中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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特异性小片段干扰RNA降低人源性长寿保障基因2/肿瘤转移抑制基因-1表达对人前列腺癌细胞株侵袭转移能力的影响
目的 观察人源性长寿保障基因2(LASS2)/肿瘤转移抑制基因-1(TMSG-1)对人前列腺癌细胞株侵袭转移能力的影响.方法 首先采用小片段RNA干扰技术沉默人前列腺癌细胞株PC-3M-2B4(低转移潜能)中LASS2/TMSG-1的表达,并通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术、免疫细胞化学法筛选干扰效率高的小干扰RNA (siRNA)后,选取干扰效率高的siRNA-2进行后续实验,通过体外侵袭实验、细胞划痕实验及黏附实验检测干扰LASS2/TMSG-1基因前后,PC-3M-2B4细胞侵袭转移能力的改变.结果 筛选出4条siRNA,以空白对照为1,siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3及siRNA-4的LASS2/TMSG-1 mRNA表达量分别为1.557、0.155、0.369及0.193;siRNA-2转染组穿膜细胞数为(21.20±1.21)个,细胞的侵袭能力明显高于无关阴性对照组[(l0.07±1.39)个]和空白对照组[(11.00±1.97)个,P＜0.01];siRNA-2转染组细胞划痕修复率[(64.90±0.56)％]明显高于无关阴性对照组[(26.46±0.31)％]和空白对照组[(22.18±0.57)％],差异有统计学意义(P＜0.01);细胞黏附30、60 min后,与无关阴性对照组[(29.83±0.15)％、(49.90±0.35)％]、空白对照组[(30.37±1.27)％、(50.20±0.06)％]比较,siRNA-2转染组细胞黏附率[(10.10±0.27)％、(30.37±0.30)％]明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 通过RNA干扰技术证实了LASS2/TMSG-1在肿瘤侵袭转移中的作用,证明它是一种肿瘤转移抑制基因.
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降钙素基因相关肽对脑死亡大鼠肺组织水通道蛋白1及肺水含量的影响
目的 观察降钙素基因相关肽(CGRP)对脑死亡大鼠肺组织水通道蛋白1(AQP-1)及肺水含量的影响.方法 大鼠15只随机分为对照组(A组)、脑死亡组(B组)及CGRP处理组(C组),每组5只.A组持续麻醉维持12h,B组呼吸、循环支持下维持脑死亡状态12h.C组于脑死亡模型建立后静脉输注CGRP 3 μg/kg,随后给予CGRP 0.5μg/(kg·h)持续输注维持12h,维持脑死亡状态12 h.于脑死亡后12h取肺脏组织,测肺系数及肺水含量,苏木素-伊红(HE)染色观察肺脏组织结构变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织AQP-1 mRNA水平,Western blot法检测肺组织AQP-1蛋白表达.结果 肺系数及肺水含量B组(7.16 ±0.58、0.91 ±0.07)均较A组(4.12±0.39、0.70±0.08)增高,C组(5.28±0.43、0.80 ±0.05)较A组增高,但较B组低,3组间差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色A组肺组织结构基本正常;B组出现损伤性改变,C组损伤性改变较B组减轻.肺组织AQP-1 mRNA及蛋白表达水平B组(0.51 ±0.05、0.32±0.05)较A组(0.76±0.03、0.49±0.04)降低,C组(0.98±0.04、0.53 ±0.02)较A、B组增高,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 应用CGRP可提高脑死亡大鼠肺组织AQP-1表达水平,降低肺水含量,减轻肺水肿.
