中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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单启动子双表达载体pIRES-p14ARF-p53的构建及其对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用
目的 构建双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53,并研究其对骨肉瘤细胞增殖生长的抑制作用.方法 利用基因工程技术,将从培养的正常人肝细胞系L02细胞中扩增出的p14cDNA(0.5 kb)亚克隆至pIRES载体中,通过聚合酶链反应(PCR)、限制性内切酶酶切鉴定重组质粒pIRES-p14ARF-p53.通过脂质体介导转染入骨肉瘤MG-63细胞中,并筛选出阳性克隆,流式细胞仪测定瘤细胞DNA含量和细胞周期;逆转录(RT)-PCR和Western bolt对稳定转染后的瘤细胞p53、p14ARF蛋白的表达进行定性和半定量检测.噻唑蓝(MTT)比色法与细胞生长曲线观察细胞增殖情况.结果 成功构建出双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53.转染后瘤细胞形态由转染前密集排列的多角形、星形转变为排列稀疏的长梭形细胞,瘤细胞生长速度较前缓慢,群体倍增时间比转染前增加了2.3倍,且易出现脱壁并见散在瘤细胞凋亡;流式细胞仪检测发现转染后的瘤细胞多停滞于G1期;RT-PCR与Western blot检测证实p14ARF、p53基因在靶细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达,转染MG-63后24、48、72、96 h瘤细胞生长抑制率分别为:33.43%、69.37%、66.19%、75.26%,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 野生型p53和p14ARF协同抑制骨肉瘤细胞的增殖促进瘤细胞的凋亡,为进一步研究p14ARF与p53在骨肉瘤基因治疗的体内实验奠定了基础.
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猪肝移植时无心跳供体耐受热缺血时间的研究
目的 探讨猪肝移植时供肝耐受无心跳热缺血损伤的安全时限.方法 对24头小型家猪根据供肝热缺血时间0、15、30、45 min,随机分为4组,而后行原位肝移植,分析移植后肝脏丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、三磷酸腺苷(ATP)的含量以及病理变化.结果 WI-45组胆管吻合前无胆汁流出.WI-15、30、45组血清ALT、LDH、肝细胞ATP的含量与WI-0组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),WI-15、30组间差异无统计学意义(P＞0.05),但WI-45组与WI-15、30组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).电镜下观察WI-15、30组肝组织呈可复性改变,WI-45组则呈不可逆性改变.结论 猪肝移植时,供肝耐受无心跳热缺血损伤的的安全时限为30 min.
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肝门胆管癌中bcl-2的表达及临床意义
目的 探讨bcl-2表达在肝门胆管癌发生、发展中的作用,评价其在肝门胆管癌预后判断中的价值.方法 免疫组织化学法检测36例肝门胆管癌和10例正常胆管石蜡切片标本中bcl-2表达,分析其与肝门胆管癌临床病理参数和术后生存率的关系,生存率计算采用Kaplan-Meier法,Log-rank检验比较生存曲线.结果 肝门胆管癌中bcl-2阳性表达率为55.6%(20/36),正常胆管bcl-2阳性率10.0%(1/10),两者差异有统计学意义(P＜0.05);bcl-2阴性组术后1、3、5年存活率分别为82%,55%和25%,阳性组分别为33%和9%,无5年生存者,两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肝门胆管癌中bcl-2有较高阳性表达率,bcl-2表达在肝门胆管癌发生、发展中可能起促进作用;bcl-2表达可能是肝门胆管癌预后因素之一,阳性表达多提示预后不良.
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缺氧诱导因子-1α与血管内皮生长因子在胶质瘤中的表达
目的 探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α与血管内皮生长因子(VEGF)在不同级别胶质瘤中的表达特点及其生物学特性.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学法分别检测20例新鲜冷冻标本及117例多聚甲醛固定的不同级别胶质瘤标本中HIF-1α与VEGF的表达情况,并对实验结果 进行半定量计算和统计学分析.结果 RT-PCR结果 示正常脑组织和Ⅰ-Ⅳ级胶质瘤中HIF-1αmRNA平均吸光度值分别为11.99、12.18、48.31、80.96、112.77,正常脑组织和Ⅰ级胶质瘤间差异无统计学意义,其余各组间差异均有统计学意义(F＝969.45,P＜0.01);而VEGF mRNA平均吸光度值分别为29.50、37.97、60.33、84.61、112.97,各组间差异均有统计学意义(F=312.91,P＜0.01).免疫组织化学结果示HIF-1α在正常脑组织和Ⅰ-Ⅳ级胶质瘤中的阳性表达率分别为10%、13.3%、53.5%、80.6%、100%,正常脑组织和Ⅰ级胶质瘤间差异无统计学意义,其余各组间差异均有统计学意义(χ2=38.19,P＜0.05);同样,VEGF在各组中的阳性表达率分别为0%、33.3%、62.8%、83.3%、100%,各组间差异均有统计学意义(χ2=45.78,P＜0.05).结论 HIF-1α与VEGF在胶质瘤中的表达与胶质瘤的病理分级密切相关,随着病理级别的升高,HIF-1α与VEGF无论是在mRNA水平还是在蛋白水平的表达均上调,并且两者间的表达也具有相关性.
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糖尿病大鼠骨折后血管内皮生长因子的变化
目的 观察糖尿病大鼠骨折后血管内皮细胞生长因子(VEGF)的变化.方法 70只清洁雄性Wistar大鼠随机分为对照组和链脲佐菌素(stz)诱导的速发型糖尿病组,线锯锯断两组大鼠左胫骨后复位外固定.于骨折后1、2、3、4、6、8周取静脉血保留血清;大鼠左下肢X线片观察骨折愈合情况;取骨折断端组织行HE染色光镜观察、免疫组织化学检测VEGF;酶联免疫吸附分析法(Elisa)检测血清VEGF.结果 糖尿病组4周可以看见纤维骨痂,8周才有较多骨性骨痂出现,较对照组明显滞后;HE染色镜下观察糖尿病组骨形成滞后;3周VEGF免疫组织化学灰度值两组间差异有统计学意义,(实验组142.8±3.8;对照组128.0±5.5,P＜0.01);两组血清中VEGF差异无统计学意义(P＞0.05).结论 糖尿病大鼠骨折后血清中VEGF未减少,局部组织VEGF含量低是导致糖尿病大鼠骨折愈合差的原因之一.
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花生四烯酸乙醇胺对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察神经酰胺通路在大麻受体激动剂花生四烯酸乙醇胺(AEA)抑制人胶质瘤U251细胞增殖及诱导细胞凋亡中的作用.方法 噻唑蓝(MTT)法分别测定合用不同浓度C2-神经酰胺(5～20 μmol/L)或用烟曲霉毒素(FB1)(1,10 μmol/L)预处理24 h对AEA(1～10 μmol/L)抑制U251细胞增殖作用的影响;流式细胞仪annexin-V/PI双染色法定量分析10 μmol/L FB1预处理24 h后对10 μmol/L AEA促细胞早期凋亡作用的影响.结果 AEA浓度依赖性抑制U251细胞的增殖且与C2-神经酰胺具协同作用;10 μmol/L FB1预处理24 h可显著对抗AEA对U251细胞增殖的抑制作用.AEA(10 μmol/L)可诱导U251细胞发生早期凋亡(21.3%),而FB1(10 μmol/L)预处理后凋亡发生率降为8.3%.结论 AEA可通过增加神经酰胺从头合成抑制人胶质瘤U251细胞的增殖并诱导早期凋亡.
