中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
粒细胞集落刺激因子和干细胞因子对骨髓单个核细胞的动员效率及其机制
目的 联合应用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和干细胞因子(SCF)动员骨髓单个核细胞,评价其动员效果,探讨CXCL12/CXCR4信号通路在骨髓单个核细胞动员中的作用及机制.方法 将昆明小鼠随机分为两组,治疗组皮下注射重组鼠G-CSF 100μg/(kg·d)和重组鼠SCF25μg/(kg·d),连续使用5d;对照组皮下注射等剂量的生理盐水.每组于不同时间点取小鼠骨髓,分离培养骨髓单个核细胞,计数成纤维样细胞集落形成单位(CFU-F)的个数;应用流式细胞仪分选CD34+ CXCR4+单个核细胞(MNCs);应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定骨髓细胞外液CXCL12a的水平;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨髓CXCL12 mRNA表达变化.结果 应用G-CSF/SCF后,骨髓及外周血中单个核细胞计数较对照组明显增加(P<0.01),CFU-F形成能力显著增强(P<0.05);流式分选表明CD34+ CXCR4+细胞占骨髓CD34+单个核细胞总数的(44.6±8.7)%;RT-PCR和EUSA检测示骨髓CXCL12 mRNA表达下降,骨髓细胞外液CXCL12蛋白也显著下降,两者变化一致.结论 G-CSF/SCF可有效地诱导骨髓单个核细胞动员,其机制可能是通过破坏骨髓CXCL12/CXCR4信号通路平衡,下调CXCL12/CXCR4间相互作用,以促进骨髓单个核细胞动员.
-
软骨素酶联合雪旺细胞移植促进脊髓损伤修复的研究
目的 观察软骨素酶联合雪旺细胞移植在治疗急性脊髓损伤中的作用.方法 Wistar大鼠80只,制作T10节段急性脊髓损伤模型(致伤力10g×4cm).随机分成4组:对照组、雪旺细胞移植组、硫酸软骨素酶治疗组和联合治疗组.采用脊髓运动功能评分(BBB法,总分21)、神经电生理(SEP&MEP)检查和生物素葡聚糖胺(BDA)神经示踪及标本NF-200免疫组织化学染色等比较各组疗效.结果 4周后BBB评分实验组较对照组明显提高,各组间差异有统计学意义(P<0.05)(12周时4组分别为9.11±1.41、11.22±1.59、11.77±1.76和14.22±1.92).术后4周起,神经电生理检查实验组动物较对照组差异有统计学意义(P<0.05),12周时4组MEP的波幅分别恢复至术前的28.8%、44.9%、49.0%和56.8%.BDA示踪显示联合组较对照组有较多的神经纤维穿过损伤部位.NF-200免疫组织化学染色吸光度(A)比较各组间差异有统计学意义(P<0.05),3个实验组纵切片A值与对照组的比值为1.44、1.55和2.78.结论 联合应用软骨素酶和雪旺细胞移植来治疗脊髓损伤,起到协同作用,效果好于单一方法,能明显促进脊髓损伤后的轴突再生和肢体功能恢复.
-
PI3K/Akt在深低温低流量脑保护中的作用
目的 观察PI3K/Akt在深低温低流量(DHLF)脑保护中的作用并探讨其机制.方法 Akt1+/-小鼠与野生型(WT)小鼠各48只分别随机并平均的分为假手术组与手术组.手术组在深低温下钳闭颈总动脉120 min并重新开放,模拟DHLF过程.各组脑血流经激光多普勒血流仪监测.经TUNEL和Western blot检测各组脑细胞凋亡及Akt下游bcl-2与bax的改变.结果 阻断颈总动脉后,小鼠脑血流量减少86%以上.野生型手术组死亡率在再灌注24h后约为15%,72h死亡率达到20%,而Akt1+/-小鼠死亡率增加,24h后约为25%,72 h达到40%(P<0.05).Akt1+/-脑细胞凋亡数量增多(P<0.01),Western blot显示Akt下游bcl-2与bax表达增强.结论 抑制Akt1后小鼠脑损害程度加重,PI3K/Akt通过抑制线粒体凋亡通路发挥作用.
-
常温肝素灌注液对自体移植肺损伤的影响
目的 观察常温肝素液对猪自体肺叶移植术后肺组织超微结构及气体交换能力变化的影响.方法 将杂种猪18只随机分为对照组、肝素组及Euro-Collins(EC)液组.各组均在全肺切除后立即行自体肺叶移植(左侧全肺切除+左肺下叶白体肺叶移植),对照组予常温生理盐水,肝素组予常温肝素液灌注供肺,EC液组予4℃ EC液灌注.移植前、移植后0.5、1、2、4h检测移植肺的肺静脉血氧分压(PvO2)、二氧化碳分压(PvCO2)、肺动态顺应性(Cdyn),移植肺组织中的氧自由基髓过氧化物酶(MPO)活性,移植肺组织的湿干重比(W/D)及电镜结构变化.结果 与对照组比较,肝素组及EC液组移植后4h的PvO2、PvCO2、Cdyn,W/D及电镜结构差异有统计学意义(P<0.05),肝素组与EC液组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 无论是常温肝素液还是低温EC液,对供肺叶的灌注均能较好地保持移植肺的结构,保护移植肺的气体交换功能.常温肝素灌注后的供肺叶能满足自体肺叶移植的要求.
-
胃癌组织表皮生长因子受体和下游信号的表达及临床意义
目的 检测胃癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶B(AKT)、细胞外信号调节激酶(ERK)的表达,探讨3种蛋白在胃癌发生发展及侵袭、转移中的作用.方法 采用免疫组织化学方法(SP法)检测84例胃癌组织及15例正常胃组织中EGFR、AKT、ERK的表达,分析EG-FR、AKT、ERK的表达与胃癌患者临床病理特征及预后的关系.结果 (1)在84例胃癌组织中EG-FR、AKT、ERK过表达率分别为29.7%、31.0%和33.3%,正常胃组织的过表达均为0,差异有统计学意义(P<0.05);(2)Ⅲ+Ⅳ期患者AKT过表达率为39.7%,明显高于Ⅰ+Ⅱ期患者(11.5%)(P<0.01);(3)T3+T4组AKT的过表达率为37.9%,明显高于T1+12组(5.6%)(P<0.01);淋巴结阳性者AKT的阳性率为40.4%;明显高于阴性者(18.9%)(P<0.05).(4)EGFR、AKT、ERK过表达者总生存及无进展生存期明显低于低表达者.结论 检测胃癌组织中的EGFR、AKT、ERK表达,有助于胃癌的诊断及对胃癌的恶性程度的判断和预后的评估.
-
CXCL12/CXCR4生物轴在头颈部鳞癌淋巴转移的作用
目的 观察趋化因子受体4(CXCR4)及其配体12(CXCL12)在头颈部鳞癌(HNSCC)组织及颈部淋巴结中的表达,分析CXCR4、CXCL12的表达与HNSCC临床病理关系,探讨CXCL12/CXCR4生物轴在HNSCC淋巴转移中的作用.方法 半定量逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR法)及免疫组织化学SP法检测65例HNSCC组织、15例正常口腔组织及良性病变中CXCR4、CXCL12基因及蛋白表达.结果 RT-PCR结果:CXCR4在鳞癌转移组、非转移组、良性对照组中的表达分别为0.406±0.044、0.464±0.068、0.900±0.108,各组间表达的差异有统计学意义(P<0.05).转移组、未转移组淋巴结中CXCL12的表达分别为0.935±0.087、0.861±0.047,差异无统计学意义(P>0.05).免疫组织化学结果:CXCR4在鳞癌转移组、非转移组、良性对照组中的表达率分别为71.4%、33.3%、13.3%.各组间表达的差异有统计学意义(X2=65.23,P<0.05).CXCR4的表达与临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移显著相关(P<0.01),与年龄、性别无明显相关(P>0.05).淋巴结中高表达CXCL12,CXCL12的表达在所有参数的分组表达中差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CXCR4的高表达可能赋予HNSCC细胞较强的局部侵犯及淋巴转移潜能;CXCL12/CXCR4生物轴在HNSCC淋巴转移中可能发挥作用.
-
曲古菌素A对肾癌细胞增殖及对去乙酰化酶1、金属蛋白酶9表达的影响
目的 观察曲古菌素A(TSA)对肾癌细胞7860增殖抑制作用及对组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)、基质金属蛋白酶9(MMP9)表达的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度(100、200、400、800nmol/L)、不同时间(12、24、36、48 h)TSA作用后7860细胞的抑制率.吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双重染色检测细胞凋亡.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测HDAC1、MMP9的表达.结果 不同浓度TSA作用24h后,细胞生长抑制率分别为32%、45%、58%、62%.TSA作用后部分细胞发生凋亡形态改变.HDAC1、MMP9基因在TSA作用后mRNA表达降低(P<0.01).与空白组、阴性组比较,HDAC1蛋白在TSA作用后表达分别下调18.6%～87.5%(P<0.01)、21.3%～91.4%(P<0.01),MMP9蛋白表达分别下调24.6%～95.7%(P<0.01)、20.8%～89.2%(P<0.01).结论 TSA可抑制肾癌细胞增殖,并可能通过下调HDAC1、MMP9的表达抑制细胞的增殖.
