中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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竹节参多糖抗血栓活性的研究
目的 观察竹节参多糖的抗血栓活性.方法 采用大鼠腹主动脉插管取血,体外试管法测定竹节参多糖对大鼠血凝块的溶解作用;采用比浊法测定竹节参多糖对人血小板聚集的影响;采用胶原蛋白-肾上腺素诱导的血栓形成模型和血瘀证大鼠模型,观察竹节参多糖的体内抗血栓作用并探讨其作用机制.结果 体外研究时,低、中、高剂量竹节参多糖对血凝块的溶解率分别达到53.08%、57.03%和68.15%,对人血小板聚集的抑制率则分别为6.78%、29.49%和40.30%,与对照组比较差异均有统计学意义,且其血凝块溶解作用和血小板聚集抑制作用均与给药剂量呈正相关.肺血栓小鼠模型中,竹节参多糖低、中、高剂量组小鼠死亡数分别为2、2、1只,小鼠偏瘫数分别为5、4、4只,肺指数则分别为1.89%、1.71%和1.43%,均表现出显著的抗血栓作用.低、中、高剂量竹节参多糖作用于血瘀证大鼠模型后,血小板大聚集率分别降至45.62%、41.33%和31.40%,体现了明显的抗血小板聚集作用;与模型组比较竹节参多糖低剂量组对组织型纤维溶酶激活剂(t-PA)、6-酮前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)的含量无明显影响,中、高剂量组可显著升高t-PA、6-Keto-PGF1α的含量,竹节参多糖各组均可显著降低大鼠体内血栓素B2(TXB2)、纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)的含量.结论 竹节参多糖高、中、低剂量组均有显著的体外和体内抗血栓活性,其抗血栓作用可能与影响血小板功能和提高纤溶系统活性有关.
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紫草宁对乳腺癌细胞的作用
目的 观察紫草宁对乳腺癌细胞的作用.方法 采用4种乳腺癌细胞株,分为对照组和用药组进行多项体外实验,观察紫草宁对乳腺癌细胞株的增殖、凋亡、周期的影响.同时于小鼠体内建立移植瘤模型,对比对照组与用药组肿瘤体积增长的速度.结果 经不同浓度的紫草宁处理乳腺癌细胞株后,得出MCF7、ZR-75-1、SUM1315和MDA-MB-231的半数抑制浓度(IC50)值分别为(1.165±0.025)、(1.043±0.010)、(1.595±0.006)、(1.516±0.015)μmol/L.对应IC50浓度紫草宁诱导乳腺癌细胞凋亡后,与阴性对照组比较,药物处理组的细胞凋亡率显著增高(MCF7:P=0.001;ZR-75-1:P=0.001;SUM1315:P=0.001;MDA-MB-231:P=0.001).同时,紫草宁处理组的G1期细胞分数显著增加,提示紫草宁具有阻滞细胞周期于G1期的作用.在体内实验中,紫草宁显著抑制了SUM1315细胞建立的小鼠移植瘤模型的肿瘤增长速度,且药物高浓度组与低浓度组之间差异亦有统计学意义(P=0.000).结论 紫草宁可于体内及体外抑制乳腺癌细胞的增殖.
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吡格列酮对代谢综合征大鼠骨髓内皮祖细胞迁移能力的促进作用及其机制
目的 探讨吡格列酮(PIO)对代谢综合征(MS)大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs) 迁移能力的影响及其机制.方法 建立MS大鼠模型,培养MS大鼠骨髓EPCs,并进行鉴定EPCs.用细胞计数法对正常对照组、MS组及PIO干预组大鼠骨髓EPC迁移能力进行比较.将培养7d的EPCs分5组,分别加入一定浓度的PIO、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)拮抗剂GW9662、PIO及磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通道阻滞剂 Wortmannin、PIO及细胞外信号调节激酶(ERK)通道阻滞剂PD98059;并设立空白对照组,检测EPCs的迁移.结果 MS组较对照组迁移EPCs 数量明显减少(21.13±2.77比33.20±3.06,t=3.461,P=0.000);PIO组较MS组迁移EPCs数量增多(27.16±2.27比21.13±2.77,t=2.909,P=0.008).PIO可明显改善体外培养的MS大鼠骨髓EPCs迁移(13.30±3.11比24.90±5.10,t=4.509,P=0.005),GW9662和Wortmannin干预均可减弱PIO的促EPCs黏附作用,而PD98059不能减弱PIO的促EPCs迁移作用(24.90±5.10比25.10±4.99,t=0.431,P=0.153).结论 PIO可促进MS大鼠骨髓EPCs的迁移,这可能是通过PI3K/Akt信号通路介导.
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膜联蛋白A1在食管癌组织的表达及其临床意义
目的 探讨膜联蛋白A1(Annexin A1)在食管癌发生和发展过程中的生物学作用.方法 采用免疫组织化学分析94例食管鳞状细胞癌组织和周围正常组织中Annexin A1蛋白的表达.采用Annexin A1过表达和敲低慢病毒感染人永生化食管上皮细胞株SHEE,得到稳定细胞株.采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析Annexin A1过表达和敲低细胞株细胞增殖能力;采用Transwell法分析Annexin A1过表达和敲低细胞株细胞侵袭能力;采用软琼脂法分析细胞克隆形成能力;采用体内细胞移植实验分析Annexin A1过表达细胞株在体内形成肿瘤能力.结果 与正常食管组织比较,食管癌组织中Annexin A1蛋白表达水平明显增加(P=0.004).与对照细胞株比较,Annexin A1过表达细胞株细胞增殖能力(P=0.026)和侵袭(P=0.017)能力明显增加,而Annexin A1敲低的细胞株,细胞增殖能力(P=0.019)和侵袭能力(P=0.023)明显下降.与对照细胞株比较,Annexin A1过表达细胞株克隆形成能力明显增强(P=0.022),而Annexin A1敲低细胞株克隆形成能力明显下降(P=0.035).体内成瘤实验显示,与对照细胞株比较,Annexin A1过表达细胞株体内肿瘤形成率明显增加(P=0.001).结论 Annexin A1蛋白在食管癌组织中呈过表达,其参与了食管癌细胞的生长、侵袭和肿瘤形成.
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血红素氧和酶-1在原代心肌细胞缺氧/复氧损伤中的表达及意义
目的 探讨血红素氧和酶-1(HO-1)在姜黄素对原代心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤后处理中的表达及意义.方法 实验分为5组:正常对照组、姜黄素组(10μmol/L)、H/R组、姜黄素(10μmol/L)+ H/R组、姜黄素+ZnPP-Ⅸ(HO-1抑制剂)+H/R组.检测细胞活性及培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)浓度和超氧化物歧化酶(SOD)活性,评估细胞损伤情况;检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3凋亡酶活性;JC-1探针检测细胞膜电位;通过Western blot检测各组细胞HO-1、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)表达.结果 与H/R组比较,姜黄素可以诱导HO-1和bcl-2的表达,抑制bax的表达,加入ZnPP-Ⅸ后,HO-1和bcl-2表达减弱,bax表达上调(P=0.001、0.006、0.007).与对照组比较,H/R组线粒体膜电位显著降低(31±7)%比100%(P=0.004),姜黄素后处理可以提高线粒体膜电位(75±16)%比(31±7)%(P=0.011),而加入ZnPP-Ⅸ阻断了姜黄素对心肌细胞的保护作用(19±4)%比(75±16)%(P=0.001).姜黄素同时具有增加心肌细胞活性和SOD活性,降低LDH、MDA浓度,及降低Caspase-3活性,降低细胞损伤、氧化应激损伤和凋亡.结论 姜黄素可通过诱导HO-1表达,减轻氧化应激及抗凋亡而具有心肌细胞保护作用,而HO-1抑制剂ZnPP-Ⅸ可以阻断姜黄素的心肌保护作用.
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荧光探针逆行标记投射至小脑的前庭内侧核神经元及其活性评价
目的 探索甄别投射至小脑的前庭内侧核(MVN)神经元的方法,并对其活性进行评价.方法 应用在体荧光探针逆行标记投射至小脑的MVN神经元,应用中性红染色鉴定细胞存活时间,应用全细胞膜片钳技术记录其基础电生理特性,并与未经探针标记的MVN神经元进行比较.结果 投射至小脑的MVN神经元(CPMVNs)与未经探针标记的SD大鼠MVNs在离体1、2、3、4、5h的条件下存活时间比较差异无统计学意义;自发性放电频率及膜电位的电生理比较差异无统计学意义;两组神经元单突触激发的兴奋性突触后电流(eEPSCs)幅值分别为(267.100±7.563)pA(n=18)和(266.900±6.730)pA(n=25),组间比较差异无统计学意义(P=0.962);两组神经元自发性抑制性突触后电流(sIPSCs)幅值及频率分别为(19.320±1.768)pA及(2.936±0.512)Hz(n=21),(18.360±1.700)pA及(2.871±0.454)Hz(n=27),两组sIPSCs在电流幅值(P=0.207)及频率(P=0.755)比较差异均无统计学意义.结论 应用在体荧光探针逆行标记技术甄别活性良好的CPMVNs,可为进一步研究前庭小脑通路上突触信号传导机制提供特异性实验对象.
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亚硒酸钠通过p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对肺癌细胞A549增殖、凋亡的影响
目的 观察亚硒酸钠(Na2SeO3)对肺癌细胞A549增殖、凋亡及对p38丝裂原活性蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响.方法 分别用终质量浓度为0.0、2.5、5.0、10.0 μmol/L的Na2SeO3处理肺癌细胞A549,培养24、48、72h后,用噻唑蓝(MTT)检测Na2SeO3对肺癌细胞A549细胞增殖的影响;培养48h后,用流式细胞术检测Na2SeO3对肺癌细胞A549细胞凋亡的影响;Western blot检测Na2SeO3对肺癌细胞A549细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)及p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达的影响.结果Na2SeO3能够抑制肺癌细胞A549细胞增殖,与对照组比较差异有统计学意义,且具有剂量依赖性和时间依赖性.2.5、5.0、10.0μmol/L的Na2SeO3处理肺癌细胞A549 48h后,随着Na2SeO3浓度的增加,凋亡率升高,bcl-2蛋白表达逐渐下调,Caspase-3和p-p38 MAPK蛋白表达逐渐上调(Caspase-3:t2.5μmol/L=6.524,P2.5μmol/L=0.006;t5.0μmol/L=8.283,P5.0μmol/L=0.003;t10.0μmol/L=9.345,P10.0μmol/L=0.002;p-p38 MAPK:t2.5μmol/L=7.173,P2.5μmol/L=0.005;t5.0μmol/L=8.687,P5.0μmol/L=0.003;t10.0μmol/L=9.754,P10.0μmol/L=0.001);p38 MAPK总蛋白的表达在不同浓度Na2SeO3处理组之间变化不明显,与对照组比较,差异无统计学意义(t2.5μmol/L=1.325,P2.5μmol/L=0.283;t5.0μmol/L=1.364,P5.0μmol/L=0.298;t10.0μmol/L=1.321,P10.0μmol/L=0.289).结论 Na2SeO3能够抑制肺癌细胞A549细胞增殖,并促进其凋亡,促进p38MAPK信号通路磷酸化是其可能的分子机制.