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榄香烯体外增强人脑胶质瘤U251细胞对γ射线敏感性的研究
目的 探讨榄香烯体外增强人脑胶质瘤U251细胞对γ射线敏感性的机制研究.方法 人脑胶质瘤U251细胞分为4组:空白组、加药组(榄香烯治疗)、放射组(单独γ射线照射)和联合组(榄香烯联合γ射线照射),应用克隆形成计数法,绘制细胞放射生存曲线,计算增敏比,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期,电镜观察不同方法处理的U251细胞超微结构的改变,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测c-myc和bcl-2基因的表达.结果 榄香烯增强γ射线对U251细胞株抑制率,呈剂量的依赖性,榄香烯增强U251细胞对γ射线敏感的比值为1.38,FCM检测榄香烯增强γ射线对U251细胞的阻滞作用,导致G2/M期细胞比例明显升高,联合组细胞电镜下见细胞核分裂;RT-PCR证实榄香烯增强γ射线对U251细胞c-myc和bcl-2基因表达的抑制作用.结论 榄香烯对U251细胞有放射增敏作用,其作用机制可能与下调bcl-2和c-myc基因表达有关,诱导U251细胞凋亡和对细胞G2/M期阻滞有关.
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CD147与基质金属蛋白酶-2、血管内皮生长因子在人膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义
目的 探讨膀胱移行细胞癌(BTCC)组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素-蛋白过氧化酶(SP)法检测72例BTCC组织和12例正常膀胱组织CD147与MMP-2、VEGF的表达,分析CD147和MMP-2、VEGF间及其与BTCC部分临床生物学特性的相关性.结果 BTCC组织中有CD147、MMP-2、VEGF表达,其阳性率分别为68.1%、76.4%、70.8%.CD147表达与病理分级显著相关,与临床分期未见相关;MMP及VEGF表达与病理分级和临床分期显著相关;CD147表达与MMP-2、VEGF表达呈显著正相关(r=0.558,P＜0.01;r=0.406,P＜0.01).结论 CD147在BTCC的浸润与转移中起重要作用,是新的治疗靶点.
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膀胱癌细胞中DAPK基因启动子甲基化状态分析
目的 分析DAPK抑癌基因在T24、5637、ScaBER三种膀胱癌细胞中的表达情况及该基因启动子区的甲基化状态.方法 采用半定量RT-PCR和Western blot分别检测三种膀胱癌细胞中DAPK基因的表达,用甲基化特异PCR(MSP)方法检测三种细胞中的DAPK基因启动子甲基化状态.观察甲基转移酶(DMNT)抑制剂5-aza-2'-deoxy-cytidine(5-aza-CdR)对各细胞中的基因表达和甲基化状态的影响.结果 T24细胞中未检测到DAPK基因的表达,也未检测到启动子甲基化;5637细胞中该基因表达水平极低,在ScaBER细胞中该基因的表达较前两者要高.5637细胞和ScaBER细胞中均有甲基化改变.2.5 μmol/l浓度的5-aza-CdR可以有效上调5637和ScaBER细胞的DAPK基因的表达.结论 抑癌基因DAPK的表达异常与移行细胞癌的发生发展有重要联系,且基因启动子区CpG岛的异常甲基化在调节DAPK基因的表达中发挥重要作用.
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干扰素α-2b对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡及端粒酶活性的影响
目的 观察干扰素α-2b(IFNα-2b)对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长增殖、端粒酶活性及凋亡的影响,探讨其在瘢痕疙瘩治疗中的作用机制.方法 进行成纤维细胞原代培养,细胞分别来自8例瘢痕疙瘩标本和8例正常皮肤标本.第3到4代的细胞用于实验.以干扰素α-2b作用于体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞,噻唑蓝(MTT)法检测成纤维细胞生长增殖情况,聚合酶链反应-酶联免疫吸附法(PCR-ELISA法)检测不同时间成纤维细胞端粒酶活性,应用流式细胞仪观察处理后成纤维细胞凋亡.结果 IFNα-2b对瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞有生长抑制作用,可明显下调成纤维细胞端粒酶活性,和对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),并呈现出明显的时间-效应关系.体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞经10 000 U/ml IFNα-2b处理后,能诱导成纤维细胞凋亡发生,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),且具有明显的时间依赖性.结论 作为一个负性调节因子,IFNα-2b能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长增殖并诱导成纤维细胞发生凋亡,降低成纤维细胞端粒酶活性是其作用机制之一.
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Tamm-Horsfall蛋白对草酸钙结晶成核和聚集的影响
目的 在人工尿液中,观察不同浓度及不同性质的Tamm-Horsfall蛋白对草酸钙的成核,生长,聚集的影响.方法 通过分光光度计在620 μm时的A值的测定可在过饱和溶液中观察草酸钙晶体的成核和积聚.观察参数包括诱导时间(induce time),简写为TI,即形成可观察微粒所需的时间;成核曲线(slope of nucleation)的速率,简写为SN,即分光光度计A620所观察的曲线上升支;聚积曲线(slope of aggregation)的速率,简写为SA,即下降支,以及加入不同浓度的NTHP(正常人尿液中所提取的TH蛋白),SF-THP(结石患者尿液中所提取的TH蛋白)后对参数的影响.结果 草酸钙结晶实验的诱导时间为(60.0±2.0)s,成核速率(SN)(1.058±0.036)×10-3/s,聚集速率(SA)为(0.074±0.006)×10-3/s.NTHP浓度20 mg/L时,诱导时间(59±8)s;NTHP 30 mg/L时,诱导时间(63±11)s;NTHP40mg/L时,诱导时间(57±6)s,NTHP既可抑制晶体成核,又可抑制晶体的聚集.SF-THP 20 mg/L时,诱导时间(37±2)s;SF-THP 30 mg/L时,诱导时间(34±3)s;SF-THP 40 mg/L时,诱导时间(31±5)s,ST-THP降低TI并且促进聚集.结论 NTHP和ST-THP对草酸钙晶体的结晶动力学的影响是不同的.
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小干扰RNA对特异性沉寂淋巴细胞白细胞介素-2基因表达和功能的影响
目的 探讨体外转录法合成的小干扰RNA(siENA)对大鼠淋巴细胞白细胞介素(IL)-2基因的表达和功能的影响.方法 设计并合成3条siENA(siENA-1、siRNA-2、siRNA-3)在阳离子脂质体的介导下转染淋巴细胞.于转染后0、24、48 h收集细胞,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测IL-2 mRNA的变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测IL-2表达的变化.结果 体外合成的3条siRNA通过脂质体转染淋巴细胞后,均能不同程度地抑制IL-2的表达.转染后24 h的ELISA方法检测显示siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3组的抑制率分别为(79.20 ±1.83)%、(66.50±1.42)%、(43.90±1.22)%,以siENA-1的IL-2抑制作用强.半定量RTPCE方法检测显示siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3转染后的IL-2 mRNA均受到不同程度的抑制,其中siENA-2组的抑制作用明显(82.10±1.85)%.结论 siRNA可特异性的抑制淋巴细胞IL-2基因的转录和表达,为研究siRNA在移植免疫耐受及防移植物抗宿主病(GVHD)方面的应用提供了依据.
