中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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转化生长因子-β1在他克莫司肾毒性中的作用
目的 观察转化生长因子(TGF)-β1在他克莫司大鼠肾毒性中的作用.方法 将SD大鼠24只随机分成对照组、CsA组、FK506组和FK506+Dil组,用药4周后建立起各组大鼠模型.观察各组大鼠的肾功能,应用免疫组织化学技术检测各组大鼠TGF-β1的表达.结果 FK506组大鼠的血肌酐值为(34.17±4.54)μmol/L,肌酐清除率为(0.58±0.39)ml·min-1·100g-1,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).FK506组TGF-β1的阳性表达率均为100%(6/6),对照组TGF-β1的阳性表达率为16%(1/6),两者差异有统计学意义(P<0.05). 结论 TGF-β1可能介导了FK506引起的肾毒性.
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巨噬细胞移动抑制因子抗体抑制大肠癌生长与肝转移的研究
目的 观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)抗体对大肠癌生长与肝转移的抑制作用.方法 将CT26细胞接种到BALB/C小鼠项背部获得实体瘤,再对20只BALB/C小鼠行盲肠造疝原位接种瘤块术,术后随机将小鼠分为A、B两组,A组隔天腹腔注射MIF-抗体(400μg/只),B组隔天腹腔注射生理盐水,4周后处死小鼠,观测盲肠原位肿瘤和肝脏情况,并对肝组织进行连续病理切片以观察肝转移情况.ELISA方法检测小鼠血清MIF和MMP-9浓度.结果 MIF-抗体干预的小鼠盲肠原位肿瘤的重量较对照组低[(1.60±0.18)g比(2.11±0.25)g,P<0.01],两组间肝脏重量差异无统计学意义[(0.93±0.07)g比(0.96±0.07)g,P>0.05],但A组大肠癌肝转移率低于B组(1/10比7/10,P<0.05),且A组血清中MIF和MMP-9的浓度也低于B组[(21.15±1.59)ng /L比(35.65±1.34)ng/L,P<0.01;(0.19±0.01)μg/L比(0.28±0.04)μg/L,P<0.01].结论 MIF-抗体腹腔注射不仅抑制大肠癌原位肿瘤的生长,而且降低了大肠癌的肝转移率.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂蛋白去乙酰化酶抑制剂对原发性肝癌细胞增殖的影响
目的 观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂蛋白去乙酰化酶抑制剂(TSA)对原发性肝癌细胞增殖的影响.方法 噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度(30、150、1000μg/L)TSA对原发性肝癌细胞生长的影响.结果 TSA浓度为30μg/L时,实验组与对照组细胞的吸光度值差异无统计学意义(P>0.05),说明TSA(30μg/L)对细胞的增殖基本无影响;当TSA浓度达到1000μg/L时,实验组细胞大量崩解、坯死,对细胞产生了严重的毒性作用;当TSA浓度为150μg/L时,实验组细胞无崩解、坏死现象,其36h和48h细胞的吸光度值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HDAC抑制剂TSA对体外培养的原发性肝癌细胞的增殖生长具有抑制作用,并且这种抑制作用呈现一定剂量依赖性和时间依赖性.
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枳术汤加味对大鼠肠黏膜屏障功能的保护作用
目的 探讨中药枳术汤加味对大鼠肠黏膜屏障功能的保护作用及其机制.方法 将70只雄性大白鼠随机分为对照组(10只)、造模组(20只)术前连续7d饮水灌胃0.35ml/次,每天2次,治疗组(20只)术前连续7d中药灌胃0.35ml/次,每天2次,大剂量治疗组(20只)术前连续7d中药灌胃0.7ml/次,每天2次.大鼠按2.5ml/kg体重的剂量给予腹腔内注射5%水合氯醛进行麻醉.进腹后血管钳夹闭肠系膜上动脉,持续30min后恢复血供,使肠道发生缺血-再灌注损伤.分别在再灌注1、24h后进行以下检测:肠道细菌移位发生率;回肠黏膜病理变化;外周血浆D-乳酸浓度、二胺氧化酶浓度;回肠黏膜细胞凋亡指数.结果 缺血-再灌注1、24h后细菌移位阳性率、细菌培养阳性率和血浆D-乳酸和二胺氧化酶浓度,造模组高于对照组(P<0.05);治疗组低于造模组(P<0.05);大剂量治疗组和治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05). 回肠膜黏重量、绒毛高度及宽度,造模组小于对照组(P<0.05);治疗组大于造模组(P<0.05);大剂量治疗组和治疗组比较差异无统计学意义.肠黏膜上皮细胞凋亡指数,造模组高于对照组(P<0.05);治疗组低于造模组(P<0.05);大剂量治疗组和治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05). 结论中药枳术汤加味能减少肠道细菌移位,降低肠黏膜的通透性,可以保护肠黏膜屏障功能.
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不同浓度丁酸钠体外诱导树突状细胞分化的细胞表型研究
目的 探讨不同浓度丁酸钠诱导对体外培养树突状细胞(DC)细胞表型的变化规律.方法 通过粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)体外诱导的人外周血单个核细胞来源的DC,按不同丁酸钠浓度和不同诱导时间分组培养,流式细胞仪检测各组DC的细胞表型.结果 在丁酸钠诱导下,各组DC表面的成熟标志均显著下调,丁酸钠浓度越高下调越明显,随着培养时间的延长,各组DC表面的成熟标志均显著下调;但是细胞的凋亡率也同时上升.结论 丁酸钠在体外可以显著抑制DC的成熟过程,以丁酸钠浓度为0.75mmol/L和培养48h为佳的诱导浓度和时间.
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水通道蛋白3在人正常椎间盘中的表达
目的 观察水通道蛋白-3(aquaporin-3)在人正常椎间盘中的表达及分布.方法 收集10例青年人因腰椎骨折行椎间融合手术摘除的正常椎间盘样本,运用免疫组织化学、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、 Western blot检测AQP3在椎间盘中的表达及分布.结果 免疫组织化学显示AQP3表达于椎体软骨终板类软骨细胞,髓核和纤维环未见表达;RT-PCR显示AQP3 mRNA在椎体软骨终板及髓核组织有表达;Western blot检测显示椎间盘组织在29×103左右有一特异性条带.结论 AQP3在人正常椎间盘中的表达及分布提示其可能参与椎间盘内液体平衡,对维持椎间盘组织的正常生理功能、在椎间盘退变的发病机制中可能有重要作用.
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肺癌相关基因LSCC-3对肺癌细胞形态特征和生物学活性的作用
目的 观察肺癌相关基因LSCC-3的表达对肺腺癌细胞PAa形态学特征及生物学活性的作用.方法 构建含有LSCC-3基因全长开放阅读框架(ORF)片段之真核表达载体并转染肺癌PAa细胞;显微镜及倒置荧光显微镜下观察LSCC-3基因的表达及其对于肺癌PAa细胞的形态学特征的影响;采用四甲基氮唑盐(MTT)比色法研究LSCC-3基因的转染对于肺癌PAa细胞生物学活性的作用.结果 以pLPS-LSCC-3-3'EGFP真核表达载体成功转染肺癌PAa细胞,显微镜下观察显示细胞质内有大量LSCC-3基因表达的肺癌PAa细胞出现了细胞脱水、核膜皱缩,核小体形成乃至细胞结构破坏等典型的细胞凋亡、破坏迹象.转染LSCC-3基因后第1～5d肺癌PAa细胞的增殖活性(以A490值表示)较对照组细胞受到明显抑制,始终维持在较低水平(0.1157、0.1257、0.1297、0.134、0.145 Vs.0.1165、0.1300、0.1677、0.1935、0.2058);而细胞凋亡率则明显增加,尤其是转染后前3d,实验组细胞的凋亡率几乎呈线性增长,与对照组细胞间差异有统计学意义(0、12.1%、33.2%、37.8%、38.7% Vs 0、9.1%、13.7%、10.3%、13.1%;P<0.01). 结论 LSCC-3基因的表达在体外可以明显地促进肺癌细胞的凋亡,从而抑制肺癌细胞的增殖,其或许可被应用于肺癌的基因或生物治疗.
