中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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抗原负载的树突状细胞体外诱导抗肿瘤免疫的研究
目的 观察抗原负载的树突状细胞(DCs)体外诱导抗肿瘤免疫效应,探讨树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法 .方法 以细胞因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4体外诱导人单核细胞来源的树突状细胞,第6天加入肝癌细胞BeL-7402的冻融抗原并以联合细胞因子鸡尾酒法[肿瘤坏死因子(TNF-α)+IL-6+IL-1β+前列腺素E2(PGE2)]诱导成熟,对照组仅以鸡尾酒法诱导成熟.24 h后收获DCs以流式细胞仪检测其成熟表型CD80、CD83、CD86和LHA-DR,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其IL-12的分泌,噻唑蓝(MTT)比色法检测其刺激淋巴细胞增殖活性,乳酸脱氢酶释放实验检测其诱导的免疫效应细胞对肝癌细胞的特异性细胞毒作用.结果 联合细胞因子可诱导的DCs成熟和IL-12的分泌(P＜0.05),成熟的DCs有较强的刺激淋巴细胞增殖能力;抗原负载组DCs可诱导效应细胞对肝癌细胞BeL-7402的特异性杀伤作用(P＜0.05).结论 抗原负载的DCs可体外诱导特异性抗肿瘤免疫效应,提示以抗原负载的树突状细胞作为肿瘤免疫治疗的方法 是可行的.
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门静脉主干缩窄法制备SD大鼠门静脉高压症模型时佳口径的探讨
目的 探讨缩窄门静脉主干法制备SD大鼠门静脉高压症模型时的佳缩窄口径.方法 SD大鼠70只,随机分为正常组和6个实验组,每组各10只.正常组行假手术.各实验组分别按照5、6、7、8、9、12号针头的缩窄口径行门静脉主干缩窄术.观察各组大鼠术后累积死亡率,术后状态,术前、术后即刻及术后2周时的门静脉压力,术后2周时的食管组织学变化和脾指数.结果 5、6、7、8、9、12号针头缩窄组术后3 d时大鼠的累积死亡率分别为100%、80%、70%、20%、10%、0%,与缩窄程度正相关.8、9、12号组的大鼠存活状态明显好于5、6、7号组.5、6、7、8、9、12号组术后即刻门静脉压力分别为:(5.836±0.275)、(4.557±0.419)、(3.856±0.576)、(3.343±0.433)、(2.708±0.309)、(1.957±0.358)kPa,7、8、9、12号组术后2周时门静脉压力分别为:(2.163±0.424)、(1.956±0.172)、(1.841±0.202)、(1.232±0.154)kPa,均较正常(0.881±0.165)kPa显著升高(P＜0.05).术后2周,7、8、9、12号组大鼠食管下段黏膜下层平均血管数目分别为:(3.94±0.83)、(3.58±0.63)、(3.14±0.64)、(2.02±0.62)个,与正常组(1.65±0.62)个比较,除12号组外均有增多(P＜0.01);固有层平均血管数目分别为:(2.24±0.64)、(2.05±0.29)、(1.52±0.28)、(0.93±0.19)个,与正常组(0.82±0.18)比较,除第12组外均增多(P＜0.01);黏膜下层血管口径分别为:(4.52±1.51)、(4.05±1.23)、(3.75±1.11)、(2.03±0.86)μm,除第12组外均增大(P＜0.01);脾指数分别为:(4.21±0.93)、(4.06±0.68)、(3.84 4±0.71)、(3.31±0.69)除12号组外也较正常增加(P＜0.01).结论 缩窄门静脉主干可成功制成大鼠门静脉高压症模型;其佳缩窄口径应该是:大鼠体重200 g左右时用8号针头(直径0.8mm),大鼠体重300 g左右时用9号针头(直径0.9 mm).
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下游调控元件拮抗调节子基因在人肝癌组织中的表达及其意义
目的 观察人肝癌组织下游调控元件拮抗调节子(DREAM)的表达.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测10例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中DREAMmRNA基因的相对表达量,并采用免疫组织化学法检测DREAM在上述组织中的表达情况.结果 80%(8/10)的肝癌组织中DREAM表达缺失,而癌旁组织中仅30%(3/10)该基因表达缺失,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 中晚期肝癌中DREAM表达处于失活状态,可能在肝癌的发生、发展过程中发挥重要作用.
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同种异体胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植治疗糖尿病
目的 观察同种异体大鼠胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植在糖尿病治疗中的作用.方法 分离胰腺组织获得胰岛及胰腺导管上皮细胞,将具有干细胞潜能的胰腺导管上皮细胞在体外培养27d.将新鲜分离的胰岛(200±50)个及诱导分化2周的胰腺干细胞来源的胰岛样结构(2×106)个序贯移植到糖尿病大鼠的肾被膜下观察大鼠的血糖及生存情况.结果 将胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植到同一糖尿病大鼠3周后血糖仍在5 mmol/L水平,对照组血糖无明显下降.结论 胰腺干细胞可诱导分化为分泌胰岛素的胰岛样结构,胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植对大鼠糖尿病有治疗作用.
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生长抑素Ⅱ型受体在Dukes D期大肠癌及肝转移灶中的表达及其与血管内皮生长因子的关系
目的 观察生长抑索Ⅱ型受体在大肠癌伴肝转移患者病变组织中的表达,同时比较血管内皮生长因子(VEGF)的表达状况.方法 (1)采用实时逆转录-聚合酶链反应(RT·PCR)及免疫组织化学两种方法 测定32例大肠癌患者原发灶及相应肝转移灶中sst2的表达,所测数据采用方差分析的方法 与患者的年龄、性别、肿瘤位置、组织学分型、生长方式、术前CEA水平比较;(2)采用免疫组织化学法检测了病灶中VEGF的表达,并与上述sst2的测定数据进行直线回归分析.结果 (1)sst2在所有检测的原发肿瘤组织中均有表达,并不与肿瘤的位置、生长方式、组织学类型相关(P＞0.05);(2)肝转移灶中表达的sst2量与原发灶比较,差异无统计学意义(P＞0.05);(3)对伴有CEA升高(＞5μg/L)的患者,其肝转移灶及原发灶均比术前CEA较低(＜5μg/L)患者表现出sst2表达下调(原发灶P＜0.01,肝转移灶P＜0.01);(4)肿瘤原发灶及肝转移灶中,sst2均与VEGF呈现明显负相关(r=0.425,P＜0.05).结论 (1)sst2在伴有肝转移的大肠癌患者原发灶及肝转移灶中均有表达,差异无统计学意义;(2)sst2表达与患者术前CEA水平有关;(3)生长抑素通过抑制VEGF发挥抗肿瘤新生血管形成的作用不仅在大肠癌原发灶中起作用,而且可能对肝转移灶同样有效.
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带蒂大网膜对严重损伤输尿管的修复作用
目的 探讨带蒂大网膜对严重输尿管损伤的修复作用及其机制.方法 随机将20条犬均分为实验组及对照组,建立严重输尿管损伤动物模型,实验组采用带蒂大网膜包裹损伤输尿管,对照组未采用大网膜包裹.术后观察尿瘘及输尿管坏死情况,术后12周再手术观察输尿管损伤愈合及吻合口血管再生情况,免疫组织化学染色检测血管内皮生长因子(VEGF)及其受体KDR的表达.结果 实验组均无尿瘘,对照组2例因尿瘘反复腹腔感染而死亡.术后12周实验组输尿管吻合口处黏膜及平滑肌层再生,血管再生现象明显,VEGF及KDR表达升高.对照组吻合口处愈合不良或瘢痕愈合,血管再生不明显,VEGF及KDR阴性或弱表达.结论 带蒂大网膜有促进严重输尿管损伤修复的作用,可能通过VEGF及KDR的表达升高促进血管再生而实现.