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胃癌幽门螺杆菌感染与白细胞介素-1基因多态性的相关性研究
目的 探讨中国汉族人非贲门胃癌幽门螺杆菌(Hp)感染与白细胞介素(IL)-1基因多态性的关系,探讨宿主遗传因素对Hp感染在非贲门胃癌的作用.方法 采用病例对照研究和PCR-RFLP方法,检测143例非责门胃癌患者和264例正常对照者的IL-1B和白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1 receptor antagonist,IL-1RN)双等位基因型分布.Hp感染通过检测血清Hp Ab-IgG.结果 Hp阳性非贲门胃癌患者IL-1B-511*T等位基因频率高于Hp阴性患者(60%vs 46%,P=0.0342,OR=1.666,95%CI:1.045～2.656),也高于正常对照组(60% vs 48%,P=0.0071,OR=1.665,95%CI:1.149～2.412),多因素logistic回归分析校正年龄和性别后,与携带IL-1B-511*C/C基因型者比较,携带T/T基因型者胃癌风险升高3.01倍(OR=3.01,95%CI:1.27～7.11,P=0.012),携带IL-1B-511*T等位基因者胃癌风险升高2.29倍(OR=2.29,95%CI:1.08～4.86,P=0.032).结论 IL-1B-511*T等位基因和Hp阳性胃癌相关,提示该等位基因在Hp阳性非贲门胃癌发病机制中可能起重要作用.
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缺血后处理对猪体外循环手术心肌肌钙蛋白Ⅰ及肌酸激酶同功酶的影响
目的 探讨缺血后处理对猪心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn Ⅰ)及肌酸激酶同功酶(CKMB)的影响.方法 24只小型约克猪(体重35～40 kg)被随机分为4组.A组:于体外循环(CPB)开始后并行循环45 min,心肌缺血90 min,再灌注120 min;B组:升主动脉阻断前进行心脏缺血预处理(阻断升主动脉5 min、开放10 min,重复3次),余处理与A组相同;C组:并行循环45 min,心肌缺血90min,再灌注120 min;再灌注开始进行缺血后处理(阻断升主动脉30 s后开放30 s,重复3次,共3min);D组:缺血预处理+缺血后处理.在CPB前、缺血90分、再灌注30、60、90、120 min采静脉血检测血cTn Ⅰ、CKMB水平.结果 在再灌注30、60、90、120 min,A组cTn Ⅰ和CKMB分别为5.41、6.63、8.84、13.25 μg/L和18.61、21.53、25.54、29.73 μg/L,B组分别为2.61、2.97、4.60、5.97 μg/L和12.45、13.68、15.50、14.18 μg/L,C组分别为3.01、3.21、4.68、5.92 μg/L和14.01、14.51、16.48、16.71 μg/L,D组分别为2.63、3.06、4.68、6.04 μg/L和13.08、14.20、15.18、15.86 μg/L;血浆cTn Ⅰ和CKMB水平在B组、C组及D组显著低于A组(P＜0.05),而B组和C组与D组无统计学意义(P＞0.05).结论 缺血后处理可以抑制cTn Ⅰ的释放和CKMB漏出,减轻心肌缺血再灌注损伤而发挥心肌保护作用.
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吸入氧化亚氮对大鼠耳蜗总RNA产量的影响
目的 通过检测氧化亚氮对大鼠耳蜗总RNA产量的影响,探讨氧化亚氮(N2O)对大鼠内耳损伤的机制.方法 将30只健康Wistar大鼠随机等分为3组:A组(对照组,n=10)持续吸入50%O23 h;B组(实验组,n=10)持续吸入50%N2O+50%O23h;C组(实验组,n=10)持续吸入50%N2O+50%O2 6 h.联用TRIzol和RNeasy法分别抽取3组大鼠耳蜗的总RNA,用分光光度法测总RNA的产量及电泳检测其质量.结果 A组大鼠耳蜗得到总RNA 7.69 μg;B组大鼠耳蜗得到总RNA 6.51 μg,与A组比较减少15%;C组大鼠耳蜗得到总RNA 5.32 μg,与A组比较减少31%.A260/A280值分别为2.07、2.04和2.05,提示RNA纯度高,电泳结果提示总RNA无降解.结论 长时间吸入N2O的大鼠耳蜗总RNA较正常大鼠耳蜗总RNA产量降低,提示N2O干扰耳蜗RNA产量可能是造成耳损害的原因之一.
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三氧化二砷对不同p53表型胶质瘤细胞程序性死亡相关基因表达的影响
目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对两种不同p53表型胶质瘤细胞U87MG、T98G作用后细胞程序性死亡相关基因表达的影响.方法 应用基因芯片技术筛选出As2O3作用于两种胶质瘤细胞U87MG、T98G前、后与细胞程序性死亡有关的表达差异有统计学意义的基因;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率;用电镜和原位凋亡检测(TUNEL)法及及吖啶噔/溴乙啶双荧光染色进行细胞形态观察、流式细胞仪等方法检测细胞程序性死亡改变.结果 两种胶质瘤细胞应用As2O3后,透射电镜下T98G中频繁地观察到细胞自噬现象;筛选出U87MG细胞在As2O3作用前后差异表达且与程序性死亡相关基因共46条(上调33条,下调13条).T98G细胞在As2O,作用前后差异表达且与程序性死亡相关基因共54条(上调34条,下调20条).结论 As2O3以剂量依赖的方式通过细胞程序性死亡来抑制U87MG和T98 G细胞的增殖;As2O,诱导下的两种不同P53表型的细胞系中还存在非凋亡调控的细胞程序性死亡(自噬);P53/ATM通路的基因、Bcl-2家族、TNF配体家族、TNF受体家族基因参与As2O3诱导胶质瘤细胞程序性死亡的发生机制.
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门静脉高压症大鼠断流术后胃黏膜缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子的表达
目的 观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)在断流术前后肝前性门静脉高压症(PHPH)大鼠胃黏膜的表达,探讨HIF-1α和VEGF在门静脉高压胃病(PHG)的发生发展的作用.方法 取Wistar大鼠制备PHPH模型80只,设假手术组(SO)60只,在术后3周施断流术.检测HIF-1α、VEGF和CD34在大鼠胃壁组织中的表达.结果 断流术前PHPH组大鼠胃壁中HIF-1α(5.8±1.3)和VEGF(12.0±3.0)的表达均明显高于SO组[HIF-1α(0.037 50±0.051 75),VEGF(0.7±0.1),P＜0.01].术后HIF-1α、VEGF和MVD均有升高趋势.结论 HIF-1α和VEGF可能参与了PHG的发生发展,断流术本身能通过某种机制影响HIF-1α和VEGF的表达,加重PHG.
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表达转化生长因子βⅡ型受体胞外区-活化T细胞表达和分泌的调节因子融合基因重组腺病毒的构建与鉴定
目的 构建表达转化生长因子βⅡ型受体(TβRⅡ)胞外区-活化T细胞表达和分泌的调节因子(RANTES)融合基因重组腺病毒并鉴定其在肿瘤细胞的表达.方法 采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增小鼠TβRⅡ胞外区和RANTES基因,重叠PCR法扩增TβRⅡ胞外区-RANTES融合基因,将融合基因克隆至pDC316载体,采用AdMax Adenovirus Vector Creation试剂盒构建融合基因重组腺病毒载体,融合基因重组腺病毒按moi=100:1的比例体外感染小鼠肺腺癌L795细胞系,Western Blot方法检测感染后肿瘤细胞的蛋白表达.结果 RT-PCR正确扩增了440 bpTβRⅡ胞外区、244 bp RANTES基因,重叠PCR正确扩增了745 bpTβRⅡ胞外区-RANTES融合基因,重组质粒融合基因-pDC316经酶切鉴定正确,与pJM17双质粒共转染获得表达融合基因重组腺病毒,病毒滴度为8×1010 pfu/ml,感染后的LA795细胞有相对分子质量为33 000的蛋白表达.结论 成功构建表达TβRⅡ胞外区-RANTES融合基因重组腺病毒载体,为进行体内抗肿瘤基因治疗的研究创造条件.
