中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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丹参抑制转化生长因子-β1诱导的肌源性干细胞向肌成纤维母细胞分化
目的 观察丹参对失神经骨骼肌肌源性干细胞(MDSCs)向肌成纤维母细胞分化的抑制作用.方法 采用差速贴壁法分离出大鼠失神经骨骼肌MDSCs,加入转化生长因子-β1(TGF-β1)和丹参进行干预,将细胞分为3组:A:对照组；B:10 μg/L TGF-β1组；C:10 μg/L TGF-β1+ 150 mg/L丹参组.荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞在干预后5个时间点α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白(Vimentin) mRNA和蛋白表达.结果 与A组比较,B组和C组细胞α-SMA、Vimentin的mRNA在干预后第2、3、5、7天均明显升高(P＜0.05),其蛋白表达在干预后第3、4、6、8天亦显著升高(P＜0.05)；与B组比较,C组细胞α-SMA、Vimentin的mRNA和蛋白在对应时间点均明显降低(P＜0.05).结论 丹参能抑制TGF-β1诱导的失神经骨骼肌MDSCs向肌成纤维母细胞的分化.
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基于Isthmin和RGD基序的复合物对胶质瘤U251的治疗作用
目的 探讨基于Isthmin和BGD基序的复合物对胶质瘤U251的治疗效应.方法 构建Isthmin和RGD基序的复合物,并建立胶质瘤U251移植瘤模型,体内外观察其对U251细胞和血管内皮细胞的影响.结果 该复合物能有效诱导U251细胞的凋亡,抑制肿瘤血管的生成,从而抑制肿瘤的生长和延长荷瘤小鼠的平均生存率.结论 该复合物能同时靶向肿瘤和血管内皮细胞,为胶质瘤的基因治疗提供了较理想的策略.
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Survivin对PC-3细胞微小RNA表达的影响
目的 检测Survivin抑制后PC-3细胞微小RNA( miRNAs)表达谱的变化,探讨Survivin与相关miRNAs之间的关系.方法 利用负载Survivin短发夹RNA (shRNA)重组腺病毒( pGSadeno-sur shRNA),体外转染PC-3细胞,96 h后,收集细胞提取RNA,检测miRNA表达谱的变化.结果 共有650个miRNAs表达信号在雄激素非依赖前列腺癌PC-3细胞中可以被检测到,有9个miRNAs的表达信号水平高于1000,其中的6个miRNAs表达谱同实验组比较差异有统计学意义(P＜0.01).实验组与空白对照组比较有75个miRNAs表达差异有统计学意义(P＜0.01),其中42个表达上调、33个表达下调；阴性对照组与实验组比较有27个miRNAs表达差异有统计学意义(P＜0.01),其中22个表达上调、5个表达下调；实验组与空白对照组及阴性对照组比较均表达上调的miRNAs有15个,表达下调的miRNA有1个.结论 抑制PC-3细胞中Survivin的表达对miRNAs 表达谱有明显影响,为明确相关miRNAs在PC-3细胞中的作用提供新线索.
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结直肠癌中缺氧诱导因子-1α与Survivin表达的关系
目的 探讨结肠癌LS174T细胞及结直肠腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及与Survivin的关系.方法 构建靶向HIF-1α的质粒pSilence-2.1-U6-siRNA并鉴定,采用阳离子脂质体转染法将其转染LS174T细胞,低氧培养24h,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测siRNA对HIF-1α的抑制作用.Western blot检测Survivin蛋白表达.应用免疫组织化学方法检测69例人结直肠腺癌组织中HIF-1α、Survivin蛋白的表达.结果 LS174T细胞转染靶向HIF-1α的siRNA表达载体后,HIF-1α、Survivin表达显著下降.69例结直肠腺癌组织中,HIF-1α、Survivin蛋白的阳性表达率为66.7％ (46/69)和56.5％ (39/69).腺癌组HIF-1α蛋白阳性表达率显著高于腺瘤组(P＜0.01).Ⅲ期腺癌HIF-1α蛋白表达显著高于Ⅰ～Ⅱ患者(P＜0.05).结直肠腺癌中HIF-1α表达与Survivin显著正相关.结论 结直肠腺癌发展过程中HIF-1α与Survivin表达密切相关.
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缺氧及沉默缺氧诱导因子-1α对BxPC-3细胞中RUNX3基因表达的影响
目的 观察缺氧及应用小干扰RNA (siRNA)沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因对胰腺癌细胞株BxPC-3中RUNX3基因表达的影响.方法 构建人RUNX3基因真核表达载体质粒pEGFP-RUNX3,CoC12化学模拟肿瘤缺氧环境,检测缺氧以及siRNA沉默HIF-1α对BxPC-3细胞中RUNX3基因在mRNA和蛋白水平的影响.结果 缺氧能使BxPC-3细胞中RUNX3基因的表达较常氧时显著升高[表达为(9.13±1.55),P＜0.05],siRNA转染BxPC-3细胞后能显著下调HIF-1α蛋白表达(抑制率90％),并导致RUNX3基因的表达也受到明显抑制.结论 缺氧促使BxPC-3细胞中HIF-1α在蛋白水平表达升高,缺氧时HIF-1α能上调RUNX3基因的表达水平.
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重组人血管内皮抑素与化疗联合治疗肺癌的时序性研究
目的 观察重组人血管内皮抑素(恩度)与化疗联合应用的不同时序对疗效的影响.方法 60只荷A549人肺癌细胞株移植瘤裸鼠随机分为实验组和对照组,实验组分为D1、D3、D5、D7组,给予恩度治疗并分别在恩度治疗第1、3、5、7天进行化疗,比较各组裸鼠移植瘤瘤体积的变化 及抑瘤率.结果 治疗组裸鼠移植瘤生长速度较对照组均明显减慢,并从恩度治疗后第8～40天均显示差异无统计学意义(P＞0.05)；D3、D5、D7组较D1组移植瘤生长速度慢,且在第40天时点出现明显差异(P＜0.05)；D7组移植瘤生长速度慢,但与D3、D5组比较差异无统计学意义.D1、D3、D5、D7组抑瘤率分别为47.97％、46.78％、46.91％、53.52％.结论 恩度“窗口期”给予化疗疗效优于恩度与化疗同时给药,恩度给药后第7天进行化疗可能是佳时点.
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盐酸戊乙奎醚对吗啡依赖大鼠相关脑区p-CREB及M5受体的影响
目的 观察盐酸戊乙奎醚(PHC)对吗啡依赖大鼠相关脑区p-CREB及M5受体的影响.方法 将雄性SD大鼠30只随机分为对照组(NS组)、吗啡依赖组(MOR组)和PHC治疗组(PHC组),每组10只.连续7d交替皮下注射吗啡(10 mg/kg,每天1次)或生理盐水,诱导大鼠的吗啡依赖位置偏爱效应.实验第8天停用吗啡,NS组与MOR组腹腔注射等体积的生理盐水；PHC治疗组则腹腔注射PHC 1.5 mg/kg.30 min后各组大鼠行CPP测试.Western blot法检测大鼠中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层p-CREB的蛋白表达；实时定量聚合酶链反应(PCR)检测大鼠中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层M5受体的mRNA水平.结果 (1)PHC治疗组的灰区停留时间与MOR组比较显著缩短[(422±103)s 比(622 ±97)s,P＜0.01].(2)MOR组中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中p-CREB水平显著高于NS组[(0.93±0.06)、(0.67±0.10)、(0.89±0.14)比(0.31±0.02)、(0.20±0.01)、(0.40±0.07),P＜0.01]；与MOR组比较,PHC组中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中p-CREB水平显著降低[(0.65±0.05)、(0.58±0.04)、(0.67±0.09),P＜0.05或P＜0.01].(3)MOR组中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中M5受体的mRNA含量较NS组显著增高(1.80、0.22、0.50比1.00、0.13、0.32,P＜0.01)；与MOR组比较,PHC 组能明显降低中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中M5的mRNA含量(0.65、0.09、0.07,P＜0.01).结论 PHC能抑制吗啡依赖大鼠条件性位置偏爱的表达,该效应可能与PHC下调中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中M5受体,抑制p-CREB表达有关.
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Galectin-3在CD133+肺腺癌细胞中表达增高诱导CD8+T细胞凋亡
目的 检测肺腺癌CD133+细胞中Galectin-3的表达.方法 磁珠分选出10例患者肺腺癌中CD133+细胞.流式细胞术检测分选效率,荧光实时定量聚合酶链反应( fqRT-PCR)和Western blot检测CD133+细胞中Galectin-3的表达,并在体外检测了CD133+细胞上清诱导CD8+T细胞凋亡的能力.结果 流式细胞术结果表明磁珠分选出的细胞中CD133+细胞数为90％.fqRT-PCR 和Western blot结果发现Galectin-3在CD133+细胞中的表达量分别为CD133-细胞中的1.24倍和1.5倍,差异有统计学意义(P＜0.05).凋亡检测结果显示CD133+细胞的上清诱导CD8+T细胞凋亡率为(27.1±2.6)％,并且这种诱导凋亡的能力可被乳糖以及抗Galectin-3的抗体中和.结论 Galectin-3在肺腺癌CD133+细胞中高表达,并具有很强的生物学活性,在体外具有明显的诱导CD8+T细胞凋亡的功能.
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Runx2和骨钙素在钙化心脏瓣膜的表达
目的 探讨风湿性和退行性瓣膜钙化可能机制.方法 分为风湿性病变、退行性病变(n=10)和对照组,行瓣膜钙化检测.结果 苏木素—伊红(HE)染色观察病理变化,Yon Kossa染色显示病变瓣膜肉眼大致正常的组织内存在点状钙质沉积.免疫组织化学显示两组病变瓣膜内层见骨钙素分布,瓣膜间质细胞内见Runx2分布.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)显示病变瓣膜均有Runx2(灰度值0.297±0.154和0.287±0.172)和骨钙素(灰度值0.178±0.087和0.190±0.095)mRNA表达,两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 风湿性和退行性钙化瓣膜都存在Runx2 活化及其下游成骨信号蛋白骨钙素表达.肉眼观不能准确判断早期瓣膜钙化.