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骨髓间充质干细胞诱导肝细胞耐受肝功能衰竭血清细胞毒性的研究
目的 探讨与骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养的肝细胞可耐受慢加急性肝功能衰竭患者血清的细胞毒性,以及共培养细胞对肝功能衰竭血清的肝功能支持作用.方法 收集慢性乙型肝炎慢加急性肝功能衰竭患者血清(n=18)及正常志愿者血清(n=18).建立猪肝细胞与BMSCs适共培养体系.实验分为4组:肝功能衰竭血清单纯肝细胞培养组(Hep-F)、肝功能衰竭血清共培养组(Co-F)、正常人血清单纯肝细胞培养组(Hep-N)和正常人血清共培养组(Co-N).血清浓度依次为10％、20％、40％、60％、80％和100％.培养24 h后收集上清液检测白蛋白水平和肝细胞周期确定合适的肝功能衰竭血清浓度.观察细胞生长状态、超微结构及细胞活力.分别检测60％浓度血清培养组超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷氨酰胺(GLN)和胆碱酯酶(CHE)水平.更换为含10％胎牛血清的完全培养基继续培养24 h,收集Hep-FB、Co-FB、Hep-NB和Co-NB组上清液,重复检测SOD、LDH、GLN和CHE水平.结果 共培养组肝细胞在60％浓度的肝功能衰竭血清中贴壁数量多,呈岛状聚集生长.肝细胞表达白蛋白水平佳,G2～S期细胞比例升至32.08％,细胞内超微结构接近正常,细胞活力较对照组明显改善.Co-F组SOD、GLN和LDH水平与Co-N组之间差异无统计学意义(P＞0.05),仅CHE水平有所下降,但与Hep-F组比较显著提高.Co-FB组LDH、GLN、CHE活性较Hep-F组有显著改善.结论 与BMSCs共培养的肝细胞可耐受中高浓度慢加急性肝功能衰竭血清的细胞毒性,有效维持肝细胞功能.
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体外培养包埋透明质酸/壳聚糖/质粒DNA纳米粒的壳聚糖支架负载软骨细胞
目的 观察包埋透明质酸(HA)/壳聚糖(CS)/质粒DNA (pDNA)纳米粒的壳聚糖支架对软骨细胞生物学性状的影响及基因转染能力,探讨其作为基因活化软骨组织工程支架的可行性.方法 构建包埋HA/CS/pDNA纳米粒的壳聚糖支架,负载兔关节软骨细胞体外培养,1～2周后通过扫描电镜、组织学、免疫组织化学、倒置相差显微镜及激光共聚焦显微镜检测支架对软骨细胞表型及功能的影响,以及基因转染的能力.结果 支架孔径为100～300 μm,孔孔隙率为(86.0±1.2)％;软骨细胞在包埋HA/CS/pDNA纳米粒的支架中贴附良好,维持表型稳定,1～2周时实验组分泌蛋白多糖及Ⅱ型胶原等软骨细胞外基质较对照组明显增多,1周时测得支架中的HA/CS/pDNA纳米粒介导基因转染软骨细胞并表达绿色荧光蛋白.结论 包埋HA/CS/pDNA纳米粒的壳聚糖支架细胞相容性良好,能转染培养的软骨细胞表达绿色荧光蛋白.
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微小RNA-374a抑制乳腺癌细胞增殖和迁移能力
目的 观察微小RNA(miRNA)-374a对乳腺癌细胞增殖、迁移能力的作用,以及对下游基因单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的调控作用.方法 利用质粒构建miRNA-374a过表达和空白对照细胞株;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测374a-PLL3.7-MDA和EV-PLL3.7-MDA中miRNA-374a的表达,并分析其与乳腺癌细胞增殖、转移、迁移的相关性.结果 细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖实验和单克隆形成实验结果显示,374a-PLL3.7-MDA组细胞增殖能力明显低于对照组细胞EV-PLL3.7-MDA.Transwell小室实验结果显示,374a-PLL3.7-MDA细胞小室膜下表面的细胞数明显少于对照组细胞.374a-PLL3.7-MDA组细胞中MCP-1的表达明显降低.结论 miRNA-374b可能通过MCP-1抑制乳腺癌细胞增殖、迁移能力.
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咽喷嘴与喷洒:胃食管反流对气道的侵袭
目的 在观察食管反流形成咽喷嘴基础上,探讨胃食管反流对气道的侵袭.方法 10只SD大鼠分A、B两组,5只兔为C组.动物麻醉后经胃向食管插入9F导管,A组切开甲状及环状软骨,经导管注射5％葡萄糖氯化钠;B和C组分别注射泛影葡胺及硫酸钡,透视观察咽部征象.结果 A组大鼠,随注射压力上升,咽部出现喷洒;B和C组动物,当压力分别达(150.0±9.8)、(187.8±8.3) mmHg(1 mmHg =0.133 kPa),观察到咽喷嘴;随后造影剂进入喉及气管,动物剧烈呛咳.结论 通过构建胃食管高位反流模型证实咽喷嘴和喷洒是胃食管反流对气道侵袭的基础,为探讨胃食管反流致呼吸道疾病的发病机制提供了新思路.
