中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白3基因表达沉默对人肿瘤裸鼠移植瘤生长的影响
目的 构建人肿瘤裸鼠移植瘤模型,探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白3(LRIG3)表达沉默后对移植瘤生长以及表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响.方法 将Hela229细胞接种于裸鼠背部皮下,成瘤后将裸鼠分为3组,分别在瘤体内注射生理盐水、LRIG3反义寡核苷酸(ASODN)、LRIG3错义寡核苷酸(MSODN),检测各组移植瘤生长以及LRIG3和EGFR表达.结果 ASOND组较其他两组瘤体生长加快、体积增大,苏木素-伊红(HE)染色可见核仁染色较深,核分裂相增多,LRIG3蛋白表达结果:空白对照组为0.2302±0.0108、MSODN组为0.2203±0.0183,ASODN组为0.1532±0.0132,两两比较,ASODN组肿瘤组织中LRIG3蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).EGFR蛋白表达结果:空白对照组为0.9212±0.0796、MSODN组为0.9904±0.0830、ASODN组为1.2730±1.1116,两两比较,ASODN组肿瘤组织中EGFR蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).LRIG3表达降低,EGFR表达升高.结论 LRIG3基因表达抑制引起人肿瘤裸鼠移植瘤生长加快,瘤体内EGFR表达升高.
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高迁移率族蛋白A2过表达对大鼠垂体瘤细胞增殖及周期的影响
目的 观察高迁移率族蛋白A2(HMGA2)基因过表达对大鼠垂体瘤细胞增殖及周期的影响.方法 制备携带HMGA2基因的质粒(pIRES2-dsRed-HMGA2 cDNA),转染至大鼠GH3细胞.通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内HMGA2 mRNA表达的变化,Western blot检测pIRES2-dsRed-HMGA2 cDNA转染大鼠GH3细胞后HMGA2蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖实验检测HMGA2基因过表达对大鼠GH3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测HMGA2基因过表达对大鼠GH3细胞周期的影响.结果 pIRES2-dsRed-HMGA2cDNA转染大鼠GH3细胞24 h后HMGA2 mRNA和蛋白表达水平分别高于对照组的26.40％和36.60％,差异有统计学意义(P＜0.05),与对照组比较实验组细胞在24、48、72、96 h增殖数量增加(P＜0.05);流式细胞仪分析显示,实验组的Go/G1期细胞百分率较对照组明显减少[(43.15±0.63)％比(65.33-±0.37)％],而S期较对照组明显增加[(39.57±0.65)％比(18.26±0.54)％,P＜0.05].结论 HMGA2基因过表达促进大鼠垂体瘤细胞增殖,改变细胞正常周期.
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微小RNA-133a在心肌缺血再灌注损伤后心室重塑过程中的表达
目的 观察心肌缺血再灌注损伤后心室重塑的动态过程以及微小RNA(miRNA)-133a在此过程中的表达.方法 建立活体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.将实验动物随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(I/R组).选取术后1、3、7、15、30d 5个观察点,将每组分为5个亚组,监测心脏功能,检测心室重塑指标以及心肌组织内miRNA-133a的表达.结果 I/R组:随再灌注时间延长心功能逐渐下降,心肌内Ⅰ型胶原蛋白表达明显上调,心肌细胞凋亡率明显升高(P＜0.05),缺血区间质纤维化加重,心肌组织内miRNA-133a表达下调(P＜0.05);其中第3天,细胞凋亡率高,为(54.6±7.3)％,纤维化开始明显[L/R组比Sham组:(5.60±2.30)％比(1.64±0.41)％,P＜0.05],心肌组织内miRNA-133a表达量低(0.57±0.22).结论 心肌缺血再灌注损伤后发生纤维化重塑,再灌注后3d是心室重塑形成的重要时期;miRNA-133a在心肌缺血再灌注后心室重塑的动态过程中表达明显下调,可能参与调节此过程.
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合成型血管平滑肌细胞的分离、培养及鉴定
目的 探讨合成型血管平滑肌细胞(VSMCs)的分离、培养及鉴定方法.方法 采用改良Ⅱ型胶原酶消化法分离、体外培养SD大鼠胸主动脉VSMCs,胰酶消化传代获取第3代细胞,分为空白组与血小板衍生因子-BB(PDGF-BB)处理组.噻唑蓝(MTT)比色法及细胞划痕实验分别检测分析细胞增殖活性与迁移活性;倒置显微镜、结晶紫染色观察形态学改变;免疫细胞化学染色鉴定VSMCs并测定分析收缩型标记蛋白α-平滑肌肌动蛋白(SMA)以及合成型标记蛋白平滑肌胚胎型肌球蛋白重链(SMemb)、原肌球蛋白-4(TPM-4)表达量的变化.结果 空白组VSMCs呈典型“谷峰状”生长,SMA细胞免疫荧光染色及免疫细胞化学染色阳性率≥95％;PDGF-BB处理组VSMCs由收缩型长梭状形态向合成型扁平状形态转化(P＜0.05),VSMCs增殖及迁移活性分别增加11.48％、1.92倍(P＜0.05);收缩型标记蛋白SMA表达下降(P＜0.05),合成型标记蛋白SMemb及TPM-4表达均增加(P＜0.05).结论 PDGF-BB处理后,VSMCs由收缩表型向合成表型转化,增殖迁移活性增加,收缩型标记蛋白表达下降、合成型标记蛋白呈现高表达,表现为高合成型VSMCs的特点.
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ZnSe∶Mn/ZnSe-IgG掺杂量子点探针对人肝癌细胞的免疫荧光成像的影响
目的 利用水溶性ZnSe:Mn/ZnSe掺杂量子点优良的光学特性实现对肝癌细胞株HCCLM9甲胎蛋白(AFP)抗原的特异性免疫荧光标记成像.方法 用巯基丙酸修饰的ZnSe∶Mn/ZnSe掺杂量子点,制备水溶性ZnSe∶Mn/ZnSe-IgG复合物探针.荧光、紫外光光谱分析及透射电镜研究其特性.通过间接免疫荧光法,用水溶性ZnSe∶Mn/ZnSe-IgG复合物探针标记肝癌细胞株HCCLM9 AFP抗原.噻唑蓝(MTT)法检测该复合物探针的细胞毒性,并同传统量子点探针比较.双光子共聚焦激光显微镜观察成像,并进行连续激发实验,同传统量子点探针及有机荧光探针比较光稳定性.结果 该水溶性ZnSe∶Mn/ZnSe-IgG复合物探针具有激发光谱宽、荧光强度高的特点,生物相容性较传统量子点好,无明显细胞毒性.用该探针对肝癌细胞成像清晰,其荧光在共聚焦激光连续激发情况下无明显衰减.结论 ZnSe∶Mn/ZnSe掺杂量子点是一种较理想的荧光材料,比传统量子点毒性更小,并且比传统的有机荧光染料具有更优良的光学特性.
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不对称二甲基精氨酸与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的关系
目的 探讨蛛网膜下腔出血(SAH)后大鼠血、脑脊液不对称二甲基精氨酸(ADMA)的浓度变化及其与一氧化氮(NO)浓度和脑血管痉挛(CVS)的关系.方法 将78只SD大鼠分为对照组(n=6)、假手术组(n=36)及SAH组(n=36),采用枕大池二次注血法建立SAH动物模型.定期检测各亚组血浆、脑脊液中ADMA、NO浓度;显微镜下测量基底动脉壁厚度及动脉内径.结果 (1)SAH组脑脊液ADMA浓度逐渐升高,至术后5d达其高值;NO浓度逐渐降低,至术后5d达其低值;(2)以基底动脉壁厚度与内径的比值作为评价CVS程度的指标并进行Pearson相关性分析,SAH组脑脊液ADMA浓度与CVS程度呈正相关;与脑脊液NO浓度呈负相关.(3) SAH组血浆ADMA浓度无明显变化.结论 ADMA可能通过抑制NO生成影响SAH大鼠CVS的发生与发展;脑脊液ADMA水平与SAH大鼠CVS程度明显相关,可作为预测CVS的指标;血浆ADMA水平与CVS程度无明显相关.
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乳腺癌转移抑制基因1对胶质瘤细胞黏附和迁移的影响及其机制
目的 探讨乳腺癌转移抑制基因1(BRMS1)在胶质瘤细胞黏附和迁移中的作用和机制.方法 脂质体介导真核表达质粒pEGFP-BRMS1和对照质粒pEGFP-N2转入人胶质瘤U251和U87细胞中,Western blot技术检测BRMS1蛋白的表达.黏附实验和迁移实验检测细胞黏附和迁移能力.Western blot检测磷酸化黏着斑激酶(FAK) (p-FAK)和磷酸化酪氨酸激酶(Src)(p-Src)蛋白的表达.结果 与对照组比较,转染pEGFP-BRMS1质粒24 h后U251和U87细胞中BRMS1蛋白表达显著增高;细胞黏附能力分别下降60％和65％;细胞穿越Transwell小室能力分别下降64％和68％,差异均有统计学意义(P＜0.01);转染BRMS1后两种细胞p-FAK和p-Src表达量明显减少.结论 BRMS1通过减少p-FAK/p-Src表达抑制胶质瘤细胞黏附和迁移能力.
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梯度信号对背根神经节轴突生长的影响
目的 观察梯度神经生长因子(NGF)对背根神经节(DRG)轴突生长的引导及促进作用.方法 制备聚左旋丙交酯(PLLA)膜,再使NGF梯度负载于该膜.取孕14 d胎鼠DRG,随机分为两组,A组(n=10)种植于负载有均匀NGF的膜上;B组(n=10)种植于负载有梯度NGF的膜上.培养5d后,测量轴突长度.结果 梯度NGF组的DRG轴突长度为(1530±30).μm,轴突转弯系数(TR)为0.49 ±0.10;而均匀NGF组的DRG轴突长度为(1210±20)μm,TR为0.10±0.08.两组间的轴突长度与TR比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NGF梯度信号对背根神经节轴突生长具有引导及促进作用.
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大黄素对胆管癌QBC939细胞凋亡及丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径表达的影响
目的 观察大黄素在体外对胆管癌QBC939细胞增殖的抑制作用及信号转导通路丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响.方法 用大黄素作为干预因素,剂量效应组分别用不同浓度大黄素的培养液与QBC939细胞共培养;检测细胞增殖、凋亡,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中c-myc mRNA表达,Western blot检测细胞中c-myc、MAPK、p-MAPK蛋白质的表达.结果 大黄素抑制QBC939细胞增殖,0、20、40、80 μmol/L大黄素对QBC939细胞增殖抑制率分别为(4.73±0.88)％、(21.27±4.04)％、(38.68±4.57)％、(62.45±6.12)％ (P ＜0.05),c-myc、p-MAPK蛋白明显下降,MAPK蛋白表达无变化.结论 大黄素可能通过抑制MAPK信号转导途径抑制QBC939细胞增殖.
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回肠转位术对Yorkshire幼猪体质量、血胰高血糖素样肽-1水平及葡萄糖耐量的影响
目的 观察回肠转位手术对Yorkshire幼猪体质量、肠激素胰高血糖素样肽-1(GLP-1)水平以及血糖代谢的影响.方法 将17只Yorkshire幼猪随机分为IT组及Sham组,分别实施回肠转位手术及Sham手术,监测每周体质量变化,术后4周行葡萄糖耐量试验,检测幼猪血糖水平绘制成曲线并计算曲线下面积,抽取葡萄糖灌注后0 min和40 min静脉血行GLP-1水平检测.结果 术后第4周,IT组体质量[(32.1±2.31) kg]较Sham组[(34.1±1.78) kg]差异无统计学意义(Z=0.42,P＞0.05);IT组血糖峰值[(10.58±2.85) mmol/L]较术前[(13.50±2.56) mmol/L,Z=2.31,P＜0.05]显著降低,且IT组平均峰值时间[(90.00±10.54) min]较Sham组[(50.00±5.16) min]明显延迟(Z=2.29,P＜0.05).IT组DGTT全程180 min糖耐量曲线下面积[(1568.9±546.3)mmol/L×min]较术前基线水平[(1938.4±873.4) mmol/L × min]明显减少(Z=2.26,P＜0.05);术后第4周,葡萄糖灌注后40 min血浆GLP-1水平,IT组[(10.0±1.56) ng/L]明显高于Sham组[(4.27±1.68) ng/L,Z=2.12,P＜O.05].结论 回肠转位手术能在术后早期提高机体GLP-1肠激素水平,降低血糖峰值,延迟峰值时间,使机体的葡萄糖耐量得以改善,而这一效应与早期体质量变化无关.
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携带一氧化氮合酶反义基因重组腺相关病毒载体抑制大鼠脑胶质瘤生长增殖的研究
目的 建立大鼠脑胶质瘤模型,诱导型一氧化氮合酶反义RNA重组腺相关病毒载体(rAAV-AsiNOS)在体内抑制大鼠脑C6胶质瘤生长增殖以及对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响.方法 采用立体定向技术将C6胶质瘤细胞接种于SD大鼠的右侧尾状核区,建立大鼠脑胶质瘤模型,造模7d后根据注入肿瘤内物质不同分为对照组(生理盐水)、rAAV-LacZ组(重组腺相关病毒载体rAAV-LacZ)和rAAV-AsiNOS组,设立空白组(只进行类似立体定向开颅手术但未接种C6细胞).各组于造模前(第1天)、造模后7d(第8天,转染前)和转染7d(第15天)分别进行神经功能缺失评分;于转染前和转染7d接受MR平扫及增强检查;于转染7d测定大鼠脑胶质瘤重量和体积,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析大鼠脑胶质瘤中iNOS和VEGF mRNA表达水平.结果 对照组和rAAV-LacZ组转染后神经功能缺失均加重,rAAV-iNOS组转染后神经功能缺失改善.转染后7d MR结果示对照组和rAAV-LacZ组脑肿瘤大于转染前,rAAV-iNOS组病灶缩小,部分坏死.RT-PCR结果示:对照组、rAAV-LacZ组及rAAV-iNOS组中iNOS mRNA表达分别为:0.67 ±0.04、0.72±0.07、0.21±0.02;对照组、rAAV-LacZ组及rAAV-iNOS组中VEGF mRNA表达分别为:0.71±0.08、0.76±0.07、0.29±0.02; iNOS和VEGF mRNA在rAAV-iNOS组表达均比对照组和rAAV-LacZ组明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 携带iNOS反义RNA腺相关病毒载体rAAV-iNOS,能够抑制大鼠脑胶质瘤中iNOS表达,调控VEGF合成,减少胶质瘤血管形成,发挥体内抗胶质瘤机制.
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负载k-ras抗原的树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞对肺癌细胞的体内杀伤作用
目的 观察k-ras突变多肽致敏的树突状细胞(DC)诱导活化的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肺癌细胞的体内杀伤作用.方法 联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)1000 mg/L和白细胞介素4(IL-4) 500 mg/L诱导外周血DC,分别使用表达k-ras突变体的肺癌细胞抗原、单纯k-ras突变体抗原表位肽和k-ras突变体抗原表位肽阳离子纳米颗粒致敏DC,进而通过诱导刺激T淋巴细胞得到特异性的CTL.分别使用肺癌A549、NCH-446细胞株建立荷瘤裸鼠模型,以评价CTL体内抗肿瘤活性.结果 负载全瘤抗原的DC诱导产生的CTL对表达k-ras阳性(A549)的肺癌细胞具有较好的抑制作用,而对k-ras表达阴性(NCH-446)的肺癌细胞抑制作用与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 负载肿瘤抗原的DC诱导CTL能够显著抑制肿瘤的生长速度,进而提高荷瘤裸鼠的生存时间,表明其可增加特异性抗肿瘤作用.
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脾脏缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨远程缺血预处理(RIPC)对肝缺血再灌注损伤(HIRI)的影响及其机制.方法 将36只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)仅行开腹及肝门分离;缺血再灌注模型组(IR组)采用Pringle's法阻断肝门15 min,再灌注2h;缺血预处理组(RIPC组)首先阻断脾动脉15 min,放开15 min,后其操作同IR组.各组大鼠在再灌注2h后分别取门静脉血清测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST);取肝组织作病理学检查、免疫组织化学法肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和P-选择素测定.结果 与Sham组比较,血清ALT、AST水平在IR组[(466.75±89.45)、(782.25±87.71) U/L)]和RIPC组[(231.87 ±50.80)、(326.75 ±19.12) U/L]明显升高(P＜0.05);肝组织病理损伤评分升高(P＜0.05);肝组织内TNF-α和P-选择素表达升高(p＜0.05).其中上述指标在RIPC组中水平较IR组均明显降低(P＜0.05).结论 脾脏缺血预处理可减轻HIRI,分析其原因可能是通过减少黏附因子的表达,减轻中性粒细胞的聚集,从而减少炎性损伤而发挥作用.