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脑膜瘤复发与微血管密度、血管内皮生长因子表达的关系
目的 探讨脑膜瘤复发与微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达与其复发的相关性.方法 采用免疫组织化学MaxVisionTM法,分别检测复发组脑膜瘤33例和非复发组脑膜瘤26例的MVD和VEGF的表达,分析肿瘤复发与两者的关系.结果 非复发组与复发组脑膜瘤的MVD平均值分别为34.2923±17.2422、71.410±39.475,复发组明显高于非复发组(P<0.05);其中复发组脑膜瘤I级与Ⅱ、Ⅲ级的MVD平均值分别为54.7304±25.3080、109.780±39.642,Ⅱ、Ⅲ级的MVD平均值明显高于I级者(P<0.05).VEGF蛋白表达在复发组脑膜瘤I级的阳性率39.13%(9/23)高于非复发组的阳性率11.54%(3/26)(P<0.05).38例VEGF蛋白表达阴性的脑膜瘤中MVD平均值为37.9263±15.2300,21例VEGF蛋白表达阳性的脑膜瘤中MVD平均值为86.0286±28.7464,VEGF蛋白的表达与MVD平均值呈正相关(r=0.7888,P<0.05). 结论 VEGF和MVD联合检测可作为反映脑膜瘤临床病理特征的指标之一,两者高水平的表达提示复发的可能性较大.
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兔肌源性干细胞分离培养及诱导分化为神经细胞的研究
目的 探讨兔肌源性干细胞(MDSC)分离纯化及诱导分化为神经细胞的方法.方法 取2～3周龄新西兰兔大腿肌肉,采用改进的Preplating技术分离MDSC,并应用流式细胞仪(FCM)、免疫细胞化学检测细胞表型.添加神经生长因子、全反式维甲酸、β-巯基乙醇诱导MDSC分化为神经细胞并运用免疫细胞化学和FCM检测特异性神经巢蛋白(Nestin)的表达.结果 经过连续6d的差速贴壁分离得到小圆形及小菱形细胞,传代后进一步纯化,FCM结果显示这些细胞>90%为desmin+,>90%为bcl-2+,>95%为CD45-.免疫细胞化学显示大多数细胞为desmin+及bcl-2+.诱导后的细胞>90%为Nestin+.结论 采用改进的Preplating技术能很好地分离出MDSC,并能在体外诱导分化为神经细胞,为构建组织工程化尿道海绵体提供种子细胞.
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茉莉素对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH的抑制增殖及诱导凋亡作用
目的 观察茉莉素对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH的抑制增殖及诱导凋亡作用,并比较茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸作用强度差异.方法 1～10mmol/L茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸分别处理SK-N-SH细胞后,MTT法检测细胞生长活性;克隆形成实验检测细胞增殖能力;PI单染法流式细胞术检测细胞周期;AO/EB荧光染色法、Hoechst 33258荧光染色法、AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡.结果 各浓度茉莉素作用后,SK-N-SH细胞呈时间、浓度依赖性生长抑制,其中茉莉酸甲酯作用强,1～10mmol/L茉莉酸甲酯作用24 h后,细胞生长抑制率为(22.74～88.67)%,IC50为1.44mmol/L;2.5mmol/L茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸作用后,细胞克隆形成能力分别降低87.00%、78.66%、39.00%,细胞周期示S期细胞比率显著增高,G0/G1期细胞比率下降,部分细胞发生典型的凋亡形态学改变;1.5～2.5mmol/L茉莉酸甲酯作用后,细胞凋亡率为(23.77～36.43)%.结论 茉莉素能通过减弱瘤细胞增殖、诱导细胞周期阻滞和凋亡等机制抑制人神经母细胞瘤细胞株的生长活性.
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不同年龄及退变腰椎间盘中蛋白多糖酶活性测定
目的 测定不同年龄以及退变腰椎间盘中的蛋白多糖酶活性,探讨蛋白多糖酶与年龄、退变之间的关系.方法 对20个腰椎间盘的蛋白多糖酶活性进行测定,其中8个腰椎间盘来自胎儿,6个是退变的成人腰椎间盘,6个是正常的成人腰椎间盘.用含有10mmol/L CaCl2的0.05mol/L Tris/HC对腰椎间盘中的蛋白多糖酶进行提取,用1mmol/L APMA将其激活,与取自牛肩胛软骨的蛋白多糖单体底物进行反应,以酶标仪来测定蛋白多糖酶的活性.结果 胎儿腰椎间盘、退变成人腰椎间盘以及正常成人腰椎间盘的蛋白多糖酶活性的吸光度值分别是1.963±0.487、1.719±0.337、0.870±0.133.胎儿腰椎间盘与正常成人腰椎间盘的吸光度值差异有统计学意义(P<0.01),退变成人椎间盘的吸光度值也高于正常成人椎间盘(P<0.01). 结论腰椎间盘中的蛋白多糖酶活性与年龄、退变相关.
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局部血管紧张素Ⅱ水平与核因子-κB、p38丝裂素活化蛋白激酶信号传导通路活化在人门静脉高压症脾静脉血管病变中的作用
目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngII)与核因子(NF)-κB、p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路活化在人门静脉高压症(PHT)脾静脉血管病变中的作用及其机制.方法 PHT组为乙肝后肝硬化门静脉高压症患者26例;对照组选取因外伤性脾破裂行脾切除术患者10例.放免法(RIA)检测脾静脉中AngII水平;免疫组织化学法测定脾静脉中NF-κB、Phospho-p38蛋白的表达.蛋白免疫印迹法检测脾静脉及体外培养的脾静脉血管平滑肌细胞的NF-κB 、Phospho-p38蛋白的表达.结果 PHT组脾静脉组织AngII为(248.91±48.31)ng/L,显著高于对照组AngII为(143.35±36.45)ng/L(P<0.01).免疫组织化学和蛋白免疫印迹均显示PHT组脾静脉NF-κB 、Phospho-p38蛋白的表达较对照组明显增强.体外培养脾静脉血管平滑肌细胞(VSMC),AngII在1×10-8～1×10-6mol/L浓度范围内,AngII以浓度依赖性方式增加人脾静脉VSMC中NF-κB 、Phospho-p38蛋白的表达.结论 门静脉高压症时脾静脉组织AngII水平升高,NF-κB、Phospho-p38蛋白表达增加.AngII能激活脾静脉血管平滑肌细胞NF-κB、p38信号传导通路.门静脉高压症时AngII可能通过激活P38和NF-κB信号对传导通路门静脉高压症的形成和维持可能起重要作用.
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挤压综合征模型肾脏细胞凋亡的研究
目的 观察挤压综合征模型大鼠肾脏细胞的凋亡.方法 将雄性Wistar大鼠22只随机分为两组,正常组10只,实验组12只.实验组复制挤压综合征模型,解除压力后12h眼眶取血检测血清学指标,取肌肉、肾脏行苏木素-伊红(HE)染色,肾脏同时行TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling)染色.观察致伤后肌肉和肾脏病理变化及肾脏细胞凋亡情况.结果 实验组大鼠血清尿素氮、肌红蛋白、钾离子、肌酐、肌酸激酶较正常组明显升高(P<0.01),血清钙离子显著下降(P<0.01).实验组大鼠肾脏组织每400倍视野中凋亡细胞数明显高于正常组(22.07±2.64比0.08±0.28,P<0.01). 结论挤压综合征中大鼠肾小管上皮细胞出现明显凋亡.