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乙酰胆碱对人房颤心房肌电生理特性的影响
目的 观察房颤时人心房肌细胞动作电位变化及迷走神经递质乙酰胆碱(ACh)对离体人心房肌动作电位(AP)及有效不应期(ERP)的影响.方法 选择20例心脏瓣膜病患者分为两组,其中11例合并房颤者为房额组(AF),9例窦性心律者为对照组(SR),术中取右心耳组织,采用玻璃微电极技术,检测两组患者静息膜电位(RMP),动作电位复极达90％的时程(APD90),动作电位复极达50％的时程(APD50)及不同起搏频率下APD90的变化,同时观察给予Ach前后上述指标的变化.结果 Ach灌注前,AF组与SR组间RMP( 63.70±3.00) mV比(54.70 ±2.19) mV、APD90 (312.60±11.92) ms比(406.30±14.61) ms、APD50( 177.30±14.05) ms比(218.50±15.10) ms差异有统计学意义(P＜0.05).Ach灌注后,AF与SR两组间RMP(67.8±2.0) mV比(61.4±1.8) mV、APD90 (263.60±13.38) ms比(316.20±15.40) ms、APD50( 173.60±16.82) ms 比(217.60±15.16) ms差异有统计学意义(P＜0.05).与灌注前自身比较,两组RMP显著增高、APD90显著缩短(P＜0.05).APD50差异无统计学意义(P＞0.05).但在AF组患者,其APD90缩短程度( △APD90,％)较SR组小(P＜0.05).结论 房颤时存在心房组织APD缩短,频率适应性降低等电重构,它促进了房颤的维持.Ach可加重重构作用,但在慢性房颤中这种作用减弱.这种改变可能是机体对抗房颤的一种调节机制.
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持续氧合血灌注供心对移植心脏急性排斥反应的影响
目的 观察持续氧合血灌注供心对移植心脏急性排斥反应的影响.方法 建立无缺血再灌注损伤(同系A1组、异系B1组)和缺血再灌注损伤(同系A2组、异系B2组)4种异位心脏移植模型,并设立对照组C,术后第7天取标本,Real-Time聚合酶链反应(PCR)检测移植心脏MHC-Ⅱ、B7-2 mRNA表达,免疫组织化学法检测CD4+T细胞浸润.结果 A2、A1组MHC-ⅡmRNA分别为9.30±0.53、1.48 ±0.31 (P ＜0.05)、B7-2 mRNA分别为5.45±0.43、1.46 ±0.30(P ＜0.05)、CD4+T 细胞数分别为4.86±0.90、3.14 ±0.69(P＜0.05)；B2、B1组MHC-ⅡmRNA分别为21.12±1.15、14.14±0.80(P ＜0.05)、B7-2 mRNA分别为13.41±0.43、8.23±0.48(P ＜0.05)、CD4+T细胞数分别为43.57±2.07、18.86±0.69(P ＜0.05).结论 持续氧合血灌注供心有助于减轻或延缓急性排斥反应的发生.
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整合素连接激酶对含成纤维细胞胶原网格收缩的影响
目的 探讨整合素连接激酶(ILK)对含成纤维细胞胶原网格(FPCL)收缩的影响和机制.方法 (1)运用人皮肤成纤维细胞(Fb)构建FPCL,观察ILK-AKT信号通路特异性抑制剂LY294002对FPCL收缩的影响.(2)运用Western blot印迹法检测ILK小干扰RNA(siRNA)转染和LY294002对Fb中ILK和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.结果 第24小时和第48小时LY294002组FPCL收缩率[(20.23±9.57)％、(22.47±10.93)％]明显低于对照组[(48.73±6.60)％、( 54.33±12.88)％](P＜0.05),第72、96和120小时FPCL收缩率为(25.58±7.40)％、(26.67±13.76)％、(28.82±3.48)％明显低于对照组(58.00 ±7.54)％、(59.67±11.29)％、(66.95±9.98)％和DMSO组(47.34±12.41)％、(52.26±10.90)％、(56.38±10.75)％ (P＜0.05).LY294002组和ILK siRNA转染组α-SMA蛋白表达(0.992 ±0.255、1.225 ±0.323)与各对照组(2.009 ±0.820、2.190 ±0.577、1.758±0.732)比较均显著降低(P＜0.05).结论 阻断ILK信号通路可明显抑制Fb构建的FPCL收缩和Fb中α-SMA的表达.
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吗啡对胃癌细胞Survivin和Caspase-9表达的影响
目的 观察吗啡对人胃癌MGC-803细胞Survivin和Caspase-9基因表达的影响.方法 胃癌MGC-803细胞分为两组:对照组和吗啡组.对照组不加任何药物,吗啡组将吗啡加入细胞培养液中使吗啡终质量浓度为0.1 μmol/L.孵育24h后应用流式细胞仪检测细胞凋亡,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测胃癌MGC-803细胞中Survivin和Caspase-9基因mRNA和蛋白的表达.结果 吗啡组胃癌细胞凋亡率为(17.20±2.95)％,明显高于对照组的凋亡率(11.40±2.86)％(P＜0.05)；RT-PCR和Western blot结果显示,吗啡组胃癌细胞中Survivin mRNA和蛋白表达降低,而Caspase-9 mRNA和蛋白表达增高(P＜0.05).结论 0.1μmol/L吗啡通过抑制Survivin的表达、增强Caspase-9的活性而促进胃癌细胞的凋亡.
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下腰椎不同固定方式的生物力学对比研究
目的 观察下腰椎不同固定方式对腰椎稳定性的影响.方法 新鲜成人尸体下腰椎标本6具,测定L4/5节段屈伸、左右侧屈、左右旋转6个方向ROM和刚度值的变化,按5组顺序依次测试:A组(正常下腰椎标本组)；B组(单侧椎板关节突螺钉固定+椎间单枚Cage)；C组(单侧椎弓根螺钉固定+椎间单枚Cage)；D组(单侧椎弓根螺钉联合对侧椎板关节突螺钉固定+椎间单枚Cage)；E组(双侧椎弓根螺钉固定+椎间单枚Cage).结果 与A组比较,B组各运动状态ROM有减少,而刚度明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05)；与B组比较,C组各运动方向ROM与刚度,差异无统计学意义(P＞0.05)；与C组比较,D组各运动状态ROM有减少,而刚度增加,差异有统计学意义(P＜0.05)；与E组比较,D组各运动方向ROM与刚度,差异无统计学意义(P＞0.05)；与E组比较,C组各运动状态ROM有增加,而刚度减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 单侧椎板关节突螺钉固定并椎间融合器植骨方法提供了一定的稳定性,而单侧椎弓根螺钉联合对侧椎板关节突螺钉固定并椎间融合器植骨具有与双侧椎弓根螺钉固定相同的稳定性,临床上可根据病例的具体情况,如身高体质量指数、病变类型及病变节段稳定程度选择性地应用上述两种固定融合方法.
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骨髓间充质干细胞对大鼠慢性胰腺炎中星状细胞的影响
目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对慢性胰腺炎(CP)中星状细胞(PSC)的活化、增殖和分化的影响.方法 将80只SD大鼠随机分为空白组(20只,注射无菌生理盐水)、模型组[20只,尾静脉注射二氯二丁基酯(DBTC)制作大鼠CP模型]、治疗组(20只,于CP模型制作成功后尾静脉注射体外培养的同种异体GFP-MSCs)、假治疗组(20只,于CP模型制作成功后尾静脉注射等量的无菌生理盐水).取大鼠胰腺检测PSC活化表达的Desmin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平,组织中Ⅰ、Ⅲ胶原含量及白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF) -β1表达水平.结果 治疗组PSC表达的Desmin、GFAP、α-SMA,组织中Ⅰ (0.135±0.030) ng/g、Ⅲ胶原含量(0.029±0.008) ng/g,TGF-β1 (0.020±0.006) μg/L浓度均低于假治疗组(P＜0.05),但IL-10 (603.799±89.374) g/ml,TNF-α(507.45±90.13) μg/L均高于假治疗组(P＜0.05),后者与模型组之间的差异无统计学意义(P＞0.05),空白组未见明显异常.结论 BMSCs可以通过对细胞因子的调控减少PSC的活化,抑制其增殖及分化,降低细胞外基质的沉积.
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DCC基因对乳腺癌细胞株MCF-7的作用
目的 克隆人类DCC基因并构建其真核表达载体plRES2-AcGFP1/DCC,将人DCC基因转染人乳腺癌细胞MCF-7中稳定表达,检测转染后细胞生物学特性的变化.方法 构建DCC基因表达载体plRES2-AcGFP1/DCC,用脂质体法将DCC基因的真核质粒表达载体pIRES2-AcGFP1/DCC导人人乳腺癌细胞MCF7中,细胞计数、生长曲线、细胞黏附分析、软琼脂实验检测转染后细胞的生物学特性变化.结果 将逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)扩增后的产物克隆到真核表达载体pIRES2-AcGFP1/DCC上,经PCR扩增筛选鉴定和测序鉴定证实为所需序列,转染乳腺癌MCF-7细胞后,DCC基因的表达明显增强.细胞计数和细胞生长曲线结果表明,转染后的MCF-7/DCC细胞生长速度明显地低于亲代的MCF-7和MCF-7/vect细胞(P＜0.05).细胞黏附分析显示,MCF-7/DCC细胞的黏附率较其他两组明显降低(P＜0.05).MCF-7/DCC与MCF7细胞的克隆形成率分别为34％、68％,MCF-7/DCC细胞的克隆形成率低于亲本细胞(P＜0.05).结论 DCC基因可有效抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、黏附能力.
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基质金属蛋白酶-2敏感型聚乙二醇复合水凝胶的制备及性质
目的 采用相对分子质量20000 Da分枝状聚乙二醇(four-armed PEG-Ac)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)敏感型底物肽制备一种可降解复合水凝胶,并检测其性能.方法 以制备浓度为10％ (w/v)的酶敏感型复合PEG水凝胶为实验A组,单纯PEG水凝胶为对照B组,比较两种水凝胶在37℃磷酸盐缓冲液(PBS)和血清的降解,并检测细胞毒性.在制胶过程中包埋转化生长因子(TGF-β1),观察两组水凝胶对TGF-β1的缓释效果.结果 PBS中A、B两组4周累计降解率分别为78.36％、76.28％,两者差异无统计学意义(P＞0.05)；分别添加正常人体血清,A组4周累计降解率为88.35％,降解速度加快,B组则变化不明显.噻唑蓝(MTT)比色法检测复合PEG水凝胶无细胞毒性.A、B两组水凝胶TGF-β17 d累计释放率分别为50.63％、44.36％,两者差异无统计学意义(P＞0.05),分别添加MMP-2后,A组对TGF-β1的释放速度明显加快.结论 MMP-2敏感型PEG水凝胶结构稳定,对细胞无毒性,包埋TGF-β1有良好的控释效果,有望应用于新型组织工程心脏瓣膜支架材料的研制.
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表皮生长因子受体单克隆抗体对胶质瘤U87细胞放疗敏感性的影响
目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体对胶质瘤放疗敏感性的影响及其机制.方法 U87胶质瘤细胞体外培养,建立小鼠的皮下和颅内胶质瘤动物模型,予以尼妥珠单抗或西妥昔单抗或联合两种抗体治疗,同时予以放疗,取各组实验肿瘤标本,计算相对肿瘤体积,比较治疗前后卫星肿瘤频率变化以及细胞增殖,比较各组以上结果的差异.结果 尼妥珠单抗和西妥昔单抗可增强体内U87MG肿瘤放疗敏感性,h-R3tRT和C255tRT组的中位RTV分别为2.2及2.8,与对照组中位RTV3.5比较差异有统计学意义.小鼠接受抗体的治疗后,卫星肿瘤数量减少了40％～80％,h-R3tRT组及C255tRT组卫星肿瘤频率分别为(9、1～25)和(4、0～17),与对照组卫星频率(18、3～40)比较差异有统计学意义.联合组尼妥珠单抗加强了放疗引起的增殖抑制为56.5％,而单独抗体组和单独放疗组分别为39.9和19.9％,而西妥昔单抗无论单独使用(7.8％),还是与放疗联用(21.7％),不产生明显的细胞增殖抑制作用.结论 EGFR单克隆抗体可增强U87MG细胞的放疗敏感性.
