中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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β1整合素反义寡核苷酸对人胰腺癌BXPC-3细胞体外侵袭力的影响
目的观察β1整合素反义寡核苷酸(ASODN)对人胰腺癌BXPC-3细胞体外侵袭力的影响.方法采用脂质体将不同浓度β1整合素ASODN转染到人胰腺癌BXPC-3细胞中,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法和Transwell侵袭室方法分别检测细胞β1整合素mRNA、蛋白表达水平及体外侵袭能力.结果与对照组相比,32～128 mg/L ASODN转染后可抑制β1整合素mRNA和蛋白的表达(P＜0.05),64 mg/L ASODN转染使BXPC-3细胞体外侵袭力明显下降(P＜0.05).结论靶向β1整合素的ASODN可有效抑制其在人胰腺癌BXPC-3细胞中的表达,并降低癌细胞体外侵袭力.
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丁酸钠诱导MCF-7细胞凋亡反义cDNA文库的构建和初步鉴定
目的构建丁酸钠诱导MCF-7细胞凋亡过程的反义cDNA文库,以分离丁酸钠抗肿瘤效应基因.方法收集经2.5 mmol/L丁酸钠处理0、12、18、24、36、48、72 h的人乳腺癌MCF-7细胞,提取poly(A)+RNA,逆转录合成cDNA第一链和第二链,双链cDNA修平末端后连上EcoRⅠ/Hind Ⅲ接头,分别用EcoRⅠ/Hind Ⅲ酶切消化后,反向连上载体pcDNA 3.1,连接产物转化大肠杆菌得一反义cDNA文库,随机挑取40个克隆子进行酶切鉴定.结果构建的反义cDNA文库含1×106重组子,重组效率为90%,插入子平均长度为1.5kb.结论构建的文库容量较大,质量较高,为进一步分离丁酸钠抗肿瘤效应基因奠定了基础.
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转录沉默子8在调控肝再生进程中的作用
目的探讨转录沉默子8(TIS8)基因在调控肝再生进程中的作用.方法野生小鼠(WT鼠)随机分为70%肝切除术组(PH组,每小组5只)和假手术组(SH组,分组同前).TIS8基因敲除鼠(TIS8鼠)亦实施PH,随即分为术后48 h组和术后72 h组,每组5只.使用实时RT-PCR法测定PH和SH后WT鼠不同时相肝组织TIS8的mRNA水平;Western blot检测PH后48 h和72 h WT鼠和TIS8鼠肝组织中TIS8蛋白质的表达水平并结合肝细胞复制周期进行比较.结果WT鼠TIS8基因的诱导表达始于PH后6～12 h,继而下调,但于48 h表达再次上调.WT鼠TIS8蛋白质的表达存在于肝静止期,PH后2～6 h表达减弱,但12～36 h表达再次升高,而48～72 h表达略减弱;然而,TIS8鼠术后48 h和72 h TIS8蛋白质的表达均明显减弱(P＜0.01),说明,肝再生过程中TIS8蛋白质表达的时段恰好对应于肝细胞的有丝分裂进程.结论正常肝再生的有效进程中,TIS8的表达是必需的;TIS8参与了肝细胞有丝分裂进程的调控.
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表达Ki67基因小干扰RNA的选择性增殖溶瘤腺病毒的构建
目的构建表达肿瘤增殖基因Ki67小干扰RNA(Ki67-siRNA)的选择性增殖溶瘤腺病毒.方法设计有小发夹结构的Ki67-siRNA对应模板DNA序列,煺火处理后克隆至pCA13质粒,构建重组质粒pCA13-Ki67.用BglⅡ从pCA13-Ki67酶切出包含CMV启动子及Ki67-siRNA模板DNA序列的表达框,将此表达框克隆进选择性增殖腺病毒质粒pZD55,构建重组质粒pZD55-Ki67.将pZD55-Ki67与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染293细胞,9～12 d后出现病毒空斑.提取重组腺病毒的DNA,聚合酶链反应(PCR)鉴定正确者即为选择性增殖溶瘤腺病毒ZD55-Ki67.大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度.结果成功构建了表达Ki67-siRNA的选择性增殖溶瘤腺病毒.结论成功构建的ZD55-Ki67为利用Ki67-siRNA靶向肿瘤治疗奠定了基础.
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大鼠异体胰腺移植模型的术式探讨
目的探讨大鼠异体胰腺移植模型的手术操作方法,并对大鼠颈部胰段移植和腹部胰十二指肠移植模型的术式和特点进行比较.方法施行颈部胰段移植60次和腹部胰十二指肠移植模型60次,均采用显微外科缝合法进行动、静脉吻合.结果颈部和腹部异体胰腺移植的供体手术时间分别为(31.0±6.0)min和(37.6±3.8)min;受体手术时间分别为(49.2±5.6)min和(60.6±7.8)min.两组供体平均手术时间差异无统计学意义(P＞0.05);腹部模型受体手术时间明显长于颈部模型(P＜0.05).无干预同系移植组中,颈部和腹部异体胰腺移植术后1周存活率分别为93.6%和86.2%,两种术式的手术成功率差异无统计学意义(P＞0.05).结论两种异体胰腺移植术式均可以满足胰腺移植免疫和生理研究的需要.两种术式分别有其各自的优缺点,术式选择主要根据实验者的设计进行.
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带蒂腹直肌包绕阴茎增强犬尿道压力的研究
目的探讨采用带蒂腹直肌包绕球部尿道治疗男性尿失禁的可行性.方法成年雄性比格犬10条,游离阴茎周围组织,建立类似尿失禁模型,取长8.0 cm,宽2.5 cm全层带蒂的腹直肌,包绕球部尿道处阴茎1周.术前,术中,术后1个月、2个月分别测定尿道压力变化.结果术前平均大尿道压力为(48.9±11.0)cm H2O,使用带蒂腹直肌包绕阴茎后,平均大尿道压力为(78.3±20.5)cm H2O,与术前相比,差异有统计学意义(t=4.995,P＜0.01).术后1个月和术后2个月复查时,平均大尿道大压力分别为(92.2±31.6)cm H2O和(88.3±22.4)cm H2O,与术前相比差异均有统计学意义(t=4.011,P＜0.01和t=6.058,P＜0.01).结论采用带蒂腹直肌包绕球部尿道能明显提高尿道压力,为采用此法治疗男性尿失禁提供了实验依据.
