中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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红花对肝星状细胞c-fos和c-jun基因表达的调节
目的 观察红花对肝星状细胞c-fos和c-jun基因表达的影响.方法 在培养的肝星状细胞株中分别加入不同浓度的红花(终质量浓度分别为1.0、0.5 g/L)；于8、24、48、72h4个时间点分别收集细胞,提取肝星状细胞总RNA;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定c-fos和c-jun的基因表达水平.结果 红花两组HSC-T细胞c-fos基因表达水平在8 h(0.49 ±0.13、0.34±0.11)、24 h(0.42±0.10、0.26 ±0.08)、48 h(0.31 ±0.07、0.20±0.04)、72 h(0.23 ±0.05、0.12±0.04)4个时间点均明显低于对照组(0.63±0.13、0.50±0.12、0.43±0.06、0.32±0.04)；c-jun基因表达水平在8 h(0.70±0.14、0.46±0.11)、24 h(0.57 ±0.10、0.43±0.07)、48 h(0.42 ±0.09、0.26±0.06)、72 h(0.31 ±0.05、0.12±0.04)4个时间点也均明显低于对照组(0.93±0.13、0.80 ±0.12、0.63 ±0.10、0.46±0.07);随剂量加大,HSC-T细胞c-los、c-jun基因表达水平逐渐降低；两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 红花对肝星状细胞c-fos和c-jun基因表达有明显下调作用.
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红花对肝星状细胞间质胶原酶及Ⅰ型胶原基因表达的影响
目的 观察红花对HSC-T6细胞间质胶原酶及Ⅰ型胶原基因表达的影响.方法 以不同浓度的红花(1.0、0.5 g/L)作用于培养的肝星状细胞株HSC-T6细胞48 h,收集细胞,提取总RNA；用逆转录定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定间质胶原酶(MMP13)及Ⅰ型胶原的基因表达水平.结果 MMP13基因表达水平在红花(1.0、0.5 g/L)两组分别为0.63±0.10、0.40±0.07,而空白对照组为0.26±0.04.Ⅰ型胶原基因表达水平在红花(1.0、0.5 g/L)两组分别为1.30±0.20、1.97±0.36,而空白对照组为3.12±0.46.结论 红花可明显促进HSC-T6细胞间质胶原酶的基因表达,并明显抑制Ⅰ型胶原的基因表达；且这些作用与剂量有关.
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体外诱导骨髓间充质干细胞成骨表型的变化
目的 探讨诱导人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)分化为成骨细胞过程中表型变化.方法 抽取骨髓分离单个核细胞,用DMEM条件培养基诱导hBMSCs向成骨细胞分化；相差显微镜观察成骨细胞形态,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,分别应用对硝基苯磷酸盐法和BM-Purple法测定成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)分泌量和含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞ALP mRNA的表达.结果 在诱导第5、10、15、20d,改良Gomori染色细胞阳性率分别为(10.35±3.79)％、(11.48±5.92)％、(35.28±7.05)％和(46.7±6.18)％,诱导至12d,p1、p3、p5、p7、p9成骨细胞ALP活性测定结果分别为:60.90±2.95、61.36±1.95、37.42±4.06、20.67±1.98、7.63±1.08.培养代次小于(等于)p5的细胞可见ALP mRNA表达,而p7、p9细胞未见表达.结论 hBMSCs经定向诱导后可以分化为成骨细胞,随着诱导细胞传代次数的增加成骨表型降低.
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低温复苏对失血性休克大鼠肺组织过氧化物酶体增殖物激活受体-γ、诱导性一氧化氮合酶及肿瘤坏死因子-α基因表达的影响
目的 观察失血性休克大鼠在不同温度复苏后肺组织内过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的变化.方法 36只成年雄性Wistar大鼠随机平均分为3组:对照组(S)、休克常温复苏组(NR) (37 ～38℃)和低温复苏组(HR) (33 ～34℃).S组只进行外科插管操作,不建立失血性休克模型及复苏,NR组和HR组在建立失血性休克模型后分别在预定温度下进行复苏.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测复苏60 min和240 min大鼠肺组织PPAR-γ、iNOS和TNF-α mRNA表达变化.结果 (1)与对照组比较,复苏60 min NR组和HR组PPAR-γ mRNA表达量分别为0.61±0.09和1.71±0.16(P＜0.05).复苏240 min NR组和HR组PPAR-γ mRNA表达量分别为0.54±0.08和2.82±0.19(P＜0.05)；(2)与对照组比较,复苏60 min NR组和HR组iNOS mRNA表达量分别为3.43±0.27和2.21±0.28(P ＜0.05).复苏240 min NR组和HR组iNOS mRNA表达量分别为4.86±0.62和2.93±0.37(P ＜0.05)；(3)与对照组比较,复苏60 min NR组和HR组TNF-α mRNA表达量分别为4.12±0.30和3.36±0.34(P ＜0.05).复苏240 min NR组和HR组TNF-α mRNA表达量分别为 5.87±0.34和4.91±0.53(P ＜0.05).结论 低温复苏能够上调失血性休克大鼠肺组织PPAR-γ基因表达,抑制TNF-α和iNOS基因表达,减轻肺组织损伤.
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放射线治疗骨包虫病的研究
目的 探讨放射线(6WV-X线)治疗骨包虫病的疗效.方法 建立子午沙鼠骨细粒棘球蚴病动物模型72只,随机分成4组,1组作为对照组,另外3组分别给予40 Gy/5次、50 Gy/5次、60 Gy/5次,6WV-X线定位照射治疗,放疗结束3个月时观察子午沙鼠、囊液内头节死亡数、蛋白质及钙离子浓度变化；比较观察囊皮角质层、生发层病理组织学变化以及照射区域骨坏死；电镜下观察包虫囊角质层、生发层超微结构变化.结果 各组均有死亡病例,但沙鼠一般行为正常.各组头节死亡数(分别为:对照组:22.6个,40 Gy/5次组:96.6个,50 Gy/5次组:131.5个,60 Gy/5次组:155.5个)差异有统计学意义(p＜0.01).囊液内蛋白质(钙离子)浓度随照射剂量升高而降低(升高),蛋白质(钙离子)浓度变化分别为对照组:1.0241(2.8875),40 Gy/5次组:0.7245 (3.0541),50 Gy/5次组:0.6171(3.5446),60 Gy/5次组:0.5058(3.8241),各照射组与对照组及各照射组之间比较差异有统计学意义(P＜0.01).病理组织学显示各治疗组棘球蚴囊呈不同程度变性和坏死,与对照组比较差异有统计学意义(p＜0.01),40 Gy与50 Gy组,40 Gy与60 Gy组比较,病理改变差异有统计学意义(p＜0.01),但50 Gy与60 Gy组间比较病理改变差异无统计学意义(p＞0.05)；各照射组骨细胞均有不同程度变性、坏死现象.电镜下观察随照射剂量的升高,囊皮角质层及生发层结构遭到不同程度破坏.结论 放射线治疗对骨包虫病的治疗有效,但需根据实际情况选择合适的照射剂量,预防不可逆性骨坏死的发生.
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逆转录病毒载体介导的白细胞介素-1受体拮抗剂和转化生长因子-β1联合基因体外转染兔膝关节软骨细胞表达的研究
目的 运用重组逆转录病毒载体介导白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和转化生长因子-β1 (TGF-β1),分别和共同体外转染兔膝关节软骨细胞,观察其在关节软骨细胞中的表达及其对软骨细胞生物学性状的影响.方法 构建含有目的基因的表达载体PLNCX2-IL-1Ra-GFP和PLNCX2-TGF-β1-RFP,分别和联合体外转染到兔膝关节软骨细胞,采用NO检测试剂盒检测基因转染对软骨细胞的影响,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中hIL-1Ra和hTGF-β1的表达.结果 成功构建真核表达载体PLNCX2-IL-1Ra-GFP和PLNCX2-TGF-β1-RFP并稳定转染软骨细胞；培养液NO含量检测基因转染组[hIL-1Ra:(92.15±5.36)μmol/L; hTGF-β1:(89.71±5.43) μmol/L;hIL-1Ra+ hTGF-β1:(94.93±4.88) μmol/L]均比空载体组(60.19±4.68)μmol/L和空白组(57.23±4.29) μmol/L高,差异有统计学意义(P＜0.05),基因转染组间差异无统计学意义(P＞0.05),非基因转染组间差异无统计学意义(P＞0.05)；ELISA检测发现基因转染组均有一定量hlL-lRa和hTGF-β1表达,空白组与空载体组均无基因表达,基因转染组与非基因转染组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),单基因转染组和联合基因转染组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 逆转录病毒载体PLNCX2介导的IL-1Ra和TGF-β1能有效的转染到兔膝关节软骨细胞并获得一定程度表达,转染后的软骨细胞增生活跃.
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N-(3,4-二甲氧基肉桂酰)邻氨基苯甲酸在肝移植术后抑制急性排斥反应的作用
目的 观察N-(3,4-二甲氧基肉桂酰)邻氨基苯甲酸(3,4-DAA)对大鼠肝移植急性排斥反应的预防作用.方法 以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,建立大鼠肝移植模型,随机分为4组.A组:对照组(n=22),B组:3,4-DAA 400 mg/(kg·d)组(n=22),C组:环孢素A(CsA)5 mg/(kg·d)组(n=22).D组:3,4-DAA 400 mg/(kg·d) +CsA 5 mg/(kg·d)组(n=22).各组于手术当天起连续口服给药,分别于术后第3、5、7天处死受体,收集血液行肝功能检测并观察肝组织病理学变化.各组另随机选4只受体观察生存时间.结果 (1)4组受体平均生存时间分别为(11.3±1.7)、(16.0±0.8)、(21.5±1.7)、(26.5±1.3)d,B组与A组比较生存时间延长,差异有统计学意义(P＜0.01)；D组受体存活时间长,与A、B、C3组比较,差异均有统计学意义(P＜0.0l).(2)B组大鼠术后各时间外周血谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总红胆素(T-BIL)值均低于A组(P＜0.05).D组各时间点ALl、AST、T-BIL值低于A、B、C组(P＜0.05).(3)术后第7天肝脏排斥活动指数B组明显低于A组(P＜0.05),D组得分低,与A、B、C组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 3,4-DAA能抑制大鼠肝移植术后急性排斥反应,与CsA合用具有协同作用.
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表没食子儿茶素没食子酸酯增强氟尿嘧啶抑制Hep3B细胞生长的研究
目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是否具有增强氟尿嘧啶(5-Fu)抑制肝癌Hep3B细胞生长作用,并探讨其机制.方法 应用噻唑蓝(MTT)比色法观察肝癌细胞的生存率,应用q值判断药物间的相互作用；Western blot法测定磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(p-ACC)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达.结果 与对照组[0.1％二甲基亚砜(DMSO)]比较,工作浓度为5、10、25、50 μmoL/L的EGCG显著抑制Hep3B细胞的生长(P＜0.05).当与30 μmol/L 5-Fu联合用药时,相应的q值分别为1.09、1.27、1.30和1.16,即浓度为5 μmol/L EGCG与5-Fu联合用药表现出两药相加效应,而浓度为10、25、50 μmol/L EGCG与5-Fu联合用药表现出协同效应.EGCG上调Hep3B细胞中p-ACC(Ser79)蛋白表达,下调p-Akt(Thr308)蛋白表达,进一步揭示EGCG与5-Fu联合激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路,抑制磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路.这一系列分子活动参与5-Fu协同抗肝癌细胞生长作用.结论 EGCG具有协同增强5-Fu抑制Hep3B细胞生长作用.
