中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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多剂量应用甘露醇对脑挫裂伤大鼠脑水肿及水通道蛋白-4的影响
目的 观察大鼠脑挫裂伤形成的创伤性脑水肿病理过程中水通道蛋白-4(AQP4)的表达与脑水肿形成之间的关系以及脑挫裂伤时多剂量应用甘露醇对水通道蛋白-4表达的影响.方法 采用自由落体脑损伤模型方式制作大鼠左顶叶脑挫裂伤模型,通过对应用多剂量甘露醇前后(1、6、12、24、48 h)脑挫裂伤组织免疫组织化学方法和半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测AQP4 mRNA的表达,干湿重法测定脑组织水含量.结果 与对照组比较,脑挫裂伤后自6 h开始脑组织水含量持续增加(P《0.05),并在24 h时达到高峰;AQP4 mRNA和蛋白质在脑水肿区表达增强,挫裂伤未进行甘露醇治疗组(IR)6 h AQP4 mRNA(吸光度值,A)由0.33±0.04上升到0.58±0.05(P《0.05),48 h AQP4 mRNA(吸光度值,A)由12 h的0.61±0.07上升到0.78±0.10(P《0.05);甘露醇应用后(MI组)挫裂伤灶AQP4 mRNA和蛋白质从6 h开始明显增高(P《0.05),并随着时间推移含量持续增高,甘露醇应用后6 h和12 h与应用前相应时间组之间差异无统计学意义(P》0.05);伤后24 h和48 h明显高于应用前相应时间组,两者差异有统计学意义(P《0.05).在整个脑水肿的形成过程中AQP4 mRNA和脑组织含水量呈正相关(rs》0.780,Ps《0.05).结论 脑挫裂伤后AQP4 mRNA和蛋白的表达明显增强,提示AQP4参与了脑挫裂伤创伤性脑水肿的发生发展过程,水通道蛋白的改变可能是甘露醇出现"反跳现象"的重要原因之一.
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子鼠胰腺干细胞与胰岛联合移植治疗糖尿病
目的 探讨利用子鼠胰腺干细胞与胰岛联合移植保护移植胰岛,提高糖尿病移植疗效的可行性.方法 分离纯化孕16 d SD大鼠子鼠:胰腺干细胞培养传代,行Nestin免疫组织化学及流式细胞术鉴定;分离纯化SD大鼠胰岛,分联合移植组(10只)、单独移植组(10只)及正常对照组(10只),分别将2×105个子鼠:胰腺干细胞与800个胰岛和单纯800个胰岛移植至糖尿病大鼠模型左肾包膜下,定期监测各组大鼠血糖情况及留取血浆ELISA测胰岛素含量,观察胰岛存活时间.结果 子鼠:胰腺干细胞培养传代3代后细胞涂片免疫组织化学示存在Nestin阳性细胞,流式细胞术测定nestin阳性细胞含量占74.1%.联合移植组大鼠均于术后第3天起血糖开始下降,血浆胰岛素水平逐渐升高,术后5 d内血糖可降至正常[(5.4±0.6)mmol/L],血浆胰岛素达到正常水平[(509.8±16.6)ng/L],胰岛存活时间(18.2±2.4)d;单独移植组大鼠血糖可于术后1周内降至正常[(6.1±0.9)mmol/L],胰岛存活时间(14.4±2.1)d;两组胰岛存活时间差别有统计学意义(P《0.05).结论 子鼠胰腺干细胞与胰岛联合移植可保护胰岛功能,延长胰岛体内存活时间,提高移植疗效.
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黏液基因2反义寡核苷酸对胃癌细胞黏附功能的影响
目的 观察应用反义脱氧寡核苷酸(ASODN)体外抑制MUC2对人胃癌细胞株SGC7901黏附活性的影响.方法 应用人工合成的MUC2 ASODN经阳离子脂质体包裹后转染入胃癌细胞株SGC7901,采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学、玫瑰红法检测与内皮细胞黏附能力、噻唑蓝(MTT)法检测其与基质的黏附能力等方法体外观测对胃癌细胞黏附作用的影响.结果 RT-PCR结果显示SGC7901细胞转染MUC2 ASODN 48 h后,MUC2的mRNA(1.2380±0.1019)和蛋白(1.20±0.00)表达与对照组(1.8130±0.1651,6.50±0.45)比较均明显降低(P《0.01、P《0.05);癌细胞与基质(0.7335±0.0679)及内皮细胞(0.0350±0.0224)的黏附能力与对照组(0.9072±0.1057,0.1262±0.0660)比较都有明显下降(P《0.01);CD44V6表达明显降低(1.50±0.09,对照组5.50±0.25),而E.钙黏蛋白表达增高(5.50±0.23,对照组3.50±0.28)(P《0.05).结论 使用人工合成MUC2 ASODN能有效抑制胃癌细胞株SGC7901的黏附作用,降低肿瘤细胞的侵袭转移潜能.
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高迁移率族蛋白B1诱导的树突状细胞对T淋巴细胞增殖及功能性极化的影响
目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导的树突状细胞(DCs)对大鼠脾T淋巴细胞增殖反应及功能性极化的影响,并探讨其作用机制.方法 分离正常Wistar大鼠脾脏DC后置于24孔培养板(1×106/孔),采用1 ms/L的HMGB1刺激48 h,DC与脾T淋巴细胞的细胞比例分别为1:50、1:100、1:150、1:200混合,于共同作用后3、5 d观察脾T淋巴细胞增殖及功能性极化的情况.结果 DC与T淋巴细胞以1:50、1:100、1:150、1:200的比例相互作用,脾T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应均明显增强、上清液中干扰素(IFN)-γ含量显著升高和白细胞介素(IL)-4含量明显降低(P《0.01),其中细胞比例1:150组为明显.脾T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应增强、IFN-γ含量增加和IL-4含量降低均以第3天为显著[分别为(0.646±0.028)、(268.08±14.07)、(6.16±0.59)ng/L,P值均《0.01].结论 HMGB1诱导的DC使脾T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应明显增强,并促进T淋巴细胞向Th1功能性极化.
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垂体腺瘤侵袭性与基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-2抑制因子、细胞外基质金属蛋白酶诱导者基因蛋白表达的关系
目的 探讨基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-2抑制因子、细胞外基质金属蛋白酶诱导者的表达与侵袭性垂体腺瘤的关系.方法 用免疫组织化学染色法检测60例垂体瘤组织标本中MMP-2、TIMP-2、CD147蛋白水平表达.免疫组织化学染色检测结果应用半定量图像分析方法计算MMP-2、TIMP-2、CD147阳性细胞占全部肿瘤细胞的百分率.结果 影像学证实,60例垂体瘤患者中,30例为侵袭性垂体腺瘤、30例为非侵袭性垂体腺瘤.免疫组织化学染色法显示,在侵袭性组垂体腺瘤标本中,28例(93.33%)MMP-2表达为阳性、27例(90.00%)CD147表达为阳性、11例(36.67%)TIMP-2表达为阳性;在非侵袭性组垂体腺瘤标本中,13例(43.33%)MMP-2表达为阳性、11例(36.67%)CD147表达为阳性、27例(90.00%)TIMP-2表达为阳性.侵袭性垂体腺瘤中MMP-2、CD147的表达显著高于非侵袭性垂体腺瘤中MMP-2、CD147的表达(P《0.01).侵袭性垂体腺瘤中TIMP-2的表达显著低于非侵袭性垂体腺瘤中TIMP-2的表达(P《0.01).结论 MMP-2、CD147蛋白水平高表达,以及TIMP-2蛋白水平低表达与垂体腺瘤的侵袭性密切相关.MMP-2、TIMP-2、CD147可以作为判定垂体腺瘤侵袭性的有效指标.