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改良法制备5-氟尿嘧啶磁性纳米脂质体
目的 探讨5-氟尿嘧啶磁性纳米脂质体(MNLF)的佳制备方法,并观察其理化性能.方法 采用正交设计对筛选出的制备工艺进行优化,以磁性脂质体的包封率和粒径分布为指标综合评价,以药物与磷脂的比例、表面活性剂的浓度及油水相的比例、冻融温度等为考察指标,分析了不同制备方法对脂质体性质的影响.后选用逆向蒸发法结合冻融法制备MNLF,佳方案为A3B3C2D2及蛋黄卵磷脂(PC):去氧胆酸钠(SD)为10∶ 1,冷冻温度为-10℃,以包封率、外观、粒径变化、渗漏率、胶体ζ电位和pH值等为评价指标,对MNLF的物理化学稳定性进行研究.结果 制备的MNLF的平均粒径为450nm,平均包封率为69.5%,ζ电位为-39.0mV,pH值为6.91,有较好的稳定性,磁响应性好.结论 以改良的逆相蒸发法+冻融法制备的MNLF粒径小、包封率高、磁响应性好.
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脓毒症和脓毒性休克大鼠的肺肾肠内皮素-1和内皮素A受体基因表达变化及其意义
目的 观察大鼠脓毒症和脓毒性休克时内皮素-1(ET-1)和内皮素A受体(ETAR)基因在肺、肾和小肠黏膜中的表达变化以及各脏器功能受损情况.方法 24只雄性大鼠随机分为正常组、对照组、脓毒症组和脓毒性休克组;通过脓毒症和脓毒性休克大鼠模型,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)以葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)基因为内参照基因,分别检测脓毒症和脓毒性休克组肾、肺和小肠黏膜组织ET-1和ETAR基因表达情况,同时检测其血清丙氨酸转氨酶(ALT)、白蛋白(A)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和动脉血气变化.结果 脓毒症组肾肺肠组织ET-1 mRNA表达相对量分别为87%、74%、82%,ETAR mRNA为82%、65%、78%;脓毒性休克组肾肺肠组织ET-1 mRNA表达相对量分别为98%、85%、93%,ETAR mRNA为95%、80%、91%,较正常组和对照组均明显增加(P<0.01).脓毒性休克组大鼠血清ALT为288.50±194.10、BUN 58.00±5.20,Cr1 33.67±18.70,较正常组、对照组和脓毒症组均显著上升,差异有统计学意义(P<0.01);脓毒症组血清ALT为97.17±6.30、BUN 30.17±2.30、Cr 75.83±6.70,较正常组明显升高(P<0.01).脓毒症组和脓毒性休克组早期动脉血气分析为低氧和呼吸性碱中毒,脓毒性休克组后期出现明显的低氧血症和CO2潴留.结论 ET-1和ETAR参与了脓毒症和脓毒性休克的病理生理过程,且可能是参与脓毒症和脓毒性休克并发多脏器功能障碍综合征(MODS)启动的因子之一.
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RANTES-受体轴在消化道肿瘤及淋巴结中的表达与肿瘤转移的关系
目的 检测RANTES及其受体在消化道肿瘤中的表达并探讨其与消化道肿瘤转移的关系.方法 免疫组织化学方法检测35例有淋巴结转移的消化道肿瘤中RANTES及其受体CCR3、CCR5的表达以及RANTES在转移的淋巴结中的表达水平,显微镜下观察阳性率并且用图像分析系统测得吸光度进行分析.琼脂糖平板法检测RANTES对于消化道肿瘤细胞的趋化作用.结果 淋巴结转移的消化道肿瘤中RANTES及其受体CCR3、CCR5以及转移的淋巴结中RANTES的阳性表达率分别为80.0%、77.1%、68.6%、74.3%,吸光度值分别为0.1839±0.0442、0.1999±0.0444、0.1825±0.0598、0.1871±0.0371;而对照的无转移组阳性率分别为6.7%、20.0%、13.3%、20.0%,吸光度值分别为0.0502±0.0043、0.0693±0.0243、0.0648±0.0145、0.0913±0.0111.有转移组和无转移组在阳性率和吸光度方面的差异均有统计学意义(P<0.05).琼脂糖平板法检测RANTES对原代肿瘤细胞以及胃癌细胞系AGS的趋化指数分别为1.97和1.79. 结论 RANTES及其受体在有淋巴结转移的消化道肿瘤中高表达以及RANTES在有转移的淋巴结中高表达可能与肿瘤的侵袭转移相关,其机制可能为淋巴结中高表达RANTES对肿瘤细胞的趋化定向迁移有关.
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壳聚糖纳米粒作为消化道给药基因治疗载体的研究
目的 观察壳聚糖纳米粒载体的体内外基因转染活性,寻找佳转染条件.方法 以编码GFP的质粒DNA作报告基因,3种不同壳聚糖[季铵化壳聚糖(TMO-60%),壳聚糖(43×103～45×103,87%),壳聚糖(230×103,90%)]分别与质粒DNA混合,用复凝聚法制备壳聚糖/DNA复合物.检测纳米粒形态和直径,壳聚糖对DNA包裹力,体外转染效率,纳米粒包裹质粒饲喂裸鼠后报告基因在消化道黏膜的表达率.结果 壳聚糖纳米粒能高效稳定包裹质粒DNA;TMO-60%与DNA的比例为3.2∶ 1.0时,体外转染效率高,达28.9%;TMO-60%/质粒DNA复合物灌胃后,全胃肠道均有GFP表达,尤其在胃和小肠上段强.结论 季铵化壳聚糖纳米粒在体内、体外均有较高的转染活性,是基因治疗的可取载体.
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基质金属蛋白酶及其抑制剂在风湿性心脏病二尖瓣病变组织中的表达
目的 探讨基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制剂(TIMPs)在风湿性心脏病(RHD)二尖瓣膜病理改变中的作用及其机制.方法 实验组为成人RHD患者二尖瓣16例,对照组为同期意外死亡的无心脏病变的成人二尖瓣7例.经HE染色及电镜观察两组形态学和超微结构变化,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学染色(SABC法)测定MMP-2、MMP-13、TIMP-1及TIMP-2在二尖瓣组织的mRNA含量和蛋白表达.结果 实验组为风湿性病理改变,对照组结构基本正常.实验组MMP-2、13及TIMP-1、2的mRNA表达分别为0.96±0.27、0.93±0.38、0.87±0.32、0.94±0.37,较对照组均明显增加(P<0.05);其MMP-2、13及TIMP-1、2蛋白表达亦明显高于对照组.结论 RHD患者二尖瓣膜中MMPs/TIMPs表达增强,可能参与二尖瓣细胞外基质(ECM)的重构,是其风湿性改变的重要分子机制之一.