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蛋白磷酸酶2A抑制剂通过核因子-KB通路诱导胰腺癌细胞株PANC-1凋亡
目的 探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)抑制剂斑蝥素和冈田酸通过激活核因子-κB(NF-κB)通路诱导胰腺癌细胞株PANC-1凋亡的作用机制.方法 PP2A抑制剂处理胰腺癌细胞后,噻唑蓝(MTr)检测细胞活力,流式细胞术检测凋亡水平,Western blot检测NF-κB通路的激活水平.结果 PP2A抑制剂显著抑制胰腺癌细胞活力,呈剂量和时间依赖性,并可诱导细胞凋亡；PP2A抑制剂激活NF-κB通路的上游激酶IKKα,导致IκBα磷酸化并降解,并释放p65入核,从而激活NF-κB通路；阻断NF-κB通路,可削弱PP2A抑制剂的细胞毒性作用.结论 PP2A抑制剂通过NF-κB通路依赖性机制诱导胰腺癌细胞凋亡,有望用于胰腺癌治疗.
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糖尿病小鼠胰腺干细胞转分化为胰岛样细胞
目的 观察链脲佐菌素所致糖尿病小鼠胰腺干细胞是否能转分化为胰岛样细胞.方法 以链脲佐菌素建立糖尿病小鼠模型,分离培养其胰腺导管上皮细胞,经体外扩增及诱导培养后,以细胞免疫化学方法检测PDX1表达,行STZ染色和葡萄糖刺激的胰岛素释放试验鉴定其功能.结果 糖尿病小鼠胰腺干细胞经体外培养和诱导分化后,PDX1阳性,并形成胰岛样细胞团；胰岛样细胞对高糖刺激(15.0 mmol/L)的胰岛素释放较低糖(5.6 mmol/L)时增加了1.4倍(37.2±11.2比25.9±7.6,t =2.830,P＜0.05),DTZ染色阳性.结论 链脲佐菌素所致糖尿病小鼠胰腺干细胞在体外培养条件下可转分化为胰岛素分泌细胞.
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肌源干细胞的原代培养及量子点标记
目的 探讨大鼠肌源干细胞(MDSCs)的分离、培养新方法,并应用量子点进行标记.方法 应用差速贴壁法对10只新生SD大鼠腓肠肌进行原代培养获取肌源干细胞(MDSC),然后量子点对其进行标记,荧光显微镜下观察效果.结果 应用新生SD大鼠取材,消化时间25 min,可明显提高获取细胞数量(每高倍视野增加约25％)；荧光显微镜下观察量子点标记后的肌源干细胞,紫外光激发(激发波长≤400 nm)呈现明亮的橘红色.结论 应用新生SD大鼠取材缩短消化时间可明显提高肌源干细胞的获取量,量子点可成功标记肌源干细胞.
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联合甲磺酸伊马替尼和ABT-737对胃肠间质瘤细胞凋亡的影响
目的 观察联合甲磺酸伊马替尼(IM)和ABT-737对胃肠间质瘤细胞凋亡的影响.方法 培养胃肠间质瘤细胞株GIST-882；噻唑蓝(MTT)比色法分析不同浓度ABT-737和不同处理时间对GIST-882细胞生长的影响；分析联合应用不同浓度IM和ABT-737对GIST882细胞生长的影响.Western blot法分析IM处理对bcl-2蛋白的影响；并分析联合应用IM和ABT-737对Caspase-3 蛋白表达的影响.结果 10 μmol/L的ABT-737作用细胞24、48、72 h后,细胞的生存率分别是70％、55％、38％；20 μmol/L的ABT-737作用细胞24、48、72 h后,细胞的生存率均小于10％.0.1μmol/L的IM联合0.1μmol/L的ABT-737可将GIST-882细胞的生存率抑制在20％以下,10 μmol/L的IM联合10 μmol/L的ABT-737可将GIST-882细胞的生存率抑制在10％以下.IM对GIST882细胞bcl-2蛋白的表达无明显影响；联合应用IM和ABT-737可以促进GIST-882细胞活化型Caspase-3 蛋白的表达.结论 联合应用ABT-737可以加强IM对GIST细胞的促凋亡作用.
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灯盏细辛对大鼠肾冷缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响
目的 观察中药灯盏细辛对大鼠肾脏冷缺血再灌注损伤(IRI)中肾脏细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法 封闭群SD大鼠36只,随机分为3组,每组12只.假手术组(A组),对照组(B组),实验组(C组).药物应用:C组术前15 min,灯盏细辛注射液按1.2 ml/100 g通过尾静脉注射,A、B组按相应剂量注射生理盐水.动物手术:A组,切除右肾.B、C组采用的是冷IRI模型,3组大鼠均在术后24h再次手术切除左肾进行检测.透射电镜检查肾组织形态学,免疫组织化学检测凋亡相关的基因bcl-2与bax的表达,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果 (1)超微结构检查(透射电镜):A组结构正常；B组细胞呈损伤形态:线粒体肿胀,微绒毛减少,胞质内空泡形成,部分细胞核可见凋亡迹象.C组病变较B组显著减轻.(2)免疫组织化学蛋白阳性染色指数(PI):缺血再灌注后B、C组的bcl-2表达分别为(21.21±1.18)％和(35.52±1.94)％,较A组(4.95±0.77)％均增多(P＜0.05),B组低于C组(P＜0.05).B、C组的bax表达分别为(58.55±2.90)％和(45.90±3.14)％,较A组(4.67±0.67)％增多(P＜0.05),而且B组高于C组(P＜0.05).A组的蛋白阳性染色指数的比值bcl-2/bax为(1.06±0.07)高于B组(0.35±0.03)和C组(0.78±0.07,P＜0.05),而且C组高于B组(P＜0.05).(3)细胞凋亡检测(TUNEL):细胞凋亡指数B组(28.57±3.58)％和C组(19.99±3.37)％均显著大于A组(2.33±0.42)％(P＜0.01),C 组小于B组(P＜0.01).结论 灯盏细辛减少大鼠肾脏冷IRI诱导的肾脏细胞的凋亡,与调节凋亡相关基因bcl-2与bax表达有关.
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肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因对人乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响
目的 观察肿瘤相关钙信号传导蛋白-2(TROP-2)基因小干扰RNA (siRNA)对乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响.方法 培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株,以荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测TROP-2基因mRNA表达；筛选出TROP-2表达高者.采用TROP4基因siRNA转染乳腺癌细胞,分别以荧光实时定量RT-PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平,然后以噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力.结果 人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-35、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株TROP-2 mRNA分别是1.362±0.057、2.207±0.056、2.997±0.052、0.136±0.045、0.122±0.025、0.194±0.028和2.706±0.039,以MCF-7细胞高;以TROP-2 siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性；黏附实验结果显示,5、10、20 nmol/L siRNA组黏附率分别为(52.9±2.5)％、(25.6±2.3)％、(12.8±2.2)％(P＜0.01)；Transwell实验结果显示,5、10和20 mol/L siRNA组穿过滤膜的细胞分别为78±17、39±15、19±16,而对照组分别为136±25、139±21(P＜0.01).结论 TROP-2基因在乳腺癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用；以siRNA转染乳腺癌细胞,可抑制乳腺癌细胞黏附和侵袭能力.
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雷帕霉素对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察雷帕霉素(RAPA)对人骨肉瘤细胞U-2OS和Saos-2增殖和凋亡的影响并探讨其机制.方法 体外培养骨肉瘤细胞株U-2OS和Saos-2；噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测不同浓度雷帕霉素对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响；Western blot检测雷帕霉素作用后骨肉瘤细胞Fas蛋白表达的变化.结果 MTT检测显示雷帕霉素可抑制入骨肉瘤细胞增殖,在雷帕霉素浓度达到20 nmol/L时,抑制作用显著提高(P＜0.05),增殖抑制率分别达到31.2％和28.7％.流式细胞检测显示在雷帕霉素浓度达到20 nmol/L时,其诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用显著增强(P＜0.05).Western blot检测显示经雷帕霉素作用48 h后的骨肉瘤细胞Fas蛋白的表达明显增强.结论 雷帕霉素对入骨肉瘤细胞株U-2OS和Saos-2的增殖有抑制作用并可诱导其发生凋亡,其可能是通过上调Fas蛋白的表达而发挥作用的.
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Wnt3a联合骨形态发生蛋白2对骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响
目的 观察经典Wnt/β-catenin以及骨形态发生蛋白(BMP)信号通路对大鼠骨髓来源的间充质干细胞(BMSCs)体外增殖以及向成骨方向分化的影响.方法 应用密度梯度离心联合贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞并分4组:对照组、Wnt组、BMP组、Wnt3a和BMP-2联合组,在不同时间点用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖活性,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定、Yon Kossa染色观察细胞向成骨分化和基质矿化程度.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测成骨特异性标志物表达.结果 培养第7天,CCK-8测吸光度值联合组为0.845,Wnt组为0.738,明显高于对照组0.409(P＜0.05).培养第6天和第12天,ALP活性吸光度值联合组为63.8和144.3,BMP-2组为40.8和104.1,均明显高于对照组7.3和18.9(P ＜0.05).培养14 d后,联合组骨钙素mRNA表达量高于对照组,而Runx2及Osterix表达量与其他组比较增高不显著.培养3周后,Yon Kossa染色显示联合组钙结节数量及大小均高于对照组.结论 Wnt3a因子和骨形态发生蛋白-2联合诱导能有效地促进骨髓间充质干细胞增殖及向成骨方向分化.
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泡状棘球蚴感染诱导免疫耐受的研究
目的 观察泡状棘球蚴感染对纯系大鼠异位移植心脏存活时间的影响并探讨发生机制.方法 建立Brwon norway(BN)大鼠到Lewis (LEW)大鼠的颈部异位心脏移植模型.对照组(n=12)以健康的LEW大鼠为受者；实验组(n=12)以感染泡状棘球蚴的LEW大鼠为受者.术后观察移植心的存活时间、组织病理学变化,测定血清内白细胞介素-4(IL-4)和y-干扰素(IFN-γ)水平.FACS 流式检测实验组和对照组大鼠脾内CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25+ Treg细胞)的数量水平.结果 实验组与对照组移植心的存活时间分别为(16.17±3.19)d及(7.92±1.93)d,两组差异有统计学意义(P＜0.05).实验组移植心的组织病理学分级(平均分级为3.38级)与对照组(平均分级为3.79级)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).发生排斥反应后,实验组血清内IL-4水平为(152.21 ±45.62) ng/L高于对照组(50.85±22.15) ng/L,而实验组血清内IFN-γ水平为(12.35±1.02) ng/L水平低于对照组(42.63±4.15) ng/L,两组差异均有统计学意义(P ＜0.05)；FACS流式检测结果提示实验组大鼠脾内CD4+ CD25+ Treg细胞数量为10.8％,高于对照组的6.1％,两组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 泡状棘球蚴感染造成Th1/Th2向Th2类细胞因子偏移,通过介导CD4+ CD25+ Treg细胞数量增加而导致大鼠异位移植心脏存活时间延长,它可能是诱导移植免疫耐受的原因之一.