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灵长类动物桡神经缺损修复模型的功能学评价
目的 探讨灵长类动物桡神经缺损修复后功能学的评价方法.方法 解剖3只猕猴桡神经,建立5只猕猴双侧桡神经25 mm缺损的模型,分别用自体神经(A组)及去细胞猪神经(B组)桥接神经缺损(5侧/组).术后观察猕猴一般情况及伸腕活动;于术前、术后1周、术后5个月,诱导、测量并计算术后累积大伸腕角度(DEmax)和伸腕角度恢复率(R)以评价神经功能的修复效果.结果 桡神经在桡侧腕长伸肌第一肌支发出点以近可显露长度为52 ～ 62 mm,直径为3.3～4.1 mm;术后猕猴即时出现垂腕、垂指畸形,一般情况好,术后5个月A、B组DEmax和R的均值分别为120°、96°和99％、69％.结论 该模型安全、简便,可动态、定量评价神经功能恢复情况.
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趋化因子受体-6小干扰RNA对人肝癌HCCLM6细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用
目的 观察小干扰RNA(siRNA)沉默趋化因子受体-6(CCR6)对人肝癌HCCLM6细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用.方法 利用针对CCR6基因的siRNA建立CCR6-短发卡RNA(shRNA)稳定转染细胞株,并建立裸鼠皮下移植瘤模型.将18只裸鼠随机分为3组:Mock对照组、CCR6-Scrambled对照组和CCR6-siRNA组,每组6只,5周后处死.实验期间观察各组裸鼠的肿瘤生长,测量肿瘤长短径并描绘肿瘤生长曲线;称量瘤重并计算抑瘤率;取肝、肺组织观察并计数转移灶.结果 Mock对照组、CCR6-Scrambled对照组和CCR6-siRNA组肿瘤体积分别为:(843.92±291.08)、(809.08±263.74)、(314.17-±93.42) mm3,CCR6-siRNA组生长相对缓慢(P＜0.05);Mock对照组、CCR6-Scrambled对照组和CCR6-siRNA组肿瘤重量分别为:(1.55 ±0.38)、(1.43 ±0.29)、(0.71 ±0.22)g,CCR6-siRNA组肿瘤重量小于对照组(P＜0.05),抑瘤率为52.35％;CCR6-siRNA组肝、肺转移灶数目较对照组减少(P＜0.05).结论 CCR6-siRNA能够有效抑制人肝癌皮下移植瘤的生长和转移.
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卡托普利对缺氧型肺动脉高压大鼠影响及机制
目的 观察慢性缺氧所致肺动脉高压大鼠肺血流动力学、肺动脉病理和肺组织3-磷酸肌醇激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt) mRNA、蛋白表达变化,探讨卡托普利对慢性缺氧所致肺动脉血流动力学、肺动脉平滑肌增殖及PI3 K/Akt mRNA、蛋白表达的影响.方法 将30只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=10)、肺高压组(n=10)、卡托普利组(n=10).后两组慢性缺氧4周后,建立缺氧型肺动脉高压动物模型.卡托普利组大鼠每天灌胃卡托普利100 mg/(kg·d),对照组和肺高压组每天灌胃等量生理盐水.慢性缺氧28 d后,测定平均肺动脉压(mPAP)及右室收缩压(sRVP);观察右室肥厚程度,计算右室重量/(左室+室间隔)重量比值,以[RV/(LV+S)]表示;计算肺中、小血管肌型动脉相对中膜厚度(RMT);采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、Western blot分别观察大鼠肺组织PI3K/Akt mRNA、蛋白表达.结果 与对照组比较,肺高压组大鼠mPAP为(38.3±2.3) mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)、sRVP为(57.1 ±4.8)mm Hg、RV/(LV+S)为(0.47±0.03)％、RMT为(53.9±5.9)％,比值显著增高(P＜0.05),肺组织PI3 K/Akt mRNA为(6.2±0.4)、蛋白表达水平显著增高(P＜0.05).与肺高压组比较,卡托普利组mPAP为(16.5±0.6)mmHg、sRVP为(22.8-±0.7)mm Hg、RV/(LV+S)为(0.35±0.03)％、RMT为(30.5±3.8)％,比值显著低于肺高压组(P＜0.05),肺血管PI3K/Akt mRNA表达水平显著降低(2.5±0.4,P＜0.05);卡托普利组mPAP、sRVP、RV/(LV+S)与对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);PI3K/Akt mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 慢性缺氧导致大鼠产生肺动脉高压、肺动脉平滑肌增殖并且其肺组织PI3K/Akt mRNA、蛋白表达增加,而口服卡托普利降低慢性缺氧大鼠肺动脉高压、平滑肌增殖和下调肺组织PI3K/Akt mRNA、蛋白表达.
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肿瘤抑素相关肽T42肽的构建、纯化及其抗肝癌细胞活性
目的 采用基因工程技术成功构建出肿瘤抑素相关肽T42肽,然后用基因工程重组菌pgex-4t-t使其高效表达,并提取纯化T42肽,观察其抗肝癌细胞活性.方法 用人工合成T42基因,将其链接到pgex-4t-1表达载体中,构建表达载体pgex-4t-t42,将该质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中培养,采用几丁质柱亲和层析纯化T42肽.在体外对肝癌细胞进行噻唑蓝(MTT)实验,实验分4组:T42肽组、磷酸盐缓冲液(PBS)阴性对照组、氟尿嘧啶阳性对照组和空白对照组.T42肽组与氟尿嘧啶组分别加入不同浓度的肿瘤抑素T42肽和氟尿嘧啶,浓度梯度为10、20、30、40、50 mmol/L,PBS组加入等体积的PBS,比较不同浓度T42肽作用下细胞存活率的变化,观察T42肽对人肝癌HepG2细胞、LO2细胞活性的影响.结果 成功提取纯度在90％以上的T42肽,其相对分子质量与理论值基本一致.MTT实验结果显示:PBS对照组细胞的存活率为(96.86±1.12)％,T42肽组及氟尿嘧啶组的细胞存活率明显高于与PBS组,差异均有统计学意义(P＜0.01),而T42肽组与氟尿嘧啶组间的差异无统计学意义(P＞0.05).随着T42肽药物浓度的升高HepG2细胞的存活率逐渐下降.吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色结果显示,浓度为30 mmol/L的T42肽作用48 h后,HepG2细胞出现核皱缩、胞膜受损等细胞凋亡的特征性变化.结论 T42肽可明显抑制人肝癌细胞HepG2的生长增殖,并促进其凋亡,显示出较强的抗肿瘤细胞活性.
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骨髓基质干细胞神经分化微小RNA表达谱研究
目的 利用基因芯片筛选出骨髓基质干细胞(BMSCs)诱导分化前后差异表达的微小RNA(miRNA),寻找可能的神经分化特异性的miRNA.方法 从小鼠骨髓中分离骨髓基质干细胞,采用β-巯基乙醇(β-ME)、丁羟基茴香醚(BHA)、维甲酸及碱性成纤维生长因子(bFGF)定向诱导小鼠BMSCs向神经细胞方向分化,用免疫荧光染色进行鉴定.利用基因芯片技术,筛选出分化前后差异性表达的miRNAs,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术,对筛选出的差异miRNA进行验证,利用靶基因预测软件对表达差异明显的miRNA进行靶基因预测.结果 (1)骨髓基质干细胞分化后,细胞呈现典型的神经细胞形态,可见神经样轴突和胞体的锥样改变,免疫荧光染色显示神经元特异性烯醇化酶(NSE)在分化后的细胞中表达.(2)小鼠骨髓基质干细胞分化后一共有18个miRNAs表达升高,4个miRNAs表达下降.FQ-PCR验证结果总体上与芯片检测的结果一致.结论 miRNA在骨髓基质干细胞神经分化过程中大量表达,它们可能对骨髓基质干细胞的神经分化进程起重要的调控作用.
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保留骨膜的兔桡骨缺损性骨不连模型中临界骨缺损量的研究
目的 探讨新西兰大白兔保留骨膜的桡骨缺损性骨不连动物模型中的临界骨缺损量.方法 选取40只成年新西兰大白兔,制成保留骨膜的桡骨缺损长度分别为10、15、20、25、30 mm 5组实验兔,每组8只,分别在4、8、12、16周时拍X线片,观察其骨不连情况.结果 在保留骨膜的情况下,25～30 mm缺损长度为该模型临界骨缺损量的参考值,或桡骨缺损长度达桡骨全长的35.5％～42.4％、桡骨缺损长度达桡骨横径的6～7倍时出现骨不连.结论 该数值为新西兰大白兔保留骨膜的桡骨缺损性骨不连动物模型的临界骨缺损值.
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程序性死亡配体-1基因转染对大鼠肝移植术后细胞因子的影响
目的 观察腺相关病毒(AAV)介导的程序性死亡配体-1(PD-L1)基因转染对大鼠肝移植术后干扰素(INF)-γ、白细胞介素(IL)-17、IL-10及转化生长因子-β1 (TGF-β1)等的影响.方法 96只近交系大鼠随机分为等基因组(G1)、同种异体组(G2)、空载体组(G3)和转染组(G4),每组12对.通过大鼠肝移植急性排斥模型,采用夹闭法将PD-L1-AAV2-红色荧光蛋白(RFP)转染供肝,观察大鼠中位生存时间(MST),全自动生化分析仪测定肝功能,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测受体移植肝IL-10、IL-17、INF-γ及TGF-β1的表达.结果 G1组全部存活;G2、G3组MST分别为18(17 ～20)、18(17～19) d;G4组显著延长了其存活(MST 29 d)(P＜0.05).术后14d G4组肝功能及病理变化与7d G2、G3组相似.除G1组1NF-γ无表达外,余组移植肝INF-γ与IL-17表达类似.G1组术后7 d IL-17水平明显升高,后渐降至28.9 ng/g,仍高于3d;G2、G3组移植肝INF-γ、IL-17水平3d高表达,并渐增强,均在14d达峰值418.6、382.9 ng/g.而G4组虽高表达,但其幅度及浓度均低于G2、G3组,除G4组3d外,差异有统计学意义(Jp＜0.05).各组移植肝TGF-β1与IL-I0表达类似,G1组术后3d升高至170.2、106.2 ng/g,后渐降,但仍高于G2、G3组;而G4组术后3d高表达,14d达峰值564.1、614.9 ng/g,除G4组3d外,各组TGF-β1、IL-10均高于G2、G3组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AAV介导的PD-L1基因转染可延长移植肝的存活,其机制可能是基因转染增强了PD-L1/PD-1信号通路,在上调IL-10、TGF-β1表达的同时,下调INF-γ、IL-17的表达,从而发挥对移植肝的保护作用.
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超顺磁性纳米榄香烯对大肠癌HCT-116细胞增殖、侵袭及微小RNA-155表达的影响
目的 观察超顺磁性纳米榄香烯对人大肠癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其可能机制.方法 制备超顺磁性纳米榄香烯,采用不同浓度的超顺磁性纳米榄香烯处理人大肠癌HCT116细胞后,以噻唑蓝(MTT)法检测癌细胞增殖,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测癌细胞微小RNA(miR)-155 mRNA水平.结果 超顺磁性纳米榄香烯对人大肠癌HCT116细胞增殖具有一定的抑制作用.在2.5～25.0 mg/L浓度范围内,超顺磁性纳米榄香烯对癌细胞的抑制与浓度呈正相关(r =0.685);Transewell结果显示,空白对照组、不同浓度(5、10、20 mg/L)超顺磁性纳米榄香烯处理组细胞穿过滤膜的细胞分别为(44.8±1.5)、(32.2±1.3)、(18.2±1.5)和(8.6±1.2)个.FQ-PCR结果显示,与空白对照组比较,超顺磁性纳米榄香烯组miR-155 mRNA水平明显下调,且呈浓度依赖性(P＜0.01).结论 超顺磁性纳米榄香烯可降低人大肠癌细胞增殖、侵袭能力,下调miR-155是其重要机制之一.
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胃转流术对2型糖尿病大鼠肝组织胰岛素受体底物-2、葡萄糖转运体-2表达的影响
目的 观察胃转流术(GBP)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝组织胰岛素受体底物-2(IRS-2)、葡萄糖转运体-2(GLUT-2)表达的影响,探讨GBP改善胰岛素抵抗的机制.方法 健康雄性SD大鼠随机分为糖尿病手术组(DO组)、糖尿病对照组(DC组)、正常手术组(NO组)、正常对照组(NC组).术前及术后第1、2、4、8周分别测各组空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)水平,计算各组术前与术后第8周胰岛素敏感指数(QUICKI).应用Western blot及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组术后8周肝脏组织IRS-2、GLUT-2蛋白及mRNA的表达.结果 术后8周,DO组FPG由术前的(20.21±2.14) mmol/L下降至(8.50±2.19) mmol/L(P＜0.05);DO组QUICKI由术前的0.43±0.02升至0.55±0.05(P ＜0.05);DO组与DC组比较,IRS-2、GLUT-2的蛋白表达分别增加43％和40％ (P ＜0.05),IRS-2、GLUT-2的mRNA表达分别增加28％和25％ (P＜0.05).结论 GBP可上调T2DM大鼠肝脏组织胰岛素信号传导通路中IRS-2、GLUT-2的表达水平,提高胰岛素敏感性.
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转染内皮型一氧化氮合酶的CD34+细胞早期抗血小板聚集的效果及机制
目的 研究一氧化氮合酶基因转染对CD34+骨髓干细胞体外抗血小板聚集的影响,并初步探讨其作用机制.方法 取犬骨髓,经免疫磁珠分离出CD34+细胞,脂质体转染质粒内皮型一氧化氮合酶(eNOS),内皮细胞生长因子诱导并扩增.检测脂多糖(LPS)刺激组织因子(TF)表达,血小板黏附实验检测体外抗血小板黏附效果.结果 体外血小板黏附实验显示eNOS-CD34+细胞抗血小板聚集作用显著高于非转染组.经LPS刺激后,TF免疫荧光检测可见eNOS-CD34+细胞荧光明显弱于空转染CD34+细胞荧光.Western blot检测发现eNOS-CD34+细胞TF蛋白表达明显弱于空转染CD34+细胞组.结论 eNOS基因转染明显提高CD34+骨髓干细胞体外抗血小板聚集作用,其机制可能与抑制TF表达有关.
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醋甲唑胺对自发性蛛网膜下腔出血小鼠认知功能的影响
目的 探讨醋甲唑胺对自发性蛛网膜下腔出血(SAH)小鼠认知功能损害的影响及机制.方法 90只雄性C57 BL/6J小鼠随机分为假手术组、SAH组及醋甲唑胺组,用血管内刺破法建立SAH模型,激光多普勒血流仪记录出血侧脑血流量的变化.旷场试验评价小鼠的感觉运动及认知功能,原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测出血侧海马的变性和凋亡神经元的变化,免疫组织化学法检测海马区的活化型半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达.结果 SAH总死亡率为25.3％,其中SAH组26.1％,醋甲唑胺组24.4％,差异无统计学意义(P＞0.05).醋甲唑胺组3、7、14d的旷场试验运动总距离及中央格时间较SAH组改善明显(P＜0.05);在出血侧大脑半球,SAH组(87.11 ±6.73) μm及醋甲唑胺组(89.39±7.22)μm的大脑中动脉直径较假手术组的大脑中动脉直径(106.89±8.66) μm明显变小(P＜0.05),但SAH组和醋甲唑胺组大脑中动脉直径比较差异无统计学意义(P＞0.05);醋甲唑胺组出血侧海马区TUNEL阳性细胞与SAH组比较明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05);醋甲唑胺组出血侧海马区Caspase-3阳性细胞比值与SAH组比较明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 醋甲唑胺可改善SAH小鼠的认知功能,并可能是通过抑制Caspase-3的激活、抑制海马神经元的凋亡起作用.
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上调视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1后食管癌细胞基因表达谱的变化
目的 观察转染视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1(RIZ1)后,食管鳞状细胞癌TE13细胞株基因表达谱的改变.方法 培养TE13细胞株,1∶10传代后培养至对数生长期,脂质体法分别转染pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(+)/RIZ1真核表达载体,转染成功后,应用Agilent人类全基因表达谱基因芯片筛选转染前后的差异基因(差异倍数≥2.0或≤0.5),用聚合酶链反应(PCR)验证结果和对差异基因功能分析.结果 差异基因总共有2123个,其中上调960个,下调1163个,功能主要集中在细胞发育、病毒复制的监管等.RIZ1基因可能参与包括细胞因子受体互相作用等多种信号通路.结论 RIZ1基因通过多种途径发挥作用,为进一步研究RIZ1基因与食管癌间的关系提供了依据.