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RGD肽对猪去细胞心脏瓣膜表面修饰的研究
目的 检测促黏附分子RGD肽(精-甘-天冬氨酸)表面修饰去细胞瓣天然支架可行性.方法 应用酶和去污剂法制备猪去细胞主动脉瓣,固相法合成含RGD短肽GRGDSPC.实验组采用化学交联剂Sulfo-LC-SPDP使GRGDSPC肽与之结合,去细胞瓣直接混合短肽和单纯去细胞瓣两组作对照.X射线光电子能谱法(XPS)支架材料表面分析.结果 XPS法显示,对照组未检出硫元素,实验组检出硫元素电子结合能中间峰位在163.1～165.7eV,提示二硫键形成,证明Sulfo-LC-SPDP使GRGDSPC肽成功固定于去细胞瓣表面.结论 通过化学交联法实现RGD肽对去细胞瓣表面修饰,有望促进组织工程心脏瓣膜构建.
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结肠腺癌与腺瘤的蛋白质组表达差异
目的 通过比较结肠腺癌与结肠腺瘤组织的蛋白质组表达差异,寻找结肠腺癌相关的蛋白质,筛选结肠癌早期诊断的分子标志物.方法 应用蛋白质组学技术,对8例结肠腺癌组织和8例结肠腺瘤组织进行胶内差异双向电泳(2-D),选择差异表达超过2倍的蛋白点进行MALDI-TOF/TOF质谱分析和生物学信息分析.结果 成功建立结肠腺癌和结肠腺瘤的双向凝胶电泳图谱,结肠腺癌和腺瘤组织凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为3289和2986,其中表达差异超过2倍的斑点共有31个,质谱分析和数据库检索共鉴定出18个蛋白质,包括keratin 8、S100A6、protein disulfide isomerase等.结论 蛋白质组学可提示结肠腺癌与腺瘤组织间的蛋白质表达差异,而对相关差异表达蛋白的研究有可能为结肠癌的早期诊断和治疗提供新的分子标记物.
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外源性三磷酸腺苷-氯化镁预处理对大鼠供肝热缺血损伤的保护作用
目的 观察三磷酸腺苷-氯化镁(ATP-MgCl2)预处理对无心跳大鼠供肝热缺血损伤的保护作用.方法 根据ATP-MgCl2预处理与否及供肝获取前经历的供体心脏停搏时间(即热缺血时间)30min或45min,将实验动物分为4组,即非预处理的30min(N-30min)组和45min(N-45min)组,以及ATP-MgCl2预处理的30min(tN-30min)组和45min(tN-45min)组行原位肝移植,观察存活状况,取材行光学显微镜及电子显微镜检查,移植术后1、3、7d 采集血样检测肝功能.结果 N-30min组和N-45min组的1周存活率分别为50.0%和16.7%,而tN-30min组和tN-45min组的1周存活率分别为83.3%和66.7%,预处理组移植肝脏的病理及肝功能明显好于非预处理组.结论 ATP-MgCl2预处理能够减轻供肝的热缺血损伤,改善肝功能,减轻病理损害,提高大鼠肝移植的存活率.
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七氟醚和异氟醚对肝硬化患者肝切除术后肝功能的影响
目的 比较七氟醚和异氟醚对肝硬化患者行肝切除术后肝功能变化的影响.方法 将40名年龄为40～70岁的肝硬化(Child-Pugh A级),择期行肝癌肝叶切除术的患者随机分为七氟醚组和异氟醚组.两组患者均以咪唑安定0.1mg/kg体重、舒芬太尼0.4μg/kg体重、哌库溴铵1mg/kg体重诱导,分别予七氟醚或异氟醚辅以舒芬太尼维持麻醉.分别于术前、术后1、3、7d抽取非输液侧上肢静脉血测谷草转氨酶、谷丙转氨酶、总胆红素、碱性磷酸酶、胆碱酯酶、白蛋白、凝血酶原时间和血小板计数.结果 两组患者血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶和碱性磷酸酶较术前明显升高,术后3d达峰,且其增高值在异氟醚组明显高于七氟醚组;术后无患者出现肝衰竭或肝损伤的临床表现.结论 在肝硬化患者的麻醉中,异氟醚对肝功能的影响可能强于七氟醚.
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S100A2、reprimo在胃腺癌中的表达及其临床意义
目的 检测胃腺癌组织中钙结合蛋白S100A2、reprimo的表达情况,探讨它们在胃腺癌发生发展过程中的作用以及相互作用.方法 应用免疫组织化学SP法,检测 100例胃腺癌组织和20例正常胃黏膜组织中S100A2和reprimo蛋白的表达,分析其与胃癌临床病理特征之间的关系.结果 在20例正常胃黏膜组织中S100A2、reprimo均呈阳性表达,在100例胃腺癌组织中,其阳性表达率分别为48%、35%,差异均有统计学意义(χ2值分别为18.35、28.36,P<0.01).S100A2和reprimo的表达与浸润深度、淋巴结转移密切相关(χ2值分别为4.54、10.53、15.71、16.22,P<0.05或P<0.01),S100A2的表达还与胃腺癌分化程度有关(χ2值为6.73,P<0.01).S100A2蛋白的表达与reprimo蛋白的表达呈显著正相关(χ2值为14.91,P<0.01). 结论胃腺癌组织S100A2、 reprimo蛋白表达下调可能与胃腺癌发生发展有关.低的S100A2、 reprimo阳性表达率常意味着肿瘤高的浸润转移能力.S100A2、 reprimo的表达可以作为胃腺癌预后的判断指标.
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直肠癌肛侧肠管分子边界的研究
目前,直肠癌的治疗仍然是以手术为主的综合治疗[1].近年来随保肛手术比例的增加,术后吻合口复发的比例也呈现出逐渐上升的趋势 [2].为考察手术切缘的安全性,我们利用直肠癌肛侧肠管不同距离组织和癌中心组织对细胞角蛋白-19 (CK-19),基质金属蛋白酶-11 (MMP-11)的表达以及苏木素-伊红染色 (HE染色)下癌组织壁内逆向浸润情况进行分析,观察分子水平的安全切缘与细胞病理学确定的安全切缘是否存在差异,并探讨直肠癌分子边界的存在.
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人胰腺癌细胞系MIA PaCa-Ⅱ神经侵袭原位移植瘤动物模型的建立
胰腺癌恶性度极高、预后极差,易远处脏器转移,其中腹腔内神经丛是其容易发生转移的部位,这是造成患者腹部疼痛和严重影响生活质量的重要原因.我们建立人胰腺癌裸鼠原位移植瘤模型,为研究神经侵袭的发生、发展提供实验依据和条件.
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大鼠急性胰腺炎肠壁肿瘤坏死因子-α mRNA表达与肠细菌易位的关系
我们通过复制大鼠重型急性胰腺炎(SAP)模型,观察肠壁肿瘤坏死因子(TNF)-αmRNA的表达与血TNF-α、血液、肠系膜淋巴结(MLN)和胰腺细菌培养及肠道病理改变的关系,以及大黄的影响.
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青蒿素联合全转铁蛋白诱导肝癌细胞凋亡的研究
近年来发现青蒿素及其衍生物具有明显的抗肿瘤活性[1].本研究旨在观察青蒿素联合全转铁蛋白对小鼠肝癌细胞株H22细胞凋亡的诱导作用.
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诱导型一氧化氮合成酶在OxyHb诱导的血管痉挛细胞模型中的表达
我们应用氧合血红蛋白(OxyHb)孵育平滑肌细胞,构建脑血管痉挛细胞模型,通过免疫细胞化学和比色法检测细胞诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)表达及上清液一氧化氮(NO)含量,探讨其在脑血管痉挛过程中的作用.
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间断性经皮穿刺技术治疗慢性硬膜下血肿126例分析
慢性硬膜下血肿(CSDH)是神经外科较常见病和多发病.我科自2004年1月至2007年12月采用间断性经皮穿刺技术治疗CSDH共126例,取得良好效果.