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急性胰腺炎大鼠肾上腺损伤中bax与bcl-2表达的研究
目的 观察急性胰腺炎(AP)大鼠肾上腺损伤时细胞凋亡及调控基因bcl-2和bax蛋白的表达及作用.方法 采用牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射法建立AP模型.术后3、6、12 h检测血皮质酮水平,观察肾上腺病理,TUNEL检测细胞凋亡,免疫组织化学检测bcl-2和bax蛋白表达.结果 与SO组比较,AP3 h组血清皮质酮显著增高,随后逐渐降低(P＜0.05).随病程延长,肾上腺细胞凋亡指数增高,bax蛋白表达增强,bax/bcl-2比值亦逐渐升高(P值均＜0.05),并与凋亡指数(AI)呈正相关(r =0.759,P＜0.05).结论 bax和bcl-2可能参与了AP肾上腺损伤的发病过程.通过激活bcl-2和抑制bax的蛋白表达,减少细胞凋亡发生从而保护肾上腺结构和功能,可能为今后AP及相关肾上腺损伤的药物及基因治疗提供依据和新思路.
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INI1基因对胃癌细胞增殖活性的影响及其机制
目的 通过改变INI1基因表达水平探讨INI1对胃癌细胞增殖活性影响的分子机制.方法 荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot方法检测15例胃癌及癌旁组织INI1 基因mRNA和蛋白质的表达水平；将INI1-GFP真核表达质粒及INI1特异性小干扰RNA(INI1-siRNA)分别转染人胃癌SGC7901细胞株,Western blot方法检测过表达及下调表达INI1的效率；噻唑蓝(MTT)比色法检测过表达及下调表达INI1后SGC7901细胞的增殖活性的改变,荧光定量RT-PCR及Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达改变.结果 临床胃癌组织中INI1蛋白及mRNA表达水平明显低于癌旁组织(P＜0.01)；INI1-GFP转染S1GC7901细胞可明显增加INI1表达水平,同时降低细胞增殖活性(P值均＜0.01)；而INI1-siRNA转染可明显降低INI1表达水平,同时增加SGC7901细胞增殖活性(P值均＜0.01)；上调INI1表达可抑制PCNA表达水平,而下调INI1表达则增加PCNA的表达(P值均＜0.01).结论 INI1具有抑制胃癌细胞增殖的作用,此作用与其负向调节PCNA表达有关.
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不同浓度γ干扰素诱导大鼠脾脏来源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的变化及对T淋巴细胞增殖的影响
目的 观察不同浓度γ干扰素(IFN-γ)作用下大鼠脾脏来源的树突状细胞(DC)中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO) mRNA和蛋白表达的变化及IDO对同种异体T淋巴细胞增殖的影响.方法 应用细胞因子体外诱导培养大鼠脾脏来源DC,应用流式细胞仪测定大鼠DC特异性分子OX62 和表面分子CD80、CD86的表达.分别用不同浓度(0、100、300、500 U/ml)的IFN-γ诱导作用DC后,实时聚合酶链反应( Real-time PCR)测定DC中IDO mRNA的相对表达水平,Westemblot检测DC中IDO蛋白在DC中的表达水平.同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)检测不同浓度IFN-γ诱导后的DC对同种异体T淋巴细胞增殖的影响.结果 体外诱导培养的DC光学显微镜下观察,具有典型的树枝状突起.0X62表达率达到80％以上,CD80、CD86的阳性表达也在80％左右；DC的IDOmRNA(2 -△△Ct值分别为:1.010 ±0.094、1.340±0.114、1.700±0.087、2.080±0.150)和蛋白的相对表达量(分别为:0.861 ±0.612、1.155±0.059、1.308±0.068、1.755±0.118)随着IFN-γ作用浓度的增大逐渐增大,分别为:不同浓度组间差异有统计学意义(P＜0.05)；各组IFN-γ作用后DC与对照组比较,T淋巴细胞的增殖率显著降低(P＜0.05)；且随着IFN-γ作用浓度的增大T淋巴细胞的增殖率逐渐降低,A值分别为:0.458±0.041、0.423±0.030、0.349±0.019、0.312±0.036,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用改良的培养黏附法体外获得纯度较高的大鼠脾脏来源的DC；IFN-γ可以诱导大鼠脾脏来源DC表面活性IDO的表达增加,减弱脾脏DC对同种T细胞增殖的刺激能力.
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布-加综合征下腔静脉病变隔膜相关基因筛选及其靶基因分布预测
目的 筛选布-加综合征下腔静脉病变隔膜相关基因及其靶基因分布规律,从基因角度探讨布-加综合征(B-CS)的发病机制.方法 应用基因芯片检测布-加综合征下腔静脉病变隔膜和正常下腔静脉壁中差异表达的基因,并应用相关软件预测对应的靶基因分布.结果 病变隔膜与正常下腔静脉壁组织中的差异表达的基因有9371个,其中4986个在病变隔膜基因表达谱中出现上调,4385个出现下调.在数据库中能预测到这些差异基因的靶基因近百个,其中有涉及细胞代谢、细胞增殖、信号转导和细胞凋亡的靶基因,也有部分与已知的癌基因和抑癌基因相关的基因.结论 基因芯片能有效分析出B-CS下腔静脉病变隔膜的相关基因表达谱,并利用相关软件预测出其可能的靶基因,这些基因的异常表达可能参与了病变隔膜的形成.
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阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者血清C反应蛋白、内皮素-1、肿瘤坏死因子-α水平变化及其临床意义
目的 探讨血清C反应蛋白(CRP)、内皮素-1(ET-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAHS)中的变化及其意义.方法 选取经多导睡眠监测系统(PSG)确诊且未经治疗并排除其他疾病的OSAHS患者60例为OSAHS组；对照组为50例PSG监测正常且排除其他疾病者.分别测定CRP、ET-1、TNF-α水平.结果 OSAHS组血清CRP、ET-1、TNF-α分别为(7.87±6.56) mg/L、(84.24±23.46) ng/L、(24.83±5.89) ng/L,均高于对照组(P＜0.05).结论 血清CRP、ET-1、TNF-α水平在OSAHS患者中均升高,表明它们均参与了OSAHS的病理生理过程,OSAHS患者存在着系统性炎症.
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Leptin在勃起功能障碍患者中的表达及其意义
目的 检测勃起功能障碍(ED)患者的瘦素水平,探讨Leptin在ED患者中的表达及其意义.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别检测60例ED患者(患者组)及30名健康成人(对照组)清晨空腹血瘦素水平,同时记录所有人的身高、体质量并计算体质量指数( BMI),根据勃起功能国际问卷( IIEF-5)评分将患者组分为轻、中、重3组.结果 患者组和对照组瘦素水平与BMI都明显相关；在排除BMI影响的情况下,患者组瘦素值(11.33±5.32) μg/L明显高于对照组(4.41±3.56) μg/L(P＜0.05)；同时轻、中、重3组的瘦素值分别为(6.98±5.19) μg/L、(10.60±8.11) μg/L、(13.90±9.43) μg/L,有明显上升趋势(P＜0.05).结论 测定瘦素水平对勃起功能障碍患者的诊断与疗效评估有一定参考价值.
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Caveolin-1在一氧化氮介导的三维纤维蛋白凝胶血管新生模型中的作用
目的 观察Caveolin-1( Cav-1)在一氧化氮(N0)介导的血管新生中的作用.方法 建立人脐静脉内皮细胞(HUVECs)三维纤维蛋白凝胶血管新生模型.通过管腔形成指数(TFI)来定量分析毛细血管管腔样结构,以亚硝酸盐来反映NO的产生量.根据是否添加血管内皮生长因子(VEGF)和N-硝基-L-精氨酸(L-NAME)分为VEGF组、VEGF+L-NAME组和对照组.HUVECs转染反义寡核苷酸( ASON)和无义寡核苷酸(NSON),并将其分为ASON组、NSON组和对照组.结果 VEGF组TFI和亚硝酸盐分别为(3.15±0.46)、(0.36±0.05) mmol/L,明显高于对照组(0.89±0.09)、(0.18 ±0.02) mmol/L(P＜0.05).VEGF+ L-NAME组TFI和亚硝酸盐分别为(1.06±0.13)、(0.21±0.02) mmol/L,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).HUVECs在三维纤维蛋白凝胶内培养后Cav-1的表达水平逐渐升高.ASON组TFI(1.28±0.15)明显低于对照组(3.27 ±0.33)和NSON组(3.05±0.31) (P ＜0.05),转染ASON的HUVECs添加VEGF和L-NAME后TFI和亚硝酸盐无明显改变,差异有统计学意义(P＞0.05).结论 Cav-1对NO介导的血管新生起非常重要的调节作用.
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去整合素和金属蛋白酶17调控胰腺癌细胞增殖凋亡的机制
目的 探讨去整合素和金属蛋白酶17(ADAM17/TACE)调控胰腺癌细胞增殖凋亡的作用机制.方法 分别采用免疫组织化学及流式细胞仪检测58例胰导管腺癌组织及6株胰腺癌细胞株中ADAM 17/TACE的表达,用小RNA干扰(siRNA)技术去除胰腺癌细胞L3.6pl ADAM17/TACE mRNA及蛋白表达后,CCK-8试剂盒检测胰腺癌细胞L3.6pl的生长速度,Western blot检测ADAM17/TACE、凋亡相关基因PARP、增殖相关基因p27( p27kipl)表达.阻断表皮生长因子受体(EGFR)及丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路后,Western blot检测ADAM17/TACE及EGFR/p-EGFR、AKT/p-AKT的表达变化.结果 58例胰导管腺癌组织及6株胰腺癌细胞中ADAM17/TACE的表达阳性率均为100％.同亲代L3.6pl细胞比较,siRNA干扰ADAM17/TACE mRNA的表达后,L3.6pl细胞生长速度减缓(P＜0.05)；p27kipl的表达明显增强；多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)表达亦明显增强提示出现凋亡；分别阻断EGFR和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/AKT信号通路后,ADAM17/TACE蛋白表达均增加.结论 ADAM 17/TACE调控胰腺癌细胞增殖,抑制其表达可致胰腺癌细胞凋亡,可能与PI3K/AKT信号通路相关.