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聚甲基丙烯酸羟乙酯/二氧化硅/羟基磷灰石人工软骨材料的制备及细胞相容性的影响
目的 制备一种新型的人工软骨材料,探讨其细胞相容性.方法 将聚甲基丙烯酸羟乙酯(PHEMA)与0.5％二氧化硅(SiO2)及1％～5％羟基磷灰石(HA)复合制备成复合材料,采用噻唑蓝(MTT)法测定材料的细胞毒性及兔软骨细胞增殖状况;比色法检测碱性磷酸酶活性.结果 PHEMA材料加入0.5％ SiO2不改变软骨细胞增殖活性;软骨细胞活性与PHEMA/0.5％ SiO2材料中HA含量有关;并且PHEMA/0.5％ SiO2材料中含1％ HA适合软骨细胞生长,有良好软骨细胞黏附性.结论 加入适量的HA能提高PHEMA为基体的人工软骨材料的细胞相容性.
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花生四烯酸乙醇胺诱导人U251胶质瘤细胞增殖凋亡的研究
目的 观察大麻受体激动剂花生四烯酸乙醇胺(AEA)诱导人U251胶质瘤细胞凋亡中的作用.方法 体外培养人U251胶质瘤细胞,并将U251胶质瘤细胞株分为空白对照组,分别含AEA药液1、5、10 μmol/L DMEM培养液共4组,以24、48 h作为药物作用时间进行观察.在倒置显微镜下观察细胞形态变化,通过流式细胞仪检测细胞凋亡,激光共聚焦显微镜观察经Hoechst 33258染色的药物作用细胞爬片.结果 各对照组细胞生长良好,各实验组细胞出现不同程度的细胞变圆、漂浮和细胞碎片;流式细胞仪检测显示通过5 μmol/L AEA作用24 h后,可出现早期细胞凋亡,10 μmol/L AEA作用48 h后早期凋亡率为(43.78±3.45)％;激光共聚焦显微镜证明AEA处理U251细胞后,能诱导细胞凋亡,染色质固缩.结论 AEA可以诱导人U251胶质瘤细胞早期凋亡,并呈剂量、时间依赖性.
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腺苷预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后B细胞白血病/淋巴瘤-2、B细胞白血病/淋巴瘤-2相关蛋白X表达的影响
目的 观察腺苷对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后细胞凋亡及B细胞白血病/淋巴瘤-2(bcl-2)和B细胞白血病/淋巴瘤-2相关蛋白X(bax)表达的影响,探讨其对脊髓损伤的保护作用.方法 通过阻断大鼠肾动脉水平的腹主动脉90 min建立大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型.27只成年健康雄性SD大鼠随机分成3组,每组9只.实验分组如下:A组:假手术组;B组:缺血再灌注损伤组;C组:腺苷预处理组.每组分别设置再灌注12、24、48h3个时间点,于各时间点观察大鼠并对其后肢运动功能进行评分,取再灌注48 h大鼠的L2～L5节段脊髓组织作苏木素-伊红(HE)染色及尼氏(Nissl)染色,透射电镜观察超微结构,Western blot、实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)分别检测bcl-2和bax蛋白及mRNA的表达.结果 HE染色及Nissl染色结果显示:C组细胞水肿、尼氏体溶解等组织形态学变化较B组轻;透射电镜观察结果显示:C组的神经元超微结构损伤较B组轻;Western blot及RT-qPCR检测结果显示:腺苷能降低bax的表达,增强bcl-2的表达.结论 腺苷可减轻脊髓缺血再灌注损伤所造成的损害,促进神经功能的恢复.
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腺病毒介导的黑色素瘤分化相关基因-7抑制内质网应激蛋白表达阻滞MHCC-97H血管形成及转移机制的研究
目的 探讨黑色素瘤分化相关基因(MDA)-7抑制内质网应激蛋白表达,以及阻滞MHCC-97H血管形成的机制.方法 以人肝癌细胞株MHCC-97H为实验对象,使用噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪比较Ad.MDA-7及对照组、缺氧组及正氧组的细胞生存率,比较缺氧环境中,MHCC-97H凋亡率的变化.荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测MDA-7、细胞外信号调节激酶(ERK)、E-钙黏蛋白(E-cad)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA的变化.Western blot检测MDA-7、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、E-cad、VEGF、MMP-9蛋白表达的变化.结果 MTT表明缺氧条件下,正氧组正常肝细胞LO2生长抑制率分别为(12.60±4.85)％,(7.80±0.61)％,Ad.MDA-7对正常肝细胞LO2无生长抑制作用.肝癌细胞株MHCC-97H生长抑制率缺氧组,正氧组分别为(5.10±0.09)％、(4.80±0.05)％.缺氧环境中,ERK、VEGF和MMP-9空白组及空白对照组mRNA表达量为[(18.042 ±5.915)/(17.512 ±6.354)、(22.654±5.976)/(22.587 ±7.741)、(22.654±2.789)/(22.587±8.551)]高于正氧组[(10.987±2.514)/(12.347±4.385)、(15.321 ±4.262)/(15.634 ±8.521)、(15.321 ±6.384)/(15.634±4.423)].缺氧环境中,E-cad mRNA空白组及空白对照组[(6.427 ±0.512)/(6.042±1.972)]表达低于正氧组[(10.987±2.514)/(12.347 ±4.385)],而Ad.MDA-7干预后,ERK、VEGF和MMP-9 mRNA缺氧组及正氧组表达量降低[(4.117±1.843)/(5.683±0.794)、(5.371 ±0.541)/(4.209 ±0.348)、(5.371 ±0.941)/(4.209±0.265)],E-cad表达量明显增加[(19.573 ±5.971)/(21.309±8.544)].PERK、VEGF和MMP-9蛋白表达与mRNA一致.结论 缺氧环境中,肝癌细胞株MHCC-97H生长抑制率与正氧环境中差异无统计学意义,MDA-7基因明显抑制PERK表达,抑制肝癌细胞血管生成作用.同时,MDA-7基因增强E-cad表达,协同其作用,抑制肿瘤细胞转移.
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不同填充材料在修复羊椎体内骨缺损的吸收与成骨特性
目的 观察不同填充材料在修复羊椎体内骨缺损中的吸收与成骨特性.方法 采用成年健康山羊6只,每只羊的L1-6椎体分为4组,分别填充羊同种异体骨、丙烯酸树脂骨水泥及CemOsteticTM人工骨浆,T12椎体空腔未填充作为空白对照.于术后4、8、12周分别处死2只山羊,取出椎体组织块,制备为脱钙组织切片,行苏木素-伊红(HE)染色并进行组织学观察.结果 通过大体观察,羊腰椎椎弓根深度为(13.1±1.3)mm、横径为(16.9±1.5) mm、矢状径为(12.8-±1.3) mm、椎体高度为(29.8±1.6) mm.所有羊均成活,通过组织学观察发现,在12周时,空白对照组缺损处为纤维结缔组织结构,内无骨小梁结构;羊同种异体骨组缺损内吸收明显,有大量骨小梁及成骨细胞;丙烯酸树脂骨水泥组骨水泥-骨小梁界面可见大量缺损存在,周围可见大量炎性细胞;Cem-OsteticTM人工骨浆组可见散乱的骨小梁,周围有大量成骨细胞和破骨细胞.结论 除丙烯酸树脂骨水泥组外,其余两种材料填充椎体内骨缺损处均可见生物降解性及成骨性存在,其中同种异体骨在成骨方面较为显著.
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细胞凋亡在兔体外循环肺损伤中的作用
目的 探讨细胞凋亡在体外循环(CPB)肺损伤中的作用机制.方法 选取健康新西兰大白兔20只,随机分为CPB组和对照组(Sham组,单纯开胸).测定各组围CPB期左右心房中性粒细胞计数、氧合指数;取肺组织样本,电镜观察其超微结构,并动态记录肺组织含水量、细胞凋亡相关因子B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、Fas配体(FasL)的表达和bcl-2/bax及细胞凋亡指数变化.结果 CPB后,CPB组较Sham组氧合指数明显下降(P＜0.05),中性粒细胞在肺内明显聚集(P＜0.05),肺组织含水量显著增加(P＜0.05).同时,肺组织细胞凋亡指数明显升高[CPB 30 min,(51.13 ±9.87)‰比(1.27-1.03)‰,P＜0.05;CPB停止即刻,(59.64±7.74)‰比(1.30±0.82)‰,P＜0.05],肺泡上皮细胞FasL蛋白表达增加[CPB 30 min,(53.84±8.64)％比(4.25±1.41)％,P ＜0.05;CPB停止即刻,(81.88±9.67)％比(4.32±1.32)％,P＜0.05],bax蛋白表达增加[CPB 30 min,(56.78±9.12)％比(6.69±1.00)％,P＜0.05;CPB停止即刻,(77.28±8.48)％比(6.96±1.03)％,P＜0.05],bcl-2蛋白表达下降[CPB 30 min,(15.25±1.98)％比(22.87±3.15)％,P ＜0.05;CPB停止即刻,(10.35±1.67)％比(23.54±2.34)％,P＜0.05].结论 体外循环可引发炎性肺损伤,并通过外源性及内源性凋亡途径诱发肺组织细胞凋亡.
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心肌内心电图诊断心脏移植术后急性排斥反应的研究
目的 探讨应用心肌内心电图QRS波幅诊断大鼠心脏移植术后急性排斥反应的佳临界值.方法 建立改良Ono法大鼠腹部异位心脏移植模型,在心脏移植术中分别于供心右室流出道、左室游离壁的心肌处埋置心表起搏导线,描记心肌内心电图,测量QRS波波幅.对照组大鼠(10只)术后第7天处死,实验组大鼠(30只)分别在术后3、5、7d处死,取移植心脏进行病理检查.结果 病理结果阴性和阳性的QRS波幅分别为(94.4±4.6)％、(76.2±10.5)％,两者差异有统计学意义(P ＜0.05);QRS波幅的受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.958,在佳分割点90％的灵敏度为90.5％,特异度为88.9％,阳性预测值为95％,阴性预测值为80％,符合率为90％.结论 QRS波幅是诊断大鼠心脏移植术后急性排斥反应可靠性较高的指标,在缺乏心肌活检条件时,可以作为诊断急性排斥反应的指标.
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磷脂酰肌醇-3激酶在犬体外循环缺血再灌注心肌胰岛素抵抗发生机制中的作用
目的 检测在犬体外循环(CPB)缺血再灌注心肌胰岛素抵抗过程中磷脂酰基醇3-激酶(PI3K)的表达,观察心肌细胞是否通过PI3K来诱导葡萄糖转运蛋白-4(Glut-4)的转运,探讨体外循环心肌胰岛素抵抗的受体后发生机制.方法 健康杂种犬24条,随机均分为4组(n=6),组Ⅰ主动脉阻断30 min;组Ⅱ主动脉阻断120 min;组Ⅲ主动脉阻断30 min+胰岛素(PI3K激活剂);组Ⅳ主动脉阻断30 min+渥曼青霉素(PI3K抑制剂).分别于CPB转流前、开放主动脉后15、45、75 min时采集心肌组织标本.测定PI3K及Glut-4的变化.结果 心肌细胞Glut-4外膜百分比:于再灌注15 min,4组外膜百分比值分别由转流前(18.68±6.76)％、(19.76±3.41)％、(17.43±5.36)％、(18.43±4.98)％下降至(3.88±1.43)％、(1.89±1.27)％、(4.2l±1.59)％、(0.65±1.32)％,组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ于再灌注45 min有不同程度缓慢上升,组Ⅳ持续下降,至再灌注75 min达低;但与转流前比较,4组差异有统计学意义(P＜0.01);与组Ⅰ比较,再灌注后组Ⅱ、组Ⅳ外膜百分比值下降明显,持续时间长(P＜0.05),组Ⅲ外膜百分比值上升(P＜0.05).PI3K表达变化:缺血再灌注后心肌细胞PI3K表达不同程度下降;于再灌注75 min,4组分别由转流前21.23 ±2.58、22.73土2.45、20.19±37.30、21.76±2.74下降至18.53±1.86、15.44±9.27、24.00±1.90、1.06±0.43;与组Ⅰ比较,组ⅣPI3K表达下降明显(P＜0.01),而组ⅢPI3K表达增强(P＜0.05).结论 CPB缺血再灌注后,PI3K作为主要的信号传导因子,刺激心肌细胞Glut-4从胞质内转运至包膜上,完成对葡萄糖的摄取,即缺血再灌注心肌胰岛素抵抗过程中心肌细胞Glut-4的转运主要通过PI3K途径实现.
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脑源性神经营养因子前体在脊髓损伤后对少突胶质细胞存活及生长的影响
目的 观察脑源性神经生长因子前体(proBDNF)在少突胶质细胞前体细胞(OPCs)的表达及其对OPCs存活及生长的调控作用.方法 取新生C57BL/6小鼠大脑皮层分离少突胶质细胞前体细胞,体外原代培养.应用Western blot法观察proBDNF及其受体p75NTR和sortilin在OPCs内的表达水平;设置100 μg/L胎牛血清白蛋白(BSA)对照组和proBDNF梯度浓度组(1、10、100 μg/L),每组6孔细胞.应用结晶紫及β-tublin染色,观察OPCs细胞形态,评估proBDNF对OPCs生长的影响.结果 Western blot结果显示OPCs细胞内源性表达proBDNF及其受体p75 NTR和sortilin;与BSA对照组比较,proBDNF治疗组OPCs的数量显著减少[(537.67±34.93)个比(440.67±9.29)、(390.67±9.45)、(337.25±7.27)个],差异有统计学意义(P＜0.01);同时proBDNF可以抑制OPCs的生长,与BSA对照组比较,proBDNF治疗组OPCs的长突起减少,照片显示细胞平均面积减小显著[(2.44±0.71) μm2比(1.65±0.12)、(1.30±0.11)、(0.95±0.08)μm2],差异均有统计学意义(1 μg/L proBDNF组P＜0.05,其他组P＜0.01).结论 OPCs内源性表达proBDNF及其受体.proBDNF对OPCs的存活及生长具有抑制作用,该作用可能通过p75 NTR-sortilin通路介导.
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富勒烯介导的光动力疗法对结肠癌腹腔种植小鼠模型的作用
目的 观察富勒烯介导的光动力疗法(PDT)对携带荧光素酶基因的结肠癌腹腔种植模型的作用.方法 采用腹腔注射CT26-luc细胞株的方法建立结肠癌腹腔种植小鼠模型,将富勒烯溶液注射入腹膜腔,24 h后打开腹膜腔进行白光照射(治疗组);同时设立空白对照组、照射组和富勒烯组作为对照.采用体内荧光成像技术对肿瘤病灶进行定量检测,并进行生存率随访.结果 小鼠行PDT后第1天,治疗组的肿瘤荧光值下降(23.74 ±7.50)％,而同期的空白组、照射组和富勒烯组分别增加(18.24±5.39)％、(22.04±5.81)％、(21.20 ±7.48)％,与治疗组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);同时,治疗组的平均生存期高于两个对照组(P＜0.05).结论 富勒烯介导PDT可抑制结肠癌腹腔转移灶的生长,延长小鼠模型的生存期.
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防腐标本椎体成形术、椎体后凸成形术术后大垂直载荷的影响因素
目的 探讨单、双侧注入骨水泥及注入骨水泥前灌洗椎体对椎体后凸成形术(KP)、椎体成形术(VP)术后大垂直载荷的影响.方法 将48个标本分为6组.A、B、E、F组分别行单侧KP、VP手术;C、D组分别行双侧KP、VP手术;E、F组在注入骨水泥前,用生理盐水灌洗椎体.记录术前及术后椎体的大垂直载荷并进行比较.结果 KP及VP术后椎体的大垂直载荷差异无统计学意义(A组与B组:t’=0.746,P＞0.05;C组与D组:t’=0.312,P＞0.05;E组与F组:t’=0.830,P＞0.05);单侧和双侧注入骨水泥后椎体的大垂直载荷差异无统计学意义(A组与C组:t’=0.374,P ＞0.05;B组与D组:t’=0.529;P＞0.05);进行生理盐水灌洗对术后椎体大垂直载荷无明显影响(A组与E组:t’=0.821,P＞0.05;B组与F组:t’=0.449,P＞0.05).结论 单、双侧注入骨水泥以及注入骨水泥前生理盐水灌洗椎体对术后椎体大垂直载荷无明显影响,但注入骨水泥前灌洗椎体可增强术后椎体大垂直载荷.
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成骨细胞促进胚胎干细胞向造血前体细胞分化的研究
目的 观察成骨细胞对胚胎干细胞(ESC)向造血前体细胞分化的促进作用.方法 用平皿黏附法培养BALB/c小鼠骨髓基质细胞,诱导分化为成骨细胞,鉴定后用作支持细胞.将小鼠胚胎于细胞(ESC-D3)先诱导生成胚胎体(EB),再与成骨细胞共培养,3d后进行代表血液血管干细胞的原始细胞集落(BL-CFC)培养并计数;7d后行流式细胞仪检测ESC来源的CD34+细胞生成比例.结果 在成骨细胞的支持下,与空白对照比较,ESC来源的代表血液血管干细胞的BL-CFC集落增加了2.89倍;由ESC生成的CD34+细胞由(12.68±2.39)％增加到(32.83±3.84)％.结论 成骨细胞体外可促进胚胎干细胞向造血前体细胞分化.