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高免疫原性胶质瘤细胞疫苗的体外抗瘤作用
热休蛋白70(HSP70)与主要组织相容性抗原复合体I类分子(MHC-I)是参与内源性抗原提呈的两类重要分子[1,2].本研究旨在观察模型HSP70及MHC-I类分子高表达人多形性胶质母细胞瘤GBM U251细胞疫苗体外诱导的抗瘤作用.
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膀胱移行细胞癌组织中MAGE-A基因及蛋白的表达
我们对45例人膀胱移行细胞癌组织中黑色素瘤抗原(MAGE)基因家族中的MAGE-A1、MAGE-A3及MAGE-A12基因的表达进行检测.
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血管内皮生长因子siRNA联合丝裂霉素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究
血管内皮生长因子(VEGF)是目前发现强效的促血管生长因子,也是目前肿瘤治疗的理想靶点[1,2].本研究旨在观察利用小干扰RNA技术下调VEGF表达与丝裂霉素(MMC)联合应用对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响.
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插管法建立大鼠体外循环模型
国内外己经建立了多种CPB动物模型[1,2],本研究采用插管法尝试建立大鼠的CPB动物模型.
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等离子体处理聚乳酸/羟基乙酸材料的细胞相容性
乳酸羟基乙酸共聚(PLGA)支架虽然早就应用于组织工程,用以修复肌腱、骨、外周神经等组织的缺损[1-3],但由于其亲水性差,细胞吸附力弱,在制作细胞-支架复合物时,往往效果不甚理想[4].我们用常压等离子体射流技术制备了PLGA支架,观察骨髓基质干细胞(BMSC)在支架上的培养情况.
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RNA结合蛋白Sam68mRNA在原发性肝癌中的表达及意义
本研究旨在通过半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察3RNA结合蛋白Sam68 mRNA在人原发性肝癌中的表达,探讨其意义.
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胶原酶分离罗非鱼胰岛的实验观察
临床同种胰岛移植的技术已经取得显著进步[1],但面临着供体紧缺的难题.为此人们更加关注异种胰岛移植的可能性,目前相关研究多在哺乳动物间进行,有关鱼类胰岛移植到哺乳动物的报道较少.罗非鱼具有来源广、耐高温[2]、耐低氧、胰岛制备方便而且生物安全度高的特点.本文报道罗非鱼胰岛的制备方法,为鱼类到哺乳类动物间的胰岛移植提供实验基础.
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大肠癌胃泌素、生长抑素的表达及比势与p16INK4a、p21CIP1、CDK2、CDK4的相关性研究
我们采用免疫组织化学SP 法检测70 例大肠癌组织中胃泌素(GAS)、生长抑素(SS)、p16INK4a、p21CIP1、CDK2及CDK4蛋白的表达情况,探讨GAS、SS与细胞周期调控因子p16INK4a、p21CIP1、CDK2、及CDK4的相关性,了解GAS、SS对大肠癌细胞增殖周期的具体调控位点[1].
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354例肺癌淋巴结转移特点分析
淋巴结转移是影响肺癌患者预后的因素之一[1].我们对我院1998年10月至2008年3月354例患者淋巴结转移情况进行分析,现报道如下.
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谷氨酰胺和生长激素对门静脉高压症术后营养状态和肠黏膜屏障的影响
目的 观察谷氨酰胺和生长激素联合肠外营养对肝硬化门静脉高压症手术患者术后营养状态和肠黏膜屏障的影响.方法 选择58例接受门静脉高压症手术的肝硬化患者,随机分为两组:实验组(添加谷氨酰胺和重组人生长激素,n=30)和标准营养组(对照组,n=28),两组术后第3天开始进行等氮等热量(每天125kJ/kg体重)营养支持,持续7d.术前、术后第3和第10天清晨分别抽取静脉血检测血清前白蛋白、转铁蛋白,并对手术前、后的尿乳果糖/甘露醇排泄率比值(L/M)、十二指肠黏膜绒毛高度、陷窝深度及肠黏膜增殖细胞核抗原(PCNA)指数进行对比.结果 实验组在术后第10天血清前白蛋白:(199.81±8.77)mg/L、转铁蛋白:(2.28±0.19)mg/L均显著高于对照组(P<0.05),L/M值升高小于对照组(P<0.05),肠黏膜绒毛高度(375.15±23.64)μm和陷窝深度(128.53±16.42)μm均大于对照组(P<0.05)及术前(P<0.05),肠黏膜上皮PCNA指数(24.27±4.25)大于对照组(P<0.05). 结论谷氨酰胺和生长激素联合肠外营养能够改善门静脉高压症手术后营养状态,降低小肠黏膜通透性,并维护肠黏膜形态学完整性,作用优于标准胃肠外营养.
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经皮椎体成形术治疗骨质疏松性椎体压缩骨折
目的 前瞻性评价经皮椎体成形术和正规非手术治疗应用于疼痛性新鲜骨质疏松性椎体压缩骨折的早期临床疗效.方法 将122例入选患者随机分为PVP治疗组(A组)和非手术治疗组(B组),采用视觉疼痛模拟评分(VAS)和活动能力评分评价疗效,记录原始评分及实验开始后1d、2周、1、6个月、1年时评分并比较分析.结果 完整随访80例,A组47例;B组33例.实验开始后各随访时间点评分,A组均明显优于B组(P<0.05).1d时A组疼痛缓解率91%(43/47),非手术组24%(8/33).结论 PVP术可以迅速缓解患者疼痛,提高患者活动能力.早期临床随访结果显示,其明显优于正规非手术治疗.
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脊髓损伤后促红细胞生成素防御保护性机制研究进展
随交通运输的高速化、体育运动的极限化及频发的暴力意外伤害,脊髓损伤(SCI)的发生呈现:高致残率、低死亡率、治疗耗费高等特点,并业已成为全球性医疗棘手问题.促红细胞生成素(EPO)是由肾脏分泌用以调节红细胞生成的糖蛋白激素之一,其与促红细胞生成素受体(EPOR)在中枢神经系统(CNS)中皆有表达[1].动物体内实验和神经元体外培养证实EPO是一种神经保护因子,可通过以下途径发挥神经组织保护作用[2],包括:抗细胞凋亡以促进神经元的生成与存活,诱导神经滋养血管生长,抑制自由基和一氧化氮过量生成,拮抗细胞兴奋性毒性作用,协同神经营养因子发挥作用,减弱脂质过氧化反应.目前国内对EPO在全身各器官系统中的作用机制研究较少,现对EPO应用于脊髓损伤实验和临床治疗的研究现状综述如下.
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神经干细胞增殖与分化影响因素的研究进展
中枢神经系统损伤(包括脑和脊髓的外伤、脑血管疾病如脑出血和脑缺血、神经系统变性疾病如运动神经元病以及退行性疾病如帕金森病等)的再生与修复是神经科学研究领域的热点和难点[1],中枢神经系统损伤不仅给患者造成重大的精神负担,还给社会和家庭带来巨大的经济负担.近年来,神经干细胞(NSC)的发现成为上述疾病的治疗带来了希望,国内外在NSC的分离、培养、鉴定以及移植等方面的实验研究都取得了明显进展.然而,让NSC终应用于临床,有效的调控其增殖和分化尤为重要.现对近几年来影响NSC增殖和分化的因素做一综述.