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苦参碱对肝癌干细胞增殖及侵袭转移能力的抑制作用
目的 观察苦参碱对肝癌干细胞增殖及侵袭转移能力的影响,探讨苦参碱对肝癌干细胞的作用机制.方法 应用无血清肿瘤干细胞培养基,悬浮培养人肝癌细胞株SMMC-7721形成克隆,收集后裸鼠皮下接种并予以顺铂筛选,取耐药细胞继续悬浮培养获得干细胞克隆.采用不同浓度苦参碱体外作用72 h后,噻唑蓝(MTT)比色法观察肝癌干细胞的增殖能力变化,荧光定量聚合酶链反应(PCR)、Westem blot法检测侵袭转移相关基因细胞黏附调节基因(CAR)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、层粘连蛋白(Laminin)、纤连蛋白(Fibronectin)表达水平的变化.结果 在肿瘤干细胞培养基和顺铂的双重筛选下,SMMC-7721细胞能形成悬浮生长的干细胞克隆.5、50、100、200 mg/L苦参碱体外作用72 h后,可明显抑制肝癌干细胞的增殖,抑制率分别为(3.0±0.3)％、(26.9±0.5)％、(55.1±0.6)％、(77.4±0.8)％.荧光定量PCR结果显示,50 mg/L苦参碱可诱导肿瘤干细胞CAR、E-cadherin,Laminin、Fibronectin基因表达上调至未处理组的15.2、8.5、4.9和6.3倍,差异有统计学意义,与Western blot的结果一致.结论 一定浓度的苦参碱可明显抑制肝癌干细胞的体外增殖,并抑制其侵袭转移能力.
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颈椎单开门OsteoMed M3钉板内固定椎管扩大成形术的生物力学研究
目的 观察在单开门术中应用OsteoMed M3钉板内固定重建颈椎稳定性的效果.方法 6具新鲜颈椎标本,对每一标本先后行完整颈椎组、后路单开门OsteoMed M3钉板内固定组、后路椎板切除组、后路椎板切除加侧块钉棒内固定组的三维运动范围测试.结果 行后路钢板内固定组,在前屈(22.65±2.39)、后伸(15.63±1.56)、左侧弯(19.83±3.16)、右侧弯(16.90±2.13)及右旋(19.45±3.00)状态下运动范围与椎板切除组及侧块钉棒组之间的差异有统计学意义(P＜0.05),与正常组的运动范围接近,差异无统计学意义(P＞0.05)；在左旋(20.67±2.89)状态下运动范围与其他各组之间的差异有统计学意义(P＜0.05).椎板切除及侧块钉棒组与其他各组之间的差异有统计学意义(JP＜0.05).结论 在单开门术中应用OsteoMed M3钉板内固定具有良好的生物力学性能,可重建颈椎稳定性.
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Ⅱ型大麻素受体选择性抑制剂对钛颗粒诱导破骨细胞活化的作用
目的 观察Ⅱ型大麻素受体(CB2)选择性抑制剂AM630对钛颗粒(Ti)诱导炎性破骨细胞(OC)活化的影响.方法 实验分5组,即空白组、核因子-κB (NF-κB)受体活化因子配体(RANKL)组、Ti组、R+Ti组、药物组.采用噻唑蓝(MTT)法检测0.1 g/LTi颗粒和不同浓度AM630(50、100、200 nmol/L)处理小鼠单核/巨噬细胞株RAW264.7后24、48、72 h细胞增殖活性；以0.1 g/L Ti颗粒和(或)50 μg/L RANKL诱导RAW264.7,6d时加入AM630再培养24h,以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测成熟OC,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CB2、NF-κB受体活化因子(RANK)、肌酸磷酸激酶(CPK)基因mRNA含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎性因子白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α表达水平.结果 MTT结果表明0.1 g/L Ti颗粒和(或)AM630(50、100、200 nmol/L)对RAW264.7细胞增殖能力无影响.TRAP染色,RANKL组、R+Ti颗粒组均可见大量的紫红色多核细胞；Ti组、药物组阳性细胞较少,统计分析结果表明AM630≥100 nmol/L时,TRAP阳性细胞数量与RANKL组[(181.80±14.23)/孔]比较差异有统计学意义(p＜0.05).定量RT-PCR结果显示R+Ti组CB2、RANK以及CPK mRNA含量分别为11.26±1.39、9.68±0.91和9.93±0.56；药物组(100 nmol/L AM630)上述基因mRNA含量为4.73±0.55、3.85±0.45和5.42±0.87,差异有统计学意义(P＜0.05).ELISA结果显示,Ti颗粒加入24h后IL-1β、TNF-α的含量分别为(176.9±9.2)、(159.7±8.2) ng/L;与药物组[IL-1β:(105.5±7.0) ng/L,TNF-α:(75.9±8.1) ng/L]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Ⅱ型大麻素受体选择性抑制剂AM630能够抑制Ti颗粒引起的炎性破骨细胞活化.
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碱性成纤维生长因子、表皮生长因子和血小板衍生因子对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响
目的 观察碱性成纤维生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)和血小板衍生因子(PDGF-BB)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖和成骨分化的影响.方法 采用贴壁培养纯化小鼠BMSCs,培养液(DMEM/F12,10％胎牛血清,青、链霉素)中添加(实验组)或者不添加(对照组)细胞因子bFGF、EGF和PDGF-BB(浓度均为10μg/L)进行培养,取传至第3代的细胞进行成骨分化,成骨诱导液:1×10-8 mol/L地塞米松、50 μmol/L抗坏血酸、10 mmol/L β-甘油磷酸钠.流式细胞仪检测细胞表面标记抗原CD45和CD90的表达；SYBgreen荧光定量聚合酶链反应(PCR)扩增检测成骨细胞特异性基因骨钙素和Ⅰ型胶原的表达；碱性磷酸酶染色和茜素红染色检测成骨细胞的分化.结果 初始接种后,对照组的小鼠BMSCs贴壁较快,而传代后实验组的小鼠BMSCs增殖较快.对照组和实验组的小鼠BMSCs经传代纯化后CD45、CD90的阳性表达率分别为(27.34±0.69)％、(41.93 ±0.34)％和(0.48±0.12)％、(82.78 ±0.25)％,实验组的小鼠BMSCs在传代过程中较少观察到细胞的老化现象,细胞的纯化程度较高,而且其向成骨分化的效率明显高于对照组细胞.结论 联合使用细胞因子bFGF、EGF和PDGF-BB可促进小鼠间BMSCs的体外增殖和干性的维持,并且有利于其向成骨细胞的分化.
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微电场网对肺癌细胞PC9和A549细胞膜通透性的影响
目的 观察不同参数下微电场网对人非小细胞肺癌细胞株PC9和A549的影响.方法 利用微电场网发生仪对细胞株PC9和A549在10、25、40 V/cm电场强度下,作用1h和2h,观察PC9和A549细胞的增殖、凋亡和细胞膜通透性改变.结果 电场强度40 V/cm、作用时间1h,PC9的增殖抑制率和凋亡率分别为62.1％和27.5％,A549的增殖抑制率和凋亡率分别为55.0％和26.4％ (P＜0.05).电场强度25 V/cm、作用时间1h,PC9的增殖抑制率和凋亡率分别为31.9％和14.1％,A549的增殖抑制率和凋亡率分别为30.5％和13.8％ (P＜0.05).电场强度10 V/em,作用1h和2h,微电场网对PC9、A549细胞株均无明显抑制作用.此时,微电场网组细胞的荧光染色阳性率明显高于对照组,PC9细胞荧光染色阳性率为(15.4±2.9)％,A549细胞荧光染色阳性率为(18.1±2.1)％.结论 当电场强度为10 V/cm时,作用时间2h以内,微电场网增加PC9和A549细胞膜通透性是安全有效的.
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塞来昔布对人甲状腺髓样癌裸鼠种植瘤生长的抑制作用
目的 观察塞来昔布对人甲状腺髓样癌裸鼠皮下种植瘤生长的抑制作用,并探讨其作用机制.方法 按照人甲状腺髓样癌TT细胞2×106个/只接种在40只BALB/c裸鼠皮下制作成肿瘤动物模型,随机分成A、B、C、D4组,分别给予生理盐水、塞来昔布、阿霉素、塞来昔布联合阿霉素,其中塞来昔布每只300 mg/(kg·d),阿霉素每只2 mg/(kg·),待接种部位出现直径约0.5 cm瘤结节后连续给予相应药物治疗1周,分别测量裸鼠体质量、肿瘤质量,3周后处死裸鼠取瘤体计算抑瘤率,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织及肝、肺组织中环氧合酶-2(COX-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 A、B、C、D组的抑瘤率分别为0％、45.37％、49.71％、69.68％,B、C、D组与A组比较(P＜0.05),其余各组间抑瘤率比较差异无统计学意义(P＞0.05).COX-2、MMP-9、VEGF在A组中的表达明显高于B、C、D组,差异有统计学意义(P＜0.05),三者在B、C、D组中的表达差异均无统计学意义(P＞0.05).在各实验组肝组织中均出现肿瘤细胞的侵袭,COX-2、MMP-9、VEGF均呈现阳性.结论 塞来昔布能抑制甲状腺髓样癌皮下种植瘤的生长,联合阿霉素能增强抑瘤效果.
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牛磺酸在重型颅脑创伤裸鼠体内的分布
目的 应用小动物活体成像技术观察牛磺酸(Tau)在重型颅脑创伤裸鼠体内的分布及代谢.方法 将32只雄性BALB/C裸鼠随机分为正常(normal)组、假手术(sham)组、牛磺酸治疗(TBI-Tau)组和脑创伤染料组(TBI-Cy7).后两组用液压打击仪制作左侧重型脑创伤模型,sham组在相同位置只开骨窗,不予打击.TBI-Tau、sham组伤后立即尾静脉注射Cy7-Tau,TBI-Cy7组注射游离Cy7,normal组不做处理,直接注射Cy7-Tau,剂量均为5 mg/kg.给药后1、2、4、8、12、24h行活体成像.结果 各组给药后体内荧光强度灰度值12 h内呈线性下降,Tau主要通过肾脏代谢；sham组手术切口皮缘24 h仍有较高浓度Tau富集(0.0340±0.0058)；TBI-Tau组1、2、4、8h体内荧光灰度值均强于sham组(P＜0.05),24h离体脑组织成像显示TBI-Tau组脑创伤处有高浓度Tau富集(0.640±0.096,与sham组比较,P＜0.01).结论 活体成像技术可实时监测Tau在颅脑创伤裸鼠体内的分布、代谢,Tau主要通过肾脏代谢,在脑创伤区域、皮肤切口处有特异性富集并长时间存在.