-
丝素蛋白降低聚丙烯补片表面粘连的研究
目的 观察聚丙烯补片经丝素蛋白涂覆后,其表面粘连程度的变化,并探讨其作用机制.方法 将40只Sprague-Dawle大鼠随机分为两组,每组各20只.按组于腹腔内分别植入丝素蛋白涂覆聚丙烯材料(丝素面朝向腹腔,聚丙烯面朝向腹壁)和聚丙烯补片,于术后3、7、14、90 d分批处死大鼠,比较植入补片表面粘连程度及粘连面积,并行病理及扫描电镜检查.结果 丝素蛋白涂覆聚丙烯材料组,术后3、7、14、90d检查基本无腹腔内粘连形成,补片表面粘连面积占总面积的(6.04±4.78)%,粘连程度为(0.8±0.4);单纯聚丙烯组全部大鼠术后并发腹腔内粘连面积占总面积的(86.61±12.25)%,粘连程度为(3.4±0.6),有5只(5/20,25.0%)大鼠分别于术后2～9d因肠管与聚丙烯粘连引起肠梗阻或肠瘘死亡,两组的术后腹腔内粘连面积和粘连程度差异均存在统计学意义(P均<0.05).结论 丝素材料能促进腹膜间皮细胞长入,于聚丙烯补片表面腹膜化,形成新的间皮细胞层,可有效降低聚丙烯补片与腹腔内器官发生粘连的程度及范围.
-
缺血再灌注损伤对肝脏免疫原性的影响
目的 观察缺血再灌注损伤对肝脏免疫原性的影响.方法 30只大鼠均分为3组,利用免疫荧光及Western blol检测缺血30min再灌注组及缺血60min再灌注组及对照组的肝脏中共刺激分子B7蛋白的表达水平.结果 正常肝脏B7-1、B7-2表达处于极低水平(0.035±0.005、0.025±0.004),缺血再灌注后肝脏B7-1、B7-2的蛋白表达明显升高(P<0.01),缺血再灌注60min组的B7-1、B7-2的表达水平明显高于缺血30min再灌注组(B7-1:0.070±0.017比0.051±0.008,B7-2:0.042±0.004.比0.037±0.004,P<0.01).结论 缺血再灌注损伤使共刺激分子B7蛋白表达升高,提示缺血再灌注损伤可使移植肝免疫原性升高,这些均能促进急性排斥反应的发生.
-
丝裂霉素C诱导成纤维细胞凋亡的作用及其机制
目的 观察丝裂霉素C(MMC)对成纤维细胞诱导凋亡的作用及机制.方法 体外培养成纤维细胞并传至5～8代,分别用含有0～0.3g/L MMC的MEM培养液处理成纤维细胞12h后CCK-8试剂盒检测不同浓度MMC对成纤维细胞的生长抑制效果;以0～0.2g/L MMC处理细胞爬片后用Hoechest33342细胞核染色,荧光显微镜下观察凋亡细胞核形态并用image pro-plus软件计数凋亡细胞;按不加药培养细胞12 h作对照组、0.2g/L.MMC培养细胞12h、P13K/Akt抑制剂LY294002 100 nmol/L与MEK/ERK抑制剂PD98059 100nmol/L分别处理细胞1h后换新鲜培养基培养11h分为4组,提取胞质蛋白,Western blot法检测Caspase-3、p-ERK1/2、p-Akt表达量.结果 MMC对成纤维细胞的抑制率与药物浓度呈正相关性,0.2g/L MMC对细胞活性抑制率达50.21%;Hoeeheat33342细胞核染色随MMC浓度升高出现凋亡细胞核特征的染色质凝聚,边集,呈亮蓝色核的比率逐渐增高,凋亡细胞计数显示0.05、0.1、0.2g/L MMC处理组凋亡率显著高于其他低浓度组,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot检测0.2 g/L MMC组、PD98059组、LY294002组C8spase-3表达均显著高于对照组,p-ERK1/2、p-Akt表达均较对照组降低.结论 一定浓度的MMC可诱导成纤维细胞发生凋亡,其效应途径部分是通过降低ERK1/2、Akt的磷酸化水平使胞质内凋亡执行蛋白Caspase-3的表达水平增加,诱导成纤维细胞由正常增生状态转而发生凋亡减少胶原纤维生成,从而抑制瘢痕形成.
-
Rac1基因沉默对髓母细胞瘤细胞侵袭移动的影响
目的 观察Rac1基因沉默后对髓母细胞瘤细胞侵袭移动的影响.方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测Rac1 mRNA和蛋白在髓母细胞瘤Daoy细胞株中的表达;通过转染Rac1 shRNA观察Rac1基因沉默后Daoy细胞骨架的变化,再转染Rac1 N17和Rac1 L61,观察Rac1基因缺失和表达增强后对Daoy细胞侵袭、移动的影响.结果 Rac1 mRNA和蛋白在Daoy细胞株中均有高表达;Rac1基因沉默后Daoy细胞交联的F-actin网和细胞膜伪足形成减少;单层细胞划痕24 h后,Rac1 shRNA组、Rac1 N17组、对照质粒(control)组细胞迁移数分别是86±4、97±6、198±7;Rac1 shRNA和Rac1 N17两组分别与control组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).在侵袭实验中,Rac1 shRNA组、Rac1 N17组、对照质粒组细胞侵袭数分别是30±4、45±6、78±7;Rac1 shRNA组和Rac1 N17两组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 Rac1基因与Daoy细胞骨架形成密切相关,RNA干扰沉默Rac1基因可以抑制Daoy细胞的侵袭移动.
-
改良内固定治疗股骨颈骨折的研究
目的 改进股骨颈骨折内固定方法,并观察其治疗效果.方法 18只山羊采用手术方法造成双侧股骨颈移位骨折模型,实验侧采用改良内固定,对照侧采用传统髓内固定.术前及术后4、6、8、12周分5次行放射性核素三相骨显像检查;术后4、8、12周分3批处死动物行股骨头、颈组织学观察;同时结合X线检查客观评价改良内固定治疗股骨颈骨折的疗效.结果 (1)放射性核素骨显像:血流相及血池相显示实验侧股骨头不但动脉灌注较对照侧好,而且静脉回流也比对照侧通畅.骨静态相显示术后4、6周实验侧头/干比值大于对照侧(P<0.01),表明实验侧股骨头的血流量和骨代谢率高于对照侧,股骨头血供重建及骨组织修复过程较对侧快.(2)组织学观察结果显示在血管重建、编织骨生成及坏死骨清除等阶段实验侧均较对照侧提前.结论 改良内固定在力学稳定件增加的基础上,减轻了股骨颈髓内压力,保护了残留血供,有利于骨折愈合及股骨头血供的早期重建,促进了骨组织的修复.
-
P物质受体在大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的表达
目的 比较大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化过程中P物质(SP)受体的表达变化.方法 采用全骨髓法体外分离、培养SD大鼠BMSCs,分为诱导成骨组与未诱导组,在传代培养的不同时期(1、2、3周),采用免疫细胞化学、Western blot对BMSCs的成骨细胞诱导进行鉴定,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测各组细胞SP受体mRNA、蛋白的表达,观察时间-效应关系.结果 (1)rBMSCs及其诱导的成骨细胞有SP受体表达.(2)SP受体mRNA在诱导1周时下降(P<0.05),在诱导至3周时显著增高(P<0.05).(3)同一时间点诱导组SP受体的蛋白水平高于未诱导组(P<0.05),诱导组SP受体蛋白水平在第3周时显著增高(P<0.05),呈明显的时间依赖性.结论 大鼠BMSCs及其诱导的成骨细胞表达SP受体,随着成骨诱导的不断进行,SP受体在成骨分化的末期大量表达.