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转染微小RNA-126对肺腺癌A549细胞增殖的影响
目的 观察体外转染微小RNA-126(miR-126)对人肺腺癌A549细胞增殖的影响.方法 人肺腺癌A549细胞株进行体外培养,分为3组:A组用单纯脂质体处理,B组用miR-126对照系列处理,C组用miR-126处理.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-126表达,Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测A549细胞增殖.结果 转染人工合成的miR-126后的C组miR-126表达上调至(0.786±0.132),与A组(0.453±0.085)、B组(0.432±0.092)比较差异有统计学意义(P＜0.01);C组细胞的VEGF表达下调至(0.312±0.075),与A组(0.633±0.172)、B组(0.597±0.095)比较差异有统计学意义(P＜0.01);C组的细胞增殖被明显抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 转染miR-126能够明显增加A549细胞内miR-126的表达,并下调VEGF蛋白表达,抑制肺腺癌A549细胞生长.
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半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3抑制剂对体外循环时兔心肌的保护作用
目的 观察半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3抑制剂对体外循环时心肌的保护作用.方法 清洁健康新西兰大白兔(体质量为2.0 ～2.5 kg,雌雄不拘)30只,随机分为对照组和Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO组(术前0.5h经股静脉给予Ac-DEVD-CHO 5 ml/kg,术中停止体外循环后再经股静脉给予5 ml/kg).分别在术前、体外循环转流中和转流后检测各组肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白(cTnⅠ)、Caspase-3活性和髓过氧化物酶(MPO)活性变化.结果 Caspase-3抑制剂组与对照组比较,血cTnⅠ水平(g/L) (0.03 ±0.02、0.03±0.06、0.08 ±0.04、0.09±0.02比0.03±0.01、0.06±0.03、0.12 ±0.05、0.17±0.07)和CK-MB浓度(U/L)均明显降低(111.39±0.03、134.26 ±3.45、342.49±5.35、501.25±8.31比100.41 ±0.02、435.21±6.38、987.32±25.17、1 264.53±22.08),Caspase-3活性(z/pmol/h/mg)受到明显抑制(0.03±0.01、0.09±0.02、0.18 ±0.03、0.39±0.02比0.02 ±0.01、0.16±0.05、0.72 ±0.04、0.87 ±0.06),MPO活性显著降低(μg/L) (0.33 ±0.02、0.53 ±0.03、0.67±0.03、0.88 ±0.05比0.33±0.01、0.96 ±0.04、1.12±0.03、2.17 ±0.02),差异有统计学意义(F=36.10 ～574.13,P＜0.05).结论 Caspase-3抑制剂对体外循环时心功能损伤起到一定的保护作用.
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种植骨髓间充质干细胞的丝素蛋白多孔支架治疗脊髓损伤
目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)种植于丝素蛋白多孔支架(PSFSs)后对大鼠脊髓损伤(SCI)的治疗作用.方法 将96只SD大鼠随机分成对照组、PSFSs组、BMSCs组及PSFSs±BMSCs移植组,每组24只.移植后l、2、4周采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分法评估大鼠神经功能恢复情况,采用免疫组织化学染色、Western blot分析检测损伤部位生长相关蛋白43(GAP-43)、髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达水平,免疫荧光染色检测GAP-43的表达强度.结果 术后4周BBB评分实验组较对照组显著提高,各组间差异有统计学意义(分别为5.23±1.13、7.17 ±1.11、7.35±1.59、9.43 ±2.16,P＜0.05).D组GAP43免疫组织化学染色积分吸光度(IA)值高于其他组(分别为13.94±3.63、26.07±5.31、22.14±4.56、33.03±7.58),MBP免疫组织化学染色IA值高于其他组,分别为13.80±3.41、21.16±3.36、32.96±7.74、44.06 ±7.99,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光染色示D组损伤区内具有更多表达GAP-43的生长锥.Western blot分析表明各组GAP43的灰度值比值分别为0.16±0.04、0.41 ±0.05、0.33 ±0.06、0.72 ±0.16,MBP的灰度值比值分别为0.96 ±0.11、1.85±0.08、2.14 ±0.16、2.43 ±0.31,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 种植BMSCs的PSFSs能够促进SCI大鼠轴突再生、髓鞘化及后肢运动功能的恢复,其疗效优于单一方法.