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人脐带间充质干细胞联合布洛芬修复大鼠脊髓损伤
目的 观察人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)联合布洛芬移植治疗大鼠脊髓损伤的效果,探讨布洛芬对hUCMSCs存活和分化的影响.方法 用Impactor ModelⅡ打击器制作80例大鼠脊髓胸10(T10)损伤模型,随机分为DMEM实验对照组(A组)、布洛芬注射组(B组)、单纯移植hUCMSCs组(C组)、联合治疗组(D组),对损伤后2个月内的实验大鼠进行行为学评分(BBB评分),评估后肢运动功能恢复,结合人细胞核抗体(MAB1281)和神经丝蛋白(NF-200)免疫组织化学染色分析细胞存活和分化.结果 行为学评分D组(14.90±2.45)分,明显高于B组(10.56±2.32)分、C组(11.90±1.89)分,差异有统计学意义(P＜0.05).术后8周观察到D组的hUCMSCs存活数量多于其他治疗组；NF-200染色面积D组(0.28±0.13)高于B组(0.11±0.04)、C组(0.18 ±0.06),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 布洛芬可以促进hUCMSCs在损伤部位存活并使其易于向神经样细胞分化,两者联合移植可以明显促进损伤后轴突再生和脊髓功能恢复.
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pIRES2-EGFP-hBMP-2真核表达载体的构建及鉴定
目的 构建带有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)真核表达载体.方法 通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从人外周血淋巴细胞中扩增出骨形态发生蛋白-2 (BMP-2)基因,构建BMP-2基因和报告基因EGFP真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2,经PCR、酶切、测序等方法进行鉴定,紫外分光光度计测定质粒浓度及纯度.结果 真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2酶切后显示空载体和hBMP-2基因片段长度分别为5.3 kb和366 bp,PCR扩增hBMP-2基因片段长度366 bp,紫外分光光度计测定空载体和含hBMP-2基因的质粒浓度分别为382 mg/L和383 mg/L,测序证实pIRES2-EGFP-hBMP-2载体序列正确.结论 成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2,可为后续骨修复的基因治疗研究奠定基础.
关键词： 骨形态发生蛋白-2基因 真核表达载体 -
携带人黑色素瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24基因的溶瘤腺病毒SG600-IL24和干扰素联合治疗裸鼠肝癌
目的 利用携带人黑色素瘤分化相关基因(MDA)-7/白细胞介素(IL)-24基因的溶瘤腺病毒SG600-IL24与干扰素(IFN)联合治疗肝癌裸鼠移植瘤.方法 构建携带人MDA-7/IL-24基因的溶瘤腺病毒SG600-IL24,单独使用该病毒或IFN以及两者联合治疗裸鼠肝癌模型,观察其抗肿瘤效应.结果 成功构建携带人MDA-7/IL-24基因的溶瘤腺病毒SG600-IL24载体,SG600-IL24+IFN联合治疗组裸鼠平均生存时间为(111.20±2.60)d,与其他3组[对照组为(35.20±1.53)d,IFN组为(67.60±2.10)d,SG600-IL24组为(59.20±1.16)d]比较生存期明显延长(P＜0.01),且有3例生存时间超过120 d,达到长期生存；SG600-IL24+ IFN组裸鼠肝癌体积也明显小于SG600-IL24组或IFN组(P＜0.01).结论 溶瘤腺病毒SG600-IL24联合IFN对裸鼠人肝癌移植瘤模型有协同抗肿瘤作用.
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经典瞬时受体电位通道蛋白1在致石豚鼠胆囊平滑肌中的表达
目的 观察豚鼠胆囊结石形成过程中胆囊平滑肌经典瞬时受体电位通道蛋白1(TRPC1)的表达变化及其对胆囊平滑肌收缩功能的影响.方法 20只雄性豚鼠随机均分为对照组和实验组,对照组给予普通饲料喂养,实验组给予致石饲料喂养.喂养60d后剖杀,观察豚鼠胆囊结石形成,检测胆囊体积(FV)、空腹胆囊胆汁量(FB)和胆汁胆固醇含量(TC),并用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测胆囊平滑肌组织TRPC1 mRNA的表达量.结果 实验组有7只豚鼠观察到有胆泥或胆囊结石形成,对照组胆囊未见胆泥或结石形成；实验组FV[(1.78 ±0.22) cm3]、FB[(1.39±0.16) ml]、TC[(0.05±0.01) mmol/L]水平均高于对照组(P＜0.05)；实验组TRPC1mRNA(0.7057 0.0627)在胆囊平滑肌的表达量较对照组显著下降(P＜0.05).结论 高胆固醇饮食致石过程中胆囊平滑肌中TRPC1的表达降低,从而可能导致胆囊平滑肌收缩功能减弱,胆囊排空能力下降,使胆囊结石易于形成.
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粒细胞集落刺激因子对兔心肌梗死后炎性因子的影响
目的 观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对外周血细胞及炎性因子的影响.方法 38只清洁级大白兔随机分两组制备心肌梗死模型,梗后第2天,G-CSF组给予G-CSF 10μg/(kg·d),对照组生理盐水0.5 ml/(kg·d),皮下注射共5d,血液自动分析仪检测外周血细胞,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测超敏C反应蛋白(HsCRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 梗后7、14d白细胞总数(WBC),中性粒细胞(N)数G-CSF组高于对照组(P＜0.05).HsCRP梗后7d,G-CSF组高于对照组(P＞0.05)；梗后14 d G-CSF组[(2.02±1.57) mg/L]低于对照组[(4.12±0.68) mg/L(P＜0.05].TNF-α在梗后7 d G-CSF组高于对照组(P＞0.05),梗后14 d G-CSF组[(40.9±17.7) ng/L低于对照组(53.2±14.8)ng/L,p＜0.05].结论 G-CSF有助于WBC总数的升高,并对急性期炎性细胞因子的升高有轻度影响,但可促进炎性细胞因子的尽早恢复.
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Cullin1基因在乳腺癌细胞侵袭中的作用及机制
目的 探讨Cullin1(Cul1)基因对乳腺癌细胞迁移及侵袭的影响及机制.方法 Cul1小干扰RNA(siRNA)、对照siRNA分别转染人乳腺癌MDA-MB-231和BT-549细胞,细胞迁移试验观察迁移能力；细胞侵袭试验观察侵袭能力；明胶酶谱实验检测细胞分泌基质金属蛋白酶(MMPs)的能力；Western blot法检测MMPs及组织金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)蛋白的表达.结果 与对照组比较,Cul1 siRNA处理组MDA-MB-231和BT-549两种细胞的迁移能力分别减少了83％和77％；侵袭能力分别减少了84％和79％；MMP-2活力分别减少了88％和76％;MMP-2蛋白表达分别减少了47.87％和15.35％,TIMP-2蛋白表达量分别增加了49.03％和68.84％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Cul1基因干涉后通过上调TIMP-2表达进而抑制MMP-2表达及分泌,终抑制乳腺癌细胞的侵袭能力.
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生长因子包被的静电纺丝膜片对骨髓间充质干细胞生长的影响
目的 观察生长因子包被的聚左旋乳酸己内酯(PLCL)/纤维蛋白原静电纺丝膜片对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的影响.方法 以静电纺丝法制备PLCL/纤维蛋白原膜片,然后通过浸渍方法,将膜片序贯通过纤维连接蛋白(FN)溶液和生长因子[血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)]溶液的作为实验组A膜片,仅将膜片通过生长因子溶液的作为实验组B膜片,以未经任何处理的膜片为对照组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测实验组A、B的生长因子体外溶出结果.采用密度梯度离心获取兔BMSCs,培养后接种于膜片上,采用噻唑蓝(MTT)法检测兔BMSCs在不同膜片中的黏附、增殖.结果 两实验组膜片VEGF、bFGF在体外溶出持续超过10d,随着时间延长,两组膜片内的2种生长因子溶出量逐渐降低,并且B组的降低速率要高于A组.黏附实验结果表明,在12h时,A组膜片上的吸光度值(0.47±0.04)高于B组(0.37±0.06)及对照组(0.35±0.09),差异有统计学意义(P＜0.01)；增殖实验结果表明,各组膜片上细胞在各时间点均有所增长,A组的细胞数均比B组及对照组高,差异有统计学意义(P＜0.01),B组与对照组差异无统计学意义(P＞0.01).结论 采用FN和VEGF、bFGF修饰的PLCL/纤维蛋白原静电纺丝纳米纤维膜片具有良好的生长因子缓释作用和细胞相容性.
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低氧诱导因子-1α沉默对膀胱癌细胞血管内皮生长因子和葡萄糖转运蛋白-1表达的影响
目的 采用RNA干扰技术(RNAi)技术观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对膀胱癌细胞株BIU-87血管内皮生长因子(VEGF)、葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)表达的影响.方法 体外培养人膀胱癌BIU-87细胞,荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测低氧(90％氮气+5％氢气+5％二氧化碳)和常氧下HIF-1α、VEGF、GLUT-1的表达；Western blot检测HIF-1α-siRNA的转染效果及转染前后细胞VEGF、GLUT-1的表达；采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测HIF-1α-siRNA转染后的细胞增殖.结果 低氧8、24 h条件下,BIU-87中HIF-1α蛋白(0.56±0.08、1.33±0.21)、VEGFmRNA (2.12±0.29、3.27±0.46)、VEGF蛋白(0.29±0.04、0.59±0.10)、GLUT-1 mRNA(1.99±0.22、3.95±0.48)、GLUT-1蛋白(0.38±0.05、0.65±0.11)表达均较正常氧条件下HIF-1α蛋白(0.33±0.05)、VEGF mRNA (0.97±0.11)、VEGF蛋白(0.98±0.16)、GLUT-1 mRNA(1.05±0.12)、GLUT-1蛋白(1.46±0.24)表达显著升高(P＜0.05),而HIF-1α mRNA在低氧8、24h (1.05±0.09、0.96±0.11)与正常氧(1.16±0.13)条件下差异无统计学意义(P＞0.05)；HIF-1α-siRNA转染能有效沉默HIF-1α,转染后BIU-87增殖水平(0.63±0.08)与转染前(1.12±0.17)比较明显降低(P＜0.05),转染后VEGF mRNA (0.43±0.05)和蛋白(0.58±0.07)表达比转染前(1.08±0:12、1.19±0.17)降低(P＜0.05),GLUT-1 mRNA和蛋白(0.56±0.06、0.51±0.07)表达比转染前(1.07±0.18、1.16±0.16)降低.结论 低氧条件下,HIF-1α-siRNA能通过沉默HIF-1α,抑制BIU-87细胞VEGF、GLUT-1表达,从而抑制膀胱癌细胞增殖.