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SEPT7基因抑制人胶质瘤细胞系TJ899侵袭的研究
目的 研究隔蛋白7(SEPT7)基因对人胶质瘤细胞系TJ899侵袭的抑制及其分子机制.方法 Transwell法和3-D Matrigel法、划痕实验和2-D Matrigel法观察转染SEPT7的TJ899胶 质瘤细胞侵袭、迁移能力变化,蛋白印记和免疫组织化学检测MMP2、MMP9、MT1-MMP、TIMP1和TIMP2的表达变化,蛋白印记和免疫荧光检测整合素αV β3的表达,应用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白tubulin-α结构的变化.结果 Transwell法和3-D Matrigel法观察转染SEPT7后T3899细胞的侵袭能力下降了59.86%、43.36%,划痕实验和2-D Matrigel法观察和迁移能力下降了65.45%、24.02%.转染SEF17后,MMP2、MMP9、MT1-MMP和整合素αV 83的表达分别下调了54.03%、39.13%、76.06%、53.09%,TIMP1和TIMP2的表达则上调了62.50%、77.78%.肿瘤细胞的微管蛋白Tubulin-α结构出现了重新分布,由高密度型变化为稀疏型,这种变化接近于正常的非肿瘤的细胞的微管蛋白Tubulin-α结构.结论 SEPT7基因可以抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力,其分子机制可能通过逆转MMPs/TIMPs的失衡状态,降低整合素αV 83的表达,以及改变细胞骨架tubulin-α的结构而实现的.SEPT7可作为胶质瘤基因治疗的重要候选基因.
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瘦素受体在小鼠日本血吸虫病肝纤维化组织中的动态表达及作用
目的 观察小鼠感染日本血吸虫后不同时期肝脏瘦素长受体(OB-Rb)mRNA和蛋白动态表达,探讨瘦素及其受体在日本血吸虫病肝纤维化发生发展中的作用.方法 日本血吸虫尾蚴皮肤敷贴法感染小鼠构建日本血吸虫病肝纤维化模型,于感染后2、4、8、12、16、20、24周取肝脏标本.HE和VG染色对肝组织进行病理学检查,免疫组织化学SP法动态观察OB-Rb及肝星状细胞(HSC)标记物α-平滑肌动蛋白(α-SMA)表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测OB-Rb mRNA动态表达.结果 α-SMA和OB-Rb蛋白阳性表达随病程进展进行性增加,两者共表达于胶原纤维沉积处;模型组OB-Rb mRNA在感染4周开始表达,随病程进展逐渐增高,持续至24周.相关分析表明,α-SMA蛋白表达与胶原含量(r=0.956,P《0.01)及肝纤维化程度(r=0.804,P《0.01)均呈正相关;OB-Rb蛋白和mRNA表达与胶原含量(r=0.965,P《0.01;r=0.945,P《0.01)及肝纤维化程度(r=0.823,P《0.01;r=0.880,P《0.01)均呈正相关.结论 瘦素、HSC和日本血吸虫病肝纤维化之间有着极为密切的关系,瘦素可能是日本血吸虫病肝纤维化形成过程中一个新的促肝纤维化因子.
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MCM2p、p16INK4A和Ki-67在肝癌组织中的表达
目的 探讨MCM2p在肝癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖活性的关系.方法 采用免疫组织化学法检测MCM2p、p16INK4A和Ki-67在肝细胞肝癌及其相应的癌旁正常组织中的表达.结果 肝癌组织MCM2p和Ki-67的表达显著高于癌旁肝组织(P《0.01),而p16INK4A表达显著低于癌旁肝组织(P《0.01).MCM2p的表达和Ki-67的表达状况关系密切,呈正相关,而与p16INK4A表达呈负相关.结论 MCM2p和Ki-67在肝癌组织中呈高表达,并与肝癌的发生发展及肿瘤的增殖活性有关.
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记忆合金椎体矫形复位器支架在不同椎体骨折模型的应用
目的 自行研制记忆合金椎体矫形复位器系统,验证复位器支架的设计预期与在椎体内的复形复位效果.方法 脊柱标本一具,对其中的节段用厚度0.75 mm记忆合金板材制作的五瓣(瓣高11 mm)、六瓣(瓣高12 mm)矫形复位器进行实验操作,在正常形态的椎体与压缩骨折模型的椎体内植入记忆合金复位器支架;术前、术后和标本复温后分别摄片,CT扫描观察复位器在椎体内的复形、对压缩骨折椎体高度恢复以及在椎体内空腔的形成情况.结果 记忆合金椎体矫形复位器可安全顺利通过设计的辅助器械管道完成实验;复位器在椎体内经温水作用,不需借助外力,产生记忆功能,可自行扩张复形,在椎体标本内产生预期的空间和支撑作用;对压缩的骨折复形达到骨折前的90%.实验结果达到设计预期.结论 记忆合金矫形复位器系统在椎体内可产生预期的复形与矫形效果,在椎体内支撑固定并形成空腔,是一种安全可行的、新的脊柱微创技术.
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非心脏跳动的供体肺脏在自制改良保存液中的保存效果
目的 评价LPD液,EC液和FWM液的肺脏保存效果.方法 18只纯种新西兰白兔随机分为3组:LPD组、EC组和FWM组.肺脏经过1 h的热缺血和4 h的低温(4℃)保存后,置于通气、全血灌注的离体兔肺模型上灌注1 h,每15 min做1次血气分析,再灌注结束后测量肺泡表面活性物质的活性及肺脏的干湿比.结果 FWM组中的肺脏氧合明显的高于其他组(P《0.05).再灌注后,FWM组的表面活性物质保存较好(P《0.05).干湿比在各组之间差异无统计学意义,但是FWM组显示出了水肿减轻的趋势.结论 FWM保存液在非心脏跳动的供体肺的保存中比LPD液和EC液有更好的保存效果.