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自噬在胰岛素促进顺铂诱导EC9706细胞凋亡中的作用
目的 观察自噬和凋亡在胰岛素对人食管鳞癌细胞化疗增敏中的作用.方法 以140 mg/L顺铂作用于食管鳞癌EC9706细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,探寻活细胞数量达到平台期的时间T1(24 h),加入10 mU/ml胰岛素继续培养,6h后活细胞数再次达到T2平台期.分别收集T1、T2平台期细胞,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和单丹磺酰戊二胺(MDC)染色后,荧光显微镜下定性观察荧光;流式细胞术定量检测细胞凋亡、测定MDC荧光强度;Westernblot检测自噬相关蛋白Beclin-1的表达.结果 (1)T1平台期细胞凋亡率为(32.6±4.3)％,低于T2平台期的(47.5±5.6)％,差异有统计学意义(P＜0.05),但T1平台期细胞MDC平均荧光强度为104.9±13.2,明显高于T2平台期的82.6±10.3,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)加入胰岛素后Beclin-1的表达显著下调,对照组、T1平台期、T2平台期的相对灰度值分别为0.151±0.053、0.657±0.050、0.453±0.032,任意两组之间差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 通过抑制自噬,增加细胞凋亡,胰岛素提高了食管鳞癌细胞对顺铂的敏感性.
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脂联素在皮下缝合促进脂肪组织切口愈合中的抗凋亡作用及机制
目的 观察脂联素在皮下缝合的脂肪组织中的表达水平与脂肪细胞凋亡的关系,探讨脂联素在皮下缝合促进脂肪组织切口愈合中的作用及机制.方法 建立猪脂肪组织切口愈合模型,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测局部脂肪组织脂联素表达水平,应用荧光标记法观察切口局部脂肪细胞凋亡的变化.培养3T3-L1细胞株,应用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)凋亡检测法测定不同浓度的脂联素对细胞凋亡的影响.结果 皮下缝合的局部脂肪组织脂联素水平均显著高于对照组(P＜0.05);术后第3天及第5天皮下缝合组脂肪细胞凋亡数为(29±13)和(15±8)个,分别低于对照组细胞凋亡数[(69±25)、(23±16)个],差异有统计学意义(P＜0.05).随着脂联素浓度升高,细胞凋亡率分别为(26.42±1.58)％、(15.14±1.91)％、(7.04±1.16)％、(5.05±0.83)％,均显著低于空白对照组细胞凋亡率[(33.18±1.86)％],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 脂联素抑制脂肪细胞凋亡是皮下缝合促进脂肪组织切口愈合的作用机制之一.
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生物活性敷料促进创面愈合的研究
目的 观察研制的壳聚糖生物活性敷料对创面愈合的影响.方法 选用10只清洁级Wistar大鼠,于脊柱两侧制备面积约2.0 cm×1.0 cm无菌创面及感染创面动物模型,设立同体对照,实验组用壳聚糖生物活性敷料覆盖,对照组用凡士林纱布(高渗盐水纱布)覆盖,于术后3、7、10、14 d观察创面感染、组织反应、肉芽生长及愈合情况,两组均定期换药直至创面愈合,比较两种敷料对创面愈合的影响.结果 无菌创面及感染创面愈合时间实验组分别为(9.6±1.5)d和(15.3±2.6)d,对照组为(14.6±2.1)d和(19.0±3.2)d,实验组的治疗效果明显优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 研制的壳聚糖生物活性敷料具有控制创面感染及促进创面愈合的作用.
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脂肪特异性蛋白27对肝星状细胞增殖与胶原合成的影响
本研究旨在观察FSP27基因对肝星状细胞(HSCs)增殖与胶原合成的影响,现报道如下.一、材料和方法1.材料:鼠抗平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体购自Southem-Biotech公司;RNA Trizol试剂盒购自Invitrogen公司.2.带Fsp27基因的慢病毒载体构建及细胞感染:构建的重组体慢病毒包含鼠Fsp27基因及绿色荧光蛋白(GFP)基因,对HSCs进行慢病毒感染.根据慢病毒中GFP的表达,测算感染效率.3.Fsp27对细胞表型及细胞增殖的影响:实验分为空白对照组(无病毒转染)、阴性对照组(空载病毒转染)及实验组(Fsp27慢病毒转染),慢病毒转染HSCs后观察细胞表型的变化,细胞计数试剂盒(CCK-8)测算细胞增殖抑制率.
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髓过氧化物酶基因G-463A多态性与颈动脉斑块易损性的相关性
近年来的研究表明,髓过氧化物酶(MPO)及其基因多态性与动脉硬化及其相关疾病的发生密切相关[1].我们应用聚合酶链反应(PCR)技术研究MPO基因多态分布频率在颈动脉硬化脑梗塞患者与健康对照组之间的差异,探讨MPO基因多态性与颈动脉斑块患者易发脑梗塞的相关性.一、材料与方法1.一般资料:选择无血缘关系研究对象165人,均为温州市居民;脑梗塞组97例,均为超声检查诊断为颈动脉斑块的患者,男67例,女30例,平均年龄(51.8±7.7)岁;对照组68例,均为颈动脉超声检查正常者,且为健康体检者,经实验室检查排除冠心病、高血压、高血脂,男41例,女27例,平均年龄(53.4±7.7)岁.
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经皮置管引流联合大黄灌肠治疗重症急性胰腺炎
重症急性胰腺炎(SAP)常伴有腹腔间隔室综合征(ACS)及麻痹性肠梗阻,导致胃肠道功能障碍[1].本研究旨在观察经皮置管引流联合大黄治疗重症急性胰腺炎后胃肠道功能障碍恢复情况,探讨其有效性和安全性.一、资料与方法1.一般资料:收集2010年4月至2013年4月入住本科的60例SAP患者,男36例,女24例,年龄18 ～ 76岁.按照随机数字表法将患者随机分为3组:常规保守治疗组15例(对照组),经皮穿刺引流组22例(PCD组),经皮穿刺引流联合中药大黄灌肠组23例(联合治疗组).2.治疗方法:对照组采用常规治疗,在对照组进行的基础上,PCD组和联合治疗组均采用在B超引导下对胰周积液行经皮置管引流,联合治疗组同时加用中药大黄灌肠.
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转铁蛋白受体基因在大鼠脑内表达成像的研究
基因治疗是目前神经系统疾病的一种重要前沿治疗方法,已应用于多种疾病的治疗[1],病毒载体作为一种基因转移工具已被广泛用于基因治疗和细胞分子生物学研究[2].转铁蛋白受体基因是目前研究较多的磁共振报告基因之一[3],其配体转铁蛋白能够通过配体-受体系统通过血脑屏障[4].我们以转铁蛋白受体基因(TfR)为研究对象,利用核共振成像(MRI)的活体示踪技术将这些探针特异性结合的脑内转基因神经细胞.一、材料与方法1.材料:健康成年SD大鼠12只(清洁级),Buker Sigma 7.0T超导型磁共振,转铁蛋白纳米铁螯合物(Tf-USPIO)购自北京万德高科.
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兔VX2肝脏原位种植瘤的超声造影增强模式与定量分析
我们根据超声造影总结了兔VX2肝脏原位种植瘤模型的增强方式及生长过程中血供特点,为不同研究方向的模型选择与实验设计提供依据.一、材料与方法1.材料:清洁级新西兰大白兔,雌性,体质量2.0 ～2.5 kg,术前禁食12 h,不禁水.荷瘤兔由东南大学附属中大医院介入科惠赠.2.兔VX2肝脏原位种植瘤的构建:氯胺酮,地西泮(1∶1)经耳缘静脉注射麻醉荷瘤兔,无菌条件下取出VX2肿瘤,用眼科剪剪成约1 mm大小的瘤块备用.新西兰大白兔麻醉成功后取仰卧位固定,经剑突下正中切口进腹,暴露肝脏左叶.粗针头插入肝脏实质,形成一口小底大的隧道.将瘤块自肝包膜开口处送入隧道底部.
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烫伤大鼠早期血小板活化因子水平变化及其与烧伤程度的关系
血小板活化因子(PAF)是一种主要由多种炎性细胞产生的内源性磷脂介质[1],具有强烈的促血小板(PLT)聚集和释放作用,能增加血管壁的通透性,与炎性反应密切相关,参与损伤后多种炎症介质的“中心放大”介导作用,是创伤、休克等多种疾病的重要致病因子,与其发生和转归密切相关2].本研究旨在探讨烫伤早期SD大鼠血清PAF的变化及其与烧伤程度的相关性.一、材料与方法1.材料:自动酶标仪(型号:RT-2100C,深圳雷杜公司);医用离心机(型号:LD4-2A,北京医用离心机厂);KELON低温冰箱(型号:BCD-191W/HC,广东科龙有限公司);721型分光光度仪(上海欣茂仪器有限公司);血常规测定仪(型号:ZBG51-MTN-21,北京中西远大有限公司);大鼠PAF酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂(上海史瑞可生物技术有限公司提供,批号:2009041004).
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异黏蛋白在乳腺癌细胞中的表达
异黏蛋白(MTDH)作为一个癌基因,可在全身多种肿瘤中过表达[1].MTDH的过表达可能与乳腺癌的耐药和转移有关.本研究旨在测定4种乳腺癌细胞中MTDH的表达水平,探讨MTDH的表达与乳腺癌细胞生物学特性之间的关系.一、材料与方法1.材料:乳腺癌细胞:MDA-MB-231、MCF-7、 MDA-MB-435S、 MCFG/ADR.TransStart Top Green qPCR Supermix,逆转录试剂盒,MTDH鼠抗人单克隆抗体.2.实时定量聚合酶链反应(Realtime PCR):抽提细胞RNA合成cDNA,进行聚合酶链反应.内参基因为甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH),内参引物和MTDH引物参照文献[2].ABI7500仪器设置为SYBR Green法,计算2-△△Ct,进行统计分析.
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Genipin对肾癌细胞解偶联蛋白2和线粒体的影响
我们选取解偶联蛋白2(UCP2)作为切入点,采用不同剂量Genipin干预肾癌GRC-1细胞,探讨Genipin对肾癌的作用及其机制.一、材料与方法使用40、80、120 μmol/L 3种浓度的Genipin干预细胞48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡,噻唑蓝(MTT)法计算GRC-1细胞凋亡率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测量UCP2 mRNA含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)法定量细胞内UCP2蛋白表达;使用荧光探针检测细胞内钙离子与线粒体活性氧(ROS)含量;分光光度仪检测线粒体膜通道转运孔(MPTP)开放度和线粒体膜电位(△Ψm)的变化.数据采用SPSS 19.0统计学软件分析,组间均数采用单因素方差分析.
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阻断钙调磷酸酶/活化T细胞核因子通路抑制钛颗粒诱导的骨溶解
人工关节置换术治疗严重关节疾患的早期效果良好,但假体后期失效问题日益突出.磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解是导致假体失效的重要因素[1].体外研究结果显示,磨损颗粒可明显抑制成骨细胞分化,促进破骨细胞分化及活化[2].通过11R-VIVIT肽特异性阻断钙调磷酸酶/活化T细胞核因子(Cn/NFAT)通路可促进骨祖细胞向成骨细胞分化,并促进成骨细胞终矿化[3],抑制破骨细胞分化及活化[2].我们用钛颗粒诱导小鼠颅骨溶解模型模拟假体周围磨损颗粒诱导的骨溶解,观察阻断Cn/NFAT通路对骨溶解的影响.一、材料与方法1.材料:11R-VIVIT肽(RRRRR-GGG-MAGPHPVIVITGPHEE).钛颗粒去除内毒素处理后用磷酸盐缓冲液(PBS)液制成悬液.
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小鼠腹腔异位心脏移植模型方法改进
自从1973年Corry等[1]首次报道小鼠异位心脏移植模型以来,小鼠异位心脏移植现已成为移植免疫研究中为常用的模型.小鼠血管细、手术困难,限制了该模型的广泛应用.我们改进手术方法,获得了很好的效果.一、材料与方法1.材料:C57BL/6(H2b)小鼠150只及BABL/c(H2d)小鼠50只,雌性,6～8周龄,体质量16～20 g,购于上海交通大学医学院实验动物中心.供、受体体质量差异无统计学意义.同种同品系组:供、受体均为C57BL/6小鼠.同种异品系组:供体为BABL/c小鼠,受体为C57BL/6小鼠.两组均为50例.手术显微镜购于上海医用光学仪器厂;血管夹购于Accurate Surgical&ScientificInstruments公司;显微持针器购于E6emSurgical公司;显微剪刀和镊子购于FineScience Tools公司;11-0带针缝线和6-0医用丝线购于上海金环医用缝线厂;戊巴比妥钠和肝素钠购于上海医药集团公司.
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人血管内皮抑制素联合化疗栓塞在伴有门静脉癌栓的原发性肝癌中的治疗作用
门静脉癌栓是影响肝癌预后的重要因素[1].根据程树群等[2]所提出的门静脉癌栓分型,可以将门静脉癌栓分为Ⅰ～Ⅳ型,并认为其中Ⅰ～Ⅲ型患者有望从化疗栓塞(TACE)治疗中受益.形成缺氧环境并促进血管内皮生长因子(VEGF)的表达是限制TACE治疗效果的重要因素.我们在TACE治疗时联合人血管内皮抑制素rh-Endostatin(通用名恩度,山东先声麦得津生物制药有限公司),通过随机对照研究,观察其在TACE治疗合并门脉癌栓的原发性肝癌中的作用.一、材料与方法1.一般资料:入组患者60例,其中门静脉癌栓分型Ⅰ型24例,Ⅱ型25例,Ⅲ型11例,排除门静脉癌栓Ⅳ型及肿瘤远处转移、合并其他严重基础疾病病例.
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还原型谷胱甘肽联合美洛昔康在大鼠睾丸扭转损伤修复中的治疗作用
我们通过构建大鼠睾丸扭转模型,检测特定炎性基因表达,观察美洛昔康联合还原型谷胱甘肽防治睾丸扭转导致的损伤后修复作用.一、材料与方法1.大鼠:SPF级雄性Wistar大鼠称体质量约为300 g,给予同等标准食物与水.2.实验设计:30只雄性成年大鼠随机分5组,组1对照组,即假手术组;组2单纯手术组,接受左侧睾丸扭转90 ain后复位;组3与组4手术措施同组2,术后4天分别接受抗氧化剂还原型谷胱甘肽[125 mg/(kg·d)]和非甾体抗炎药物美洛昔[3 mg/(kg·d)]腹腔注射;组5手术处理同组2,为两药联合治疗组.
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不同强度电磁场对小鼠免疫系统的影响
随着社会的发展,环境中电磁场辐射种类和强度也在增强,特别是极低频脉冲电磁场日益增多,其对人体健康的影响,也受到了广泛关注.张泸生等[1]报道极低频脉冲磁场能抑制癌瘤生长并提高细胞免疫功能,但脉冲电磁场(PEMFs)作用的适磁场强度尚不清楚.我们采用不同强度PEMF干预小鼠,观察各组小鼠的免疫参数的变化,探索适宜的强度.一、材料与方法1.材料:IgG、IgM、IgA测量酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(宁波瑞源生物科技有限公司).动物:4周龄BALB/c小鼠[雄性,体质量(25.0±0.2) g]40只,购自哈尔滨医科大学动物饲养中心.小鼠置SPF环境下饲养.电子天平,奥豪斯型号RC21P1502ZH;自制脉冲磁场系统,信号发生器输出波形为脉冲方波,频率10 Hz.专利申请号:201110426247.6.
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肝癌预后与血清α-藻糖苷酶、γ-谷氨酰转肽酶水平的关系
α-藻糖苷酶(AFU)是存在于哺乳动物体内的一种溶酶体酸性水解酶,主要参与含岩藻糖基的糖蛋白、糖脂及黏多糖等生物活性大分子的分解代谢,以往的研究已经证实血清AFU水平可以用作早期诊断原发性肝细胞癌(HCC)的标志物[1]γ-谷氨酰转肽酶(GGT)是一种广泛存在于肾、肝、胰腺、肠等组织中的膜结合蛋白[2].临床主要用以辅助甲胎蛋白(AFP)诊断HCC[3],也有报道证实GGT水平可以作为接受介入治疗(TACE)的HCC患者预后的预测因子[4].我们分析664例经手术治疗的HCC患者的预后,采用单因素分析及COX多因素回归分析试图阐明术前AFU和GGT水平与HCC患者预后的关系.