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miR-146a在肝癌石蜡组织中的表达及其临床意义
目的 探讨福马林固定石蜡包埋的肝癌组织中miR-146a的表达水平及其临床意义.方法 提取76例肝癌及其对应癌旁组织的总miRNA,使用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-146a的表达,分析其表达水平与各临床病理特征的关系.结果 miR-146a在肝细胞癌(HCC)中的表达(相对表达量0.75±0.07)低于癌旁肝组织(1.28±0.09),差异有统计学意义(t=-5.02,P＜0.01).miR-146a表达在TNM临床Ⅰ、Ⅱ期(1.30±0.13)、无转移复发组(0.95±0.09)、无门脉癌栓组(0.83±0.07)、包膜完整或无浸润组(0.87±0.10)、单个肿瘤结节组(0.89±0.09)表达分别高于在Ⅲ、Ⅳ期(0.55±0.05)、转移复发组(0.46±0.06)、门脉癌栓组(0.48±0.10)、无包膜或包膜浸润组(0.62±0.07)及多个肿瘤结节组(0.57±0.07) (P＜0.05).结论 miR-146a的低表达与肝癌发生与病程进展密切相关,miR-146a可能是肝癌的抑癌微小RNA(miRNAs),检测肝组织中miR-146a的表达水平可协助肝癌诊断及预后判断.
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不同来源间质干细胞对大鼠肝纤维化的治疗作用
目的 观察脐带间质干细胞(UMSCs)和骨髓间质干细胞(BMSCs)对CCl4诱导大鼠肝纤维化的治疗作用.方法 通过50％ CCl4橄榄油皮下注射10周建立大鼠肝纤维化模型,随机平均分为UMSCs组、BMSCs组及空白对照组,UMSCs组经尾静脉输注1ml UMSCs(2×109/L),BMSCs组输注1 ml BMSCs (2×109/L),空白对照组输注1 ml生理盐水,移植处理3周后处死所有大鼠.抽取血液检测移植处理前后各组大鼠肝功能指标[谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)],取肝脏标本苏木素-伊红(HE)染色行病理检查及量化计分.结果 (1)移植处理3周后,与空白对照组大鼠ALT、AST、TBIL指标[(637.60±42.38) U/L、(525.80 ±40.20) U/L、(17.26±0.68)μmol/L]比较,BMSCs组[(168.80±8.35) U/L、(352.00±33.64) U/L、(14.12±0.34),mol/L]和UMSCs组[(163.60±7.30) U/L、(339.00±44.94) U/L、(13.96±0.29) μmol/L]均降低,差异均有统计学意义(P＜0.05),ALB指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与BMSCs组比较,UMSCs组大鼠ALT、AST、TBIL及ALB指标差异均无统计学意义(p＞0.05).(2)与移植处理前各组ALT、AST、TBIL指标[空白对照组:(337.80±13.97)U/L、(436.40±23.27) U/L、(15.20±0.57) μmol/L; BMSCs组:(337.40±14.10) U/L、(439.40±15.27) U/L、(15.52±0.47) μmol/L;UMSCs组:(337.40±16.21) U/L、(437.20±25.15) U/L、(15.54±0.72).μmol/L]比较,处理3周后BMSCs组和UMSCs组相应指标均降低,空白对照组相应指标均升高,差异均有统计学意义(P＜0.05)；移植处理前后各组大鼠ALB指标差异无统计学意义(P＞0.05).(3)与空白对照组比较,BMSCs组和UMSCs组肝脏炎症活动度及纤维化程度均减轻,量化计分(空白对照组:13.20±1.79、15.90±5.28;BMSCs组:4.70±1.57、6.00±1.70; UMSCs组:4.30±1.79、5.90±0.82)差异有统计学意义(P＜ 0.05)；UMSCs组与BMSCs组计分差异无统计学意义(P＞0.05).结论 UMSCs和BMSCs移植均可改善CCl4诱导的肝纤维化大鼠的肝功能,减轻肝脏的炎症活动度及纤维化程度,其中UMSCs的改善效果稍优于BMSCs.
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载A3NEP1-40脊髓组织工程支架材料控释规律的研究
目的 探讨A3NEP1-40以RADA-IKVAV/FRM为载体的缓释规律.方法 DMEM/F12溶液能触发RADA-IKVAV/FRM自组装,包裹A3NEP1-40形成均质水凝胶.将包裹125 μg及25 μgA3NEP1-40的水凝胶各自放入2.5ml及0.5ml磷酸盐缓冲液(PBS)中进行释放,并依此分为A、B、C、D4组.应用高效液相色谱仪检测并计算A3NEP1-40每天释放量及累计释放量,统计学分析释放规律.结果 (1)初的24h呈爆发释放,40％的A3NEPl-40自凝胶内释出；平稳释放阶段内样本中可持续检测到A3NEP1-40释放达40d.(2)A组与B组、C组与D组差异无统计学意义,A组与C、D两组、B组与C、D两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 RADA-IKVAV/FRM可以控制A3NEP1-40释放速度,达到缓释效果,是一种较为理想的神经组织工程材料,同时也可以用作载体构建缓释药物.
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SIGIRR对脂多糖诱导的人气道上皮细胞株炎症反应的抑制作用
目的 观察单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR)对内毒素-脂多糖(LPS)诱导的人气道上皮细胞株H292炎症反应的影响.方法 以人气道上皮细胞株H292为研究对象,实验分为两组:A组(实验组,SIGIRR过表达组)；B组(对照组,空载体转染组).将含有SIGIRR cDNA全长的真核表达载体瞬时转染H292细胞24h后,使SIGIRR在H292细胞中过表达,并设立空载体转染组作为对照组；分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测SIGIRR表达.于基因转染24h后给予LPS刺激H292细胞,分别于加入脂多糖(LPS)后3、6、12、24h各时间点,Western blot法检测转染前后核因子-κB(NF-κB)转录活性的改变,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转染前后炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β及IL-6表达水平的变化.结果 转染SIGIRR表达载体的H292细胞,其SIGIRR表达量显著上升.LPS刺激后,Western blot法检测可见,对照组NF-κB转录活性明显升高；而实验组转染SIGIRR表达载体后NF-κB转录活性下降.ELISA实验结果表明,过表达SIGIRR的H292细胞在接受LPS刺激后其炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白表达水平明显低于对照组.结论 SIGIRR过表达可减轻H292细胞对LPS诱导的炎性反应,抑制H292细胞株产生TNF-α、IL-1β和IL-6等炎性因子.
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慢病毒介导的具有特定二级结构的microRNA-338-3p抑制剂的构建
目的 构建慢病毒介导的具有特定二级结构的人microRNA-338-3p (miR-338-3p)抑制剂并观察其对结直肠癌细胞侵袭转移能力的影响.方法 由miRBase数据库查找获得miR-338-3p成熟序列,设计目的基因片段并人工合成；将miR-338-3p抑制剂序列和pLV-THM载体经双酶切后连接,产生pLV-THM-miR-338-3p抑制剂慢病毒表达载体,双酶切后测序鉴定,筛选阳性克隆；以pLV-THM-miR-338-3p抑制剂、psPAX2和pMD2.G质粒共转染包装细胞293T,包装产生慢病毒并测定滴度.流式细胞仪筛选建立稳定过表达miR-338-3p抑制剂的SW-620亚细胞株,利用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-338-3p表达,Western blot检测其靶基因Smoothened (SMO)蛋白表达水平,Transwell小室穿透试验检测肿瘤细胞转移能力.结果 经双酶切鉴定和测序证实,成功构建了包含miR-338-3p抑制剂的慢病毒表达载体,倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞293T表达绿色荧光.稳定过表达miR-338-3p抑制剂的SW-620亚细胞株中,miR-338-3p表达水平显著低于阴性对照组(0.92±0.43比3.71 ±0.22,P＜0.01),SMO蛋白表达水平明显升高,且肿瘤细胞表现出侵袭转移能力的增强(细胞数78.6±6.9比23.7±4.2,P＜0.01).结论 成功构建了miR-338-3p抑制剂的慢病毒表达载体和稳定低表达miR-338-3p的SW-620亚细胞株,证实miR-338-3p可通过抑制结直肠癌细胞中SMO蛋白表达而抑制肿瘤细胞转移.
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成纤维细胞生长因子2逆转上皮间质转化机制
目的 探讨成纤维细胞生长因子2(FGF2)逆转转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺癌上皮细胞间质转化(EMT)的机制.方法 用细胞划痕和Transwell侵袭试验检测细胞运动和侵袭能力变化,用免疫荧光和Western blot法检测逆转过程中关键分子的表达变化.用特异性通路抑制剂分析FGF2逆转EMT发挥作用的的信号通路.结果 TGF-β1作用72 h后,肺癌上皮细胞发生EMT,细胞运动、侵袭能力增强(200.0±12.5,P＜0.01).联合FGF2继续培养48h之后,细胞各项指标恢复至对照水平,运动、侵袭能力下降(50.0±5.5,P＜0.01).利用特异性通路抑制剂LY294002和PD98059后结果显示,抑制丝裂原激活的蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)通路可以明显阻断FGF2对于TGF-β1诱导EMT的逆转作用,而激活MAPK/ERK通路可以降低TGF-β1对Smad2的磷酸化.结论 FGF2通过MAPK/ERK通路逆转TGF-β1诱导的肺癌上皮细胞EMT.
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肢体远隔缺血后适应对兔急性肠道缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨肢体缺血后适应对兔急性肠道缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 健康雄性新西兰大白兔36只,随机分为3组(每组12只):空白对照组(Con)、肠道缺血再灌注组(IRI)、肢体缺血后适应组(LIP).再灌注结束后测定血清中丙二醛(MDA)含量,测定肠道组织中髓过氧化物酶(MPO)活性并在光镜下观察肠道组织形态学变化.结果 IRI组和LIP组的MDA含量[(8.93±1.25)、(5.32±1.54),mol/L]、MPO活性[(3.68±0.45)、(1.94±0.51) U/100 g]及肠黏膜损伤评分(4.15±0.81、2.96±0.64)均明显高于Con组[(3.96±1.36) μmol/L、(0.56±0.36) U/100 g、0.82±0.70),差异均有统计学意义(P＜0.01).LIP组的MDA含量[(5.32±1.54) μmol/L]、MPO活性[(1.94±0.51) U/100 g]及肠黏膜损伤评分(2.96±0.64)明显轻于IRI组[(8.93±1.25) μmol/L、(3.68±0.45) U/100 g、4.15 ±0.81],差异有统计学意义(P＜0.01).结论 肠道缺血再灌注前肢体短暂缺血再灌注对肠道急性缺血再灌注损伤有显著保护作用.其保护作用可能与减轻活性氧的损伤及加强抗氧化能力有关.
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二氮嗪对深低温低流量小鼠脑的保护作用
目的 观察不同浓度二氮嗪对深低温低流量脑缺血再灌注小鼠模型的脑保护作用,探讨二氮嗪发挥脑保护作用的机制.方法 将240只3周龄的C57/BL-6健康小鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(m)、二氮嗪(2、5、10 mg/kg)组、渥曼青霉素+二氮嗪(2、5、10 mg/kg)组共8组,每组30只.每组再平均分为再灌注2、24、72 h 3个亚组,每个亚组再平分为蛋白质组和脑组织大体标本组,小组以5只为单位.根据要求建立深低温低流量动物模型,于再灌注不同时间点取小鼠脑组织.应用Western blot技术分别检测各组脑组织中总蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)的表达变化.对各组脑组织进行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,观察脑组织损伤程度.结果 再灌注24h二氮嗪组p-AKT、p-GSK-3β与其他组比较表达增高,差异有统计学意义(P＞0.05)；再灌注24 h和72 h 2 mg/kg组与其他二氮嗪组比较表达增高,差异有统计学意义(P＜0.05).TTC染色结果显示再灌注24 h二氮嗪组与其他组比较脑损伤减轻,差异有统计学意义(P＜0.05)；再灌注24 h和72 h 2 mg/kg组与其他二氮嗪组比较脑损伤减轻,差异有统计学(P＜0.05).渥曼青霉素+二氮嗪组与模型组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 二氮嗪对深低温低流量小鼠模型有脑保护作用,其发挥作用的机制可能是通过激活磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/AKT信号通路,进而调节AKT下游蛋白糖原合成激酶-3β(GSK-3β)的磷酸化水平而实现的.