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生物素化去细胞猪主动脉瓣构建组织工程心脏瓣膜研究
目的 制备生物素化去细胞猪主动脉瓣,通过生物素-亲和素系统提高去细胞瓣膜的细胞黏附效率.方法 将10 mmol/L的生物素和5 g/L亲和素分别依次与去细胞猪主动脉瓣反应,制备表面含亲和素的生物素化去细胞猪主动脉瓣.将1.0×105生物素化和未生物素化的骨髓基质干细胞,分别种植于上述改性前后的去细胞瓣膜,应用Hoechst 33258试验确定细胞的黏附效率,扫描电镜观察细胞在瓣膜上的生长.结果 生物素和亲和素能链接到去细胞猪主动脉瓣,生物素化骨髓基质于细胞在表面含亲和素的生物素化去细胞猪主动脉瓣上的黏附效率(55.73±4.53)%显著高于各对照组分别为(31.20±3.94)%、(30.75±3.15)%和(28.51±4.52)%,且扫描电镜示细胞在去细胞猪主动脉瓣膜表面形成一细胞层,生长良好.结论 去细胞猪主动脉瓣可生物素化,并能以亲和素为中介,与细胞表面生物素的结合,增加细胞的黏附效率,且不影响细胞的生长.
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聚乙二醇修饰磁性5-氟尿嘧啶白蛋白微球的制备与表征
目的 制备聚乙二醇(PEG)修饰的磁性5-氟尿嘧啶白蛋白微球(PEG-5-Fu-MAMS),对其表征和体外释放规律进行初步研究.方法 采用乳化-加热固化法,制备PEG修饰的磁性5-氟尿嘧啶白蛋白微球;用扫描电镜和Malvem粒度仪对其形貌和粒径进行表征;碱消化后在265 nm波长下测定吸光度计算载药量;溶解后于0、5、10、20、30、40、60、90 min测定其吸光度,研究其稳定性和磁响应性;药物体外释放实验研究微球的缓释性.结果 微球平均粒径为1.32μm,呈球形,表面光滑;载药量为(5.31±0.13)%;具有良好的磁响应性;0.5 h释放度为(28.50±0.66)%,24 h释放度为(46.93±2.83)%.结论 PEG-5-Fu-MAMS具有良好的外形、粒径、载药量、磁响应性和药物缓释作用.
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MHCC97中肝癌干细胞的分离及其特性
目的 分离肝癌细胞系MHCC97中肝癌干细胞并观察其干细胞特性.方法 利用流式分选法从MHCC97中分离出边缘群(SP)和主群(MP).分别采用软琼脂克隆形成和裸鼠成瘤实验观察SP和MP细胞体内、外成瘤能力;羟基喜树碱(HCPT)体外诱导,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析其分化潜能.结果 SP细胞克隆形成率为57%,MP细胞仅为13%;1×103SP细胞可成瘤(2/8),MP细胞则需1×105才能成瘤(2/8).诱导3 d后,约15%SP细胞出现双核;诱导后SP细胞甲胎蛋白和r-谷氨酰转肽酶的表达降低,白蛋白表达增强,葡萄糖磷酸酶仅诱导后表达.结论 MHCC97中SP亚群富集具有干细胞特性的癌细胞,即肝癌干细胞.
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腺病毒载体介导的CTLA4Ig基因追踪臂丛神经通路的研究
目的 利用腺病毒载体(Ad)介导的CTLA4Ig基因示踪大鼠臂丛神经轴突及其运动和感觉神经元,探讨转基因产物CTLA4Ig蛋白作为神经通路示踪剂的可行性及其特点.方法 经正中神经或尺神经或肌皮神经近断端导入携带CTLA4Ig或增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的Ad(各2×107pfu).在转染后3周内6个不同时间点取标本,行CTLA41g免疫荧光染色,观察标记的运动及感觉神经元所在脊髓和脊髓后根神经节(DRGs)节段、神经根及轴突被标记范围及时间,并与EGFP基因的示踪结果比较.结果 由正中神经、尺神经和肌皮神经所标记的神经元分别在C6～Th1、c7～Th1及C5～C7节段;其相应的神经根及神经干近段轴突亦被标记.CTLA4Ig标记的神经元在转染3周后消失,所标记神经干轴突在转染5周后消失;而EGFP所标记的神经元和神经干分别2周、3周后消失.结论 CTLA4Ig基因能在Ad介导下经外周逆行性、特异性示踪臂丛神经及其靶运动和感觉神经元.
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前列腺素E1对血吸虫病家兔门静脉平滑肌细胞增殖的影响
目的 观察血吸虫病家兔门静脉高压症形成过程中,静脉应用前列腺素E1对门静脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及可能机制.方法 血吸虫尾蚴皮肤敷贴法感染家兔,构建门静脉高压模型,其中7只在感染尾蚴后60 d开始耳缘静脉给予PGEI(2.5μg/kg体重).至150 d透射电镜比较门静脉VSMC超微结构变化,Western blot和免疫组织化学分别检测门静脉血小板衍生生长因子B(PDGF-B)表达水平和表达部位.结果 血吸虫病家兔门静脉中膜增厚,VSMC活化增殖,PDGF-B表达增强并集中在中膜平滑肌层.外源性PGE1可以抑制VSMC增殖;显著降低门静脉中膜厚度[(76.35±11.41)μm比(118.29±36.52)μm,P《0.01]和PDGF-B[(3.63±1.39)比(6.64±1.95),P《0.05]表达.结论 VSMC增殖是血吸虫病家兔门静脉高压血管病变的重要环节.PGE1可以有效地抑制血吸虫家兔门静脉VSMC增殖,抑制PDGF-B表达可能是其中机制之一.
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抗细胞间黏附分子-1抗体对心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨抗细胞间黏附分子(ICAM)-1单抗对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及可能机制.方法 应用犬心肌缺血再灌注损伤模型,比较抗ICAM-1单抗干预前后心肌中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肌酸磷酸激酶(CPK)、ATP、乳酸(LA)以及水含量指标变化,及这些改变对心功能的影响.结果 缺血再灌注后,心肌中MDA(6.45±1.20)、LA(79.05±5.75)、水含量(81.29±1.45)以及血浆中的CPK(862.80±255.94)增加,而心肌中SOD(4.66±0.58)及ATP(3.38±0.48)减少,心功能减退,发生再灌注损伤.抗ICAM-1单抗干预后,心肌或血浆中原本升高的MDA(4.70±1.37)、CPK(416.10±124.32)、LA(66.39±3.94)以及水含量(79.80±1.10)下降,而下降的SOD(6.26±0.60)及ATP(4.60±0.64)增加,心功能显著改善.结论 抗ICAM-1单抗干预可降低心肌自由基水平,改善心肌灌注,减少心肌损伤,从而保护心肌缺血再灌注损伤.