-
当归对兔肝纤维化肝癌介入治疗后肝纤维化的作用
目的 建立兔肝纤维化肝癌模型,观察当归对其行化疗栓塞(TACE)术后加重肝纤维化的预防作用,探讨当归预防肝纤维化的作用机制.方法 将55只新西兰大白兔随机表法分为对照组(n=10)、模型组(n=15)、介入组(n=15)和预防组(n=15).造模时给予腹腔注射纯CCl4剂量0.1 ml/kg,每周1次,共注射10周,同时给予5%的乙醇饮水,在第10周末于肝左叶种植VX2瘤.其中模型组:在第12周末经肝动脉注入生理盐水2ml;介入组:在行TACE术时注入平阳霉素1mg+碘油0.2ml;预防组:在行TACE术时注入平阳霉素1mg+碘油0.2ml+当归注射液6ml/kg.对照组:以相同剂量生理盐水注射.各组于第16周末检测透明质酸酶(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ型胶原(CⅣ),并进行肝组织苏木素咿红(HE)染色、胶原纤维(VG)染色和转化生长因子(TGF)-β1免疫组织化学染色.结果 模型组(7/10)和预防组(6/10)的肝纤维化病理分期主要处于肝纤维化Ⅱ期(P>0.05),介入组(7/9)主要处于肝纤维化Ⅲ期,与模型组(3/10)和预防组(4/10)分期比较差异有统计学意义(P<0.05);模型组、介入组和预防组血清HA、LN、PCⅢ和CⅣ明显高于对照组(P<0.05),预防组低于介入组(P<0.05),与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);对照组肝组织TGF-β1呈阴性表达,介入组肝组织TGF-β1表达明显增强,模型组和预防组TGF-β1表达较介入组减少.结论 用CCl4诱发兔肝纤维化后并种植VX2瘤,可以建立兔肝纤维化肝癌模型,行TACE术后可加重其肝纤维化的程度,当归对其有延缓作用,TGF-β1参与其调控机制.
-
移植骨髓间充质干细胞对兔退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响
目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对兔退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响.方法 以各兔L2/3、L3/4、L4/5、L5/6节段分为正常组、退变组、成纤维细胞(SFs)移植对照组、MSCs移植治疗组.MSCs和SFs分别经绿色荧光蛋白(GFP)转染后,注射植入退变椎间盘的髓核.通过透射电镜观察退变椎间盘凋亡髓核细胞形态;用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测退变组织中髓核细胞凋亡相关基因bcl-2和box mRNA的表达;免疫荧光法标记髓核细胞凋亡相关蛋白Caspase-3,并通过TUNEL法标记凋亡髓核细胞,激光共聚焦显微镜检测髓核细胞凋亡蛋白表达率和细胞凋亡比率.结果 透射电镜下,退变椎间盘中凋亡髓核细胞呈现出核染色质边集,空泡形成,核膜断裂,凋亡小体形成等变化.MSCs移植治疗组bcl-2 mRNA的表达量高于退变组和SFs移植对照组(P<0.05),bax mRNA的表达量与退变组差异无统计学意义(P>0.05).MSCs移植治疗组细胞凋亡率和Caspase-3表达率均高于正常组[细胞凋亡率分别为(16.75±2.14)%和(6.86±1.08)%;Caspase-3表达率分别为[(20.34±1.03)%和(6.09±0.77)%](P<0.05),低于退变组和SFs移植对照组[细胞凋亡率分别为(31.87±4.16)%和(29.02±2.16)%;Caspase-3表达率分别为(31.50±3.78)%和(30.20±4.93)%](P<0.05).结论 髓核细胞凋亡在椎间盘退变过程中起重要作用.MSCs移植能有效抑制椎间盘髓核细胞凋亡,延缓椎间盘退变过程.
-
多聚唾液酸神经细胞黏附分子在垂体腺瘤中的表达及其临床意义
目的 探讨垂体腺瘤中多聚唾液酸神经细胞黏附分子(PSA-NCAM)的表达及与侵袭性、组织学类型、Ki-67抗原之间的关系.方法 收集61例手术切除的垂体腺瘤标本及临床资料,3例正常垂体腺组织来自24 h内死亡的尸解标本,应用免疫组织化学法检测PSA-NCAM在不同类型腺瘤中的表达.结果 本组61例垂体瘤中有26例(52.6%)PSA-NcAM阳性表达,3例正常垂体组织皆为阴性.25例男性患者中11例(44.0%)PSA-NCAM阳性表达,36例女性患者中15例(41.7%)PSA-NCAM阳性表达,两者差异无统计学意义(P>0.05).PSA-NCAM阳性表达组的平均年龄(42.1±11.2)岁,阴性表达组为(44.7±12.4)岁,两者差异无统计学意义(P>0.05).PSA-NCAM阳性表达组的平均Ki-67抗原标记指数(Ki-67 LI)为(3.6±1.3)%,阴性表达组为(2.7±1.4)%,两者差异有统计学意义(P<0.05).PSA-NCAM阳性表达组的肿瘤平均宽度为(2.5±0.9)cm,阴性表达组的为(1.6±1.2)cm,差异有统计学意义(P<0.05).侵袭性垂体腺瘤的PSA-NCAM阳性表达率62.5%(20/32),非侵袭组20.7%(6/29),两者差异有统计学意义(P<0.01).结论 PSA-NCAM的表达与垂体腺瘤的大小、侵袭性、增殖指数密切相关,而与患者的性别、年龄等无明显相关.
-
Oct4和Klf4慢病毒共转染外周血细胞的研究
目的 观察Oct4和KLF4慢病毒载体共转染CD44阳性细胞并观察其在CD44阳性细胞中的表达.方法 培养CD44+细胞并用CD44+蛋白做免疫荧光染色.通过将Oct4和Klf4慢病毒共转染入CD44+细胞,和免疫双染观察其在CD44+细胞中的表达.结果 染色KLF4培养的细胞CD44的蛋白检测阳性.Oct4的和Klf4的慢病毒细胞转染成功,蛋白在48h后表达,表达阳性率为96.4%.结论 即Oct4和Klf4的慢病毒转染能在CD44+细胞表达Oct4和Klf4的融合蛋白.
-
细胞外信号调节蛋白激酶在一氧化氮对心肌缺血再灌注后保护及抗凋亡的作用
目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)是否在整体器官和活体水平参与一氧化氮(NO)对心肌缺血再灌注损伤后的心脏保护和抗细胞凋亡过程及其与NO的相互作用机制.方法 小鼠离体心脏灌注模型全心脏缺血20min,再灌注120min.再灌注期间分别用空白对照剂或NO供体(SNAP,10μmoL/L)治疗.用选择性MEK1/2(MEK1/2是激活ERK1/2的上游激酶)阻断剂U0126(1μmol/J L)预治疗(于缺血前10min).结果 用SNAP治疗组表现出明显的心肌保护作用,表现为心肌细胞凋亡减少(TUNEL和Caspase-3活性,P<0.01)和心功能提高(P<0.01).此外,SNAP组和对照剂组比较,2.5倍的激活ERK. U0126完全阻断了SNAP诱导的ERK激活,明显但不是完全阻断SNAP的心脏保护作用.结论 NO在缺血再灌注心脏中的抗凋亡和心脏保护机制,部分是通过激活ERK进行.
-
多孔双相陶瓷复合重组人骨形态发生蛋白-2和碱性成纤维细胞生长因子缓释微球的生物相容性
目的 观察复合重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)缓释微球的多孔双相陶瓷(BCP)组织相容性.方法 A组(rhBMP-2+bFGF缓释微球/BCP)、B组(单纯BCP)、C组(bFGF缓释微球/BCP)、D组(rhBMP-2缓释微球/BCP)和E组(不含BCP).其中bFGF、dlBMP的浓度各为5、15μg,材料均为5 mm×5 mm×1mm.采用体外细胞培养的方法测定细胞黏附能力、浸提液对于兔骨髓基质细胞(BMSCs)增殖和成骨分化的影响及体外诱导BMSCs成骨分化的能力.结果 细胞在材料上黏附、生长良好.各组噻唑蓝(MTT)吸光度值、碱性磷酸酶(ALP)值均随培养时间的延长而增大.A组与B、D和E组比较对MSC有显著的促增殖作用,但低于C组(P<0.05).A组ALP活性显著高于B、C和E组,但低于D组(P<0.05).结论 复合rhBMP-2和bFGF缓释微球的BCP具有良好的生物相容性.