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维甲酸缓释系统抑制兔眼青光眼滤过术后瘢痕形成机制研究
目的 探讨维甲酸缓释系统(RADDS)抑制兔眼青光眼滤过术后瘢痕形成的机制.方法25只新西兰大白兔双眼均行青光眼滤过手术.所有兔左眼均放置RADDS,为RA十PLGA组.随机选择15只右眼仅放置缓释膜,为PLGA组.10眼作为空白对照NV组.术后第7、14、30、60、90天分批处死兔摘除眼球,免疫组织化学法检测手术部位滤过泡及巩膜表面成纤维细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)和转化生长因子-β2(TGF-β2)表达；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测TGF-β2 mRNA表达.结果 免疫组织化学法结果显示RA+ PLGA组PCNA、TGF-β2表达量在7、14、30 d时明显减少(P＜0.01)；RT-PCR结果显示RA+ PLGA组TGF-β2 mRNA表达明显减少(p＜0.01).结论 RADDS通过抑制成纤维细胞增殖,抑制TGF-β2表达减少滤过术后瘢痕形成,从而保证术后疗效.
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不同培养方法对兔骨髓间充质干细胞诱导分化为成骨细胞的影响
骨髓间充质干细胞(BMSCs)的传统培养常以异种血清作为培养基,这存在伦理学争议、传播疾病和潜在免疫排斥反应等问题[1-2],且违反卫生部《组织工程化组织移植治疗技术管理规范》的要求[3].我们将自体富血小板血浆(APRP)替代异种血清,用于BMSCs的培养及诱导成骨分化,探讨诱导BMSCs成骨分化新方法.
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兔动脉粥样硬化模型的建立
动脉粥样硬化(AS)是心脑血管疾病的主要病理基础,血脂异常是AS的主要危险因素[1].我们用高脂饲料喂养法建立兔动脉粥样硬化模型,用于研究动脉粥样硬化血管损伤及修复机制.一、材料与方法1.材料:2～3个月龄新西兰兔40只,由南京大学动物实验中心提供;高脂饲料购自南通特洛菲饲料科技有限公司;总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)检测试剂盒购自日本协和医药株式会社;甘油三酯(TG)检测试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司;巨噬细胞甘露糖受体-2(CD280)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)抗体购自北京博奥森生物技术有限公司.
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不同去细胞方法对兔肌腱组织学的影响
组织工程韧带/肌腱是近年研究的热点,理想的组织工程韧带可以保留肌腱/韧带的基本组织结构,提供佳的干细胞增殖分化环境及肌腱/韧带胶原间的纤维连接,去细胞组织工程肌腱/韧带提供了这种可能,同时避免肌腱/韧带免疫源性及疾病传播风险[1].目前研究较多的是通过应用不同化学试剂进行肌腱/韧带的去细胞,目的是在保留肌腱/韧带的生物学特性的同时去除肌腱细胞成分以达到降低抗原性及保存肌腱/韧带结构完整性的目的.本研究旨在观察几种方法常用去细胞方法处理兔趾屈肌腱及半腱肌后对其组织学改变,比较不同去细胞方法对肌腱组织学及胶原结构的影响.
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缺血后处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤后慢性纤维化的保护机制
本实验旨在建立大鼠单侧肾脏缺血再灌注损伤(IRI)模型,观察缺血后处理对肾脏再灌注损伤后慢性纤维化进程的影响,探讨其减轻慢性纤维化的作用机制.一、材料与方法1.动物分组:健康雄性Wistar大鼠,体质量250～280 g,随机分为3组,分别为假手术组(sham组)、缺血再灌注损伤组(IRI组)和缺血后处理组(IPO组).每个组分别设置缺血后再灌注12周、16周2时间点,每个时间点6只大鼠.
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二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌过程中肝组织血管内皮生长因子及其受体2的表达
我们采用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌,观察肝组织血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR)在诱癌不同时期的表达,探讨其在调控肝癌发病中的作用.一、材料与方法1.材料:DEN 9.5×105 mg/L,纯度99.9％,美国Sigma公司.雄性Wistar大鼠150只,清洁级,体质量(100±10)g,动物合格证号:SCXP(沪)2008-0016,购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司,所有大鼠分笼饲养于上海中医药大学附属普陀医院实验动物房.
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显露喉返神经腔镜甲状腺手术与开放手术的对比
腔镜甲状腺手术由于其颈部的无瘢痕的美容效果渐成为患者的首选,而喉返神经损伤则是甲状腺手术严重的并发症之一.武汉市第五医院自2011年始实行腔镜喉返神经探查术,对比观察腔镜与开放喉返神经探查术后临床疗效异同,现报道如下.
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Twist对肾结石所致肾纤维化的影响
Twist是常染色体上一种编码碱性螺旋-环-螺旋的转录因子,初在果蝇身上发现,它表达于原线和邻近中胚层的原肠胚中.Twist在中胚层分化中发挥重要作用,在增强骨骼肌分化的同时阻碍其他中胚层的分化[1].Twist是介导上皮间质转化(EMT)的1个关键基因[2].EMT是1个失去上皮细胞极性、细胞与细胞接触能力,并重塑细胞骨架的过程,其特征是失去上皮性的标记如E-钙黏素(E-cadherin),而获得间质细胞的特性[3],它是慢性炎症和纤维化的一个重要过程.Yang等[4]通过培养犬类肾小管上皮细胞和人类乳腺上皮细胞后发现,Twist的过度表达可引起EMT,但是Twist在肾结石患者中的表达及临床意义目前仍无文献报道.
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大鼠骨髓间充质干细胞向肝细胞诱导分化研究
我们以干细胞生长因子(HGF)和α-成纤维细胞生长因子(α-FGF)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)特定向肝细胞分化,为进一步通过干细胞移植治疗肝脏疾病提供依据.一、材料与方法1.大鼠BMSCs的分离和培养:通过动物实验伦理委员会的批准,4周龄SD大鼠被安置在浙江省东阳市人民医院的实验动物中心接收标准的饮食,健康SD大鼠麻醉处死后提取股骨和胫骨骨髓腔中的DMEM-LG冲洗液,细胞重悬液被转移到75 cm2的组织培养瓶,在含10％胎牛血清(FBS) DMEM培养基中进行BMSCs的体外贴壁培养增殖,培养在37℃以及5％ CO2的环境中.培养4d后半数换液,3d后全换液.5～7 d后传代.7代以内的BMSCs应用于实验研究.
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丹酚酸B逆转肾小管上皮细胞转分化时微小RNA表达谱的变化
微小RNA(miRNA)是新近被证明的一类高度保守的、内源性非蛋白编码的长度约为22 nt的小分子RNA,部分miRNA参与了肾间质纤维化的发生发展[1-2].我们前期的研究结果显示:丹酚酸B不仅能有效阻止甚至具有逆转肾小管上皮-间质转化(EMT)的作用[3].我们采用miRNA芯片技术,观察丹酚酸B逆转转化生长因子(TGF)-β1诱导的肾小管ETM时miRNA表达谱的变化.
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深低温停循环对大鼠海马神经元线粒体超微结构的影响
本研究旨在观察深低温停循环(DHCA)技术本身对海马线粒体超微结构的影响,现报道如下.一、材料与方法1.材料:清洁级SD大鼠40只(昆明医科大学实验动物中心提供),随机分为常温不停循环组(空白对照,36.5 ～37.5℃,NC)、常温停循环组(36.5～37.5℃,NTCA)和深低温停循环组(＜20℃,DHCA)3组(每组12只),另外4只为体外循环预充管道提供血液.膜式氧合器(东莞科威医疗器械有限公司),蠕动泵BL-100型(常州普瑞流体技术有限公司),Mierom切片机(HM-325)(德国),光学显微照相装置(TK-C1381EG,日本),细胞医学图像分析系统(CMIS,重庆天海医疗器械有限公司),JEM-100CX透射电子显微镜(TEM、日本JEOL电子公司).
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三维治疗计划系统模拟不同活度125I粒子植入肿瘤靶区内外的剂量分布
放射性125I粒子活度是影响剂量分布的关键因素之一,若选择不当常造成肿瘤复发或并发症.如何选择粒子活度国内外尚无统一标准,我们应用三维治疗计划系统(TPS)模拟在相同体积、相同周边剂量时选择不同活度125I粒子,观察其靶区内及靶区外剂量分布.一、材料与方法1.材料:放射性125I粒子,6711-99型,活度分别为0.3、0.5、0.8 mCi,中国上海欣科医药公司.计算机三维治疗计划系统,美国SSGI公司.Powerlook 1000激光扫描仪,中国台湾世缘资讯科技公司.
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硫酸镁联合高渗盐水治疗重型颅脑损伤
近年来国内外报道分别应用硫酸镁和高渗盐水治疗重型颅脑损伤,但所用药物浓度、剂量、方法不一致,疗效总体也不佳.我们通过联合使用硫酸镁和高渗盐水治疗重型颅脑损伤,现报道如下.一、材料与方法1.入组标准:(1)入院时GCS为3 ～8分;(2)无合并严重基础疾病或严重复合伤;(3)年龄18 ～ 70岁;(4)外伤后24 h内入院;(5)颅内血肿小于30 ml,未接受手术治疗;(6)入院时血钠浓度在125 ～ 150 mmol/L.2.退组标准:(1)迟发性颅内血肿或颅内血肿进行性增大需手术治疗;(2)人组后才发现合并其他部位严重损伤.
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三氧化二砷对人乳腺髓样癌细胞的化疗增敏作用
化疗增敏剂是一类本身对肿瘤的治疗作用相对较弱,却能通过与化疗药物协同作用而提高化疗药物的疗效[1].本研究旨在观察三氧化二砷(As2O3)体外促进化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)、表柔比星(EPI)、紫杉醇(PTX)诱导乳腺髓样癌(MBC)细胞的凋亡.
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脉冲电磁场治疗废用性骨质疏松的形态学研究
废用性骨质疏松(DOP)属继发性骨质疏松的一种.临床上以脊椎与骨盆区及骨折处为主,常为持续性疼痛.目前对骨质疏松症的药物治疗主要为双膦酸盐、钙剂等,但存在治疗周期长、费用高及药物不良反应等问题.PEMF为临床中用于骨折延迟愈合、骨不连的治疗手段之一,有报道认为PEMF对于废用性骨质疏松长期疗效优于降钙素[1].我们通过骨形态计量学观察探讨PEMF对于DOP治疗作用和对骨代谢的调节.