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核因子-κB的活化与基质Gla蛋白mRNA的表达在门静脉高压症血管病变中的意义
目的 探讨脾脏动、静脉组织内核因子-kappaB(NF-κB)的活化与基质Gla蛋白(matrix Gla protein,MGP)mRNA的表达在门静脉高压症性血管病变中的意义.方法 实验组为肝炎后肝硬化门静脉高压症(portal hypertension,PHT)患者28例,住院期间行择期脾切除加贲门周围血管离断术;对照组选取同期因外伤性脾破裂急诊人院行脾切除术患者12例.采用化学发光凝胶电泳迁移率(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)方法检测脾脏动、静脉血管NF-κB的活性;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测血管组织的MGPmRNA表达.结果 对照组内脾脏动、静脉组织MGPmRNA分别为0.23±0.10、0.26±0,13,显著低于PHT组脾动脉、脾静脉的0.58±0.19、0.55±0.15,差异有统计学意义(P＜0.05);于PHT组脾动、静脉内检测到NF-κB活性表达1.44±0.23、1.38±0.18,显著高于对照组脾动、静脉的0.19±0.12、0.25±0.16,差异有统计学意义(P＜0.05),且PHT组脾脏动、静脉MGP mRNA表达与NF-κB的活性呈显著正相关(r=0.692,P＜0.05;r=0.703,P＜0.05).结论 肝硬化时PHT血管组织内NF-κB的活化,MGPmRNA的表达增强,调节血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的增殖和迁移,并参与了内脏血管病变形成和发展.
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良性脑膜瘤Ets-1和基质金属蛋白酶-9的表达及其与肿瘤复发的关系
目的 探讨良性脑膜瘤中E26转录因子-1(E26 transformation-specitic-1,Ets-1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及其与肿瘤复发的关系.方法 选取52例Simpson Ⅰ级切除的良性脑膜瘤采用免疫组织化学法检测Ets-1和MMP-9的表达,分析其参数与肿瘤复发的关系.结果 Ets-1的表达:非复发组免疫组织化学(IHC)评分为(2.8±1.7),复发组为(6.3±1.5),复发组较非复发组的IHC评分增高,两者差异有统计学意义(P＜0.01).MMP-9的表达:非复发组IHC评分为(2.2±1.8),复发组为(3.3±1.7),复发组较非复发组的IHC增高,两者差异有统计学意义(P＜0.05).Ets-1和MMP-9的表达具有呈显著正相关(γ=0.822,P＜0.01).结论 Ets-1正性调节MMP-9的表达水平;Ets-1和MMP-9可以作为预测良性脑膜瘤复发的危险因素.
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葛根素对乙醇性股骨头坏死的预防作用
目的 探讨葛根素对小鼠乙醇性ONFH的预防作用.方法 4周龄小鼠随机分为3组,A组给予白酒,B组给予白酒和葛根素,C组给水.4、6、8、10个月分批检测动物血清学、肝脏和股骨头组织学、基因表达等变化.结果 实验6个月时:(1)3组血清CHO、TG、ALP分别为:(6.39±0.49)、(3.19±0.11)、(2.98±0.36)mmol/L,(1.01±0.15)、(0.71±0.13)、(0.68±0.22)mmol/L,(161.6+32.44)、(196.5±31.52)、(203.4±22.83)IU.(2)A组出现脂肪肝,股骨头骨小梁变细稀疏,髓内造血组织减少,脂肪与空骨陷窝明显增多.B组股骨头内脂肪稍增加,空骨陷窝比正常C组少.3组大脂肪细胞平均直径和空骨陷窝计数分别为(40.02±3.25)、(39.15±3.67)、(38.51±3.09)μm,(13.5±1.6)、(9.8±2.2)、(10.3±2.7)%.(3)A组中PPARγmRNA呈高表达,Osteocalcin mRNA呈低表达.B组和C组中PPARγmRNA呈低表达,Osteocalcin mRNA呈高表达.始自6个月,A组各数据和B、C组间差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),B、C组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 葛根素能够预防小鼠乙醇性ONFH的发生.
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核心结合因子a1基因转染的骨髓基质干细胞复合生物衍生骨支架诱导异位成骨的研究
目的 观察核心结合因子a1(Cbfa1)基因转染的人骨髓基质干细胞(hBMSCs)复合生物衍生骨支架异位成骨的效果.方法 雌性BALB/C裸鼠18只,随机分为3组:转染Cbfa1基因的hBMSCs复合支架(A)、未转染细胞复合支架(B)和单纯支架组(C),每组6只.分别将各组人工骨植入裸鼠背部皮下,于术后4、8周行组织学、免疫组织化学和荧光原位杂交等检测.结果 Cbfal基因转染后,可诱导BMSCs骨钙素、Ⅰ型胶原呈阳性表达.体内植入后,A组成骨速度及成骨质量均明显优于其他组;植入细胞及宿主间质细胞呈骨钙素、骨形态发生蛋白2阳性表达;4周时,Y染色体阳性细胞数明显高于B组.结论 Cbfal基因转染BMSCs,能够诱导其向成骨细胞分化、上调骨形态发生蛋白2基因表达并提高移植细胞的生存率,明显促进异位成骨能力.
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大鼠异体肢体移植中淋巴细胞亚群的动态观察
目的 探讨大鼠后肢异体移植中排斥反应与T淋巴细胞亚群和活化T细胞的关系.方法 将24只(8只Wistar,16只SD)大鼠随机分成两组,实验组8只为Wistar→SD后肢移植未作免疫抑制组,对照组8只为FK506(2 mg/kg体重)和霉酚酸(20 mg/kg体重)免疫抑制组,观察术后排斥反应及病理检查;流式细胞仪检测T细胞亚群和活化T细胞.结果 术后6～8 d,实验组移植肢体出现排斥反应,活化T细胞(CD3/CD69、CD3/CD25、CD3/HLA-DR)已于排斥反应发生(6.88±0.83)d前2～4 d显著升高,CD4/CD8比值中度升高;活化T细胞增高与排斥反应程度呈正相关(相关系数r为0.874、0.854、0.879,P＜0.05);CD4/CD8比值与排斥反应程度无明显相关(相关系数r=0.544,P＞0.05);对照组,活化T细胞较术前无明显变化,未出现排斥反应.结论 动态监测活化T细胞将有助于异体肢体移植急性排斥反应的早期诊断.
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骨肉瘤中血管生成素-2与受体Tie-2 mRNA表达及其意义
目的 探讨血管生成素-2(Ang-2)及其受体Tie-2在骨肉瘤血管生成中作用及其对骨肉瘤恶性演进的影响.方法 采用原位杂交和免疫组织化学技术,检测46例骨肉瘤、15例骨软骨瘤、5例正常骨组织中Ang-2、Tie-2 mRNA表达及骨肉瘤中VEGF、CD34蛋白表达,计数微血管密度(MVD);并与骨肉瘤主要病理学参数进行比较.结果 Ang-2、Tie-2 mRNA在正常骨组织无表达,少量表达于骨软骨瘤及骨肉瘤瘤旁组织,明显表达于骨肉瘤中(69.6%、73.9%);Ang-2、Tie-2表达水平与骨肉瘤组织学分级分型无关,转移组显著高于无转移组(P＜0.01);高MVD组高于低MVD组(P＜0.01),Ang-2与VEGF表达相关,Ang-2与Tie-2表达正相关(r=0.445,P＜0.01).结论 Ang-2及其受体Tie-2参与了骨肉瘤血管生成调控,与骨肉瘤浸润性生长和转移密切相关.