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5-杂氮-2′-脱氧胞苷对前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响
目的 检测E-cadherin基因在激素非依赖性前列腺癌(HIPC)细胞上的表达及启动子CpG岛甲基化,探讨甲基化抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对HIPC细胞的影响及意义.方法 2.5、5.0、10.0 μmol/L的5-Aza-CdR处理PC-3细胞72h后,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测CpG岛甲基化改变,逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测E-cadherin mRNA变化,Westernblot方法检测E-cadherin蛋白变化,Transwell小室检测细胞侵袭性改变.结果 HIPC的E-cadherin启动子CpG岛甲基化呈阳性,基因表达缺失,细胞侵袭性明显.经5-Aza-CdR作用之后,CpG岛甲基化阳性明显减弱(P＜0.05),E-cadherin基因恢复表达(P＜0.05),PC-3细胞的侵袭性下降约59.68％,且与药物的浓度呈正相关.结论 5-Aza-CdR可逆转PC-3细胞E-cadherin启动子CpG岛的异常甲基化,诱导mRNA转录和蛋白的表达,并降低癌细胞的侵袭性.
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聚桂醇在体外对肝癌细胞的杀伤作用
聚桂醇是一种新型硬化剂,本研究旨在观察聚桂醇对肝癌细胞的杀伤作用,现报道如下.一、材料与方法1.材料:人肝癌细胞株HepG2;聚桂醇注射液(陕西天宇制药有限公司);四氮唑盐(Sigma-aldrich);680酶标仪( Bio-rad).2.实验方法:(1)细胞株生长杀伤实验[噻唑蓝(MTT)比色法]:取对数生长期HepG2细胞,制成细胞混悬液,接种于96孔板,每孔100μl(含3000个细胞).
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人参皂苷Rb1对体外条件下大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的影响
本研究旨在观察人参皂苷Rb1在体外条件下对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨分化的影响.一、材料与方法实验于南方医科大学实验中心完成.1.材料:5周龄SD大鼠6只,体质量150～200 g.试剂:人参皂苷Rb1干粉由中国药品生物制品检定所提供.
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外源性硫化氢对肢体缺血再灌注所致中性粒细胞肺内黏附的作用
近来研究表明,硫化氢(H2S)是继一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)之后的第3种气体信号分子[1].本研究旨在观察外源性H2S对肢体缺血再灌注(IR)所致肺中性粒细胞(PMN)与肺微血管内皮细胞(PMVEC)黏附的作用.一、材料与方法1.PMVEC细胞株购自Clonetics公司.应用胰酶消化法传代,在细胞亚融合时进行实验.
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携带白蛋白启动子小鼠SCP2基因表达载体的构建
胆汁中胆固醇的过多分泌伴随肝细胞浆内胆固醇的浓度显著增高是形成胆固醇结石的关键因素,其中固醇携带蛋白2(SCP2)是影响肝细胞中游离胆固醇浓度的主要因素.本实验旨在构建携带白蛋白启动子小鼠SCP2基因表达载体.
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核转录因子-κB小干扰RNA转染对食管癌细胞化疗敏感性的影响
我们通过小分子干扰RNA(siRNA)阻断核转录因子(NF) -κB信号通路,观察其对食管鳞癌细胞增殖及化疗敏感性的影响.一、材料与方法构建NF-κB p65 siRNA载体质粒“p65 siRNA”及无义序列质粒“HK”并转染食管癌Eca109细胞,转染72 h后将细胞分为:(1)对照组:未转染Eca109细胞;(2) HK组:Eca109细胞转染HK;(3) p65siRNA组:Eca109细胞转染p65siRNA.
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Bryan人工颈椎间盘置换术后颈椎应力变化的三维有限元分析
我们建立了三维有限元模型,于椎间隙植入Bryan人工颈椎间盘假体,通过力学分析方法评价人工颈椎间盘置换对手术节段及上、下邻近节段的活动及应力变化的影响.一、材料与方法1.CT扫描:选取1名行“Bryan人工颈椎间盘置换术( C5/6)”治疗的颈椎病患者为志愿者,分别于术前和术后6个月采用SIEMENS 64层螺旋CT扫描机进行扫描,层厚0.6mm,扫描范围包括C4～C7全部骨性结构、韧带、椎间盘及Bryan人工颈椎间盘假体.
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幼龄大鼠体外循环模型的建立
体外循环(CPB)对各个脏器均有损伤,婴幼儿心脏手术后尤为明显.我们建立幼龄大鼠体外循环模型,为研究幼龄动物体外循环后炎症机制及干预措施提供良好的动物模型.一、材料和方法:1.材料:幼龄健康SD大鼠14只,年龄:5 ～6周,体质量(216.20±9.33)g,由安徽医科大学动物实验中心提供);呼吸机、蠕动泵、监护仪、血气分析仪、动物膜肺、自制静脉留置针,20ml注射器,自制体外循环管道.
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靶器官对周围神经分化的影响
周围神经系统负责全身各部分的运动和感觉,其支配的靶器官对神经的分化起着决定性的作用,周围神经之所以能够分化成运动神经和感觉神经正是由于其支配的靶器官不同所致[1].本实验旨在探讨能否利用改变神经支配的靶器官的方式调控神经的分化过程,重塑神经的性质.
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家兔微创心肌梗死模型的研究
心肌梗死是威胁人类生命的严重疾病之一.我们在已往心肌梗死动物模型的基础上加以改进,采用微创的方法建立了比较稳定的家兔心肌梗死模型,结扎左冠状动脉前降支(LAD)所致家兔心肌梗死与临床上单只冠脉阻塞形成的心肌梗死相似[1].
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不同强度运动对关节软骨退变的影响
我们通过建立不同强度运动训练的大鼠模型,把不同强度作为不同的关节软骨外加应力的剂量干扰因素,观察其血液中CTX-Ⅱ、软骨中Ⅱ型胶原及滑膜中基质金属蛋白酶(MMP) -13的水平.一、材料与方法:1.动物分组及训练设计:清洁级雄性SD能适应跑台运动的大鼠50只,体质量( 178.57±12.31)g(由中国医科大学附属盛京医院实验中心动物实验窒提供),分笼(3～5只/笼)饲养.
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Shh/Gli2信号轴在小鼠急性胰腺炎中的表达及意义
在慢性胰腺炎症过程中,Hedgehog(Hh)信号与组织的修复以及细胞增殖密切相关[1];而在急性胰腺炎症损伤中,Hh的作用不清楚.本研究通过诱导小鼠急性胰腺炎(AP)模型,观察Hh信号以及下游关键转录因子GLI2的表达,探讨胰腺急性损伤时组织修复的机制.
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乳腺癌中MUC1、MUC2的表达及其临床意义
黏蛋白(MUC)是一类高分子的糖蛋白,MUC1和MUC2是Mucin家族的主要成员[1].本研究旨在检测乳腺癌组织中MUC1和MUC2 mRNA的表达及临床意义.一、材料与方法1.一般资料:乳腺疾病患者254例,其中乳腺良性疾病患者68例,乳腺癌患者186例.
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不同压力CO2气腹对肝癌细胞体外侵袭能力的影响
腹腔镜肝癌手术中,CO2气腹是否会增加肝癌细胞的侵袭能力,以及由此促进了肿瘤在腹腔内的种植和转移,是腹腔镜外科医生尤为关心的问题.我们应用体外模拟CO2气腹环境,观察不同气腹压力对肝癌细胞体外侵袭能力的影响.一、材料和方法1.细胞培养及分组:肝癌SMMC-7721细胞(取自南昌大学消化研究所)常规培养于含10％小牛血清的RPMI 1640中.
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肝内单发病灶的复发性肝细胞癌的临床病理特点
目的 探讨肝内单发病灶的复发性肝细胞癌的临床病理特点.方法 对96例复发性肝细胞癌患者进行分析,根据其肝内复发病灶为单发或多发将其分为单发组(46例)和多发组(50例).对两组患者的10项临床病理指标及3项病理免疫组织化学指标进行统计分析.结果 两组比较差异有统计学意义的指标中,初次手术切除时肿瘤直径≤5 cm者单发组为67.4％(31/46),多发组为34.0％(17/50)；脉管无癌栓者单发组为76.1％ (35/46),多发组为56.0％(28/50)；复发时间＞1年者单发组为65.2％ (30/46),多发组为40.0％( 20/50)；Ki-67阳性细胞数≤20％者单发组为43.5％ (20/46),多发组为24.0％ (12/50).结论 初次手术切除时肿瘤直径≤5 cm,脉管无癌栓,复发时间＞1年,Ki-67阳性细胞数≤20％的原发性肝细胞癌术后复发时为单发病灶.
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乳腺浸润性导管癌前驱病变的病理形态学诊断
目的 探讨乳腺浸润性导管癌前驱病变的诊断及鉴别诊断要点.方法 收集乳腺癌前驱病变86例,光镜下观察苏木素-伊红(HE)切片,将病变分为:导管上皮不典型增生(ADH)组,导管原位癌(DCIS)组,包括低、中度、高度DCIS,并观察ADH和DCIS的细胞特征及形态结构.结果 ADH组35例,18例显示在普通型导管增生(UDH)的背景上混杂有非典型细胞或特征性结构；另17例与低度DCIS有相似的结构和细胞学特征.DCIS组51例,低度者(17例)细胞结构单一,界限清楚,大小、形态一致,异型性不明显,无坏死及核分裂像；中高度者(分别为14例和20例)细胞极性消失,异型性明显,中度为灶状坏死,高度为大片粉刺样坏死；结构上有实体型、筛状型、粉刺型及混合型.结论 ADH与DCIS的诊断主要依赖细胞和结构特征；部分ADH虽与低度DCIS相似,但仍有差异.
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耐受性树突状细胞和调节性T细胞相互作用研究进展
树突状细胞(DCs)是体内重要的抗原递呈细胞(APC),其重要的特点就是能够刺激初始型T细胞增殖,是机体免疫系统反应的启动者,在免疫应答过程中起着重要的作用,同时DCs在诱导免疫耐受中起重要作用,是诱导外周免疫耐受的调控点[1].而近年来在免疫学领域的另一研究热点则是对调节性T细胞(Tr)的研究.Tr细胞是外周免疫耐受新的重要作用机制,它可通过细胞接触或者抑制性细胞因子作用于APCs或效应性T细胞,从而发挥调节效应.越来越多的研究结果证实DCs与Tr细胞在人类免疫调节过程中存在着紧密联系.现介绍DCs与Tr在免疫调节中的相互作用的进展.
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虚拟手术在经椎弓根螺钉内固定术中的应用
自1969年Harrington等[1]完成经椎弓峡部的椎弓根螺钉内固定术后,该手术方法已在全世界范围内广泛开展.与其他脊柱固定术比较,经椎弓根螺钉固定术有更好的生物机械稳定性,因而能更好地促进相邻椎骨的融合[2-3].由于椎弓根临近血管、神经、脊髓,螺钉植入位置不当可导致神经、血管或其他重要结构的损伤[4-5],从安全角度出发,数10年来术者们采用了多种方法来减少脊柱椎体固定手术中的上述并发症.
