中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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细胞凋亡、细胞增殖在人颈椎间盘退变过程中的作用
目的 探讨细胞凋亡、细胞增殖在人颈椎间盘退变过程中的作用以及人颈椎间盘细胞凋亡可能涉及的信号转导途径.方法 收集手术切除的33份突出颈椎间盘组织,以22份正常人颈椎间盘组织作为对照,组织形态学和TUNEL法检测凋亡细胞,免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、bax及Caspase-3的表达.结果 实验组的细胞密度低于对照组(髓核内:6.30±1.54比8.96±1.14;软骨终板内:17.27±1.82比25.41±1.89);实验组的TUNEL阳性细胞率高于对照组(髓核内:11.73±1.36比7.02±1.26;软骨终板内:13.04±1.75PC6.86±1.42);实验组髓核内PCNA阳性细胞率高于对照组(8.38±1.98比4.55±1.54);实验组髓核内bax阳性细胞率和Caspase-3阳性细胞率分别高于对照组(bax:19.32±1.95比10.94±1.72;Caspase-3:15.05±1.74比8.92±1.48);TUNEL阳性细胞率与细胞密度之间呈负相关(P＜0.01);实验组髓核内PCNA阳性细胞率与细胞密度之间呈正相关(P＜0.01);两组髓核内bax阳性细胞率、Caspase-3阳性细胞率均与TUNEL阳性细胞率之间呈正相关(P＜0.01).结论 细胞凋亡与细胞增殖间的不平衡可能是人退变颈椎间盘内细胞密度下降的原因,人颈椎间盘髓核细胞的过度凋亡可能与bax和Caspase-3的表达上调有关.
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RNA干扰对肝癌细胞CDC20表达的影响
目的 观察RNA干扰(RNAi)对肝癌细胞株Hepal-6中CDC20表达的抑制作用.方法 设计针对小鼠肝癌细胞Hepal-6 CDC20 mRNA的小干扰RNA(siRNA),以阳离子脂质体包埋后转染鼠肝癌细胞Hepal-6,转染48 h后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法 检测Hepal-6细胞CDC20 mRNA及蛋白质表达的变化.结果 siRNA各组与正常对照组和阴性对照组比较,CDC20 mRNA的表达均受明显抑制,并呈剂量依赖性(在100、50、25 nmol/L浓度下,Mixed siRNA组与正常对照组mRNA表达比较:0.370±0.058比0.840±0.044,0.480±0.081比0.900±0.068,0.830±0.062比1.010±0.054,各组P＜0.01);CDC20蛋白质的表达亦均受抑制(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3及Mixed组与N-Cont或Blank组蛋白质表达比较:0.482±0.035/0.402±0.003/0.479±0.026/0.446±0.017比0.826±0.03l或0.835±0.024,各组P均＜0.01).结论 CDC20 siRNA可显著抑制小鼠肝癌细胞Hepal-6中CDC20 mRNA和蛋白质的表达.
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转化生长因子-β1诱导小鼠同种异体气管移植物纤维增生的研究
目的 用小鼠异位气管移植观察核因子(NF)-κB是否激活转化生长因子(TGF)-β1基因参与诱导气管移植物纤维增生,探讨闭塞性细支气管炎(OB)的发病机制.方法 将小鼠气管移植分成同基因组和异基因组,在术后7、14、21 d取材算管腔闭塞率;对移植物行TGF-β1免疫组织化学染色;凝胶电泳迁移率改变法(EMSA)测定NF-κB活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1的mRNA水平;Western blot检测TGF-β1蛋白表达.结果 和同基因组比较,异基因组气管移植物在术后14 d开始纤维增生,术后21 d管腔闭塞率达(78±9)%,呈典型OB改变;NF-κB的转录活性在术后7 d明显升高,术后14、21 d维持较高水平;OB的气管移植物TGF-β1染色阳性;TGF-β1 mRNA及蛋白表达在移植术后14、21 d明显升高,在术后7 d差异无统计学意义(P＞0.05).结论 NF-κB转录活性增强,激活TGF-β1促进纤维增生,是造成OB的重要原因.
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核转录因子抑制蛋白α突变体对大鼠急性胰腺炎的保护作用
目的 观察核转录因子抑制蛋白α突变体(IκBαM)对大鼠急性胰腺炎的保护作用.方法 蛙皮素诱导建立SD大鼠急性胰腺炎模型.分4组:空白对照组A组、急性胰腺炎组B组、转染PcDNA3.0组C组、转染PcDNA 3.0-IκBαM组D组.分别于24 h检测各组血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、淀粉酶的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰腺组织中Fas、FasL、Caspase-3、mRNA的表达;组织学检测胰腺腺泡细胞坏死情况.结果 D组与B、C组比较:血清TNF-α、淀粉酶表达水平明显降低,差异有统计学意义[TNF-α(587±93比915±102;587±93比897±116);淀粉酶(6773±663比8973±825;6773±663比9021+_763),P＜0.05];胰腺组织Fas、FasL、Caspase-3 mRNA表达明显升高,差异有统计学意义[Fas(0.572±0.103比0.473±0.084;0.572±0.103比0.468±0.071);FasL(0.627±0.124比0.397±0.084;0.627±0.124比0.391±0.072);Caspase-3 (0.893±0.142比0.513±0.122;0.893±0.142比0.508±0.130),P＜0.05];胰腺组织腺泡细胞坏死明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).B、C、D组与A组表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IκBαM通过诱导胰腺腺泡细胞凋亡对大鼠急性胰腺炎发挥保护作用.
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胰腺癌肿瘤干细胞样侧群细胞的分离鉴定
目的 分离鉴定胰腺癌中的侧群(SP)细胞亚群.方法 应用Hoechst33342染色,流式细胞仪检测5个胰腺癌细胞系及3个原代培养的临床胰腺癌标本中sP细胞的含量.以PANC-1为例,通过平板克隆形成试验和NOD-SCID小鼠异种移植成瘤实验比较SP细胞与non-SP细胞的克隆形成能力及成瘤能力,通过对体外培养的SP细胞和SP细胞衍生肿瘤的HoechsG3342复染SP再分析判断其是否具有分化潜能.结果 除了BXPC-3,其他胰腺癌细胞系及原代培养标本都存在Verapamil敏感的SP细胞.SP细胞与non-SP细胞比较具有较高的克隆形成能力[(43.67±3.10)%比(8.33±1.63)%,P＜0.01],并且能够分化产生non-SP细胞并维持自身SP细胞的比例在一个较稳定的水平.SP细胞的成瘤能力是non-SP细胞的100倍以上.而且SP细胞在体内亦可发生不对称分裂生成SP细胞和non-SP细胞.结论 SP细胞可能是胰腺癌干细胞的候选细胞之一.