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羟基磷灰石纳米粒子肝动脉灌注对兔VX2肝种植瘤生长和bax/bcl-2蛋白表达的影响
目的 探讨羟基磷灰石纳米粒子(Nano HAP)在体内对兔VX2肝种植瘤生长的抑制作用及对肿瘤细胞bax/bcl-2凋亡蛋白表达的影响.方法 将56只VX2肝荷瘤兔随机分成四组,通过肝动脉灌注Nano HAP溶胶、5-Fu以及5-Fu与Nano HAP的混合液,并与生理盐水组对照.观察各组动物的一般情况,对肿瘤体积进行监测并比较.采用免疫组织化学染色观察bax/bcl-2蛋白的表达.结果 各治疗组对肿瘤生长都有明显的抑制作用.Nano HAP溶胶组肿瘤体积明显小于对照组(P＜0.05),肿瘤生长抑制率达到28.1%;5-Fu组抑瘤率达到43.7%,但动物表现出明显毒副作用;联合治疗组抑瘤率达到51.2%,而且毒副反应明显小于5-Fu组.Nano HAP组及联合治疗组免疫组织化学染色显示bcl-2蛋白表达率分别为41.7%(5/12)、38.5%(5/13),较对照组72.7%(8/11)明显降低;bax蛋白表达率为50.0%(6/12)、61.5%(8/13),明显高于对照组27.3%(3/11).结论 Nano HAP在体内对兔VX2肝种植瘤生长有明显的抑制作用,而且能明显降低5-Fu的毒性作用.其抑瘤机制可能是通过影响bax/bcl-2的表达加速肿瘤细胞凋亡.
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部分可吸收腹壁疝修补材料的研究
目的 对聚丙烯网(polypropylene mesh,PPM)+壳聚糖膜部分可吸收复合材料修补大鼠腹壁缺损的效果进行研究.方法 S-D大鼠80只,随机分为单纯PPM修补组(Ⅰ组),PPM+壳聚糖膜复合材料修补组(Ⅱ组)和商品化防粘连复合补片组(Ⅲ组).手术造成腹壁缺损,分别采用上述三种补片修补,术后分期进行腹腔内粘连评分,组织学检查及抗张强度的测定.结果 Ⅰ组大鼠术后各期腹腔粘连明显高于Ⅱ组及Ⅲ组(分别P＜0.05),而Ⅱ组及Ⅲ组之间差异无统计学意义(P＞0.05).电镜下,术后90 d观察,Ⅰ组网片表面新腹膜的生长不规则,Ⅱ组网片表面有光滑、完整的新腹膜间皮细胞形成,Ⅲ组网片表面则没有新腹膜形成,而是形成纤维素性包裹层.术后60、90 d,三组网片修复腹壁缺损后的抗拉强度差异无统计学意义(P＞0.05).结论 本研究中利用PPM与壳聚糖膜这两种廉价材料组合后设计的部分可吸收复合网片,可安全放置腹腔,能有效的防止术后的粘连,并维持良好的修复强度,值得进一步研究和开发.
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增殖细胞核抗原小干扰RNA对人结肠癌CaCO2细胞抑制作用
目的 观察增殖细胞核抗原(PCNA)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌CaCO2细胞抑制作用.方法 WST-8法和克隆形成抑制研究No.2和No.4 PCNA siRNA对CaCO2细胞的作用;碘化丙锭(PI)单染检测细胞周期,Hochest33258染色观察凋亡形态,膜联蛋白(Annexin)V和PI双染测定凋亡百分率.结果 No.2和No.4 PCNA siRNA与CaCO2细胞作用,增殖抑制率分别为(72.24±1.01)%和(74.67±3.35)%;克隆形成抑制率均达90%;两种药物转染细胞均出现明显亚二倍体峰,Sub-G1+G0/G1期减少,S+G2/M期增多;siRNA处理组细胞有较多凋亡形态变化;凋亡率随浓度增加而增加,且早期凋亡率持续高于晚期凋亡/坏死率.结论 PCNA siRNA显著抑制人结肠癌CaCO2细胞增殖及克隆形成;细胞停留于G2/M期,明显诱导细胞凋亡.
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人工髋关节假体旁组织中巨噬细胞亚群的分布
目的 探讨人工髋关节假体周围组织中巨噬细胞亚群的分布情况.方法 获取因人工髋关节无菌性松动而行翻修术的37例患者假体周围组织,并用免疫组织化学的方法检测假体周围组织6个区中27E10(+)、25F9(+)和RM3/1(+)巨噬细胞亚群的分布.结果 在人工关节假体周围各个区域组织中均有27E10(+)、25F9(+)和RM3/1(+)的巨噬细胞存在.各区中25F9(+)的巨噬细胞百分数分别为(35.12±27.09)%、(42.6±28.01)%、(36.81±23.44)%、(33.86+26.63)%、(42.45±19.12)%和(42.50±29.10)%均高于各区中27E10(+)及RM3/1(+)巨噬细胞的百分数(P＜0.05).25F9(+)和RM3/1(+)的巨噬细胞亚群在2区、5区和6区较多,1区和4区较少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 假体旁组织中巨噬细胞亚群的分布与磨损颗粒相关,假体旁组织中同时存在着急性和慢性炎症过程.巨噬细胞不断地被激活可使炎症不断发展,这也许是导致人工关节假体无菌性松动不可避免的重要原因.
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重复内镜活检和切除组织病理检查在消化道疾病中的价值
我们通过对21例因有消化道症状而行胃、结肠镜检查发现明显黏膜异常而内镜活检仅示一般病变者短期内重复内镜活检病理检查,并和手术切除整体病检比较相符合情况,从而判断重复活检病理和切除病理的实用价值.
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门静脉阻断后复流时小肠黏膜细胞凋亡的变化
我们通过建立日本大耳白兔门静脉夹闭致肠道血回流障碍后开放再通模型,取回肠组织检测其细胞凋亡情况,比较分析不同程度的门静脉阻断及持续不同时间后复流对小肠损伤情况的变化.
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骨水泥型人工股骨头置换和术后感染模型的建立
我们通过设计制作动物的人工关节,建立人工关节置换及术后感染模型.一、材料与方法1.兔人工股骨头的设计与制作:日本大耳白兔10只,体重2500～3200 g,平均2950 g,雌雄不拘,处死后取下左股骨,根据股骨解剖和X线片,测出(1)头直径(7.85±0.43)mm;(2)颈长度(2.21±0.10)mm;(3)颈干角(121.43±3.91)°;(4)髓腔直径(4.20±0.11)mm.据此,设计出小、大号兔股骨假体二种,头直径分别为7.0 mm和8.0 mm,柄长15～17 mm,颈长2 mm,颈干角120°.在重庆机电院以医用不锈钢制作,股骨头抛光,假体表面镀铬处理.
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血栓闭塞性脉管炎远期手术35例疗效分析
我们应用不同手术方式治疗晚期血栓闭塞性脉管炎患者35例,现将结果报道如下.一、材料和方法1.材料:自1995年1月起至今,对我校附院手术治疗过的Ⅲ、Ⅳ期(Fontaine分期法)血栓闭塞性脉管炎晚期患者每年采用不定期跟踪及预约定期复诊的方法,对术后已满3年和5年的患者进行检查并建立档案,从中随机选择35例,年龄32～56岁(平均48岁),全部为男性、单侧下肢.按手术方法共分两组:(1)"单一手术组",即单纯应用动静脉转流术的患者一组(17例);(2)"联合手术组",即应用动静脉转流术附加腰交感神经切除术的患者为一组(18例).
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肝癌细胞中干细胞亚群的分离与鉴定
我们在前期研究[1]的基础上,选择c-kit、CK7及两者的组合对原代肝细胞癌(HCC)细胞进行流式细胞分选,从肝癌细胞中分离与鉴定干细胞亚群.
