc(T58A突变)肝祖细胞成功诱导肝脏原位混合型肝细胞-胆管细胞癌小鼠模型.
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非肌层浸润性膀胱癌进展风险评估模型的研究进展
非肌层浸润性膀胱癌具有较高的复发率和进展率,对患者的生活质量造成严重影响,如何早期精准评估患者出现复发、进展的风险,对选择合适的治疗方案,如保留膀胱治疗或早期根治性膀胱切除术,提高患者生存率就显得尤其重要.本文就非肌层浸润性膀胱癌进展风险评估的研究进展作一综述.
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| 2019 | 01 02 |
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| 1998 | 01 02 |