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RNAi人端粒酶逆转录酶基因腺病毒表达载体的构建及对肾癌细胞生长的抑制作用
目的 构建表达端粒酶逆转录酶(hTERT)基因小干扰RNA(siRNA)腺病毒载体,观察其对肾癌细胞系Ketr-3生长抑制作用.方法 将病毒Ad-hTERT体外感染人肾癌细胞系Ketr-3,分别用结晶紫染色、噻唑蓝(MTT)法检测其对细胞生长的影响,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定hTERT基因mRNA的表达水平,免疫组织化学检测hTERT抗原的表达.结果 结晶紫、MTT结果表明:在MOI=50时,Ad-hTERT感染的Ketr-3细胞发生明显病变;MOI=50的Ad-hTERT感染Ketr-3细胞后,在第3、5、7天细胞存活率分别为(92.3±1.2)%、(82.0±1.0)%和(72.0±1.0)%,与对照组比较差异有统计学意义(P《0.05);RT-PCR结果表明:病毒Ad-hTERT感染Ketr-3细胞3d后,hTERT mRNA表达是对照组的(50.5±1.7)%,差异有统计学意义(P《0.01);免疫组织化学结果表明:Ad-hTERT处理组的hTERT抗原表达较对照组显著减少.结论 转录hTERT基因siR-NA的重组腺病毒载体为肾癌基因治疗提供了新的工具.
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缺氧对钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶表达的影响及其与p38 MAPK信号通路活化的关系
目的 探讨缺氧对钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(CASK)表达的影响及其与p38MAPK信号通路活化的关系.方法 采用定量PCR方法Western blot技术,检测内皮细胞株的CASK在常氧和缺氧1、3、6、12 h条件下表达情况.采用Western blot技术,检测常氧和缺氧1、3、612 h条件下p38 MAPK 180位苏氨酸/182位酪氨酸双位点磷酸化情况,及p38信号通路特异性阻断剂SB203580预处理1 h,血管内皮细胞缺氧3 h后CASK蛋白的表达.采用双荧光素酶报告系统,分析常氧和缺氧1、3、6、12 h条件下CASK启动子报告基因的活性.结果 缺氧能够明显上调CASK mRNA和蛋白的表达,缺氧3 h,CASK mRNA的表达为常氧对照组的1.8倍,CASK蛋白表达为常氧对照组的1.4倍.p38 MAPK信号通路阻断剂SB203580预处理,能够以剂量依赖性方式抑制3 h缺氧诱导的内皮细胞CASK蛋白表达.不同时间的缺氧能够明显增强CASK荧光素酶报告基因的活性.结论 缺氧能够诱导内皮细胞CASK的表达部分依赖于p38 MAPK信号的活化.
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中药胰必清对急性出血坏死性胰腺炎急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞的作用
目的 观察TLR4、核转录因子(NF)-κB在急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)大鼠肺泡巨嗜细胞的表达及应用胰必清(YBQ)治疗前后的变化.方法 72只SD大鼠平均随机分为3组:A组(假手术对照组)、B组(AHNP)及C组(AHNP+YBQ),开腹胰胆管注入5%牛磺胆酸钠法建立大鼠AHNP模型,分别于术后3、6、12、24 h处死大鼠,逆转录·聚合酶链反应(RT-PCR)法、免疫荧光共聚焦法分别检测支气管灌洗液肺泡巨噬细胞中TLR4 mRNA、NF-KB表达水平的变化,肺组织病理检查行病理学评分.结果 C组肺泡巨噬细胞3、6、12、24 h TLR4 mRNA表达水平结果为0.54、0.65、0.65、0.54,NF.KB免疫荧光检测结果为49.54、68.67、74.27、59.23,与肺组织的病理学评分相一致,随时间的延长而逐渐升高,6～12 h左右达高峰,与时间明显相关,与B组比较明显降低,差异有统计学意义(P《0.05).结论 中药胰必清能通过调节肺泡巨噬细胞中TLR4的基因表达,进一步调节NF-KB的活化来改善AHNP-ALI.
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门静脉高压症大鼠食管胃底侧枝循环形成机制研究
目的 观察缺氧诱导因子(HIF)-1α和血管内皮生长因子(VEGF)在门静脉高压症大鼠贲门及周围组织血管的表达,探讨其在门静脉高压症食管胃底侧枝循环形成机制中的作用.方法 对肝前型门静脉高压症模型组80只和假手术对照组20只的贲门及周围组织行HIF-1α和VEGF免疫组织化学染色,测定其表达并进行相关性分析.结果 肝前型门静脉高压大鼠模型术后30 d小网膜组织内出现小静脉血管内皮细胞的细胞质和细胞核内出现阳性反应的棕黄色颗粒,术后60 d食管胃底组织肌层及黏膜下层新生静脉血管内皮细胞的细胞质和细胞核内出现阳性反应的棕黄色颗粒.对照组呈阴性或弱阳性.差异有统计学意义(P《0.05).结论 HI-1α和VEGF过度表达可能在门静脉高压食管胃底侧枝循环形成中起重要作用.
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氯胺酮及瑞芬太尼对切口痛大鼠脊髓FOS及诱导型一氧化氮合酶表达的影响
目的 观察氯胺酮及瑞芬太尼对切口痛大鼠脊髓FOS及iNOS表达的影响.方法 48只SD大鼠随机分为4组:假手术组(S组),对照组(C组),瑞芬太尼组(R组),瑞芬太尼+氯胺酮组(R+K组).各组分别于术前24 h,术后24、48 h测定PWT.术后48 h测PWT后,各组随机分为两亚组:(1)S1,C1,R1,R+K1组:采用免疫组织化学sP法检测脊髓FOS表达;(2)S2,C2,R2,R+K2组:采用RT-PCR技术测定iNOSmRNA的表达量.结果 术后24、48 h PWT比较:R组较S及C组明显降低(P《0.01);但R+K组较R组明显升高(P《0.01).S、C、R、R+K组FOS蛋白阳性细胞数分别为(38±4)、(43±4)、(187±4)、(65±5).R组较其余三组FOS蛋白表达均明显增加(P《0.01).C、R及R+K组iNOSmRNA/β-actin积分光度值分别为(0.221±0.024)、(0.907±0.115)、(0.492±0.06).R组较C及R+K组iNOSmRNA表达增加(P《0.05).结论 瑞芬太尼诱导的痛觉过敏与脊髓iNOS,FOS表达的上调有关,小剂量氯胺酮联合瑞芬太尼使用,可减少脊髓iNOS,FOS的表达,预防瑞芬太尼诱导的继发性痛觉过敏.
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RNA干扰沉默血管内皮生长因子对人膀胱癌细胞株T24增殖和凋亡的影响
目的 观察RNA干扰沉默血管内皮生长因子(VEGF)对膀胱癌细胞株T24增殖和凋亡的影响.方法 构建了4个针对VEGF的小干扰RNA(siRNA)表达质粒pGC-siVEGF1-4,脂质体法稳定转染T24细胞.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(EUSA)检测转染细胞VEGF mRNA和蛋白表达,噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡情况.结果 4个VEGF siRNA表达质粒均能明显抑制转染细胞的VEGF mRNA和蛋白表达,使细胞增殖减慢,其中以pGC-siVEGF3为明显,细胞增殖受抑达38.9%(t=18.49,P《0.01).且该组出现了大程度G0/G1细胞阻滞(59.8±1.4),明显大于空质粒组(48.5 ±1.5),差异有统计学意义(P《0.01),该组的细胞凋亡率也高(17.4%).结论 VEGF siRNA表达质粒可下调T24细胞VEGF表达,抑制膀胱癌细胞生长并促进其凋亡.