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Cuff 套管技术在同系大鼠肺移植中的应用
目的 建立同系大鼠原位肺移植模型,评价Cuff 套管技术应用效果.方法 采取两名手术者同时、分别行供受体手术的方法,行左侧同系原位大鼠肺移植22例,肺动脉、肺静脉、主支气管吻合均采用非缝合的Cuff套管技术,评价其可行性和可靠性.结果 移植手术成功率90.9%(20/22),移植物缺血时间、热缺血时间和总的手术时间分别为(42.5±2.3)min,(17.1±3.6)min和(68.7±5.1)min.同系大鼠移植术后3周以内(12/22)通气和血流灌注良好,手术后6个月(3/22)、9个月(3/22)、12个月后(2/22)移植肺显示通气不良但吻合口开放.结论 大鼠原位肺移植模型采用非缝合的Cuff套管技术行支气管和血管吻合简便、快速和可靠,支气管吻合后能够保持较长时间的管腔开放.
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小鼠异位心脏移植血液循环重建模型的建立
目的 建立新的一种简单、稳定的小鼠腹腔异位心脏移植模型.方法 将供体心脏肝上下腔静脉与受体下腔静脉端侧吻合,供体升主动脉与受体腹主动脉端侧吻合.用C57BL/6J (H-2b)作供体和受体做同基因心脏移植,用C57BL/6J (H-2b)作供体BALB/C (H-2d)受体做同种异体心脏移植.结果 新方法血管吻合时间(21.3±1.6)min比传统方法吻合时间(28.5±1.4)min明显缩短,心脏复跳时间从(2.3±0.9)min降低到(1.4±0.5)min.同基因和同种异体移植的两种方法比较,1周生存率差异无统计学意义(P>0.05).结论 小鼠心脏移植新模型明显缩短移植物温缺血时间,有利于移植物长期存活.
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腰椎横突间入路椎体间融合术的生物力学评价
目的 观察腰椎横突间入路椎体间融合术(ILIF)及附加椎弓根钉固定后的生物力学稳定性.方法 采用小牛脊柱运动节段标本12具,依序进行不同处理后分为以下7组:(1)正常对照组(IS);(2)左侧小关节切除+椎间融合器植入组(TLIF);(3)TLIF附加同侧椎弓根钉固定组;(4)TLIF附加双侧椎弓根钉固定组;(5)左侧横突间入路椎间融合器植入组(ILIF);(6)ILIF附加同侧椎弓根钉固定组;(7)ILIF附加双侧椎弓根钉固定组.分别测试各组在轴向压缩、前屈、后伸、左右侧屈时的载荷-应变、载荷-位移变化以及轴向刚度和双向扭转稳定性等生物力学指标,并进行统计学比较.结果 所有生物力学指标中ILIF组稳定性均大于TLIF组(P<0.05),在定量扭矩扭角方面差距大达72%.ILIF+BPSF的稳定性高,在前屈载荷应变方面较IS组差异大达53%,而ILIF+HPSF组与ILIF+BPSF组比较差异无统计学意义(P>0.05). 结论 ILIF手术生物力学稳定性优于TLIF手术;ILIF附加同侧椎弓根钉固定与附加双侧椎弓根钉固定生物力学稳定性相当,使用ILIF术式附加侧同椎弓根螺钉固定,可提供较好的即刻稳定性.
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假体周围骨溶解性骨缺损的转骨形态发生蛋白-2基因治疗
目的 模拟假体周围骨溶解环境,观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因治疗假体周围骨溶解性骨缺损的效果.方法 成年雄性Beagle犬6条,于股骨外髁造成假体周围3mm骨缺损区.1条动物的左侧缺损区植入1ml平均直径1μm的钛合金颗粒混悬液,右侧植入1ml磷酸盐缓冲液(PBS),观察造模结果;其他5条动物双侧植入1ml钛合金颗粒混悬液,于术后2个月取出假体,植入转BMP-2基因冻干骨或单纯冻干骨,二次术后3个月取材,行组织学、组织形态计量学观察植骨愈合替代及界面骨整合情况.结果 颗粒造模术后2个月可见典型的骨溶解界膜组织形成.翻修术后3个月,冻干骨组见较多植骨残余,假体-骨界面基本为软组织界膜,假体骨接触率(BIC)为(1.38±1.22)%;基因治疗组见少量植骨残余,假体-骨界面有点状骨接触,BIC为(12.96±1.61)%,两组差异有统计学意义(P<0.01).结论 采用BMP-2基因治疗可提高假体周围骨溶解性骨缺损的界面骨整合.
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磁性生物陶瓷椎体间融合器的研究
目的 检测由磁性生物陶瓷制作椎体间融合器生物愈合的可行性与稳定性.方法 应用磁性生物陶瓷制作椎体间融合器后,选健康2～4岁山羊9只,平均体重27.8kg,经氯胺酮诱导,气管插管,安氟醚吸入麻醉后,取右下腹腹膜外斜切口,暴露L3与L4椎间隙后,保留前纵韧带,从椎间隙外侧切开纤维环,摘除髓核后,牵引及撑开椎间隙,刮除软骨终板,凿去大部分椎骨表面皮质骨,植入"楔形"磁性生物陶瓷椎体间融合器.结果 9只山羊均成活,术后约8h即可恢复站立,行走;24h后恢复正常行走,进食,但是活动较少,大多数时间处于卧位,休息;3周后情况明显好转,活动恢复至正常.术后6个月,腹部彩色B超检查未见血拴形成,腹部大血管血供正常.定期X线检查,肉眼大体标本观察,光境观察,扫描电镜(SEM)观察,材料与骨实现牢固的"生物愈合".结论 采用磁性生物陶瓷制作椎体间融合器植入体内是可行的.
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腺病毒介导的血管内皮生长因子小干扰RNA对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的研究
目的 观察腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹状小分子干扰RNA(siRNA)对骨肉瘤细胞株MG63增殖和凋亡的影响.方法 将携带VEGF短发夹状siRNA的腺病毒载体Ad-VEGF-siRNA感染MG63.噻唑蓝(MTT)比色分析细胞体外增殖力,Hoechst染色、流式细胞术观察细胞凋亡.建立30只裸鼠移植瘤模型,Ad-VEGF-siRNA组瘤内注射Ad-VEGF-siRNA病毒纯化液0.2ml,通过免疫组织化学技术,观察肿瘤组织中MG63细胞的增殖和凋亡.结果 与对照组比较,Ad-VEGF-siRNA组MG63细胞生长减慢,Hoechst染色可见到典型的凋亡细胞,24、48、72h凋亡率分别为7.27%、12.01%和20.09%.Ad-VEGF-siRNA明显抑制移植瘤生长,抑瘤率达40.7%.Tunel染色可见MG63细胞典型凋亡特征,同时肿瘤组织中PCNA、bcl-2表达明显减少(P<0.01). 结论 Ad-VEGF-siRNA可高效而特异地阻断VEGF基因表达,抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡.
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二膦酸盐对佐剂性关节炎的影响
目的 观察二膦酸盐对大鼠佐剂性关节炎中关节软骨的影响,探讨其对软骨的保护作用.方法 将80只7周龄的Lewis雌鼠随机平均分为对照组(NV)、炎症组(SV)、小剂量(SI-10)和大剂量治疗组(SI-100),弗氏佐剂致敏,按10μg/kg和100μg/kg体重每周3次皮下注射英卡膦酸钠.6周和10周时,采用软X线片、组织学染色和末端DNA转移酶介导的脱氧UTP缺口末端标记技术(TUNEL)等方法对前足踝关节进行评估.结果 6周时,SV和SI-10关节破坏严重,平均凋亡软骨细胞数分别为(4.23±0.88)个和(3.71±0.74)个,与NV和SI-100差异有统计学意义(P<0.05).10周时,SV关节破坏仍很严重,平均凋亡软骨细胞数为(3.84±0.75)个,与其余组差异有统计学意义(P<0.05). 结论二膦酸盐可以抑制破骨细胞对骨的吸收,保护软骨下骨;还可以抑制软骨细胞的凋亡,保护关节软骨.