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三种小胶质细胞原代培养方法的比较
目的 探讨建立简捷高效原代小胶质细胞纯化培养方法 .方法 以小胶质细胞原代培养McCarthy经典培养方法 为基础,分为常规对照组、机械分离组、胰酶消化组和利多卡因组共四组培养,并对比观察记录形态变化并计数,借助CD68及OX42抗体间接免疫荧光标记进行鉴定、计算纯度.结果 三种分离方法 均获得了较高纯度和产量的小胶质细胞,以利多卡因组为佳,纯度为(94.92±7.05)%,流式细胞结果 显示细胞纯度约为(96.2±2.8)%.结论 小胶质原代细胞培养过程中,采用利多卡因处理可显著提高细胞分离效率及纯度.
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先天性巨结肠不同节段肠壁神经、平滑肌的分布及临床意义
目的 观察先天性巨结肠(HD)不同节段肠壁神经和平滑肌的病变范围,探讨先天性巨结肠根治术后肠动力功能紊乱原因及手术切除结肠范围.方法 用免疫组织化学和苏木素-伊红(HE)染色法,检测20例先天性巨结肠肠壁神经节细胞、神经纤维和平滑肌细胞病理组织学改变及分布范围.结果 巨结肠不同节段肠壁神经节细胞、神经纤维数量及突触素(Syn)、神经节细胞黏附分子(NCAM)的阳性表达,在距扩张远端8 cm虽未达到正常,但与对照组差异减小(P＞0.05).环肌层和纵肌层出现不同程度增厚,在距扩张远端8 cm仍未正常(P＜0.01).肌层出现空泡样变,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 先天性巨结肠切除段肠壁神经、平滑肌层均存在病变,在距扩张段的远端8 cm处,两者病变总体缓解.在允许情况下,手术切除结肠的范围应达到或超过此范围.
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局灶性脑缺血后海马的电生理学观察
目的 观察将在体记录扩散性抑制的电生理学方法 应用于局灶性脑缺血后远隔缺血区(海马)的电生理学改变.方法 采用局部给予3 mol/L高浓度氯化钾溶液,光化学血栓形成局灶性脑缺血模型和大脑中动脉栓塞局灶性脑缺血模型诱导扩散性抑制;抑制组预先30 min腹腔注射MK-801(0.2 mg/100 g);将记录电极加以改良置入海马记录细胞外直流电位变化.结果 诱导组记录到幅度约10～30 mV,时程大于1～2 min的扩散性抑制波,抑制组未记录到SD波.并观察到大脑中动脉栓塞脑缺血模型诱导的海马扩散性抑制波.结论 SD波可能参与MCAO模型中海马远隔效应的发生.
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Toll样受体4对失血性休克小鼠肺组织血红素加氧酶和诱导型一氧化氮合酶的影响
目的 观察Toll样受体4(TLR4)对失血性休克小鼠所致急性肺损伤(ALI)中肺组织血红素加氧酶-1(HO-1)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响.方法 TLR4基因突变型小鼠C3H/HeJ和野生型小鼠C3H/HeN(48只),随机分为假手术组和失血性休克(6、24、48 h)组.采用小鼠失血性休克致急性肺损伤模型,观察血气分析,HO-1和iNOS蛋白表达,白细胞介素-6(IL-6)水平,肺组织肺湿/干重比和病理形态学改变.结果 与假手术组比较,C3H/HeN和C3H/HeJ小鼠失血休克后24 h肺组织HO-1蛋白强阳性表达,IL-6含量明显增加为365.38±48.26和300.89±39.34;6 h肺组织iNOS蛋白强阳性表达(P＜0.01).与C3H/HeN小鼠比较,C3H/HeJ小鼠失血休克后24 h肺组织HO-1、IL-6含量和W/D明显降低(P＜0.05);6 h肺组织iNOS蛋白显著减少为0.049±0.013.病理学检查显示失血休克后各时点肺组织损伤程度较假手术组明显加重.结论 TLR4在失血性休克后ALI过程中被激活,通过影响HO-1和iNOS的表达参与了失血性休克致急性肺损伤的过程.
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靶向于前列腺癌特异性膜抗原shRNA的筛选与鉴定
目的 获得高效抑制前列腺癌细胞株Lncap中前列腺癌特异性膜抗原(PSMA)表达的shRNA序列.方法 根据PSMA基因信息,设计siRNA1、siRNA2、siRNA3三条针对PSMA基因cds区的siRNA序列及无意义的对照序列,组建与之对应的4对互补的单链DNA序列,包括siRNA的正义链和反义链;正义链序列按5'向3'顺序依次为:酶切位点(BamH Ⅰ)、干扰序列(19 bp)、loop环(TrCAAGAGA)、干扰序列的反向互补序列(19 bp)、中止信号(TTTTT)、酶切位点(EcoR Ⅰ).将合成的序列插入空载体pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector中,转染前列腺癌细胞后,通过real-time PCR检测不同序列片段对PSMA的mRNA抑制效果并通过Western blot检测对目的 蛋白PSMA的抑制效果.结果 设计的3条针对PSMA的序列中第2条的抑制效果好,目的 序列位于PSMA(NM_004476)的1207到1226,茎环序列为5'-GATCC GTCTCAAAGTGCCCTACAATrcAAGAGA TTGTAGGGCACTTTGAGAC TTTTT G-3'.其对前列腺癌细胞株中PSMA的mRNA的抑制率为60.0%,对其蛋白表达的抑制率为86%.转染细胞后,细胞可以稳定低表达PSMA.结论 成功获得高效抑制前列腺癌细胞株Lncap中PSMA表达的shRNA序列.
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胰腺癌CT灌注与血管内皮生长因子、微血管密度和缺氧诱导因子-1α表达关系
目的 探讨胰腺癌CT灌注和血管生成相关因子表达的关系.方法 26例外科手术证实胰腺癌患者,术前行多层螺旋CT灌注扫描,同时检测肿瘤血管内皮生长因子,微血管密度(MVD)及缺氧诱导因子(HIF)-1α,探讨CT灌注与血管生成相关因子表达间关系.结果 低分化腺癌BF、BV均值分别为(917.4±256.4)ml·min-1·kg-1和(130.9±44.1)ml/kg体重,明显低于高分化腺癌的(2728.7±360.0)ml·min-1·kg-1和(241.2±86.2)ml/kg体重.低分化腺癌MVD、血管内皮生长因子(VEGF)和HIF-1α值高于高分化腺癌(t值分别为3.29、2.99和3.39,P＜0.01).同时胰腺癌的BF、BV和血管生成相关因子表达负相关,MTT与表达无关,PS值与表达正相关.结论 CT灌注成像对胰腺癌诊断有一定的临床价值.