-
硫化氢在肠缺血-再灌注损伤大鼠肝脏功能障碍中的作用
目的 观察硫化氢(H2S)在肠缺血-再灌注损伤大鼠肝脏功能障碍中的作用.方法 将24只雄性Wistar大鼠随机分为A(假手术)组、B(缺血-再灌注)组、C(缺血-再灌注+NABS)组(n=8).留取血浆测定H2S、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL),行肝脏组织匀浆检测脂质过氧化物(LPO)、髓过氧化物酶(MPO)、超氧物歧化酶(SOD)、丙二醇(MDA)和GSH/GSSG,光镜和电镜下观察肝脏组织病理变化,TUNEL染色观察肝细胞凋亡指数(AJ),逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法分别检测肝脏组织bcl-2、bax、Caspase-3、STAT3 mRNA和蛋白、pSTAT3和cytochrome C蛋白的表达.结果 C组ALT、AST、肝脏组织MPO、浸润的中性粒细胞数、MDA、LPO、AI、pSTAT3蛋白、Caspase-3mRNA、Caspase-3蛋白、bax mRNA、bax蛋白表达量分别为(47.63±5.04)U/L、(57.63±5.04)U/L、(1.71±0.17)U/mg、(14.13±1.64)个/视野、(23.42±0.69)nmol/mg、(140.13±11.33)nmol/mg、(23.39±1.40)%、0.222±0.019、0.477±0.050、0.214±0.009、0.076±0.004、0.419±0.012,均显著低于B组,高于A组(P<0.01),均与H2S负相关,与AJ正相关.C组H2S、GSH/GSSG、SOD、cytochrome C蛋白、bcl-2 mRNA、bcl-2蛋白表达量分别为(35.27±3.14)μmol/L、9.78±0.56、(90.70±5.69)U/mg、1.132±0.076、0.325±0.052、0.377±0.034,均显著高于B组,低于A组(P<0.01),均与AI负相关,与H2S正相关.pSTAT3与bax、Caspase-3基因表达正相关,与cytochrome C蛋白、bcl-2基因表达负相关.结论 H2s对肠缺血再灌注损伤大鼠肝脏功能障碍起保护作用.
-
硫氧还蛋白对大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A表达的影响
目的 观察经硬膜外注入硫氧还蛋白(Trx)对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后脊髓组织中Nogo-A表达的影响,探讨其对脊髓损伤的保护作用.方法 成年Wister大鼠56只,分为假手术组(A组,n=8)、损伤对照组(B组,n=24)和Trx治疗组(C组,n=24).B、c组用改良Allen's法以30 g/cm致伤大鼠T8脊髓制作损伤模型,同时在蛛网膜下腔置管,C组术后即刻和随后每天1次按0.75mg/kg从硬膜下导管推入硫氧还蛋白,B组在相同时问点给予等量生理盐水;A组打开椎板后蛛网膜下腔置管,不损伤脊髓,不给药.在术后3、7、14 d分别对其进行后肢运动功能BBB评分(n=8),评分完毕即处死动物,取受损节段脊髓组织行免疫组织化学观察脊髓组织中Nogo-A阳性细胞的表达,同时计数阳性细胞.结果 各时间点B组大鼠BBB评分均显著低于A组(P<0.01),伤后7、14 d时C组评分显著高于B组(P<0.05或0.01).B组在术后7与14日Nogo-A表达均显著高于A组(P<0.01);C组在伤后7、14 d的表达量显著低于B组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A显著升高,Trx能明显抑制Nogo-A的表达,可能促进轴突的再生.
-
HBV-X蛋白对人肝癌细胞株SMMC-7721恶性表型的影响
目的 观察HBV-X蛋白对低侵袭性人肝癌细胞株SMMC-7721恶性表型的影响.方法 pcDNA3.1(-)-X重组质粒转染SMMC-7721细胞,以空质粒转染作对照,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),Western blot检测X蛋白表达水平,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液X蛋白、MMP-2、MMP-9、尿激酶纤溶酶原活化因子(uPA)水平,并用体外功能实验观察转染前后的恶性表型的变化.结果 重组质粒转染SMMC-7721后X蛋白表达明显升高,细胞培养上清液HBV-X蛋白为(13.02±2.12)μg/L,对照组为(4.07±0.37)mg/L;MMP-2重组质粒转染组为(49.04±4.07)μg/L,对照组为(25.15±5.43)μg/L,MMP-9水平分别为(27.82±2.25)μg/L和(7.89±1.27)μg/L;uPA重组质粒转染组水平明显高于空质粒转染组,分别为(10.78±3.23)μg/L和(1.24±0.34)μg/L,t值分别为19.93,6.27;6.83,7.04,P值均<0.01.体外功能实验提示SMMC-7721转染HBV-X重组质粒后细胞黏附、运动和侵袭能力明显增强,细胞黏附率为(85.33±14.78)%,对照组为(57.34±2.52)%,t=2.96,P<0.05.运动试验透膜组胞数分别为(24.3±1.9)个和(12.3±2.5)个,t=4.89,P<0.05.侵袭试验透膜细胞数分别为(18.2±3.2)个和(9.3±2.3)个,t=4.29,P<0.05.而细胞增殖能力也明显增加.结论 HBV-X蛋白可能通过MMP-2、MMP-9、uPA分泌促进SMMC-7721的恶性表型.
-
骨形成发生蛋白4在胶质瘤细胞株U251中的作用
目的 观察骨形成发生蛋白4(BMP4)在U251细胞中的作用.方法 阿霉素、BMP4质粒体分别给予U251细胞,BMP4的小干扰给予阿霉素处理过48h的U251细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、荧光定量PCR和Western blot检测转染是否成功及BMP4的表达量.噻唑蓝(MTT)检测细胞活性,应用公式(1-处理组A/空白组A)×100%计算处理组细胞增长抑制率.结果 RT-PCR、荧光定量PCR和Western blot证明转染是成功的.在给予BMP4质粒体0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/孔后,细胞的抑制率分别为(23.4±1.1)%、(54.8±1.3)%、(58.8±1.6)%、(57.2±1.4)%、(56.1±0.9)%(P<0.05),0.5μg/孔与1.0、1.5、2.0、2.5 μg/孔的抑制率差异有统计学意义(P<0.05),1.0、1.5、2.0、2.5μg/孔之间差异无统计学意义(P>0.05).单用阿霉素对U251细胞的抑制率为(45.2±1.1)%(P<0.05).给予阿霉素后给予BMP4的siRNA,细胞的抑制率为(23.1±2.7)%,与阿霉素组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 BMP4可以抑制胶质瘤细胞U251的生长.
-
神经生长因子在脑膜瘤细胞核中的表达及其临床意义
目的 探讨神经生长因子(NGF)在脑膜瘤中的表达及其临床意义.方法 对56例脑膜瘤切片进行NGF、孕激素受体(PR)、Ki67免疫组织化学染色,并随访患者脑膜瘤复发情况.结果 脑膜瘤中NGF核阳性率为41.1%,高于Ki67阳性率35.7%(P>0.05).PR阳性率为印.7%.NGF核阳性率与Ki67阳性率呈正相关(r=0.741,P<0.01),与PR阳性率呈负相关(r=-0.59,P<0.01).NGF核阳性组患者中位复发时间(36.000±2.484)个月明显短于NGF核阴性组(59.000±2.295)个月(P<0.01).结论 NGF核阳性率可以作为脑膜瘤细胞增殖活性及预后判断指标.
-
TRAF6在小鼠急性胰腺炎相关的肺损伤中的作用
目的 观察肿瘤坏死因子受体相关6(TRAF6)在小鼠急性胰腺炎相关的肺损伤中的作用.方法 雨蛙素7次腹腔注射诱导急性胰腺炎模型,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法检测TRAF6肺组织表达.也检测了肺髓过氧化物酶(MPO)的水平.结果 与对照组比较,雨蛙素注射后1h,TRAF6表达明显下调,然后在2、4、12 h开始逐渐恢复,在24 h,表达明显上调(P<0.05).在胰腺炎症早期,MPO水平明显升高(1h 477.83±30.24;2 h 797.50±34.25;4 h1255.50±126.66),12 h明显下降(608.17±30.27),24 h接近基线水平(230.50±17.69).结论 在急性胰腺炎相关的肺损伤过程中,TRAF6可能参与调节肺炎症进程.
-
增殖诱导配体在膀胱癌中的表达
目的 观察增殖诱导配体(APRIL)在人膀胱癌组织中的表达.方法 应用免疫组织化学SP法检测19例复发性膀胱癌、46例无复发性膀胱癌、8例正常膀胱组织中APRIL的表达,比较3组之间的差异及膀胱癌病理分级G1(n=21)、G2(n=21)、G3(n=23)之间的差异.结果 APRIL在复发性膀胱癌、无复发性膀胱癌、正常膀胱组织中阳性表达率分别为94.7%(18/19)、82.6%(38/46)、0(0/8),APRIL在膀胱癌不同病理分级G1级(n=21)、G2级(n=21)、G3级(n=23)中阳性表达率分别为76.2%(16/21)、85.7%(18/21)、95.7%(22/23).APRIL在正常膀胱组织、无复发性膀胱癌、复发性膀胱癌表达依次增强,且各组差异有统计学意义(P<0.05).APRIL的阳性细胞表达计分在膀胱癌不同病理分级中差异有统计学意义(P<0.05).结论 APRIL蛋白的表达可能与膀胱癌的发生、发展和复发有关.