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塞来昔布抑制脑胶质瘤细胞运动侵袭的影响
目的 观察环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对13251胶质瘤细胞运动侵袭能力的影响.方法 采用脑胶质瘤细胞的体外趋化运动模型和体外侵袭模型,分12、24 h的不同时间进行了Celecoxib抑制胶质瘤细胞运动侵袭的生物特性研究.结果 趋化运动实验中Celecoxib处理后12 h组、24 h组细胞较对照组细胞的趋化运动能力明显下降,两者差异有统计学意义(P＜0.01),12、24 h组细胞趋化运动抑制率为52.57%、73.91%,两者差异有统计学意义(P＜0.01);侵袭实验中Celecoxib处理12、24 h后侵袭至滤膜下表面的细胞数均低于对照组的细胞数,两者差异有统计学意义(P＜0.01),12、24 h组细胞组织侵袭抑制率为55.90%、85.16%,两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Celecoxib能在模拟体内运动侵袭试验中有效抑制U251胶质瘤细胞的运动侵袭能力.
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重组人骨形态发生蛋白-2/异体骨复合骨用于兔腰椎融合的显微CT研究
目的 观察重组人骨形态发生蛋白-2/异体骨复合骨、自体骨与异体骨分别用于兔腰椎融合后,不同时间点融合骨组织微结构的变化.方法 成年雄性新西兰大白兔45只,随机分为3组,每组15只.在每只兔的L5、L6横突间行腰椎后路植骨融合术,各组分别植入复合骨条,自体髂骨条以及单纯异体髂骨条,每组于术后第3、4、5周各处死5只大白兔,分离保存融合节段标本.用显微cT扫描后行骨组织定量分析.结果 术后3个时间点中,复合骨组和自体骨组新生骨小梁的强度和形态均要优于异体骨组且差异有统计学意义(P＜0.05).第3周,复合骨组的组织骨密度(TMD)为(433.98±2.64)mg/cm3,高于自体骨组(424.81±4.69)mg/cm3(P＜0.05);第4周,复合骨组的骨小梁厚度(Tb.Th)为(0.097±0.004)mm,高于自体骨组(0.082±0.003)mm(P＜0.01);第5周,复合组的组织矿含量(TMC)为(7.70±0.30)mg,高于自体骨组(7.00±0.24)mg(P＜0.01).结论 在兔腰椎后路横突间植骨融合中,重组人骨形态发生蛋-2/异体骨复合骨的成骨效应不低于自体骨,优于异体骨.
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骨形成蛋白-2和转化生长因子-β1双基因在骨髓基质细胞中的共表达
目的 观察骨形成蛋白(BMP)-2、转化生长因子(TGF)-β1双基因真核表达载体在骨髓基质细胞中的共表达.方法 以pGEM-T-BMP-2及pGEM-T-TGF-β1为模板,分别用引入新的酶切位点的引物,聚合酶链反应(PCR)扩增出1188 bp长度的BMP-2和1173 bp长度的TGF-β1两个目的 基因片段;依次将其定向克隆入真核双基因表达载体pIRES;酶切、分析及序列测定重组子:然后,用脂质体包裹转染骨髓基质细胞;荧光定量逆转录(RT)-PCR方法 检测BMP-2及TGF-β1基因的共表达情况.结果 双酶切可见1188 bp的BMP-2条带及核酸序列测定证实重组质粒pIRES-BMP-2-TGF-131构建正确,并在骨髓基质细胞中能同时高效表达BMP-2和TGF-β1 mRNA.结论 BMP-2和TGF-β1双基因真核载体能够在骨髓基质细胞中实现BMP-2和TGF-β1基因共表达.
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陷阱受体3反义寡核苷酸对胶质瘤U251细胞凋亡的影响
目的 观察陷阱受体3(DcR3)反义核苷酸(ASODN)在胶质瘤细胞凋亡中的作用.方法 构建并挑选DcR3反义核苷酸,转染U251细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法 观察DcR3 mRNA和蛋白有无降低,流式细胞仪观察细胞凋亡的变化.结果 经1.2 μmol/L AS20DN处理的U251细胞可有效地降低DcR3 mRNA和蛋白表达,DcR3/β-actin比值分别为(12.4±3.1)%和(13.5±4.2)%,错义链组、脂质体组、对照组mRNA和蛋白分别为(68.8±4.5)%、(74.5±5.0)%、(71.3±6.4)%和(78.2±6.8)%、(79.8±4.5)%、(76.4±5.6)%,差异有统计学意义(P＜0.05),同时,传染DcR3反义核苷酸的U251细胞凋亡率为(42.9±13.1)%,明显高于错义链组(15.8±4.8)%、脂质体组(15.7±3.7)%和对照组(14.6±4.0)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DcR3反义核苷酸可使U251细胞凋亡增多.
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去骨瓣减压术对大鼠缺血缺氧性脑损伤后核因子-κB表达及细胞凋亡的影响
目的 观察去骨瓣减压术对大鼠缺血缺氧性脑损伤后核因子(NF)-κB表达及细胞凋亡的影响.方法 将60只SD大鼠随机分3组:脑缺血(IS)组、脑缺血+去骨瓣减压(IS+DC)组、去骨瓣减压(DC)组,每组20只.不同时间点取脑,三苯基氯化四氮唑(TTC)染色观察脑梗死范围,电镜观察半暗区神经元超微结构变化,免疫组织化学测定NFκB表达,TUNEL法检测细胞凋亡变化.结果 与单纯脑缺血组比较,(IS+DC)组脑梗死范围减小,半暗区神经元损伤减轻,NF-κB表达降低(0.0621±0.0101,P＜0.05),细胞凋亡数量减少(10.93±3.54,P＜0.05).结论 去骨瓣减压术通过降低缺血半暗区脑组织NF-κB基因表达,减少细胞凋亡,起到脑保护作用.
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Hedgehog信号通路在胰腺癌中的表达与表皮生长因子受体的关系
目的 探讨胚胎发育信号通路Sonic hedgehog(SHH)在胰腺癌组织中的表达及其与表皮生长因子受体(EGFR)的关系.方法 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测胰腺癌组织及癌旁组织中SHH和EGFR的mRNA和蛋白表达.结果 SHH mRNA和蛋白在胰腺癌组织中的阳性率分别为81.6%和79.6%,与癌旁组织比较,差异有统计学意义(P＜0.05).EGFR mRNA和蛋白在胰腺癌组织中的阳性率均为73.5%,与癌旁组织比较,差异有统计学意义(P＜0.05).SHH和EGFR蛋白表达与年龄、肿瘤大小、组织学类型和肿瘤部位等病理因素均无明显相关(P＞0.05),而在不同淋巴结转移状况和TNM分期的病例组中,两者表达差异有统计学意义(P＜0.05).配对资料的Spearman相关分析显示,SHH表达与EGFR表达呈正相关(r=0.232,P＜0.05).结论 SHH和EGFR信号通路在胰腺癌组织中呈活化状态,两者之间的相互作用对胰腺癌的发生发展可能有重要影响.