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bcl-XL反义寡核苷酸转染对结肠癌细胞增殖及裸鼠体内人结肠癌移植瘤生长的抑制作用
目的 观察bcl-XL反义寡核苷酸转染后,对结肠癌细胞增殖及裸鼠体内人结肠癌移植瘤生长的影响.方法 制备对数生长期的SW620单细胞悬液,裸鼠背侧皮下注射.当移植瘤体积平均50mm时,将裸鼠随机分为3组:对照组、N-ODN组和反义寡核苷酸组,每组5只.反义寡核苷酸组及N-ODN组瘤旁注射2ml/kg体重的反义寡核苷酸或N-ODN,对照组瘤旁注射等量生理盐水,第16天处死裸鼠,取部分肿瘤组织,提取RNA及蛋白,采用阳离子脂质体介导的反义寡核苷酸转染、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot、噻唑蓝(MTT)法、原位缺口末端标记法(TUNEL)等方法观察了bcl-XL反义寡核苷酸转染对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响及裸鼠体内人结肠癌移植瘤生长的影响.结果 (1)对细胞增殖活性的抑制率随反义寡核苷酸浓度的增加逐渐增高,具剂量依赖性.当浓度超过200nμmol/L后,对细胞活性的增殖抑制率递增幅度明显减小,差异有统计学意义(t=2.418、1.531和1.838,P=0.003、0.016和0.011).(2)细胞对照组、空白对照组、N-ODN组及反义寡核苷酸组的mRNA相对表达量分别为0.96±0.25、0.97±0.48、0.78±0.32及0.41±0.13,抑制率分别为0.00%、-6.25%、18.75%及57.29%,与细胞对照组比较,除空白对照组有少量增高外,N-ODN组及反义寡核苷酸组的表达依次减弱,抑制率依次增加.反义寡核苷酸组与细胞对照组、空白对照组及N-ODN组比较,差异有统计学意义(P=0.025);N-ODN组、空白对照组及细胞对照组间两两比较,差异无统计学意义(P=0.263).(3)与细胞对照组比较,空白对照组无明显变化;N-ODN组稍有降低;反义寡核苷酸组明显降低(P=0.017).(4)细胞对照组、空白对照组、N-ODN组及反义寡核苷酸组的阳性细胞的阳性率分别为3.7%、5.0%、7.0%及35.0%.经统计学分析,反义寡核苷酸组与细胞对照组、空白对照组及N-ODN组比较,差异有统计学意义(χ2=181.880,P=0.000);细胞对照组、空白对照组及N-ODN组间两两比较,差异无统计学意义(χ2=1.410,P=0.084).(5)治疗第1天,肿瘤体积各组间差异无统计学意义(P=0.162).第6天,反义寡核苷酸组与对照组比较差异有统计学意义(t=2.410,P=0.027).第11、16天,各组两两比较差异均有统计学意义(P=0.028、0.016).(6)反义寡核甘酸体内治疗后,3组裸鼠肿瘤组织中均有bcl-XL基因的表达,但反义寡核甘酸组的表达明显减弱,而对照组及N-ODN组的表达未发生明显改变.结论 bcl-XL反义寡核苷酸可有效抑制结肠癌细胞增殖及裸鼠体内人结肠癌移植瘤的生长.通过反义寡核苷酸下调bcl-XL的表达,可治疗结肠癌.
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防腐标本椎体成形术后邻近椎体再骨折的研究
目的 探讨防腐标本椎体成形术(PVP)后邻近椎体再骨折的原因.方法 选取防腐尸体4具,每具尸体取T9~L5椎体,每具胸腰椎标本分为T9~T11、T12~L2、L3~L5 3个脊柱节段(包括3个椎体,2个椎间盘).将12个脊柱节段,分为A、B两组,每组各有6个脊柱节段(T9~T11、T12~L2、L3~L5各两个).A组人为造成中间椎体骨折后行PVP;B组不做任何处理.A、B两组分别在生物力学机下行压缩力学实验.记录A、B两组脊柱节段的大垂直载荷、刚度及邻近椎体再骨折的位置并进行比较与统计学分析.结果 A组与B组大垂直载荷的差异有统计学意义(t=-2.267,P=0.047),注入骨水泥后,A组脊柱节段大垂直载荷(3048±403)N比B组(3586±418)N低约15%;A、B两组刚度差异无统计学意义(t=-0.542,P=0.600).A组再发骨折的部位为T9、T12、L3椎体各两个,全部为上位邻近椎体.B组骨折的部位为T9、T10、T12、L1椎体各一个,L3椎体两个.结论 PVP后脊柱节段的大垂直载荷下降,增加了邻近椎体(尤其是上位邻近椎体)发生再骨折的风险.
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抑制神经前体细胞表达下调因子8对前列腺癌细胞生物学行为及其雄激素受体表达的影响
目的 慢病毒介导短发卡RNA(shRNA)靶向抑制前列腺癌细胞株LnCaP、VCaP 细胞的抑制神经前体细胞表达下调因子8(NEDD8)的表达,观察其对雄激素受体(AR)、前列腺特异性抗原(PSA)的表达以及细胞生物学行为的影响.方法 构建NEDD8短发夹RNA(NEDD8-shRNA)稳定转染的LnCaP、VCaP 细胞株.实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及Western blot法检测NEDD8、AR及PSA mRNA及蛋白表达.细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、TranswellTM 实验检测细胞侵袭能力.结果 NEDD8-shRNA慢病毒转染后,LnCaP、VCaP 细胞NEDD8 mRNA表达量分别是空白对照组的(0.11±0.03)、(0.16±0.04)倍,AR mRNA表达量分别为(0.52±0.04)、(0.42±0.05)倍,PSA mRNA的表达量分别为(0.49±0.04)、(0.59±0.06)倍.慢病毒转染后,LnCaP、VCaP 细胞NEDD8蛋白相对表达量分别为(11.26±2.65)%、(6.26±2.04)%,AR蛋白相对表达量分别为(30.36±4.35)%、(15.36±3.37)%,PSA蛋白相对表达量分别为(13.37±2.70)%、(11.36±2.67)%.与对照组比较,NEDD8、AR、PSA mRNA及蛋白表达均显著下降(P=0.000).慢病毒转染后,与对照组比较,LnCaP、VCaP 细胞增殖显著抑制;转染后 LnCaP、VCaP细胞株凋亡率分别为(15.08±1.23)%、(20.37±1.76)%,与对照组比较显著增加(P=0.001、0.000);穿膜细胞数显著减少(P=0.000、0.004),分别为(55.5±12.5)、(60.8±11.3) 个.结论 NEDD8可能在转录水平参与了对AR表达调控,通过抑制NEDD8基因能有效抑制LnCaP、VCaP中AR表达及细胞的增殖、侵袭能力,诱导细胞凋亡.
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程序性坏死特异性抑制剂-1对脓毒症大鼠心肌受体作用蛋白表达的影响
目的 探讨不同剂量程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对脓毒症大鼠心肌保护作用的量效关系.方法 50只SD大鼠按随机数字表法分为5组(n=10):空白组、模型组、Nec-1小剂量组、Nec-1中剂量组、Nec-1大剂量组,采用鼠尾静脉注射内毒素方法建模,在建模6h后收集标本,通过光镜观察心肌组织形态学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组血浆肌钙蛋白(cTnI)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6),采用Western blot法检测心肌组织中受体作用蛋白1(RIP1)、受体作用蛋白3(RIP3)的表达.结果 与空白组比较,模型组血浆cTnI[(7.58±0.46)比(1.06±0.17)ng/ml]、TNF-α[(937.86±53.36)比(236.95±28.68)pg/ml]、IL-6[(776.13±17.94)比(168.35±20.60)pg/ml]活性均增高(t=-30.561,P=0.000;t=-32.122,P=0.000;t=-39.684,P=0.000),RIP1、RIP3蛋白表达(1.22±0.14比0.41±0.11,t=-17.480,P=0.000;1.15±0.02比0.18±0.08,t=-52.463,P=0.000)均增高.与模型组比较Nec-1干预组cTnI[(7.24±0.41)、(4.43±0.84)、(1.26±0.17)比(7.58±0.46)ng/ml;t=1.622,P=0.112;t=14.765,P=0.000;t=29.606,P=0.000]、TNF-α[(878.73±70.24)、(437.43±59.26)、(273.44±23.745)比(937.86±53.36)pg/ml;t=2.637,P=0.012;t=22.221,P=0.000;t=29.235,P=0.001]、IL-6[(719.18±49.83)、(381.89±28.69)、(221.93±42.58)比(776.13±17.94)pg/ml;t=3.722,P=0.000;t=25.743,P=0.000;t=36.184,P=0.000],RIP1、RIP3蛋白表达(0.83±0.09、0.70±0.09、0.55±0.09比1.22±0.14;t=8.598,P=0.000;t=11.297,P=0.000;t=14.511,P=0.000;0.94±0.02、0.73±0.01、0.53±0.04比1.15±0.02;t=10.961,P=0.000;t=22.405,P=0.000;t=33.414,P=0.000),且随着Nec-1剂量升高表达依次下降.心肌病理损伤在Nec-1大剂量组表现轻.结论 大剂量Nec-1能改善脓毒症时心肌组织的病理性炎症损伤;Nec-1能抑制脓毒症心肌组织RIP1、RIP3蛋白表达.
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叉状头/翅膀状螺旋转录因子3对结直肠癌细胞凋亡的影响
目的 观察叉状头/翅膀状螺旋转录因子3(Foxp3)在结直肠癌中的表达及其短发夹RNA(shRNA)对结直肠癌细胞凋亡的影响.方法 Western blot检测结直肠癌组织和对应的癌旁组织中Foxp3的表达水平.同时Western blot检测人结直肠癌细胞HCT116、SW480、RKO及人肠黏膜细胞CCC-HIE-2中Foxp3的表达水平.转染靶向Foxp3基因的shRNA的表达载体Foxp3 shRNA1、Foxp3 shRNA2和对照序列载体shRNA control至人结直肠癌细胞中,分别命名为Foxp3 shRNA1、Foxp3 shRNA2、shRNA control组.同时设置未转染组,未转染组中只加入转染试剂.Western blot和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Foxp3水平,筛选出干扰效率较高的shRNA.流式细胞术检测48h细胞凋亡.结果 Foxp3在癌旁组织及结肠癌组织中表达水平依次为:0.24±0.05、0.78±0.08,差异有统计学意义(t=63.254,P=0.000).Foxp3在人结直肠癌细胞HCT116、SW480、RKO中的表达水平均高于人肠黏膜细胞CCC-HIE-2,且Foxp3的表达水平由低到高依次为:RKO、HCT116、SW480,后期选用SW480继续研究.未转染组、shRNA control、Foxp3 shRNA1、Foxp3 shRNA2 组细胞中Foxp3蛋白表达水平依次为:0.92±0.05、0.93±0.07、0.21±0.04、0.34±0.06,mRNA 表达水平依次为:1.00±0.07、1.01±0.08、0.53±0.06、0.79±0.08,后续选用Foxp3 shRNA2干扰Foxp3表达.未转染组、shRNA control、Foxp3 shRNA2组细胞凋亡率依次为(13.21±3.12)%、(12.98±3.54)%、(32.01±6.72)%.Foxp3 shRNA2组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)表达水平依次为:0.86±0.05、0.85±0.06、0.26±0.05,活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)表达水平依次为:0.38±0.09、0.39±0.08、0.88±0.06,磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)表达水平依次为:0.40±0.06、0.39±0.04、0.22±0.05.结论 Foxp3在结直肠癌组织及细胞中均表达上调,干扰Foxp3表达能促进人结直肠癌细胞凋亡,作用机制可能与STAT3信号通路有关.