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CD4+CD25+调节性T细胞对同种胰岛移植免疫耐受的影响
目的 观察体外分离的CD4+CD25+调节性T细胞对同种胰岛移植免疫耐受的影响.方法 免疫磁珠法分离CD4+CD25+调节性T细胞,体外试验观察其对CD4+CD25-T细胞增殖的影响.将数量达1×106的CD4+CD25+调节性T细胞回输胰岛移植受体,对比其对移植物存活的影响.结果 分离的CD4+CD25+调节性T细胞体外试验可明显抑制CD4+CD25-T细胞的增殖.单纯胰岛移植组移植物物存活期为(5.57±0.79)d,回输受体CD4+CD25+调节性T细胞数量1×106、2×106时,胰岛移植物存活时间分别为(15.29±2.29)d和(25.43±2.30)d(P《0.01).CD4+CD25+调节性T细胞回输胰岛移植受体可显著延长移植物存活期,诱导免疫耐受的作用为剂量依赖性.结论 CD+CD25+调节性T细胞体外、体内试验可抑制效应性T细胞功能,诱导胰岛移植免疫耐受.
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葡萄糖调节蛋白94在人肝癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨葡萄糖调节蛋白94(Crp94)mRNA及蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达情况及其与肝癌发生的关系.方法 肝癌患者手术切除标本10例,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测肝癌组织和癌旁组织细胞Grp94 mRNA基因的相对表达量,并通过免疫组织化学SP法检测10例肝癌组织和癌旁组织标本Crp94蛋白的表达情况.结果 (1)半定量RT-PCR显示:Grp94 mRNA在肝癌组织中均呈高表达,相对表达量为0.7490±0.7508,而在对应的癌旁组织中呈低表达或无表达,相对表达量为0.446 62±0.50000两组之间差异有统计学意义(P《0.05).(2)免疫组织化学及图像分析结果显示:在肝癌组织和癌旁组织中Grp94蛋白平均灰度扫描值分别为158.0800±20.5952、122.2800±24.4148两组之间差异有统计学意义(P《0.01).结论 Grp94在肝癌中的表达明显增高,可能在肝癌的发生、发展过程中发挥重要作用.
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靶向Survivin和FoxM1B的shRNA对人脑质瘤干细胞生长和凋亡的影响
目的 观察Survivin、FoxM1B的短发卡RNA对人脑胶质瘤干细胞生长和凋亡的影响.方法 培养脑胶质瘤干细胞;依据靶基因序列设计siRNA,建立可克隆入pSilencerTM3.1-H1neo表达载体的Survivin和FoxM1B shRNA表达质粒系统,鉴定正确后扩增质粒;利用脂质体转染法(LipofectaminTM 2000)转染脑胶质瘤干细胞,分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot在mRNA和蛋白水平检测目的 基因的表达,并分别采用噻唑蓝(MTT)法和Hoechst染色试剂盒检测胶质瘤干细胞的生长抑制率及凋亡率.结果 成功构建Survivin、FoxM1B shRNA表达质粒;RT-PCR结果显示在第3、5、7天Survivin和FoxM1B的灰度值分别为80.27±11.65、77.41±10.99、78.10±8.84及72.45±9.59、70.50±9.43、67.94±13.57;Western blot检测Survivin和FoxM1B在第3、5、7天的灰度值分别为72.45±9.59、70.50±9.43、67.94±13.57及76.55±18.01、73.57±15.41、72.05±11.46.而细胞生长抑制率和凋亡率增加,双干扰组较单干扰组较为明显.结论 成功构建Survivin,FoxM1B shRNA表达质粒.shRNA转染脑胶质瘤干细胞后,目的 基因表达明显下降,从而抑制脑胶质瘤干细胞的增殖,促进凋亡.而双干扰效果更为显著.
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转化生长因子-β1联合白细胞介素-2体外诱导非肥胖糖尿病小鼠调节性T细胞的产生
目的 体外诱导非肥胖糖尿病(NOD)小鼠CD4+ CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的产生并检测其免疫抑制功能.探讨外源性白细胞介素(IL)-2在诱导方案中的作用.方法 分选NOD小鼠童贞T细胞(Naive T),利用Anti-CD3、Anti-CD28刺激,同时给予转化生长因子-β1(TGF-β1)和白细胞介素-2(IL-2),共同培养5 d,收获诱导性Treg(iTreg),经流式细胞仪检测其表型.利用体外T细胞增殖体系,对比NOD小鼠天然Treg(nTreg),评价iTreg的免疫抑制能力.将诱导方案中的IL-2撤除以观察其作用.结果 TGF-B1联合IL-2能诱导NOD小鼠Naive T转化为iTreg,较对照组有统计学意义[(41.33±3.21)%比(8.00±3.00)%,P《0.05].iTreg可有效抑制T细胞增殖,其能力与nTreg的差异元统计学意义[(40.33±1.03)%比(38.33±3.06),P》0.05].外源性IL-2有利于iTreg的产生[(41.33±3.21)%比(15.00±1.00)%,P《0.05].结论 TGF-β1联合IL-2可在体外诱导Naive T转化为具有免疫抑制功能的Treg.
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脊髓运动神经元轴突抑制前后E3B1基因的表达变化及意义
目的 检测E3B1基因在脊髓运动神经元(SMN)轴突生长抑制前后的表达变化及意义.方法 应用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测SMN轴突生长抑制前后E3B1mRNA和蛋白表达的变化,应用免疫细胞化学检测培养SMN Ⅲ型β-微管蛋白的表达.结果 与正常培养的SMN比较,与轴突抑制物共培养的SMN Ⅲ型β-微管蛋白表达明显降低(P《0.01),E3B1mRNA和蛋白的表达均显著升高(P《0.01).结论 E381基因的过度表达可能是SMN轴突生长抑制的重要因素.
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重型颅脑损伤72例患者治疗分析
重型颅脑损伤引发的继发性脑损害如缺血、缺氧、脑水肿等共同造成颅高压,进而导致脑疝,是致患者死亡和伤残的重要原因[1].我科于2003年1月至2007年1月治疗重型颅脑损伤患者72例,报告如下.
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抑癌基因DPC4和转化生长因子-β1在大肠癌的表达及临床意义
我们采用原位杂交及免疫组织化学的方法,对大肠癌组织中TGF-B1和DPC4在mRNA及蛋白水平的表达进行检测,探讨它们与大肠癌发生发展的关系.
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hTERT启动子调控腺病毒介导的HSV-tk/GCV基因系统治疗人膀胱癌
我们在体外实验已证实,hTERT启动子调控腺病毒介导的HSV-tk/GCV基因对膀胱癌细胞有选择性的杀伤作用,而对正常细胞不产生明显影响[1].我们采用BALB/C裸鼠建立荷人膀胱癌动物模型,给予重组腺病毒静脉内注射治疗,观察其在体内的治疗效果及安全性.