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肝癌术后复发及预后与Survivin表达的关系
目的观察凋亡抑制蛋白Survivin在肝癌组织中的表达,探讨其表达与Ki-67增殖指数、肝癌切除术后复发、预后的相关性及其临床意义.方法应用免疫组织化学方法检测55例肝癌组织中Survivin、Ki-67的表达.结果Survivin在肝癌组织中的表达率为52.7%,有门脉癌栓或卫星结节的肝癌Survivin表达率明显高于无门脉癌栓或卫星结节者(P＜0.05),Survivin阳性表达的肝癌切除术后1、3年复发率(55.17%、96.55%)明显高于Survivin阴性表达的1、3年复发率(26.91%、73.08%)(P＜0.05),肝癌切除术后Survivin阳性表达的1、3年生存率(58.62%、10.34%)显著低于Survivin阴性表达的1、3年生存率(76.92%、30.71%,P＜0.05).此外,Survivin阳性表达的肝癌组织Ki-67增殖指数(33.83±18.90)%明显高于Survivin阴性表达的肝癌组织增殖指数(19.60±19.35)%(P＜0.05).结论Survivin可能通过促进肝癌细胞增殖参与肝癌的发展,其表达与肝癌切除术后复发风险高和预后不良相关,可作为肝癌的预后指标.
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5-氟尿嘧啶与双嘧达莫联合对肾癌细胞生长的影响
目的探讨5-氟尿嘧啶(5-Fu)与双嘧达莫(DPM)作用对肾癌细胞生长的影响.方法以人肾癌细胞系(RCC925)为研究对象,运用长春新硷(VLB;Velban)作为参照的有/无核苷酸体外条件培养体系来研究不同浓度5-Fu(0.6、6.0、60.0mg/L)与DPM的作用.结果当DPM浓度不变时,不同浓度5-Fu(0.6、6.0、60.0 mg/L)分别对应的肾癌细胞生长抑制率组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);当5-FU浓度不变时,不同浓度DPM(0、1.25、2.50、5.00、10.00 mg/L)分别对应的肾癌细胞生长抑制率组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);而且6、60 mg/L浓度的5-Fu与5 mg/L DPM联合应用,与单用0.078 mg/L VLB对肾癌细胞的生长抑制率比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论5-Fu与DPM联合应用可优化肾癌治疗.
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bcl-2基因短发夹RNA对自体移植静脉内膜增生的影响
目的探讨针对bcl-2基因短发夹RNA对兔自体移植静脉内膜增生的影响.方法18只新西兰白兔,取颈外静脉,用含pshRNA-bcl-2质粒(基因组)或pH1质粒(空载体组)的阳离子脂质体溶液浸泡,空白对照组无特殊处理,间置于同侧颈总动脉.术后4周采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测bcl-2基因的表达,病理形态学观察血管新内膜增生改变.结果基因组移植静脉内膜的bcl-2的mRNA和蛋白均明显受到抑制.组织学检查显示,基因组新内膜厚度为(85.78±5.47)μm,空载体组为(175.2±10.90)μm,差异有统计学意义(P＜0.01).结论bcl-2基因的短发夹RNA可能通过降低血管bcl-2蛋白的表达抑制移植静脉内膜增生.
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脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸在人膀胱癌EJ细胞中的转染率及稳定性
目的探讨端粒酶反义寡核苷酸(asODN)在脂质体介导下在人膀胱癌EJ细胞中的转染率、分布特点及稳定性.方法合成针对端粒酶RNA模板区的asODN,并行全硫代修饰或不修饰,5'-FITC标记,脂质体介导转染人膀胱癌EJ细胞后分别于15、30 min、1 h以及以后每小时,在电镜下观察asODN在细胞中的表达,分布特点及稳定性.结果在脂质体介导下,未修饰型asODN转染细胞后15 min开始表达,1～3 h稳定表达于细胞中,表达率15%～20%,4 h减退;修饰型asODN 15min开始表达,8 h有56%～80%的高表达,12 h开始消散.结论脂质体是一种有前途的膀胱癌非病毒基因治疗载体.
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培哚普利对心衰大鼠心肌细胞收缩力-频率关系的影响
目的探讨血管紧张素转化酶抑制剂培哚普利在心力衰竭治疗中对心肌细胞收缩力-频率关系的影响及其可能机制.方法通过缩窄雄性Wistar大鼠的腹主动脉制成压力负荷增高性心力衰竭模型.随机分成培哚普利治疗组(CHF-T,每日3 mg/kg体重)、心衰对照组(CHF-C)和假手术对照组(PS).分离左室心肌细胞,应用激光扫描共聚焦显微镜测定单个心肌细胞在0.5、1.0、1.5、2.0 Hz电刺激时的缩短分数及钙瞬变.结果心肌细胞的收缩力-频率关系,在CHF-C组由PS组的正负双向型转变为单纯负向型,而在CHF-T组呈平坦型.心肌细胞的钙-频率关系在PS和CHF-C组与收缩力-频率关系相似,分别呈正负双向型和单纯负向性;而在CHF-T组也为正负双向型,但其[Ca2+]imax峰刺激频率却由PS组的1.5 Hz前移到1.0 Hz.另外,在不考虑刺激频率的情况下,于PS和CHF-C组,心肌细胞的缩短分数与[Ca2+]imax有明显的相关性,而在CHF-T组则相关不明显.结论慢性心力衰竭时,单个心肌细胞的收缩力-频率关系明显受损.长程的ACE抑制剂治疗能抑制上述改变.