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血管内皮细胞生长因子基因转染兔骨髓间充质干细胞结合聚乳酸/羟基磷灰石支架治疗兔股骨头坏死的研究
目的 探讨pcDNA3.1-血管内皮生长因子(VEGF)165重组质粒转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),复合聚乳酸/羟基磷灰石(PLA/HA)支架植入股骨头坏死兔体内,观察其治疗效果.方法 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测pcDNA3.1-VEGF165重组质粒转染兔BMSCs后血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达.实验分为4组:(1)重组质粒转染BMSCs复合支架组;(2)空白载体转染BMSCs复合支架组;(3)单纯支架植入组;(4)未处理组.分别于术后8、12周对股骨头行显微CT及苏木素-伊红(HE)染色检查,第12周行X线摄影.结果 pcDNA3.1-VEGF165重组质粒转染兔BMSCs后VEGF表达水平明显高于其他组,X线及显微CT可见坏死骨小梁周围部分新骨及小血管形成,其他组可见部分股骨头变形,软骨下骨变薄,骨小梁稀疏、断裂,骨密度不均匀.结论 pcDNA3.1-VEGF165重组质粒转染兔BMSCs复合PLA/HA多孔支架能够诱导兔股骨头内新生血管和骨的形成.
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阿仑膦酸钠/磷酸钙骨水泥和同种异体骨修复兔股骨骨缺损的比较
目的 观察载阿仑膦酸钠(ALN)的磷酸钙骨水泥(CPC)、磷酸钙骨水泥、同种异体骨修复兔股骨骨缺损的效果.方法 取健康成年新西兰大白兔36只,制备直径4 mm,深10 mm的双侧股骨髁部缺损动物模型,随机分为3组(n=12),于缺损处植入载ALN的CPC(A组)、CPC(B组)、同种异体骨(C组).术后3、6个月取标本行生物力学测试和Van-Gieson染色行组织学观察.结果 生物力学测试结果:缺损部位3个月A组为(39.54±4.40) mPa,B组为(31.66±6.12) mPa,C组为(18.83 ±3.35) mPa;6个月A组为(45.01±3.87) mPa,B组为(33.47±5.46) mPa,C组为(23.07±3.51) mPa,差异有统计学意义(P＜0.05);股骨中段3个月A组(25.18 ±5.54) mPa,B组为(16.05 ±3.61) mPa,C组为(15.35 ±4.27) mPa;6个月A组为(31.38 ±4.96) mPa,B组为(16.84±3.87) mPa,C组为(16.61 ±4.07) mPa,3、6个月股骨中段部位压缩强度A组与B、C组比较差异有统计学意义(P＜0.05),B、C组间差异无统计学意义(P＞0.05).组织学观察显示,3个月,A、B、C3组材料周围有不同程度的新生骨生成,A、B组材料有不同程度降解,新生骨与材料结合,C组新生骨与材料界限明显,6个月,3组新生骨量增加,A、B组材料降解明显,新生骨沿降解孔隙向内部生长,A组优于B组,C组材料无明显变化.组织学定量分析:3个月骨组织含量A组为(27.66±4.28)％,B组为(15.23±4.61)％,C组为(6.34±5.82)％;6个月A组为(36.35±5.71)％,B组为(19.37±5.60)％,C组为(10.67±4.49)％,3、6个月新生骨组织含量百分比A组＞B组＞C组(P＜0.05),各组内新生骨量6个月优于3个月.结论 载ALN的CPC加快修复兔股骨骨缺损,并增强股骨强度.
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肝素对大鼠下切牙颈环区组织骨保护素水平及细胞凋亡的影响
目的 观察肝素对SD大鼠下切牙颈环区组织骨保护素(OPG)水平及其细胞凋亡的影响.方法 24只4周龄SD大鼠随机分2组,实验组腹部皮下每天注射肝素1 U/g,对照组注射等体积生理盐水.4周后测量股骨骨密度值;下颌骨用微波-乙二胺四乙酸(EDTA)法脱钙切片,行苏木素-伊红(HE)染色、OPG免疫组织化学染色及原位末端转移酶标记(TUNEL)染色,并用Image软件半定量分析OPG含量;透射电镜观察下切牙颈环区细胞超微结构.结果 实验组骨密度值为(0.185±0.006) g/cm2,低于对照组的(0.196 ±0.011) g/cm2 (P ＜0.05).实验组和对照组下切牙OPG吸光度值分别为0.235 3±0.0350和0.2673 ±0.0444 (P ＞0.05).TUNEL染色显示实验组颈环区组织未见细胞凋亡,对照组可见个别成牙本质细胞及中间层细胞呈阳性染色.透射电镜见实验组颈环区组织无细胞凋亡发生,对照组有细胞呈现凋亡特征.结论 肝素在诱导SD大鼠骨质疏松的同时,可抑制下切牙颈环区组织细胞凋亡的发生,但OPG水平未见明显改变.