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抗人膀胱癌单克隆抗体Fab段与超抗原偶联蛋白的制备及T淋巴细胞刺激活性鉴定
目的 制备超抗原与抗人膀胱癌单克隆抗体Fab偶联蛋白并鉴定其活性.方法 以木瓜蛋白酶、BDI-1抗体比率1:100制备的Fab与SEA以5倍抗体过量用SPDP偶联;经surperdex-200柱纯化;SDS-PAGE确定纯度及相对分子质量;免疫组织化学法鉴定抗体活性;CCK-8、酶联免疫吸附试验(ELISA)法分析偶联蛋白促PBMC增殖、分泌活性.结果 偶联蛋白、Fab、SEA洗脱出峰时间分别为16、27.5、30 min;SDS-PAGE电泳显示在250×103出现连续条带;免疫组织化学显示仅偶联蛋白组膀胱癌细胞膜呈阳性染色;CCK-8、ELISA法显示偶联蛋白促PBMC增殖指数PI介于1.1±0.1-2.3±0.1;PBMC上清白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ浓度分别为(136.1±12.8)、(140.8±21.8)、(207.7±10.5)ng/L,与SEA组差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 成功制备BDI-1Fab-SEA偶联蛋白,偶联蛋白仍保持良好的T细胞刺激活性和抗体活性.
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Ki-67启动子的克隆及其转录活性
目的 克隆肿瘤特异Ki-67启动子,观察其在人肿瘤细胞中的转录活性.方法 提取肾癌Ketr-3细胞基因组总DNA作为模板,聚合酶链反应(PCR)获取1.6 kb的Ki-67启动子DNA片段.克隆到pGL3-Basic载体构建双荧光素酶检测质粒pGLB-Ki-67.将pGLB-Ki-67转染4种人肿瘤细胞及人脐静脉内皮Huvec细胞,使用双荧光素酶检测系统鉴定启动子活性及肿瘤特异性.结果 电泳与测序结果 显示克隆出的Ki-67启动子片段序列与Genbank中记录一致,pGLB-Ki-67质粒构建成功.其启动子活性在Hela、BIU-87、Ketr-3、A549 4种人肿瘤细胞内分别达到SV40 promoter/enhancer活性的21.0%、31.1%、23.9%和7.2%;在Huvec细胞内仅为0.5%.结论 克隆出I(5-67基因启动子(-820～+771),并证明其具有良好转录活性.
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血管内皮生长因子-C和人表皮因子受体2共沉默对人肺腺癌细胞生物学行为的影响
目的 观察靶向血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、人表皮因子受体2(HER2/neu)基因的小干扰RNA(siRNA)转染对肺腺癌细胞株A549生物学行为的影响.方法 构建靶向VEGF-C、HER2/neu的siRNA表达质粒,转染A549细胞,Transwell小室检测细胞体外侵袭能力,噻唑蓝(MTY)比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定凋亡率.结果 siVEGF-C组、siHER2/neu组、共转染组的细胞侵袭数分别为(42.76±2.87)、(47.10±3.63)、(40.50±3.21),显著低于阴性对照组(61.00±2.48,P＜0.01);转染48 h生长抑制率分别为(19.77±1.15)%、(22.98±2.13)%、(41.27±0.51)%,显著高于阴性对照组(4.99±0.14)%(P＜0.01);转染48 h肿瘤细胞凋亡率分别为(10.8±1.8)%、(11.7±1.5)%、(20.2±3.4)%,显著高于阴性对照组(2.6±0.7)%(P＜0.01).与单独一种siRNA转染比较,联合转染肿瘤细胞生长抑制率增加(P＜0.01),凋亡率增加(P＜0.01).结论 靶向VEGF-C、HER2/neu的siRNA转染后可以显著降低A549细胞侵袭能力,抑制增殖,诱导细胞凋亡,共转染后对增殖和凋亡影响更显著.
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小分子干扰RNA抑制肺癌细胞Survivin表达对凋亡和顺铂耐药性的影响
目的 观察应用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制肺癌A549细胞中Survivin表达对细胞凋亡和顺铂耐药性的影响.方法 设计、合成特异性抑制Survivin表达的siRNA,转染肺癌A549细胞48 h后,检测Survivin基因mRNA表达量以及肺癌细胞凋亡率和对顺铂耐药性变化.结果 A549细胞转染Survivin特异siRNA后,Survivin/β-actin基因mRNA表达比例1.17±0.25下降至0.41±0.18,抑制率65.10%;细胞凋亡率由2.67%上升至32.33%;顺铂半数抑制浓度(ICSO)由6.37 ms/L降低至2.42 ms/L.结论 通过siRNA特异性抑制肺癌A549细胞中Survivin基因表达可增加凋亡,逆转顺铂耐药.
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真皮多能干细胞与聚(对苯二甲酸丁二醇酯-co-聚乙二醇-co-低聚乳酸)三元共聚酯的生物相容性
目的 观察小鼠真皮多能干细胞(SKP)与聚(对苯二甲酸丁二醇酯-co-聚乙二醇-co-低聚乳酸)(PBTEOLA)三元共聚酯的生物相容性.方法 分离培养小鼠乳鼠SKP.用DAPI标记SKP细胞核后,荧光显微镜下动态观察SKP接种在共聚酯支架上的生长情况;SKP与共聚酯体外立体培养至第4天和第7天时,通过扫描电镜及苏木素-伊红(HE)染色观察细胞生长及基质分泌情况;噻唑蓝(MTY)比色法检测共聚酯对SKP的增殖影响.结果 SKP细胞接种于共聚酯上24 h后即贴壁生长,第5～7天时为生长高峰.SKP牢固地黏附于共聚酯材料表面和孔隙内,细胞间有伪足相连,且有基质形成.检验时间因素和材料因素交互作用时,差异无统计学意义(P＞0.05).共聚酯对细胞生长无明显影响.结论 PBTEOLA三元共聚酯对SKP细胞具有良好的生物相容性,可选择作为组织工程的支架材料.
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低表达蛋白HAX1对Hela细胞凋亡的影响
目的 观察低表达蛋白HAX1对Hela细胞维持线粒体膜电位及细胞凋亡的影响.方法 利用RNA干扰技术抑制Hela蛋白HAX1表达3 d后,利用阳离子脂质荧光染料JC-I标记法和流式细胞仪检测并比较实验组(蛋白HAX1低表达组)及对照组细胞线粒体膜电位变化趋势.加入H2O2(2 mmol/L)诱导细胞凋亡3 h后利用Annexin V-FITC法检测并比较两组细胞凋亡率.结果 对照组细胞线粒体膜电位下降百分比均值为9.52%,实验组细胞线粒体膜电位下降百分比均值为21.12%,实验组细胞线粒体膜电位降低比率多于对照组(P＜0.05).对照组H2O2(2 mmol/L)诱导细胞凋亡率均值为21.80%,实验组H2O2(2 mmol/L)诱导细胞凋亡率均值为31.73%.实验组细胞凋亡率高于对照组(P＜0.05).结论 低表达蛋白HAX1不仅可以降低Hela细胞线粒体膜电位稳定性,而且促进Hela凋亡.