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上尿路梗阻多层螺旋CT三维尿路成像的临床研究
上尿路梗阻在临床上较为常见,以往诊断主要依赖B超、排泄性尿路造影(IVU)、逆行肾盂输尿管造影(GRP)、普通CT、MR等检查,但随着CT技术的不断进步,CT尿路成像技术对上尿路梗阻性疾病的诊断具有重要的临床价值[1].我们自2002年2月采用多层螺旋CT三维尿路成像(MSCTU)检查上尿路梗阻性疾病89例进行分析,探讨其在上尿路梗阻中的诊断价值.
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新西兰兔肢体动脉移植后血管形态的变化
随着心脏血运重建全动脉化概念在CABG(冠状动脉旁路移植术)中的广泛被接受,RA(桡动脉)成为仅次于胸廓内动脉的候选血管桥.RA桥术后近期通畅率较高,但中、长期随访结果差异较大[1,2].我们通过建立自体肢体动脉桥动物模型,观察移植后肢体动脉重塑情况.
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后凸成形术治疗非病理性胸腰椎压缩性骨折
球囊扩张椎体后凸成形术在老年骨质疏松性脊柱压缩性骨折的治疗上开辟了新的道路[1].我们对该技术治疗非病理性胸腰椎压缩性骨折进行研究.一、材料与方法1.材料:新鲜小牛胸腰椎,聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥(PMMA),椎体后凸成形术器械等,椎体骨密度测定提示骨密度正常.
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小鼠同种异体胰岛移植排斥反应中可诱导共刺激分子的表达及阻断其对排斥反应的影响
移植胰岛长期存活率不高,主要原因是移植术后排斥反应[1,2],共刺激信号在排斥反应的发生中起重要作用.本实验旨在观察共同刺激分子-可诱导其刺激分子(ICOS)是否参与了小鼠同种异体胰岛移植排斥反应的发生,并用ICOS单克隆抗体(ICOSmAb)阻断ICOS,研究其对排斥反应的抑制作用.
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经皮椎体成形术联合125I粒子植入治疗脊柱转移瘤
目的 探讨经皮椎体成形术(PVP)联合125I粒子植入治疗脊柱转移瘤患者的临床疗效.方法 将80例脊椎转移瘤患者,随机分为单纯PVP组40例,PVP联合125I粒子植入组(联合治疗组)40例.单纯PVP组是在DSA机引导下经皮穿刺,将骨水泥注射到患椎内.联合治疗组是PVP术中联合125I粒子植入.结果 联合治疗组和单纯PVP组术后KPS评分分别为(92.5±7.1)分及(87.7±7.3)分,较术前(68.9±7.9)分及(69.4±8.3)分明显增高,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).联合治疗组肿瘤进展时间(TTP)为9.0个月,单纯PVP组TTP为8.9个月.结论 PVP具有创伤小,操作较简单,并发症少的特点,可有效缓解脊柱转移瘤患者疼痛,PVP术中联合125I粒子植入能增强抗肿瘤作用,从而达到提高疗效的目的 .
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应用滤过富集法检测肝癌患者外周血中肿瘤细胞
目的 建立一种循环肿瘤细胞的检测方法,探讨肝癌患者外周血中循环肿瘤细胞在肿瘤进展中的意义.方法 肝癌细胞株HCC97-L经滤过富集后测定肿瘤细胞的检出率以检测该方法的敏感性,采用该方法滤过富集32例肝细胞癌(HCC)患者、15例肝良性病变患者和10例正常健康对照的外周血中循环肿瘤细胞,用细胞角蛋白8/18(CK8/18)行免疫荧光检测结合显微镜下形态学观察,判断并计数肿瘤细胞.结果 HCC97-L细胞检出率在40%～100%之间,平均为68%;Ⅰ～Ⅱ期患者,循环肿瘤细胞的阳性率为28.6%;Ⅲ～Ⅳ时,为88.9%.两组差异有统计学意义(P＜0.01).健康志愿者10例和肝良性病变患者15例外周血均未见CK8/18阳性肿瘤细胞.结论 全血滤过富集法能简单、快速、有效的检出肝癌患者外周血中循环肿瘤细胞,部分早期肿瘤已有肿瘤细胞的血源性播散;随着肿瘤进展血中肿瘤细胞也增加.
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MUC1 DNA疫苗治疗胰腺癌的研究进展
胰腺癌为常见的恶性肿瘤,发病率逐年上升,但预后很差.由于难以早期诊断,胰腺癌诊断明确时往往已属于局部进展期,肿瘤浸润肠系膜上动静脉、门静脉或者出现了肝转移而失去根治切除的机会[1].全世界范围内胰腺癌的平均切除率不足20%.不可切除的胰腺癌患者中位生存期是3～6个月,可切除患者的预后也不佳,术后5年生存率大约是10%～19%,中位生存期是12～18个月[2].尽管开展了早期诊断研究以使患者获得早期发现早期治疗的机会,开展扩大切除术以提高切除率,采用新辅助放化疗以提高疗效[3],但至今仍没有突破性的进展,胰腺癌的疗效徘徊不前[2].因此,探索新的有效的治疗手段,是国内外目前急需解决的重要课题[4,5].
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兔耐甲氧西林金黄色葡萄球菌慢性骨髓炎模型
目的 建立一种基于新西兰白兔的骨髓炎模型以供毒性评估和治疗性研究.方法 40例健康新西兰大白兔,采用胫骨近段髓腔注射0.1 ml 5%鱼肝油酸钠和0.1 ml 1×108 CFU/ml耐甲氧西林药金黄色葡葡球菌(MRSA)悬浮液的方法诱导骨髓炎,不用抗生素来预防菌血症.采用大体观察,放射影像,细菌学和组织病理学等方法来评价.结果 所有大白兔都可以看到早期局部组织肿胀、病腿跛行,不同程度食欲减退,同时伴有体重增长缓慢.37例有典型骨髓炎的放射学表现,表现为中度到广泛的皮质反应,皮质骨破坏,轻度到广泛新骨形成,在胫骨髓腔的近端多有死骨形成.38例培养出MRSA,病理学显示为慢性活动性炎症,骨溶解,并有新生编织骨.结论 本方法简便易行,效果较满意,未出现严重并发症和死亡,可以用作骨髓炎相关研究.
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胰腺癌基础与临床研究的热点问题
胰腺癌是一种高度恶性的消化道肿瘤,尽管以手术为主的胰腺癌综合治疗模式在延长患者生存时间和提高生活质量方面取得了一定进展,但其临床疗效仍不尽人意.资料显示胰腺癌术后5年生存率仅为3%～4%.面对严峻的现实,惟有多学科交叉合作,在胰腺癌发病机制、早期诊断、综合治疗等方面进行深入研究,并获得突破性进展,才有望根本改善其预后.