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Skp2、PTEN和p27在胶质瘤中的表达及其意义
目的探讨Skp2、PTEN和p27在胶质瘤中的表达及其意义,及其相互关系.方法用免疫组织化学方法检测33例胶质瘤和6例正常脑组织标本中Skp2、PTEN和p27蛋白的表达.结果Skp2在正常脑组织中表达不明显,在低级别胶质瘤中表达较少,在高级别胶质瘤中表达较多,两两比较差别有统计学意义(P＜0.01).PTEN和p27在正常脑组织中表达明显,在低级别胶质瘤中表达较少,在高级别胶质瘤中表达不明显,两两比较差异有统计学意义(P＜0.01).胶质瘤中Skp2蛋白表达与p27蛋白表达呈负相关(r=-0.809,P＜0.01),PTEN蛋白和p27蛋白的表达呈正相关(r=0.865,P＜0.01).Skp2蛋白和PTEN蛋白的表达呈负相关(r=-0.814,P＜0.01).结论在胶质瘤中PTEN的缺失突变导致Skp2在胶质瘤中表达升高,进一步促进p27的泛素化降解,使p27表达降低,失去对细胞周期的调控,从而促进胶质瘤的恶性进展和增殖.
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促进组织工程心脏瓣膜细胞黏附力的初步研究
目的探讨纤维连接蛋白(Fn)增强种子细胞与组织工程心脏瓣膜(TEHV)黏附力的可行性,为组织工程心脏瓣膜的构建提供良好的细胞基础.方法取6个规格相同的有P4HB[聚β羟基丁酯]构建的心脏瓣膜,气体消毒后分别置入12孔板中,每2个为1组,前两组分别被Fn及多聚赖氨酸(poly-lysine)包被,第3组空白对照.24 h后分别种植骨髓基质干细胞0.8×105个,24 h后在瓣膜背面再分别种植0.25×105个.2周后分别行MTT检测及扫描电镜检测;取不同数量的MSC,行MTT检测,制作不同细胞个数与MTT吸收光度的曲线.结果经Fn包被的MTT吸光度A值(0.128 96±0.004 896)及poly-lysine包被的MTT吸光度A值(0.120 33±0.039 91)均明显高于对照组(0.112 54±0.006 556),P＜0.05,Fn组与poly-lysine组比较有统计学意义,前者高于后者.结论Fn能有效的促进细胞在生物可降解的组织工程心脏瓣膜的黏附及增殖,是发展组织工程心脏瓣膜的一种优良的促细胞黏附剂.
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核因子-κB圈套对Kupper细胞活化的抑制作用及其机制
目的探讨核因子-κB(NF-κB)圈套对大鼠Kupper细胞(KCs)活化的抑制作用及其机制.方法分离大鼠KCs并随机分为3组:正常对照组、内毒素(LPS)刺激组及NF-κB圈套组,后者KCs在LPS刺激前转染NF-κB圈套.除对照组外,两个实验组培养液中加入终浓度为1 mg/L的LPS.于LPS刺激6 h后,凝胶电迁移率改变分析法(EMSA)检测NF-κB蛋白结合活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测KCs膜表面CD80 mRNA表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6表达情况.结果转染NF-κB圈套可以高效抑制KCs激活,EMSA结果显示NF-κB活性仅为LPS组的0.53,RT-PCR结果显示KCs CD80mRNA表达仅为LPS组的0.46,ELISA结果显示培养上清TNF-α表达量仅为LPS组的0.37,IL-6仅为LPS组的0.60.结论NF-κB圈套可以高效抑制NF-κB的转录活性,降低KCs膜表面共刺激分子和细胞因子的产生,为活体内应用NF-κB圈套提供了可靠的实验依据.
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化疗前后乳腺癌细胞基因表达谱的变化
目的探讨乳腺癌细胞经化疗药物处理前后分子水平变化特征.方法应用含14 000个基因的人cDNA芯片检测经阿霉素(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、甲氨喋呤MTX)及AF(ADM+5-Fu)和MF(MTX+5-Fu)处理前后MCF-7和MDA-MB-231细胞基因表达谱的变化.结果两种细胞经不同药物处理后基因表达的变化有差异,通过cDNA芯片检测,得到了每种细胞经不同药物处理后差异表达的基因,并初步筛选出经ADM处理后在两个细胞株中均差异表达且表达趋势相同的基因10个,5-Fu处理组49个,MTX处理组8个,AF处理组10个以及MF处理组58个,这些基因涉及细胞骨架、细胞增殖、分化及周期调控、基因转录和翻译以及细胞物质与能量代谢等多方面.结论药物作用所致细胞分子水平的变化复杂,涉及多种途径、多个基因,芯片技术可为筛选化疗敏感基因提供全面、可靠的技术支持.
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选择性绿激光治疗前列腺增生症患者血清游离/总前列腺特异性抗原的变化
目的观察经尿道选择性绿激光前列腺汽化术(PVP)治疗前列腺增生症(BPH)患者,血清中的总前列腺特异性抗原(T-PSA)、游离PSA(F-PSA)水平和总/游离(F/T)PSA比值的变化,探讨其在PVP术后随访中的意义.方法对120例BPH患者行PVP治疗,采用化学发光免疫法分别检测术前1 h、术后24 h和1个月患者血清中的总PSA和游离PSA水平,并计算游离/总PSA比值,随访比较分析手术前后PSA变化差异.结果术后24 h患者血清总PSA值平均为(15.5±8.4)μg/L及游离PSA值平均为(2.8±1.2)μg/L,均明显高于术前患者血清总PSA值(4.2±1.5)μg/L及游离PSA值(0.8±0.3)μg/L,差异有统计学意义(P＜0.05).血清游离/总PSA比值术前术后比较差异无统计学意义(P＞0.05).术后1个月血清总PSA值、游离PSA值及游离/总PSA比值与术前比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论与血清中的总PSA和游离PSA水平相比,血清游离/总PSA比值是PVP术后短期及长期随访的一个更可靠指标.