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胰岛素样生长因子-1和转化生长因子-β3对人肌腱细胞表型分化标志物mRNA表达的影响
目的 观察在无血清条件下,不同浓度的胰岛素样生长因子(IGF)-1和转化生长因子(TGF)-β3在人肌腱细胞体外培养中对人肌腱细胞的表型及其标志物基因表达的影响.方法 在不添加胎牛血清(FBS)的α-MEM培养基中,加入IGF-1 (50μg/L)、TGF-β3(10 μg/L)以及IGF-1(50 μg/L)+ TGF-β3(10μg/L),同时使用10％的FBS作为阳性对照组,用天狼猩红染色细胞观察细胞第14天的表型变化,同时在细胞培养第14天提取各组细胞mRNA,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)测定人肌腱细胞表型及分化标志物Scleraxis、Tenomodulin、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)以及核心蛋白聚糖(Decorin)的基因表达.结果 在没有添加FBS的条件下,各实验组及对照组细胞形态均未出现表型变异,与阳性对照组的细胞比较,IGF-1(50 μg/L)+TGF-β3(10 μg/L)组的细胞形态呈现出较强分化状态,有较多的胶原产生,同时胶原纤维的排列浓密有序并呈现出平型排列的胶原纤维形态,与阳性对照组极为类似.与阳性对照组比较,IGF-1(50tμg/L)+TGF-β3(l0 μg/L)组的肌腱细胞表型标志物的基因表达比值明显上调(Scleraxis为132.5,=3.35,P＜0.01;Tenomodulin为536.3,t=115.89,P＜0.01;Collagen Ⅰ为5.22,t =5.94,P＜0.01及Decorin为1.40,t=5.67,P＜0.05),差异有统计学意义.结论 在不使用FBS的α-MEM培养基中添加IGF-1(50 μg/L)+TGF-β3(10μg/L)可维持人肌腱细胞表型,胶原纤维产生类似于添加10％ FBS培养的肌腱细胞,同时上调肌腱细胞的表型及分化标志物的mRNA表达.
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虾青素对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用
目的 观察虾青素在大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤(EBI)中的保护作用.方法 成年雄性SD大鼠72只,随机分为假手术组(sham)、SAH加安慰剂组(vehicle)和虾青素处理组(ATX).通过建立大鼠视交叉SAH模型,于手术后24 h分别检测大鼠脑组织含水量、伊文氏蓝含量的改变,并应用Western blot技术、原位末端转移酶标记(TUNEL)以及分光光度比色法分别检测脑组织中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白水平的表达、神经细胞凋亡和脑组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)及超氧化物歧化酶(SOD)的变化.结果 SAH后24 h大鼠脑组织含水量[(80.76±0.67)％]、血脑屏障通透性[(2.17 ±0.53)μg/g]显著升高;颞叶底部皮层Caspase-3蛋白水平表达(0.49 ±0.13)和TUNEL凋亡阳性细胞[(41.54±9.38)％]也明显增多;应用虾青素干预以后,大鼠脑组织含水量[(79.91±0.42)％]、血脑屏障通透性[(1.35 ±0.46) μg/g]、Caspase-3蛋白水平表达(0.34±0.06)和TUNEL凋亡阳性细胞[(27.86±5.17)％]均显著减少,同时,虾青素能够减轻SAH后的氧化应激损伤[MDA:(2.52±0.60)、(4.44±1.32)、(2.64±0.78) nmol/mg;GSH:(6.50±1.80)、(3.72±1.12)、(6.23±0.87)μmol/g;SOD:(25.71 ±4.00)、(14.71 ±2.35)、(21.61±3.87) U/mg].结论 虾青素能够减轻SAH后EBI,并可能与其强抗氧化性有关.