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蛋白磷酸酶2A抑制剂对胰腺癌细胞丝裂原活化蛋白激酶信号通路的激活作用及对细胞生长的影响
中药斑蝥中的有效成分斑蝥素(CAN)及其衍生物对多种肿瘤细胞具有抑制作用[1.2],我们发现斑蝥素可抑制胰腺癌细胞的生长和转移[1].斑蝥素是蛋白磷酸酶2A(PP2A)的选择性抑制剂,PP2A可使细胞信号通路中的多种激酶去磷酸化而失活,这些激酶包括与细胞生长密切相关的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK):细胞外信号调节激酶(ERK)、c-jun氨基端激酶(JNK)和p38等.本研究旨在检测斑蝥素和经典的PP2A抑制剂冈田酸(0A)对胰腺癌细胞MAPK信号通路的激活作用及对细胞生长的影响.
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腹腔镜肾上腺部分切除术治疗良性肾上腺肿瘤
不管肾上腺肿瘤的大小和所处的位置,传统的治疗总是将肿瘤侧肾上腺全切.近年来不断有学者提倡对肾上腺良性肿瘤实施肾上腺部分切除术,以避免肾上腺皮质功能不全的不良反应发生[1].我们于2010年7月至2012年12月实施22例单侧腹腔镜肾上腺部分切除术,治疗效果满意.
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不同剂量125I粒子植入对荷人肉瘤裸鼠移植瘤疗效的研究
软组织肉瘤广泛切除术后局部复发率为30％～50％[1].辅助外放疗可降低局部复发率[2],但外放疗剂量≥60Gy将增加正常组织的损伤[3].近距离照射以其疗效确切、并发症少的优势成为治疗软组织肉瘤的手段之一.我们将粒子种植在纤维肉瘤裸鼠移植瘤内,观察不同剂量125 I粒子植入治疗的疗效和并发症.
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慢性胰腺炎痛模型大鼠脊髓c-Jun氨基末端激酶的磷酸化表达的变化
难受性腹痛是慢性胰腺炎常见的临床症状之一,80％～90％的慢性胰腺炎患者在发病过程中都会产生腹痛,因此,控制腹痛在慢性胰腺炎的治疗中具有重要的地位[1].但是由于对慢性胰腺炎性疼痛的发病机制尚不完全清楚,到目前为止,临床上仍缺乏满意的镇痛药物.对于慢性胰腺炎性疼痛的治疗,目前除了非甾体类抗炎药和阿片制剂外,并没有很多的选择,其治疗的满意率较差[2].我们采用二丁基二氯化物(DBTC)尾静脉注射的方法建立慢性胰腺炎大鼠模型,观察c-Jun氨基末端激酶的磷酸化(pJNK)在脊髓中的表达变化.
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非小细胞肺癌组织中抗癌1号和组织抑制因子-1、基质金属蛋白酶-9表达与临床生物学行为关系
目的 观察抗癌1号(KAI1)和组织抑制因子-1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,探讨它与临床生物学的关系.方法 应用免疫组织化学法检测73例NSCLC、51例相应的癌旁和13例非肿瘤性肺组织的KAI1和TIMP-1、MMP-9的表达,采用x2检验和Pearson分析临床生物学行为的相关性.结果 NSCLC和癌旁非肿瘤组织中,KAII和TIMP-1阳性率(39.7％、74.0％和90.6％、37.5％)差异有统计学意义(P＜0.05),而MMP-9阳性率(79.4％和67.4％)差异无统计学意义(P＞0.05)；在NSCLC组织中,KAI1检出率与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤类型差异有统计学意义(P＜0.05),TIMP-1、MMP-9的检出率与TNM分期、淋巴结转移差异有统计学意义(P＜0.05),三者检出率与年龄、性别无明显相关；KAI1的表达与TIMP-1、MMP-9呈负相关.结论 Al1和TIMP-1、MMP-9均与肺癌的发展转移有关.
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腹腔镜胃癌根治术对患者机体细胞免疫功能的影响
目的 观察腹腔镜胃癌根治术对患者机体细胞免疫功能的影响.方法 选取102例进展期胃癌患者分成腹腔镜组53例、开腹组49例,分别行腹腔镜胃癌根治术和开腹胃癌根治术,采用流式细胞仪测定患者术前1d及术后第1天及第5天外周血中CD3、CD4+、CD8+、CD19及自然杀伤(NK)细胞比例的变化,研究不同手术方式对患者细胞免疫功能的影响.结果 腹腔镜组术中出血量[(82.50±50.33) ml]显著少于开腹组[(107.50±49.42) ml] (P＜0.05).术后第1天及第5天,腹腔镜组和开腹组患者的CD3、CD4+、CD8+、CD19及NK细胞比例均较术前明显降低(P＜0.05),术前和术后NK细胞比例腹腔镜组与开腹组比较差异有统计学意义(x2=0.017,P＜0.05).结论 腹腔镜胃癌根治术损伤小,患者恢复快,对患者术后机体细胞免疫功能影响较小.
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两种腰椎非融合内固定术治疗腰椎间盘突出症早期疗效的比较
目的 比较棘突间Coflex动态内固定术(A组)与腰椎椎弓根螺钉加弹性棒内固定术(B组)两种腰椎非融合内固定手术方式治疗腰椎间盘突出症的早期手术疗效.方法 对2008年3月至2012年3月经郑州大学第一附属医院确诊为单节段腰椎间盘突出(L4/5)的22例患者行腰椎非融合内固定手术治疗并对其进行短期随访调查研究,术后随访时间为(6.87±3.25)个月.术前术后分别用JOA评分和ODI指数对早期临床疗效进行评价,并比较两种术式的手术时间、出血量.结果 术后两组患者JOA评分(A组25.00±2.65、B组24.70±3.04)较术前(A组10.10±4.78、B组10.70±5.21)明显提高(p＜0.05),术后ODI指数(A组3.40±2.74、B组3.30±2.68)较术前(A组25.30±8.82、B组24.80±7.93)明显下降,两种手术方式疗效差异无统计学意义(P＞0.05)；两种手术方式手术时间及出血量差异有统计学意义(P＜0.05).结论 两种腰椎非融合内固定术比较,棘突间Coflex动态内固定术相对手术时间短、术中出血量少；两者均能保留一定的腰椎活动度,改善临床症状,获得较满意的疗效,早期疗效差异无统计学意义.
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细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白27基因在胃癌中表达及其与启动子甲基化的关系
目的 探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白27(p27KiPl)在胃癌中的表达及其与基因启动子甲基化的关系.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测97例胃癌标本p27KiPl蛋白的表达,并选取25例正常胃黏膜组织作对照,同时应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法对启动子甲基化进行检测.结果 正常胃黏膜组织中p27KiPl蛋白表达率明显高于胃癌组(x2=31.02,P＜0.01).在高/中分化组、黏膜层/黏膜下层组和无淋巴结转移的病例中,p27KiPl蛋白表达率分别为66.67％ (30/45)、92.86％ (13/14)、79.07％ (34/43),但随着胃癌分化程度的降低,侵及肌层/浆膜层或发生淋巴结转移,p27KiPl蛋白表达率明显降低,分别为30.77％(16/52)、39.76％(33/83)、22.22％ (12/54)(x2值分别为12.47、13.55、31.03,P＜ 0.01).46例p27KiPl蛋白高表达病例中仅有5例出现启动子甲基化,而在51例p27KiPl蛋白低表达病例中启动子甲基化高达21例(x2=11.32,P＜0.01).结论 p27KiPl与胃癌发生发展密切相关.p27KiPl蛋白表达降低常提示胃癌的低分化、高侵袭转移能力.p27KiPl基因启动子甲基化可以引起p27KiPl蛋白表达下调或缺失,与胃癌的发生发展密切相关.
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急性肝衰竭患者外周血调节性T细胞比率及活性变化
目的 观察调节性T(Treg)细胞在急性肝衰竭(ALF)患者外周血中的比率、活性变化及其临床意义.方法 选取20名ALF患者及10名健康对照者,分离外周血单个核细胞(PBMCs).应用流式细胞术检测各组患者PBMCs中CD4+ CD25+ CD127low Treg细胞占CD4+细胞的比率.通过单向混合淋巴细胞反应(MLR),观察从各组患者PBMCs中分离的CD4+CD25+CD127lowTreg细胞抑制淋巴细胞增殖的能力变化.同时检测外周血中超敏C反应蛋白(hsCRP)、血沉(ESR)、免疫球蛋白(Ig)等水平.结果 ALF患者PBMCs中Treg细胞占CD4+细胞的比率明显低于健康对照者[(4.20±1.34)％比(8.34±0.89)％,t=8.81,P＜0.01].加入ALF患者分离得到的Treg细胞的MLR,Treg细胞抑制同源性PBMCs细胞增殖的能力被明显削弱,cpm=(21.48±4.14)×103；与健康对照者cpm=(6.32±1.18) x103]比较差异有统计学意义(t=11.26,P＜0.01).而ALF患者外周血hsCRP、ESR、Ig水平明显高于健康对照者(P＜0.05).ALF患者外周血Treg细胞下降与hsCRP和1gG升高呈负相关(r=-0.634,P＜0.01；r=-0.596,P＜0.01).结论 ALF患者存在Treg细胞数量及活性的下降,Treg细胞等免疫调节因素可能在ALF的发病机制中发挥作用.
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外周血肿瘤-睾丸抗原基因mRNA检测对小肝癌诊断的价值
目的 探讨肿瘤睾丸(CT)抗原MAGE-1、SSX-1及CTp11基因mRNA的小肝癌患者外周血中的表达及诊断价值.方法 用巢式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测30例小肝癌患者外周血单个核细胞(PBMC)中上述3种基因的表达.结果 小肝癌患者PBMC中MAGE-1、SSX-1和CTp11基因mRNA的阳性表达率分别为26.6％(6/30)、26.6％(6/30)和16.6％ (5/30),有40.0％ (12/30)患者PBMC标本中可以检测到其中1种CT抗原基因表达.在血清甲胎蛋白(AFP)阴性及低浓度阳性小肝癌患者PBMC中其阳性率为58.7％ (9/24),此结果与血清AFP检测结果联合起来,可显著提高单纯根据AFP检测结果所做出的诊断率(50.0％比20.0％,P＜0.05).结论 外周血中MAGE-1、SSX-1及CTp11基因mRNA的检测有助于小肝癌的诊断.
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Janus蛋白酪氨酸激酶-信号转导子和转录激活子信号通路对神经干细胞发育的调控
神经干细胞(NSCs)是神经系统内处于较早发育阶段的细胞体,可发育成为各种成熟的神经细胞.因此,可以利用NSCs来替代受损的神经细胞,恢复中枢神经系统的功能[1].Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK)-信号转导子和转录激活子(STAT)信号通路是近年来新发现的一条细胞内信号转导途径,许多细胞因子和生长因子都利用该途径传递生物学信号,发挥生物学作用[2].在神经和胚胎发育中,JAK-STAT通路可在不同发育阶段及不同内外源性调控因素作用下选择性的激活或抑制,从而影响了NSCs的发生、增殖、分化进程及终的命运[3].现对这方面的相关研究进展作一介绍.