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水通道蛋白4在食管鳞癌中的表达
目的 观察水通道蛋白4(AQP4)在食管鳞癌组织中的表达并探讨其在食管癌发病中的作用.方法 取食管鳞癌组织、癌旁正常鳞状上皮组织各16例,应用免疫组织化学,逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测AQP4的表达及分布.结果 免疫组织化学显示,AQP4表达于正常食管黏膜鳞状上皮细胞,在食管鳞癌组中主要表达于肿瘤上皮细胞和癌巢中.RT-PCR法结果 显示,AQP4在癌旁正常组织和食管癌组织中的mRNA表达平均相对A值分别为0.45±0.12、0.70±0.23,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AQP4在正常食管黏膜鳞状上皮细胞以及食管鳞癌组中均有表达,而且在癌组织中表达增加;AQP4可能对人食管癌的发生、发展起促进作用.
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Bmi-1介导的甲强龙对脊髓源性神经干细胞增殖能力的影响
目的 观察甲强龙对脊髓源性神经干细胞增殖能力的影响,并探讨其机制.方法 体外培养及鉴定C57BL/6小鼠脊髓来源的神经干细胞分为甲强龙组与对照组,通过细胞生长曲线研究甲强龙对其增殖能力的影响,并利用半定量聚合酶链反应(PCR)法及Western blot法观察两组神经干细胞24、48、72 h自我更新重要调节因子Bmi-1、Numb、Notch表达的差异.结果 细胞生长曲线测定第7天甲强龙组神经干细胞计数为12.4×104,而对照组为19.3×104,相差6.9×104;在24、48、72 h甲强龙组与对照组Bmi-1 mRNA表达灰度比值分别为0.52±0.05、0.21±0.02、0.16±0.05,而Numb,Notch mRNA表达无明显变化,Western blot法测定甲强龙组与对照组Bmi.1蛋白表达的灰度比分别为0.63±0.07、0.33±0.04、0.19±0.06.结论 甲强龙抑制脊髓源性神经干细胞增殖通过Bmi-1介导.
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1,25-(OH)2 D3在大鼠肾移植急性排斥反应中的作用
目的 观察1,25-(OH)2D3在大鼠肾移植急性排斥反应中的作用,探讨其在免疫调节中的机制.方法 行Wistar为供体,SD大鼠为受体的肾移植术,24只SD大鼠随机分为4组,检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、Ca2+、P3+、白细胞介素(IL)-2、干扰素(IFN)-γ的水平及移植肾的病理变化.结果 Ⅰ组大鼠肾移植后5 d血清中BUN、Cr、IL-2、IFN-γ水平分别明显高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组(P＜0.05),Ⅱ、Ⅲ组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05),但分别与Ⅳ组比较均明显增高(P＜0.05).各组Ca2+、P3+比较差异无统计学意义(P＞0.05).病理结果 显示,Ⅰ组大鼠移植后肾脏排斥反应重,其余组与之比较均有所减轻,以Ⅳ组明显.结论 1,25-(OH)2D3通过减少IL-2、IFN-γ的产生,减少排斥反应的发生,改善移植肾的功能.
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CO2气腹下缺氧诱导因子-1α与血管内皮生长因子在大鼠肝癌中的表达及其意义
目的 观察不同CO2气腹压力条件下,大鼠移植性肝癌中缺氧诱导因子(HIF)-1α与血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化.方法 制作大鼠Walker-256移植性肝癌模型,将48只肝痛模型随机分为4组,给予不同气腹压力0、5、10、15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),恒定一定时间及流量.术后处死全部大鼠,切取肝肿瘤,4%甲醛固定后行苏木素-伊红(HE)染色,免疫组织化学染色检测HIF-1α及VEGF表达.结果 随着CO2气腹压力的增加,HIF-1α、VEGF在肿瘤模型上的表达逐渐增强(P＜0.05),各组肝癌组织中HIF-1α VEGF呈正相关关系(其r分别为0.835、0.714、0.761、0.781).结论 随着CO2气腹压力的增加,HIF-1α与VEGF的表达逐渐增加,且HIF-1α与VEGF呈正相关.CO2气腹促进肿瘤生长和转移可能与HIF-1α VEGF有一定关系.
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大鼠树突状细胞CD86分子小干扰RNA慢病毒载体构建及其功能
目的 观察针对大鼠树突状细胞(DCs)表面共刺激分子CD86的小干扰RNA(siRNA)慢病毒载体转染骨髓来源大鼠DCs后,CD86分子mRNA水平变化及DC刺激T淋巴细胞增殖能力的变化.方法 将针对大鼠DCs表面共刺激分子CD86的siRNA慢病毒载体转染骨髓来源大鼠DCs,逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测CD86分子mRNA水平,MLR检测转染后的树突状细胞刺激T淋巴细胞增殖能力的变化.结果 转染组CD86分子mRNA水平较未转染组及阴性对照组有明显下降.MLR中各实验组DC与细胞1:1、1:10、1:50混合72 h后492 nm吸光度值分别为,未转染组:0.876±0.117、0.582±0.085、0.472±0.034;阴性对照组:0.870±0.140、0.541±0.066、0.438±0.067;转染组:0.394±0.143、0.294±0.032、0.218±0.015.表明转染后的DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力较未转染组及阴性对照组显著降低.结论 实验所用针对CD86分子的siRNA慢病毒载体,可以特异性的抑制大鼠树突状细胞CD86基因的表达,降低树突状细胞对T淋巴细胞的刺激增殖能力.
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骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后功能恢复的影响
目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对脊髓损伤修复的促进作用.方法 用改良Allen法制作大鼠脊髓损伤动物模型.随机分成对照组(A组),脊髓损伤9 d后脊髓内微量注射生理盐水溶液5μl;骨髓间充质干细胞移植组(B组),脊髓损伤9 d后脊髓内注射骨髓间充质干细胞悬液5μl.移植后7、14、28 d采用斜板实验、脊髓运动功能BBB评分法观察大鼠运动功能恢复情况,脊髓诱发电位的检测观察神经功能恢复,苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓损伤处空洞面积的改变情况,免疫组织化学法观察移植的骨髓间充质干细胞的存活及分化情况,损伤部位神经纤维的再生情况.结果 移植后28 d,两组斜板倾斜角度差异有统计学意义[A组(44.96±5.70)度,B组(53.19±6.51)度,P＜0.05];两组BBB评分差异有统计学意义[A组(6.8±1.2),B组(10.1±3.5),P＜0.05].同时,两组MEP潜伏期差异有统计学意义[A组(4.69±0.47)ms,B组(3.97±0.83)ms,P＜0.05],两组SEP潜伏期差异有统计学意义[A组(4.19±1.97)ms,B组(2.60±0.92)ms,P＜0.05].两组神经轴突计数差异有统计学意义[A组(32.8±6.1)条/mm2,B组(39.0±4.6)条/mm2,P＜0.05].实验组可见明显星形胶质细胞和神经纤维再生,脊髓损伤处的空洞面积明显减小.结论 骨髓间充质干细胞可在脊髓损伤处分化为神经元和神经胶质细胞,能够减小脊髓损伤处的空洞面积,促进受损轴突的再生和运动功能的恢复.