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人端粒酶逆转录启动子驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因治疗裸鼠胰腺移植瘤的安全性研究
目的 探讨人端粒酶逆转录(hTERT)启动子驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因治疗裸鼠胰腺癌的安全性.方法 应用细菌内同源重组法构建hTERT启动子和常规巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的HSV-TK基因真核表达载体PDC312-TP-TK,PSU-CMV-TK.制备腺病毒液,检测病毒滴度为1.9×1010 pfu/ml和1.4×1010 pfu/ml.建立裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型,分别以两种方法治疗后观察皮下移植瘤消退、HSV-TK基因表达情况、肝脏苏木素-伊红(HE)染色切片、肝功能.结果 PDC312-TP-TK组与PSU-CMV-TK组对肿瘤的抑瘤率分别为58.3%和65.6%,治疗组间差异无统计学意义(P＞0.05),杀伤方面具有一样的高效性;但其对肝脏的毒副作用远小于PSU-CMV-TK组,PDC312-TP-TK组血清中ALT,AST,ALP分别为(54.00±1.97)、(147.00±12.67)、(33.00±2.59)U/L而PSU-CMV-TK组中为(334.00±9.81)、(511.00±11.24)、(98.00±3.12).差异有统计学意义(P＜0.01).裸鼠肝脏苏木素-伊红(HE)染色中,仅PSU-CMV-TK组有肝脏坏死改变.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)中也仅PSU-CMV-TK组检测到1143 bp的TK基因片段.结论 hTERT启动子驱动的HSV-TK基因是一种新的靶向治疗方法,在具有治疗高效性的同时,更具有安全性.
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不同纯度大鼠供体胰岛中巢蛋白、神经元素3的表达
目的 观察巢蛋白(Nestin)、神经元素(Ngn)3在不同纯度大鼠胰岛中的表达.方法 将30只成年雄性SD大鼠随机分为3组,采用胰管内注入胶原酶消化法分离成年大鼠胰腺,Ⅰ组(n=10):胰岛沉淀物不进行纯化;Ⅱ组(n=10):胰岛沉淀物加入25%Ficoll-400纯化,Ⅲ组(n=10):胰岛沉淀物依次加入25%、11%的Ficoll-400纯化.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Nestin和Ngn3 mRNA在不同纯度胰岛细胞中的表达.结果 Ⅰ组获得胰岛纯度为(43,60±6.29)%,Ⅱ组获得胰岛纯度为(65.30±4.40)%,Ⅲ组获得胰岛纯度为(77.60±6.36)%,各组差异均有统计学意义(P＜0.05).Ⅰ组中Nestin和Ngn3的mRNA表达明显高于Ⅱ组、Ⅲ组,Ⅲ组中表达弱.结论 Nestin、Ngn3在不同纯度胰岛细胞中均有表达,但是在低纯度胰岛中表达明显,提示低纯度胰岛中可能携带较多的干细胞.
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胰腺癌大鼠胰腺上皮内瘤变的研究
目的 建立SD鼠胰腺癌模型并探讨其癌变过程中病理形态学改变及胰腺上皮内瘤变(PanIN)的计数和分级.方法 将二甲基苯并蒽(DMBA)置入胰实质内作为实验组(A组)及设立曲古霉素(TSA)干预组(B组),3～5个月内处死观察胰腺癌发生情况,苏木素-伊红(HE)染色镜下观察胰腺病理学变化及PanIN计数和分级.结果 A组(实验组)发癌率为48.6%(18/37),其中胰腺导管癌17例和纤维肉瘤1例;B组发癌率为33.3%(12/36),其中胰腺导管癌11例和纤维肉瘤1例;A组肿块大径明显大于B组(P＜0.05);C组(对照组)胰腺及A、B组胰腺外主要脏器均未见肿瘤发生和无明显病理学改变.A组癌旁组织高级PanIN(HpanIN)数高于B组各时段,差异无统计学意义(P＞0.05);A组非癌胰腺组织各时段HpanIN数高于B组,差异无统计学意义(P＞0.05);A组和B组3个月鼠胰腺HpanIN数明显低于4个月鼠和5个月鼠,差异有统计学意义(P＜0.05);C组仅见1个HpanIN,均明显低于A、B组鼠(P＜0.01).结论 DMBA置入胰实质内可在短期获得较高的SD鼠胰腺癌发生率,TSA能抑制胰腺癌的发生和生长;HPanIN可能是胰腺导管癌发生过程中必不可少的重要病理形态学改变.
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双功能融合基因/5-氟胞嘧啶系统对胰腺癌细胞的杀伤作用
目的 观察双功能融合基因/5-氟胞嘧啶(FCU1/5-FC)系统对胰腺癌BxPC 3细胞系的杀伤作用.方法 在脂质体的介导下将含有FCU1自杀基因的真核表达载体pcDNA3.1/FCU1导人BxPC 3细胞系,经G418筛选后获得稳定表达FCU1基因的BxPC-3/FCU1细胞株.用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测FCU1基因的表达.给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)后,用噻唑蓝比色法(MTT)法测定转染前后BxPC-3细胞的存活率;流式细胞仪分析转染前后细胞周期及凋亡改变;将BxPC 3/FCU1与未转染基因的BxPC-3细胞按不同的比例混合,观测5-FC对BxPC 3细胞的旁观者效应.结果 FCU1基因在BxPC-3细胞中可稳定表达;5-FC按10、30、50、70、110、130 mg/L处理BxPC 3/FCU1细胞后,细胞存活率依次为(97.30±0.17)%、(82.50±0.21)%、(71.20±0.35)%、(59.30±0.25)%、(35.40±0.19)%、(19.90±0.32)%、(19.20±0.17)%,与未转染组比较有统计学意义(P＜0.01).在混和细胞中,当BxPC-3/FCU1细胞所占比例分别为0、10%、20%、50%、70%、100%时,5-FC对混合细胞的杀伤率依次为0、18.9%、47.2%、76.9%、87.6%、94.3%.结论 FCU1/5-FC自杀基因系统对胰腺癌细胞具有明显的杀伤作用,其旁观者效应明显.
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一氧化氮对重症急性胰腺炎肺损伤Toll样受体2/4表达的影响
目的 观察一氧化氮(NO)对重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤Toll样受体(TLR)表达的影响.方法 动物分为假手术组、胰腺炎组、氯喹(CQ)治疗组和L-精氨酸(L-Arg)治疗组;实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织TLR2/4 mRNA表达.结果 SAP大鼠肺组织TLR2/4表达明显增高(3 h:0.787±0.751、1.512±1.794 E-2;6 h:1.086±1.738、2.097±3.735 E-2;12 h:1.113±6.141、2.957±2.620 E-2),肺损伤加重(P＜0.05或P＜0.01).以CQ抑制肺组织中TLR2/4表达后(3 h:0.313±5.491 E-2,0.005±1.419 E-3;6 h:0.488±7.442 E-2,0.010±1.518E-3;12 h:0.883±8.911 E-2,0.024±2.760 E-3),肺损伤减轻(P＜0.05或P＜0.01).给予L-Arg治疗后,肺组织NO浓度明显升高,TLR2/4表达降低(0.656±3.972 E-2,1.501±6.111 E-2;0.260±0.891 E-2,0.732±5.135E-2;0.126±0.914E-2,0.414±1.678 E-2),肺损伤程度减轻(P＜0.05或P＜0.01).结论 肺组织内TLR2/4表达在SAP肺损伤中明显上调,肺组织损伤加重;NO可以明显抑制SAP肺组织TLR2/4表达从而减轻肺组织损伤.
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可诱导性共刺激分子单抗联合细胞毒T淋巴细胞4Ig在大鼠胰腺移植中的作用
目的 探讨可诱导性共刺激分子(ICOS)单抗、细胞毒T淋巴细胞4Ig(CTLA4Ig)阻断共刺激通路对于异基因大鼠胰腺移植的作用及其机制.方法 建立胰腺移植模型,分A组(对照组),B组(CTLA4Ig组),C组(抗ICOS单抗组),D组(联合CTLA4Ig和抗ICOS单抗组).术后1、4、7 d监测血糖,第7天取胰腺做苏木素-伊红染色,脾脏做流式细胞检测CD3+CD8+T细胞、CD4+T细胞、CD4+CD25+T细胞.结果 与A组比较:B、C、D组排斥反应较A组明显减弱,显著延长了移植物的存活时间.CD3+CD8+T细胞计数B、C、D与A组比较均有减少,差异有统计学意义(P＜0.01).CD4+T细胞B、D与A组的差异有统计学意义(P＜0.05).CD4+CD25+T细胞各组间逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 抗ICOS单抗和CTLA4Ig能有效地抑制大鼠胰腺移植排斥反应,延长移植物存活时间,且联合应用比单一应用更有效.其可能机制为诱导了CD4+CD25+T细胞的产生.