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嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞在肿瘤免疫治疗中的研究进展
随着肿瘤免疫学理论和技术的发展,免疫治疗在肿瘤治疗中的作用目益受到重视.T淋巴细胞在肿瘤免疫应答中起主要作用,基于T细胞的过继性细胞免疫治疗(ACI)在部分恶性肿瘤中取得了一定的效果,但在大多数肿瘤中疗效尚不能令人满意[1].近年来,一种新的免疫治疗方法嵌合抗原受体(CAR)基因修饰T细胞显示出的靶向性、杀伤活性和持久性为ACI注入了新的活力.
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肝癌姑息性切除术后裸鼠残癌模型的建立
目的 建立肝癌姑息性切除术(PR)后可研究残癌生物学特性变化的转移性裸鼠人肝癌原位移植瘤模型.方法 采用单肝叶双瘤源原位接种技术建立MHCC97H原位移植瘤模型,PR切除1瘤,观察5周.测量肿瘤大小,流式细胞术计数外周血循环肿瘤细胞数,荧光显微镜和苏木素-0伊红(HE)染色检测肝内、肺、腹腔转移等,免疫组织化学染色和Western blot检测脑和肿瘤组织Vimentin表达.结果 双瘤源接种成瘤率95.6％、PR成功率95.3％、裸鼠5周总体存活率90.2％.假手术组、肝部分切除术组、PR组肿瘤大小、循环肿瘤细胞数均依次升高,肝内转移率分别为15.4％、41.7％、83.3％,肺转移率分别为61.5％、91.7％、100.0％,腹腔转移率分别为23.1％、50.0％、83.3％(P值均＜0.05).手术组脑和肿瘤组织Vimentin表达均显著上调.结论 成功建立转移性裸鼠人肝癌原位移植瘤合并PR模型,可用于研究残癌生物学特性的变化.
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47℃恒温不完全热消融后肝癌细胞对血管内皮细胞功能的影响及机制
目的 观察47℃不完全热消融后肝癌细胞对内皮细胞功能的影响.方法 以47℃ 恒温水浴处理HepG2细胞；收集HepG2母系和亚系的条件培养基；检测条件培养基对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移和成管能力的影响.结果 HepG2经47℃处理后产生快速增殖的亚系n；与母系比较,亚系n条件培养基显著促进HUVECs的增殖、迁移和成管,其分光光度值、迁移细胞数和成管环数明显增高,分别为0.57±0.04、85.60±9.40、18.00±1.90 (P ＜0.05)；应用贝伐珠单抗后差异无统计学意义(P＞0.05).结论 肝癌细胞不完全热消融后可转化为快速增殖的亚系,后者可通过增加血管内皮生长因子(VEGF)的分泌增强内皮细胞的功能.
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17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对原发性肝癌细胞增殖侵袭的抑制作用
目的 观察17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17AAG)对肝癌细胞的增殖、侵袭和转移能力的抑制作用.方法 检测1μmol/L 17AAG对细胞增殖、侵袭能力和凋亡的影响,观察0.1 μmol/L和1.0μmol/L 17AAG对其靶点热休克蛋白(HSP) 90表达的影响.结果 17AAG对HL7702肝脏细胞无生长抑制作用,对肝母细胞瘤细胞HepG2[ 24、48和72 h IC50值分别为( 14182.94 ±6369.90)、(1.56±0.19)和(0.02±0.00) μmol/L]和肝癌细胞MHCC-97H[ 24、48和72 h IC50值分别为(5660.49±3029.33)、(3.30±0.31)和(1.55±0.12) μmol/L]均有生长抑制作用,影响细胞周期,降低其离散和侵袭的能力,并诱导凋亡,对裸鼠皮下移植瘤生长具有抑制作用,降低肿瘤的肺、肝转移.17AAG上调HSP90的表达.结论 17AAG对HepG2细胞和MHCC-97H细胞具有增殖抑制、诱导凋亡和降低转移能力的作用,而对HL-7702肝脏细胞则无生长抑制及诱导凋亡的作用.
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受体作用蛋白在肝癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导凋亡耐受中的作用
目的 观察受体作用蛋白(RIP)基因的表达变化在肝癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡耐受中的作用.方法 以肝癌细胞HepG2、Hep3B为研究对象,制备RIP siRNA的细胞模型,应用流式细胞仪分析两种细胞模型对TRAIL作用后细胞周期的变化,Western blot检测其在RIP基因沉默前后凋亡信号传导蛋白Caspase-8、Caspase-3、DFF-45的表达变化.结果 转染RIP siRNA后,细胞恢复了对TRAIL诱导凋亡的敏感性,当TRAIL浓度为100 μg/L时,HepG2及Hep3B转染组的细胞生存率为(60.02±5.23)％和(50.78±3.76)％,显著低于对照组的(96.44±5.43)％和(101.85±6.41)％(P＜0.01)；细胞生存周期SubG1期为(76.89±6.68)％和(72.45±7.31)％,显著高于对照组的(0.78±0.07)％和(3.62±0.38)％(P＜0.01).转染组TRAIL单独作用,可以引起HepG2 siRNA及Hep3B siRNA凋亡传导通路上传导蛋白Caspase-8、Caspase-3的裂解.结论 肝癌细胞对TRAI诱导凋亡的耐受可能与其传导通路上RIP蛋白的表达相关,抑制其表达可以导致凋亡传导蛋白Caspase-8、Caspase-3的裂解,促使凋亡的发生,恢复肝癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性.
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人凋亡相关因子配体及人转化生长因子-β1基因共修饰树突状细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受的研究
目的 联合人凋亡相关因子配体(hFasL)及人转化生长因子-β1( hTGF-β1)基因共修饰大鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞( imDC),提高imDC诱导大鼠同种异体原位肝移植免疫耐受的能力,以延长受鼠生存期.方法 行以DA大鼠为供体、近交系Lewis大鼠为受体的同种异体原位肝移植140例,随机均分为7组:未给移植受鼠注射DC组(对照组)、mDC组、imDC组、空载体组、FasL组、TGF组及共转染组；分别于移植前5d每天给Lewis大鼠腹腔注射mDC、imDC、空载体转染的imDC、hFasL修饰的imDC、hTGF-β1修饰的imDC、hFasL和hTGF-β1共修饰的imDC各2×106个,于肝移植术后3、7、10d各处死4只,观察外周血肝功能变化[丙氨酸转氨酶(ALT)和总胆红素(TBIL)],肝脏病理改变,肝脏凋亡,外周血清细胞因子,并进行生存分析.结果 肝脏病理示术后7d,7组差异有统计学意义(P＜0.01),共转染组排斥反应均轻于TGF组和FasL组；10d时,7组差异有统计学意义(P＜0.01),共转染组排斥反应轻于TGF组和FasL组,TGF组轻于FasL组.肝功能示共转染组于7d时就已基本恢复正常,FasL组于7d时有所降低,但10 d时反而升高,ALT及TBIL的浓度均高于共转染组(P＜0.01,P＜0.05)；TGF组到10 d时,肝功能已恢复正常,ALT及TBIL的浓度均低于FasL组(P＜0.01,P＜0.05),但与共转染组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).酶联免疫吸附试验(ELISA)检测示,术后7d共转染组和TGF组的血清白细胞介素(IL)-1、IL-10及IL-12与FasL组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)；但共转染组和TGF组之间差异无统计学意义(P＞0.05).TUNEL显示FasL组的肝、脾及腹腔淋巴结中淋巴细胞凋亡指数与共转染组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05),但多于TGF组,差异均有统计学意义(P＜0.05).FasL组中位生存期20 d与imDC组(23 d)差异无统计学意义(P＞0.05),而TGF组延长受鼠生存时间有限(48 d)；只有共转染组出现长期存活的受鼠(＞90 d),均长于FasL组和TGF(P＜0.01,P=0.01).结论 imDC、hFasL或hTGF-β1单基因修饰imDC均未能诱导同种异体大鼠肝移植长期存活；hFasL 和hTGF-β1共转染的imDC诱导同种异体大鼠肝移植免疫耐受的能力显著增强,显著延长同种异体肝移植大鼠的生存期.
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靶向去唾液酸糖蛋白受体多功能分子的构建及抗肝癌效应
目的 构建具有靶向去唾液酸糖蛋白受体、溶酶体逃逸、DNA结合的多功能融合蛋白,并对表达产物进行功能鉴定.方法 合成编码Melittin的两条寡核苷酸单链(GenBank:X02007),退火形成寡核苷酸双链；双酶切含抗去唾液酸糖蛋白单链抗体( ASGPR scFv) C1基因的载体C1/pIT2,0.7％低融点琼脂糖凝胶回收C1；以pSW50-Gal4为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增Gal4基因；采用分子克隆技术将其定向克隆至载体pGC4C26H中,获得重组质粒C1 MG/pGC4C26H；双酶切载体C1MG/pGG4C26H,胶回收片段C1MG定向克隆至载体pET-32c中,将含C1MG/pET-32c的BL21单菌落1∶100接种至1000 ml LB肉汤培养基中培养,并通过IPTG诱导表达.表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,免疫印迹技术( Western blot)和免疫组织化学分析重组蛋白C1 MG的抗原结合能力,溶血实验分析C1MG的生物学活性,肿瘤细胞生长抑制实验分析C1MG的DNA结合能力.结果 成功构建原核表达质粒C1MG/pET-32c,并经测序证实:在大肠杆菌BL21中有效表达重组融合蛋白C1MG；表达产物以包涵体形式存在；纯化的C1 MG大小为64.1 kDa,浓度为0.6g/L;Western blot结果说明C1MG能有效识别重组ASGPR,免疫组织化学结果证实C1 MG能结合到鼠肝细胞表面；溶血实验显示ClMG具有裂解红细胞膜功能；肿瘤细胞生长抑制实验证实C1 MG将pEBAF/tk-GAL4rec质粒有效地导入表达ASGPR的细胞中并表达TK基因,氯喹对肿瘤细胞生长抑制无明显影响.结论 在大肠杆菌中成功表达和纯化得到单链抗体-蜂毒肽-酵母转录因子(C1MG)的融合蛋白,该融合蛋白至少具有以下功能:ASGPR靶向识别能力、溶酶体膜裂解功能、以及DNA特异性结合功能,提示对肝癌的靶向治疗有潜在的应用价值.