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急性高容量血液稀释下肝下下腔静脉阻断对血流动力学的影响
目的观察琥珀酰明胶行急性高容量血液稀释(AHHD)对Pringle法联合肝下下腔静脉阻断行肝部分切除患者血液动力学的影响.方法选择ASAⅠ～Ⅱ级择期行肝切除术的患者20例,麻醉诱导后20～30 min内输入琥珀酰明胶(20 ml/kg体重),行第一肝门联合肝下下腔静脉阻断,联合阻断和开放过程根据HR、MAP和CVP调节异氟醚吸入浓度和复方氯化钠输入速率,必要时用血管活性药物.记录AHHD、阻断和开放三个过程不同时间点的HR、MAP和CVP的变化.结果与AHHD前比较,MAP在AHHD完成即刻[(84±10)mm Hg]和AHHD后10 min[(85±9)mm Hg]均有明显升高(P＜0.05);CVP在AHHD 10 min[(9.7±2.0)cm H2O]、AHHD完成即刻[(12.6±2.3)cm H2O]和AHHD后10 min[(12.4±1.9)cm H2O]均有显著性升高(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).与联合阻断前比较,MAP在阻断后5 min[(69±10)mm Hg]、10 min[(72±11)mm Hg]下降显著(P＜0.05);CVP在阻断后1 min[(7.2±2.4)cm H2O]、5 min[(4.8±2.8)cm H2O]和10 min[(5.0±2.3)cm H2O]均明显下降(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01);与阻断开放前比较,MAP在阻断开放后5 min[(79±12)mm Hg]、10 min[(78±10)mm Hg]上升显著(P＜0.05);CVP在阻断开放后1 min[(9.8±2.4)cm H2O]、5 min[(11.2±2.8)cm H2O]和10 min[(11.5±2.5)cm H2O]均明显上升(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).在整个手术过程中HR的变化差异无统计学意义.结论术前急性高容量血液稀释,阻断过程中必要时再辅以小剂量血管收缩药,可安全地用于Pringle法联合肝下下腔静脉阻断行肝部分切除术.
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钙通道抑制剂对人肝细胞钙池操纵钙通道电流的影响
目的探讨钙池操纵钙通道(SOC)抑制剂(2-APB)对人肝细胞SOC电流(Isoc)的影响.方法应用全细胞膜片钳记录技术测定人肝细胞Isoc,并观察2-APB对该电流的影响.结果(1)培养的人肝细胞记录到Isoc,从其电流-电压(Ⅰ～Ⅴ)曲线可以看出该Isoc的反转电位为+3.0 mV左右.在钳制电位为-100mV时,该Isoc为(-682.83±171.40)pA(n=8);(2)60、80μmol/L的2-APB分别使Isoc由给药前的(-682.83±171.40)pA下降至给药后的(-359.54±201.85)、(252.15±158.81)pA,给药前后差异有统计学意义(n=8,P＜0.05或P＜0.01);2-APB的抑制作用呈浓度依赖性增强,其EC50为(63.36±9.57)μmol/L.结论2-APB对培养的人肝细胞Isoc具有显著的抑制作用.
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上皮钙黏附素和树突细胞在膀胱癌中的表达及其意义
目的探讨膀胱癌中上皮钙黏附素(E-cd)和树突细胞(DC)的表达及其与生物学行为的关系.方法免疫组织化学检测采用链霉素-生物素(LSAB)免疫酶染色法,对65例膀胱癌手术切除标本中的E-cd、DC的表达进行了对照检测,染色时用已知E-cd和S100阳性的正常膀胱黏膜及膀胱肌层内神经作阳性对照,用PBS取代一抗作阴性对照.结果65例膀胱癌中33例E-cd正常表达(50.8%),20例DC正常表达(30.8%),E-cd正常表达率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为70.1%、66.6%和25.9%,在Tis-1期和T2-4期肿瘤中分别为80.6%和23.5%;DC正常表达率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为76.5%、33.3%和0,在Tis-1期和T2-4期肿瘤中分别为63.3%和2.7%.在不同病理分级和临床分期的膀胱癌中,E-cd和DC的正常表达率差异有统计学意义(P＜0.05).结论E-cd和DC的正常表达率均随膀胱癌的病理分级、临床分期的上升而下降,E-cd和DC正常表达者的肿瘤复发率和死亡率均显著低于异常表达表.E-cd和DC可作为预测膀胱癌生物学行为的指标之一.
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血管内皮生长因子定向转染诱导缺血心肌血管生成的研究
目的观察血管内皮生长因子(VEGF)质粒直接心肌注射对兔急性心肌缺血后侧支循环形成的影响.方法建立兔左冠状动脉结扎的急性心肌缺血模型,取缺血边缘区以先期构建的真核表达质粒pcDNA3/VEGF16s和真核载体pcDNA3的DNA分别多点心肌注射,给药后2、4周取材分别行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白浓度分析、苏木素-伊红(HE)染色、VEGF染色.结果治疗组VEGF165 mRNA含量较对照组明显增多;蛋白浓度分析转染后VEGF165显著增多,高峰出现于实验后2周;治疗组缺血心肌新生血管数目明显多于对照组.结论VEGF165外源性基因能在转染心肌细胞后成功表达,促进了缺血心肌血管新生和侧支循环形成.
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反义缺氧诱导因子-1α对胰腺癌生长转移的影响
目的观察反义缺氧诱导因子(HIF)-1α对胰腺癌生长、转移的影响及其与β1-integrin的关系.方法缺氧条件下(0.5%O2)体外培养4 h,未转染反义HIF-1α质粒的BxPc-3细胞设为缺氧对照组;常氧条件下体外培养,未转染反义HIF-1α质粒的BxPc-3细胞设为常氧对照组;缺氧条件下(0.5%O2)体外培养4 h,稳定转染反义HIF-1α质粒的BxPc-3细胞设为实验组.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测HIF-1α和β1-integrin的表达情况.Transwell侵袭室方法检测BxPc-3细胞侵袭能力.裸鼠皮下接种BxPc-3细胞8周后,观察各组肿瘤生长情况.结果实验组HIF-1α和β1-integrin的表达明显降低,迁移的细胞数远少于对照组(P＜0.05);实验组肿瘤的体积、重量、生长速度远低于对照组(P＜0.05).结论反义HIF-1α可能通过阻断β1-integrin的表达而抑制胰腺癌的生长和转移.因此,阻断HIF-1α的表达为胰腺癌基因治疗提供了新途径.