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自体肌腱移植单束解剖重建前交叉韧带的临床研究
我们对26例前交叉韧带损伤患者采用单束解剖重建,取得良好效果,现报道如下.一、资料与方法1.一般资料:26例前交叉韧带(ACL)损伤患者,其中男16例,女10例;左膝12例,右膝14例;其中运动损伤18例,其他损伤8例.年龄16～ 59岁,平均(24.9±8.5)岁.所有患者都有关节不稳症状,前抽屉试验阳性,Lachman试验阳性;合并半月板损伤20例,内侧副韧带损伤3例.术前MRI均证实ACL完全断裂.受伤至手术时间3 ～15年,平均6.1个月.所有患者ACL损伤均采用关节镜下半腱肌、股薄肌肌腱重建.半月板缝合3例,部分修整17例,内侧副韧带修复3例.
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重组人红细胞生成素对大鼠颅脑损伤后脑核因子-κB活性和表达的影响
促红细胞生成素(EPO)对脑创伤、脑卒中、缺血、癫痫发作等疾病具有保护性治疗作用,但其机制尚不清楚[1].我们制作大鼠颅脑损伤模型,利用重组人红细胞生成素(rhEPO)观察颅脑损伤后核因子(NF)-κB活性和表达的变化.一、材料与方法1.动物分组及试剂:健康雄性SD大鼠,体质量250 ～ 280 g;随机分为打击组(TBI组)和rhEPO干预组,每组42只,按从受伤后处死时间分为伤后1、3、6、12、24 h、3d和7d亚组;聚合酶链反应(PCR)试剂盒购于Fermentas公司;免疫组织化学试剂盒购于武汉博士德公司;注射用rhEPO购自上海克隆生物技术公司.
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游离脂肪酸下调载脂蛋白M的表达及其机制
游离脂肪酸(FFA)是构成人体的重要成分,参与血脂代谢.研究表明,FFA水平升高可导致外周胰岛素抵抗,而胰岛素抵抗的个体载脂蛋白M(ApoM)水平下降[1].本研究旨在观察FFA水平升高是否会直接下调ApoM并探讨其机制.一、材料和方法大鼠血浆FFA浓度检测、肝脏组织中mRNA的提取、逆转录、实时定量聚合酶链反应和PCR芯片(Qiagen公司)反应严格参照试剂盒说明书操作.大鼠ApoM和内参照基因β-肌动蛋白的引物和探针由上海生工生物工程有限公司合成.统计学分析参照文献[2].
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炎性细胞因子浓度在行非等容血液稀释的全髋置换术患者血清中的表达变化
我们采用流式细胞微球阵列法检测患者术中行急性非等容血液稀释(ANIH)后血清中CD4+亚群Th1[(白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)、γ-干扰素(INF-γ)]和Th2(IL-4、IL-6、IL-10)细胞因子的表达,探讨其防止患者围术期发生炎性反应综合征的作用.一、材料与方法1.一般资料:选择2011年2月至2012年4月在李惠利医院行全髋关节置换术的高龄患者60例,男38例,女22例,年龄70 ～ 86岁,体质量46～ 76 kg.无术前禁忌证,血细胞比容(HCT)＞35％,血红蛋白(Hb)＞120 g/L.病例随机分为ANIH组(A组,30例)和常规处理对照组(B组,30例).
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右旋美托咪定对中老年患者单肺通气术后早期认知功能改变的影响
我们将右旋美托咪定(DEX)应用于单肺通气(OLV)中老年患者围术期,探讨其对患者术后认知功能障碍(POCD)发生率的影响.一、资料与方法1.一般资料:本研究已获本院医学伦理委员会批准,并与患者签署知情同意书.择期行OLV的中老年患者60例,年龄(60±9)岁,体质量指数(21.5±3.8) kg/m2,美国麻醉医师协会(ASA)分级和纽约心脏病协会(NYHA)分级均为Ⅱ～Ⅲ级,简明精神状态量表(MMSE)评分≥26分.将患者随机分为DEX组(n=30)和生理盐水对照组(NC组,n =30).2.方法:患者常规监测心率(HR)和有创平均动脉压(MAP).静脉注射咪达唑仑0.01 ～0.02 mg/kg、舒芬太尼0.4～0.6 μg/kg、罗库溴铵0.6～1.0 mg/kg和依托咪酯0.3 mg/kg麻醉诱导,待麻醉诱导满意后行双腔气管内插管并行机械通气,潮气量:双肺通气时10 ml/kg,OLV时8 ml/kg,通气频率10～15次/分,吸呼比=1∶2,吸入氧浓度100％,维持PET-CO2在 35 ～40 mm Hg.
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腔镜模拟器在微创胸外科教学中的应用
近年来,微创外科的发展突飞猛进,在临床中的作用也越来越重要[1].目前我科几乎所有类型的手术均可以在胸腔镜下进行,胸腔镜下手术所占比例也呈逐年递增趋势,微创胸腔镜技术是胸外科研究生培养的重要方面.本研究旨在探讨腔镜模拟训练器在胸外科研究生教学中的应用价值,结果如下.一、材料与方法选取没有临床经验的实习生20人,有1年以上胸外科实习经验的胸外研究生10人,各分为实验A组、对照A组和实验B组、对照B组.实验组接受腔镜模拟训练2个月,对照组不参加腔镜模拟训练.训练前及训练2个月后,进行测试,测试项目包括在腔镜模拟器下放6个黄豆到立柱上,1根绳穿过6个金属孔,打2个外科结.记录完成时间,应用SPSS 17.0统计软件分析,结果采用均数±标准差(-x±s)表示,采用t检验.
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表达葡萄球菌肠毒素A基因的溶瘤腺病毒激活T淋巴细胞靶向治疗鼠膀胱癌
我们根据端粒酶高表达于人恶性肿瘤和缺氧诱导因子(HIF)-1α在膀胱癌中表达上调的特点构建了携带超抗原葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因的人端粒酶逆转录酶(hTERT)/HIF双调控溶瘤腺病毒PPE3-SEA,并已报道该腺病毒可以在鼠膀胱癌细胞内表达SEA蛋白[1].本研究旨在观察该腺病毒对膀胱癌的抑制效果,并初步观察其不良反应.一、材料与方法1.动物模型的建立、分组和治疗:采用皮下成瘤的方法建立荷瘤鼠模型.对照组瘤内注射生理盐水0.1 ml,实验组注射溶瘤腺病毒1×108 PFU/0.1 ml,连续治疗3d.
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细胞穿膜肽-抗人膀胱癌单克隆抗体-载丝裂霉素白蛋白纳米微球的偶联和特异性结合及其穿膜能力的鉴定
细胞穿膜肽可促进多种物质穿过细胞膜,白蛋白载药纳米微球载药量大并可缓慢释放,单克隆抗体能实现特异靶向性.结合以上三者的长处,建立细胞穿膜肽-膀胱癌单克隆抗体-载药白蛋白纳米微球三联体(TAT-EGFP-BDI-1-MMC-Ns),可实现药物缓释、靶向、促进药物内化进入肿瘤细胞,实现肿瘤细胞内化疗.本研究旨在探讨TAT-EGFP-BDI-1-MMC-Ns对EJ细胞靶向结合及其穿膜活性.一、材料与方法1.材料:EJ细胞(购于南京凯基公司);穿膜肽-增强型绿色荧光蛋白(TAT-EGFP,本课题组构建制备);丝裂霉素白蛋白纳米微球(MMC-Ns,本课题组采用交联固化法制备);N-琥珀酰亚胺基-3-(2-毗啶基二琉)丙酸脂(SPDP,Sigma公司);二硫苏糖醇(DTT,德国Meek公司);BDI-1(广西医科大学附属肿瘤医院馈赠).
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股骨颈骨折CT影像分析及临床意义
目的 在追求理想解剖复位前提下,借助电子计算机X射线断层扫描技术(CT)影像对股骨颈骨折骨缺损情况进行评估.方法 对我院150例股骨颈骨折患者行螺旋CT扫描.借助CT影像对股骨颈骨折进行分类,提出潜在骨缺损及真性骨缺损的概念,并对各类骨缺损的发生部位进行统计.结果 在150例股骨颈骨折患者中,存在潜在骨缺损99例,占66.00％;有真性骨缺损26例,占17.33％,以颈后方缺损为多见(12例,8.00％).结论 螺旋CT影像可以直观、立体的反映骨折、骨缺损形态.股骨颈骨折潜在骨缺损发生率较高.
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胃癌患者血清调节性T细胞、细胞毒性T淋巴细胞的检测及意义
目的 检测胃癌患者术前、术后早期外周血中调节性T细胞(Treg)和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)含量,观察胃癌患者机体免疫状态及手术对机体免疫功能的影响,探讨围手术期患者机体免疫功能的变化规律.方法 选取34例胃癌患者,其中男21例,女13例.另取28例健康志愿者外周血作为对照.用流式细胞术检测胃癌患者术前第3天、术后第9天及健康人外周血抑制性T淋巴细胞(Treg细胞、CD8+ CD28-T细胞)以及抗肿瘤效应细胞(CD8+ CD28+T细胞,CTL细胞)含量.结果 (1)胃癌患者术前外周血抑制性T淋巴细胞包括Treg细胞、CD8+ CD28 T细胞均较健康对照组明显升高,分别为[(1.532±0.529)％比(1.082±0.457)％,P＜ 0.05; (54.867±16.528)％比(45.592±13.287)％,P＜ 0.05],而胃癌患者术后Treg细胞较术前进一步升高[(1.824±0.983)％比(1.372±0.669)％,P＜0.05];(2)胃癌患者术前抗肿瘤效应细胞(CD8+CD28+T)较健康对照组明显下降[(45.034±16.501)％比(54.276±13.314)％,P＜0.01],术后变化不明显[(42.617±15.991)％比(43.760±15.080)％,P＞0.05].结论 (1)胃癌患者术前细胞免疫功能较健康人低下,术后细胞免疫功能进一步下降;(2)胃癌患者术后早期(第9天)是进行免疫活性细胞联合过继治疗的重要窗口期;(3)外周血Treg细胞、CD8+ CD28+T细胞、CD8+ CD28-T细胞比例可作为评价胃癌患者机体细胞免疫功能的指标.
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细胞因子信号转导抑制因子2和信号转导与转录激活因子5在肝细胞肝癌组织中的表达及意义
目的 探讨细胞因子信号转导抑制因子2 (SOCS2)和信号转导与转录激活因子5(STAT5) mRNA及其蛋白在肝细胞肝癌中的表达及与临床病理特征的关系.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测84例患者肝细胞肝癌、癌旁组织中SOCS2和STAT5 mRNA和蛋白表达水平,并与临床病理资料进行相关分析.结果 肝癌组织及癌旁组织中SOCS2 mRNA相对量分别为0.089±0.034、0.340±0.083,SOCS2 mRNA在肝癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P＜0.05).肝癌组织及癌旁组织中STAT5 mRNA相对量分别为0.532±0.094、0.276±0.065,STAT5 mRNA在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.05).本实验对肝癌组织和癌旁组织中SOCS2和STAT5蛋白表达进行定性分析,在肝癌和癌旁组织中均有两种蛋白的表达,但在肝癌组织中SOCS2的表达明显低于癌旁组织,而STATS在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织.SOCS2和STAT5表达呈负相关,mRNA比较r=-0.612,P＜0.05;蛋白比较r=-0.574,P＜0.05.结论 在肝癌组织中SOCS2、STAT5 mRNA和蛋白的表达一致,SOCS2在肝癌组织中为低表达,STAT5在肝癌组织中为高表达,两者可能单独或共同参与HCC的发生发展过程.
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结直肠癌组织中高尔基磷酸化蛋白3表达与Wnt信号通路的关系
目的 探讨结直肠癌组织中高尔基磷酸化蛋白3(Golph3)表达与Wnt信号通路的关系.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测62例结直肠癌组织中Golph3、β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期素(Cyclin) D1的表达.结果 Golph3、β-catenin异位表达和Cyclin D1在结直肠癌组织中的阳性表达率分别为53.2％(33/62)、69.4％(43/62)和67.7％(42/62),Golph3高表达的结直肠癌组织中β-catenin异位表达率及Cyclin D1的表达率明显高于Golph3低表达的结直肠癌组织(P＜0.05).结论 结直肠癌组织中Golph3的高表达与Wnt信号通路激活密切相关.
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肝细胞癌中微小RNA-650的表达及其临床意义
目的 探讨微小RNA (miR)-650与肝细胞癌(HCC)发生发展的关系.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测并比较肝癌及其癌旁组织、正常肝组织中miR-650的表达水平,分析其与临床病理特征的关系;正常肝细胞株THLE-2分别转染miR-650双链体、miR-650反义序列,Real-time PCR、Western blot、噻唑蓝(MTT)分别用于检测转染效率、生长抑制因子-4(ING4)蛋白表达及细胞增殖活力.结果 miR-650的表达水平在HCC组织中高于癌旁组织(3.02±1.11比1.25±0.63,P＜0.05),并与患者的年龄(P＜0.01)、肿瘤分化程度(p＜0.05)和肿瘤分期(P＜0.01)明显相关.miR-650与ING4的表达明显负相关(rs=-0.2011,P＜0.05).肝细胞增殖活力在转染后72、96、120、144 h较对照组明显活跃(1.53 ±0.15比0.88±0.11,2.62 ±0.26比1.44±0.18,3.82±0.29比2.53±0.24,4.06±0.24比3.06±0.35,p＜0.05).结论 miR-650与HCC的临床病理学特征有关,它可能通过抑制ING4的表达而促进了HCC的肿瘤发生发展.
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棘突间动态内固定装置应用于腰椎间盘突出症研究
目的 比较棘突间动态固定系统(Ccoflex)与单纯腰椎间盘髓核摘除术(LD)治疗腰椎间盘突出症患者的中远期疗效.方法 收集郑州大学一附院2009年1月至2013年4月接受Coflex患者37例;接受LD患者43例.随访时间分别为(45.7±11.2)和(46.2±10.7)个月.随访期间采用日本整形外科协会(JOA)评分、视觉模拟评分(VAS)评分、Oswestry功能障碍指数(ODI)和影像学分析评估其疗效.结果 48个月内Coflex组JOA评分与VAS评分均高于单纯组(P＜0.05),12个月内ODI评分低于单纯组(P＜0.05);末次随访时两组椎间盘背侧高度、椎间孔大距离和椎管面积差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Coflex治疗腰椎间盘突出症临床疗效优于LD.
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免辅助装置手助腹腔镜巨脾切除及同步脾血回输的临床研究
目的 探讨免辅助装置手助腹腔镜巨脾切除的可行性、技术优势以及术中同步脾血回输的临床价值.方法 分析自2007年10月至2011年10月间行巨脾切除的肝硬化门脉高压症48例患者的临床资料,按手术方式分免辅助装置的手助腹腔镜组(n=30)、完全腹腔镜组(n=12),另6例为中转手助或开腹手术.比较术中出血、手术时间与取脾时间;按脾脏长径(＞ 20 em或≤20 cm)分为重度脾肿大(n=28)与中度脾肿大(n=20),比较两者的术中出血及中转手术率.采用血液回输机进行同步脾血回输.结果 免辅助装置不影响手术中气腹的保持,平均每例患者节省费用约2000元.手助腹腔镜组与完全腹腔镜组的平均出血量差异无统计学意义[(88.1±16.3) ml比(107.5±11.6)ml,P＞0.05];手助腹腔镜组平均手术时间明显短于完全腹腔镜组[(75.2±13.3) min比(120.7±20.5)min,P＜0.05];手助腹腔镜组平均取脾时间明显短于完全腹腔镜组[(8.0±3.1) min比(25.2±2.8)min,P＜0.05).重度脾肿大患者的手术中转率(50％)显著高于中度脾肿大患者(20％,P＜0.01);术中出血明显高于中度脾肿大患者[(103.8±25.0) ml比(70.4±10.3) ml,P＜0.01].术后第1天,同步睥血回输的患者血红蛋白较术前显著升高[(2.07±0.25) g/L,P＜0.05].结论 手助腹腔镜巨脾切除术具有较强的安全性与可行性,尤其对于重度脾肿大患者显示明显优势;免辅助装置有效而经济;同步脾血回输明显提高患者血红蛋白水平.