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结直肠癌局部淋巴结癌胚抗原含量判断淋巴结转移的价值
局部淋巴结转移状况是判断结直肠癌预后和选择辅助治疗方案的重要因素之一.常规淋巴结病理学检查工作量大、费时,因而需要找到一种简便、迅捷、准确的方法来判定淋巴结转移状况[1].我们用电发光法测定结直肠癌局部淋巴结浸出液癌胚抗原(CEA)浓度,分析其对判断有无淋巴结转移的价值.
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PED/PEA-15在肝癌中的表达及意义
本研究旨在观察PED/PEA-15在肝癌组织中的表达,探讨PED/PEA-15在肝癌发生发展中的作用机制.一、材料与方法1.组织标本来源:本组95例标本均取自山西医科大学第一附属医院病理科并经病理证实.其中男68例,女27例,年龄18～73岁,平均49岁.肝细胞癌47例、癌旁组织35例及正常肝组织13例.按照肝癌的临床病理分级(Sugihara分级),肝癌中高分化19例,中等分化12例,低分化16例.
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胰岛素样生长因子-1和磷酸化的细胞外信号调节激酶在乳头状甲状腺癌中的表达及其意义
我们应用免疫组织化学SP法检测胰岛素样生长因子1(IGF-1)和磷酸化的细胞外信号调节激酶(P-ERK)在乳头状甲状腺癌(PTC)和正常甲状腺组织中的表达,探讨其在乳头状甲状腺癌发生发展中的作用及两者的相关性.
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大鼠呼吸面罩的设计及与气管插管通气的比较
气管插管是心肺复苏的重要步骤.常用方法有气管切开插管法,直视下直接插管法和直视下钢丝引导插管法等[1-3].我们设计出一种简易的大鼠面罩,与气管切开插管法进行比较.
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erbB4/HER4在胃癌的表达
erbB4是编码第四人体表皮生长因子受体(HER4)的癌基因.本研究旨在检测HER4在胃癌中的表达,观察erbB4/HER4在胃癌发生发展中的作用.
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SD大鼠两种气管插管方法的比较
凡涉及大鼠开胸的研究多需要进行辅助呼吸.准确顺利地气管插管是辅助呼吸的重要步骤,是实验成败的关键之一.我们用身边简单的静脉套管针进行引导,直视下经口腔气管插管,并与气管切开插管法比较.
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放射性125I粒子照射对家兔腹腔血管影响的病理学观察
放射治疗是治疗恶性肿瘤的重要手段之一,然而放射治疗在治疗肿瘤的同时也可以引起组织血管的损伤,进而加重对机体器官的损伤.我们以放射性125I粒子照射家兔腹腔血管,观察形态学以及病理学观察,为放射性125I粒子组织间种植技术应用于血管周围肿瘤治疗提供放射剂量耐受阈的依据.
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尿毒症患者肾移植前后睾丸体积变化的比较
我们自2001年8月至今随机选择在我院分别接受血液透析和腹膜透析治疗的30例尿毒症患者,应用彩色多普勒超声于肾移植手术前以及术后1个月、3个月和1年对睾丸体积进行监测,并和20名正常志愿者睾丸体积作对照.
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应用磁共振成像判断梗死心肌微血管通透性研究
应用磁共振成像(MRI)可评估心肌活力[1,2],其原理是梗死心肌细胞膜破裂,导致磁共振对比剂的分布增加.梗死心肌细胞膜破裂同时,微血管损伤也随之发生[3],此时血池对比剂可由血管内进入组织间隙[4].我们建立家猪心肌梗死模型,应用血池对比剂监测梗死心肌微血管壁完整性的变化.
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RNA干扰Survivin基因对裸鼠原位膀胱癌的治疗作用
我们利用原位膀胱癌动物模型评价通过RNA干扰下调Survivin表达对膀胱癌的治疗作用,并探讨其作用机制.一、材料与方法1.材料:人膀胱癌细胞株T24购于中国科学院上海生物细胞研究所,培养于含有10%胎牛血清的IMDM培养基.
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STAT3在肝细胞肝癌中的表达
JAK/STAT是胞外至胞核的信号传导通路,其中的信号转导及转录激活因子3(STAT3)对于癌细胞生长、凋亡的调控作用日益受到重视[1],我们通过检测其mRNA及其磷酸化蛋白-即活化形式的STAT3(p-STAT3)来探讨STAT3在肝癌中的表达.
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转入胰岛素基因胰岛的胰岛素合成功能研究
我们将人类前胰岛素基因转入小鼠胰岛,建立双胰岛素模型,在体外培养中利用在移植后损伤中起重要作用的炎性细胞因子对其进行干预,通过对比不同胰岛素量的变化和胰岛内胰岛素总量的变化,探讨转基因胰岛的胰岛素合成功能特性.
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胃肠道间质瘤病期进展与血清血管内皮生长因子及血管形成的关系
胃肠道间质瘤(GIST)是起源于胃肠道肌层的间叶性肿瘤,以梭形肿瘤细胞以及CD117免疫组织化学阳性为特征[1].血管内皮生长因子(VEGF)与恶性实体肿瘤血管形成及预后有关[2].血清VEGF(SVEGF)水平在许多肿瘤患者明显升高,与肿瘤组织VEGF的关系存在争议,本研究旨在探讨SVEGF、瘤组织VEGF及微血管密度(MVD)与GIST病期进展及预后的关系,以期了解血管形成是否促进GIST进展.
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神经生长因子的促乳腺癌生长效应及信号传导机制研究进展
神经生长因子(NGF)是神经营养因子家族成员之一,能维持神经细胞的存活和正常功能[1],促进受损神经细胞再生[2]、修复[3].近来证明它是乳腺癌进展的重要生物学基础.在乳腺癌细胞中,NGF高表达,并通过"自分泌环"产生的一系列的信号传导,表现出促进肿瘤生长的生物学效应[4,5].现就神经生长因子及受体、对乳腺癌的生物学效应以及信号传导机制做出综述.
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人工关节假体无菌性松动的研究进展
无菌性松动是目前假体翻修的主要原因,目前的髋关节翻修手术中有三分之二因为无菌性松动,膝关节翻修中二分之一因为无菌性松动[1].关于假体无菌性松动的原因有多种假设和学说,但这些假设多数是建立在经验观察,动物实验和临床病例报道等基础上.本文综述了近年来假体无菌性松动的主要学说,由此可以看出假体无菌性松动是有诸多的因素造成,绝不是一个单一的病因学说.