-
胃癌腹膜微转移与网膜乳斑的关系
目的 观察网膜乳斑在腹膜微转移中的作用.方法 将30只小鼠分成3组,向小鼠腹腔内打入1×106经Dil荧光标记的BS186MFC胃癌细胞,3组小鼠分别于24、48、72 h被杀死取其大网膜,免疫荧光标记大网膜乳斑中的巨噬细胞,在免疫荧光显微镜下观察乳斑区胃癌细胞的变化.结果 乳斑与非乳斑区在24、48、72 h不同时间点标记胃癌细胞比率分别为484:1、136:1、10:1.各时间点胃癌细胞在乳斑区的差异有统计学意义(P<0.05).标记细胞数在乳斑与非乳斑区之间的差异有统计学意义(P<0.01).结论 网膜乳斑对胃癌细胞的腹膜微转移有抑制和杀伤作用.
-
NKCC1在手汗症伴腋窝多汗患者腋窝汗腺中的表达及意义
目的 观察手汗症伴腋窝多汗患者(腋窝多汗组)、手汗症无腋窝多汗患者(单纯型手汗症组)及非手汗症患者(对照组)的腋窝汗腺数目及Na+K+Cl-联合转运子1(NKCC1)的表达,探讨其与手汗症发病的关系.方法 27例腋窝多汗组,11例单纯型手汗症组,8例对照组,取各组患者腋窝皮肤作常规苏木素.伊红(HE)染色,计数汗腺数目,并检测NKCC1在3组患者腋窝皮肤汗腺中的表达和分布.结果 3组汗腺计数差异均无统计学意义(HC=2.528,P>0.05).腋窝多汗组与单纯型手汗症组、对照组NKCC1的吸光度差异有统计学意义(F=5.158,P<0.05;F=5.158,P<0.01),单纯型手汗症组与对照组差异无统计学意义(F=5.158,P>0.05).结论 伴有腋窝多汗的手汗症患者腋汗增多与NKCC1蛋白表达增强有关,而与腋窝汗腺数目无关.
-
水通道蛋白5在手汗症伴腋窝多汗患者腋窝汗腺中的表达及意义
目的 观察手汗症伴腋窝多汗患者腋窝汗腺中水通道蛋白(AQP)的表达,探讨其与手汗症伴腋窝多汗的发病机制的关系.方法 应用苏木素-伊红(HE)染色对34例实验组和8例对照组的腋窝汗腺进行染色,在光镜下分别计算其腋窝汗腺数目,并进行比较;应用免疫组织化学方法对上述两组腋窝汗腺进行AQP1、AQP3和AQP5蛋白检测,并进行对照研究.结果 两组中腋窝汗腺数目差异无统计学意义(Z=-1.506,P>0.05);两组腋窝汗腺中均无AQP1、AQP3表达,AQP5在两组均有表达且在实验组中表达显著增强(Z=-3.523,P<0.05).结论 AQP1、AQP3不参与人体腋窝汗腺分泌;AQP5可能是参与人体腋窝汗腺分泌的主要水通道蛋白之一,其表达增强很可能是手汗症伴腋窝多汗患者的发病机制之一.
-
熊去氧胆酸对大鼠肝再生和细胞周期蛋白D1表达的影响
目的 观察熊去氧胆酸对大鼠肝再生和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠分为对照组和熊去氧胆酸组(UDCA组),各32例.对照组给予标准饲料,UDCA组给予0.3%UDCA饲料,7d后行70%肝部分切除术(PH).于术后0、1、2、3 d四个时间点观察大鼠肝细胞增殖和Cyclin D1表达情况.结果 两组大鼠在0d时PCNA蛋白几乎不表达,在PH后1d,PCNA蛋白标记指数迅速上升达高峰,而UDCA组PCNA标记指数显著高于对照组(40.70±4.73比33.24±5.59,P<0.01).2 d时,UDCA组PCNA标记指数仍显著高于对照组(35.64±5.86比29.45±7.04,P<0.05).3 d时两组差异无统计学意义(P>0.05).UDCA组在PH术后1、2 d Cyclin D1表达明显高于对照组(P<0.05),3 d时两组差异无统计学意义(P>0.05).结论 熊去氧胆酸可促进肝细胞增殖,并且上调Cyclin D1表达.
-
人工体神经-内脏神经反射弧建立后大鼠盆神经节-膀胱神经通路和递质研究
目的 观察人丁体神经-内脏神经反射弧建立后大鼠膀胱和盆神经节(MPG)之间的神经通路及神经递质性质.方法 8只成年wistar大鼠在体建立人工体神经-内脏神经反射弧.将辣根过氧化物酶(HRP)注射至实验大鼠的膀胱壁肌层,逆行神经追踪,通过免疫组织化学或组织化学方法显示HRP阳性标记细胞中的胆碱已酰转移酶(ChAT)、酪氨酸羟化酶(TH)、血管活性肠肽(VIP)、P物质(SP)和还原型辅酶Ⅱ(NADPH,NOS标志物).结果 支配膀胱的神经元多位于MPG主体部,呈圆形或椭圆形,无明显突起,多数为ChAT(40.1%,112/279)和TH(20.4%,50/245)免疫阳性,少数为VIP(10.7%,25/233)、NOS(6.5%,15/230)、SP(3.3%,8/242)反应阳性.结论 人工体神经-内脏神经反射弧建立后MPG中支配膀胱的神经元以胆碱能和肾上腺素能为主,VIP、SP和一氧化氮(NO)可能发挥神经调质作用.
-
Sox9基因对兔腰椎间盘退变的作用
目的 观察腺病毒介导的Sox9基因(AdSox9)对兔腰椎间盘退变模型的疗效.方法 25只新西兰大白兔用针刺法制作腰椎间盘退变模型,24周后,将AdSox9注射到退变椎间盘组织中,6周后用MRI观察椎间盘变化,免疫组织化学法观察椎间盘组织Ⅱ型胶原(Col2al)的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察Col2al mRNA的变化.结果 MRI示:治疗后L2～3、L3～4、L4～5的椎间盘信号值分别为:580.43±76.43、612.74±56.73、605.87±76.53,模型对照组为:238.43±43.65、217.65±38.95、236.98±76.53;Col2al表达的标记指数:治疗后L2～3、L3～4、L4～5的椎间盘分别为:42.48±5.53、45.34±15.43、42.47±25.45,模型对照组为:11.68±10.08、12.68±13.75、13.38±26.53;Col2al mRNA的表达:治疗后L2～3、L3～4、L4～5的椎间盘分别为6570.43±174.53、7653.75±158.93、6905.83±119.23,模型对照组为:1256.76±89.76、1217.65±18.65、1132.97±47.65.3种方法均示,治疗组与模型对照组之间比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 AdSox9对退变椎间盘动物模型有治疗作用.
-
血卟啉单甲醚光动力治疗对人胶质瘤细胞U87-MG抗原加工相关转运体1的影响
目的 观察光动力学疗法(PDT)对人胶质瘤细胞株U87-MG抗原加工相关转运体1(TAP1)表达的影响.方法 CCK-8法确立光敏剂适浓度.实验随机分为5组:A、B、C、D组细胞与光敏剂避光孵育2h后,接受激光照射,能量密度分别0、1.2,2.4A.2J/cm2;E组未予处理(无光敏剂、无激光).PDT后2、12 h分别收集细胞,实时定量聚合酶链反应(realtime-PCR)检测;12、24 h提取蛋白,进行Western blot分析.结果 处理后TAP1基因转录水平明显升高:2h时,1.2、2.4A.2 J/cm2组分别上调11.070、5.925、4.175倍;12h时,分别上调10.400、4.560、4.023倍.TAP1蛋白在PDT后12 h,0、1.2、2.4、4.2 J/cm2组分别上调1.17、2.65、1.92、1.37倍;24 h,分别上调1.13、2.43、2.38、2.09倍,差异有统计学意义(P<0.01).结论 PDT上调TAP1基因的转录和表达,并呈剂量依赖性和时间依赖性,从而增强肿瘤细胞抗原处理及提呈能力.
-
四嗪二甲酰胺抑制肺癌细胞株A549、EBC-1、MA增殖并诱导细胞凋亡的研究
目的 观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肺癌细胞株A549、EBC-1、MA增殖并诱导细胞凋亡作用.方法 将不同浓度的ZGDHu-1与A549、EBC-1、MA细胞在体外培养,用锥虫蓝染色、噻唑蓝(MTT)比色法、5'-溴-2脱氧尿苷(HrdU)-酶联免疫吸附试验(ELISA)法观察ZGDHu-1对A549、EBC-1、MA细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记、Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡.结果 ZGDHu-1能抑制A549、EBC-1、MA细胞增殖和活力,呈现作用时间和剂量的量效关系.A549、EBC-1、MA细胞经ZGDHu-1作用48 h后,其IC50分别为165、106、210μg/L;72h后的IC50分别为42、18、90μg/L.大部分细胞阻滞于G2～M期;出现典型的细胞形态改变,亚G1峰检出并显著增加,Annexin-V+/PI-表达升高,细胞内DNA片段含量增加,Hoechst33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变,证实ZGDHu-1能诱导A549、EBC-1、MA细胞凋亡.结论 ZGDHu-1能抑制A549、EBC-1、MA细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡.