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人羊水克隆样细胞来源干细胞用于侧脑室损伤动物模型细胞治疗的研究
目的 探讨人羊水克隆样细胞来源干细胞用于侧脑室损伤大鼠模型细胞治疗的可能性.方法 羊水标本来自怀孕16~22周行产前诊断的孕妇,在超声引导下行羊膜腔穿刺取得.利用克隆杯,从人孕中期羊水标本中分离获得人羊水克隆样细胞来源干细胞,培养扩增.制作脑室损伤大鼠模型,设立正常对照组、实验对照组、实验组、空白对照组.第3代人羊水克隆样细胞来源干细胞注入脑室损伤模型大鼠脑室内,选取合适的时间点对模型鼠的生长发育指标(体重、脑重、张耳时间、长毛时间)、感觉运动功能(足测试、姿势反射、肢体位置)进行观察测试.并运用SNK法对各组结果均数进行两两比较,判断有无差异.利用Western blot技术检测模型鼠脑组织内人相关Nestin 的表达.结果 各组模型鼠体重、脑重无明显差异,实验组、实验对照组和空白对照组鼠崽之间长毛时间无明显差异,但此3组跟正常对照组差异有统计学意义.实验对照组和空白对照组运动功能测试各项指标与正常对照组和实验组差异均有统计学意义,实验组各项指标与正常对照组接近.Western blot检测表明,hAFCSCs移植5d后,就可以检测出人相关蛋白的表达.结论 人羊水克隆样细胞来源干细胞移植入侧脑室损伤模型鼠体内可以改善模型鼠的生长发育和感觉运动功能.
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短发夹RNA靶向沉默大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞胰岛素样生长因子结合蛋白-3的研究
目的 筛选靶向抑制大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)中胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)基因表达有效的短发夹RNA(shRNA),为基因沉默IGFBP-3治疗大鼠勃起功能障碍提供依据.方法 构建4对靶向IGFBP-3的短发夹RNA(shRNA)质粒和阴性对照,体外原代培养CCSMC,分6组:空白对照组、转染pGPU6/GFP/Neo-IGFBP-3 (611)组、转染pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP-3 (526)组、转染pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP-3 (866)组、转染pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP-3 (710)组和转染pGPU6/GFP/Neo-shNC阴性对照组;转染48h后各组分别用实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot方法检测靶向沉默IGFBP-3的效果.结果 CCSMC转染后实时定量PCR和Western blot检测发现,pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP3-526、pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP3-611、pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP3-866均有明显的沉默效果,与空白对照组和转染pGPU6/GFP/Neo-shNC组比较差异有统计学意义,而其中pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP3-526沉默效果明显,实时定量PCR和Western blot结果显示分别可以抑制72%和79%.结论 靶向IGFBP-3基因的shRNA能够高效抑制大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞中靶基因的表达,为进一步体内实验奠定基础.
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钠-钾ATP酶介导间充质干细胞修复大鼠急性肺损伤
目的 探讨间充质干细胞(MSCs)旁分泌作用修复急性肺损伤(ALI)的机制.方法 实验设阴性组、炎症组、修复组及对照组,每组大鼠分别注射磷酸盐缓冲液(PBS)、脂多糖(LPS)、LPS+MSCs和MSCs,72h后测定肺湿/干比及制作苏木素-伊红(HE)病理切片.体外共培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)及MSCs,设置阴性组、炎症组、修复组及对照组,共培养72h后提取大鼠AT-Ⅱ蛋白及mRNA,Western blot及定量聚合酶链反应方法观察Na-K-ATPaseα1亚基在蛋白及基因水平的改变以及测定AT-Ⅱ的Na-K-ATPase活性.结果 LPS明显造成大鼠ALI,鼠尾静脉注入MSCs可明显缓解炎症损伤;阴性组、炎症组、修复组及对照组肺湿干比分别为:4.33±0.24、5.21±0.21、4.34±0.19和4.44±0.14,MSCs可明显降低肺湿/干比(P=0.000).体外实验证实MSCs可明显提高AT-Ⅱ的Na-K-ATPase活性.阴性组、炎症组、修复组及对照组Na-K-ATPase的活性分别为0.54±0.01、0.68±0.02、0.75±0.01和0.62±0.00,炎症环境可提高Na-K-ATPase活性,P=0.000;MSCs明显提高Na-K-ATPase活性,P=0.000.4组α1亚基蛋白表达分别为0.737±0.039、0.610±0.022、0.780±0.029 和0.838±0.022,MSCs明显提高Na-K-ATPaseα1亚基的蛋白表达,P=0.000.MSCs同时促进α1基因的表达,4组mRNA表达分别为1.000±0.000、0.787±0.044、3.960±0.091及4.466±0.071,P=0.000.结论 MSCs不仅提高AT-Ⅱ的Na-K-ATPaseα1亚基在蛋白和基因的表达,同时提高Na-K-ATPase活性,从而缓解ALI.
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抗人类表皮生长因子受体2/表皮生长因子受体双特异性抗体对人胰腺癌细胞PANC-1的靶向治疗
目的 通过同时靶向人类表皮生长因子受体-2(Her-2)和表皮生长因子受体(EGFR)分子的双特异性抗体抑制人胰腺癌细胞PANC-1体内外增殖.方法 通过基因合成获得曲妥珠单抗和西妥昔单抗的基因序列,经重叠聚合酶链反应(PCR)融合成目的基因,构建入表达载体,转化进毕赤酵母X-33进行表达,获得同时靶向Her-2和EGFR的双特异性抗体CT-BiAb;流式检测CT-BiAb 对胰腺癌细胞系PANC-1的结合能力;MTT法检测CT-BiAb对PANC-1细胞的增殖抑制;通过流式双染法检测给药后PANC-1细胞的凋亡率;建立PANC-1荷瘤小鼠动物模型,检测CT-BiAb的体内抗肿瘤活性.结果 通过毕赤酵母表达及纯化,获得CT-BiAb,经Western blot鉴定验证了CT-BiAb 表达及装配正确.流式细胞术检测CT-BiAb与PANC-1的结合率为50.9%.细胞增殖抑制实验,与PBS组相比,亲本抗体组与CT-BiAb组对PANC-1均有抑制作用,且抑制作用呈浓度依赖性.凋亡实验,CT-BiAb组PANC-1细胞凋亡率[(33.50±7.14)%]高于亲本曲妥珠单抗[(15.86±4.32)%,P=0.022],也高于西妥昔单抗组[(18.64±5.71)%,P=0.048].移植瘤模型实验,CT-BiAb 高剂量组肿瘤抑制率可以达到(73.76±10.21)%,明显优于亲本曲妥珠单抗[(32.55±14.42)%,P=0.001],也明显优于西妥昔单抗组[(52.63±8.47)%,P=0.006].结论 本文构建了CT-BiAb,其具有良好的体内外抗肿瘤活性,有效地抑制PANC-1的体内外增殖,为抗肿瘤治疗提供了新的思路.
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局部联合应用透明质酸钠及5-氟尿嘧啶对兔肌腱粘连及愈合的影响
目的 探讨局部联合应用透明质酸钠(SH)及5-氟尿嘧啶(5-Fu)对肌腱粘连及愈合的作用.方法 将90只成年新西兰大白兔,体重2.0~2.5kg,雌雄各半,采用随机数字表的方法分为3组(n=30):SH组、5-Fu组及SH+5-Fu组.按照自身对照的原则,显露兔双后腿肌腱,常规手术制备肌腱损伤模型,实验组右后腿肌腱损伤处分别应用SH、5-Fu及联合应用SH及5-Fu,左后腿肌腱应用生理盐水作为对照组.分别于术后第1、3、6 周取兔肌腱常规进行大体及组织学观察,分别观察肌腱粘连程度及成纤维细胞的变化;术后6周电镜下观察成纤维细胞、胶原纤维生长.结果术后第1、3、6 周,SH组、5-Fu组及SH+5-Fu组肌腱粘连程度较对照组均明显减轻(P值分别为0.048、0.044、0.001;0.036、0.045、0.005;0.035、0.016、0.001);SH+5-Fu组较SH组、5-Fu组肌腱粘连程度均明显减轻(P值分别为0.047、0.019、0.032;0.014、0.019、0.034);SH+5-Fu组肌腱内成纤维细胞数(1周:153.20±13.26;3周:192.30±10.94;6周:195.60±12.93) 较对照组(1周:64.30±5.60;3周:91.60±8.36;6周:92.90±7.61)、SH组(1周:94.00±10.67;3周:133.10±10.72;6周:134.80±8.51)及5-Fu组(1周:100.30±10.38;3周:139.60±10.27;6周:141.20±10.97)均明显升高(P值分别为0.018、0.001、0.001);SH+5-Fu组腱周成纤维细胞数(1周:103.40±8.34;3周:84.40±9.05;6周:80.00±10.57) 较对照组(1周:210.80±12.94;3周:189.50±15.07;6周:184.40±15.61)、SH组(1周:140.30±13.84;3周:121.40±13.75;6周:115.40±14.36)、5-Fu组(1周:147.50±8.15;3周:127.20±8.64;6周:121.50±7.56)均明显减少(P值分别为0.005、0.007、0.019);术后第6周,电镜下观察SH+5-Fu组较SH组、5-Fu组及对照组肌腱细胞及胶原纤维排列较规则,结构较规则,周期性横纹明显.结论 局部联合应用SH及5-Fu可以明显促进肌腱内成纤维细胞增殖和胶原纤维合成,减少腱周成纤维细胞及胶原纤维合成,促进肌腱愈合,防止肌腱粘连.
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缺血预适应对小肠缺血再灌注损伤后c-Fos和c-Jun基因表达的影响及其保护作用
目的 观察小鼠小肠缺血再灌注损伤(IRI)模型中缺血预适应(IPC)对小肠IRI的保护作用,并检测c-Fos和c-Jun的变化,探讨其小肠IRI和IPC中的作用机制.方法 建立雄性C57BL/6小鼠小肠IRI模型,分为Sham组(假手术)、IRI组(单纯IRI)和IPC组(IPC+IRI)3组.采集3组术后再灌注0、30、60、90、120min小肠组织,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测不同时间点c-Fos和c-Jun的mRNA表达;免疫组织化学检测不同时间点小肠组织的c-Fos、c-Jun、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测不同时间点小肠上皮细胞凋亡情况.结果 RT-qPCR检测结果显示与对照组比较,IRI组小肠组织中c-Fos和c-Jun mRNA表达强度不断上升,分别于再灌注30min和60min时达峰值(12.34±2.95、11.65±2.43),并且明显高于IPC组(P=0.011、P=0.017).免疫组织化学检测显示IRI组再灌注30~60min时c-Fos(189.62±47.45、174.31±32.57)(P=0.026、P=0.029)和60~120min(71.31±11.54、97.46±14.48)(P=0.031、P=0.027)时c-Jun表达明显高于IPC组.IRI组PCNA表达不断增强,60min达峰值(392.74±67.04)后下降,并且明显高于IPC组(P=0.013);TUNEL染色显示与对照组比较随再灌注时间延长,IRI组和IPC组的凋亡指数(AI)均高于对照组,但IPC组再灌注90~120min的AI值明显低于IRI组(P=0.036、P=0.028).结论 IPC对小鼠小肠IRI具有显著的保护作用,c-Fos和c-Jun可能是介导小鼠小肠IPC保护作用的重要内源性活性介质.
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新型国产覆膜支架中长期耐久性的研究
目的 验证新型国产覆膜支架的长期安全性能.方法 绵羊12只,分为2组,每组6只.分别进行胸主动脉覆膜支架实验和腹主动脉覆膜支架实验.存活180d后行主动脉造影复查,观察支架位置,形态.然后处死,进行大体解剖和病理检查.结果 实验组12只绵羊,支架取出前造影见支架位置良好,无明显移位,无支架断裂.植入物被上皮细胞完全覆盖,无血栓成形.植入的支架与血管结合紧密,支架内壁组织光滑,无明显有肿胀及相关损伤或炎症,没有巨细胞或肉芽肿迹象.结论 新型国产覆膜主动脉支架具有良好的长期生物安全性.