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前列腺癌组织中P504S的表达及其与血清前列腺特异抗原的关系
目的 探讨α-甲酰基辅酶A消旋酶(P504S)在前列腺癌(PCa)组织中的表达及其与血清PSA的关系.方法 采用免疫组织化学方法 检测P504S在PCa(36例)、前列腺高分级上皮样内瘤样病变(HG-PIN,20例)及良性前列腺增生(20例)组织中的表达,探讨其在PCa中的表达水平与血清PSA水平的关系.结果 36例PCa组织标本中,P504S的表达阳性率为72.2%(26/36).20例HG-PIN组织中P504S的表达阳性率为55.0%(11/20),20例良性前列腺增生组织中均未见阳性表达.高分化、中分化、低分化PCa组织中P504S的阳性表达率分别为44.4%、72.2%、100.0%.P504S表达与PCa恶性程度呈正相关(P＜0.05),与患者血清PSA水平无明显相关(P＞0.05).结论 P504S基因表达与Pea的分级密切相关.
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前列腺干细胞抗原在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义
目的 采用量子点荧光标记技术观察前列腺干细胞抗原在膀胱移行细胞癌中的表达.方法 52例膀胱移行细胞癌手术标本,其中病检提示为表浅膀胱癌34例,侵犯肌层的有18例,所有标本行量子点荧光标记,每张设置阴性对照,实验后1个月内,在4个时间点对阳性部位荧光强度分4个等级做出判断.结果 在肿瘤细胞膜上出现一圈橙红色的荧光,细胞质和细胞核无荧光表达,阴性片表现为组织自身激发的绿色荧光,两者对照区别明显.这种阳性表达在表浅膀胱肿瘤中达到97.1%,在侵犯肌层的肿瘤中为77.8%,在病理级别为Ⅱ级的肿瘤中强阳性表达率为43.3%,Ⅲ级的强阳性表达率为59.1%.荧光强度在2周内无明显变化,到1个月时标本荧光强度有不同程度减弱,没有了荧光强度为"卅"的标本,除了4例标本荧光强度衰减为"0"外,其余仍在肉眼可识别范围内.结论 前列腺干细胞抗原是膀胱移行细胞癌有价值的瘤标,特别是对高级别表浅肿瘤敏感性高,可用于临床早期诊治和监测复发.
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黏蛋白Muc-1、Muc-3和Muc-5ac在胆囊结石形成的作用
目的 探讨黏蛋白(Mucin,Muc)Muc-1,Muc-3和Muc-5ac在胆囊结石形成中的作用及其关系.方法 应用免疫组织化学法检测Muc-1、Mac-3和Muc-5ac在36例胆囊结石患者、20例慢性胆囊炎患者和12例正常胆囊的胆囊黏膜中的表达.结果 Muc-1和Muc-5ac在胆囊结石和慢性胆囊炎的胆囊黏膜表达的阳性率分别为61.1%(22/36),66.7%(24/36)和40.0%(8/20).40.0%(8/12),均显著高于正常对照组25.0%(3/12),33.3%(4/12)(P＜0.01);胆囊结石组的阳性率(61.1%、66.7%)又显著高于慢性胆囊炎组(40%,40%,P＜0.05).Muc-1与Muc-5ac在结石性胆囊黏膜中的阳性表达呈正相关(r=0374,P＜0.01).Mac-3在胆囊结石和慢性胆囊炎的胆囊黏膜表达的阳性率分别为30.1%(11/36)和35.0%(7/20),显著低于正常对照组75.0%(9/12)(P＜0.01),但在胆囊结石和慢性胆囊炎的胆囊黏膜两组之间表达的阳性率差异无统计学意义(30.1%比35.0%)(P＞0.05).Muc-3分别与Muc-1和Muc-5ae在结石性胆囊黏膜中的阳性表达呈负相关(r=-0.407、-0.296,P＜0.01).结论 Muc-1、Muc-3和Muc-5ac参与了胆囊结石的成石过程,它们之间相互作用,共同促进胆囊结石的形成.
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蚕丝粉体改性聚氨酯材料的组织相容性
目的 观察不同蚕丝粉体(SM)配比的改性聚氨酯(PU)材料人造血管的组织相容性.方法 将PU与SM按照不同配比混合制成PU-SM薄膜.通过大鼠急性毒性实验、肌肉植入局部反应实验以及材料对细胞RNA合成影响实验,观察不同含量SM对改性PU材料组织相容性的影响.结果 PU-SM复合材料经过适当的配比可有效的减低移植物对大鼠的急性毒性,且可降低局部炎症反应,较涤纶材料更为优良.SM比例为50%及70%时的PU-SM复合材料对细胞的数量和细胞总RNA基本不变,从分子水平说明SM配比为50%及70%时,PU-SM复合材料的组织相容性得到大改善.结论 经一定比例配比的SM改性PU材料可以改善PU的生物相容性.
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N-乙酰半胱氨酸对重症急性胰腺炎大鼠肠道屏障功能障碍与二次打击的保护作用
目的 观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠屏障功能障碍与二次打击的防护作用.方法 雄性Wistar大鼠54只随机分为SAP组(n=24)、SAP+NAC组(n=24)和假手术组(n=6).建模后3、6、12、24 h,取腹主动脉血液和小肠、胰腺、肺脏、肝脏组织.光镜下观察小肠组织病理改变,检测各时段血浆肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素-6(IL-6)和二胺氧化酶(DAO)活性,以及胰腺、肺脏、肝脏中髓过氧化物酶(MPO).结果 SAP组各时间点血液TNF-α、IL-6、DAO均较假手术组显著升高(P＜0.01),6、12、24 h胰腺、肺脏、肝脏MPO较假手术组显著升高(P＜0.05或P＜0.01);与SAP组比较,SAP+NAC组各时间点血液TNF-α、IL-6显著下降(P＜0.05或P＜0.01),6、12、24 h三个时间点DAO活性均显著降低(P＜0.05或P＜0.01),12、24h胰腺、肺脏、肝脏MPO显著减少(P＜0.05或P＜0.01).结论 NAC可有效防护SAP大鼠肠屏障功能障碍,并可减轻胰腺、肺脏、肝脏遭受二次打击的严重程度.
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Stathmin基因在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的 检测Stathmin基因在乳腺癌组织中的表达,探讨Stathmin基因与乳腺癌发生和进展的关系.方法 50例新鲜乳腺癌标本,所有标本均含有乳腺癌组织及癌旁组织,采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测Stathmin的表达情况.结果 50例标本的癌组织中Stathmin的表达率为52%,癌旁组织中Stathmin的表达率为6%,在有淋巴结转移的38例乳腺癌中,Stathmin基因表达率为61%;在没有淋巴结转移的12例乳腺癌中,Stathmiu基因表达率为25%.结论 Stathmin的表达可能在乳腺癌发生、发展及转移中发挥作用,Stathmin的表达还可能与乳腺癌的预后有关.