-
睫状神经营养因子对不全视神经损伤的保护效应
目的 观察睫状神经营养因子(CNTF)对猫视神经不全损伤后的神经保护效应.方法 制作猫视神经不全损伤模型;CNTF组分别给予CNTF 8μl(1g/L)玻璃体内注射,对照组给予生理盐水8μl;术后15d双侧上丘、外侧膝状体显微注射DiI 5μl逆行神经示踪;术前、术后3、15、30d行视觉诱发电位(P-VEP)检测;术后30 d原位心脏灌注;视网膜铺片,视网膜神经节细胞计数;取术侧视神经组织,光镜和电镜观察视神经形态变化.结果 对照组术侧眼PVEP P-100较CNTF组振幅明显减低,潜伏期明显延长,差异有统计学意义(P<0.01);与手术组相较.CNTF组视网膜神经节细胞存活数[(1256±124)个/mm2]明显高于对照组[(632±61)个/mm2](P<0.01),神经结构更加完整.结论 视神经不全损伤后CNTF玻璃体注射具有视神经保护效应.
-
缺氧诱导丝裂原因子在小鼠支气管肺发育不良模型中的表达及意义
目的 探讨缺氧诱导丝裂原因子(HIMF)在小鼠支气管肺发育不良(BPD)模型中的表达及意义.方法 32只新生昆明小鼠随机分为对照组(n=16)、高氧暴露组(n=16),分别置于正常空气(21%,O2)及氧箱(85%,O2)中,于暴露后第7、14、21、28天每组随机选取4只,采用苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织形态学改变,运用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法检测肺组织中HIMF mRNA和蛋白表达水平.结果 对照组肺泡逐渐发育成熟,大小均匀,肺间质变薄;高氧暴露组肺泡隔增厚、肺泡融合,放射状肺泡计数减少31.1%～65.3%;与对照组比较,高氧暴露7、14、21 d后肺组织HIMF mRNA和蛋白水平分别增高2.435～2.528倍(P<0.05)、2.45～5.42倍(P<0.05),而高氧暴露28 d后分别下调52.81%(P<0.05)、74.60%(P<0.05).结论 成功建立小鼠BPD模型,HIMF基因表达异常可能参与BPD的发生、发展过程.
-
一种用于制备标准化脊髓损伤动物模型的实验装置
标准理想的脊髓损伤模型对于阐明脊髓损伤的病理生理机制和评价损伤后干预手段的效果非常关键.我们设计了一种可以制造不同部位的标准化的脊髓损伤的实验装置,现介绍如下.
-
膜周部室间隔缺损患者内皮素1多态性的研究
内皮素1(ET1)在正常胚胎发育过程中起重要作用,与神经嵴细胞的发生有关,ET1基因敲除老鼠表现出主动脉弓畸形和室间隔缺损[2].ET1 TaqI单核苷酸多态性为内含子4的8000位点T/C的转换,可能引起ET1表达的差异,因此可能与先天性心脏病的易感性有关.我们运用PCR-RFLP的方法,以医院为基础的病例对照研究,探讨ET1 TaqI多态性与膜周部室缺发生的易感性.
-
Rac1、缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子在胃癌组织中的表达和血管生成的关系
我们采用免疫组织化学方法检测60例胃癌组织和30例正常胃黏膜组织中Rac1、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,并用CD34标记血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD),探讨Rac1、HIF-1α、VEGF与肿瘤血管生成的关系.
-
一种脑组织近距离放疗动物模型的建立
利用脑胶质瘤瘤腔内置球囊近距离放疗系统(the GliaSite RTS)进行瘤内近距离放疗是一种比较新颖的近距离放疗形式,可以克服传统间质内放疗的不足[1].近距离放射性脑损伤的实验研究对于开展此种疗法又至关重要.本研究旨在建立一种适用于液态放射性核素包括常用的125ⅠI、131Ⅰ等的脑近距离放疗动物模型.
-
腹部大手术后液体平衡及全身炎症反应综合征对腹腔内压力变化的影响
腹腔内高压(IAH)是腹部大手术后出现严重并发症的重要原因之一,大量液体复苏以及腹部大手术是IAH发展的独立危险因素.我们分析腹部大手术后IAH的发生率,探讨24 h液体平衡及全身炎症反应综合征(SIRS)对腹腔内压力(IAP)变化的影响.
-
荧光引导下恶性胶质瘤手术切除的临床研究
恶性胶质瘤是神经外科常见肿瘤,呈侵袭性生长,肿瘤与正常脑组织的分界不清,正常显微镜下手术要作到全切肿瘤基本不可能,以往研究结果显示能够把MRI显示增强信号的肿瘤全部切除的比例不到20%[1],往往导致有肿瘤灶残余.我们采用荧光导航下恶性胶质瘤的手术切除,提高了手术全切率,手术安全性较高.
-
肝门部胆管癌术后胆肠吻合口大出血一例诊治分析
肝门部胆管癌行胆肠吻合术后并发症包括复发性胆管炎、胆肠吻合口狭窄、盲袢综合症、消化道出血,其中消化道出血常是来自十二指肠溃疡出血[1],胆肠吻合口大出血不多见.我们抢救1例肝门部胆管癌术后胆肠吻合口大出血病例,现报道如下.
-
Survivin shRNA表达质粒的构建、转染和筛选
我们采取基因静寂策略,利用psi RNA-hH1neo载体,以Survivin mRNA为靶序列,构建在细胞内产生短发夹状RNA(shRNA)的重组质粒,观察其对胆囊癌细胞株GBC-SD的抑制作用.
-
膀胱癌组织Kringle5基因的克隆、表达、纯化及活性鉴定
Kringle5(K5)是纤溶酶原裂解片段,生物活性高于内皮抑素和血管抑素,其相对分子质量小、穿透力强,是更有研究前途的内源性血管生成抑制因子.本研究旨在对膀胱癌组织Kringle5基因的克隆、表达、纯化及活性鉴定.
-
人胆管瘢痕组织和脂肪组织裸鼠皮下移植动物模型的建立
损伤性胆管狭窄的病理基础是胆管瘢痕[1],防治胆管瘢痕形成是胆道外科一个亟待解决的问题.本研究旨在建立人胆管瘢痕组织和脂肪组织裸鼠皮下移植模型.
-
大鼠重度创伤-失血性休克模型的建立
本研究旨在探讨一定条件下大鼠重度创伤-失血性休克模型建立成功的评价标准.一、材料与方法健康SD雄性大鼠32只,随机分为对照组(NC,n=8)、休克组(shock group,n=24),shock组又分为复苏组(shock-A,n=12)、非复苏组(shock-B,n=12).
-
膀胱肿瘤合并前列腺增生的临床研究
目的 探讨同期经尿道膀胱肿瘤及前列腺电切的有效性及安全性.方法 选择我院自2003年6月至2009年2月住院治疗的167例合并膀胱肿瘤合并前列腺增生(BPH)的膀胱肿瘤患者,实验组(n=108)同期行膀胱肿瘤及前列腺电切,对照组(n=59)仅行膀胱肿瘤电切.两组在年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、肿瘤分期分级、IPSS评分等方面差异无统计学意义(P>0.05).结果 所有手术顺利,术中未出现明显膀胱穿孔;实验组术后1个月内尿路感染率(6.5%)明显低于对照组(35.6%),P<0.01;两组肿瘤复发率分别为29.6%和40.7%,实验组低于对照组(P<0.05);两组复发时间分别为23.2和18.5个月,实验组长于对照组(P<0.05);前列腺窝种植例数分别为3例和2例,两组前列腺窝种植率差异无统计学意义(P>0.05).结论 对于合并BPH的膀胱肿瘤患者,同期行膀胱肿瘤及前列腺是比较安全可靠的方法,可以降低术后尿路感染发生率及肿瘤复发率,并不增加前列腺窝肿瘤种植.
-
胆管癌动物模型研究进展
胆管癌起源于胆管上皮细胞,是仅次于肝细胞肝癌的第2位肝胆恶性肿瘤,约占消化道肿瘤的3%[1].近年来,胆管癌的发病率呈现逐年升高的态势,日益受到包括肝胆外科医师在内的消化科专家的普遍关注[2].