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雌激素受体在自身免疫性脑脊髓炎小鼠膀胱组织的表达及意义
目的 通过建立自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型,观察多发性硬化(MS)神经源性膀胱中雌激素受体(ER)表达变化,并探讨其意义.方法 将髓鞘少突胶质细胞糖蛋白片段mog35-55和等体积完全弗氏佐剂充分混匀乳化,在百日咳毒素辅助下复制EAE模型.取20只C57BL/6雌性小鼠随机平均分为实验组以及对照组,从免疫后开始观察并记录小鼠临床症状.在免疫后第23天时,观察记录4h内小鼠小便次数以及单次尿量,处死小鼠收集脊髓以及膀胱,并将膀胱称重.通过苏木素-伊红(HE)染色和勒克司坚牢蓝(LBF)染色观察脊髓的病理变化,用Western blot检测ER在EAE小鼠膀胱中表达变化.结果 23d时EAE小鼠神经功能临床评分增加,出现典型的MS症状,对照组体重为(23.0±1.1)g,实验组体重为(16.5±1.5)g,与对照组比较实验组小鼠体重明显偏低(P=0.001).实验组小鼠4h内平均小便次数[(8.7±1.4)次]较对照组[(4.2±1.1)次]增多(P=0.001);单次小便尿量实验组[(0.22±0.11)mg]相对于对照组[(0.34±0.07)mg]明显减少(P=0.008),实验组中膀胱占体重比[(0.26±0.09)‰]较对照组[(0.11±0.03)‰]高(P=0.001).HE-LFB染色观察到EAE实验组小鼠脊髓出现明显的炎性细胞浸润和脱髓鞘表现.Western blot结果显示膀胱中ER蛋白相对表达量实验组(0.38±0.08)显著低于对照组(0.71±0.19,P=0.001).结论 mog35-55可以成功诱导EAE小鼠模型,该模型可以很好地模拟出MS神经源性膀胱的症状,ER以及雌激素可能为MS导致的膀胱功能障碍的重要因素.
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新型钾通道开放剂QO-58对SD大鼠离体小动脉血管张力的影响及机制
目的 观察离体状态下不同浓度的新型钾通道开放剂(QO-58)对SD大鼠冠状小动脉血管张力、舒张能力的影响,并探究QO-58对于加强血管舒张功能的可能作用机制.方法 显微镜下离体分离20只SD大鼠的冠状小动脉20根,直径1.0~1.5mm,将每根动脉制成血管环10条,每条长1.8~2.0mm,并作如下实验:(1)每只大鼠取6条内皮完整血管环作平行实验,加入A2受体激动剂(U46619)、60mmol/L高钾溶液、内皮素-1(ET-1)处理后产生均持续性收缩,记录大收缩幅度100%,在此基础上给予不同浓度的QO-58作对比试验,分为实验1组(10μmol/L)、实验2组(20μmol/L)、实验3组(50μmol/L)、实验4组(100μmol/L)、实验5组(500μmol/L),并另取1条离体冠状小动脉给予二甲基亚砜(DMSO)作对照组,对比各组小动脉血管环的舒张水平(血管张力)指标;(2)另取每只大鼠4条内皮完整血管环,预收缩处理后,取舒张为明显的一组的用药浓度为实验浓度,每只取4条血管环作对比试验,A组血管环在给予QO-58前加入eNOS抑制剂(L-NAME)孵育30min,B组用药前不予处理,对比A、B组血管环的血管舒张水平;C组血管环在给予QO-58前去内皮,D组为内皮完整血管环,对比C、D组血管环的血管舒张水平,探究QO-58舒张作用机制.结果 (1)SD大鼠的离体冠状小动脉的50%舒张效应血管张力指数(PD2)、大舒张率(Emax)值均首先随着加入QO-58的浓度的升高而增加,50μmol/L达到峰值,随后逐渐降低,对照组血管环则均无明显舒张作用,其中实验3组的PD2为3.92±0.13、Emax为(99.78±0.65)%,均为高、舒张效果为明显(F=2.927,P=0.013);(2)关于舒张机制的研究结果显示,A组的PD2、Emax均显著高于B组(P=0.000);而C、D组血管环的PD2、Emax则比较差异无统计学意义(C组比D组,PD2:P=0.845,Emax,P=0.715).结论 新型钾通道开放剂(QO-58)对于SD大鼠离体冠状小动脉血管具有良好的舒张作用,且呈浓度依赖性,但浓度过大则舒张作用逐渐减弱,QO-58的血管舒张作用机制无内皮依赖性,但QO-58可能有助于促进NO释放进而达到扩张血管平滑肌、改善血管张力的作用,具有临床应用价值.
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经胃入路自然腔道内镜手术对猪应激反应的影响
目的 比较经胃入路自然腔道内镜手术(NOTES)与普通腹腔镜技术对实验猪应激反应相关指标的影响,评价经胃入路NOTES技术对机体的应激反应.方法 将16只本地母猪采用随机数字表法随机分为经胃入路NOTES组和腹腔镜组,分别进行腹腔探查术,分别在麻醉诱导前、手术结束时、术后24、48、72h及7d等6个时间点检测白细胞计数(WBC)、皮质醇(CORT)、C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果 在6个检测时间点,两组实验动物的CRP、TNF-α含量比较,差异无统计学意义(CRP:t=0.982,P=0.435;t=0.675,P=0.570;t=1.354,P=0.082;t=1.728,P=0.256;t=0.815,P=0.428;t=1.294,P=0.374;TNF-α:t=2.514,P=0.548;t=4.007,P=0.746;t=1.582,P=0.279;t=1.624,P=0.315;t=1.356,P=0.395;t=0.997,P=0.104),WBC(×109/L)在术后24h及72h经胃入路NOTES组较腹腔镜组白细胞升高(15.36±2.62比13.2±2.73,18.84±6.41比16.80±5.02),差异有统计学意义(t=14.578,P=0.012;t=12.175,P=0.047),在其余4个检测时间点两组差异无统计学意义(t=0.857,P=0.663;t=1.846,P=0.262;t=2.776,P=0.816;t=4.555,P=0.430);CORT(μg/dl)在手术结束时经胃入路NOTES组较腹腔镜组升高(29.72±10.30比21.74±8.70),差异有统计学意义(t=18.126,P=0.017),在其余5个检测时间点,两组差异无统计学意义(t=1.548,P=0.879;t=1.396,P=0.721;t=2.174,P=0.164;t=2.207,P=0.139;t=2.612,P=0.183).结论 与普通腹腔镜手术比较,基于外科手术无菌原则进行手术,经胃入路NOTES技术并不增加实验动物的应激反应.
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肝素在脂多糖诱导急性损伤大鼠血管内皮细胞损伤中的作用及核因子-κB、白细胞介素-1β、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α变化
目的 探讨肝素在脂多糖诱导急性损伤大鼠血管内皮细胞损伤中的作用,以及核因子(NF)-κB、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平变化.方法 选择120只SD大鼠随机分为脂多糖组、肝素组和对照组,各40只.脂多糖组和肝素组大鼠均按照10mg/kg经腹腔注射脂多糖溶液以建立脓毒症大鼠模型,肝素组在注射脂多糖溶液前1h注射300IU/kg肝素溶液.对照组大鼠按照10mg/kg经腹腔注射NaCl溶液.观察造模6h时各组大鼠肺组织形态学变化.采用酶联免疫法检测3组大鼠静脉血中NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α等的变化.应用伊文思蓝(EB)检测各组大鼠肺血管通透性改变情况.结果 (1)肝素组大鼠肺结构改变少于脂多糖组,炎性细胞浸润也明显低于脂多糖组;(2)脂多糖组和肝素组0~6h时的NF-κB活性显著升高,脂多糖组由0h的(2.51±0.49)U/L升至6h的(18.85±2.97)U/L,肝素组由0h的(2.39±0.34)U/L升至6h的(3.37±0.82)U/L,脂多糖组NF-κB活性增加水平与肝素组比较更为显著(P=0.021);6~12h时两组NF-κB活性明显降低,其中脂多糖组由0h的(18.85±2.97)U/L降至6h的(13.47±2.19)U/L(P=0.022),肝素组由0h的(3.37±0.82)U/L降至6h的(2.25±0.34)U/L(P=0.048),但仍显著高于对照组和0h时的水平(P=0.000);0h时3组血液IL-1β、IL-6、TNF-α水平差异无统计学意义(IL-1β:P=0.940;IL-6:P=0.626;TNF-α:P=0.948),0~6h,脂多糖组和肝素组大鼠血液中各指标迅速升高(组内比较,与0h比较,6h时脂多糖组IL-1β:P=0.039;IL-6:P=0.018;TNF-α:P=0.000;肝素组IL-1β:P=0.036;IL-6:P=0.036;TNF-α:P=0.012),12h各指标水平显著回落(组内比较,与6h比较,脂多糖组IL-1β:P=0.042;IL-6:P=0.027;TNF-α:P=0.008;肝素组IL-1β:P=0.047;IL-6:P=0.045;TNF-α:P=0.034);脂多糖组大鼠6h和12h时的血液IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著高于肝素组(脂多糖组:肝素组6h,IL-1β:P=0.031;IL-6:P=0.023;TNF-α:P=0.000;12h,IL-1β:P=0.046;IL-6:P=0.038;TNF-α:P=0.017).(3)肝素组大鼠肺EN含量为(1.21±0.18)mg/ml,也明显低于脂多糖组的(1.92±0.20)mg/ml(t=8.344,P=0.000),表明肝素组大鼠肺血管通透性优于脂多糖组.结论 肝素可能够通过抑制脓毒症大鼠NF-κB、IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低其对血管内皮细胞的损伤,从而发挥对脓毒症的抗炎作用.
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凝血酶致敏蛋白2受抑癌基因p53的调控并调节前列腺癌细胞的增殖
目的 观察凝血酶致敏蛋白2(THBS2)对前列腺癌细胞增殖能力的影响以及抑癌基因p53对THBS2的调控能力.方法 以Lipofectamine 2000试剂转染针对p53和非特异性对照组的小干扰RNA(siRNA),干扰前列腺癌细胞C4-2中p53 的表达,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测细胞内THBS2的mRNA和蛋白水平表达变化;采用质粒转染的方法在293T细胞中过表达p53后检测THBS2蛋白水平的变化,明确p53对THBS2表达的影响;采用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法计算并检测干扰或过表达THBS2表达后对前列腺癌细胞增殖能力的影响,明确THBS2对前列腺癌细胞增殖的调节能力.结果 干扰p53表达后细胞内THBS2 mRNA的表达明显升高,说明p53可以调节THBS2的转录水平,进一步检测干扰p53表达后,THBS2的蛋白水平表达明显升高;在细胞内,过表达p53后检测THBS2的蛋白表达水平明显下降;在C4-2细胞中干扰目标基因THBS2的表达后,增殖细胞的百分比从(19.7±1.6)%下降至(13.2±0.9)% (P=0.000).同时,在C4-2细胞中过表达THBS2后,增殖细胞的百分比从(19.2±1.5)%上升至(36.0±1.3)% (P=0.011).结论 在前列腺癌细胞中,p53可以在mRNA和蛋白水平调节THBS2的表达,THBS2具有调节前列腺癌细胞增殖的能力.
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两种髓内钉治疗股骨转子间骨折的有限元分析
股骨转子间骨折的治疗方式现主要为髓内固定.联合交锁髓内钉InterTan 为施乐辉公司推出的一种髓内钉;解剖型头髓钉ZNNCM为捷迈公司近年推出的一种解剖型髓内钉.我们运用有限元分析法,对InterTan与ZNNCM治疗Evans-Jensen Ⅳ型股骨转子间骨折的生物力学进行比较.一、材料与方法用螺旋CT对1名健康男性志愿者(29周岁,70kg)股骨进行扫描,将数据导入Mimics,得到股骨几何模型.利用Icem软件生成六面体网格.利用Hypermesh生成Evans-Jensen Ⅳ型骨折模型.通过经验公式[1]将灰度值转化成弹性模量,本研究将股骨弹性模量设定为正常骨的66％.两种内植物弹性模量为110Gpa,泊松比为0.33[2].