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原发性肝细胞癌消减杂交文库构建及差异表达基因筛选
目的构建人原发性肝细胞癌(HCC)消减杂交文库,筛选差异表达基因.方法以癌组织为检测者(tester)、癌旁组织为参照者(driver),应用抑制性消减杂交(SSH)方法构建消减杂交cDNA文库,随机挑选56个阳性克隆进行鉴定、测序及同源性分析.结果文库获得130个阳性克隆,鉴定96%有200～1 500bp插入片断.获得的35个基因中包括已知基因26个,功能未知基因5个,新基因4个.已知基因中包含酶、细胞信号转导、基因调控因子、转录调节因子、癌基因、抗凋亡因子及细胞的黏附与生长调节因子等相关基因.结论应用SSH方法成功构建HCC差异表达基因cDNA文库,筛选出低丰度和新基因在内的HCC差异表达基因.
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术后早期腹腔内化疗治疗胃肠道恶性肿瘤
腹腔内区域性化疗优于其他给药方式其意义在于提高肿瘤部位药物浓度,提高杀伤力,并减轻全身毒副作用.我们于1999年5月至2003年12月对68例胃肠道恶性肿瘤患者临床应用腹腔内化疗,取得较好效果.
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不同细胞因子体外诱导骨髓间充质干细胞定向肝细胞分化的研究
肝脏损伤修复过程是一个多步骤、多因子、涉及多种信号相互作用的精确而有序的复杂过程,肝脏损伤后骨髓间充质干细胞(BMSCs)参与肝脏再生就是以上因素综合作用的结果[1-4].我们模拟体内多种细胞因子协同作用进行体外诱导,观察体外不同细胞因子对BMSCs定向肝细胞分化率的影响,探讨提高诱导分化率的佳条件.
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软骨细胞混合液态胶原铸型成组织工程化软骨
我们通过将浓缩后的液态胶原-软骨细胞复合液注入到铸模中,经体外培养,构建组织工程化透明软骨样组织.
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脊髓神经干细胞定向分化为神经元过程中生长相关蛋白-43和钙调蛋白的表达
我们通过本实验在分离培养大鼠脊髓神经干细胞(NSCs)的基础上,研究其在定向分化为神经元过程中生长相关蛋白-43(GAP-43)和钙调蛋白(CaM)的表达及两者相关性,为神经干细胞的研究和应用奠定理论基础.
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用于静脉血管桥近端吻合的一次完成型血管机械吻合装置
目前,随着冠状动脉搭桥术手术技术的不断提高,人们对尽可能缩短血管桥吻合时间,从而缩短手术时间,保证手术安全性这一观点,有了更加肯定的认可[1].我们通过本实验设计的一次完成型血管机械吻合装置(OVAD)可以瞬间快速的完成血管吻合,且不损伤血管内膜[2].
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手汗症患者胸交感神经超微结构观察
我们于2004年3月至2004年9月对23例手汗症患者经胸腔镜手术切除的胸交感神经组织进行超微结构观察,初步探讨手汗症的发病机制.
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大鼠不同丘脑核团毁损对痛阈改变的研究
长期以来,人们用丘脑核团毁损治疗包括顽固性癌痛在内的各种慢性疼痛的报道[1-6].本研究旨在毁损临床常用的丘脑相关的镇痛核团,比较其镇痛效果.
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银杏酮酯对周围神经再生的影响
张烽等[1]曾报道银杏叶提取物(EGb24/6)20 mg/d灌胃有助于周围神经再生.EGb24/6的明确有效成分仅为30%.而由我国自行研制生产的第5代银杏叶提取物银杏酮酯(EGb50)首次使银杏叶提取物明确有效成分超过50%,理论上应更能促进神经再生.本研究旨在观察EGb50对促进神经再生的有效性.
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联合中心静脉导管治疗暴发性胰腺炎时腹腔室膈综合征的临床研究
重症急性胰腺炎(SAP)的治疗基本有章可循,但暴发性胰腺炎(FAP)治疗无章可循,而SAP患者中约25%为FAP,FAP并发腹腔室膈综合征(ACS)时其病死率可高达60%[1,2].我们联合腹腔中心静脉导管置管引流并检测腹腔内压、多次短时血滤(SVVH)、呼吸机支持呼吸和胃肠道中药清洗对FAP时的ACS进行了临床研究.
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青皮注射液对鼠脑梗死灶周围葡萄糖利用率的影响
有研究表明,适当提高动脉压能减小脑梗死灶体积[1],青皮有兴奋肾上腺素α受体升高动脉血压的作用[2].为观察青皮对脑局部葡萄糖利用率(LCGU)的影响,我们在大鼠局灶性脑缺血模型上进行了研究.
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RNA干涉胰岛素样生长因子1类受体的研究
RNAi技术的关键是siRNA的制备,实验结果证实,通过发卡结构的小RNA(shRNA)载体表达siRNA可以抑制特定靶基因表达[1].我们通过将针对IGFIR基因的RNA干扰片段装入特定质粒PSUPER中,再转染入人肝癌细胞株SMMC7721中,并筛选出稳定株.
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骨水泥阻塞髓腔后对远侧关节的影响
临床上骨水泥型人工关节存在的缺陷可以造成许多的并发症[1].研究结果显示,骨水泥填塞骨干髓腔后可以导致股骨远端骨内压明显升高并持续存在[2],本研究旨在探讨该改变对股骨远侧关节的影响.
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兔侧后方腰椎融合模型的建立和效果评价
有许多因素影响腰椎的融合过程,在临床上研究单一因素的作用十分困难.而动物模型提供了一个可行的方法来解决这一问题,我们根据临床科研的需要,在参考相关文献的基础上,复制建立了兔的横突间植骨腰椎融合模型[1,2].
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吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对NF-κB调控基因血管内皮生长因子转录和表达的影响
血管内皮生长因子(VEGF)是重要、特异的一种血管发生特异性生长因子,在肿瘤血管的形成中起关键作用.