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马钱子对人肝癌细胞生长的影响及其作用机制
目的 探讨马钱子对人肝癌细胞生长影响及作用机制.方法 体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,分别加入5％、10％、20％的马钱子药物血清,噻唑蓝(MTT)比色法测定对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制作用.20％马钱子药物血清作用肝癌细胞SMMC-77210、24、48 h后,分别收集细胞,提取蛋白和总RNA,应用Westem blot和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Fas、Cyclin D1、PCNA蛋白和mRNA表达.结果 20％马钱子药物血清对人肝癌细胞72 h的生长抑制率为(54.94±8.19)％,与5％、10％浓度抑制率(19.928±7.653)％、(29.020 ±6.100)％比较差异有统计学意义(F=18.23,P＜0.01).药物血清作用24、48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 Fas蛋白表达分别为(0.302±0.009)、(0.399±0.021),与对照组(0.226±0.022)比较,差异有统计学意义(F=68.25,P＜0.05)；药物血清作用48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 PCNA蛋白表达为(0.7457±0.0386),与对照组、24 h(0.8529±0.0099、0.9016±0.0139)比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；药物血清作用24、48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 Cyclin D1 mRNA表达分别为0.045 680 ±0.038 130、0.026 714±0.019934,与对照组(0.145246±0.048543)比较,差异有统计学意义(F=8.671,P＜0.05)；药物血清作用24、48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 Cyclin D1蛋白表达,PCNA、Fas mRNA表达变化差异无统计学意义(F =68.25,P＞0.05).结论 马钱子具有抑制人肝癌细胞增殖作用,其抑制效应与药物血清浓度成正相关；通过上调肝癌细胞Fas蛋白和下调PCNA蛋白及Cyclin D1 mRNA表达,是马钱子抑制肝癌细胞增殖的机制之一.
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大鼠门静脉接受不同血供对肝脏缺血再灌注损伤的影响
目的 观察大鼠门静脉接受不同血供对肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠120只,随机分为门静脉动脉化组(A组)、门腔转位组(B组)和对照组(C组).观察各组大鼠的生存情况,分别在术后6h、12 h、1d、3d及7d检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、一氧化氮(N0)、血浆内皮素-1(ET-1)以及肝脏病理.结果 B组生存时间明显低于A、C两组.术后6h、12h、1d及3d,A组大鼠ALT及AST均显著低于B组和C组；而在术后1d和术后3d时,B组ALT及AST均高于C组；术后6h、12h及1d,A组大鼠血清NO与血浆ET-1均显著低于B组和C组；在术后6h和术后12h时,B组血清NO与血浆ET-1均高于C组,差异有统计学意义.结论 大鼠门静脉接受动脉化较门腔转位术更有利于促进近期肝脏缺血再灌注损伤的恢复.
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阿司匹林抑制核因子-κB增强索拉非尼对肝癌的促凋亡作用
目的 观察合用阿司匹林(Aspirin)与索拉非尼(Sorafenib)对肝癌生长转移的抑制作用和促凋亡作用并探讨其机制.方法 采用人肝癌裸鼠原位模型LCI-D20,分为对照组、Sorafenib 单用组(30 mg/kg灌胃,1d1次)、Sorafenib+ Aspirin合用组、Aspirin单用组(30 mg/kg灌胃,1 d 1 次),治疗4周后观察荷瘤小鼠生存期、肿瘤体积、肺转移,定量比较肿瘤细胞凋亡指数,观察各组荷瘤鼠生存期,检测各组核因子-κB (NF-κB)及IκBα表达.结果 对照组、Sorafenib治疗组、Sorafenib + Aspirin合用组、Aspirin治疗组肿瘤体积分别为(4.76±0.51)、(1.41±0.08)、(0.66 ±0.12)和(4.58±0.47) cm3；肺转移灶数目分别为(189±21)、(96±15)、(30±17)和(92±18)个；中位生存期分别为72、98、112、80 d.肿瘤凋亡指数分别为(2.6±1.1)％、(8.6±3.7)％、(24.3±6.9)％和(6.8±1.5)％；与Sorafenib治疗组比较,Sorafenib+ Aspirin合用明显降低肿瘤体积(P＜0.05)、抑制肺转移灶数目(P＜0.01),延长荷瘤鼠生存期(P＜0.05)和促进肿瘤细胞凋亡(P＜0.05).Sorafenib 在肝癌中具有下调IκBα和上调NF-κB-p65的作用而合用Aspirin可逆转此作用.结论 Aspirin通过抑制NF-κB活化,进一步增强Sorafenib对肝癌凋亡的促进作用及对肝癌生长转移的抑制作用,并延长荷瘤鼠生存期.
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人凋亡相关因子配体及人转化生长因子-β1基因共转染大鼠未成熟树突状细胞对其生物学活性的影响
目的 观察人凋亡相关因子配体(hFasL)及人转化生长因子-β1( hTGF-β1)基因共转染的大鼠未成熟树突状细胞(imDC)对其生物学活性影响.方法 实验分6组:mDC组、imDC组、空载体组、hFasL基因转染组、hTGF-β1基因转染组及hFasL-hTGF-β1基因共同转染组(即共转染组).用hFasL或(和)hTGF-β1真核表达载体(pIRES2-EGFP-hFasL、pIRES2-EGFP-hTGF-β1)转染培养6d后大鼠骨髓来源的imDC,转染24 ～48 h后应用荧光显微镜、酶联免疫吸附试验(ELISA)、Western blot、流式细胞术及混合淋巴细胞反应(MLR)检测不同基因修饰的imDC的生物学活性.结果 荧光显微镜观察显示pIRES2-EGFP-hFasL及pIRES2-EGFP-hTGF-β1质粒转染imDC后可见绿色荧光；ELISA检测共转染组和转化生长因子(TGF)组TGF-β1基因表达均高于mDC组、imDC组、空载体组及FasL组(P值均＜0.01),imDC组、空载体组及FasL组的TGF-β1基因表达均高于mDC组(P＜0.05).hFasL基因表达各组间的差异均无统计学意义(P值均＞0.05)；经Westen blot检测hFasL及hTGF-β1基因转染组有均有相应蛋白表达(相对分子质量分别为31×103和43×103)；流式细胞术显示表面分子CD86、CD80在mDC表达高于imDC及各基因转染组和空载体组；转染后混合淋巴细胞反应(MLR)显示,共染组T细胞的增殖反应均明显弱于TGF组和FasL组(P＜0.05).结论 联合FasL和TGF-β1基因转染的imDC在体外诱导同种异体免疫耐受的能力强于FasL或TGF-β1单基因转染.
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肝动脉断流促进癌旁正常肝细胞上皮-间质转化
目的 观察肝动脉断流对癌旁正常肝细胞生物学特性的影响.方法 肝动脉结扎(HAL)阻断裸鼠肝脏原位移植瘤(高转移性MHCC97H肝癌细胞)血供(nHAL=10,n假手术=10).免疫组织化学(SP)法分别检测移植瘤内或癌旁缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Pimonidazole及上皮-间质转化(EMT)标记分子如E-cadherin和N-cadherin分子表达；体外用CoCl2模拟缺氧环境,免疫荧光和Western blot检测缺氧处理后L-02肝细胞内上述分子的表达变化.结果 HAL增加肝癌组织和癌旁肝组织内HIF-1α表达和Pimonidazole阳性细胞数(HAL组:9±3比假手术组:4±2,P＜0.05),减少癌旁肝细胞内E-cadherin水平,增加其N-cadherin蛋白表达.100 μmol/L CoCl2有效模拟体外缺氧环境,增加L-02肝细胞内HIF-1α表达,上调N-cadherin同时降低E-cadherin表达.结论 HAL 增加肝癌及癌旁组织缺氧,诱导癌旁正常肝细胞发生EMT.
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Fas及Caspase家族在泡球蚴感染宿主肝脏中的表达及其意义
目的 探讨细胞凋亡信号分子Fas及Caspase家族在肝泡球蚴病宿主中的表达及意义.方法 16例配对泡型包虫患者(AE)肝脏标本,16只雌性BALB/C小鼠.分析肝脏标本中肝细胞病理变化、凋亡及Fas、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达.结果 AE患者病灶周围肝细胞水肿,汇管区周围纤维化,肝细胞造型坏死；病灶周围肝细胞发生显著凋亡[(74.0±15.0)％比(4.2±3.3)％],Fas[ (71.3±19.0)％比(5.2±1.6)％]、Caspase-3[ (39.4±18.3)％比(3.3±2.9)％]、Caspase-8[ (37.6±3.5)％比(4.0±1.8)％]和Caspase-9[ (24.7±13.8)％比(2.0±1.4)％]高表达(P＜0.05).泡球蚴感染小鼠病灶处可见囊泡,肝组织纤维化严重；肝细胞发生显著凋亡[(37.5±5.2)％比(13.9±2.7)％],Fas[ (48.3±6.2)％比(4.6±1.2)％]、Caspase-3[(29.7±6.3)％比(5.2±1.9)％]、Caspase-8[ (23.1±2.9)％比(3.5±1.4)％]和Caspase-9[( 16.7±3.2)％比(2.3±1.1)％]高表达(P＜0.05).结论 泡球蚴感染引起宿主肝细胞凋亡,提示Fas及Caspase家族介导的细胞凋亡信号通路可能参与了泡球蚴所致肝损伤进程.
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小分子RNA干扰同时沉默表皮生长因子受体和胰岛素样生长因子-1受体基因对肝癌细胞周期和凋亡的影响
目的 观察小分子RNA干扰(riRNA)同时沉默表皮生长因子受体(EGFR)和胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)基因对肝癌细胞周期和凋亡的影响.方法 构建真核表达载体,转染质粒48 h后通过流式细胞仪、噻唑蓝(MTT)检测细胞周期、凋亡、增殖变化以及Western blot检测CDK1、CDK2和p53蛋白的表达.结果 转染48 h后双基因干扰组吸光度为0.2,G0/G1和G2/M期细胞比例分别为72.70±0.26和7.38±0.06,凋亡率为17％,CDK1、CDK2蛋白的表达降低,与对照组和单基因干扰组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 同时沉默EGFR和IGF1R基因能有效干扰肝癌细胞增殖、诱导细胞凋亡,并使肝癌细胞阻滞于G0/G1期,干扰多个受体分子可能是一种新的肝癌治疗途经.
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柴胡皂甙-d对人肝癌HepG2细胞周期的阻滞作用及p27表达的影响
目的 观察柴胡皂甙-d(SSd)对人肝癌HepG2细胞周期的阻滞作用及对其p27基因表达的影响.方法 常规培养人肝癌HepG2细胞至对数生长期,随机分为两组,实验组10 mg/L的SSd作用48 h,设空白对照；流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞p27基因mRNA表达；免疫组织化学SP法检测p27蛋白的表达.结果 实验组HepG2细胞G1期百分率为(69.43 ±3.01)％较对照组(62.83±2.72)％明显增加(P＜0.05),S期细胞百分率为(22.30±0.82)％较对照组(27.23±0.59)％明显减少(P＜0.01)；p27基因mRNA相对表达量(0.566 ±0.001)较对照组(0.335±0.000)明显增多(P＜0.05)；p27蛋白表达阳性率为(33.9±3.1)％较对照组(21.9±1.7)％亦明显增多(P＜0.01).结论 SSd可导致人肝癌HepG2细胞周期阻滞于G1期,其机制可能与上调p27基因表达有关.