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以超声微泡为载体的胞嘧啶脱氨酶:尿嘧啶磷酸核糖转移酶融合自杀基因在食管癌细胞株EC9706中的表达
目的 观察超声微泡(UM)介导的胞嘧啶脱氨酶:尿嘧啶磷酸核糖转移酶/5-氟胞嘧啶(CD:UPRT/5-FC)自杀基因系统对人食管癌细胞株EC9706的转染效率和对细胞活力的影响.方法 将EC9706细胞按1×108/L接种于12孔孔板中,随机分为4组:A组:空白对照组;B组:单纯质粒组;C组:单纯超声微泡组;D组:超声微泡+质粒组.24 h后在荧光显微镜下观察各组细胞绿色荧光蛋白的表达,流式细胞术(FCM)检测各组的转染效率,Western blot法检测各组细胞CD基因的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测5-氟胞嘧啶(5-FC)对转染后细胞的杀伤作用.结果 (1)D组细胞中的绿色荧光强度明显高于其他各组,FCM检测各组转染成功率分别为0％、1.42％、0％、32.60％,超声微泡介导的转染对EC9706细胞活性无明显影响(P＞0.05);(2)Western blot结果显示D组细胞CD基因蛋白条带灰度值明显高于其他各组(P＜0.05);(3)5-FC对转染后的肿瘤细胞有明显的杀伤作用,细胞存活率明显下降.结论 采用超声微泡携带CD:UPRT融合自杀基因可显著提高在食管癌细胞中的转染效率,增强5-FC对肿瘤细胞的杀伤作用.
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二甲双胍对骨肉瘤MG63细胞增殖及蛋白激酶B、叉头框转录因子O亚族1表达的影响
目的 观察二甲双胍对骨肉瘤细胞增殖及蛋白激酶B(Akt)信号通路中Akt、叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)蛋白磷酸化的影响,探讨二甲双胍抑制骨肉瘤细胞增殖的作用机制.方法 以骨肉瘤MG63细胞株为研究对象,采用含有10％胎牛血清的RPMI 1640培养液在体外培养至细胞融合达70％时,更换终质量浓度为50 mmol/L的不含血清的培养液继续培养,在加入实验剂量的二甲双胍后12、24、36、48、72 h分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞的增殖,收获24 h的细胞,提取总蛋白后采用Western blot检测Akt、磷酸化Akt (p-Akt)、FoxO1、磷酸化FoxO1(p-FoxOl)的表达.结果 二甲双胍可显著抑制MG63细胞增殖,呈明显的时间依赖性,用药48 h后,MG63细胞内Akt、FoxO1的磷酸化水平明显下降.二甲双胍组的p-Akt和对照组的p-Akt水平分别为0.62 ±0.04和1.33±0.16(P＜0.05),二甲双胍组的p-FoxO1和对照组的p-FoxO1水平分别为0.82 ±0.02和1.71±0.05(P ＜0.05).结论 二甲双胍可通过Akt/FoxOl信号通路的去磷酸化而抑制MG63细胞的增殖.
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大鼠线粒体融合蛋白基因重组腺病毒载体的构建及鉴定
目的 构建并鉴定携带大鼠线粒体融合蛋白(rMfn2)基因的重组腺病毒AdS-mCMV-增强绿色荧光蛋白(EGFP)-CMV-rMfn2表达载体.方法 设计含有Not Ⅰ和HindⅢ酶切位点的引物,应用聚合酶链反应(PCR)法扩增目的基因rMfn2,将扩增产物连接到穿梭质粒上,构建重组穿梭质粒pDC316-mCMV-EGFP-CMV-rMfn2.测序鉴定重组穿梭质粒后,与腺病毒骨架质粒pAd5在JM109感受态细胞中同源重组,获得重组腺病毒AD-rMfn2,而后感染HEK293细胞进行包装、扩增、纯化,并测定病毒滴度;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测目的基因rMfn2在HEK293细胞中的转录及表达.结果 腺病毒穿梭质粒经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确,目的基因rMfn2正确克隆至腺病毒骨架质粒中;在HEK293细胞中包装、扩增获得了高滴度的重组腺病毒AD-rMfn2,其滴度为4×1013 TU/L;AD-rMfn2感染HEK293细胞48 h后,可检测到目的基因rMfn2的转录和蛋白表达.结论 成功构建重组腺病毒AD-rMfn2.