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GPC3基因对肝癌细胞SK-Hep-1体外迁移、侵袭能力的影响
目的 利用构建好的GPC3真核表达载体,观察GPC3基因对SK-Hep-1肝癌细胞增殖、黏附、侵袭能力的影响.方法 将pEGFP-N2-GPC3增强型绿色荧光蛋白表达载体通过脂质体方法 转入SK-Hep-1人肝癌细胞,确定GPC3已经成功转入细胞后,观察肝癌细胞转染前后增殖、黏附、迁移及侵袭能力的改变.结果 GPC3抑制SK-Hep-1的增殖,降低对Matrigel胶的黏附能力,迁移实验中,200倍目镜下实验组细胞的穿膜细胞数为131.70±7.44.空质粒对照组细胞的穿膜细胞数为71.60±4.76.侵袭实验中,200倍目镜下实验组细胞的穿膜细胞数为220.00±12.80.空质粒对照组细胞的穿膜细胞数为138.00±10.50.两组细胞比较,迁移、侵袭能力均显著增强(P＜0.01).结论 GPC3真核表达载体抑制肝癌细胞SK-Hep-1的增殖,降低其对Matrigel胶的黏附能力,增加其迁移及侵袭能力,GPC3可能通过抑制FGF2信号途径抑制肝癌细胞的增殖.
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CD326在乳腺癌细胞系的表达及其与乳腺癌细胞耐药的关系
目的 探讨上皮细胞黏附分子(CD326)在乳腺癌细胞系中的表达及其与乳腺癌细胞耐药的关系.方法 流式细胞仪分析MCF-7、MCF-7/ADR及MDA-MB-231中cD326表达情况;细胞计数法(CCK-8法)检测流式细胞仪分选获得的CD326阳性和阴性细胞亚群体外对表阿霉素、多西他赛耐药情况;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同细胞亚群中多药耐药基因(MDR1)及乳腺相关耐药基因(BCRP)的表达情况.结果 MCF-7/ADR中CD326的表达(31.03%)明显高于亲本株MCF-7(27.02%),MDA-MB-231中CD326的表达(33.43%)明显高于MCF-7及MCF-7/ADR;MCF-7和MDA-MB-231中CD326阳性细胞亚群对表阿霉素及低浓度多西他赛(0.25～1.0*IC50)的体外耐受性明显高于阴性细胞亚群(P＜0.01),但对高浓度多西他赛(1.5～2.0* IC50)的体外耐受性差异无统计学意义(P＞0.05);CD326阳性与阴性细胞亚群间MDR1、BCRP基因表达差异元统计学意义(P＞0.05).结论 CD326与乳腺癌化疗药物的耐药有关,其诱导耐药并不是通过经典的耐药途径.
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表达白细胞介素18的条件增殖腺病毒在肾癌Ketr-3细胞中的生物活性及抗肿瘤作用
目的 观察表达白细胞介素18(IL-18)基因的条件增殖腺病毒在肾癌Ketr-3细胞中的生物活性及其对Ketr-3细胞的杀伤作用.方法 通过荧光显微镜观察表达绿色荧光蛋白的条件增殖腺病毒(ZD55-EGFP)在肾癌Ketr-3细胞中的感染和增殖情况.分别将表达IL-18的条件增殖腺病毒(ZD55-IL-18)及表达IL-18的普通腺病毒(Ad-IL-18)感染人肾癌Ketr-3细胞系,通过Western blot法检测病毒E1A和IL-18蛋白的表达;免疫细胞化学染色检测IL-18抗原表达;TUNEL法检测Ketr-3细胞的凋亡情况;噻唑蓝(MTT)比色法检测Ketr-3细胞存活情况.结果 ZD55-EGFP能有效感染肾癌Ketr-3细胞并在其中大量增殖.Westem blot检测结果 发现ZD55-IL-18能在肿瘤细胞内表达E1 A并有效介导IL-18表达,在病毒感染Ketr-3细胞48 h后,ZD55-IL-18、Ad-IL-18处理组的IL-18蛋白表达量分别为255.6±3.1、118.7±2.90免疫组织化学检测显示ZD55-IL-18、Ad-IL-18处理组的IL-18抗原阳性率分别为(82.4±3.2)%和(23.4±1.9)%.TNUEL检测结果 显示ZD55-IL-18、Ad-IL-18处理组的细胞凋亡率分别为(52.2±3.5)%和(25.5±1.9)%.病毒感染4 d后,MTT检测结果 显示ZD55-IL-18、Ad-IL-18处理组细胞存活率分别为(32.6±2.3)%和(73.3±2.5)%,表明ZD55-IL-18对Ketr-3细胞有显著的杀伤作用.结论 ZD55-IL-18能在Kerr-3细胞中高效特异性表达IL-18基因并显示出良好的抗肿瘤作用.
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肾癌肿瘤相关抗原G250及G250蛋白多糖(PG)区基因的克隆、表达及鉴定
目的 探讨肾癌肿瘤相关抗原G250及G250蛋白多糖(PG)区基因的克隆,蛋白表达及鉴定.方法 从肾癌细胞786-0中提取mRNA,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出G250及G250 PC,区cDNA.将获得的cDNA片段插入pET28a(+)表达载体,构建重组质粒pET-28a(+).G250/pET-28a(+)-G250 PG,转化DH5α大肠杆菌.通过PCR鉴定筛选出正确的重组子,并用其转化BL21 Codon Plus菌.采用IPTG诱导工程菌进行诱导表达,SDS-PAGE及Westernblot鉴定.结果 克隆的基因经测序证实,G250/G250 PG区序列正确.构建重组质粒pET-28a(+).G250/pET-28a(+)-G250 PG,并在原核系统中表达G250/G250 PC重组蛋白,目的 蛋白均具有较好的抗原性和特异性.结论 成功完成G250/G250 Pc区基因克隆及表达,为在G250/G250PG蛋白纯化基础上进行抗体制备和G250功能研究提供了实验依据.
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p55PIK N末端24个氨基酸抑制甲状腺癌细胞增殖的研究
目的 观察P55PIK的N端的24个氨基酸抑制甲状腺癌细胞增殖的作用.方法 构建含有P55PIK-N端24个氨基酸的腺病毒载体Ad-N24-p55PIK-GFP及对照病毒Ad-GFP,以其感染甲状腺癌YTC236细胞,流式细胞仪检测细胞周期进程,应用BrdU掺人的方法 检测其对细胞DNA合成的影响,通过建立体内肿瘤裸鼠移植瘤模型,进一步证实Ad-N24p55PIK-GFP的抗肿瘤作用.结果 对照腺病毒Ad-GFP感染的细胞中G0/G1期细胞为(69.83±3.50)%,S期和G2/M期细胞数分别为(18.56±3.10)%和(11.61±2.90)%,而带有插入目的 基因的腺病毒Ad-N24p55PIK-GFP感染后的细胞G0/G1期细胞减少为(45.81±2.10)%,S期和G2/M期细胞增加至(30.12±2.60)%和(24.07±2.90)%,BrdU掺入显示BrdU阳性的细胞数由(21.2±3.0)%降至(8.1±2.2)%,FTC236细胞裸鼠移植瘤模型局部应用Ad-N24p55PIK-GFP后肿瘤生长显著减慢.结论 在FTC236细胞中,过表达p55PIK的N末端的24个氨基酸可有效阻滞细胞周期进程,抑制细胞DNA合成,体外有效抑制甲状腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长.