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颅脑损伤急性期灌注压变化后引起兔脑神经元凋亡的研究
目前认为在影响颅脑损伤患者预后的诸多因素中,以脑灌注压为明显[1].本研究旨在探讨颅脑损伤急性期灌注压变化后脑神经元凋亡的规律和机制,观察颅脑损伤急性期脑灌注压的合适水平.
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电离辐射对大鼠肠屏障功能的损伤作用
肠组织对辐射高度敏感,放射性肠损伤常见于核爆炸、核事故以及临床恶性肿瘤放疗中.本实验旨在探讨电离辐射对大鼠肠屏障功能的损伤作用及其病理机制.
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血管内支架治疗主动脉弓小弯侧夹层动脉瘤
主动脉小弯侧的动脉瘤或是夹层撕裂用常规的覆膜支架进行血管内封堵手术是难以将其完全封堵,形成内漏的可能性大.
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成熟猪窦房结起搏细胞的生物学特性
窦房结是心脏传导系统的重要组成部分.将窦房结细胞分离后深入研究其形态与电生理功能已得到很多学者的重视[1,2].窦房结起搏细胞在构建生物起搏器领域中具有重要地位.
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脑胶质瘤瘤周MRI水肿分级与层粘连蛋白α1、γ2的表达的关系
层粘连蛋白(LN)做为一族具有多种生物学功的细胞外基质(ECM)糖蛋白,参与基底膜构建,还和细胞黏附、生长、迁移有关[1].已知的研究多在离体情况下探讨它与胶质瘤侵袭的相关性.
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稳定表达乙型肝炎病毒X基因正常肝细胞株的建立
我们通过脂质体介导转染将乙型肝炎病毒X(HBVx)基因导入正常肝细胞系中,建立稳定表达乙型肝炎病毒X基因正常肝细胞株,为研究HBVx基因的生物学行为提供细胞模型.
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静脉移植骨髓间充质干细胞对大鼠脊髓损伤后少突胶质细胞再髓鞘化的影响
有研究结果表明,骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗SCI能明显改善脊髓的神经功能[1-2].我们应用常规电镜技术和免疫组织化学荧光标记方法,观察Mscs移植治疗对损伤脊髓少突胶质细胞超微结构和髓磷脂碱性蛋白(MBP)、髓鞘蛋白前脂蛋白(PLP)含量的影响,并探讨其机制.
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肝移植中AO血型搭配使用经验探讨
ABO血型不合肝移植术后易发生抗体介导的免疫反应,引起胆道、血管和肝叶坏死等并发症.本研究旨在探讨血型不合中使用A型血供肝给O型血受体的经验.
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靶向血管生成因子2的shRNAs降低U87胶质瘤侵袭力的研究
血管生成因子(Ang)-2作为多个促肿瘤迁移因子的潜在激活物质,在胶质瘤新生血管生成与稳定、周围基质降解与侵袭方面发挥重要作用[1,2].我们通过敲低Ang-2在人源性U87胶质瘤细胞中的表达,观察其对胶质瘤侵袭力的影响.
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磷酸酶基因上调BIU-87细胞中p53蛋白表达水平并增强其对化疗药物的敏感性
张力蛋白同源、第10号染色体丢失的磷酸酶基因(PTEN)失活是否参与了化疗耐药的形成,目前报道尚少.本研究通过脂质体介导法将野生型PTEN基因(WT-PTEN)与两种突变型PTEN基因:G129E-PTEN(无脂质磷酸酶活性而保留蛋白磷酸酶活性)、C124A-PTEN(无磷酸酶活性)分别导入携带野生型p53基因的人膀胱癌细胞株BIU-87,研究PTEN在膀胱癌细胞中的作用.
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睾酮对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞增殖的影响及其与雄激素受体水平变化的关系
睾酮缺乏是阴茎勃起功能障碍(ED)可能的原因之一[1].为探讨睾酮在阴茎海绵体生长发育中的作用,我们设想阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSM)中存在雄激素受体(AR),接受体内睾酮的刺激作用.
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奥曲肽减轻肠梗阻引起肠黏膜损伤的研究
Bounous等[1,2]采用向肠腔内注射胰蛋白酶抑制剂,或预先结扎胰管,能减轻因为出血性休克所引起的肠黏膜损伤,表明胰蛋白酶在肠黏膜的损伤中起着重大的作用.
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股骨颈骨折后股骨头坏死与血管内皮生长因子表达的关系
创伤后股骨头缺血坏死与激素等特发性坏死病因不同,其中股骨颈骨折后股骨头缺血坏死发生率可达37.2%[1].我们采用免疫组织化学染色检测股骨颈骨折的股骨头内血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平,探讨股骨颈骨折后股骨头的病理变化及VEGF表达的关系.
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两种兔可控性急性心肌缺血再灌注模型的比较
目的 完善兔可控性急性心肌缺血再灌注(I/R)动物模型的制备,提高模型成功率和动物成活率.方法 成年健康家兔60只,随机分为假手术组30只(Sham组)、I/R1组15只和I/R2组15只.Sham组仅穿线不接扎,I/R1组选择左冠状动脉前降支,I/R2组选择冠状动脉左缘支.开胸后以5-0 prolene线穿过冠状动脉,硅胶管圈套5-0 prolene线,用血管钳收紧硅胶管阻断冠状动脉血流,制备兔可控性心肌缺血再灌注模型.四肢安装肢体导联,通过心电图sT段的改变作为心肌缺血的评定指标.结果 Sham组30只动物手术前后心电图均无变化;I/R1组结扎后,13只动物ST段无明显变化;2只动物ST段轻度压低,再灌注时无心律失常表现;I/R2组15只动物结扎后ST段均抬高明显,并渐与QRS波融合,QRS波幅随着时间的延长逐渐变小,再灌注时11只出现室性早搏,4只出现室性心动过速.结论 兔可控性心肌缺血再灌注模型应选择冠状动脉左缘支.用血管钳收紧硅胶管圈套5-0 prolene线的方法 可以准确地复制兔心肌缺血再灌注的实验模型,简化实验操作步骤.
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转移性人肝癌裸小鼠原位种植合并肝动脉结扎模型的建立
目的 建立稳定有效的转移性人肝癌裸小鼠原位种植合并肝动脉结扎模型.方法 采用56只BALB/C-nu/nu裸小鼠,建立转移性人肝癌裸小鼠原位种植模型;随机分为2组,移植瘤术后2周进行肝动脉结扎(HAL)组和仅开腹为假手术组.两组中各随机抽出6只裸鼠,在2次手术后2 d利用哌莫硝唑(PimoIlidazole)作为乏氧探针行肝脏移植瘤标本免疫组织化学显色和Western blot检测移植瘤组织中乏氧诱导因子(HIF)-1α蛋白的表达.结果 人肝癌裸小鼠原位种植成瘤率为100.0%(56/56);HAL手术成功率达93.3%(28/30);与假手术组比较,HAL组移植瘤内乏氧细胞(Pimonidazole阳性细胞)显著增加(P＜0.05),移植瘤组织HIF-1α蛋白表达升高(P＜0.05).结论 转移性人肝癌裸小鼠原位种植合并肝动脉结扎模型手术成功率高,能够导致肝脏移植瘤有效乏氧,是一种较理想的研究肝动脉断流对人肝癌生物学特性影响的实验模型.