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同源盒基因在恶性肿瘤研究中的进展
同源盒基因(HOX基因)早发现于果蝇,之后发现也存在于包括人在内的脊椎动物中.其显著的特点是在从低等动物到高等动物进化的过程中始终处于高度保守状态.HOX家族中每个成员都含有一段183个核苷酸的高度保守序列,称为Homeobox即同源盒.其蛋白产物称为同源盒蛋白,是一组重要的转录调节因子,其中由同源盒编码的长61个氨基酸的序列称为同源域,目前认为同源盒蛋白通过同源域与其靶基因结合,以单体、同源双体或者异源双体、三体形式直接调控下游靶基因的表达,以发挥其转录调节因子的作用[1].同时,HOX基因也可螯合其他蛋白质共同促进或抑制基因的表达[2].
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生长抑制及DNA损伤诱导基因45在肝细胞性肝癌中的意义
生长抑制及DNA损伤诱导基因45(GADD45)家族是DNA损伤修复重要相关基因,初从受紫外线(UV)照射的细胞分离得到,是电离辐射效应基因之一.GADD45家族属于p53、乳腺癌易感基因I(BRCA1)的下游基因,它广泛、稳定地表达在人体细胞特别是在静止期细胞中.该家族通常在UV放射、低氧、离子辐射、基因毒性药物等多种DNA损伤因素作用后,随着DNA修复途径的启动而快速诱导表达,所以又称为细胞和DNA损伤的应激基因[1].GADD45基因在调控G2/M细胞周期监测点、维持基因组稳定性及细胞信号转导过程中起重要作用,与DNA损伤修复密切相关.近年来的研究结果显示GADD45基因还能够诱导凋亡,在肿瘤细胞凋亡中起级联放大的桥梁作用,因此与肿瘤发生、发展和转归同样存在密切关系[2].
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MicroRNA在胰腺癌中的研究进展
微小RNA(miRNA)是一类长度为19 ～ 25个核苷酸的单链RNA,是由Dicer酶从折叠的70 ～ 100个核苷酸的发夹状转录前体RNAs(pre-microRNAs)上切割得到的小分子RNAs,主要通过与靶信使RNA(mRNA)的3’-非翻译区(3’-UTR)碱基配对的方式来执行对靶mRNA的切割或者翻译抑制功能,抑制靶基因表达而起调控作用[1].业已证实,正常组织与恶性肿瘤组织的rniRNA表达谱差异有统计学意义,在恶性肿瘤发生发展中,异常表达的niRNA扮演着"癌基因"和(或)"抑癌基因"的重要角色[2-3].miRNA表达的异常改变可能在胰腺癌的诊断、治疗及预后判断中发挥重要作用.现就miRNA在胰腺癌中的研究进展作一综述.
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人脐带Wharton胶来源干细胞的生物学特性及在肝脏疾病治疗中的应用
间充质干细胞(MSCs)来源于中胚层,是一类具有自我复制、高度自我更新能力、连续传代培养仍具有多向分化潜能及免疫调控能力的成体干细胞.能参与骨、肌肉、脂肪、肌腱、肝脏、等组织的再生[1].目前用于临床和实验的MSCs主要有骨髓间充质干细胞(BMSCs)和脂肪间充质干细胞(ADMSCs).因BMSCs和ADMSCs增殖能力及提取效率易受到患者年龄、身体状况等客观条件影响,某种程度上限制了其广泛应用[2].近年来,从人脐带Wharton胶中提取的MSCs(WJ-MSCs)因具有来源广泛、取材方便、免疫原性低、易于转染外源性基因等特点,成为一个新的研究热点.
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三维体外早期血管生成模型的评估进展
正常机体内,成熟的血管网对所有器官及组织的氧及营养成分的供应十分重要;与此同时,血管网的形成在一些疾病的发生及发展过程中也发挥着重要作用,如肝癌及糖尿病的发展与血管网的形成密切相关[1];此外,在游离移植手术后游离移植物早期血管网的构建有利于提高移植物的存活率[2].然而,目前对于早期血管网形成的具体机制不是十分清楚,为充分了解这一机制以寻找促血管形成或抑制血管形成的有效方法,建立一个能高效模拟体内血管网形成环境的三维体外模型十分必要,这将为改善血管相关性疾病的治疗提供可靠的实验依据.现从血管生成机制、三维体外血管生成模型的构建、内皮细胞活动方式的评估进展等方面进行综述.
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犬盆底疝动物模型的建立
目的 探讨以实验犬为平台建立盆底疝的动物模型的可行性.方法 人组8条犬,通过外科操作打开犬盆底肌肉筋膜组织间隙(肛门外括约肌、坐骨尾骨肌和肛提肌、闭孔内肌间的间隙),再通过围手术期诱导便秘提高实验犬腹内压以制备犬盆底疝的动物模型,解剖并观察实验犬盆底疝的发生,以验证盆底疝动物模型的成功建立.结果 8条犬术后1周伤口均愈合,3例术后出现局部红肿,2周后消退,8条犬术后1个月内(短术后3d,长术后18 d)均出现盆底膨出,解剖操作证实盆底疝模型制备成功.结论 该方法制备犬盆底疝模型的方法简单、易行.
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股骨远段闭合注射骨肉瘤原位模型的建立
目的 探讨一种新的建立裸鼠股骨骨肉瘤原位模型的方法.方法 体外连续传代筛选HOS细胞株,HOS细胞悬液闭合注射于股骨下端骨髓腔中.观察MNNG/HOS细胞在股骨骨肉瘤原位模型的成瘤特性.常规影像学检查以及肿瘤组织病理检查.结果 接种2周后平均肿瘤体积为(0.210±0.095) cm3,4周后平均肿瘤体积为(0.84±0.25) cm3.外观皮肤呈紫红色,静脉怒张.术后4周X线片可见股骨下段溶骨及成骨改变、肿瘤样骨形成.光镜下可见典型骨肉瘤病理特征,成瘤率为91.7％,免疫组织化学Stro-1阳性表达率为8％.结论 该方法建立模型操作简单,创伤小,模拟了人类骨肉瘤的临床发病和发展过程,提供了更加贴近人体的研究模型.
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骨质疏松腰椎三维有限元模型的建立
目的 建立正常人及骨质疏松患者腰椎三维有限元模型,观察骨质疏松导致的骨结构及性质的改变对骨生物力学的影响.方法 选择健康及骨质疏松老年女性患者各1例,通过CT扫描获得志愿者腰椎数据,Mimics10.0软件生成腰椎三维模型；将三维模型数据导人Hypermesh 10.0软件进行网格划分,建立有限元模型；根据腰椎CT灰度值对三维模型赋10种材料属性后,导入Abaqus 6.9内施加载荷、设置边界条件等操作建立正常及骨质疏松腰椎三维有限元模型,观察腰椎大米塞斯应力(yon mises stress)、大位移、大轴向应变3项指标.结果 建立正常人和骨质疏松患者第五腰椎(L5)三维有限元模型；日常生理载荷作用下,正常人L5产生的大von mises stress、大位移、大轴向应变分别为4.171 Mpa、1.693e-2mm、5.508e-5；骨质疏松患者L5产生的大von mises stress、大位移、大轴向应变分别为4.451Mpa、3.822e-2 mm、1.414e-4.结论 日常生理载荷作用下,骨质疏松患者和正常人L5所产生的应力无明显差异.但骨质疏松患者腰椎更容易产生应力集中,抵御载荷储备能力降低.
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胰腺癌化疗耐药研究的现状与进展
胰腺癌发病率呈升高趋势,早期诊断率及手术切除率较低,即使病灶得以切除,患者仍多死于复发或转移,预后极差.在多学科综合治疗理念指导下,患者预后虽有改善,但极为有限,其病程演变除与肿瘤生物学行为相关外,化疗耐药亦为主要相关因素,也是临床及基础研究的热点课题之一.现由细胞凋亡、上皮间质转化(EMT)、肿瘤干细胞(CSCs)以及微小RNA (miRNAs)等几个方面,探讨胰腺癌化疗耐药的机制及研究进展.
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体外循环对兔胰岛细胞胰岛素信号转导通路的影响
目的 观察体外循环(CPB)对兔胰岛细胞胰岛素(INS)信号通路的影响.方法 将30只兔随机分为假手术组(S组)和CPB组.利用脱氢酶法和放射免疫法测定血糖水平,血浆INS和胰高血糖素(GLC)的连续性变化；利用免疫荧光标记法检测各阶段胰岛INS、GLC和胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达水平.结果 与转流前(0.106±0.005)比较,CPB组术毕胰岛INS表达水平(0.120±0.011)显著增高(P＜0.05)；胰岛GLC表达水平与转流前(0.095 ±0.010)比较,复跳后分别为0.073 ±0.015、0.065±0.013、0.053±0.007,均显著下降(P＜0.05)；而胰岛IRS-1表达水平停跳时(0.074±0.008)显著高于转流前(0.069 ±0.005) (P＜0.05).结论 CPB抑制兔胰岛IRS-1表达的增高,可能是增加的INS不能满足机体代偿需要的原因之一.
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急性坏死性胰腺炎大鼠外周血中性粒细胞凋亡相关的蛋白质变化
目的 观察急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠外周血中性粒细胞(PMN)蛋白组学的变化.方法 SD大鼠60只,随机分为2组,每组30只,建立ANP组和SO(假手术)组模型,分别在制模后3、6、12 h分批处死大鼠,抽取下腔静脉血测定血淀粉酶含量,密度梯度离心分离PMN,用流式细胞仪测定PMN凋亡比率.切取胰腺标本组织,病理切片苏木素-伊红(HE)染色,并对胰腺组织进行病理评分.同时对大鼠制模后12h的PMN裂解,应用Label free技术对两组PMN进行蛋白定量差异分析,DeCyder MSTM 2.0分析定量数据,MASCOT算法鉴定定量多肽分子,且进一步鉴定出与凋亡有关的差异蛋白质.结果 ANP组PMN凋亡延迟,至12h达到低(2.15 ±0.45),与SO组各个时间点比较差异有统计学意义(P＜0.01)；鉴定出与PMN凋亡有关的4种蛋白质相对分子质量为78000葡萄糖调节蛋白、RhoGTPases、L-乳酸脱氢酶A链和血红蛋白α2链(ANP组与SO组的比值分别为1.953614、3.526625、1.766764、0.609825),两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ANP时,PMN凋亡延迟,与凋亡有关的差异蛋白质可能参与了ANP外周血PMN凋亡延迟.
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天花粉蛋白对同种胰岛移植排斥反应的抑制作用
目的 探讨天花粉蛋白对小鼠同种胰岛移植排斥反应的抑制作用及其机制.方法 行BALB/C小鼠至C57BL/6小鼠的同种异基因胰岛移植,实验组腹腔注射天花粉蛋白,移植后每天测血糖,了解胰岛移植物存活时间.检测各组T细胞增殖水平及脾脏T细胞的组成比例.结果 实验组和对照组胰岛移植物存活时间分别为(12.2±1.7)d和(9.7±1.4)d,实验组有所延长(P＜0.05).天花粉蛋白注射后T细胞对供体特异性抗原刺激的增殖反应明显减弱(P＜0.01)；脾内调节型T细胞比例上升.结论 天花粉蛋白对小鼠同种胰岛移植排斥反应有一定抑制作用；其机制可能与天花粉蛋白抑制小鼠的抗原特异性T细胞增殖及上调调节型T细胞有关.