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人源性乳腺癌骨转移小鼠模型的建立
目的 建立人乳腺癌细胞转移到人骨的"人源性"乳腺癌骨转移小鼠模型.方法 严重联合免疫缺陷(SCID/berg)雌小鼠50只,随机分为实验组(n=30)和对照组(n=20),其中实验组植入人骨后随机均分3组:A组(MDA-MB-231干细胞亚群,1×105个/只)、B组(同A组细胞,1 × 106个/只)和C组(MDA-MB-231亲代细胞,1×106个/只);对照组鼠随机均分2组:D组(阳性对照组,未植入人骨,MDA-MB-231亲代细胞,1×105个/只)、E组(阴性对照组,植入人骨,生理盐水).第4、7周行骨扫描,8周取人骨、鼠骨、肺等行HE染色及CK、CD34、CD105、SMA免疫组织化学检查.结果 骨扫描:第4周鼠植入的人骨均成活,第7周部分模型鼠出现可疑骨转移灶.HE染色及CK检查:B组人骨转移率高77.8%(7/9),与C组人骨(20.0%)、D组鼠骨(20.0%)、E组鼠骨的骨转移率差异均有统计学意义(P《0.05);B组内人骨(77.8%)、鼠骨(0)、鼠肺(11.1%)转移差异有统计学意义(P《0.01).人骨表面结缔组织生长,骨内CD105、SMA、CD34均阳性的血管长入.结论 "人源性"乳腺癌骨转移小鼠模型骨转移发生率优于"非人源性"骨转移小鼠模型,能较好模拟人骨转移的血循环过程.
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大鼠原位肝移植急性排斥反应模型的建立及技术改进
目的 建立大鼠原位肝脏移植的急性排斥模型并观察其排斥反应的特点.方法 选择近交系雄性DA大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,改良"二袖套"法建立肝移植模型48例,肝动脉重建采用"袖管式微血管缝合法"(microvascular sleeve anatomosis).受体随机分为两组,A组(非干预组,n=24):术后不用免疫抑制剂;B组(FK506处理组,n=24):术后每日用FKS06每日0.2 mg/kg体重灌胃.分别于术后3、5、7 d随机解剖受体大鼠6只,取材肝组织对移植肝进行病理学观察,同时静脉采血测定血清谷丙转氨酶(ALT)、白蛋白(Alb)和总胆红素(TBIL)浓度;每组各留6只观察其生存时间和死亡原因.结果 本方法建立模型的手术时间(包括供体手术)和重建动脉的时间明显缩短,手术成功率和肝动脉的通畅率均为100%.DA→Lewis组合的模型术后的血清生化指标、肝脏病理学改变、生存情况均符合肝移植急性排斥的特点,排斥反应于术后3～5 d出现,并逐渐增强,术后7 d迅速达到高峰并维持;该模型可以为抗排斥药物FKS06预防而达到长期存活.A、B两组中位生存时间分别为14、73 d;A、B两组的累积生存率曲线差异有统计学意义(Log-Rank取值为11.78,P《0.01).结论 .DA到Lewis大鼠品系组合可以建立稳定可靠的肝移植急性排斥模型;该模型具有研究周期短、病理改变典型、可重复性好等优点.
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肿瘤干细胞在乳腺癌中的研究新进展
干细胞(stem cells)是一种可以自我更新、具有多向分化潜能的细胞,在特定的条件下,它可以分化成不同的功能细胞,形成多种组织和器官.研究结果显示,在肿瘤组织中也存在着一小部分与干细胞性质相似的细胞群体,同样具有自我更新能力和分化潜能,故被命名为"肿瘤干细胞(cancer stem cells)".
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125I对乳腺肿瘤组织缺氧诱导因子-1α的作用及其机制
目的 探讨125I粒子对乳腺肿瘤组织缺氧诱导因子(HIF)-1α表达水平的影响及其分子生物学机制.方法 建立人类乳腺癌MCF-7细胞株的裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤鼠随机分两组(每组10只):对照组:植入空载粒子和实验组:125I粒子植入组(0.4 mCi),瘤体长径8～10 mm时植入125I粒子,粒子植入后当对照组瘤体平均长径15～20 mm时,处死荷瘤小鼠,标本分别冻存和固定,用半定量逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印记及免疫组织化学染色方法检测HIF-1α的mRNA及其蛋白表达水平.结果 实验组中肿瘤组织及癌旁组织的HIF-1α的mRNA及其蛋白表达明显降低,与对照组比较差异有统计学意义[mRNA:q(肿瘤组织)=22.63,q(边缘组织)=19.53,P《0.01;蛋白:q(肿瘤组织)=87.54,q(边缘组织)=80.39,P《0.02;阳性细胞:q(肿瘤组织)=20.68,q(边缘组织)=16.47,P《0.01].两组正常组织中HIF-1α的表达变化不明显,差异无统计学意义(t=1.73,P》0.05).结论 125I粒子抑制乳腺肿瘤组织促肿瘤血管生长因子HIF-1α mRNA及其蛋白水平的表达.
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肿瘤抑制基因DBC2在乳腺癌中的表达和对T47D细胞增殖的抑制作用
目的 探讨抑癌基因DBC2在乳腺癌中的表达和抑制乳腺癌T47D细胞系增殖的可能机制.方法 逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测原发性乳腺癌标本中DBC2基因的缺失表达情况;检测DBC2的瞬时表达对T47D细胞增殖和细胞周期的影响,以及对关键细胞周期蛋白表达的作用.结果 在37.5%的原发性乳腺癌标本中DBC2的表达缺失;DBC2在T47D细胞中的瞬时表达使细胞周期出现G1期阻滞,DBC2瞬时表达48 h后,处于G1期的百分比为66.29%,而对照组为57.64%;DBC2的表达不能抑制Cyclin E和C-Myc的表达,但能显著的抑制Cyclin D1的表达.结论 DBC2的缺失表达与原发性乳腺癌的发生关系密切,DBC2的表达可抑制体外乳腺癌细胞的生长,可能通过抑制Cyclin D1的表达并使细胞停滞于G1期等机制实现.
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Ad-p53对乳腺癌阿霉素耐药细胞株多药耐药基因1/P-gp表达的影响
目的 观察腺病毒介导的p53基因(Ad-p53)逆转乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/Adr多药耐药作用及其对MDR1 mRNA/P-gP表达的影响.方法 以人乳腺癌MCF-7细胞及其阿霉素耐药株MCF-7/Adr为实验对象,以50 MOI Ad-p53感染MCF-7/Adr细胞,CCK-8法观察Ad-p53对多药耐药的逆转作用,实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MDR1 mRNA变化,免疫荧光组织化学及Western blot检测P-gP蛋白表达的变化.结果 50 MOI Ad-p53能使MCF-7/Adr细胞阿霉素IC50由(4.54±0.91)mg/L降到(0.26±0.11)mg/L,逆转耐药倍数为18.1倍(P《0.01);MDR1 mRNA相对表达量由1.32下降至0.85(P《0.01),P-gP蛋白表达量亦下降.结论 Ad-p53具有对人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/Adr多药耐药的逆转作用,其可下调MDR1 mR-NA/P-gP表达.