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冠心患者外周血单个核细胞体外诱导分化的研究
内皮祖细胞(EPCs)是干细胞移植疗法常见的种子细胞之一.EPCs是指外周血、骨髓和脐血中存在的内皮细胞前体细胞,具有定向分化成为成熟内皮细胞的能力,并可参与缺血组织血运重建,有效促进血管新生,增加局部缺血组织血流,是出生后组织血管新生的重要途径[1,2].
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硝苯地平体外对人精子运动功能及顶体反应的影响
近年来发现精子对L型Ca2+通道阻断剂二氢吡啶类较为敏感[1].本研究旨在探讨正常血药浓度下,二氢吡啶类阻断剂硝苯地平(NIF)体外对人精子活力、活率及顶体反应的影响,从而为男性不育的诊断、开发新型避孕药以及指导临床用药提供帮助.
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采用藻酸钙培养法在体外构建工程化关节软骨组织
Masuda等[1]近报道了用藻酸钙短期培养牛软骨细胞,然后利用收集的细胞及基质培养成无支架的软骨组织获得成功,我们试图用羊的软骨细胞,采用该方法培养无支架的软骨组织,为构建组织工程软骨用于临床开辟新的途径.
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丝状支架韧带材料机械强度和体外降解性研究
膝关节交叉韧带断裂是发生率较高且严重的运动创伤,由于交叉韧带自身愈合能力差,人们很早就放弃了单纯缝合修复的方法,而多使用移植物重建[1].本实验旨在通过观察丝状支架的机械强度和体外降解性,探讨其临床应用的可行性及其影响因素.
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抑制心内直视术中核转录因子激活保护心肌研究
心肌在缺血再灌注中产生的氧自由基可激活心肌细胞核转录因子(NF-κB)[1],后者进入细胞核启动有关基因的转录,导致合成多种炎性细胞激酶和白细胞粘连分子,从而引起白细胞黏附浸润,释放氧自由基,损伤心肌.有研究将抑制NF-κB激活的制剂用于这一病理过程,心肌损伤减轻[2].
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胃癌组织中核转录因子-κB表达与意义
核转录因子-κB(NF-κB)是一种转录因子、调节许多基因的表达.我们通过免疫组织化学检测了53例胃癌及18例正常胃组织中NF-κB的表达及分析其与胃癌生物学行为的关系.
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肿瘤微生态系统研究进展
肿瘤微生态系统(TMES)假说是利用生态系统发展到一定阶段后系统依照其内部群落间的营养联系和反馈调节使它的结构和功能能够保持相对稳定的固有基本规律,结合人体组织具有自我更新(SR)和损伤后修复的固有特征及肿瘤只能在能分裂的细胞中发生和发生的多步骤过程的共识来探讨肿瘤干细胞(TSC)的来源、并解释肿瘤组织异质性、自主增殖及侵袭转移等行为的原因,同时推测肿瘤演进的规律及潜在的治疗方法.
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肠道干细胞与肠道损伤修复研究进展
胃肠道黏膜上皮细胞终身不断自我更新以维持其动态平衡,而这种动态平衡需要干细胞来调节细胞增殖、衰老及凋亡,由此可见肠道干细胞在维持肠道结构与功能的完整以及损伤后的修复中扮演着重要角色.
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免疫重建荷PAa肺癌SCID小鼠模型
目的探索建立人肺癌PAa-PBL-SCID模型的方法.方法将健康人外周血淋巴细胞(h PBL)2.5×107注入实验组SCID小鼠腹腔内,同时双侧腹股沟皮下注射PAa细胞,1×106/侧;对照组仅双侧腹股沟皮下注射PAa细胞,1×106/侧.第2、4、6周鼠内眦动脉取血,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定人IgG含量.比较肿瘤大小,免疫组织化学检测小鼠肿瘤中人T淋巴细胞的存在.结果模型成瘤率为100%,成瘤潜伏期8～15 d.2、4、6周时小鼠血中人IgG分别达(60.36±5.42)mg/L,(86.65±7.76)mg/L,(124.24±5.66)mg/L.模型小鼠的肿瘤明显小于对照组小鼠,差异有统计学意义(P＜0.05).6周时免疫组织化学检测出人淋巴细胞分布于小鼠肿瘤组织中.处死动物,常规病理切片见肿瘤生长.结论SCID小鼠腹腔注射人淋巴细胞、皮下注射肺癌细胞能够建立人PAa-PBL-SCID模型.
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大鼠隐匿阴茎动物模型的建立
目的建立大鼠隐匿阴茎动物模型,为进一步研究阴茎包埋对阴茎海绵体结构与功能的影响提供实验模型.方法取2周龄雄性SD大鼠75只,随机分为A、B、C、D、E 5组各15只,A、B、C和D组分别用阴茎根部外荷包缝合法、包皮折叠缝合法、包皮切除法和阴茎根部内荷包缝合法包埋阴茎,E组为假手术组.结果术后第1天,A组有1只死于尿潴留,B和D组各有1只死于麻醉.A组手术操作简单,B、C和D组手术操作相对复杂;A、C和D组包埋效果较B组好;A、B和D组可解除包埋,C组解除包埋困难;由于A、B和C组缝合线外露,易被大鼠撕咬致阴茎外露,而难以建立成功的包埋模型;D组可于术后第2月、第4月和第6月解除阴茎包埋.结论阴茎根部内荷包缝合法可较好地建立2周龄大鼠隐匿阴茎动物模型.
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结直肠外科临床与基础研究展望
结直肠外科在国外是一专科性极强的专业,我国以肛肠外科的形式发展也有悠久的历史,但以现代科学为基础的临床基础研究,无论与国外、还是与国内兄弟学科相比,均存在明显差距.基于国内结直肠外科疾病的明显增加以及人们对生活质量要求的提高,基于建立于现代科学理念及传统中医系统观之上的中国结直肠外科专科化建设迫在眉睫,系统性的结直肠外科临床与基础研究势在必行.以下就目前存在的热点问题提出讨论.
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大肠外科实验研究现状与发展方向
近年来无论是大肠的炎症性疾病、良性肿瘤、恶性肿瘤抑或其功能性疾病的发病率均有增高的趋势,因此大肠外科的实验研究亦取得了长足进步,现就其实验研究现状与发展方向作一简述.