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新型多肽神经组织工程支架与背根神经节细胞联合培养的研究
目的 观察自组装含IKVAV多肽凝胶材料与神经组织的生物相容性.方法 肽溶于NaOH溶液中,调整pH至8.5,浓度为0.01g/ml,加DMEM/F12在盖玻片上触发多肽自组装为凝胶,透射电镜检测.取新生SD大鼠背根神经节及其游离细胞分为实验组与对照组,实验组中DRG及其游离细胞与凝胶材料联合培养.倒置相差显微镜观察DRG生长情况,免疫荧光染色结合镜下细胞计数检测凝胶材料的细胞毒性和黏附性.结果 透射电镜显示:自组装凝胶为编织状纳米纤维.实验组中DRG轴突生长情况优于对照组.培养1、3d后,两组中活细胞比例差异无统计学意义.培养3、12h后,实验组中神经细胞黏附数显著高于对照组.结论 含IKVAV多肽凝胶材料能促进DRG生长和神经细胞黏附,对细胞毒副作用小,可作为优良的神经组织工程支架材料.
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骨髓基质干细胞复合小肠黏膜下层体内异位成骨的研究
目的 观察骨髓间充质干细胞复合小肠黏膜下层构建组织工程骨膜的异位成骨能力.方法 将常规方法培养的BMSCs与SIS复合(M1组)及进行成骨诱导培养BMSCs与SIS复合(M2组)植入兔(n=8)背部肌袋内作为实验组,以单纯SIS作为阴性对照.术后4、8、12周观察其成骨情况.结果 BMSCs在SIS支架上黏附、生长良好.植入体内4、8、12周,M2、M1、SIS组成骨量分别为(25.08±0.79)%、(18.81±0.42)%和(13.98±1.86)%,各指标M2组高于M1或SIS组(P<0.05),M1组高于SIS组(P<0.05).随着时间的延长,两实验组成骨量逐渐增加(P<0.05),SIS组的成骨量变化不明显(P>0.05). 结论 BMSCs与SIS复合构建组织工程骨膜在体内有异位成骨作用,而且经过成骨诱导的组织工程骨膜成骨作用更加明显.
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慢病毒介导骨形成蛋白-2基因转染骨髓间质干细胞修复大鼠颅骨骨缺损
目的 观察携带人骨形成蛋白-2(hBMP-2)基因的慢病毒(lentivirus)转染骨髓间质干细胞构建的组织工程化骨对大鼠颅骨极量骨缺损的修复效果. 方法 300～350g雄性 SD大鼠取股骨骨髓体外培养扩增骨髓间质干细胞(BMSC),以lentivirus载体介导hBMP-2基因转染BMSC,诱导其向成骨细胞分化.将细胞接种于经纤维连接蛋白修饰的β-磷酸三钙(β-TCP),共同培养10d.30只大鼠均造成颅骨极量缺损(直径8mm)模型,分为Lev- BMP2转染细胞+β-TCP组(A组:n=10);BMSC +β-TCP组(B组:n=10);β-TCP组(C组:n=10)于第4、8、12、20周从影像学及组织学角度观察比较颅骨缺损修复情况.结果 无论X线摄片及组织切片均表明,A组颅骨骨缺损修复优于同期的B组和C组.在各时间点A组和B组在植骨区均有新骨形成,而C组仅见边缘区成骨.术后20周新生骨小梁相对体积(TBV,%)A组为(60.83±11.49),B组为(40.37±9.02),C组为(18.37±6.02),差异有统计学意义(P<0.01). 结论 Lev- BMP2转染BMSC复合β-TCP构建的组织工程化骨对大鼠颅骨极量骨缺损有较好的修复效果.
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成年大鼠急性脊髓损伤后Rho GTPases的失衡性表达及对轴突再生的影响
目的 观察成年大鼠急性脊髓损伤(SCI)后小G蛋白Rho GTPases Rac、Cdc42和Rho的表达变化及Rho-ROK下游底物MLC的过度磷酸化,探讨哺乳动物SCI后轴突再生过程中生长锥易于萎陷的可能机制.方法 成年SD大鼠36只随机分为SCI4、7、14、21d组,对照组和假手术组共6组,每组6只,SCI组制作Allen's脊髓打击模型并按时序取材,Western印迹检测Rac1、Cdc42和Rho A的表达变化以及MLC磷酸化程度变化,GST Pull down assay 检测RhoA活化程度变化.结果 在SCI后,大鼠脊髓挫伤部位Rac1和Cdc42的表达逐步升高并在第7天达到峰值,之后呈现下降趋势;与之形成对比的是RhoA的表达则无明显变化,但Rho的下游信号通道RhoA-ROK作用底物MLC磷酸化程度却逐步升高;RhoA活性测定则显示GTP-RhoA呈逐步增高趋势. 结论成年大鼠SCI后脊髓中枢轴突再生过程中存在Rho GTPases Rac、Cdc42和Rho的失衡性表达,这可能是外周微环境中吸引性和排斥性因素制约失衡的直接后果;Rho的活性持续异常升高可导致MLC磷酸化程度异常升高.这一变化可刺激肌动-肌球蛋白的收缩性,从而导致大鼠SCI后生长锥的萎陷和再生神经突起的回缩.
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吡咯喹啉醌对体外培养雪旺细胞增殖及Cyclin E基因表达的影响
目的 观察吡咯喹啉醌(PQQ)对体外培养的大鼠坐骨神经雪旺细胞(Sc)增殖的影响,寻找PQQ促进Sc体外高效扩增的佳效应浓度,并探讨其促进Sc增殖的作用机制.方法 取SD鼠婴坐骨神经体外培养Sc,应用免疫荧光技术鉴定Sc的纯度,采用噻唑蓝(MTT)比色分析法选择PQQ促进Sc增殖的佳效应浓度,设6个浓度梯度(1、10、102、103、104、105nmol/L),用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PQQ对雪旺细胞Cyclin E基因表达的影响.结果 PQQ浓度为1、10、1×102、1×103nmol/L时能促进雪旺细胞的增殖,以浓度为1×102nmol/L时促进作用明显,PQQ浓度为1×104nmol/L时与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而PQQ浓度为1×105nmol/L对SC具有一定的抑制作用;RT-PCR法显示与对照组比较PQQ浓度为1×102nmol/L时能促进雪旺细胞Cyclin E基因的表达.结论 适宜浓度的PQQ能促进Sc的增殖,其机制可能与其促进Sc中Cyclin E基因的表达有关.
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骨肉瘤细胞的仿血管发生
目的 探讨骨肉瘤细胞的仿血管发生现象,骨肉瘤细胞是否具有血管形成相关基因的表达.方法 应用Ⅰ型胶原蛋白凝胶和Matrigel的三维培养基对骨肉瘤细胞进行培养,并运用电镜、光镜观察这些类血管样结构的形态学构成;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测骨肉瘤细胞血管形成相关基因(VEGF、Flt-1、KDR、Ang-1、Tie-2、Ang-2、Tie-1、EPHA2、CD31、Thrombin、VE-Cadherin)的表达.结果 电镜、光镜下观察到骨肉瘤细胞在Ⅰ型胶原蛋白凝胶和Matrigel的三维培养基中能够形成良好的类血管样的管道结构;骨肉瘤细胞类内皮细胞和内皮前驱细胞,具有血管形成相关基因(VEGF、Flt-1、KDR、Ang-1、Tie-2、EPHA2、CD31、Thrombin、VE-Cadherin)的表达.结论 骨肉瘤细胞具有仿血管发生的能力和血管形成相关基因的表达,三维培养是研究肿瘤细胞仿血管发生现象较好的工具.