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螺旋CT灌注成像评估直肠癌血管生成状态的研究
目的 探讨螺旋CT灌注成像对直肠癌血管生成状态评估的价值.方法 对30例直肠癌患者进行螺旋CT灌注成像检查.选定肿瘤平面后进行同平面两层动态增强扫描,绘制所选层面的癌灶、靶动脉的感兴趣区的时间一密度曲线(TDC).根据TDC计算出病灶的血流灌注量(BF)、血容量(BV)、平均弥散时间(MTY)、表面弥散性(PS).术后选择对应扫描平面标本癌组织4 μm切片进行免疫组织化学染色(SP),经鼠抗人CD34单克隆抗体标记肿瘤组织内血管内皮细胞,测定癌组织微血管密度(Micmvessel Density MVD).结果 MVD、BF、MTT在FrNM不同分期、不同浸润深度、有无淋巴结转移比较中差异有统计学意义(P＜0.01);MVD、BF随着病理分期的增高呈升高趋势,两者呈显著正相关(r=0.723,P＜0.01);MTT随病理分期的增加而缩短,与MVD呈显著负相关(r=-0.656,P＜0.01).BV随分期增加、浸润深度增加、淋巴结转移呈增高趋势,但无统计学意义(P＞0.05);PS随分期增加有下降趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 直肠癌的MVD与血流灌注量之间呈正相关、与平均弥散时间呈负相关;螺旋CT灌注成像能从活体较好地反映肿瘤的微循环功能,可提供非侵入性监测肿瘤血管生成状态的方法 .
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表达前强啡肽基因的Ad5型腺病毒载体的构建及鉴定
目的 构建且鉴定含前强啡肽基因(prodynorphin)的血清5型腺病毒载体(Ad5).方法 应用分子生物学方法 将前强啡肽基因序列克隆入腺病毒穿梭质粒pDC316-PDP,后者与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装得到含前强啡肽转基因的腺病毒Ad5-PDP.用聚合酶链反应(PCR)方法 对转基因病毒进行鉴定,TCID50法测定病毒滴度.结果 PCR法证实转基因正确插入了Ad5型病毒基因组内,且没有野生型病毒污染,病毒滴度为1×1012v.p./mL.PCR鉴定Ad5-PDP重组成功.结论 获得的Ad5-PDP滴度高,感染性好,可以用于转基因治疗的实验研究.
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三氧化二砷抑制肝癌细胞RhoC基因表达对其侵袭转移行为的影响
目的 观察三氧化二砷(As2O3)抑制肝癌HepG2细胞侵袭转移的作用及对转移相关基因BhoC表达的影响.方法 分别采用AnnexinV/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡,噻唑蓝(MTT)比色法、TransweU法检测As2O3对HepG2细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测AS2O3作用后HepG2细胞中RhoC基因表达的变化.结果 As2O3作用后HepG2细胞的早期凋亡细胞明显增多(P＜0.05),黏附、迁移及侵袭穿膜细胞数较对照明显减少(P＜0.01).As2O3作用4、6.8d后RhoC基因表达水平下降(P＜0.05).结论 As2O3可通过下调RhoC基因的表达及诱导细胞凋亡而抑制肝癌细胞的侵袭转移.
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Scopadulciol对胸腺激酶依赖的丙氧鸟苷杀伤253J细胞的增效作用
目的 观察Scopadalciol(SDC)在人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸腺激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-tk/GCV)自杀基因系统对人膀胱癌细胞的体外杀伤作用中的增效作用.方法 利用重组腺病毒Ad-hTERT-HSV-tk、GCV、SDC的不同组合作用于膀胱癌细胞253J和人成纤维细胞MRC-5,噻唑蓝(MTT)比色法观察细胞存活率;另外,利用携带Ad-hTERT-HSV-tk感染253J细胞和MRC-5细胞,加入不同组合和不同浓度的GCV和SDC,MTT法观察受染细胞的存活率.结果 经重组腺病毒Ad-hTERT-HSV-tk感染的253J细胞,应用GCV处理后,253 J细胞能被特异性地杀伤,而MRC-5细胞不被特异性杀伤,253J细胞存活率为25.7%(P＜0.01),联合应用SDC(0.1 μmol)后,253J细胞的存活率又有明显降低,253J细胞存活率为2.3%(P＜0.01);不同剂量SDC对不同配伍浓度的Ad-hTERT-HSV·tk/GCV作用于膀胱肿瘤细胞253J后,随着剂量和浓度的增加,253J细胞的存活率呈降低趋势(P＜0.05),当GCV浓度为1 μmol/L,SDC剂量为0.04 μmol时,253J细胞的存活率为45.7%,当GCV浓度为100 μmol/L,SDC剂量为0.1 μmol时,253J细胞的存活率仅为2.3%,并有旁观者效应.结论 在胸腺激酶依赖的GCV可以靶向杀伤人膀胱癌细胞的基础上,联合应用SDC后,对膀胱癌细胞的杀伤作用具有明显增效作用.
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悬浮细胞电转染条件的优化及影响因素
目的 以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,优化悬浮培养的白血病细胞的电穿孔转染条件.方法 通过控制电压(200～400 V)、电容(450～1200μF)、细胞状态及缓冲液血清浓度(0%、10%、15%)等转染条件,采用不同条件组合后用电穿孔法将质粒转入悬浮培养的人白血病细胞株K562,通过流式细胞仪和荧光显微镜分析转染率.结果 K562细胞在310 V、1050μF条件下转染率高,pEGFP-C2/K562为67.04%,pEGFP-C2/BRD7/K562为59.29%.对数生长期细胞电转染率高于生长过老期细胞;而缓冲液中的血清浓度与电转染率无关.结论 电穿孔是一种高效的基因转染法,通过优化转染条件、控制影响因素,可提高转染率.
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腺相关病毒载体介导p27Kip1基因转染骨肉瘤MG-63细胞的研究
目的 观察p27Kip1基因转染后对骨肉瘤MG-63细胞增殖和生存能力的影响.方法 重组质粒在内的三质粒共转染包装、收集腺相关病毒颗粒,检测病毒滴度并感染MG-63细胞,细胞免疫组织化学检测p27Kip1基因的表达,并行细胞增殖实验、细胞周期分析,探讨p27Kip1基因对骨肉瘤MG-63细胞的体外作用.结果 三质粒成功共转染293细胞,X-gal染色观察转染率为60%;采用CPE法(微量全细胞病变法)检测病毒滴度1.6×108 PFU/ml;细胞免疫细胞化学鉴定p27Kip1基因高表达;细胞生长曲线显示转染组细胞增殖明显减慢;流式细胞仪观察转染AAV-p27Kip1组细胞周期见S、G2期细胞比例明显降低,G0/G1期细胞比例增高.结论 p27Kip1基因重组腺相关病毒感染骨肉瘤MG-63细胞后能高表达目的 基因,并阻滞细胞于G1/S期,从而显著抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖.
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遗传高钙尿结石大鼠肾小管上皮细胞基底膜钙转运蛋白的异常表达及意义
目的 观察肾小管上皮细胞基底膜钙转运蛋白细胞膜钙泵1b(PMCA1b)和钠钙交换体.(NCX1)在遗传性高钙尿结石(GHS)大鼠肾组织的表达及其在特发性高钙尿症(IH)发病中的作用.方法 雄性遗传高钙尿结石大鼠和正常野生型SD大鼠各6只,采用实时荧光定量PCR检测PMCA1b和NCX1 mRNA表达,westem blot方法 检测其蛋白表达.结果 GHS大鼠与正常对照(NC)组大鼠的NCX1在mRNA水平和蛋白水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05);GHS大鼠与NC大鼠的PMCA1b在mRNA水平比较差异无统计学意义(P＞0.05),GHS大鼠的PMCA1b蛋白平均相对吸光度值(A)为(0.18±0.05),NC组为(0.43±0.07),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 PMCA1b蛋白表达下降可能是特发性高钙尿症形成的发病机制之一.