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骨代谢生化指标结合Singh指数预测老年髋部骨折风险
目的 探讨骨特异性碱性磷酸酶(BALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRAP-5b)以及Singh指数相结合预测老年髋部骨折发生的临床意义.方法 老年髋部骨折患者43例,对照组同龄健康体检人员43例,Singh指数测定:采用西门子Aristos VXPlus X光机拍摄骨盆X线片(包括骨折组和对照组),进行Singh指数的分级;骨代谢生化指标测定:采用酶联免疫(ELLSA)法测定血清BALP、TRAP-5b值.对上述实验结果应用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析.结果 骨折组和对照组血清骨代谢指标BALP、TRAP-5b含量、Singh指数,差异有统计学意义(P＜0.05).BALP和TRAP-5b之间呈明显正相关(P＜0.05),BALP、TRAP-5b与Singh指数均呈明显负相关(P＜0.05).BALP和TRAP-5b以及Singh指数预测骨折风险敏感度分别为71.9％、57.1％、60.5％,三者联合预测骨折风险的敏感度为95.1％.结论 骨折组骨代谢生化指标BALP、TRAP-5b和Singh指数存在异常.BALP和TRAP-5b以及Singh指数相结合可以明显提高预测老年髋部骨折的敏感度,可以作为预测老年髋部骨折风险的敏感指标.
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血管内皮生长因子及受体在非小细胞肺癌的表达及其与淋巴转移的关系
目的 探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、血管内皮生长因子-D(VEGF-D)及其受体-3(VEGFR-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与淋巴结转移的关系.方法 采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对96例NSCLC组织中VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3的表达量进行定量分析.结果 VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3阳性表达与淋巴转移及TNM分期明显相关(P＜0.01);VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3 mRNA在肺癌组织中的表达量明显高于正常组织(P＜0.01);且NSCLC组织中VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3 mRNA表达两两呈正相关.结论 VEGF-C、VEGF-D及其受体VEGF-3在NSCLC的发生、发展及淋巴转移中发挥重要作用.
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参麦注射液在体外循环心脏不停跳手术中的心肌保护作用
目的 观察参麦注射液在体外循环心脏不停跳手术中的心肌保护作用.方法 将60例需行二尖瓣置换术的风湿性心脏病患者随机分为对照组(A组)和参麦治疗组(B组),各30例.对两组患者术前(T1)、转机30 min(T2)、停机(T3)、术毕(T4)、术后24 h(T5)、术后72 h(T6)共6个时间点的全血乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白(cTnT)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的含量进行比较.结果 (1)B组LDH水平于T3 、T4 、T5 、T6共4个时间点均明显低于A组[(258.55±21.83) U/L比(345.12 ±25.28) U/L、(306.40±26.11) U/L比(396.36±22.66) U/L、(335.62±26.72) U/L比(415.74 ±39.56) U/L、(380.00 ±31.53) U/L比(435.45±41.39) U/L,P＜0.05];B组CK-MB水平于T2、T3、T4、T5共4个时间点均低于A组[(33.70±12.60) U/L比(42.31±11.03) U/L、(48.91±12.30) U/L比(78.81±15.03) U/L、(55.82±15.28) U/L比(90.76±20.14) U/L、(73.09 ±24.34) U/L比(109.05 ±24.33) U/L,P＜0.05];B组cTnT水平于T2 、T3 、T4 、T5 、T6共5个时间点均低于A组[(0.89±0.27) U/L比(2.61±0.25) U/L、(5.49±1.79) U/L比(11.48 ±2.41) U/L、(8.31 ±2.44) U/L比(18.34±3.76) U/L、(17.91±3.42)U/L比(27.05 ±4.24) U/L、(5.10±1.42) U/L比(11.19 ±2.80) U/L,P＜0.05].(2)B组SOD水平于T2 、T3、T4、T5、T6共5个时间点浓度水平高于A组[(68.69 ±7.26) U/L比(55.22 ±7.30) U/L、(54.28 ±7.94) U/L比(35.11 ±6.61) U/L、(44.03 ±6.17) U/L比(25.41±3.98) U/L、(53.93 ±6.76) U/L比(41.60 ±3.79) U/L、(64.27±7.13) U/L比(50.02 ±4.45) U/L,P＜0.05];B组MDA水平于T2 、T3 、W4 、T5 、T6共5个时间点浓度水平低于A组[(4.38 ±0.54) μ.mol/L比(6.97 ±0.76) μmol/L、(6.13 ±0.65) μmol/L比(8.59 ±0.96) μmol/L、(8.02±0.9)μmol/L比(10.28 ±0.58) μmol/L、(5.78±0.63) μmol/L比(8.55±0.57)μmol/L、(4.53 ±0.51)μrnol/L比(6.62±0.55) μmol/L,P＜0.05].结论 参麦注射液应用于体外循环心脏不停跳手术,利于缓解心肌缺血再灌注损伤,对心肌具有保护作用.
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胃癌患者血清基质金属蛋白酶-9水平的变化
目的 观察胃癌患者血清基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)的表达,探讨其临床价值.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定60例胃癌患者、30例正常人血清MMP-9水平,对36例胃癌患者手术前后血清MMP-9水平进行比较.结果 胃癌患者血清MMP-9水平[(60.44±9.75) μg/L]明显高于正常对照组[(26.79±2.65) μg/L],两者比较差异有统计学意义(P＜0.01);血清MMP-9水平与胃癌患者性别、年龄和癌细胞分化程度无相关;血清MMP-9水平与胃癌患者临床分期有关,Ⅳ期[(72.47±4.21) μg/L]明显高于Ⅲ期[(65.73±4.36) μg/L]、Ⅲ期[(65.73±4.36)μg/L]明显高于Ⅱ期[(54.89±3.73)μg/L]、Ⅱ期[(54.89±3.73)μg/L]明显高于Ⅰ期[(48.42±3.89) μg/L]、两两比较差异有统计学意义(P＜0.05);手术后胃癌患者血清MMP-9水平[(6.89±1.27) μg/L]明显低于患者手术前[(7.19±1.26)μg/L],两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 MMP-9可作为反映胃癌疾病进展的分子标志物之一.
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早期食管癌患者血浆肿瘤标志物的蛋白组学筛选及鉴定
目的 以蛋白组学方法检测早期食管癌患者与健康志愿者血浆差异蛋白质表达谱,筛选鉴定可用于食管癌早期诊断的潜在蛋白质标志物.方法 分别取Ⅰ期食管癌患者与健康志愿者空腹血浆标本各6例等量混合成2组样本,去除血浆高丰度蛋白后,利用双向电泳(2-DE)进行分离,经信息学软件分析,寻找到表达量差异在2倍以上的蛋白质,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)技术对差异蛋白质进行鉴定.结果 Ⅰ期食管癌患者与健康人比较,筛选出表达量差异2倍以上的蛋白质点共15个,其中表达上调的有11个,表达下调的有4个,进行质谱分析后,表达上调的蛋白有α1抗凝乳蛋白酶、α2-HS-糖蛋白、富亮氨酸α2糖蛋白;表达下调的蛋白有纤维蛋白原γ链、血红蛋白α亚基.结论 Ⅰ期食管癌患者与健康人血浆的蛋白质表达谱具有一定的差异性,而鉴定出的差异蛋白则有可能成为食管癌患者早期诊断的特异性血浆肿瘤标志物.
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自体下关节突骨块在腰椎椎间融合中的应用解剖
目的 利用行三维CT重建患者的影像学资料,测量腰椎下关节突的大小及椎间隙的高度,分析两者间的关系.方法 总结2011年7月至2013年3月我院行三维CT检查的60例患者的临床资料,利用SPSS统计软件对获得的数据进行分析.结果 下关节突的横径分别是L3(9.35±1.21) mm,L4(10.29±1.44) mm,L5(9.47 ±2.07) mm;相对应椎间隙后缘的高度分别是L3/4(9.01±1.60) mm,L4/5 (9.23±2.19) mm,L5/S1(8.14±2.26) mm;下关节突的横径均大于椎间隙后缘的高度,两者之间的差异有统计学意义(P＜0.05),自体下关节突骨块可作为腰椎椎间融合中的骨源.结论 修整后的下关节突骨块适合国人解剖特点,椎间融合有效维持节段稳定,恢复椎间高度及腰椎曲度,增加融合面积,维持脊柱的稳定性.
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Notch1和Notch3在非小细胞肺癌组织中的表达及其意义
目的 探讨Notch1和Notch3在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与患者预后的关系.方法 对60例NSCLC患者,应用免疫组织化学技术检测Notch1和Notch3在其肺癌组织及正常肺组织中的表达,分析其与患者临床病理特征及术后生存时间的相关性.结果 Notch1和Notch3在肺癌组织中的阳性率(73.3％和76.7％)明显高于正常肺组织(30.0％和26.7％,P＜0.05).Notch1的表达水平与肿瘤病理分期、淋巴结转移明显相关(P＜0.05);Notch3的表达水平与淋巴结转移明显相关(P＜0.05).Kaplan-Meier生存分析显示,Notch1和Notch3阴性组患者预后明显优于阳性组.多因素分析显示Notch1和Notch3是影响NSCLC患者预后的独立危险因素.结论 Notch1和Notch3的表达水平影响NSCLC组织的临床病理特征进而影响患者的预后.
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人类精子冷冻复苏后乌头酸水合酶的表达变化及其致损伤机制
目的 探讨乌头酸水合酶(AGO2)在人类精子冷冻复苏前后的表达变化及其致精子功能损伤机制.方法 利用计算机精液分析系统(CASA)分析15例冷冻前后人类精子的活力;提取人类冷冻前后精子的总蛋白进行Western blot分析ACO2的含量变化;分析并且进行免疫荧光染色定位ACO2在精子的表达区域;利用化学发光法检测冷冻前后精子三磷酸腺苷(ATP)含量的变化;通过荧光探针JC-1对线粒体鞘染色结果的不同进行线粒体膜电势的检测,同时采用流式细胞仪直接对红色荧光(R1)与绿色荧光(R2)定量分析,比较两组差异.结果 与冷冻前组比较,冻后复苏组的精子活力下降了18％,ATP含量下降了32％,线粒体R1的比例下降了27％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 AC02作为线粒体蛋白在冷冻复苏后发生了蛋白的降解,线粒体的功能受到了损伤,使得ATP的产量下降,导致了精子运动能力缺失.
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Sonic Hedgehog在非小细胞肺癌中的表达及其与患者生存周期的关系
目的 观察非小细胞肺癌患者Sonic Hedgehog(Shh)信号通路相关蛋白的表达,探讨在肺癌发展过程中的作用.方法 选择本院2013年1月至6月非小细胞肺癌手术患者46例,取切除肺癌组织为观察组,取癌旁组织39例,以非非小细胞肺癌患者28例肺部组织为对照组.采用免疫组织化学方法观察Shh和Gli2蛋白表达.结果 观察组Shh和Gli1蛋白阳性率分别为73.91％(34/46)和67.40％(31/46),均高于癌旁组织和对照组(P＜0.05),Ⅳ、Ⅲ期患者Shh和Gli1蛋白阳性率分别为80.95％(17/21)、71.43％ (15/21)和91.67％(11/12)、83.33％(10/12),均高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P＜0.05).结论 Shh信号通路可能通过激活Shh蛋白和Gli蛋白表达促进非小细胞肺癌组织异常增殖及细胞癌变.
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部分脾切除在晚期血吸虫肝硬化巨脾症患者的临床应用
目的 探讨部分脾切除术治疗晚期血吸虫肝硬化巨脾症的疗效.方法 将22例晚期血吸虫巨脾症手术患者随机分对照组(11例)和研究组(11例),对照组行脾切除,研究组行部分脾切除,观察两组术后24h脾窝渗血量,检测术前50 d、术后50 d两组免疫指标促吞噬肽(tuftsin)和IgM量,测量术前1周和术后1年两组患者门静脉流量,检验术后1周、1个月患者白细胞、血小板、肝功能变化,随访5年再出血率及生活质量.结果 对照组术后24h脾窝渗血量为(600 ±50) ml,明显高于研究组[(100±25)ml,P＜0.05];检测血清tuftsin及IgM:对照组术前50 d分别为(278.6±13.80)、(2.93±1.42) μg/L,术后50 d(107.4 ±9.09)、(1.45±0.41) μg/L,两种免疫指标明显下降,而研究组术前50 d[(280.7±14.50)、(2.41 ±1.07) μ/L],术后50 d[(277.5 ±7.03)、(2.70 ±0.91) μg/L],比较无下降,组间差异有统计学意义(P＜0.05).门静脉流量术前研究组为(1.23±0.11) cm2,术后1年为(0.85 ±0.15) cm2,而对照组术前为(1.19±0.18) cm2,术后1年为(1.03 ±0.19) cm2,两组均下降,且研究组少于对照组,而白细胞、血小板、肝功能变化及5年再出血率、生活质量比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 部分脾切除治疗晚血巨脾症术式可行,且术后创面渗血少,降低手术风险,又保留脾脏的免疫功能,防范脾术后凶险感染.此术式还可起到自发性分流作用.
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膜联蛋白A2和骨桥蛋白在乳腺癌组织的表达及其与乳腺癌生物学行为的关系
目的 观察膜联蛋白A2(Annexin A2)和骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)在乳腺癌组织中的表达,探讨两者与乳腺癌发生发展的关系.方法 应用免疫组织化学技术检测50例乳腺癌组织和癌旁组织中Annexin A2和OPN的表达水平,并分析两者与乳腺癌生物学行为的关系.结果 Annexin A2在乳腺癌组织中呈高表达82.00％,在癌旁组织呈低表达36.00％,两者差异有统计学意义(P＜0.01),Annexin A2表达水平与乳腺癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.01);OPN在乳腺癌组织中呈高表达74.00％,在癌旁组织呈低表达22.00％,两者差异有统计学意义(P＜0.01),OPN表达水平与乳腺癌TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 Annexin A2和OPN的高表达可能与乳腺癌的生物学行为有关.
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右美托咪定对小儿全凭静脉麻醉苏醒期躁动的影响
目的 观察右美托咪定预防小儿扁桃体腺样体切除术全凭静脉麻醉苏醒期躁动的作用.方法 将60例全凭静脉麻醉下行择期扁桃体腺样体切除术患儿,随机分为实验组(A组)与对照组(B组),诱导后分别持续静脉泵入右美托咪定每小时0.2 μg/kg和等容量的生理盐水至手术结束.记录患儿手术时间、停药至清醒时间、恢复室滞留时间、到达恢复室即刻改良Aldrete评分、进入恢复室后30 min内根据儿童麻醉后躁动评分(PAED)和改良加拿大东安大略儿童医院疼痛评分量表(m-CHEOPS),每5 min对患儿进行躁动和疼痛评分,所得高值作为监测有效值.结果 实验组与对照组比较,停药至清醒时间、Aldrete评分及恢复室滞留时间的差异无统计学意义(P＞0.05),PAED评分E组[(9.4±1.8)分]显著低于C组[(13.8±2.2)分,P＜0.05],疼痛评分E组[(3.8±0.6)分]显著低于C组[(4.8±0.8)分,P＜0.05].结论 右美托咪定可在一定程度上预防小儿扁桃体腺样体切除术全凭静脉麻醉苏醒期躁动的发生.
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前列腺癌放射治疗临床疗效及毒性的新进展
随着高龄化及生活方式的改变,前列腺癌的发生率逐渐上升[1].放射治疗技术作为其主要治疗方式之一,伴随着计算机技术和放射影像学的发展而不断进步,突出表现为靶区的精确性及照射剂量明显提高,其临床疗效进一步提高,放射性损伤也有一定程度的改善[2-3],但是患者的临床综合获益仍需进一步提高.现将前列腺癌放射治疗的进展综述如下.一、靶区剂量与临床疗效1.三维适形与调强放射治疗:根据常规分割的剂量-效应关系,提高局部剂量有望提高局部控制率.三位适形放射治疗(3D-CRT)代替常规放射治疗,正是由于其可产生更高的靶区照射剂量,而周围危及器官的受量又在可控范围.
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膀胱癌与DNA甲基化的关系研究进展
膀胱癌的发生发展是一个多基因改变的复杂过程[1].而DNA甲基化是基因表型改变的一种重要异常形式,通过影响基因的表达参与肿瘤的发生发展.正是这些分子生物学改变使原癌基因激活、抑癌基因失活,从而导致肿瘤的发生[2].因此膀胱癌与DNA甲基化的关系已成为近年来膀胱癌研究热点之一.一、DNA甲基化机制DNA甲基化是指生物体在DNA甲基转移酶的催化下,以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体,将甲基转移到CpG双核苷酸上胞嘧啶的第5位碳原子上,形成5-甲基胞嘧啶的过程[3].人类基因组DNA存在着广泛的甲基化修饰,主要发生在CpG序列[4].