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核糖核酸干扰抑制生存素表达诱导小鼠结肠癌细胞凋亡
目的筛选强效抑制生存素Survivin基因表达的小干扰核糖核酸(siRNA),探讨Survivin基因抑制对小鼠结肠癌细胞凋亡的影响.方法根据siRNA的设计规则和Survivin序列,设计3段侯选siRNA,聚合酶链反应(PCR)法制备表达框;将siRNA表达框与Survivin-绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因表达质粒(pSurvivin-EGFP)共转染293T细胞,24～48 h后根据荧光强度筛选强效siRNA;再制备其表达质粒转染小鼠结肠癌CT26细胞,应用实时荧光定量(FQ)-聚合酶链反应和蛋白印迹(Western blot)法分析Survivin基因的表达;DNA末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪(FCM)Annexin V/丙化碘锭(PI)双染色法检测细胞凋亡.结果筛选出1段高效抑制Survivin表达的siRNA,可使CT26细胞内Survivin mRNA拷贝数明显减少,抑制率为86.9%;蛋白表达水平亦显著降低;TUNEL检测显示转染48 h后RNA干扰组和对照组凋亡细胞数分别为(60.13±5.71)个和(5.47±0.63)个,两组差异有统计学意义(P＜0.01);FCM检测转染后1、2、3、4 d凋亡细胞比率分别为2.1%、4.9%、11.7%和32.6%,对照组4个时间点凋亡率均低于1.5%,两组差异有统计学意义(P＜0.01).结论siRNA能有效抑制小鼠结肠癌CT26细胞内Survivin基因表达并诱导结肠癌细胞凋亡.
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FHIT和p53在结肠癌中的表达及其意义
目的探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)基因和p53基因在结肠癌中的表达及其与临床病理因素的关系.方法采用免疫组织化学链菌素亲生物素-过氧化酶法(SP法)法检测74例结肠癌组织中FHIT和p53的表达.结果FHIT和p53在结肠癌中表达率分别为52.7%和56.8%.FHIT蛋白的丢失在结肠癌中占47.3%,FHIT蛋白低表达癌在癌组织学分级中的分布为低分化癌10/12,高中分化癌25/62,;在Dukes分期中的分布为C、D期癌23/37,A、B期癌12/37;在有淋巴转移组中为23/37,无淋巴转移组中为12/37.30例获访病例中,FHIT蛋白低表达癌在5年随访病例组中的分布为5年生存组为6/17,5年死亡组为10/13.两者与结肠癌的分化程度、病理分期(Dukes分期)、淋巴转移情况和五年生存率均有明显相关(P＜0.05).结论结肠癌组织中FHIT蛋白的丢失是频发事件,FHIT可能是结肠癌发生中重要的抑癌基因;FHIT和p53的表达,可作为评估结肠癌高危因素和恶性生物学行为的参考指标.
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RAB5A、基质金属蛋白酶-9在大肠癌中的表达及其关系
目的检测RAB5A、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在大肠癌组织中不同部位的表达及两者之间的相互关系.方法应用免疫组织化学SP法对46例大肠癌组织、距癌灶3 cm的癌旁组织和23例非肿瘤患者大肠组织中RAB5A和MMP-9进行检测.结果46例大肠癌组织中,RAB5A蛋白的表达阳性率为100%(46/46),阳性表达位于胞质和胞膜;MMP-9的表达阳性率73.91%(34/46),阳性表达位于胞质.RAB5A和MMP-9表达在有淋巴结转移、Dukes分期晚及分化程度低的患者中表达程度高(P＜0.05),MMP-9的表达还在大肠癌浸润度深的患者中表达程度高(P＜0.05).RAB5A和MMP-9的表达与性别、年龄、肿瘤部位均无关(P＞0.05).RAB5A和MMP-9的表达存在正相关(P＜0.05,r=0.434).结论RAB5A和MMP-9的表达有可能作为判断大肠癌恶性程度、转移的参考指标.
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生长激素和生长抑素对人结肠癌裸鼠移植瘤模型的影响
目的观察外源性生长激素(GH)和生长抑素(SS)对人结肠癌细胞株HT-29裸鼠移植瘤模型肿瘤生长和裸鼠血清蛋白水平的影响.方法接种结肠癌细胞株HT-29建立裸鼠移植瘤模型.比较移植肿瘤体积、细胞周期分布、增殖指数(PI)、凋亡率、bcl-2和bax mRNA水平,以及裸鼠血清蛋白水平.结果生长抑素能够明显抑制移植瘤的生长(P＜0.05)、降低移植瘤PI(P＜0.05)、促进移植瘤细胞凋亡(P＜0.01)、降低移植瘤bcl-2 mRNA表达(P＜0.05)、提高移植瘤baxmRNA表达(P＜0.05),生长激素则表现出相反的作用.生长激素能够改善移植瘤导致的低蛋白血症(P＜0.05).结论外源性生长抑素能够显著抑制人结肠癌裸鼠移植瘤生长,外源性生长激素单独或联合生长抑素应用能够改善荷人结肠癌移植瘤裸鼠低蛋白血症,但具有潜在的促进肿瘤生长的作用.
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放线菌素D在cFLIP抑制大肠癌细胞凋亡中的作用
目的探讨放线菌素D(Act D)在下调cFLIP表达水平增加大肠癌细胞凋亡中的作用.方法应用流式细胞仪(FCM)技术检测ActD预处理的人大肠癌细胞(SW620)凋亡水平、Fas受体及cFLIP蛋白表达的变化情况,并观察在ActD存在时,cFLIP蛋白对大肠癌细胞凋亡的影响.结果10μg/L ActD作用于SW620细胞后,cFLIP蛋白的表达水平随着作用时间的延长而降低.ActD作用24 h后,cFLIPL表达强度由94.4%下降到71.8%,此时1 mg/L的抗Fas抗体诱导SW620细胞凋亡率达33.7%,但Act D本身对大肠癌细胞的凋亡及Fas受体表达无明显影响(P＞0.05).结论低浓度放线菌素D可明显下调SW620细胞中cFLIP蛋白的表达水平并显著增加大肠癌细胞的凋亡率,Act D有可能成为靶向调节cFLIP蛋白在大肠癌细胞中表达的理想药物.