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微型染色体维持蛋白2和Fas相关磷酸酯酶1与乳腺癌增殖和凋亡的关系
目的 探讨微型染色体维持蛋白2(MCM2)和Fas相关磷酸酯酶(FAP-1)的表达与乳腺癌增殖和凋亡的关系.方法 采用SP法检测60例乳腺癌及15例乳腺良性疾病中MCM2及FAP-1蛋白的表达水平,10例正常乳腺组织为对照组.结果 10例正常乳腺上皮、15例乳腺良性疾病、60例乳腺癌MCM2的阳性标记指数(LI)分别为6.6±1.1、14.7±3.2、44.7±4.3,各组间差异有统计学意义(P＜0.01);MCM2的阳性表达在乳腺癌TNM分期、不同组织学分级(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)及淋巴结转移之间差异有统计学意义,呈升高趋势(P＜0.05);MCM2的LI均高于Ki-67的LI,MCM2和Ki-67在乳腺癌中的表达呈平行关系(P＜0.01).FAP-1的阳性表达率与乳腺癌的临床分期、病理分级及淋巴结转移性明显相关(P＜0.05);FAP-1在乳腺癌组织中的表达均显著高于正常组织和良性肿瘤.结论 MCM2、FAP-1在乳腺癌组织中的表达与乳腺癌的发生发展有密切联系,MCM2可能是更理想的细胞增殖标记物,FAP-1可能具有促进乳腺癌细胞增殖的作用.
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益赛普对大鼠脑外伤后核转录因子-κB的表达及脑水肿的影响
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是核转录因子-κB(NF-κB)活化的重要刺激物之一,为较早释放的具有多种生物学效应的重要促炎细胞因子[1].本研究旨在探讨益赛普对创伤性脑水肿的影响及其作用机制.
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应用蛋白质组学方法筛选人骨肉瘤多药耐药蛋白
多药耐药(MDR)是导致肿瘤化疗失败的一个重要原因[1].大量研究表明[2,3],骨肉瘤多药耐药与P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽转移酶(GST)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(Topo Ⅱ)等异常表达有关,我们应用蛋白质组学方法筛选耐药细胞与亲本细胞中差异表达的蛋白.
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颈脊髓横断对内毒素大鼠全身炎症反应、急性肺损伤及预后的影响
本研究旨在观察颈脊髓横断对内毒索大鼠全身炎症反应、急性肺损伤及预后的影响,现将结果报道如下.
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抑制核因子-κB对大鼠吻合肝动脉部分肝移植模型的保护作用
前期的实验证实吻合肝动脉的大鼠部分肝移植术与不吻合肝动脉的大鼠部分肝移植术比较能明显减轻肝脏早期的缺血再灌注损伤(IRI)[1],我们在建立吻合肝动脉的大鼠部分肝移植模型的基础上,对抑制核因子-KB(NF-KB)在吻合肝动脉的部分肝移植模型早期IRI中的作用进行研究.
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血管内皮生长因子-C短发夹RNA对肝癌细胞的抑制作用
我们通过构建靶向血管内皮生长因子(VEGF)-C的短发夹RNA(shRNA)质粒载体,观察其对肝癌细胞增殖及侵袭转移能力的抑制效应,探讨靶向VEGF-C的RNA干扰(RNAi)应用于肝癌基因治疗的可行性[1].
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RNA干扰缺氧诱导因子2对肾癌细胞周期和凋亡的影响
研究表明肾细胞癌主要表达缺氧诱导因子2(HIF-2),其主要参与血管生成、糖酵解等调节,在肿瘤生长过程中具有较重要作用[1].我们通过构建HIF-2RNA干扰真核表达载体转染入肾癌细胞中,观察HIF-2 RNA干扰对肾癌的HIF-2表达的影响,观察其对肾癌细胞周期和细胞凋亡的影响.
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人胚胎骨髓间充质干细胞大鼠脾脏移植后向肝脏的迁移与分化的研究
骨髓让间充质干细胞(MSC)具有多向分化能力,可直接来源于成人的骨髓或外周血,采集方便且不存在伦理学上的争议,具有干细胞的生物学特性及优势[1].通过MSC体外诱导分化获得肝细胞已经通过实验证实[2].我们在肝损伤大鼠脾脏内移植人胚胎MSC,移植后分时段取大鼠肝脏,观察移植细胞是否能够迁移到肝脏,并且分化为肝细胞.
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组织工程化生物活性骨膜及种子细胞生物学特性研究
我们应用猪小肠黏膜下层(SIS)作支架,分别复合不同的种子细胞体外构建组织工程化生物活性骨膜,进行生物学特性研究.
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中央杏仁核毁损对应激诱导复吸的影响
为了研究应激诱导吗啡复吸,我们采用条件性位置偏爱(CPP)重现模型,通过毁损中央杏仁核(CeA)观察其对终纹床核(BNST)和腹侧背盖区(VTA)Fos蛋白表达及CPP重现的影响.
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腺苷预处理对法洛四联症根治术婴幼儿心肌和脑的保护作用
已在动物实验和人体证实,心脏直视手术可造成心肌损伤和脑损伤,腺苷可减轻心肌损伤[1],对脑损伤的保护作用不清.本研究旨在观察腺苷预处理对法洛四联症(TOF)根治术婴幼儿心肌和脑的保护作用.
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70°斜卧位腹腔镜重复肾、输尿管切除术18例分析
我们2003年12月至2008年1月应用70.斜卧位经腹入路腹腔镜下行重复肾、输尿管切除术治疗重复肾畸形18例,效果较满意,现报道如下.
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炎症相关刺激因子诱导乳腺癌细胞上皮间质转分化的机制
我们通过检测乳腺癌细胞MCF-7在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和过氧化氢(H2O2)作用下侵袭能力发生的改变情况,观察炎症刺激是否可以促进肿瘤细胞转移,并探讨其作用机制.
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体外RNA干扰人乳腺癌细胞端粒酶逆转录酶基因表达及促凋亡的研究
我们以乳腺癌MDA-MB-453细胞株为模型,用小片段RNA(siRNA)特异性抑制人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达,了解其促肿瘤细胞凋亡的效果.
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DNA甲基转移酶1、3b基因在膀胱癌的表达及意义
肿瘤的发生与抑癌基因的失活有关[1],目前研究结果显示,抑癌基因甲基化是其失活的重要机制之一.我们采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PcR)检测Dnmtl、3b mRNA在膀胱癌组织及正常膀胱黏膜组织中的表达,并探讨其表达的意义.
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非体外循环下植入左心室辅助血泵的研究
近年来,在国内外左心室辅助装置的临床应用例数越来越多,但有关左心室辅助植入手术的报道相对较少.一般血泵植入术主要采用在体外循环下进行,缺点是可以引起炎症反应、血液破坏等.为了减少左心室辅助的心尖部手术植入时的并发症,我们在前期研究的基础上[1-4],对所研制的FW型轴流泵的手术植入方式采用在非体外循环下进行,现报道如下.