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脑干肿瘤显微外科治疗31例分析
随着现代影像学诊断水平和显微外科技术的不断发展,使神经外科医师对脑干肿瘤的手术治疗有了更深的认识.我们收集2000年至2010年手术治疗31例脑干肿瘤患者,现报道如下.一、对象与方法1.一般资料:本组脑干病变31例,男17例,女14例,年龄8～64岁,平均年龄41.8岁,术前病程0.5～36.0个月.2.临床表现:脑干肿瘤的临床表现:进食呛咳、吞咽困难症状10例,面瘫8例,行走不稳和肢体共济失调15例;眩晕10例,头痛、恶心 10例,呼吸不规则1例.
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邻苯二甲酸二丁酯对生殖结节细胞凋亡的影响
我们通过大鼠孕期暴邻苯二甲酸二丁酯(DBP)观察其对生殖结节(GT)细胞凋亡的影响.一、材料与方法1.分组:清洁级4个月龄SD大鼠(苏州大学实验动物中心:SCXK(苏)2007-0007),雄性(280±10)g,雌性(240±10)g,1:1的比例交配,分为对照组(n=10)和实验组(n=10).妊娠(GD)13～19d,实验组给予750mg/kg的DBP(美国Sigma公司,524980),对照组给于玉米油(美国Sigma公司,C8267).
关键词： -
甲亢性骨质疏松患者维生素D受体基因多态性研究
目的 观察甲状腺功能亢进症(甲亢)对骨质疏松患者维生素D受体(VDR)基因多态性的影响,探讨甲亢对骨质疏松骨代谢方面的影响.方法 取正常人10例的全血标本,为A组,取甲亢骨质疏松患者10例全血标本为B组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血液甲状腺激素(TSH)和游离甲状腺激素(FT3和FT4)水平;扩增回收VDR基因,用BsmⅠ、ApaⅠ、TaqⅠ、FoxkⅠ 4个限制性内切酶对其消化,聚丙烯酰氨凝胶电泳后得到VDR基因多态性图谱;统计学分析A组和B组的VDR基因多态性.结果 甲亢性骨质疏松患者血液中TSH水平显著低于正常人,而FT3和FT4水平显著高于正常人;与正常组(3.70%)比较,甲亢性骨质疏松患者的VDR基因琼脂糖凝胶电泳图谱具有明显的多态性(83.43%).结论 甲亢会引起VDR基因突变率变高,造成骨代谢失衡,从而导致骨质疏松的发生.
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核苷酸结合寡聚化结构域样受体3在结肠癌组织的表达及其对结肠癌细胞增殖和迁移的影响
目的 观察核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)在结肠癌组织的表达及对结肠癌细胞HCT116和SW480生物学行为的影响.方法 采用免疫组织化学法检测NLRP3在56例结肠癌组织及8例正常组织中蛋白的表达.实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NLRP3在20例结肠癌组织中mRNA的表达.采用Kaplan-Meier法进行生存分析,Log-rank法进行显著性检验,Cox回归进行多因素分析.采用Lipofectamine 2000进行p-NLRP3表达载体转染,RT-qPCR 和Western blot检测NLRP3 mRNA及蛋白的表达,噻唑蓝(MTT)和Transwell法检测其对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响.结果 56例肿瘤组织中NLRP3高表达组10例,低表达组46例,在正常结肠黏膜组织中呈阳性表达.NLRP3 mRNA在癌旁组织的表达为癌组织表达的2.51倍.NLRP3 表达与肿瘤浸润深度(P=0.024)、淋巴结转移(P=0.009)、肝转移(P=0.038)及TNM分期(P=0.024)相关.NLRP3低表达组总生存率显著低于高表达组(P=0.010).NLRP3低表达为结肠癌预后不良独立风险因素(P=0.047).p-NLRP3转染SW80细胞,72h对照组和p-NLRP组吸光度(A)值分别为0.63±0.06和0.91±0.03(P=0.010),96h分别为1.07±0.05和1.48±0.05(P=0.003).p-NLRP3转染HCT116细胞,72h对照组和p-NLRP组A值分别为0.80±0.05和1.20±0.08(P=0.005),96h分别为1.02±0.08和1.64±0.05(P=0.003).过表达NLRP3,SW480细胞对照组和p-NLRP组穿膜细胞数分别为(104±8)和(30±4)个(P=0.008);HCT116细胞对照组和p-NLRP组穿膜细胞数分别为(123±6)和(36±3)个(P=0.022).结论 NLRP3低表达与结肠癌进展密切相关,是其独立预后不良风险因素.
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尿沉渣人RUNT相关转录因子3基因甲基化在非肌层浸润性膀胱癌中的预后价值
目的 探讨尿沉渣人RUNT相关转录因子3(RUNX3)基因甲基化与非肌层浸润性膀胱癌临床病理特征与预后的关系.方法 本研究为前瞻性对照研究,按顺序纳入2014年7月至2014年12月在我院住院手术的45例初发膀胱癌患者,45例患者均行经尿道膀胱肿瘤电切术,术后病理检查证实为非肌层浸润性尿路上皮癌.对照组为同期45例输尿管结石或肾结石患者.采集手术当日晨尿进行尿沉渣RUNX3基因甲基化检测.患者术后每3个月接受膀胱镜复查,发现膀胱癌复发为研究终点.结果 与对照组比较,膀胱癌组尿沉渣RUNX3甲基化差异有统计学意义,尿沉渣RUNX3甲基化与膀胱癌病理分级明显相关(P=0.002).随访18~24个月,12例膀胱癌复发,其中3例进展为浸润性膀胱癌,生存曲线分析结果表明,尿沉渣RUNX3甲基化与膀胱癌复发相关.结论 尿沉渣RUNX3甲基化与膀胱癌病理分级明显相关,且与膀胱癌复发有关.
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HOX转录反义RNA在三阴性乳腺癌组织的表达及意义
目的 检测三阴性乳腺癌(TNBC)中长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)的相对表达,探讨其与乳腺癌恶性程度及进展的关系.方法 选取TNBC患者组织样本43例,非TNBC患者组织样本78例(均留取癌灶及癌旁正常乳腺组织),采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)的方法检测癌灶及其配对癌旁正常乳腺组织中HOTAIR的相对含量,比较其表达差异;检测TNBC与非TNBC癌灶中HOTAIR的相对含量,比较其表达差异;同时分析TNBC癌灶中HOTAIR的相对含量与肿瘤临床病理分期的关系.结果 TNBC和非TNBC组织样本中,癌灶与癌旁组织比较HOTAIR的相对表达显著升高(0.59±0.50比0.41±0.32,P=0.001);HOTAIR的相对表达在TNBC中较非TNBC中高(0.78±0.59比0.48±0.41,P=0.004);TNBC样本中,晚期样本较早中期样本HOTAIR相对表达水平升高(1.03±0.63比0.54±0.44,P=0.006).结论 HOTAIR在癌灶中表达TNBC较非TNBC明显升高,与TNBC的临床病理分期明显相关.
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驱动蛋白家族蛋白14在食管鳞癌组织的表达及其对食管鳞癌细胞增殖和周期的影响
目的 观察驱动蛋白家族蛋白14(KIF14)在食管鳞癌组织的表达,探讨其表达下调对食管鳞癌细胞增殖和周期的影响.方法 采用免疫组织化学检测87例食管鳞癌组织和对应的正常食管上皮组织中KIF14的表达,分析其表达与临床病理学参数的关系.利用Western blot检测不同食管鳞癌细胞及正常食管上皮细胞中KIF14蛋白的表达,将KIF14小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA转染食管鳞癌Eca109细胞,利用Western blot检测转染后KIF14蛋白表达的变化.进一步采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式细胞术检测KIF14表达下调对食管鳞癌Eca109细胞增殖和周期的影响.结果 KIF14在食管鳞癌组织中表达的阳性率(62.3%)显著高于正常食管上皮组织(21.8%),差异有统计学意义(χ2=30.474,P=0.000).KIF14蛋白的表达与食管鳞癌患者的组织学分级、临床分期以及淋巴结转移均密切相关(P=0.000、0.026、0.007),但与食管鳞癌患者的性别和年龄均无明显相关(P=0.821、0.644).此外,KIF14在食管鳞癌细胞中的表达水平显著高于正常食管上皮细胞Het-1A,并且KIF14 siRNA能显著下调食管鳞癌Eca109细胞中KIF14蛋白的表达.为重要的是KIF14表达下调显著抑制食管鳞癌Eca109细胞的增殖,静止细胞周期在G0/G1期.结论 KIF14在食管鳞癌的发生发展中发挥重要作用.
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甲状腺乳头状癌组织V-raf鼠类肉瘤滤过性病毒致癌基因同源体B1V600E突变与尿碘浓度的关系
目的 探讨甲状腺乳头状癌(PTC)中V-raf鼠类肉瘤滤过性病毒致癌基因同源体B1(BRAF) V600E基因突变和患者的尿碘浓度(UIC)及其与临床病理特征的关系.方法 应用聚合酶链反应(PCR)技术和DNA直接测序法检测110例PTC、47例结节性甲状腺肿、26例甲状腺腺瘤患者标本中BRAF V600E基因突变,同时检测患者的尿碘浓度;分析PTC患者中BRAF V600E基因突变和尿碘浓度与患者性别、年龄、肿瘤数目、腺体外浸润、淋巴结转移及TNM分期等临床病理特征的关系.结果 在183例甲状腺结节组织中,PTC中检测到BRAF V600E突变,突变阳性率为49%(54/110),而结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤标本未检测到(χ2=50.838,P=0.000).BRAF V600E突变与PTC的腺体外浸润呈正相关(χ2=6.031,P=0.014),与性别(P=0.363)、年龄(P=0.360)、肿瘤数目(P=0.593)、肿瘤直径(P=0.497)、淋巴结转移(P=0.554)及pTNM分期(P=0.785)无明显相关.PTC患者碘过量率为79%,高于结节性甲状腺肿的66%和甲状腺腺瘤的58%,差异有统计学意义(χ2=6.288,P=0.043).PTC患者的尿碘浓度与性别(P=0.187)、年龄(P=0.138)、肿瘤数目(P=0.571)、肿瘤直径(P=0.454)、腺体外浸润(P=0.345)、淋巴结转移(P=0.248)及pTNM分期(P=0.792)无明显相关.PTC中BRAF V600E突变与尿碘浓度无明显相关(χ2=0.019,P=0.891).结论 BRAF V600E突变与PTC的侵袭性明显相关,PTC患者尿碘浓度的碘过量率高于甲状腺良性结节.