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脱落酸对人胰腺癌细胞增殖的影响
目的 探讨脱落酸(ABA)对人胰腺癌细胞株(PANC-1)增殖的影响及其作用机制.方法 细胞计数试剂盒(CCK-8)法筛选出ABA处理浓度,实验分为对照组和ABA处理组,处理组设3个处理浓度,0.001、0.010、0.100 mmol/L.通过细胞形态观察、CCK-8法及膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V/PI)方法观察ABA对PANC-1增殖的影响.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法分别检测端粒酶mRNA(hTERT mRNA)及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、细胞周期素(Cyclin) D1蛋白的表达.结果 ABA使细胞增殖减慢(24 h:F =52.253,P＜0.01;48 h:F=107.461,P＜0.01),促进凋亡(对照组和各处理组抑制率分别为4.26％、15.42％、22.02％、39.95％).处理组hTERT mRNA表达下降,Caspase-3表达增强,bcl-2及Cyclin D1表达减弱,此效应随ABA浓度升高而明显.结论 ABA能抑制PANC-1细胞增殖,促进凋亡,其机制是活化Caspase-3,降低hTERT mRNA及bcl-2、Cyclin D1蛋白的表达.
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Bmi-1通过抑制p16基因的表达促进人胰腺癌细胞的增殖
目的 观察靶向下调Bmi-1基因对人胰腺癌细胞(PANC-1)细胞增殖、p16启动子甲基化、p16表达的影响.方法 构建反义Bmi-1真核表达载体转染人人胰腺癌PANC-1细胞,运用荧光倒置显微镜观察、Western blot技术检测靶基因沉默效率；运用流式细胞术检测细胞周期及凋亡；Western blot、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测p16基因表达；甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测p16启动子甲基化变化.结果 荧光倒置显微镜观察转染后48 h细胞转染效率在90％左右；细胞周期出现阻滞(G0/G1期细胞由40.52％上升至60.48％,P＜0.05)、凋亡增加(由7.87％上升至21.67％,P＜0.05)；Bmi-1蛋白表达水平明显下降[吸光度(IA)值318.54±1.21到175.39±0.73,P＜0.05]；p16启动子甲基化水平降低而p16基因RNA(从3.563±0.128上升到8.621±0.310,P＜0.05)及蛋白质表达上升(IA值213.38±0.54到304.12±0.76,P＜0.05).结论 本实验构建的反义Bmi-1载体能够有效沉默细胞中靶基因的表达,抑制细胞增殖；Bmi-1很可能通过甲基化的方式对p16的表达进行调控.
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靶向抑制表皮生长因子受体对胰腺癌细胞上皮-间质转化的影响及机制
目的 观察靶向抑制表皮生长因子受体(EGFR)对人胰腺癌细胞(PANC-1)上皮-间质转化(EMT)过程的影响,探讨其机制.方法 设计并合成针对EGFR基因特异的RNA干扰靶点,运用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默人胰腺癌PANC-1细胞EGFR基因表达.应用划痕试验及基质胶侵袭试验检测EGFR干扰后细胞运动、侵袭能力的变化；应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot法检测转染后EMT相关标志物E-钙粘蛋白(E-Cadherin)、N-钙粘蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维粘连蛋白(Fibronectin)等的表达变化,并检测EMT相关转录因子的表达变化；应用细胞免疫荧光共聚焦显微镜检测上述蛋白的定位及细胞形态的变化.结果 应用慢病毒介导的RNA干扰技术可特异性抑制人胰腺癌PANC-1细胞EGFR基因的表达.抑制EGFR后PANC-1细胞的运动及侵袭能力显著降低；上皮表型标志物E-Cadherin表达明显上调,间质表型N-Cadherin、Vimentin、Fibronectin等的表达显著下调；与对照组比较,EGFR干扰组细胞由纺锤形变成立方形,伪足消失；EGFR干扰组中EMT相关转录因子Snail及Slug表达显著下调.结论 应用慢病毒介导的RNA干扰技术特异性沉默EGFR基因的表达,可显著抑制PANC-1细胞的EMT过程,其机制可能与下调转录因子Snail及Slug表达有关.
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胰腺微循环障碍加重过程血管内皮生长因子的表达及其意义
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)在血液和胰腺组织中的表达水平与胰腺微循环障碍加重过程中的关系及意义.方法 健康雄性SD大鼠100只,随机分为对照组(N、32只)、急性水肿型胰腺炎组(AEP、33只)及急性坏死型胰腺炎组(ANP、35只).检测各组及各时点血中VEGF、血淀粉酶(AMY)和胰腺组织中VEGF表达,观察胰腺病理改变.结果 模型建立后,各组随机抽取8只大鼠,测量6、12、24h时点VEGF含量,其中ANP组分别为(119.69 ±26.80)、(145.78 ±22.11)、(160.05±21.11) ng/L.AEP组分别为(99.14±29.08)、(115.00±17.04)、(134.04±27.93) ng/L,N组分别为(36.09±8.59)、(46.93±8.93)、(42.06±11.74) ng/L.ANP组及AEP组血清VEGF表达均显著高于N组(P ＜0.05)；ANP组与AEP组之间差异有统计学意义(P＜0.05)；各组胰腺组织中6、12、24h各时点VEGF染色评分ANP组为11.13±1.46、7.25±0.89、5.88±1.25,AEP组为8.53士0.87、10.27±0.83、11.12±0.83,N组为3.50±0.93、2.25±1.04、1.75±0.71.AEP与ANP组胰腺组织中各时点VEGF染色评分均高于N组(P ＜0.05)；6h-ANP组的评分显著高于AEP组(P＜0.05),而12 h-ANP组与24h-ANP组的染色评分明却低于AEP组(P＜0.05).结论 在胰腺微循环障碍持续加重期,胰腺组织中VEGF表达减少,预示胰腺坏死难以逆转.
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胃旁路术对2型糖尿病大鼠的降糖作用及胰高血糖素样肽-1的影响
目的 观察胃旁路术(GBP)对Ⅱ型糖尿病大鼠血糖及血清胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的影响.方法 对80只雄性SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病模型.将建模成功的大鼠分成手术组18只(O组)；假手术组15只(S组)；饮食控制组15只(F组)；对照组15只(C组).检测术前及术后1、2、4、8周的体质量、空腹血糖、空腹血浆胰岛素水平、空腹血清GLP-1浓度.结果 (1)O组术后空腹血糖第8周降至(8.2±2.4)mmol/L,与术前比较差异有统计学意义(P＜0.05).(2)O组术后空腹血浆胰岛素8周后从术前(29.1±5.1)mU/L升至(72.5 ±7.4) mU/L(P ＜0.05).(3)O组术后GLP-1明显升高,到第8周上升至(23.26±2.19) pmol/L(P＜0.05).结论 胃旁路手术可以有效降低2型糖尿病大鼠的血糖并引起GLP-1的高分泌,其血糖下降与限制饮食及体质量下降无明显相关.
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重症急性胰腺炎大鼠甲状腺滤泡上皮细胞功能和超微结构的变化
目的 观察重症急性胰腺炎(SAP)时甲状腺滤泡上皮细胞超微结构和功能的变化.方法 雄性Wistar大鼠40只,体质量200～ 250 g(湖北省疾病预防控制中心提供),随机分为5组:假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎模型1、3、6、12h组(SAP 1、3、6、12h组).胆胰管逆行注射5％牛磺胆酸钠制备SAP模型.测定淀粉酶(AMY)、磷脂酶A2(sPLA2)、T3、T4、游离甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平.抽血后取甲状腺腺叶组织,光镜观察病理改变,电镜下观察滤泡上皮细胞超微结构改变.结果 与SO组比较,功能上SAP组大鼠血AMY、sPLA2水平明显升高,分别为(2489±442～5253±717) U/L和(621.33 ±23.77～ 1021.11 ±54.17) mol/(min·ml) (P ＜0.05),血T3、FT3、FT4水平明显下降,结果分别为(0.55 ±0.21 ～0.76±0.28) nmol/L、(0.93±0.15 ～1.98±0.63) nmol/L和(0.63 ±0.37 ～3.29±1.49) nmol/L(P＜ 0.05),T4水平先升高后降低,结果为(20.70 ±5.75 ～42.95±19.82) nmol/L,差异有统计学意义(p＜0.05).形态学上,滤泡增生、融合,滤泡上皮细胞脱落,细胞核膜内陷,微绒毛减少,粗面内质网脱颗粒,高尔基体、线粒体肿胀,间质纤维增生,毛细血管扩张、充血.结论 机体甲状腺激素水平的改变,可作为评估SAP病情严重程度的评估指标.
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肿瘤坏死因子在大鼠重症急性胰腺炎并发肾损伤时的表达变化
目的 探讨重症急性胰腺炎并发急性肾损伤时肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA表达变化及其机制.方法 将32只健康SD大鼠随机分为两组:假手术组(n=16)、胰腺炎组(n=16).假手术组开腹仅翻动肠管；胰腺炎组经胆胰管逆行注射3％牛磺胆酸钠(0.05 ml/kg)建立大鼠SAP模型.分别于制模后12、24h采血测定血清淀粉酶活性,血清尿素氮、肌酐浓度和肾脏组织TNF-α mRNA表达变化,观察胰腺及肾脏病理形态学改变.结果 胰腺炎组大鼠血清淀粉酶活性(1046.45±453、37、1916.50±461.91),血清尿素氮(23.49±3.12、39.79±3.51)、肌酐浓度(171.38±43.26、216.25±21.76)及肾组织TNF-α mRNA表达水平均较假手术组明显升高.胰腺及肾脏病理损害严重,腹水的生成(8.89 ±2.16、12.87±3.17)和皂化斑的形成较多；假手术组未见明显异常.结论 SD大鼠SAP时肾组织TNF-α mRNA表达水平明显升高,提示肾脏组织TNF-α在SAP合并急性肾损伤的发病机制中起重要作用.
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我国实验外科当前面临的机遇与挑战
实验外科是外科学的一个分支,它研究的范畴很广,既有科学技术问题,也有思想文化内涵.近年来我国实验外科有了飞速发展,在外科基础方面取得一系列成果,极大地促进了临床外科的进步,与此同时也造就一大批优秀人才.但也清醒地认识到,我们与世界先进水平相比还有不小差距,例如,基础研究的水平整体上与国外差距较大,具有开拓性和独创性的标志性成果鲜有出现;发表的学术论文数目庞大(总数居世界第一、二位),但真正能够转化为临床应用的还很有限;临床外科十分活跃且成果丰硕,但不少是国外新技术的跟踪引进和重复应用,一些重要的技术和设备仍受制于人,临床研究的创新指数和证据级别也有待提高;某些专业和学科高层次人才匮乏令人担忧.当前,我国的国内外形势发生了深刻变化,在此宏观背景下,实验外科也面临一系列新的机遇与挑战,笔者的以下杂谈纯属个人观点,供外科同仁参考.
关键词：
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