-
肺血减少型先天性心脏病动物模型手术制备研究进展
肺血减少型先天性心脏病(先心病)(Congenital heart diseases with decreased pulmonary blood flow)是以肺血管发育不良、肺血循环减少为病理特征的一系列复杂先天性心脏畸形.归纳认识和掌握患儿肺血减少型先心病的临床特点以及肺血管发育不良的评估一直是此类患者外科手术的难题[1],直接影响手术适应症的选择、术式的抉择及手术预后判断[2].
-
尿道下裂形成的分子机制研究进展
近年来人类性别发育畸形相关疾病呈逐年上升趋势,而尿道下裂是常见的性别发育畸形之一.在国外,出生男婴中尿道下裂的发病率为0.4%～1.0%[1,2],而在我国,平均每2325个男性围生儿中有一例不同程度的尿道下裂,城市的发病率明显高于农村[3].
-
大鼠酸性反流性食管炎模型的建立
目的 建立一种酸性大鼠反流性食管炎(RE)模型.方法 80只大鼠随机分为实验A、B组和对照C、D组,每组20只.实验组行幽门结扎加前胃结扎术,对照组行胃造口修补术.A、C组术后7 d处死大鼠,B、D组术后14 d处死.模型建立时及取标本前测定食管下段黏膜pH值(pHLEM).术后观察大鼠存活及食管病理改变.结果 4只术中死亡,A、B、C和D组存活率分别为68.4%(13/19)、47.4%(9/19)、83.3%(15/18)和95.0%(19/20),B、D组存活率差异有统计学意义(P<0.01).实验组模型建立前后pHLEM分别为(5.19±0.33)和(3.51±0.87)(P<0.01).实验组(A+B组)RE发生率为81.8%,对照组未发生RE.A、B组RE发生率、食管炎大体评分和镜下评分差异均无统计学意义(P>0.05).结论 幽门结扎加前胃结扎法可成功建立大鼠酸性RE模型.
-
60Co-γ照射雄性小鼠建立无精子症动物模型
目的 探词60Co-γ照射雄性小鼠建立无精子症动物模型的合适剂量及方法.方法 将100只昆明小鼠随机分为A～G组(A组为10只,余均为15只),A组为对照组,B组腹腔注射环磷酰胺,C～F组分别给予60Co-γ不同剂量全身均匀照射1次,G组间隔以60Co-γ全身均匀照射2次,观察35 d;作受孕实验,测量各组小鼠睾丸重量,并计算睾丸指数;酶联免疫法测定血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)水平;睾丸组织的组织病理学观察.结果 C、D、G组死亡率均为6.67%,但F、G组受孕率为0;60Co-γ造成小鼠睾丸组织损伤导致T(5.62±2.89)、E2(53.28±2.00)降低的同时,对垂体也会造成损伤,引起FSH(3.00±1.42)、LH(30.10±9.86)的变化(与正常组比较,均P<0.05);精原细胞表面标记c-kjt在A组呈棕褐色环形表达,在其余各组表现为断裂表达或未表达.结论 60Co-γ以6 Gy和4 Gy分2次间隔照射,可建立无精症动物模型.
-
胆囊癌早期诊断的实验研究现状及展望
胆囊癌是一种罕见且致命的疾病,1777年Stoll即有报道.胆囊癌虽然仅占所有肿瘤的0.8%～1.2%,但却是常见的胆道肿瘤,在消化道肿瘤中,胆囊癌的恶性程度占第5位,其术后5年生存率不到5%.
-
葡聚糖磁性纳米颗粒靶向rhNIS基因浓聚125Ⅰ对胆管癌细胞生长的影响
目的 观察基因载体葡聚糖磁性纳米颗粒(DMN)靶向rhNIS基因浓聚125Ⅰ对胆管癌细胞QBC939体外培养和体内接种生长状态的影响.方法 构建DMN-rhNIS-PDC316复合物并转染QBC939细胞,设立实验组(DMN-rhNIS-PDC316)、脂质体转染对照组(Liposome-rhNLS-PDC316)、空白对照组(PDC316),转染后加入3μg DMN-125Ⅰ复合物并外置300 mT磁场,流式细胞仪检测细胞凋亡率.45只胆管癌裸鼠瘤体模型随机分组(每组n=15),经裸鼠尾静脉注入3μg DMN-rhNIS-PDC316、3μg Liposome-rhNIS-PDC316和3μg PDC316并在瘤体设置300 mT磁场,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定瘤体组织细胞内rhNIS-mRNA相对表达水平.另经尾静脉注入5μgDMN-125Ⅰ并外置500mT磁场,测定瘤体处125Ⅰ滞留率,观察治疗后瘤体大小变化.结果 流式细胞仪检测DMN-rhNIS-PDC316转染组细胞凋亡率为(20.12±1.62)%,明显高于其他两组(P<0.05),脂质体对照组凋亡率为(5.31±0.14)%,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),空白对照组凋亡率为(0.15±0.02)%;实验组瘤体细胞内rhNIS-mRNA表达水平较对照组明显增多;瘤体处125Ⅰ滞留率达到18.52%,明显高于对照组;125Ⅰ治疗后实验组抑瘤效应达到64.32%;瘤体体积明显小于对照组,其差异有统计学意义(P<0.05).结论 葡聚糖磁性纳米颗粒能有效靶向rhNIS基因转染胆管癌细胞并稳定表达,增加125Ⅰ的摄入量和滞留率,促进胆管癌细胞的凋亡,而且抑瘤效应明显.
-
格尔德霉素对胆囊癌的体外治疗作用
目的 观察格尔德霉素(GA)对胆囊癌细胞生长、运动和侵袭的影响及其化疗增敏作用.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测(0、0.0064、0.032、0.16、0.8、4、20、100)×10-6 mol/L浓度梯度的GA对胆囊癌细胞GBC-SD生长影响;观察1 μmoL/L的GA对0.1倍大血药浓度(Maximal plasma concentration,Cmax)的5-氟尿嘧啶(5-Fu,Cmax 10 mg/L)、丝裂霉素(MMC,Cmax 3 mg/L)、阿霉素(ADM,Cmax 0.4 mg/L)的化疗增敏作用.应用迁移运动及侵袭实验观察1μmol/L的GA体外对胆囊癌细胞运动、侵袭能力的影响.结果 GA体外对胆囊癌细胞有较强的抑制作用,半数抑制浓度(Inhibitory concentration 50%,IC50)在20μmol/L水平.1μmol/L低生长抑制浓度的GA能够增加传统化疗药物对GBC-SD生长的抑制作用,有明显的增效作用;同时低浓度的GA可以抑制肝细胞生长因子(HGF)对GBC-SD运动迁移和侵袭能力的诱导作用.结论 GA有可能成为胆囊癌化疗和抗转移的有效药物.
-
人胆管癌CD24+ CD44+ EpCAMhigh细胞亚群的分选及其肿瘤干细胞样特性的鉴定
目的 检测及分选人胆管癌中的CD24+ CD44+ EpCAMhigh细胞亚群,探讨其是否具有肿瘤干细胞样生物学特性.方法 流式细胞术检测6例人胆管癌中CD24、CD44、EpCAM的表达率;取2例人胆管癌新鲜标本种植到NOD/SCID鼠皮下,建立荷人胆管癌小鼠模型.流式细胞术分选CD24+ CD44+ EpCAMhigh亚群细胞,NOD/SCID鼠移植瘤试验鉴定其成瘤和分化能力.结果 6例人胆管癌组织标本和2例移植瘤中,CD24+ CD44+ EpCAMhigh在人胆管癌中表达率为0.58%～2.43%(平均值0.94%).运用NOD/SCID鼠移植瘤模型,分选得到CD24+ CD44+ EpCAMhigh亚群细胞.NOD/SCID鼠移植瘤试验,1×103个CD24+ CD44+ EpCAMhigh细胞能成瘤(3/8),而CD24- CD44- EpCAMlow/-细胞在5×104才能成瘤(1/8).CD24+ CD44+ EpCAMhigh胆管癌细胞NOD/SCID鼠移植瘤的组织类型及标记物的表达率和原代肿瘤相似.结论 人胆管癌中含有CD24+ CD44+ EpCAMhigh细胞亚群,具有强成瘤能力、自我更新和分化的能力,可能是胆管癌干细胞.
-
5-氮-2-脱氧胞苷调控p53-baX凋亡通路DNA甲基化对胆管癌细胞生长的影响
目的 探讨甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(DAC或5-aza-dc)对胆管癌细胞QBC939生长的影响及其机制.方法 应用噻唑蓝(MTT)比色法检测DAC在不同浓度(0.1、0.5、1.0、5.0、25.0、100.0μmol/L)及不同时间(24、48、72 h)下对胆管癌细胞QBC939存活率的影响,透射电镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪观察细胞生长周期及凋亡率的变化;甲基化聚合酶链反应检测DAC作用前后p53-bax凋亡通路DNA甲基化变化.结果 DAC对QBC939细胞生长的抑制有浓度和时间依赖性,其半数抑制率(IC50)为72h 5μmol/L;经DAC作用后电镜下胆管癌细胞凋亡增加;胆管癌细胞凋亡发生率由DAC处理前的4.31%上升至处理后的43.04%;DAC作用前p53-bax凋亡通路中p14、DAPK抑癌基因甲基化,DAC作用后p14、DAPK抑癌基因脱甲基化.结论 DAC对胆管癌QBC939细胞的生长具有抑制作用,这一抑制作用是由于DAC脱甲基化造成的,DAC对胆管癌QBC939细胞p53-bax线粒体凋亡通路DNA甲基化的影响使细胞凋亡功能得以恢复.