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兔慢性室壁瘤模型的建立
目的 建立一种兔慢性左心室室壁瘤(LVA)模型.方法 取成年新西兰大白兔35只,结扎冠状动脉前降支和回旋支中段,造成急性心肌梗死(AMI).结扎前、结扎后当时和1个月后经心尖部测左心室内收缩末压(LVESP)和舒张末压(LVEDP).结扎前和1周及1个月后行超声心动图检查,测量左心室前后径(D1)、长径(D2)、室间隔厚度(IVS)、左室后壁厚度(LVPw)、左室舒张末容积(LVEDV)和收缩末期容积(LVESV)、射血分数(LVEF),计算室壁瘤所占左心室面积比例.留心脏标本做大体病理检查,用琼脂做左心室腔内铸型.结果 动物存活率88.6%,LVA模型成功率83.9%.超声心动图见心尖部和左室前侧壁膨出,运动消失或呈反常运动,LVA面积(33.4±2.4)%.形成LVA后,D2、IVS、LVEDV和LVESV显著增加,LVEF显著降低,D1和LVPW有增加趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).结扎冠脉后LVESP显著性降低,1个月后有回升,但仍显著低于正常.LVEDP进行性升高.病理检查室壁瘤累及左室心尖部和前侧壁,室间隔未受累.左心室腔内铸型见室壁瘤形成后心尖部和前侧壁明显膨出.结论 同时结扎冠脉前降支和回旋支中段,可形成面积较恒定的解剖性LVA,累及左室心尖部和前侧壁,不累及室间隔.腔内铸型法可用于研究左心室腔内立体构型.
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胃外科实验研究的发展方向
从分子与基因水平探讨胃肿瘤的发生机制、调控规律以及诊断和治疗,是当前胃外科实验研究的热点.胃肿瘤包括胃癌、胃间质瘤以及其他良性和恶性肿瘤.
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Ki-67核心启动子在胃癌SCG-991细胞中的转录活性
目的 观察Ki-67核心启动子在人胃癌细胞中的转录活性.方法 使用缺失分析法分别从5'端和3'端对Ki-67基因启动子逐段缺失,得到不同长度的8个和3个截短DNA片段.分别插入pGL3-Basic载体后转染人胃癌SCG-991细胞,使用双荧光素酶检测系统鉴定转录活性,确定Ki-67基因核心启动子.比较Ki-67核心启动子与另2种肿瘤启动子hTERT和Survivin的转录活性.结果 自5'端缺失得到的-223～+771截短片段在SCG-991细胞内转录活性达到病毒SV40启动子活性的56.5%;自3'端缺失的-223～+30截短片段转录活性更强,为-223～+771片段活性的2.1倍,是hTERT启动子的1.7及Survivin启动子和15.3倍.结论 Ki-67核心启动子区域为-223～+30,在胃癌SCG-991细胞中的转录活性超过SV40启动子,以及hTERT启动子及Survivin启动子.
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上皮钙黏素及埃兹蛋白在胃癌和淋巴结转移灶中的表达及其意义
目的 检测胃腺癌组织和淋巴结转移灶中细胞骨架相关蛋白上皮钙黏素(E-cad)及埃兹蛋白(Ezrin)的表达,观察其与胃腺癌侵袭和转移的关系,探讨胃腺癌的浸润和转移机制.方法 用SP免疫组织化学法检测80例胃癌和40例淋巴结转移灶中E-cad和Ezrin的表达.结果 E-cad和Ezrin在癌旁正常胃黏膜上皮为胞膜表达,而在胃腺癌组织中E-cad出现胞膜、胞质两种表达形式,Ezrin在肿瘤细胞中则为胞质表达.在胃腺癌原发灶中,E-cad、Ezrin的表达与胃腺癌的分化程度相关.E-cad的膜表达及Ezrin的表达随分化程度降低而下降(P＜0.01;P＜0.05),E-cad的浆表达随分化程度降低而升高(P＜0.01).E-cad浆表达的升高与浸润深度、淋巴结状态相关且在原发灶显著高于转移灶(P＜0.01;P＜0.05;P＜0.01).在淋巴结转移灶中,E-cad的膜表达在淋巴结转移的早期阶段高于晚期阶段(P＜0.05).另外,E-cad膜表达及Ezrin的表达呈正相关(P＜0.01).结论 胃腺癌中E-cad的表达异常导致了细胞之间的黏附力下降,从而在胃腺癌的侵袭和转移中发挥重要作用.埃兹蛋白参与调节胃腺癌细胞的分化,可能通过与E-cadherin/catenin作用来调控肿瘤细胞的黏附和侵袭.
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胃癌染色体1q43区域等位基因杂合缺失精细定位研究
目的 对胃癌1号染色体1q43区域的微卫星位点进行杂合缺失(LOH)研究,为筛选此区域内可能存在的胃癌相关抑癌基因提供依据.方法 4对荧光标记的微卫星引物(D1S1594、D1S2785、D1S304、D1S321)覆盖1q43区域与96例胃癌患者的肿瘤组织及正常组织进行多重聚合酶链反应(PCR).产物经毛细管电泳后进行LOH分析.结果 该区域所测位点平均杂合缺失率17.9%,其中D1S1594位点高,杂合缺失率为26.5%;D1S2785位点杂合缺失率低为7.7%.1q43区域各位点的杂合缺失率与性别、年龄、肿瘤大小及TNM分期无明显相关.结论 在1q43区域内发现一个高频LOH区域,即D1S1594及D1S2785位点之间约1 cm区域,提示该区域内存在与胃癌相关的抑癌基因.
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Notchl参与调节胃癌顺铂耐药的机制
目的 探讨Notchl参与胃癌SGC7901/DDP细胞株顺铂耐药的机制.方法 应用Notchl通路抑制剂MW167抑制Notchl在敏感株SGC7901和耐药株SGC7901/DDP中的表达,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测药物敏感性,流式细胞术分析细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)和Western blot检测敏感株SGC7901和耐药株SGC7901/DDP中Notch1和NF-kappa B(NF-κB),耐药蛋白P-糖蛋白(P-gP)的表达变化.结果 MW167抑制Notch1表达后敏感株SGC7901和耐药株SGC7901/DDP的药物敏感性显著增加,细胞凋亡率分别为23.71%和12.48%(P＜0.01),NF-κB和耐药蛋白P-gP在基因和蛋白表达水平均明显减低(P＜0.01).结论 Notch1可通过调节P-gP表达及抗凋亡信号通路参与胃癌顺铂耐药,可成为逆转胃癌耐药的新的靶点.