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高效诱导干细胞分化为内皮细胞的研究进展
近年来研究结果显示,内皮细胞的数量减少和功能受损已经成为多种疾病的发病机制.如糖尿病血管病变的始发因素是血管内皮功能障碍,Lombardo等[1]研究显示糖尿病患者血管内皮细胞数量和功能明显受损.而糖尿病相关性勃起功能障碍主要损伤海绵窦内皮细胞,导致内皮细胞功能受损,影响阴茎的正常勃起[2].心血管等其他疾病亦表现有血管内皮细胞受损.目前,利用干细胞的无限增殖和多项分化潜能的特性,使干细胞更多地诱导(即高效诱导)分化为内皮细胞治疗相应疾病越来越受到关注.骨髓间充质于细胞[3]、胚胎干细胞在治疗心肌梗死时分化为内皮细胞[4-5],以利于心肌血管的再生.本课题组前期研究结果显示,阴茎海绵体内存在少量的肌源性干细胞[6-8]别,如何利用这些少量的干细胞高效分化为内皮细胞来治疗相关疾病显得尤为重要.现就干细胞诱导分化为内皮细胞时如何选择培养基、细胞因子、基因的导入等方面进行概述.
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T淋巴细胞与细胞治疗的研究进展
恶性肿瘤的发生、发展与机体的免疫功能有着密切的关系,机体维持正常的免疫功能状态,有赖于各种免疫细胞之间的相互协作或相互制约,以产生适度的免疫应答,使之即能清除异物抗原,又不致损伤机体组织[1].机体的抗肿瘤免疫机制可分为细胞免疫、体液免疫和细胞因子免疫三大类,大量研究表明T淋巴细胞介导的细胞免疫与肿瘤关系密切.T细胞来源于骨髓的多能干细胞,体液中T细胞亚群的分析和组织内的定位检测是判断细胞免疫功能的一项重要指标,对恶性肿瘤复发、转移和判断治疗以及各种传染病的诊断、研究、免疫治疗和判断预后等方面均具有重要意义[2-5].
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肿瘤浸润转移与水通道蛋白1的关系研究进展
水通道蛋白(AQPs)广泛分布于人体各组织中,是实现跨细胞膜快速水转运的重要物质基础,在细胞代谢、增殖以及实现各种器官组织生理功能的过程中发挥重要作用.目前已在哺乳动物组织中鉴定出13种水通道蛋白(AQP0～AQP12).AQP0 ～2、AQP4～6和AQP8主要是水选择性通道,AQP3、AQP7、AQP9、AQP10和AQP12除对水有较高通透性外,还具有转运甘油和其他小分子溶质的功能[1].AQP1是早发现的水通道蛋白[2],其基因定位于人染色体7p15→p14[3],质膜中以四聚体形式存在,在4个单体的中心部分含有独立的孔道,孔道中有1个带正电的区域会排斥带正电的离子,避免水合质子的通过.近研究证实,在恶性程度较高的肿瘤组织中均有AQP1的异常表达[4],在肿瘤的转移过程中也发挥着重要作用[5].
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骨科疾病与非受体酪氨酸激酶家族激酶关系研究进展
非受体酪氨酸激酶(Src)家族激酶(SFKs)由Lyn、Hck、Lck、Blk、Src、Yes、Fyn、Fgr、Brk、Frk和Srm共11个成员组成.它们构型相似,有相同的功能域,共同参与细胞的转化以及细胞内信号传递过程,具有重要的生理功能[1-5].其中,Src蛋白是目前研究多的成员,也是与人类疾病联系为密切的蛋白[6-8].现就近年来关于SFKs特别是Src蛋白与骨科常见疾病的相关性予以综述.Src蛋白的结构与功能:Src蛋白有至少7个不同功能的结构域.C端区域具有Tyr527调控残基,此残基磷酸化或去磷酸化可调节Src蛋白的活性;SH1区是一个双裂结构,是Src蛋白催化区域,三磷酸腺苷(ATP)与铰链区结合发生自身磷酸化,可触发激酶的活性;SH2区与SH1结构域通过一段富含脯氨酸的SH2激酶链接区相邻,SH2区与C端Tyr527的结合可抑制激酶本身的活性;SH3区具有与富含脯氨酸序列蛋白结合的特性;SH4与SH3区之间有一段区分SFKs成员的特殊区域,其生物学功能暂不明确;SH4区位于N端,包含蛋白质棕榈化和豆蔻酰化的位点,这些位点的改变可使Src蛋白锚定于质膜内侧.
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转染IκB激酶2的显性负性突变体的受者树突状细胞诱导产生的CD4+CD25-T细胞延长肾移植大鼠生存时间的研究
目的 探讨转染Adv-IκB激酶2的显性负性突变体(IKK2dn)基因并负载供者抗原的受者树突状细胞(DC)诱导产生的CD4+ CD25-T细胞回输是否延长同种异体肾移植大鼠的存活时间,并探讨其机制.方法 获取和培养受者Lewis大鼠骨髓源性DC,转染IKK2dn基因并负载BN大鼠可溶性抗原,与BN大鼠的T细胞初次混合淋巴细胞反应(MLR),72 h后采用免疫磁珠分选法筛选CD4+ CD25-T细胞.肾移植受者为Lewis大鼠,分为初始T细胞组、Adv0-CD4+T细胞组、CD4+CD25-T细胞组、排斥组,术前7d分别输注1×107个初始CD4+T细胞、Adv-0-DC诱导产生的CD4+ CD25-T细胞、Adv-IKK2dn-DC诱导产生的CD4+ CD25-T细胞和等量生理盐水,供者均为BN大鼠.另设第三方供者组,术前处理同治疗组,供者为Wistar大鼠.移植术后观察各组大鼠存活时间和发生排斥反应;测定受者T淋巴细胞增殖能力;检测血清白细胞介素(IL)-2、IL-10、γ-干扰素(IFN-γ)以及转化生长因子-β(TGF-β)表达水平;监测血肌酐(Cr)水平;病理学检查评定排斥级别.结果 CD4+ CD25-T细胞组肾移植大鼠生存时间为(28.50 ±2.36)d,较其他各组显著延长(P＜0.01);与其他各组比较,CD4+ CD25-T细胞组表达高水平IL-10和TGF-β(P＜0.05);与排斥组、Adv0-CD4+T细胞组、第三方供者组比较,CD4+ CD25-T细胞组低表达IL-2和IFN-γ(P＜0.05);CD4+ CD25-T细胞组T淋巴细胞的增殖能力明显低于其他4组(P＜0.05);病理学检查CD4+CD25-T细胞组发生排斥反应的病理级别较低.结论 转染IKK2dn基因并负载供者抗原的受者DC诱导产生的CD4+ CD25-T细胞回输可以延长同种异体肾移植大鼠生存时间,并具有针对供者的特异性,其机制可能与诱导的IL-10、TGF-β的高分泌有关.
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糖尿病性膀胱病豚鼠膀胱Cajal间质细胞的改变
目的 观察糖尿病性膀胱病(DCP)豚鼠膀胱Cajal间质细胞(Icc)数量、形态和结构的改变,探讨ICC在DCP发病机制中的作用.方法 50只雌性豚鼠,随机选择42只作为实验组,8只作为对照组(C组).以单次腹腔注射链脲佐菌素法诱导实验组糖尿病豚鼠模型.尿动力学检查确定膀胱功能失代偿豚鼠(A组,即DCP组)及代偿豚鼠(B组,即代偿组).免疫组织化学荧光染色、激光共聚焦显微镜、透射电镜技术检测膀胱ICC形态、数量与结构变化.结果 A组膀胱ICC面积与膀胱组织面积百分比[(2.18±0.04)％]较C组[(2.81±0.04)％]及B组[(2.80±0.05)％]显著降低(P＜0.01).DCP组膀胱ICC数量减少,细胞形态及超微结构发生明显改变.结论 糖尿病膀胱病豚鼠膀胱ICC数量减少、形态结构改变,提示ICC可能在DCP的发病过程中起重要作用.
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前列腺素E受体-4在透明质酸酶诱导大鼠慢性膀胱炎中的作用
目的 观察前列腺素E受体-4(EP4)在透明质酸酶诱导的大鼠慢性膀胱炎中的作用.方法 采用膀胱灌注透明质酸酶构建慢性膀胱炎症大鼠模型,尿流动力学检测膀胱功能,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)筛选EP受体mRNA表达,Western blot检测EP4受体蛋白表达,苏木素-伊红(HE)染色计算炎性细胞数量.结果 模型组炎性细胞数目为(45.3±6.9)个/视野;排尿时间间隔为(119.2±28.2)s;膀胱容量为(0.37±0.04) ml.对照组炎性细胞数目为(4.8±1.1)个/视野;排尿时间间隔为(439.3±16.8)s;膀胱容量为(1.26±0.06) ml.与对照组比较,模型组大鼠显示明显慢性炎症,排尿时间间隔缩短,膀胱容量降低,膀胱EP4受体mRNA及蛋白表达均显著升高(P＜0.05).EP4受体拮抗剂AH23848干预后,大鼠排尿时间间隔及膀胱容量明显增加(P＜0.05),分别为(277.3±39.1)s、(0.96 ±0.11) ml,但膀胱炎症无明显改善.结论 EP4受体在透明质酸酶诱导的慢性膀胱炎大鼠膀胱组织中表达升高,其受体拮抗剂可能可以作为临床间质性膀胱炎潜在治疗靶点.
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肾透明细胞癌多层螺旋CT征象与缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子蛋白表达的关系
目的 探讨肾透明细胞癌(CCRCC)部分多层螺旋CT(MSCT)征象与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的关系.方法 采用免疫组织化学法检测42例CCRCC中HIF-1α、VEGF蛋白的表达,并观察MSCT图像.结果 CCRCC组中HIF-1仅、VEGF蛋白阳性表达率分别为78.6％ (33/42)、80.9％(34/42).HIF-1o、VEGF蛋白表达与MSCT图像显示肿瘤大小≤4 cm、＞4 cm组,强化程度≤30 Hu、＞30 Hu组,有无液化、坏死,肿瘤边界是否清楚,血管有无受侵及有无淋巴结或/和器官转移有关(P＜0.01);但与平扫密度无明显相关(P＞0.05).结论 HIF-1α、VEGF蛋白表达与CCRCC的发生、发展有关;根据CCRCC的MSCT征象在一定程度上可以判断CCRCC的生物学行为和血管生成情况.
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枸杞多糖对大鼠海绵体神经钳夹损伤的修复作用
目的 探讨使用枸杞多糖(LBP)修复钳夹损伤的海绵体神经(CN),恢复自主勃起功能的可行性.方法 21只雄性SD大鼠随机分成3组,即假手术组、LBP组、损伤对照组,于术后3个月电刺激CN测定海绵体内压(ICP)及平均动脉压(MAP),取CN进行甲苯胺蓝染色检测有髓轴突数目,取阴茎组织进行烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)染色检测一氧化氮合酶(NOS)阳性神经纤维数目.结果 LBP组ICP/MAP比值(0.44 ±0.05)明显高于损伤对照组(0.26 ±0.03,P＜0.05),但低于假手术组(0.68 ±0.08,P＜0.05).LBP组CN有髓轴突数目(106.8 ±17.9),与假手术组(180.9 ±15.3)和损伤对照组(64.9±l3.9)比较差异有统计学意义(P＜0.05).阴茎背神经NOS阳性神经纤维数目(164.2±12.2),与假手术组(263.3 ±15.0)和损伤对照组(85.6±14.7)比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LBP可促进CN钳夹损伤后的神经再生及勃起功能的恢复.
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严重联合免疫缺陷小鼠肾包膜下异种移植人前列腺增生组织模型的建立
目的 利用严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠肾包膜下移植法建立人前列腺增生(BPH)组织异种移植模型.方法 将20只4～6周龄SCID小鼠随机分为4组,每组5只.取前列腺术后组织标本,分别移植到小鼠肾包膜下和皮下.实验组为肾包膜下移植,对照组为皮下移植.8～12周后,观察前列腺组织生长,经石蜡包埋后进行常规染色和免疫组织化学鉴定.结果 人BPH组织在SCID小鼠肾包膜下成活率为90％ (18/20),皮下组仅为40％ (8/20).异种移植的前列腺组织为实体状、不规则、白色,隆出肾脏表面并嵌入肾实质,伴有血管生成.镜下表现,肾包膜下移植前列腺组织生长旺盛,皮下组前列腺组织腺体萎缩,移行上皮化生.免疫组织化学染色证实为人源性前列腺组织.结论 小鼠肾包膜下移植可高效率建立人BPH组织异种移植动物模型.
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前列腺特异性膜抗原通过p38通路对前列腺癌细胞增殖、迁移的调控研究
目的 观察前列腺特异性膜抗原(PSMA)在前列腺癌细胞增殖、迁移和分裂代谢过程中调控相关通路的作用.方法 实验对象包括稳定阻断PSMA表达的细胞株(干扰组)、未阻断PSMA表达的LNCaP细胞株(非干扰组)、不作任何处理的LNCaP细胞株(空白组).利用Western blot及免疫荧光观察3组细胞磷酸化p38(p-p38)的表达量,并使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞迁移能力,流式细胞仪检测细胞周期.结果 Western blot及细胞免疫荧光提示干扰PSMA表达后,p-p38表达水平下降40％(P＜0.05);在SB203582(p38抑制剂)作用下,3组细胞p-p38均处于较低水平,组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).CCK-8法、Transwell法、流式细胞仪检测细胞周期提示PSMA干扰后细胞增殖、迁移能力下降,细胞S期百分比降低;给予SB203582后,3组细胞增殖、迁移能力明显下降,细胞S期百分比均处于低水平.结论 PSMA通过上调p38通路对细胞的增殖、细胞周期产生影响,从而对LNCaP细胞起正性调节作用.
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华蟾素对大鼠膀胱癌的抑制作用
目的 检测SD大鼠膀胱癌组织的环氧合酶-2(COX-2)、毛细血管密度(MVD)、癌细胞凋亡水平,探讨其与病理分级的相关性.方法 采用N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)构建模型,分为空白组、MNU组、华蟾素(Cino)组、阿霉素(ADM)组和卡介苗(BCG)组,每组10只.灌注结束1周后取其膀胱进行苏木素-伊红(HE)染色并检测相关指标.结果 免疫组织化学结果表明,低级别组中,各组COX-2的表达均无差异;Cino组在MVD表达和细胞凋亡两方面与ADM组相似,但均高于BCG组.在高级别组中,Cino组的COX-2和MVD表达均低于其余各组;而细胞凋亡则相反.结论 华蟾素能有效拮抗SD大鼠膀胱癌,且对高级别表达的膀胱癌具有抑制作用.
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RNA干扰下调人滋养层细胞表面抗原-2基因表达对前列腺细胞侵袭及尿激酶纤溶酶原激活物蛋白的影响
目的 观察人滋养层细胞表面抗原-2(Trop-2)基因对人前列腺细胞侵袭的影响,并探讨其分子机制.方法 采用TROP-2基因小于扰RNA(siRNA)转染处理人前列腺PC-3细胞后,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot检测TROP-2基因mRNA和蛋白水平;采用Transwell小室法试验检测癌细胞侵袭能力;采用Western blot法检测癌细胞尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)蛋白变化.结果 siRNA转染组细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度依赖性(P＜0.01).siRNA转染组穿过滤膜的细胞数明显下降,且呈浓度依赖性(P＜0.01).Transwell小室试验结果显示,Con-A、Con-B、siRNA(5nmol/L)、siRNA(10 nmol/L)、siRNA(20 nmol/L)组穿膜细胞数分别为(128.16 ±3.89)、(127.58 ±3.56)、(102.56 ±3.28)、(76.38 ±3.25)和(39.89±3.18)个.Western blot结果显示,TROP-2 siRNA转染组uPA蛋白表达明显下调,且与浓度相关.结论 TROP-2基因在人前列腺癌细胞侵袭中发挥重要的作用,采用siRNA转染可抑制前列腺细胞侵袭,下调uPA表达,是其重要机制之一.
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第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因对人前列腺癌细胞株PC-3转移及基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9表达的影响
目的 观察第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)对人前列腺癌细胞株PC-3转移及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达的影响.方法 以携带野生型PTEN基因的腺病毒感染体外培养的PC-3细胞,采用间接免疫荧光实验和Western blot实验检测PTEN、MMP-2 、MMP-9蛋白表达的变化;明胶酶谱实验检测MMP-2和MMP-9酶活性的变化.划痕实验和Transwell实验检测PTEN对PC-3细胞体外迁移和侵袭能力的影响.结果 Ad-PTEN感染后PC-3细胞中PTEN表达明显增加,而MMP-2和MMP-9表达水平及活性均降低.划痕实验显示Ad-PTEN组细胞迁移距离在12h为(112.36±18.38) μm,明显少于Ad-LacZ组的(166.52±19.28) μm(t=4.55,P ＜0.01);在24 h为(214.75±35.62) μm,明显少于Ad-LacZ组的(361.87 ±46.15) μm(t=5.64,P ＜0.01);在48 h为(436.61 ±52.69) μm,明显少于Ad-LacZ组的(732.56±78.30) μm,(t=7.01,P＜0.01).Transwell实验结果显示Ad-PTEN组穿入下室面的细胞数[(22.40±2.41)个]明显少于Control组[(38.20±4.44)个,t=6.99,P＜0.01]及Ad-LacZ组[(37.20±4.97)个,t=5.98,P＜0.01].结论 PTEN对人前列腺癌PC-3细胞株转移及MMP-2、MMP-9表达有明显抑制作用,提示PTEN可能在前列腺癌的转移中发挥重要作用.