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骨肉瘤与肿瘤坏死因子基因多态性相关性研究
目的 观察骨肉瘤患者肿瘤坏死因子 (TNF)基因多态性,探讨骨肉瘤与TNF基因多态性的相关性.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法(PCR-RFLP) 对52例骨肉瘤患者与60例健康对照者TNF-α和TNFβ基因的NcoI酶切位点进行对比分析.结果 52例骨肉瘤患者TNF-α- 308位点G/G基因型频率(98%) 及G等位基因频率(99%) 显著高于正常对照组G/G基因型频率85.0%及G等位基因频率91.7%(P<0.05),TNF-β+252的基因型频率和等位基因频率与正常对照人群比较差异无统计学意义(P>0.05). 结论 TNFα基因多态性与骨肉瘤的发生具有相关性,TNFβ基因多态性与骨肉瘤的发生无明显相关.
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脂肪干细胞/Ⅰ型胶原凝胶/聚乳酸聚乙醇酸-β-磷酸三钙骨组织工程复合体的构建及其异位成骨研究
目的 构建基于脂肪干细胞、Ⅰ型胶原凝胶以及聚乳酸聚乙醇酸-β-磷酸三钙支架(PLGA-β-TCP)的骨组织工程复合体并对其异位成骨进行研究.方法 设计构建脂肪干细胞-Ⅰ型胶原凝胶/PLGA-β-TCP复合体(A组),同时设立单纯细胞/PLGA-β-TCP材料复合体(B组)、单纯Ⅰ型胶原凝胶/PLGA-β-TCP复合体(C组)以及单纯PLGA-β-TCP支架材料(D组)作为对照.扫描电镜、相差显微镜观察细胞材料复合情况并对脂肪干细胞增殖以及成骨分化进行分析.体外成骨诱导培养2周后移植于自体股部肌袋,8周后取出,依次行放射学、组织学定性及半定量分析.结果 (1)体外成骨诱导2周,A组细胞增殖率慢于B组(P<0.05,n=4),但其细胞总数远高于后者(P<0.01,n=4).A组碱性磷酸酶(ALPase)活性、细胞外基质矿化程度均显著高于B组(P<0.01,n=4).A组细胞悬浮于Ⅰ型胶原凝胶并均匀分布于材料孔隙中而B组细胞仅见黏附于材料表面.(2)移植8周,X线片示A组高密度钙化影形成,B、C、D组未见有阳性结果.A组材料孔隙中均匀充满新生骨组织,可观察到骨小梁样结构.B组仅在少数孔隙中有类骨组织形成,同时伴有结缔组织长入.A组新生骨面积百分比显著高于B组(P<0.01,n=4).结论 通过应用Ⅰ型胶原凝胶来实现脂肪干细胞与PLGA-β-TCP多孔支架材料的均匀复合,能够有效促进脂肪干细胞在材料孔隙中的成骨分化及均质骨组织形成.
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5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记示踪脂肪成体干细胞体内成骨分化的研究
目的 观察经成骨诱导后的脂肪成体干细胞(ADASCs)在体内的成骨分化行为.方法 分离培养兔ADASCs,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记,并通过免疫组织化学方法检查标记结果.将标记的ADASCs体外成骨诱导培养2周后与脱钙骨基质(DBM)复合,共培养7d后植入自体肌袋内.术后8周取材,固定、脱钙、包埋后切片染色,镜下观察.结果 大量ADASCs被标记,标记率达(82.3±8.6)%;体外标记后的ADASCs可以向成骨方向分化;切片苏木素-伊红(HE)染色示体内有新生骨形成,切片BrdU免疫组织化学染色示新生骨处有阳性细胞.结论 ADASCs经体外成骨诱导后植入体内能够继续维持成骨分化,并进一步形成新生骨.
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碳纳米管/羟基磷灰石/聚乳酸椎间融合器力学研究
目的 观察碳纳米管(CNTs)、羟基磷灰石(HA)和聚乳酸(PLLA)制成的增强可吸收椎间融合器力学性能.方法 将形状相同的HA/PLLA cage和CNTs/HA/PLLA椎间融合器分成a、b两组,每组12枚,4枚直接压缩为初始抗压缩力,其余植入山羊体内3、6个月后压缩.结果 A组三个不同时间的压缩力分别为:(6.54±0.36)、(4.71±0.28)、(4.12±0.17)kN;B组(8.45±0.85)、(6.76±0.72)、(6.47±0.45)KN.B组椎间融合器在各个不同时间的抗压缩力较A组大,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 CNTs/HA/PLLA 椎间融合器有较强的初始力学强度,在动物体内是一种理想的腰椎融合器.
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冻存对组织工程骨膜生物活性的影响
目的 观察冻存复苏过程对组织工程骨膜生物学特性的影响.方法 体外培养新西兰大白兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),与猪小肠黏膜下层(SIS)构建组织工程骨膜.冻存后复苏培养,扫描电镜(SEM)观查复苏后种子细胞生长状况、噻唑蓝(MTT)比色法绘生长曲线、钙-钴法检测碱性磷酸酶(ALP)、生物化学法定量分析ALP的表达.结果 冻存复苏后BMSCs仍能在SIS上保持良好的生长状况;组织工程骨膜复苏后成骨诱导培养5d时ALP含量达峰值,10～15d时稳定在较低的量,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论组织工程骨膜冻存复苏后仍保持较稳定的生物活性.
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不同活化状态的巨噬细胞对雪旺细胞增殖、分泌神经生长因子功能的影响
目的 观察不同活化状态的巨噬细胞对雪旺细胞(SCs)生理功能的影响.方法 分离、培养成年SD大鼠巨噬细胞,利用髓鞘组织(20μg/well)使其激活;从新生1d SD大鼠坐骨神经内分离SCs(1×106个/ml)并培养于Transwell下室.共培养组:激活状态的巨噬细胞加入到Transwell上室;对照组1:Transwell上室内加入未激活的巨噬细胞;对照组2:Transwell上室内加入不含细胞的培养基.通过细胞计数、3H-TdR掺入法检测SCs增殖情况,Western blot检测SCs表达神经生长因子(NGF)水平.结果 共培养组从新生大鼠内获取4.16×106个SCs,明显高于对照组1(3.83×106)和对照组2(3.19×106)(P<0.05);3H-TdR结果显示细胞增殖水平(0.2766±0.0079)明显强于对照组1(0.2268±0.0084)和对照组2(0.1929±0.0031)(P<0.05);WB结果显示NGF表达水平明显高于对照组(P<0.05). 结论巨噬细胞对SCs的影响受其活化状态的影响,激活状态的巨噬细胞可以明显促进SCs增殖,增强其表达NGF的能力.
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骨组织工程支架材料的研究现状与展望
骨组织工程学是一门综合材料科学、生命科学和生物技术的新兴交叉学科,其研究内容主要包括种子细胞、支架材料及组织工程化骨的构建等,其中支架材料不仅具有连接和支持细胞的重要作用,而且调控着细胞的形态、特异性黏附、增殖及定向分化等生物学行为,还决定着组织工程化骨移植后的修复质量和远期效果,在骨组织工程研究中占有重要地位,同时支架材料研究也是目前骨组织工程研究为活跃的领域,现就目前支架材料研究的现状与展望作一述评.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