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下胸椎黄韧带骨化与关节突关节面角度变化的关系
目的 探讨关节突关节面的角度变化与下胸椎胸椎黄韧带骨化(TOLF)的关系.方法 选取行下胸椎64层CT扫描的患者168例,其中TOLF组88例,对照组80例.测量两组T8~T12双侧关节突关节矢状面和横轴面角度,对两组数据进行统计学分析.结果 两组性别比例相似(P=0.120),TOLF组年龄(50.61±12.13)岁,对照组年龄(50.49±10.83)岁,差异无统计学意义(P=0.096).TOLF组各节段矢状面角度:T8左(75.60±3.31)°,右(75.42±3.59)°;T9左(78.78±3.65)°,右(79.60±3.51)°;T10左(83.40±2.94)°,右(84.64±3.32)°;T11左(97.61±16.67)°,右(97.30±14.62)°;T12左(124.13±12.36)°,右(131.50±11.13)°.TOLF组各节段横轴面角度:T8左(78.00±3.21)°,右(77.53±3.14)°;T9左(78.58±3.18)°,右(78.73±2.92)°;T10左(84.21±4.00)°,右(83.70±3.40)°;T11左(82.18±2.79)°,右(83.05±3.27)°;T 12左(77.13±3.81)°,右(78.20±4.05)°.对照组各节段矢状面角度:T8左(72.96±2.98)°,右(72.39±3.22)°;T9左(77.50±2.98)°,右(76.72±3.05)°;T10左(81.71±3.54)°,右(81.36±2.83)°;T11左(105.97±10.43)°,右(106.36±9.88)°;T12左(131.85±20.78)°,右(135.80±16.27)°.对照组各节段横轴面角度:T8左(75.75±2.66)°,右(75.07±2.90)°;T9左(76.82±3.02)°,右(77.24±2.88)°;T10左(81.24±3.75)°,右(81.94±2.60)°;T11左(77.64±3.28)°,右(78.69±3.10)°;T12左(74.69±2.67)°,右(74.42±4.19)°.两组矢状面角度除T9左侧和T12右侧差异无统计学意义(P值分别为0.088、0.171),余各节段差异均有统计学意义(P=0.000、0.000、0.000、0.007、0.000、0.007、0.001、0.037);两组各节段横轴面角度差异均有统计学意义(P=0.000、0.000、0.008、0.016、0.000、0.004、0.000、0.000、0.001、0.000);TOLF组各节段同侧矢状面角度进行方差分析(P=0.000),双侧均为T8和T9、T9和T10差异无统计学意义,余各节段比较差异均有统计学意义;TOLF组各节段同侧别横轴面角度进行方差分析(P=0.000),双侧均为T8和T9、T8和T12、T9和T12、T10和T11差异无统计学意义,余各节段比较差异均有统计学意义;TOLF组中共有12例矢状面角度不对称,对照组有13例,χ2=4.610,两组差异有统计学意义(P=0.020).结论 下段TOLF多发于T10、T11节段;下胸段关节突关节面越接近冠状面,黄韧带骨化的发病率越高;双侧关节突关节矢状面角度的不对称对黄韧带骨化的发生也具有一定影响.
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锌指含髓样神经变形表皮生长因子结构域第8亚型作为糖皮质激素受体下游基因在前列腺癌组织的表达及临床意义
目的 验证锌指含髓样神经变形表皮生长因子结构域第8亚型(ZMYND8)与糖皮质激素受体(GR)之间调控关系,探讨ZMYND8表达量与前列腺癌各临床病理特征之间的关系.方法通过软件预测及在敲除GR基因的前列腺癌细胞PC3中用Western blot实验方法检测ZMYND8表达量,分析GR与ZMYND8之间的关系,并在80例前列腺癌及非癌组织的组织芯片中使用免疫组织化学的方法,对ZMYND8蛋白表达量与前列腺癌各病理特征之间的关系进行分析.结果 ZMYND8 基因受GR基因调控,ZMYND8在癌组织及转移癌中表达上调(免疫组织化学评分:非癌组织为5.700±2.054,癌组织为7.340±2.163,P=0.001,转移癌组织为6.710±2.369,非转移癌组织为8.110±1.595,P=0.028),差异有统计学意义.结论 ZMYND8的表达受上游基因GR的调控,ZMYND8基因在前列腺癌临床上表现为促癌基因.
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交锁髓内钉结合锁定板治疗股骨干骨折钢板内固定术后非感染性骨不连
目的 探讨交锁髓内钉结合侧方锁定板治疗股骨干骨折钢板内固定术后非感染性骨不连的临床疗效.方法 分析收治并获得完整随访的17例股骨干骨折钢板内固定术后非感染性骨不连患者的资料,治疗采用交锁髓内钉结合侧方锁定板固定.术后1、3、6、12个月及以后每年定期复查,通过影像学分析骨折愈合情况,并指导患肢功能锻炼.结果 17例患者术后获14~36个月(平均19.6个月)随访,骨不连均愈合,愈合时间为6~14个月,平均8.7个月.术前患肢美国骨科学会(AAOS)评分、肢体短缩长度、膝关节屈曲及伸直角度分别为(68.5±10.1)分、(0.2±0.8)cm、(92.4±13.7)°和(1.8±5.0)°.术后12个月各项指标依次为(88.7±5.0)分、(0.6±0.9)cm、(110.9±15.0)°和(0.6±4.6)°.术后12个月AAOS评分及膝关节屈曲角度分别与术前比较均有明显改善(t=7.339,P=0.000;t=3.757,P=0.001).术后12个月肢体短缩长度及膝关节伸直角度分别与术前比较,差异无统计学意义(t=1.572,P=0.126;t=-0.713,P=0.481).无严重并发症发生.结论 交锁髓内钉结合侧方锁定板是治疗股骨干骨折钢板内固定术后非感染性骨不连的有效方式.
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微小RNA-223下调FBXW7表达促进胰腺癌细胞增殖和迁移
本研究旨在观察微小RNA(miRNA,miR)-223对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和迁移的影响及靶基因FBXW7的调控作用,现报道如下.一、材料与方法1.材料:胰腺癌BxPC-3细胞株、模拟物和对照物(上海艾博思生物技术有限公司);鼠抗人FBXW 7(美国Hyclone公司);Lipofectamine 2000(美国Invitrogen公司);双荧光素酶报告基因检测试剂盒(美国Promega公司);噻唑蓝(MTT)试剂盒(上海碧云天生物技术公司);反转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒(大连宝生物工程有限公司).
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患者血清前列腺特异抗原、细胞角蛋白19片段抗原21-1联合检测乳腺癌的临床研究
目的 探讨血清中前列腺特异抗原(PSA)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)联合检测对乳腺癌的诊断及病理分期的临床价值.方法 随机选择我院收治的200例乳腺癌患者为观察组;选择同时期我院确诊的200例乳腺良性疾病患者为对照组.检测患者血清中PSA、CYFRA21-1 水平,根据检测结果对乳腺癌早期诊断治疗过程中病情监测的临床价值.结果 观察组血清中游离PSA(fPSA)(0.19±0.04)ng/ml、总PSA(tPSA)(22.45±3.16)pg/ml,明显低于对照组的fPSA(0.35±0.08)ng/ml、tPSA(31.48±4.31)pg/ml;其CYFRA21-1(5.34±1.13)ng/ml明显高于对照组(3.67±1.07)ng/ml,差异有统计学意义(t=1.267,P=0.031;t=4.891,P=0.028;t=2.534,P=0.026).观察组血清中fPSA、tPSA及CYFRA21-1及3项联合检测的阳性率明显高于对照组,差异有统计学意义(χ2=3.287,P=0.012;χ2=2.936,P=0.028;χ2=13.587,P=0.000;χ2=11.279,P=0.000).观察组为病理证实的200例乳腺癌,其中Ⅰ~Ⅱ期73例,Ⅲ期76例,Ⅳ期51例.Ⅳ期乳腺癌患者血清中fPSA、tPSA含量明显低于Ⅰ~Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌患者,CYFRA21-1含量明显高于Ⅰ~Ⅱ、Ⅲ期患者.Ⅲ期乳腺癌患者血清中tPSA、fPSA含量明显低于Ⅰ~Ⅱ期患者,血清中CYFRA21-1含量明显多于Ⅰ~Ⅱ期乳腺癌患者,差异有统计学意义(Ⅳ期与Ⅲ期依次比较,t=0.783,P=0.019;t=1.524,P=0.021;t=2.875,P=0.014).tPSA±fPSA±CYFRA21-1联合检测能提高能使患者检测的敏感度提高到91.7%,特异性提高到92.8%,诊断的准确性提高到94.8%,均明显高于单项检测,差异有统计学意义(联合检测与单项CYFRA21-1比较,χ2=2.357,P=0.019;χ2=4.398,P=0.038;χ2=3.176,P=0.029).结论 PSA联合CYFRA21-1检测可有效提高乳腺癌早期诊断率.
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脑微透析技术在神经科学中的应用进展
脑微透析(B-MD)是一种脑内微创、持续监测活体细胞外小分子物质动态变化技术.现已成为脑科学基础研究中常用的技术,在脑神经系统疾病的临床应用中也有初步开展,本文拟对B-MD技术的流程、结构、特点及其在神经科学中基础研究、临床应用的进展进行综述.
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非经典Wnt信号通路在骨发育和骨代谢中的作用
非经典Wnt信号通路主要包括Wnt-平面细胞极性通路(Wnt-PCP pathway)和Wnt-钙离子通路(Wnt-Ca2+ pathway).非经典Wnt信号通路在骨发育和骨代谢中的作用广泛,可以调控骨髓间充质干细胞(BMSCs)的生长发育;调节膜内成骨、软骨内成骨和肢体形态发育;调控骨吸收和骨形成;并与一些病理性代谢密切相关.本文拟对其作用、特点和研究现状作一综述.
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精准医学在胆囊癌领域的研究进展
胆囊癌是恶性程度极高、预后差的恶性肿瘤,早期诊断困难,手术根治率低.精准医学是以个体化治疗为基础而发展起来的新型医学理念与医疗模式.生物医学及生物信息学研究的兴起使精准地对肿瘤患者进行诊断以及个体化治疗成为可能.本文对精准医学理念在胆囊癌领域的基础研究、靶向治疗及根治性手术中的应用进行了综述.新型分子靶点的发现以及新技术的应用能够推动胆囊癌精准诊疗的发展,改善患者的预后.
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热休克蛋白在胶质瘤中的研究进展
胶质瘤是成人神经系统常见的恶性肿瘤,随着分子生物学技术的发展,寻找胶质瘤细胞高度特异性的治疗靶点已经成为近年的研究新方向.热休克蛋白家族(HSPs)在胶质瘤细胞的免疫、增殖、侵袭和转移中都具有重要作用,而近年来HSPs家族研究的热点包括有HSP27、HSP70及HSP90,大量的研究证明它们与胶质瘤的诊断、治疗和预后有着重要的关系.这些研究结果预示着HSPs家族有望成为胶质瘤治疗的新靶点,不过增强HSPs的靶向性仍然是一个需要攻克的难题.
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反复轻度颅脑损伤大鼠动物模型的建立
目的 建立一种稳定可复制的反复轻度颅脑损伤(TBI)的动物模型.方法 选用雄性SD大鼠64只,按照随机数字表法分为单一损伤对照组、单一损伤组、反复损伤对照组、反复损伤组,每组再分为4个亚组:3、7、14、30d组,每亚组4只.单一损伤组开颅后仅打击1次,反复损伤组间隔24h打击4次,对照组仅行去骨瓣处理.建立损伤模型后检测1、3、7、14、21、30d神经功能缺损评分(mNSS)及Morris水迷宫检测30d空间学习记忆能力.苏木素-伊红(HE)染色观察损伤后损伤灶,免疫荧光检测损伤后神经元缺失.结果 (1)mNSS评分结果显示损伤后不同时间点,反复损伤组与单一损伤组比较,导致更加严重的神经行为学缺失,差异有统计学意义(1、3d:P=0.013,7d:P=0.003,14d:P=0.008,21、30d:P=0.000).Morris水迷宫潜伏期训练结果显示训练开始后第2天起,反复损伤组与单一损伤组比较,到达目标平台所需要的时间更长,差异有统计学意义(P=0.000).目标象限百分比结果显示,在相同检测时间内,单一损伤组[(33.33±6.80)%]较反复损伤组[(16.34±3.76)%]进入目标象限时间比更高,差异有统计学意义(P=0.029).(2)神经元免疫荧光检测结果显示损伤后14d及30d,反复损伤组损伤区周围与海马齿状回区域神经元随时间推移缺失严重,较单一损伤组差异有统计学意义(损伤区周围:14d:P=0.007,30d:P=0.003;海马齿状回:14d:P=0.009,30d:P=0.007).结论 反复TBI导致的神经行为学缺失现象更加严重,导致的神经元缺失现象也更加严重,可以为反复TBI后的神经退行性变的病理机制变化提供稳定可复制的动物模型.