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胃癌细胞甲硫氨酸依赖性的蛋白质组学研究
目的 应用蛋白质组学的技术筛选并鉴定与胃癌SGC-7901细胞甲硫氨酸依赖性相关的蛋白质.方法 将胃癌细胞株SGC-7901在同型半胱氨酸替代甲硫氨酸的培养液(M-H+)和正常培养液(M+H-)连续培养5 d后抽提细胞总蛋白,应用双向电泳与质谱技术筛选并鉴定差异表达的蛋白质,并用Western blot方法 进一步验证差异表达的蛋白质.结果 筛选并鉴定出10个差异表达的蛋白.这些蛋白质的功能主要涉及信号传导、抗氧化和药物代谢、细胞内蛋白运输等.结论 限制甲硫氨酸环境可能通过激活p38激酶信号传导通路、破坏胃癌细胞抗氧化防御机制及药物解毒功能来抑制肿瘤细胞生长.
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过表达核转录因子Kr(u)ppel样因子4下调胃癌AGS细胞血管内皮生长因子的表达
目的 观察过表达核转录因子Kr(u)ppel样因子4(KLF4)是否下调胃癌AGS细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达.方法 体外培养人胃癌AGS细胞,分为4组:转染空质粒24 h对照组、转染空质粒48 h对照组、转染KLF4表达质粒24 h组、转染KLF4表达质粒48 h组.构建KLF4表达质粒,脂质体LipofectamineTM2000分别转染空质粒、KLF4表达质粒到AGS细胞,24、48 h后提取总RNA和蛋白,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、Western blot法分别检测KLF4和VEGF mRNA和蛋白水平的表达.结果 AGS细胞在24 h转染率为65%-75%,48 h转染率为40%～45%.实验组与对照组转染24、48 h后,KLF4 mRNA的表达量分别为:563.584±250.744比4.997±5.729(P＜0.05);351.852±212.439比2.4420±1.3770(P＜0.05).VEGF mRNA表达量分别为:0.008 929±0.003 810比0.002 294±0.000720(P＜0.05);0.018 375±0.008 263比0.002 193±0.001 698(P＜0.05);胃癌AGS细胞KLF4蛋白表达量显著性增加,相对应地VEGF蛋白表达水平显著性降低(P＜0.05).结论 体外胃癌AGS细胞过表达KLF4导致VEGF mRNA和蛋白表达下调,KLF4可能参与抑制调节胃癌AGS细胞VEGF的表达.
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小分子干扰RNA对胃癌MGC803细胞E2F-1表达及其生物学行为的影响
目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对胃癌MGC803细胞E2F-1基因表达及其生物学行为的影响.方法 将实验组(E2F-1-siRNA)和阴性对照组(negative control-siRNA)转染进MGC803细胞,48 h后采用实时定量聚合酶链反应(PCR)及Western blot技术分别检测E2F-1 mRNA及蛋白的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测MGC803细胞增殖的变化,流式细胞仪检测MGC803细胞周期变化.结果 E2F-1-siRNA有效抑制胃癌细胞E2F-1 mRNA和蛋白的表达并且影响MGC803细胞的增殖,与阴性对照组及未转染组细胞比较mRNA降低了84.8%和85.3%(F=14.35,P＜0.05),蛋白降低T77.2%和79.6%,MGC803细胞增殖分别抑制了69.0%和81.6%,差异有统计学意义(F=170.18,P＜0.05);同时E2F-1-siRNA促使更多MGC803细胞DNA含量聚集于G2/M期附近,G2/M期DNA含量比例为(54.98±3.46)%,与阴性对照组(44.70±3.82)%和未转染组(31.47±2.12)%比较,差异有统计学意义(F=88.90,P＜0.05).结论 E2F-1-siRNA可以有效抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1 mRNA及蛋白的表达,使G1 期细胞的DNA含量下调,细胞分裂停滞在G2/M期附近,抑制胃癌细胞的增殖.
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胃癌侧群细胞分选及生物学特性的体外鉴定
目的 检测和分选胃癌细胞系中的侧群细胞(SP),并通过体外实验鉴定其生物学特性.方法 选择3株不同分化程度的人胃癌细胞系MKN-28、SGC-7901、BGC-823,以Hoechst33342/碘化丙锭(PI)荧光染料双染,维拉帕米拮抗对照,应用流式细胞仪荧光激活分选法检测sP细胞比例;通过细胞生长曲线(CCK-8法)、平板克隆形成试验对SP细胞体外增殖及不对称分裂能力等生物学特性进行鉴定.结果 3株胃癌细胞中均存在含量极少的SP细胞,比例在0.8%～2.7%之间.细胞生长曲线显示,人胃癌细胞系MKN-28来源的SP细胞体外增殖能力明显强于non-SP细胞及未经分选的MKN-28细胞(P＜0.05).MKN-28来源的SP细胞平板克隆形成能力(89.33±6.11)%明显强于non-SP细胞(13.33±1.16)%及未经分选的MKN-28细胞(42.67±6.43)%,P＜0.05.MKN-28分选获得的SP细胞亚群经体外培养2周后可分裂产生SP细胞和non-SP细胞,SP细胞比例由起始的100.0%下降至1.4%.结论 胃癌细胞系中存在比例相对稳定的SP细胞.胃癌SP细胞体外增殖和克隆形成能力均明显强于非侧群细胞,且具有不对称分裂能力,可作为胃癌干细胞研究的切入点.
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胃癌顺铂耐药细胞株的建立和基因表达谱分析
目的 建立人胃癌顺铂耐药细胞株,探讨其基因表达谱与顺铂耐药的相关性.方法 采用浓度梯度递增法诱导胃癌SGC7901细胞株,建立对顺铂耐药的SGC7901/DDP细胞株.应用Affymetrix基因芯片HG-U133 Plus 2.0筛选SGC7901和SGC7901/DDP的耐药相关的差异基因.结果 建立可耐受1.0 mg/L顺铂浓度的耐药株SGC7901/DDP,耐药指数22.85.应用电镜观察其形态学变化,细胞计数法绘制生长曲线,噻唑蓝(MTT)检测检测药物敏感性,流式细胞术分析细胞周期.利用基因芯片筛选得到在耐药细胞株和敏感株中表达差异大于10倍的基因共107条,其中JNK1和JNK2为与耐药相关的明显上调基因.Western blot证实JNK的磷酸化活性形式P-JNK在耐药株中表达明显升高.SP600125抑制P-JNK表达后耐药蛋白P-gp表达明显减低.结论 高通量的基因芯片筛选得到大量有意义的与顺铂耐药相关的差异基因,P-JNK可成为逆转耐药的新的靶点.
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肿瘤干细胞研究在实验外科中的现状及前景
尽管很早就提出了有关肿瘤干细胞的概念,但相对于干细胞的研究,肿瘤干细胞的研究却相对比较滞后.近年来肿瘤研究进展迅速,推动了肿瘤临床诊断和防治水平的提高,并带动了相关学科的发展和医学技术的进步.
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表观遗传学在恶性肿瘤领域的研究现状与展望
表观遗传学(epigenetics)是遗传学的一门前沿分支学科,虽然早在1942年Waddington就已提出表观遗传学这一概念,但是直到20世纪80年代末它才真正得到广泛重视.
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| 2019 | 01 02 |
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| 1998 | 01 02 |