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自体干细胞移植治疗股骨头无菌性坏死的研究进展
股骨头无菌性坏死是一种致残率高的常见病、多发病,我国每年大约有30万例骨坏死的病例.目前,病因仍不十分清楚.虽然有些骨坏死与应用糖皮质激素有关,某些免疫性疾病,如原发性血小板减少性紫癜、溶血性贫血等长期服用糖皮质激素导致股骨头无菌性坏死病例屡有报道[1],而急性淋巴细胞白血病无论成人与儿童均需长期大量服用糖皮质激素,由此引起的股骨头无菌性坏死报道尚少.单用糖皮质激素很难造出理想的股骨头坏死模型,需加用马血清或细菌内毒素造模才比较理想.
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小鼠深静脉血栓形成及再通模型的建立和评价
目的 建立和评价小鼠深静脉血栓形成及再通模型.方法 采用C57/BL6小鼠,用环形结扎不完全阻断下腔静脉并用微血管夹钳夹损伤静脉壁的方法 诱导深静脉血栓形成.于术后第7、14天行血管造影观察血栓再通情况;取从结扎处到髂总静脉分叉的下腔静脉和血栓,计算质量长度比,测定血栓面积;测定尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)、基质金属蛋白酶(PAI-1)及纤溶酶原激活物抑制因子(MMP)-2、MMP-9的mRNA和蛋白水平的表达.结果 术后第7天,80%小鼠完全性下腔静脉血栓、20%再通;术后第14天,90%小鼠血栓再通.与术后第7天比较,术后第14天血栓面积缩小80%,质量长度比减小40.7%(P＜0.05).与对照组比,u-PA术后第7、14天表达增强,而第14天表达低于第7天(P＜0.05);PAI-1、MMP-2和MMP-9术后第7、14天表达逐渐增强.结论 用环形结扎不完全阻断下腔静脉并用微血管夹钳夹损伤静脉壁的方法 可成功诱导小鼠深静脉血栓形成.研究纤溶系统和MMPs系统可分别选取术后第7、14天前后的时间点为宜.
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深低温停循环大鼠脑保护模型的建立
目的 建立一种新的深低温停循环(DHCA)大鼠脑保护模型.方法雄性SD大鼠30只,随机分为3组,即颈动脉阻断DHCA组(A组)、颈内动脉引流DHCA组(B组)和假手术组(C组).于深低温停循环后60 min时监测脑电图变化,停循环60 min后恢复循环并升温.所有大鼠于术后24 h处死,并取脑组织测脑含水量.结果 B组大鼠α波相对功率值明显低于A组(P＜0.01),而且两组大鼠α波相对功率值均明显低于C组(P＜0.01);B组大鼠θ波相对功率值明显低于A组和C组(P＜0.01),而后两组大鼠θ波相对功率差异无统计学意义.脑含水率结果 显示B组大鼠脑含水量高于A组(P＜0.05).结论 颈内动脉引流DHCA模型较颈动脉阻断DHCA模型脑缺血更完全,是一种较为理想的DHCA大鼠脑保护模型.
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西地那非在犬肺移植缺血再灌注损伤中的作用
目的 观察5型磷酸二酯酶抑制剂西地那非在肺移植缺血再灌注损伤中的作用.方法 12对体重匹配杂种犬随机分为对照组(n=6)和实验组(n=6),利用同种异体犬左单肺移植模型,实验组供肺肺动脉阻断前经主肺动脉注射西地那非1.0 mg/kg体重,移植后持续泵入西地那非每小时0.3 mg/kg体重,对照组给予等容量生理盐水.观察移植前及移植后30、60、120、180min移植肺上叶静脉血氧分压(PO2)变化,于移植后120 min取肺组织,测丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)及组织含水量(H)并观察组织形态学变化.结果 实验组PO2明显高于对照组(293±52比160±45,P＜0.05);供肺组织MDA(0.25±0.09比0.50±0.09)、MPO含量(0.13±0.06比0.25±0.09)及含水量(71.59±4.63比78.04±3.73)明显低于对照组(P＜0.05);组织形态学显示实验组损伤程度较对照组轻.结论 西地那非在供肺保存及再灌注损伤中具有肺保护作用.
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葡萄糖转运蛋白4在犬体外循环心肌胰岛素抵抗发生中的作用
目的 观察葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)在犬体外循环缺血再灌注心肌胰岛素抵抗(IR)发生中的作用.方法 将12条健康杂种犬随机分成组Ⅰ(主动脉阻断30 min),组Ⅱ(主动脉阻断120 min).分别于转流前、开放主动脉后15、45、75 min取左心室心肌活检用免疫组织化学法(Envision system)检测心肌GLUT-4,并用图像分析系统分析含量变化.结果 缺血再灌注后心肌GLUT-4总量表达明显下降,在缺血再灌注15 min明显.缺血再灌注后心肌GLUT4由心肌细胞质向细胞外膜转运障碍,在再灌注15 min明显,与组Ⅰ比较,组Ⅱ更重,持续更久(P＜0.05).结论 CPB缺血再灌注后心肌细胞GLUT-4表达总量下降及GLUT-4由心肌细胞质向细胞外膜转位障碍,可能是心肌胰岛素抵抗发生的重要分子机制之一.
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肿瘤标志物联合检测对肺癌的诊断价值
目的 探讨血浆肿瘤型M2丙酮酸激酶(TuM2-PK)、神经元特异烯醇化酶(NSE)和细胞角蛋白19(CYFRA21-1)联合测定对肺癌诊断的临床意义.方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别检测90例肺癌患者,90例良性肺部疾病和100名健康人血中的TuM2-PK、NSE和CYFRA21-1的浓度.结果 肺癌组3种指标水平均明显高于良性肺疾病组和健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);TuM2-PK诊断肺癌的敏感度为68.9%,特异度为91%;TuM2-PK和NSE联合检测肺癌的阳性率高为81%.结论 TuM2-PK可作为一种新肺癌标志物应用,TuM2-PK和NSE联合检测可以提高对肺癌的阳性诊断.
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组织型纤溶酶原激活剂基因逆转录病毒载体体内靶向溶栓
目的 观察组织型纤溶酶原激活剂(tPA)基因局部转导对特氟隆(Dacron)片(与机械瓣瓣环同质)的溶血栓作用.方法 70只兔建立下腔静脉内Dacron片植入血栓模型,随机分为pLEGFP-N1-tPA治疗组(n=30)、pLEGFP-N1空载体对照组(n=20)、空白对照组(n=20),局部基因转导,于术后2、75 d各组一半动物取材(6个亚组A1、B1、C1、A2、B2、C2),聚光共聚焦(confocal)观察所取静脉增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达,体视镜和电镜观察Dacron片表面血栓情况,免疫印迹(Western blot)、血浆平板和酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测所取静脉tPA表达、溶栓、活性及含量变化.结果 术后2 d和75 d取材,治疗组所取静脉,confocal均观察到多而强的EGFP表达,pLEGFP-N1对照组也有EGFP表达,但空白对照组无EGFP表达.70个Dacron片加未植入组10个Dacron片共80个,在体视镜(×160倍)和电镜(×500倍)下观察,未植入组和治疗组Dacron片表面均无血栓,对照组表面均有血栓.治疗组所取静脉Western blot检测均有外源tPA表达,对照组未检测到.血浆平板显示:治疗组均有大的溶解圈,有明显溶栓作用,对照组没有;根据蚓激酶计算出的纤溶活性显示:治疗组术后2 d和75 d所取静脉tPA活性分别为(529.62±9.05)、(537.50±12.45)U/g,两时间点比较,差异无统计学意义(P＞0.05).术后2 d和75 d治疗组、两对照组中6个亚组所取静脉tPA含量分别为(A1737.64±13.19)、(B129.88±5.61)、(C128.71±5.49)、(A2742.87±10.56)、(B232.03±6.26)、(C231.34±5.63)ng/g,治疗组明显高于对照组(P＜0.01);治疗组中两时间点比较,tPA含量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 pLEGFP-N1-tPA局部基因转导能有效阻止外源移植物表面血栓形成.