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建立猪脾窝异位辅助性活体肝移植的动物模型
目的 评价获取活体猪左半肝行脾窝异位辅助性肝移植的可行性.方法 选用体重相近的雌性广西巴马小型猪20头,随机分为供体和受体.切取活体供体猪左半肝(不含肝中静脉),肝左静脉缝合直径8mm、长2.5cm聚四氟乙烯人工血管做桥接血管.切除受体猪脾和左肾,将供肝置入脾窝,供体肝门静脉左支、肝动脉左支、肝左静脉桥接血管分别与脾静脉、脾动脉和左肾静脉行端端吻合,左肝管插管引出体外.未使用免疫抑制剂,观察术后2周情况及外科并发症.结果 进行10次脾窝异位辅助性活体肝移植,7头供体猪术后存活2周,6头受体猪术后存活2周,仅3头受体猪移植肝功能良好.结论 尽管动静脉血栓栓塞和人工血管血栓形成等并发症发生率较高,获取活体猪左半供肝行脾窝异位辅助性肝移植在技术上是可行的.
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吡咯喹啉醌对胶质瘤细胞生长的抑制作用
目的 观察吡咯喹啉醌(PQQ)对神经胶质瘤U87细胞的抑制作用,探讨相关作用机制.方法 培养的U87细胞进行随机分组,一组为正常培养,一组为PQQ处理.通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、Western blot、流式细胞术以及生化检测细胞周期蛋白E(Cyclin E)、细胞周期依赖性激酶2(CDK2)、p53及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达水平;分别通过膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙锭(PI)、2',7'二氯氢化荧光素已二脂(H2DCFDA)以及JC1染色,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞内活性氧(ROS)水平以及线粒体膜电势(MMP);通过丙二醛(MDA)试剂盒检测MDA水平.结果 CCK-8检测结果提示PQQ能够有效抑制U87细胞的增殖.Western blot结果显示,与正常培养的U87细胞比较,PQQ处理组Cyclin E表达水平明显降低(t=6.487,P=0.001),CDK2表达水平也明显降低(t=2.830,P=0.030),而p53表达水平显著增加(t=7.949,P=0.000),此外,凋亡相关蛋白Caspase-3表达也显著增加(t=5.577,P=0.001).流式细胞术结果显示,PQQ处理组细胞凋亡百分比为(40.80±4.09)%,明显高于对照组细胞[(7.12±0.72)%],差异有统计学意义(t=6.665,P=0.000);PQQ处理组细胞ROS平均荧光强度为(2140.12±276.80),明显高于对照组细胞(605.50±57.93)%,差异有统计学意义(t=5.429,P=0.001);PQQ处理组细胞MMP水平(0.93±0.13)明显低于对照组(1.83±0.86),差异有统计学意义(t=5.900,P=0.000).MDA检测结果显示,PQQ处理组MDA水平[(3.31±0.27)nmol/mg prot]明显高于对照组[(2.18±0.34)nmol/mg prot],差异有统计学意义(t=2.566,P=0.033).结论 PQQ可以通过抑制细胞周期相关蛋白的表达,提高氧化应激水平,以及降低线MMP从而抑制U87细胞增殖,促进神经胶质瘤U87细胞凋亡.
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重组人促红细胞生成素对大鼠颅脑损伤早期促血管新生的机制
目的 探讨磷脂酰肌醇(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路在大鼠颅脑损伤早期应用重组人促红细胞生成素(rhEPO)促血管新生中的作用及机制.方法 将125只SD 大鼠按随机数字表法随机分为假手术组(n=25)、创伤性颅脑损伤(TBI)组(n=25)、rhEPO+磷脂酰肌醇特异性抑制剂渥曼青霉素(Wortmannin组,n=25)、rhEPO+细胞外信号调节激酶特异性抑制剂PD98059组(n=25)和rhEPO组(n=25).用改良Feeney法制作大鼠颅脑损伤模型,Western blot法测定大鼠脑组织磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)和血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的表达水平,免疫组织化学法检测大鼠受损脑组织周围微血管密度(MVD)计数.结果 颅脑损伤后1、3、5和7d,与TBI组比较,rhEPO组大鼠脑组织p-Akt、p-ERK1/2 以及VEGF-A的表达升高(P=0.036,0.039,0.025);与rhEPO+PD98059组比较,rhEPO+Wortmannin组大鼠脑组织VEGF-A的表达降低(P=0.034).颅脑损伤后14d,大鼠受损脑组织周围MVD计数结果rhEPO组[(50.83±11.67)个/200倍视野]较TBI组[(14.67±3.98)个/200倍视野]升高(P=0.001);rhEPO+Wortmannin组[(22.33±3.88)个/200倍视野]较rhEPO+PD98059组[(40.50±8.83)个/200倍视野]降低(P=0.001).结论 PI3K/Akt和ERK1/2信号通路在应用rhEPO促进VEGF-A的表达以及血管新生中发挥重要作用,其中PI3K/Akt信号通路较ERK1/2信号通路发挥重要作用.
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大鼠液压冲击脑损伤核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件通路的时程表达变化
目的 观察大鼠液压冲击脑损伤核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应元件(ARE)信号通路及其下游因子血红素氧化酶-1(HO-1) 和磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1(NQO-1)时程表达变化.方法 成年雄性SD大鼠56只,制作液压冲击颅脑损伤模型,术后1、6、12、24h、3、7d对大鼠进行神经功能评分,用干湿重法测定脑含水量;Western blot测定胞质、胞核Nrf2蛋白以及HO-1、NQO-1蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)测定Nrf2-mRNA表达.结果 创伤性脑损伤(TBI)组脑含水量于冲击伤后6h开始增加[(78.98±0.12)%],24h达高峰(82.98±0.62)%],3d开始下降[(82.26±0.72)%],神经功能评分趋势与之相反,24h下降至低值(2.78±0.66),差异均有统计学意义(F=98.712、78.806,P=0.000).Western blot证实TBI组胞核Nrf2于1h开始升高(0.82±0.18),24h达到高峰(1.87±0.82),3d时降低(1.42±0.55),而胞质Nrf2自12h开始持续走低(1.14±0.22),呈相反趋势,差异均有统计学意义(F=11.566、17.928,P=0.001).HO-1和NQO-1蛋白表达与胞核Nrf2蛋白趋势一致(F=16.175、12.694,P=0.001).FQ-PCR结果显示TBI组冲击伤后各时间点Nrf2-mRNA表达水平无明显变化(F=0.802,P=0.968).结论 大鼠脑液压冲击伤Nrf2-ARE通路激活,可能在创伤性颅脑损伤中发挥抗氧化应激损伤作用.
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Toll样受体4在创伤性颅脑损伤中的作用及其机制
目的 探讨Toll样受体4(TLR4)在创伤性颅脑损伤中发挥的作用及其机制.方法 观察TLR4基因敲除型[TLR4(-/-)]/野生型[TLR4(+/+)]小鼠在自由落体脑外伤模型后24h学习能力、水肿、炎性反应等的变化.通过Morris水迷宫实验比较各组小鼠伤后学习能力;磁共振成像比较各组小鼠水肿面积;实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)比较各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-10、脑源性神经营养因子(BDNF)的表达;Western blot法比较各组髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)的变化.结果 在行自由落体脑外伤模型24h后,TLR4(-/-)小鼠寻找平台潜伏期[(39.26±18.1)s]明显短于TLR4(+/+)小鼠[(50.19±16.5)s;t=2.361,P=0.021];TLR4(-/-)小鼠穿越平台的次数(2.04±1.18)明显多于TLR4(+/+)小鼠(0.60±0.47;t=3.000,P=0.011);TLR4(-/-)小鼠的水肿面积[(10.31±2.01)%]明显小于TLR4(+/+)小鼠[(23.20±5.70)%;t=5.643,P=0.000];在mRNA水平,TLR4(-/-) 小鼠IL-10[TLR4(-/-):3.00±0.74;TLR4(+/+):1.20±0.27;t=6.046,P=0.000]、BDNF[TLR4(-/-):55.67±7.94;TLR4(+/+):42.52±3.25;t=4.055,P=0.002]的表达较TLR4(+/+)小鼠增加,而TNF-α[TLR4(-/-):6.49±0.36;TLR4(+/+):8.89±0.57;t=9.419,P=0.000]、IL-1β[TLR4(-/-):7.49±0.79;TLR4(+/+):12.76±1.06;t=10.547,P=0.000]较TLR4(+/+)小鼠明显减少.另外,TLR4(-/-)小鼠MyD88(t=7.968,P=0.000)/NF-κB(t=6.198,P=0.000)的激活在伤后24h明显低于TLR4(+/+)小鼠.结论 在创伤性颅脑损伤后,TLR4的激活启动并促进脑外伤中的炎性反应,加重外伤后的脑水肿与继发性损伤,MyD88/NF-κB信号通路在中其发挥重要作用.
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胆碱能抗炎通路在右美托咪定防治脓毒症小鼠谵妄中的作用
目的 观察胆碱能抗炎通路在右美托咪定防治脓毒症小鼠谵妄发生中的作用.方法将小鼠随机分为5组:生理盐水对照组(C组)、右美托咪定对照组(DEX组)、脓毒症组(LPS组)、右美托咪定保护组(LPS+DEX组)、α-银环蛇毒素组(α-BGT组).每组均分为2个亚组(n=6).亚组1行旷场实验;亚组2行新物体识别实验,实验后处死小鼠并留取标本.透射电镜观察小鼠海马结构改变,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测炎性因子水平.结果 C组和DEX组各项指标比较差异均无统计学意义.LPS、α-BGT组出现了明显谵妄症状,而LPS+DEX组症状较轻.(1)旷场试验结果显示,制模前各组旷场实验观察指标均无差异.制模24h后,与C组比较,LPS组小鼠表现为对新环境的认知、学习和记忆能力均下降,紧张度增加;右美托咪定可明显改善小鼠上述对新环境的探索、习惯和情绪变化,但α-BGT可拮抗右美托咪定的保护作用.(2)新物体识别实验结果显示,与C组比较,LPS组探究新事物的能力下降;右美托咪定可改善小鼠的探究能力,而α-BGT可拮抗右美托咪定的保护作用.(3)ELISA结果显示,LPS组血清及海马组织TNF-α和IL-1β水平较C组明显升高[血清(ng/L)TNF-α:794.80±93.99比23.60±3.03,IL-1β:148.49±24.80比64.55±5.13,海马组织[pg/(mg·prot)TNF-α:176.14±11.25比6.71±0.49,IL-1β:50.61±5.86比16.73±1.15,P=0.000],右美托咪定可改善LPS诱导的血清及海马组织TNF-α和IL-1β水平升高[血清(ng/L)TNF-α:184.44±26.58比794.80±93.99,IL-1β:77.43±10.75比148.49±24.80,海马组织(pg/mg·prot)TNF-α:64.83±13.09比176.14±11.25,IL-1β:17.97±2.26比50.61±5.86,P=0.000],而α-BGT可拮抗右美托咪定的保护作用[血清(ng/L)TNF-α:812.31±86.25比184.44±26.58,IL-1β:156.42±17.94比77.43±10.75,海马组织(pg/mg·prot)TNF-α:181.94±8.69比64.83±13.09,IL-1β:52.10±5.59比17.97±2.26,P=0.000].LPS+DEX组较LPS组及α-BGT组海马病理学改变明显较轻.结论 右美托咪定通过激活胆碱能抗炎通路减轻全身及脑组织的炎性反应,从而改善小鼠的谵妄状态.