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痰塔特姆氏菌溶解草酸钙结石的研究
目的 观察痰塔特姆氏菌溶解草酸钙结石的效果并与乙二胺四乙酸(EDTA)比较.方法 用痰塔特姆氏菌溶解草酸钙结石.重量分析法、配位滴定法和分光光度法分别测定草酸钙质量、钙离子和草酸根含量.结果 痰塔特姆氏菌、EDTA具有一定的溶解草酸钙结石的能力,在糜蛋白酶协助下溶石量增加.结论 痰塔特姆氏菌具有一定的溶解草酸钙结石的能力,12h内随菌群数增加溶石效果增强.
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表浅性膀胱癌术后复发和生存率与p53和K-ras基因突变的关系
目的 探讨p53和K-ras基因突变与表浅性膀胱癌术后复发和生存率的关系.方法 选取表浅性膀胱癌切除术的137例患者,并选取29例正常膀胱黏膜组织作为对照,分别提取组织的DNA,采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)和直接测序法分别分析p53和K-ras基因突变,并探讨p53和K-ras突变与表浅性膀胱癌术后复发及生存率的关系.结果 p53突变主要集中于外显子7和8,K-ras集中于外显子1和2.正常膀胱黏膜组织中p53和K-ras基因单突变率分别为3.45％(1/29)和6.90％ (2/29),p53和K-ras基因双突变率为0％ (0/29).膀胱癌组织中p53和K-ras单突变的发生率分别为43.07％ (59/137)和30.66％ (42/137),p53和K-ras双突变的发生率为26.28％(36/137).膀胱癌组织中p53和K-ras突变的发生率明显高于正常膀胱黏膜的发生率,差异有统计学意义(P＜0.05).p53和K-ras双突变的术后复发率(75.00％)明显高于p53和K-ras单突变术后复发率(30.51％和28.57％),差异有统计学意义(P＜0.05).p53和K-ras双突变的3年生存率明显低于p53和K-ras单突变的3年生存率,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 p53和K-ras突变可能是导致膀胱癌术后复发和生存率较低的原因之一.
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下调survivin基因对膀胱尿路上皮癌T24细胞增生和凋亡的影响
目的 在膀胱尿路上皮癌细胞(T24)中下调survivin基因的mRNA和蛋白的表达,观察其对T24细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建靶向survivin真核表达质粒(si-S1、si-S2、si-S3)干预T24细胞,同时构建阴性对照表达质粒(si-GL3).实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测细胞内survivin mRNA和蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;比色法检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的活性.结果 与对照组比较,转染si-S3后T24细胞内survivin mRNA和蛋白表达分别下降79％和80％,细胞活性降低呈时间和浓度依赖性,细胞凋亡增加20.96％,Caspase-3的活性增加85％(均P＜0.05).结论 下调survivin基因能有效抑制T24细胞的增殖,促进其凋亡,其机制与激活Caspase-3有关.
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钾离子增加大鼠膀胱逼尿肌敏感性与Rho激酶相关性研究
目的 探讨钾离子反复刺激大鼠膀胱组织增加大鼠膀胱逼尿肌收缩敏感性与RhoA/Rho激酶途径的相关性.方法 雌性SD大鼠20只,随机分为刺激组和对照组,每组10只.刺激组:膀胱内灌注硫酸鱼精蛋白(10 g/L)及氯化钾溶液(500 mmol/L),每3d灌注1次,共20次,为期2个月.对照组:同样方法灌注生理盐水.2个月后两组分别行膀胱尿动力学检查.取两组大鼠膀胱逼尿肌组织,用于观察预收缩后Y-27632对大鼠膀胱逼尿肌的舒张作用.结果 刺激组膀胱排尿间隔时间及膀胱容量均小于对照组[(256±51)s比(566 ±54)s;(226±60)μl比(394±37)μl,P＜0.01]、储尿期膀胱收缩次数、膀胱排尿压力阈值均大于对照组[(2.32±0.45)次/分比(0.86±0.27)次/分;(9.39±1.22) mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)比(6.03 ±0.81) mmHg,P＜0.01].刺激组膀胱逼尿肌对Y-27632的敏感性较对照组明显增加,大舒张率明显增大[(71.5±2.8)％比(45.1±3.1)％,P＜0.01].结论 钾离子反复刺激大鼠膀胱组织可增加大鼠膀胱逼尿肌收缩敏感性,其作用机制可能与RhoA/Rho激酶途径有关,从而推断间质性膀胱炎发病可能与钾离子通过RhoA/Rho激酶途径增加膀胱逼尿肌收缩敏感性有关.
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凤尾草总黄酮对大鼠前列腺增生的治疗作用及其机制
目的 观察凤尾草总黄酮对去势大鼠前列腺增生的治疗作用,并探讨其作用机制.方法 皮下注射丙酸睾酮建立去势SD大鼠前列腺增生模型,造模成功后,随机分成6组,即空白组、模型组、凤尾草总黄酮组(高、中、低剂量组)、度他雄胺组和普适泰组,灌胃给予相应药物,空白组和模型组给予等体积蒸馏水.给药45 d后,观察各组大鼠前列腺湿重和指数,检测血清雄激素(T)、双氢睾酮(DHT)、雌二醇(E2)含量,光镜观察前列腺组织病理学改变,电镜观察前列腺细胞超微结构变化.结果 凤尾草总黄酮能降低前列腺湿重及指数,各剂量组前列腺湿重[(1.750±0.245)、(1.998±0.328)、(2.064±0.196)g]及前列腺指数[(0.440±0.069)％、(0.481±0.085)％、(0.519±0.063)％]与模型组[(2.284±0.241)g、(0.586 ±0.100)％]比较均有降低,除凤尾草低剂量组的前列腺指数外,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),激素水平检测见凤尾草总黄酮高剂量组T、DHT[(0.18 ±0.01) μg/L、(16.3±1.61) ng/L]较模型组[(0.21 ±0.02) μg/L、(18.4±1.65) ng/L]降低,E2/T比值(7.24±0.63)较模型组(6.53±0.35)升高,组间差异有统计学意义(P＜0.05),凤尾草总黄酮还能够明显改善前列腺腺体的组织结构,电镜下可观察到用药后发生细胞凋亡现象.结论 凤尾草总黄酮对丙酸睾酮诱导的去势大鼠前列腺增生的具有明显治疗作用,其作用机制可能与降低血清T和DHT水平,提高E2/T比值,使体内雌、雄激素维持在相对平衡状态并促进细胞凋亡有关.
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量子点对泌尿系肿瘤活细胞的毒性效应
目的 探讨水溶性量子点硒化镉/硫化锌(CdSe/ZnS)对泌尿系肿瘤活细胞的毒性效应,观察其对泌尿系肿瘤细胞生长的影响.方法 将不同浓度的量子点(5、10、20、40、80 nmol/L)分别作用于膀胱癌EJ细胞和前列腺癌PC-3细胞,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测法来评价其对肿瘤细胞活性的影响.结果 CCK-8检测发现,两种活体细胞和量子点共同孵育24 h后,其存活率随着量子点浓度的升高均显示下降趋势,在量子点通常使用浓度(5、10、20 nmol/L)下,两种细胞的存活率分别为101.0％、99.2％、97.9％(EJ细胞)和100.1％、101.0％、99.0％(PC-3细胞),与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而在80 nmol/L高浓度时,两者存活率和对照组比较差异有统计学意义(P＜0.001),但是两种细胞的平均存活率也高达92.6％(EJ细胞)和95.8％(PC-3细胞).结论 高浓度的量子点对膀胱癌EJ和前列腺癌PC-3细胞的活性有一定程度的影响,但是通常使用浓度的量子点对它们的存活率几乎没有影响.
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芹菜素抑制PC-3细胞增殖及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3的作用
目的 观察芹菜素(API)对雄激素非依赖前列腺癌PC-3细胞的调控作用并探讨其机制.方法 以不同浓度(0、10、20、40 μmol/L)的API干预PC-3细胞48 h,通过细胞形态学观察以及细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测API对PC-3细胞的增殖抑制作用,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3 mRNA的表达.结果 CCK-8法检测显示0、10、20、40μmol/L API处理PC-3细胞48 h后的吸光度值分别为1.48 ±0.04、0.81 ±0.04、0.69±0.03、0.33±0.03,相较于对照组,10、20、40 μmol/L API浓度组对PC-3细胞均有显著的增殖抑制作用,抑制率分别为44.7％、53.5％、77.4％ (P＜ 0.01).0、10、20、40 μmol/L API浓度组Caspase-3 mRNA的表达分别为0.230±0.036、0.410±0.080、0.480 ±0.100、0.730±0.150,实验组与对照组之间的差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 API对PC-3细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性,其机制可能通过诱导PC-3细胞Caspase-3表达的增加,终导致细胞凋亡.
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氯胺酮相关性膀胱炎致病机制的研究
目的 建立氯胺酮相关性膀胱炎的动物模型,探讨其致病机制.方法 60只6～8周龄的C57小鼠分为实验组和对照组,两组分别按时间梯度再分为4、8、12周亚组,每组各10只.实验组给予氯胺酮100 mg/(kg·d)腹腔注射,对照组给予等量的生理盐水腹腔注射;分别于4、8、12周置于垫滤纸的方格中,观察每只小鼠的2h排尿次数,随后置于小鼠代谢笼中,收集24h尿液,检测尿中钾、钠离子及肌酐浓度;处死小鼠,取膀胱组织,行苏木素-伊红(HE)染色,光学显微镜观察形态学改变.结果 从8周起,实验组小鼠排尿次数增多,尿液中钾离子浓度降低,膀胱黏膜大量淋巴细胞浸润,部分膀胱组织可见鳞状细胞化生.结论 长期吸食氯胺酮可引起膀胱组织慢性炎症改变及上皮细胞鳞状化生,其损害机制可能与上皮屏障通透性改变有关.
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膀胱尿路上皮癌长链非编码RNA差异表达及意义
目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)在人类膀胱尿路上皮癌组织中的表达差异及意义.方法 收集手术切除12例尿路上皮癌及3例正常人膀胱尿路上皮黏膜,提取RNA,逆转录成cDNA并标记,在标准条件下将标记好的与芯片进行杂交,使用荧光扫描仪扫描荧光强度并分析基因表达谱差异.结果 采用Enhancer LncRNA profiling和Rinn LncRNAs profiling两种分析方法,分别发现了7条和25条差异表达的基因,并通过对其中3条差异表达基因进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测证实其表达与芯片结果一致.结论 LncRNA与膀胱尿路上皮癌发生、发展有着密切联系.
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维生素D受体、Klotho基因多态性与尿路含钙结石的相关性研究
目的 探讨维生素D受体(VDR)基因Fok Ⅰ及Klotho G395A和C1818T多态性位点在华东地区汉族人群中与尿路含钙结石发病风险的相关性.方法 306例尿路含钙结石患者及241名年龄匹配、无结石病史及家族史的健康对照者被纳入本研究.采用TaqMan单核苷多态性基因型分析方法,对2个Klotho基因多态性位点及VDR Fok Ⅰ位点与尿路含钙结石发病风险的相关性进行分析.结果 Fok Ⅰ FF纯合子基因型携带者结石发病风险显著高于ff纯合子基因型[比值比(OR)=1.68,95％可信区间(CI)=1.03 ～ 2.76,P＜0.05].同时,与f等位基因相比,F等位基因携带者结石发病风险增加了1.28倍,差异有统计学意义(OR=1.28,95％ CI=1.01～1.63,P＜0.05).结论 Fok Ⅰ位点F等位基因在华东地区汉族人群中可能成为尿路含钙结石形成过程中的危险因子.
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自约式半肾阻断带在肾部分切除术中的应用
目的 探讨自约式半肾阻断带在肾部分切除术中的可行性、安全性及临床应用价值.方法 采用自约式半肾阻断带行腹腔镜下成年香猪肾部分切除术10例.将阻断带套至肾中极,收紧约束带,行肾下极部分切除术(切除大小约2 cm×2 cm),术后解除阻断,记录术中出血量及安装和解除阻断带的时间.结果 手术均顺利进行.半肾阻断后见上半肾颜色红润,下半肾颜色苍白,手术创面未见明显出血,缝合后解除约束带,下半肾血供恢复.术中出血20～50 ml,安装阻断带时间4～11 min,解除阻断带时间为2～6 min.结论 通过自约式半肾阻断带法行肾部分切除术,可以减少热缺血的肾单位,从而减少肾功能的损伤.
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增韧基团-姜黄素单脂增强对前列腺癌的抑瘤作用
目的 探讨增韧基团-姜黄素单脂(叔丁氧羰基-苯丙氨酸酯姜黄素单酯)较姜黄素更增强对人前列腺癌的体内抑瘤作用的可行性.方法 建立人前列腺癌PC-3可移植性动物模型.裸鼠共40只,选取肿瘤体积接近的36只随机分成3组.A组(注射生理盐水);B组(注射姜黄素);C组(注射叔丁氧羰基-苯丙氨酸酯姜黄素单酯).隔日1次,共15次.用药后24 h处死裸鼠,剥瘤体,称重并计算抑瘤率.对肿瘤组织行苏木素-伊红(HE)染色和原位末端转移酶标记(TUNEL)检测.结果 成功建立人前列腺癌可移植性动物模型.A、B、C组抑瘤率分别为0％、21.76％、55.18％,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).TUNEL检测结果显示,A、B、C组凋亡指数分别为(4.2±1.3)％、(26.6±7.8)％、(49.2±8.6)％,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 叔丁氧羰基-苯丙氨酸酯姜黄素单酯与姜黄素比较,对人前列腺癌移植瘤有更显著的抑制作用.
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腹腔镜肾上腺手术三种入路的临床疗效比较
目的 探讨侧卧位后腹腔入路(A组)、侧卧位前路经腹入路(B组)和70°斜侧卧位肋弓下缘经腹入路(C组),3种入路腹腔镜肾上腺手术的临床疗效比较.方法 3种入路共实施肾上腺手术219例,比较3组患者肿瘤直径、手术时间、术中出血量、术后肠功能恢复时间、住院天数、术后并发症发生及操作舒适性评分等指标.结果 A组和B组各3例,C组1例中转开放手术;术中平均失血量:A组57.5 ml,B组42.7 ml,C组35.2 ml,A组显著多于B组和C组,B组和C组差异无统计学意义(P＞0.05);操作舒适性评分:A组6.3分,B组5.9分,C组7.4分.切除肿瘤的平均直径、平均手术时间、术后肠功能恢复时间、术后平均住院时间,3组间差异无统计意义(P＞0.05).结论 3种手术入路均可有效治疗肾上腺腺瘤,建议根据熟练程度、肿瘤大小、患者体型合理选择手术入路.
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裸小鼠原位人膀胱癌细胞浅表膀胱癌模型的建立
目的 建立一种新型裸小鼠原位膀胱癌模型.方法 设计一种将人膀胱癌细胞种植在裸小鼠膀胱上的新型建模装置.采用24只BALB/c裸小鼠,建立裸小鼠原位人膀胱癌细胞浅表膀胱癌模型;随机分为两组,实验组应用本装置,经尿道插入裸小鼠膀胱,进行定位膀胱黏膜切割,再灌注EJ人膀胱癌细胞进行种植;对照组采用开腹后直视下用细穿刺针穿入膀胱腔内划割黏膜,再灌注EJ人膀胱癌细胞进行种植,监测两组膀胱癌细胞在裸小鼠膀胱黏膜上的生长.结果 成功地应用本模型建立装置建立裸小鼠膀胱癌原位模型,实验组成瘤率为91.7％ (11/12),对照组成瘤率为55.6％ (5/9),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 本膀胱癌原位模型的建立装置微创、简便、高效.
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大鼠颞骨内段面神经缺血损伤模型的建立
目的 通过损伤岩动脉建立建立大鼠面神经缺血模型,并根据术后行为学和面神经神经元存活数目以及轴突的变化探讨模型的可行性及稳定性.方法 60只SD大鼠,手术组40只行岩动脉横断术,对比正常组10只及假手术组10只,观察大鼠行为学表现,并行Nissl染色观察面神经核团位置、形态和存活数目以及用电镜观察面神经轴突及髓鞘的变化.结果 术后手术组大鼠均出现面瘫表现;手术组存活面神经元数目对比正常组和假手术组明显减少(P＜0.05);手术组的轴突空泡化及髓鞘破坏所占的比例较正常组和假手术组明显增多(P＜0.05).结论 此模型对血管定位准确,面神经元数目缺失及轴突变化明显.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