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人类趋化素样因子超家族在非小细胞肺癌中的表达
目的 探讨人类趋化素样因子超家族(CKLFSF)成员CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义.方法 应用组织微阵列和免疫组织化学方法 检测50例NSCLC组织和癌旁正常肺组织中CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4蛋白的表达及差异.结果 CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4蛋白在癌旁正常肺组织中的阳性表达率均为100%,在NSCLC组织中的阳性表达率分别为12%、2%、14%和26%,差异有统计学意义(P＜0.01).性别、病理分化程度、病理分期与CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4蛋白在NSCLC组织中的表达程度之间无明显相关(P＞0.05).肺腺癌组织中CMTM1、CMTM4蛋白的表达明显高于其在鳞癌组织中的表达(PcmTm1=0.011,PcmTm4＜0.01).结论 位于人类染色体同一基因簇内的趋化素样因子超家族成员CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4可能是潜在的NSCLC抑癌基因.
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静脉应用抑肽酶对大鼠肺移植模型缺血再灌注损伤的作用
目的 探讨静脉应用抑肽酶对肺移植后肺缺血再灌注损伤的作用和机制.方法 利用移植肺冷缺血14 h建立的大鼠肺移植缺血再灌注损伤模型,考察抑肽酶对缺血再灌注损伤的影响,并检测细胞因子等指标探讨机制.结果 抑肽酶组较对照组移植肺氧合好、湿干比小,同时支气管肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-2[(113±32)μg/L和(162±43)μg/L,P＜0.05]、血清中IL-8[(7.26±1.01)ng/L和(9.43±0.97)ng/L,P＜0.05]和肿瘤坏死因子(TNF)-α[(152.3±36.4)ng/L和(211.6±52.7)ng/L,P＜0.05]、肺组织中髓过氧化物酶活性[(2.36±0.62)U/g和(3.98±0.36)U/g,P＜0.05]都显著降低.结论 静脉应用抑肽酶能够减轻缺血再灌注损伤,机制可能包括:减少IL-2的释放、抑制TNF-α活化和IL-8产生,抑制中性粒细胞的聚集、激活和脱颗粒.
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肺外科中单侧肺缺血-再灌注损伤的研究
目的 通过建立新西兰白兔肺外科单侧肺缺血-再灌注损伤动物模型,观察其缺血-再灌注损伤特点.方法 将96只健康新西兰兔随机分成3组:Ⅰ组为对照组(n=36);Ⅱ组为单纯阻断肺动脉组(n=30);Ⅲ组为阻断肺循环组(n=30).术中监测动物血流动力学指标;分别于开胸时(Ⅰ组)、缺血1小时和再灌注1、2、4、6 h(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组)取肺组织检测MDA;取肺组织作病理学观察,并测定手术侧肺湿/干比.结果 各组动物术中血流动力学指标平稳;在缺血1 h和再灌注1、2、4、6 h,Ⅲ组与Ⅱ组比较,肺湿/干比及肺组织中MDA含量的差异均无统计学意义(P＞0.05),Ⅰ组与Ⅱ、Ⅲ组比较差异有统计学意义(P＜0.05).在相同的时间点,Ⅱ、Ⅲ组呈现相似的肺损伤病理改变,且较为明显的肺损伤均出现在再灌注4h,再灌注6h肺损伤均呈恢复趋势.结论 肺外科中肺动脉阻断和肺循环阻断所致肺缺血一再灌注损伤特点相似,肺外科中肺血管阻断1h是安全的.
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非小细胞肺癌循环肿瘤细胞的定量检测
目的 探讨非小细胞肺癌循环肿瘤细胞(CTCs)定量检测方法 .方法 CD45免疫磁珠阴性分选组20例,CD326免疫磁珠阳性分选组25例,均为明确诊断的非小细胞肺癌患者.磁性分离富集后肺静脉与外周静脉血标本应用多参数流式细胞仪对CTCs进行定量检测.结果 阴性分选由于只能去除CD45阳性细胞,回收目的 细胞纯度低.阳性分选组中25例术中肺静脉血CTCs定量检测阳性率为64%(16/25),外周静脉血CTCs阳性率40%(10/25,P＜0.05).结论 免疫磁珠富集联合流式细胞分析检测CTCs的敏感性和特异性较高.
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部分液体通气对吸入性损伤犬的研究
目的 观察部分液体通气(PLV)对吸人性损伤犬呼吸力学、氧合和血流动力学参数的影响.方法 16条健康杂种犬经蒸气吸人造成重度吸入性损伤模型,随机分为对照组和实验组(n=8).实验组经气管导管缓慢注入氟碳液体(12ml/kg体重)行PLV治疗,治疗后30、60、90 min时测定两组犬血气、气道阻力、肺顺应性及血流动力学参数.结果 实验组Pa02呈进行性上升,在各时点与致伤后60 min比较差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,实验组各时点的PaO2稍有升高(P＞0.05).两组气道阻力、肺顺应性和血流动力学参数比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 PLV有利于吸入性损伤犬的动脉氧合,对血流动力学无明显不利影响.
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猪心肌非缺血性梗死研究
目的 观察心肌非缺血性梗死发生发展的规律.方法 中国小型猪12头,体重18～20 kg,实验组结扎LAD上等流量点,对照组解剖相应部位LAD外膜(n=6),术中测定左心室心底和心尖部位血流动力学指标.4周后取出心脏标本,将左心室分成17段,4%多聚甲醛固定1周,苏木素-伊红(HE)、PATH及天狼星红染色进行病理学观察.结果 结扎LAD 4周后,左心室17段心肌内均可发现大小不等的梗死灶.左心室腔近心端收缩压收缩压[(264.05±49.34)比(168.35±31.74)mmHg(1 mm Hg=0.133 kPa)]、平均压[(128.65±33.68)比(82.86±14.45)nnnHg、发展压[(255.09±103.18)比(178.70±31.70)nnnHg]与心尖部比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 结扎猪左冠状动脉前降支后,左心室非缺血区域可发生局灶性梗死.