-
增殖细胞核抗原蛋白和mRNA在胆管癌中的表达及其意义
目的 检测胆管癌和癌旁0.5cm胆管组织及手术切缘的正常胆管组织增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白及mRNA的表达,探讨其在胆管癌发生发展中的作用.方法 应用免疫组织化学过氧化物酶标记链霉卵白素法(SP)检测42例胆管癌组织及20例正常组织中PCNA蛋白的表达,同时应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测42例术中所取的新鲜的胆管癌、17例同个体癌旁胆管黏膜和20例正常胆管组织中的PCNA mRNA表达,并与临床资料进行相关分析.结果 正常胆管组织、癌旁组织、胆管癌组织中PCNA mRNA相对表达量分别0.5605±0.0331,0.5692±0.0408,0.6303±0.0773,PCNA mRNA在3组之间表达呈上升趋势(P<0.05),PCNA蛋白表达趋势同其相对应的基因表达趋势一致,即PCNA mRNA在胆管癌组织中高表达(P<0.05).结论 PC-NA基因转录和蛋白可能参与了胆管癌的发生发展过程.
-
长春花对胆管癌细胞增殖和细胞周期的影响
目的 观察长春花草提取物对体外培养的人胆管癌QBC939细胞的抑制作用.方法 以长春花全草为原料进行分离提取,获得总生物碱层和水层两种提取物,分别采用噻唑蓝(MTT)法、普通倒置光学显微镜观察法和流式细胞术研究两种提取物对QBC939细胞增殖、细胞形态以及细胞周期的影响.结果 长春花两种提取物均能够显著抑制胆管癌细胞的增殖,尤以总碱层的抑制作用强,半抑制常数IC50分别为0.16mg/L和49.02mg/L;两种提取物均能使细胞的形态发生明显改变.随着作用浓度的增大,长春花碱层作用的细胞G0/G1期从对照组的53.10%减少到5.87%,G2/M期细胞从对照组的26.4%增加到71.8%,Sub-G1期变化不明显;长春花水层提取物作用的细胞G0/G1期也明显减少,G2/M 期细胞明显增多,而Sub-G1期则变化明显,出现明显的凋亡峰.结论 长春花提取物具有抑制胆管癌细胞增殖、改变细胞形态及细胞周期分布的作用.
-
TLR4在人胆囊癌细胞株SGC-996的表达及对裸鼠移植瘤生长的影响
目的 观察Toll样受体4(TLR4)在人胆囊癌细胞SGC-996的表达及RNA干扰TLR4基因表达后对裸鼠体内成瘤能力的影响.方法 采用免疫组化及逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR4在SGC-996细胞的表达.将12只BALB/C裸鼠随机分为两组,实验组皮下注射6×106个经TLR4小干扰RNA稳定转染后的SGC996细胞,对照组注射同数量未经处理的SGC996细胞,连续观察5周,比较两组肿瘤的生长情况,计算成瘤率、生长体积和生长率.结果 SGC-996细胞阳性表达TLR4.两组裸鼠成瘤率均为100%,瘤体平均体积分别为(277.94±7.60)mm3和(474.47±9.99)mm3,平均生长率分别为7.941%和13.556%,瘤体质量分别为(0.76±0.16)g和(1.78±0.23)g,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TLR4表达于人胆囊癌细胞SGC-996,小干扰RNA转染后可以降低TLR4基因表达,从而使SGC996细胞体内成瘤能力下降.
-
人增生肝外胆管上皮细胞的原代培养及组织学特点
目的 建立人增生胆管上皮细胞(BECs)的原代培养.方法 通过胶原酶消化、机械分离对不同原因引起的扩张人肝外胆管上皮细胞进行分离纯化,建立原代培养;利用免疫细胞化学和免疫荧光染色,对培养的胆管上皮细胞表达CK-19、E-cadherin、Vimentin、α-SMA和S100A4进行特性鉴定.结果 BECs的贴壁成活率高,原代培养细胞生长速度快;免疫细胞化学和免疫荧光染色显示,上皮细胞特异性标志CK-19和E-cadherin表达阳性,间质细胞标志Vimentin表达弱阳性或阴性,α-SMA表达阴性,但上皮间质表型转变标志蛋白S100A4呈阳性表达.结论 本方法经济、简便、易行,在体外成功分离培养增生的人肝外胆管上皮细胞,获得了高纯度的BECs(>98%);发现增生的胆管上皮细胞发生了上皮间质表型转变,可能是参与胆汁性肝纤维化的机制之一.
-
胆囊良恶性组织中蛋白质组差异表达及膜联蛋白A3的功能
目的 分离并鉴定胆囊癌和胆囊良性组织的差异表达蛋白质,以发现可能用于早期诊断胆囊癌的肿瘤标志物.观察RNA干扰沉默膜联蛋白A3(AnnexinA3)基因对胆囊癌细胞增殖及周期的影响.方法 提取人胆囊癌和胆囊良性组织的总蛋白质,用双向电泳分离蛋白并进行比较.选择差异表达超过2倍的蛋白点进行MALDI-TOF/TOF质谱和生物学分析.miRNA干扰胆囊癌细胞株中AnnexinA3的表达后,通过噻唑蓝(MTT)实验及流式细胞仪观察癌细胞增殖能力及细胞周期的变化.结果 筛选出在胆囊癌组织中明显差异表达的46个蛋白点,共有17个蛋白质被成功鉴定,其中在胆囊癌组织中高表达的为9个,低表达的为8个,包括AnnexinA3、TTR蛋白等.RNA干扰胆囊癌细胞株AnnexinA3蛋白的表达后,MTT显示干扰后细胞增殖明显下降效率为44.14%(P<0.05).流式细胞仪观察显示干扰后G1期增加(P<0.05),S期减少(P<0.05).结论 胆囊癌组织相对于胆囊良性组织蛋白存在明显差异.干扰AnnexinA3蛋白的表达可以改善胆囊癌细胞的某些恶性生物学行为.
-
不同浓度氢氧化钠消融胆道的研究
目的 观察氢氧化钠溶液消融家兔胆道后肝脏病理及肝功能改变.方法 观察家兔右外叶胆道于5%至1%浓度氢氧化钠溶液消融后肝脏功能状态、组织病理改变和术后存活情况.结果 动物存活率100%(24/24).各组间肝功能改变差异无统计学意义(P>0.05),但均与术前比较差异有统计学意义(P<0.05).5%氢氧化钠溶液组右外叶肝脏完全坏死(6/6).2.5%氢氧化钠组右外叶肝脏几乎完全坏死(5/6).1.5%氢氧化钠组右外叶以汇管区为中心的大片坏死(1/6).1%氢氧化钠组右外叶以汇管区为中心的点片状坏死,肝叶边缘仅胆管坏死(0/6).结论 1%为氢氧化钠溶液消融胆道的较理想浓度.
-
胆囊癌细胞株GBC-SD类肿瘤干细胞筛选的研究
目的 筛选胆囊癌GBC-SD系中具有干细胞特性的细胞克隆.方法 在肿瘤干细胞培养基加入不同剂量的顺铂悬浮培养GBC-SD,将悬浮细胞收集后注射裸鼠,并持续瘤内注射顺铂,成瘤后取瘤内细胞继续原培养基培养,获得悬浮生长的克隆,分别测定其干细胞标志物(CD133、CD44、CD24)、耐药基因ABCG2细胞株MDR-1和转录因子OCT-4、Nanog的表达.结果 在肿瘤干细胞培养基和顺铂的筛选压力下,GBC-SD细胞能有效形成悬浮生长的克隆球,流式检测结果表明克隆球高表达CD133+(97.6%)、CD44+(77.9%),低表达CD24+(2.3%),同时表达耐药基因ABCG2和MDR-1,定量聚合酶链反应(PCR)及免疫荧光方法检测发现,与普通胆囊癌细胞株GBC-SD比较,克隆球干细胞基因OCT-4、Nanog表达分别增强266、284倍.结论 顺铂结合无血清培养基悬浮培养法筛选GBC-SD,作为一种新的干细胞分选方法,可以分离出具有肿瘤千细胞特征的胆囊癌克隆球.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