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羟基脲对不同p53状态肝癌细胞中GADD45β的诱导差异及调控机制
目的 探讨羟基脲对不同p53状态肝癌细胞的GADD45β诱导差异及可能调控机制.方法 转染p53全序列建立Hep3B+p53；体外合成GADD45β近端启动子序列群(-618～-314),构建荧光素表达质粒,转染肝癌细胞株HepG2、Hep3B和Hep3B+p53；以实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)比较羟基脲对GADD45β表达诱导及其近端启动子活性影响差异；比较对DNA合成和细胞克隆形成能力抑制差异；通过Caspase-3的表达变化测定凋亡的发生和发展.结果 羟基脲对Hep3B中GADD45诱导并不明显,转染p53全基因序列后,Hep3B+p53对羟基脲的敏感性明显增加,并呈现出剂量-效应的正相关.荧光素分析提示羟基脲作用Hep3B+p53后的启动子核转录因子( NF)-κB( -618/+6)和E2F-1(-470/+6)活性较Hep3B明显增强约1.1倍和0.8倍.羟基脲能够更加明显地抑制Hep3B+p53的DNA合成能力和细胞克隆形成能力,10 mmol/L羟基脲对Hep3B+p53DNA合成抑制率达到37.15％,对细胞克隆形成能力的抑制率达85.29％,与Hep3B比较差异有统计学意义(P＜0.05).羟基脲作用后Hep3B+p53的Caspase-3能够迅速地启动凋亡的发生和发展.结论 p53对核糖核苷酸还原酶抑制性化疗药物对肝癌细胞的GADD45诱导起重要作用,增强转录调节因子的表达水平是其可能的作用机制.
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特异结合唾液酸化LewisX抗原DNA适配子抑制肝癌细胞株HepG2体外侵袭转移
目的 观察特异结合唾液酸化LewisX (SLeX)抗原DNA适配子抑制HepG2细胞与E-选择素黏附能力及其体外抑制HepG2细胞浸润转移能力.方法 采用黏附实验、Transwell体外侵袭实验,检测该适配子对HepG2细胞与E选择素黏附及对HepG2细胞体外侵袭的影响.结果 该DNA适配子可有效抑制HepG2细胞与E-选择素黏附,黏附细胞数随适配子浓度的增加而减少(P＜0.01),20 nmol浓度的适配子与单克隆抗体CSLEX-1效果相似；Transwell侵袭实验中,5、10、20nmol适配子组的侵袭细胞数分别为159.00±3.27、142.00±5.50、115.00±5.07,与对照组(178.00±4.64)比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 特异结合唾液酸化LewisX抗原DNA适配子可以抑制HepG2细胞与E-选择素黏附,阻断Lewis-selectin途径,抑制HepG2细胞体外侵袭转移.
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原发性肝癌RUNX3基因启动子区甲基化及mRNA表达及其意义
目的 观察原发性肝癌中人RUNT相关转录因子3(RUNX3)基因启动子甲基化及mRNA表达,探讨其甲基化与临床特征的关系.方法 收集75例原发性肝癌患者的肿瘤标本及其癌旁组织、10例正常肝组织,应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)测定RUNX3基因CpG岛甲基化状态,并采用实时定量聚合酶链反应(PCR)分析RUNX3基因在75例原发性肝癌中的表达水平及甲基化与肝癌临床特征的关系.结果 75例肝癌组织中有34例(45.3％)存在RUNX3基因CpG 岛的异常甲基化,癌旁组织中有7例(9.3％),而正常肝组织中未检测到RUNX3基因CpG岛的异常甲基化,RUNX3基因异常甲基化在肝癌组织、癌旁组织及正常组织中的发生率差异有统计学意义(x2=29.18,P＜0.01)；75例原发性肝癌实时定量PCR分析有45例肝癌组织中存在RUNX3 mRNA 表达缺失或下调,其中60％ (27/45)伴随启动子甲基化,即RUNX3 mRNA表达下调与RUNX3基因甲基化密切相关(x2=9.77,P＜0.01)；而肝癌组织非甲基化组RUNX3基因表达量高于甲基化组4倍以上；RUNX3基因CpG岛甲基化与患者肝硬化关系密切(x2=5.07,P＜0.05).结论 原发性肝癌存在RUNX3基因CpG岛异常甲基化,CpG岛的甲基化可能是导致其基因表达降低的主要原因之一,并与患者肝硬化密切相关.
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Sonichedgehog在肝细胞癌中的表达及其预后价值
目的 探讨Sonic hedgehog(SHH)在肝细胞癌(HCC)和癌周肝组织中的表达及其临床意义.方法 检测145例HCC和癌周肝组织SHH的表达,了解其表达与患者根治性切除术后预后的关系.检测4种肝癌细胞株以及正常肝细胞株SHH mRNA的含量.结果 SHH主要表达于肝细胞和肝癌细胞的胞质,肝癌与癌周肝组织表达差异无统计学意义(P＞0.05).癌和癌周高表达的患者总体生存率显著高于低表达患者(P＜0.05).肝癌细胞株SHH表达量显著高于正常肝细胞株(P＜0.01).结论 SHH在HCC和癌周肝组织中高表达,其表达可用于区分患者预后,SHH可能参与HCC的发生和发展.
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雌激素对大鼠肝切除肝缺血再灌注损伤中核因子-κB/IκB传导通路的影响及保护作用
目的 观察雌激素对大鼠肝切除肝缺血再灌注损伤中核因子-κB(NF-κB)/抑制蛋白(IκB)传导通路影响.方法 制作肝切除肝缺血再灌注损伤动物模型,雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)；肝切除肝缺血再灌注组(I/R组)；肝切除肝缺血再灌注+雌激素组(I/R+ E2 组).分别在缺血再灌注后1、3、6h光镜下观察肝组织病理学改变,检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平和肝组织丙二醛(MDA)的含量及超氧化物岐化酶(SOD)的活性,免疫组织化学法测定肝组织NF-κB的表达,Western blot检测NF-κB抑制蛋白(IκB-α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 再灌注后I/R组在各时相血清ALT、AST均显著高于I/R +E2组,并于6h达到峰值(P＜0.05).与I/R+E2组和Sham比较,I/R组肝细胞凋亡率显著升高(P＜0.01)；肝组织中IκB-α表达降低,而NF-κB表达增高(P＜0.05)；ICAM-1 和MDA的结果变化和NF-κB表达水平变化类似,SOD呈相反变化.在光镜下观察,I/R组肝小叶结构紊乱,肝窦淤血,肝细胞水肿变性,肝细胞片状坏死,在Sham组和I/R +E2组上述病理学变化明显改善.结论 雌激素对肝切除肝脏缺血再灌注损伤有显著保护作用,其作用机制可能与雌激素影响NF-κB/IκB传导通路、减轻脂质过氧化反应、减少炎症介质释放及抑制细胞凋亡有关.
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Ku80分子表达对肝癌细胞DNA双链损伤水平的影响
目的 观察Ku80分子表达对肝癌细胞DNA双链损伤水平的影响.方法 Western blot检测40例肝癌和癌周组织中γ-H2AX和Ku80表达水平；将Ku80基因转染到SMMC7721细胞；免疫荧光和Western blot检测y-H2AX焦点分布和蛋白表达.结果 γ-H2AX在肝癌组织中的表达与癌周比较明显增高(31/40,77.5％),而Ku80表达明显减低(30/40,75％),γ-H2AX表达上调与Ku80表达下调相关(P＜0.05)；筛选获得稳定高表达Ku80的克隆细胞；免疫荧光结果显示,Ku80 高表达克隆γ-H2AX焦点数目与对照组比较明显减低(P＜0.01)；Western blot显示,Ku80高表达克隆γ-H2AX表达与对照组比较明显减低.结论 Ku80表达下调与肝癌细胞的DNA双链损伤相关,Ku80分子表达可减低肝癌细胞DNA双链损伤水平.
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超声微泡介导HSV1-TK/GCV自杀基因系统对人肝癌细胞株HepG2的杀伤作用
目的 观察超声微泡(UM)介导HSV1-TK/GCV自杀基因系统对人肝癌细胞株HepG2的杀伤效率.方法 将HepG2接种在培养板中,随机分为以下5组:(A)空白对照组；(B)单纯质粒组；(C)超声微泡+质粒组；(D)超声+质粒组；(E)超声+超声微泡+质粒组.转染后24 h,荧光显微镜观察各组细胞绿色荧光的表达,流式细胞仪检测各组细胞的转染效率,噻唑蓝(MTT)比色法检测转染方法对HepG2活性的影响,Western blot法检测各组细胞的TK蛋白表达；转染后24h,各组细胞加入0、0.1、1.0、10.0、50.0、100.0、500.0、1000.0 mg/L共8个浓度梯度的前药更昔洛韦(GCV),72 h后MTr法检测各组细胞的存活率.结果 荧光显微镜下E组的绿色荧光强度明显高于其他各组；流式细胞仪检测基因转染率分别为0％、0.39％、0.61％、1.10％、36.00％,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测提示E组tk mRNA相对表达量为1.13,是其余各组的7～9倍,Western blot 条带灰度分析显示E组TK蛋白的明显高于其他各组(P＜0.05)；转染方法对HepG2细胞活性无明显影响(P＞0.05)；GCV浓度在50 mg/L以上培养72 h后,低频超声+超声微泡+质粒组细胞几乎全部被杀灭,存活率为0,杀伤效应强(P＜0.05),其余各组几乎无杀伤作用.结论 超声破坏微泡造影剂可提高HSV1-TK基因在HepG2中的转染和表达,增强HSV1-TK/GCV自杀基因系统对肝癌细胞的杀伤效应,而超声辐照和微泡造影剂在转染过程中对细胞的活性无影响.
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精准肝脏外科关键理论和技术问题的思考
精准肝脏外科作为全新的外科理念和技术体系,旨在通过一系列现代科学理论和技术手段在肝脏外科中的整合应用和集成创新,追求以小创伤侵袭和大肝脏保护获取佳康复效果的理想目标[1].精准化是医学科技发展的必然趋势,但是肝脏外科从传统经验外科向现代精准外科转变,并非单纯依靠医生的主观把握和对高端科技的刻意追求,而是建立在对肝脏复杂的结构与功能、肝病发病机制及生物学特性、正常和病变肝脏对外科干预反应性深刻认识的基础上,并且不断将新认识融入对肝病外科治疗过程各个环节的精确掌控中.
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医者典范 总编楷模
我国著名的心血管病及老年医学专家,北京医院名誉院长,中国共产党的优秀党员,中华医学会系列杂志杰出的总编辑钱贻简教授,因病于2011年7月6日在北京逝世,享年86岁.7月12日清晨,全国各界的代表和中华医学会系列杂志的编辑们前往北京医院送别钱老,在告别室中摆放着中华医学会、中华医学会杂志社以及众多中华医学会系列杂志送来的花圈.7月21日,北京医院隆重召开了缅怀钱贻简教授座谈会.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