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细胞S期激酶相关蛋白2、p16蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
目的 观察细胞s期激酶相关蛋白2(SKP2)、p16蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,探讨它们之间的关系及其临床意义.方法 利用组织芯片和免疫组织化学技术检测SKP2、p16蛋白在89例非小细胞肺癌,10例肺良性病变组织中的表达.结果 NSCLC组织中SKP2、p16蛋白表达阳性率分别为(23.52±13.57)%、(44.72±15.97)%,均与肺良性病变组织差异有统计学意义(2.91±1.27)%、(91.13±6.57)%(P＜0.01).SKP2蛋白在NSCLC组织中的表达水平与细胞分化程度,病理类型,TNM分期密切相关(P＜0.01),而与淋巴结转移差异无统计学意义(P＞0.05).p16蛋白在NSCLC组织中的表达水平与细胞分化程度,病理类型,TNM分期,淋巴结转移密切相关(P＜0.01).NSCLC组织中SKP2、p16蛋白表达呈负相关(r=-0.309,P＜0.01).NSCLC组织中SKP2蛋白表达率与患者生存时间呈负相关(r=-0.241,P＜0.01),p16蛋白表达率与患者生存时间呈负正相关(r=0.144,P＜0.01).结论 SKP2蛋白表达增高与p16蛋白表达降低共同在NSCLC的发生发展中起促进作用,且它们对NSCLC患者的预后也有相反的影响.
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低氧反应元件对缺血心肌转染人血管内皮生长因子165基因表达的调控作用
目的 观察低氧反应元件(HRE)对低氧、复氧心肌细胞及缺血心肌转染人血管内皮生长因子165(hVEGF165)基因表达的调控作用.方法 分离新生SD大鼠心肌细胞,采用不同氧条件进行培养;建立猪心肌缺血一复灌动物模型,将在HEK293T细胞包装后获得的rAW-9HRE.hVEGF165病毒分别转染心肌细胞及动物缺血心肌.取培养心肌细胞及培养液,另取缺血区心肌组织,采用细胞免疫荧光法、酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blot方法 分别测定hVEGF165蛋白表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定hVEGF165 mRNA表达;Ⅷ因子染色,计数缺血心肌新生血管变化.结果 病毒转染率为87%;心肌细胞A、B及E组培养液中hVEGF165蛋白含量显著升高(P＜0.01),细胞免疫荧光hVEGF165蛋白染色呈阳性;RT-PCR检测显示,心肌细胞A、B及E组可见484 bp目的 条带;在动物整体水平,与转基因缺血组比较,转基因复灌组hVEGF165 mRNA及蛋白表达显著减弱(P＜0.01),心肌毛细血管密度亦减少.结论 HRE作为氧敏感基因调控开关能有效地调控缺血心肌转染hVEGF165基因的表达.
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联合应用异博定和还原型谷胱甘肽对兔供肺的保护作用
目的 观察联合应用异博定和还原型谷胱甘肽对兔肺脏保存的影响.方法 健康日本大耳白兔24对,随机分为4组,每组6对.D组用改良型低钾右旋糖酐液(对照组,改良LPD液)行肺灌洗保存,Y组用改良LPD液+异博定(2 mg/kg体重),H组用改良LPD液+还原型谷胱甘肽(3 mmol/L),L组用改良LPD液+异博定(2 mg/kg体重)+还原型谷胱甘肽(3 mmol/L).实验结束时取肺组织测定湿/干比,细胞内钙离子浓度,丙二醛(blDA)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活性,并行细胞凋亡测定.结果 L组的肺组织湿/干比、细胞内钙离子浓度、丙二醛(NDA)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活性均优于D组(P值均＜0.01),细胞凋亡L组平均灰度值和阳性单位明显好于D组(P＜0.01、P＜0.05).结论 联合应用异博定和还原型谷胱甘肽对于肺缺血再灌注损伤的作用均优于两药单独应用.
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人工肋骨支架多孔磷酸钙的制备及体内降解研究
目的 对多孔磷酸钙(CPC)体内降解情况进行研究,为其作为组织工程化人工肋骨支架提供实验基础.方法 将CPC材料埋植于兔皮下,并于预定的时间点将材料取出,称重并送扫描电镜检查,以观察其降解情况;其周围组织则进行苏木素-伊红(HE)染色和透射电镜检查,以观察其炎症反应和生物相容性.结果 CPC材料在术后2、4、8、12、24周的生物吸收率分别为(2.500±0.098)%、(7.000±0.167)%、(10.000±0.242)%、(14.000±0.251)%、(30.000±0.177)%,降解速度平稳,能有效维持缺损部位的稳定性;HE染色和透射电镜结果 显示其炎症反应于4周时消失,有良好的生物相容性.结论 CPC的体内降解速度平稳,组织相容性好,是承重部位和非承重部位的良好组织工程支架.
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鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对食管癌细胞凋亡和抑制侵袭的作用
目的 观察鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对食管癌Eca109细胞凋亡作用及抑制细胞侵袭的影响.方法 采用Western印迹检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达;应用噻唑蓝(MTT)比色法测定观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;应用原位末端标记(TUNEL)法和Matrigel侵袭实验分别观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响和侵袭活性的改变.结果 Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODE和AdoMetDC基因表达(P＜0.05).MTT法实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用(P＜0.05).TUNEL标记检测Matrigel侵袭实验结果 显示,Ad-ODC-AdoMetDCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡(P＜0.05),可显著降低食管癌细胞Eca109的体外侵袭能力(P＜0.05).结论 Ad-ODC-AdoMetDCas能显著促进细胞凋亡,抑制食管癌细胞侵袭.
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生物起搏与电子起搏"串联"起搏心脏的研究
目的 观察自体窦房结细胞移植与电子起搏器"串联"起搏心脏的作用.方法 健康成年犬12条,随机分为实验组和对照组(n=6).所有犬安置电子心脏起搏器以保证存活,然后切取窦房结.将实验组犬窦房结组织消化成细胞悬液后,注射到自体右室前壁心肌内,对照组相同部位注射等量培养液.2周后射频消融希氏束,建立完全性房室传导阻滞犬模型,观察并记录犬心律.对实验组犬经股静脉应用异丙肾上腺素,研究心律变化.免疫荧光染色观察移植的细胞存活状况及其与心室肌细胞形成的缝隙连接结构.结果 建立完全性房室传导阻滞犬模型1 h后,实验组心率高于对照组(P＜0.01).注射异丙肾上腺素后,实验组心率变化明显(P＜0.01).实验组心律在14 d内保持稳定.免疫荧光染色法证实,移植的细胞在移植部位存活,且细胞间有缝隙连接结构形成.结论 自体窦房结细胞移植是一种对儿茶酚胺类物质的调节作用反应敏感的生物起搏技术,并且在与电子起搏技术串联后,其起搏作用在14 d内保持稳定.移植的窦房结细胞可与周围细胞形成电-机械耦联的结构基础.
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新型复合组织工程瓣膜的构建和体外生物力学研究
目的 构建复合瓣膜进行体外生物力学和脉动流测试.方法 猪主动脉瓣脱细胞处理作为支架,用3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯涂层,构建复合瓣膜,用拉伸机进行体外生物力学研究,以新鲜和脱细胞猪瓣作为对照(每组12枚);用脉动流仪进行流体力学研究,以脱细胞猪瓣作为对照(每组6枚).结果 复合瓣膜抗拉强度(12.08±1.72)MPa,与新鲜猪瓣(8.38±0.52)MPa和脱细胞猪瓣(8.16±0.66)MPa比较,差异有统计学意义(P＜0.05);在心输出量2～7L/min时,复合瓣膜与脱细胞猪瓣血流动力学参数差异无统计学意义(P＞0.1).结论 复合瓣膜具有良好的生物力学、流体力学特性.
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几项心外科研究热点的回顾与思考
临床心外科工作在过去的几十年中取得了巨大的成就与发展.但在取得显著成效的过程中,又不断发现其中仍然存在不少问题,从而使学者们针对这些面临的难题继续不断进行探索与思考.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