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p21waf1基因转染对乳腺癌细胞中心体复制和增殖活性的影响
目的 观察p21waf1基因转染对人乳腺癌细胞增殖活性和中心体复制的影响.方法 应用脂质体介导法将pIRES-p21waf1真核表达载体转染人人乳腺癌细胞系MCF-7,MTF法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫荧光技术检测乳腺癌细胞的中心体复制情况.结果 p21waf1基因转染后乳腺癌细胞生长显著受抑制,细胞周期停滞于G1期,转染组G1期、S期和G2/M期细胞比例分别为(70.52±3.21)%、(16.38 4±1.17)%、(9.42 ±0.98)%,未转染组则为(49.84±1.58)%、(36.83±1.36)%、(15.64±1.09)%,两者比较差异有统计学意义,P值分别《0.01、《0.05、《0.05.中心体复制异常的乳腺癌细胞数较转染前明显减少(P《0.01).结论 p21waf1基因转染能够抑制人乳腺癌细胞增殖和中心体的异常复制,进而阻止乳腺癌的发生发展,可能成为乳腺癌治疗的一种新手段.
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鞘内注射p38 MAPK抑制剂对乳腺癌骨转移大鼠疼痛行为及前炎性细胞因子表达的影响
目的 观察鞘内注射p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580对乳腺癌骨转移大鼠疼痛行为及前炎性细胞因子的影响.方法 成功制备骨转移疼痛模型SD大鼠11只,随机取6只(给药组)鞘内注射p38MAPK抑制剂SB203580,另5只设为对照.分别检测两组动物胫骨破坏程度、热刺激后爪退缩潜伏期(PWL)、脊髓白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达及蛋白含量.结果 11只大鼠均出现明显骨破坏伴左后肢热痛觉敏感性增加.给药组与对照组大鼠胫骨破坏程度无差异,但给药组大鼠左侧PWL值[16 d:(12.12±1.26)s;19 d:(12.99±1.65)s]显著高于对照组[16 d:(9.05±1.08)s;19 d:(8.55±1.60)s,P《0.05];左侧脊髓内IL-1β和TNF-α mRNA表达减少、蛋白含量降低(P《0.05).结论 骨转移癌痛大鼠鞘内注入SB203580不能阻止胫骨进一步破坏,但可以明显降低热痛敏感性,这可能与其抑制脊髓水平P38MAPK信号通路,降低了前炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的表达有关.
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乳腺癌与瘦素受体基因变异的关系
目的 探讨瘦素受体(OB-R)基因第exon4、exon6变异与乳腺癌的关系.方法 收集山西省肿瘤医院乳腺外科2005年1月至12月行手术治疗的乳腺癌患者癌灶组织85例,良性病组织30例,健康人群抗凝血50例.采用PCR扩增、测序的方法检测标本中OB-R基因exon4、exon6的变异情况.结果 OB-R基因exon4在乳腺癌、乳腺良性疾病患者和健康对照者均未发生变异.OB-R基因exon6的668核苷酸位点处发生了A→G的碱基颠换,导致Gln223Arg,乳腺癌组68例(68.24%),良性疾病组20例(66.67%)和健康对照组33例(66.00%)分别发生碱基颠换,但三组比较差异无统计学意义(P》0.05).在乳腺癌组的52例超重和肥胖患者中有43例(82.69%)OB-R基因exon6位点处碱基颠换明显高于与正常体重的17例(51.52%)患者,两组比较有统计学意义(χ2=12.89,P《0.01).结论 OB-R基因exon4与乳腺癌发生无关,exon6的变异与体重指数改变的乳腺癌患者有关.
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线粒体融合素基因-2对乳腺癌细胞增殖的影响及其机制
目的 观察外源性线粒体融合素基因-2(Mfn2)对乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的影响,探讨其抑制乳腺癌细胞产生增殖的机制.方法 将含有Mfn2cDNA的质粒在阳离子聚合物的介导下在体外转染MCF-7,蛋白印记法(Western blot)检测绿色荧光蛋白(GFP)、p21waf1、CDK2蛋白的表达,细胞计数测定Mfn2对MCF-7细胞增殖的影响,DNA直方图分析法测定Mfn2对MCF-7周期分布的影响,用Cyclins/DNA双参数流式细胞术对Cyclin A进行标记,Cellquest软件分析.结果 转染Mfn2基因的MCF-7细胞可以稳定高表达GFP蛋白;细胞计数测定表明转染Mfn2cDNA后,MCF-7细胞增殖明显受抑,DNA直方图分析法测定显示细胞停滞于S期;转染质粒组S期细胞占42.70%,转染空质粒组和空白对照组分别为17.15%、19.58%(P《0.05);用Cyclins/DNA双参数流式细胞术检测转染质粒组Cyclin A较对照两组明显升高;Western blot显示转染质粒组p21高表达,磷酸化CDK2低表达.结论 转染Mfn2基因可以明显抑制MCF-7细胞的增殖,并使细胞停滞于S期.
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中心体β-微管蛋白在乳腺癌前病变及其乳腺癌中的表达和意义
目的 探讨中心体β-微管蛋白在人乳腺癌前病变和乳腺癌中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测乳腺癌前病变、导管内癌和浸润性导管癌各50例中中心体β-微管蛋白的表达水平,30例乳腺正常组织作为对照组.结果 不同样本组中心体β-微管蛋白的表达水平不同(χ2=25.381,P《0.05),其在导管内癌组和浸润性导管癌组间的差异无统计学意义(z=-0.909,P》0.05),其他各组间均有统计学意义(P《0.05).此外,中心体β-微管蛋白表达水平与乳腺导管内癌的核分级、浸润性导管癌的组织学分级之间无明显相关(P》0.05),但与浸润性导管癌的腋淋巴结转移呈正相关(r=0.285,P《0.05).结论 中心体的异常可能是乳腺癌发生的早期事件,并促进肿瘤的发生发展.研究β-微管蛋白的表达情况可能成为探索乳腺癌发生发展机制的一条新的途径.
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不同转移特性稳定表达绿色荧光蛋白的乳腺癌MCF7细胞亚株的建立
目的 建立不同转移特性并稳定表达绿色荧光蛋白的人乳腺癌MCF7细胞亚株.方法 转染绿色荧光蛋白(GFP)入MCF7细胞,通过有限稀释法得到10株亚株,细胞电泳得到电泳率高(A2)、低(C6)的两株,测定其增殖率、克隆形成率、体外侵袭能力,行裸鼠皮下、原位成瘤试验.结果 获得稳定表达绿色荧光蛋白不同转移特性的细胞亚株A2和C6,A2的群体倍增时间为25.6 h,C6为41.8 h;软琼脂形成率A2为30.7%,C6为14%;体外侵袭能力,A2的平均侵袭细胞数为(136.80±12.36)个,明显高于C6(73.62±9.76)个;裸小鼠皮下成瘤试验发现A2成瘤力强,并且A2原位接种后可出现骨转移.结论 建立的细胞亚株有不同转移特性,有助于进一步研究乳腺癌骨转移的分子机制和治疗.
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实验外科之我见
实验外科旨在深入研究病因,寻找更敏感特异的诊断方法,探索新的治疗手段;而外科实践通过实验外科,加深对疾病的认识,提高外科诊疗水平.因此实验外科所要解决的问题来源于临床,后研究成果也运用于临床.过去外科学发展数百年中,实验外科在克服外科四大难题:疼痛、感染、出血、休克起到了极大的作用.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
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| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
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| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
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| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