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阿托伐他汀联合依折麦布对冠状动脉粥样硬化性心脏病患者颈动脉粥样硬化斑块的影响
目的 观察联合应用阿托伐他汀与依折麦布对冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)合并高胆固醇血症患者颈动脉粥样硬化斑块的影响.方法 92例合并颈动脉粥样硬化的冠心病患者,分为对照组(单用阿托伐他汀)及联合组(阿托伐他汀及依折麦布),疗程12个月.测定治疗前后颈动脉硬化的相关指标,血脂、高敏C反应蛋白(hs-CRP)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平.结果 联合组治疗12个月后颈动脉斑块面积明显减小[(19.12±2.56) mm2比(25.76±1.01) mm2,P＜0.05].两组治疗后比较,颈动脉斑块面积[(19.12±2.56) mm2比(23.43±2.75)mm2,P＜0.05]、不斑块稳定率(79.67％比85.84％,P＜0.05)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)[(2.34±0.56) mm2比(2.75 ±0.58) mmol/L,P ＜0.01]、hs-CRP[(3.18 ±1.24) mg/L比(4.07±1.65) mg/L,P＜0.0l]及MMP-9水平[(129.25±40.71)μg/L比(218.92±60.34)μg/L,P＜0.01]差异有统计学意义.结论 联合应用阿托伐他汀与依折麦布,能使LDL-C、hsCRP、MMP-9水平进一步降低,对高胆固醇血症合并冠心病患者颈动脉硬化进展有一定影响.
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下颈椎前路椎弓根螺钉配套钢板系统的生物力学性能研究
目的 探讨下颈椎前路椎弓根螺钉配套钢板系统在颈椎病患者的生物力学性能.方法 采集新鲜颈椎标本16具,分解为C3/4、C4/5、C5/6、C6/7共32个运动节段(FSU),其中C3/4、C4/5、C5/6、C6/7各8个.将其按照不同节段随机分成A、B两组,将所获标本椎间盘切除后模拟植骨、分别植入我们自行设计生产的下颈椎前路椎弓根螺钉配套钢板系统和普通颈椎前路椎体螺钉钢板系统,比较两组固定系统的生物力学性能:(1)两组下颈椎三维生理运动范围(ROM);(2)两组稳定性指数;(3)两组螺钉的抗拔出力.结果 A、B两组各有16个FSU(其中C3/4、C4/5、C5/6、C6/7节段各4个),A组植入下颈椎前路椎弓根螺钉配套钢板系统16套,B组植入普通颈椎前路椎体螺钉钢板系统16套.经生物力学测试发现:(1)A组固定的颈椎节段前屈/后伸平均运动值为(12.78±1.32)°,左右侧弯(9.25±0.94)°,左右旋转(22.82 ±2.42)°;而B组分别为(16.24±1.64)、(12.08±1.32)、(28.44± 2.78)°.A组优于B组,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)A组稳定性指数(Sf)在屈伸、侧屈、旋转时分别为111％、110％、112％,而B组分别为87％、84％和88％,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).(3)抗拔出力测试结果显示,A组大抗拔出力为(604.68±48.76)N,而B组为(488.24±32.42)N,A组优于B组,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 下颈椎前路椎弓根螺钉配套钢板系统在生物力学性能方面优于普通颈椎前路椎体螺钉钢板系统,适用于需要颈椎前路坚强固定的患者.
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凝血酶在脑出血后脑损伤过程中促进细胞自噬性死亡的研究
目的 探讨凝血酶在脑出血后脑损伤过程中与细胞自噬性死亡的关系.方法 制作大鼠脑出血模型,干预组同时注射凝血酶抑制剂水蛭素.制作大鼠凝血酶脑损伤模型,对照组注射同体积生理盐水,应用免疫组织化学染色和Western blot检测自噬相关指标,电镜直接观察自噬细胞.结果 Western blot检测提示,脑出血大鼠注射水蛭素后的微管相关蛋白l轻链3(LC3)Ⅱ/LC3 Ⅰ为1.030±0.170,组织蛋白酶D(Cathepsin D)为(6.63±1.22)像素,低于单纯脑出血大鼠LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ的1.410±0.080和Cathepsin D的9.12±0.72;大鼠注射凝血酶后的LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ为0.730±0.070,Cathepsin D为10.34±2.22,高于对照组大鼠LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ的0.402±0.104和Cathepsin D的4.94±1.11;电镜下可在凝血酶处理大鼠脑内检测到大量自噬细胞.结论 凝血酶可以促进大鼠脑出血后细胞自噬性死亡的激活.
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慢病毒载体介导短发夹RNA沉默Ppif基因对大鼠肾细胞的影响
目的 构建干扰Ppif基因的重组U6慢病毒质粒,观察内源性小干扰RNA(siRNA)的效果.方法 根据siRNA设计原则,设计合成短发卡RNA(shRNA),用于体内转录合成干扰Ppif编码序列的发夹RNA.连接、筛选、酶切,鉴定Pgcl-GFP/U6 Ppif shRNA;以含无关序列发夹结构的质粒载体为对照,感染大鼠肾细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测mRNA和蛋白表达水平与对照组的差异.结果 测序证实重组质粒构建成功,体外试验表明,Ppif基因的mRNA和蛋白表达均一致降低[(0.582 ±0.014)％],与阴性对照组[(0.946±0.018)％]和空白对照组[(0.893±0.021)％]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 慢病毒介导的Ppif-shRNA成功在体外敲减了大鼠肾细胞的目的蛋白表达,影响了肾缺血再灌注的发生与发展.