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胆囊收缩素-A受体在胰腺癌细胞Panc-1中的表达及相关作用
目的 探讨胰腺癌细胞Panc-1中胆囊收缩素-A受体(CCK-AR)的表达及其相关作用.方法 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Panc-1细胞表面CCK-AR的表达情况,不同浓度的CCK-AR激动剂CCK-8S、拮抗剂Lorglumide分别与Panc-1细胞共同培养,噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术、TUNEL法和侵袭试验分别观察细胞的生长情况、周期改变、凋亡发生以及侵袭能力变化,Western blot法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达变化情况.结果 Panc-1细胞表面存在CCK-AR mRNA的表达,与对照组生长细胞数(70.2±1.5)及侵袭细胞数(102.1±2.7)比较,CCK-8S作用下Panc-1细胞数(85.1±1.7)明显增加,S期细胞比例增多,体外侵袭细胞数(123.8±1.1)显著增多,MMP-2的表达量增加,而Lorglumide则明显抑制Panc-1细胞(52.1±1.8)的生长,细胞被阻滞于G0/G1期,凋亡发生增多,同时显著抑制Panc-1细胞(77.6±0.9)的体外侵袭及MMP-2的表达,CCK-8S组、Lorglumide组分别与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CCK-8S可能通过"CCK-CCK-AR"途径促进Panc-1细胞增殖、侵袭,而Lorglumide在一定程度上抑制这一恶性生物学行为.
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血红素氧合酶-1基因转染对大鼠胰岛培养的影响
目的 探讨血红素氧合酶-1基因(HO-1)转染对培养的大鼠胰岛功能的影响.方法 用携带人HO-1基因和增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的腺病毒载体转染大鼠胰岛,转染后48h,以EGFP及人HO-1蛋白的表达来确定转染结果,放免法测定各组胰岛在低糖(2.8 mmol/L)、高糖(16.7 mmol/L)刺激下胰岛素释放量,并计算刺激指数(SI).结果 大鼠胰岛培养7 d后,其低糖、高糖刺激下胰岛素释放量明显低于新鲜胰岛[(4.57±0.40比(6.47±0.55)mIU/L/30 IEQ,(9.63±0.71)比(14.93±1.17)mIU/L/30 IEQ,P＜0.05];培养7 d的各组胰岛在低糖刺激时胰岛素释放量差异无统计学意义(P＞0.05),但HO-1组胰岛在高糖刺激时胰岛素释放量明显高于EG-FP组和对照组[(12.50±2.17)mIU/L/30 IEQ,(8.87±0.65)mIU/L/30 IEQ,(9.63±0.71)mIU/L/30 IEQ,P＜0.05];HO-1组SI也高于EGFP组和对照组[(2.21±0.02),(2.08±0.05),(2.11±0.03),P＜0.05].结论 HO-1基因转染能对体外培养的大鼠胰岛功能起到保护作用.
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黄芩苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞体外分化为胰岛素分泌细胞
目的 体外诱导大鼠骨髓间质干细胞(BMSCs)分化为胰岛样细胞.方法 采用分步法体外诱导后,间接免疫荧光法鉴定诱导前后细胞nestin、胰岛素蛋白表达;RT-PCR法检测诱导前后胰岛转录因子mRNA表达;ELISA检测诱导后细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌.结果 免疫荧光染色显示诱导5 h,nestin阳性细胞为(44.6±7.3)%.诱导24 h,nestin阳性细胞增至(61.8±8.4)%.此后,nestin阳性细胞数目开始下降,诱导第14天后,nestin表达基本消失;同时诱导后的细胞可以表达胰岛素蛋白.另一方面,RT-PCR结果 显示诱导后细胞可以表达胰岛素-1、葡萄糖转运子-2及其转录因子mRNA.ELISA结果 显示不同浓度的葡萄糖刺激的胰岛素分泌量不同,5mmol/L和25mmol/L葡萄糖刺激的胰岛素分泌量分别为(25.53±6.49)和(53.26±7.56)mU/L,而诱导前MSCs不具备上述特点.结论 大鼠BMSCs体外可以诱导成为胰岛素分泌细胞.
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重症急性胰腺炎大鼠脾脏巨噬细胞Toll样受体4的表达及分泌细胞因子水平的变化
目的 观察重症急性胰腺炎(SAP)大鼠脾脏巨噬细胞(sMΦ)Toll样受体4(TLR4)基因表达及分泌细胞因子水平的变化.方法 建立大鼠SAP模型,分别于6、12、24、72 h分离sMΦ,观察sMΦ静息状态下和经1 mg/L脂多糖(LPS)刺激后分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、白细胞介素(IL)-10水平的变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测sMΦ TLR4mRNA表达.结果 予LPS刺激后,对照组sMΦ分泌TNF-α、IL-6和IL-10水平显著升高,分别由(1.1844±0.3490)μg/L、(214.14±33.41)ng/L、(20.26±3.71)ng/L升至(9.3110±1.9962)μg/L、(519.01±52.64)ng/L和(55.43±6.28)ng/L,TLR4 mRNA表达亦由0.9091±0.2763明显升高至2.1944±0.6098;而模型各亚组分泌TNF-α和IL-6水平较刺激前无明显变化,同时TLR4 mRNA表达出现不同程度下调,且各指标均明显低于对照组.结论 SAP大鼠sMΦ对内毒素耐受的发生与TLR4 mRNA表达下调有关.
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联合阻断CD28和可诱导共刺激分子对小鼠同种异体胰岛移植物急性排斥反应的影响
目的 在小鼠同种异体胰岛移植模型上,通过联合阻断CD28和可诱导共刺激分子(ICOS),观察CTLA-4Ig及ICOS单克隆抗体(ICOSmAb)对胰岛移植物功能的影响.方法 将小鼠随机分成4组,每组10只.联合阻断组:分别于移植后0、2、4d和1、3、5 d腹腔内注射CTLA-4Ig 50 μg/kg和ICOSmAb 100 μg/kg体重组.ICOS组:移植后1、3、5 d腹腔内注射ICOSmAb 100 μg/kg体重组.CTLA4组:移植后0、2、4 d腹腔内注射CTLA-4Ig 50 μg/kg体重组.对照组:单纯胰岛移植,不做CTLA-4Ig和ICOSmAb处理组.观察术后移植物存活时间和病理改变,RT-PCR检测移植组织中IL-2、IL-10mRNA表达,流式细胞仪检测CD4+、CD8+T淋巴细胞表达.结果 联合阻断组小鼠移植物存活时间平均为(31.00±6.57)d,较其他3组延长,差异有统计学意义(P＜0.05);IL-2和IL-10 mRNA表达水平分别为(44.23±6.24)和(65.23±11.02),与其他3组比较,IL-2 mRNA表达差异有统计学意义(P＜0.05),而IL-10mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05);CD4+、CD8+T淋巴细胞荧光阳性百分率分别为(13.73±0.49)%和(14.56±0.31)%,表达上调均不明显;移植胰岛光镜检查接近正常.结论 应用CTLA-4Ig和ICOSmAb联合阻断C)28和ICOS,可以明显抑制胰岛移植物排斥反应.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