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S期激酶相关蛋白2基因沉默对人脑胶质瘤细胞U251生物学特性的影响
目的 观察S期激酶相关蛋白2(SKP2)基因沉默对人脑胶质瘤细胞U251生物学特性的影响,探讨其可能的机制.方法 体外培养U251细胞,分为3组,分别加入Ad-shSKP2(shSKP2组)、Ad-shNC(shNC组)及磷酸盐缓冲液(PBS,对照组),采取细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖的变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化,划痕实验和Transwell侵袭实验观察细胞迁移和侵袭的变化,Western blot测定U251细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2的蛋白表达的变化.结果 Ad-shSKP2转染24、48、72h后shSKP2组的细胞存活率分别是对照组的(87.17±2.60)%、(79.63±1.74)%和(72.81±1.78)%,而shNC组的细胞存活率无显著性变化.shSKP2组、shNC组及对照组的凋亡率分别为(18.27±2.44)%、(1.51±1.02)%和(1.11±1.20)%,G2/M期比例分别为(26.65±2.51)%、(14.46±2.58)%和(14.89±3.81)%.shNC组和shSKP2组的24h迁移距离分别为对照组的(93.45±16.77)%及(43.69±7.44)%,对照组、shNC组和shSKP2组24h通过Transwell小室的过膜细胞数(每200倍视野)分别为(87.50±5.66)、(79.78±8.03)、(38.24±6.64)个.Western blot显示,shSKP2组较对照组及shNC组bax表达上调,bcl-2、MMP-9、MMP-2蛋白表达下降.结论Ad-shSKP2可抑制U251细胞的体外增殖,可诱导U251细胞凋亡、引起G2/M期阻滞,减弱细胞的迁移及侵袭能力.Ad-shSKP2可使U251细胞bcl-2/bax比值的降低以及MMP-9和MMP-2蛋白的表达降低.
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微小RNA-370-3p对胶质瘤细胞U251增殖的影响及机制
目的 探讨miR-370-3p、β-连环蛋白(β-catenin)在人脑胶质瘤组织中的表达及其与胶质瘤细胞株U251恶性增殖的相关性.方法 (1)收集武汉大学人民医院神经外科自2014年9月至2015年3月手术切除的20例胶质瘤组织和同期行减压术切除的10例正常脑组织标本,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-370-3p表达,Western blot检测β-catenin蛋白表达,并对胶质瘤组织中两者表达进行相关性分析.(2)将体外培养的U251细胞分别转染miRNA无义序列和miR-370-3p模拟物,48h后RT-qPCR检测细胞中miR-370-3p、β-catenin mRNA表达,Western blot检测β-catenin蛋白表达.(3)双荧光素酶实验检测miR-370-3p对β-catenin编码基因CTNNB1基因的靶向调控作用.(4)细胞计数试剂盒(CCK-8)法和平板克隆形成实验综合评估转染后细胞的增殖能力.(5)共转染miR-370-3p模拟物与β-catenin pcDNA3质粒进行逆转实验进一步分析两者之间的功能联系.结果 (1)miR-370-3p在人脑胶质瘤中表达低于正常脑组织,且miR-370-3p在低级别胶质瘤(Ⅰ级和Ⅱ级)、高级别胶质瘤(Ⅲ级和Ⅳ级)胶质瘤中的表达量逐渐降低(对照组比低级别组比高级别组:3.67±1.65比4.94±1.08比2.37±1.11),与β-catenin蛋白表达呈负相关(R2=0.8868),差异有统计学意义.(2)与无义序列转染组比较,miR-370-3p模拟物转染组U251细胞中miR-370-3p表达显著增加(模拟物转染组比阴性对照组:174.33±23.08比1.03±0.30),β-catenin mRNA表达无明显改变,但β-catenin蛋白表达明显降低.双荧光素酶实验结果显示,转染miR-370-3p后野生型报告质粒的荧光素酶活性较对照组降低约40%,且差异有统计学意义(P=0.021).(3)上调miR-370-3p表达后,U251细胞增殖能力较对照组明显降低,克隆形成能力减弱(模拟物转染组比阴性对照组:30.00±7.00比63.33±4.04;P=0.004).(4)逆转实验结果发现,上调β-catenin的表达可以部分逆转miR-370-3p对U251细胞的生长抑制现象(miR-ctrl+CTNNB1组比miR-370-3p+vector组比miR-370-3p+CTNNB1组:78.33±6.03比31.33±4.51比63.00±5.57).结论 miR-370-3p可以通过转录后调控β-catenin,抑制胶质瘤细胞U251恶性生长.
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导航经颅磁刺激技术对手运动功能区的定位研究
目的 探讨导航经颅磁刺激在手运动功能皮质定位中的应用方法,以及该技术在神经外科手术规划中与神经重塑中的应用及可重复性.方法 对10名健康志愿者进行导航经颅磁刺激手运动功能区皮质定位,选取拇短展肌和第一背侧骨间肌为目标肌肉,使用预设靶点矩阵配合重复单刺激模式,以目标肌肉肌电图变化为阳性位点筛选标准.对手功能皮质定位结果提取特征点、线、面的数据,建立数据分析处理方法,完成手运动区描计和可重复性判断.结果 全组受试者均顺利完成功能定位,右手拇短展肌和第一背侧骨间肌所对应的皮质运动区面积为(830.60±225.27)mm2与(811.10±275.03)mm2,两条肌肉强激活点强度分别为(820.00±711.96)μV和(452.40±278.85)μV,平均运动阈值为(60.40±11.68)%输出强度,这些指标在两次实验中均显示出较好的稳定性.特征位点如中心、重心、运动热点、强激活点及相应线向量的对比中显示出较好的稳定性,但运动区阳性范围结果尚欠稳定.结论 导航经颅磁刺激技术能够完成手运动皮质功能区的描计,在个体水平上精确描计出手运动功能区,并在组水平上保持稳定的可重复性,有助于无创精准描计手运动功能区,以期指导手术规划、病变切除和神经重塑.
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胶质瘤患者预后与微小RNA-195表达的关系
目的 探讨微小RNA-195(miRNA,miR-195)表达水平与胶质瘤患者病理分级及预后的相关性.方法 收集手术切除的34例胶质瘤患者的福马林固定石蜡包埋组织标本,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测其中miR-195的表达水平,随访患者,并记录放化疗情况和生存期.结果 miR-195表达水平与胶质瘤病理分级呈负相关;miR-195高表达的患者中位生存期为56.53个月,较低表达患者的15.00个月延长41.53个月.miR-195高表达患者的死亡风险是低表达患者的0.363倍.结论 miR-195的表达水平与胶质瘤的病理学分级及患者预后密切相关.
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右美托咪定通过c-jun氨基末端激酶和p38通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤
目的 观察右美托咪定(Dex)在脑缺血再灌注损伤中对p38和c-jun氨基末端激酶(JNK)的表达和下游凋亡信号半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达的影响,探讨其脑保护效应的机制.方法 健康雄性SD大鼠54只,体重240~280g,采用随机数字表法分为3组(n=18):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)和Dex组.I/R组和Dex组采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,缺血90min后再灌注24h;Dex组缺血同时经尾静脉泵注3μg/kg Dex于5min内泵完,6μg/(kg·h)持续泵注2 h.S组和I/R组泵注等量生理盐水.于再灌注24h时行神经功能缺陷评分,取脑组织,氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定脑梗死体积,计算脑梗死体积百分比;干湿法测定脑含水量;采用免疫荧光法检测脑组织中磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化p38(p-p38)、活化Caspase-3(cleaved Caspase-3),采用Western blot检测JNK、p38、p-JNK和p-p38表达水平.结果 神经功能缺陷评分[(2.16±0.63)、(2.86±0.45)分,F=136.500,P=0.000]、脑含水量[(79.16±1.50)%、(85.23±1.19)%,F=162.777,P=0.000]和脑梗死体积百分比[(20.09±1.62)%、(28.53±1.68)%,F=707.707,P=0.000] Dex组均小于I/R.与I/R组比较,Dex组p-p38(18.67±2.73、32.33±3.01,F=210.481,P=0.000)、p-JNK(17.83±2.48、35.33±3.20,F=257.534,P=0.000)和cleaved Caspase-3表达阳性细胞数(33.00±3.58、51.50±3.62,F=346.888,P=0.000)均较少.与I/R组比较,Dex组p-p38(2.08±0.19比1.38±0.11,F=190.834,P=0.000)和p-JNK(35.33±3.20比17.83±2.48,F=514.456,P=0.000)均表达减少.结论 Dex定减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,其机制与抑制JNK 和p38的磷酸化,从而减少Caspase-3 的激活有关.
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Cytokine Array蛋白点表达丰度分析软件的优选研究
目的 比较3款常用图像分析软件对细胞因子矩阵(Cytokine Array)相同任意蛋白点表达的差异,优选出适图像分析软件.方法 从本实验室获得的一对Cytokine Array图像,任选图上4个蛋白点,以3款图像分析软件(Gel-Pro analyzer/Labwork、Quantity One和Image J)反复分析其蛋白丰度,比较其复杂性和可重复性,并针对入选蛋白,行酶联免疫吸附试验(ELISA)对比验证其吻合程度.结果 3款分析软件分析过程的复杂程度由简到繁依次为Gel-Pro analyzer/Labwork、Quantity One和Image J;可重复性从大到小(即变异系数从小到大)依次为Gel-Pro analyzer/Labwork(0.00%)、Quantity One(5.07%)和Image J(9.75%);若以ELISA(81.49%)结果为标准参考值,则吻合度从高到低依次为Quantity One(71.61%)、Image J(67.27%)、Gel-Pro analyzer/Labwork(62.31%).结论 各种软件均具备独自特点,如果仅作定性分析,推荐Gel-Pro analyzer/Labwork;如果作半定量分析,推荐Quantity One.若综合可重复性、分析过程的复杂程度、与ELISA结果的吻合程度,则推荐Quantity One.
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利用干细胞靶向胶质母细胞瘤治疗的研究展望
胶质母细胞瘤(GBM)是中枢神经系统常见的恶性肿瘤,尽管经过积极外科手术结合术后同步放化疗,其中位生存时间仅为14.6个月.肿瘤细胞向周围脑组织浸润生长、放化疗抵抗,从而导致肿瘤不可避免复发.随着干细胞及生物工程学技术的不断进展,利用干细胞对GBM天然的定向趋化特性,并使其携带相关治疗药物,从而达到治疗目的,是目前胶质瘤治疗研究的重要思路.该策略目前尚存在一些有待验证和深入研究的细节,需要系统性分析其优势与不足,为其临床转化和应用提供依据.
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人工智能:中国实验外科的机遇与挑战
人工智能是一门通过计算机模拟人脑智能行为的总称.当前人工智能在医学领域的研究和创新已取得显著进展并已带来巨大的社会变革,现代医学需要人工智能.成立人工智能实验室和网络临床数据库己成为我国实验外科当务之急.我们要开展人工智能在外科学领域的各项研究,包括机器学习、人工神经网络、大数据、脑科学、手术机器人,并进行人工智能伦理学问题的探讨.我们必须要继承和发扬外科优良传统.不久的将来,超级计算机将成为人类好的朋友,将帮助外科医生做出医疗决策和在外科医生指导下进行手术.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