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RNA干扰靶向抑制表皮生长因子受体表达对大肠癌细胞增殖的影响
目的观察RNA干扰(RNAi)技术能否有效抑制大肠癌LoVo细胞株表皮生长因子受体(EGFR)的表达以及对细胞增殖的影响.方法构建质粒表达载体pU6-EGFR-shRNA-1和pU6-EGFR-shRNA-2;脂质体瞬时转染后24、48、72、96、144 h实时荧光定量PCR(Real Time PCR)和Western blot检测EGFR表达,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,并绘制细胞生长曲线;分5组:A组:LoVo细胞组;B组:Lipofectamine2000组;C组:对照载体HK组;D组:pU6-EGFR-shRNA-1组;E组:pU6-EGFR-shRNA-2组.结果D组E组细胞转染shRNA后mRNA和蛋白表达降低,G0～G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞凋亡率增加,对数生长期延迟,以48 h效果显著,和A组B组C组比较差异有统计学意义(P＜0.05);但随着时间的推移其干扰作用降低.结论两条EGFR-shRNA均可有效抑制大肠癌LoVo细胞EGFR表达,阻滞更多的细胞位于G0～G1期,促进细胞凋亡而抑制细胞增殖.
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中下段直肠癌血管内皮生长因子表达与直肠系膜转移的关系
目的分析中下段直肠癌血管内皮生长因子(VEGF)表达与临床病理特征的关系,初步探讨中下段直肠癌直肠系膜转移的分子机制.方法采用病理大切片前瞻性研究56例中下段直肠癌直肠系膜转移情况,采用免疫组织化学技术检测肿瘤组织VEGF表达.结果57.1%(32/56)中下段直肠癌VEGF表达阳性;T3直肠癌VEGF表达阳性率为74.1%,明显高于T2和T1直肠癌的43.5%和33.3%(P＜0.05);淋巴结转移阳性的中下段直肠癌VEGF表达阳性率为72.4%明显高于淋巴结转移阴性的40.7%(P＜0.05);中下段直肠癌直肠系膜转移率为64.3%(36/56).36例系膜转移阳性直肠癌25例(69.4%)VEGF表达阳性,而20例系膜转移阴性直肠癌仅7例(35%)VEGF表达阳性,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论中下段直肠癌VEGF表达与浸润深度和淋巴结转移密切相关.VEGF可能参与中下段直肠癌直肠系膜转移的发生.
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转基因联合泰素帝治疗耐药结直肠癌
目的探讨可溶性血管内皮细胞生长因子受体2基因(sFlk-1)转染联合泰素帝治疗耐药结直肠癌.方法随机均分40只裸鼠至A、B、C、D组,A、B组种植转sFlk-1基因的耐药结直肠癌细胞,C、D组种植耐药结直肠癌细胞,A、C组接受泰素帝(200μg/3 d)治疗.70 d后比较各组裸鼠瘤重,微血管密度(MVD)和凋亡情况.结果A组瘤重(0.12±0.03)g明显小于B(0.22±0.02)g和C组(1.26±0.03)g、(P＜0.01),但A、B和C组瘤重均小于D组(1.26±0.03)g、(P＜0.01).A组MVD明显少于其他组,凋亡增加(P＜0.01).结论sFlk-1基因和泰素帝均能抑制耐药结直肠癌生长,两者联合并非简单作用相加,而是协同增效.
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钙调神经磷酸酶信号转导通路在结直肠癌组织中的表达
目的检测钙调神经磷酸酶(CaN)信号转导通路在结直肠癌组织中的表达,分析CaN成员与结直肠癌临床病理特征的关系.方法应用Western blot检测40例结直肠癌组织及其邻近正常黏膜中CaN Aα、CaN Aβ、CaN B与bcl-2蛋白表达,免疫组织化学法检测CaN在细胞水平的分布.结果结直肠癌组织中CaN信号传导通路成员CaN Aα、CaN Aβ、CaN B与bcl-2在结直肠癌组织中表达明显升高,分别为正常黏膜的3.45倍、3.67倍、4.31倍与3.18倍(P＜0.05);CaN Aα与CaN Aβ表达水平与TNM分期较晚(Ⅲ/Ⅳ)有关(P＜0.05),CaN Aα与bcl-2在结直肠癌组织中表达情况呈线性相关,相关系数为0.493,P＜0.05.结论CaN信号转导通路持续活化可能在结直肠癌的发生中起重要作用.
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多烯紫杉醇免疫脂质体对结肠癌细胞的靶向放射增敏作用
目的探讨免疫脂质化的多烯紫杉醇对LoVo细胞的放射增敏作用.方法制备偶联CEA抗体的多烯紫杉醇脂质体,测定抗体活性及细胞结合率,分析其对LoVo细胞体外放射增敏作用.结果多烯紫杉醇免疫脂质体平均粒径为:(213.0±17.4)nm、包封率为97.6%、较多烯紫杉醇脂质体处理的LoVo细胞荧光强度差异有统计学意义(P＜0.01);偶联抗CEA单抗的免疫活性无明显改变;2 nmol/L和100 nmol/L多烯紫杉醇免疫脂质体均可提高LoVo细胞放射敏感性,SERD0分别为1.70、1.78,而2 nmol/L多烯紫杉醇脂质体对其放射敏感性的的影响不明显,SERD0为1.02.结论多烯紫杉醇免疫脂质体可特异的与LoVo细胞结合并具有放射增敏作用.
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实验外科中动物的生物安全、保护和福利伦理
自古至今,实验外科学的发展和研究,离不开实验动物和各种人类疾病动物模型.研究中,往往在动物机体上,利用实验外科的方法和生物医学技术,揭示人类疾病的发病机制、症状表现、治疗方法和康复转归过程,为临床外科学提供科学、实用的参考依据,造福于人类的健康.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