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生物活性玻璃与壳聚糖复合骨修复材料的制备及细胞相容性的研究
目的 设计一种生物活性玻璃(BG)/壳聚糖(CS)复合材料的骨组织工程支架,检测其理化性能和细胞相容性.方法 2.0％ CS盐酸溶液与β-甘油磷酸钠在冰浴条件下以7∶1比例混合搅拌均匀.电子天平分别称取BG分别加入上述CS溶液中,分别制成理论质量比为2.0∶1.0、1.0∶1.0、1.0∶1.5的CS/BG混合液.冷冻干燥成型,20 kGy60Go辐射灭菌后得到样品.通过扫描电镜、X线衍射和傅立叶红外光谱分析、DSC热分析其微观形貌和组成;计算支架孔孔隙率;采用陶瓷试验系统进行支架的机械性能检测并评价BG的加入对支架的影响.将第3代兔骨髓间充质干细胞接种于支架上,使用扫描电镜检测支架对其黏附作用,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞在支架上增殖,并评价支架的细胞相容性.结果 合成的CS/BG支架与模具拥有同样的大小及几何形状,具有相互贯通的多孔结构,未见BG聚集,孔隙率高可达89％,孔径大小合适(100 ～ 300μm),大断裂强度为(4.90±0.63) mPa.X射线衍射图可以看到特征性的BG衍射峰;傅立叶变换红外光谱可见特征的BG吸收峰,这表明材料内有明确的BG;第3代兔骨髓间充质干细胞在支架上共培养ld后,细胞在支架表面黏附,部分细胞伸展,并伸出伪足.共培养7d后,可见细胞生长良好,沿材料铺展生长,细胞呈多角形,细胞伸出多个细长的伪足与材料相连.采用MTT法测量骨髓间充质干细胞在支架上的增殖,结果表明骨髓间充质干细胞在CS/BG支架上表现出了明显的增殖.结论 采用溶液共混、冷冻干燥法可以制备出CS/BG支架;支架具有良好的孔隙率、较好的机械强度、良好的组织相容性,可用于骨组织工程.
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前列腺素E2对成骨细胞微丝强度的调控作用
目的 观察前列腺素E2(PGE2)在受到流体剪应力(FSS)加载后的MC3T3-E1成骨细胞株中对微丝强度的调控作用,并且探讨相关机制.方法 使用荧光标记法对经过FSS加载以及空白试剂、16,16-二甲基前列腺素E2(dmPGE2)、dmPGE2+蛋白激酶A肽抑制剂(PKI)、8溴-环单磷酸腺苷(8Br-cAMP)、8Br-cAMP+ PKI处理后的MC3T3-E1细胞中微丝进行染色处理;并通过图像处理软件(Volocity)对细胞中连续微丝的比例进行量化,检测dmPGE2对细胞中微丝强度的调控作用以及蛋白激酶A(PKA)信号通路的参与作用.结果 相对于空白对照组,dmPGE2显著降低了FSS加载后MC3T3-E1细胞中的微丝的强度.PKA信号通路的激活剂8Br-cAMP在一定程度上模拟了dmPGE2对微丝的作用;PKA信号通路阻滞剂PKI削弱了dmPGE2的作用.结论 dmPGE2能够促进FSS加载后MC3T3-E1细胞中微丝强度向静态水平的恢复;并且发现PKA信号通路参与此调控过程.
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供肝自然杀伤细胞通过上调精氨酸酶-1表达减轻肝移植急性排斥反应
目的 探讨供体肝脏自然杀伤(NK)细胞减轻大鼠肝移植急性排斥反应的作用机制.方法 以Lewis大鼠为肝移植供体、BN大鼠为受体,采用改良“二袖套”法建立大鼠肝移植模型,并应用60Co射线照射清除供体免疫细胞以及经门静脉回输供肝NK细胞等技术,设立3个实验组:A:急性排斥组(Lewis-BN),n=18;B:单纯60Co照射排斥组(Lewis-BN+供体60Co照射),n=18;C:60Co照射+供肝NK门静脉回输排斥组(Lewis-BN+供体60Co照射+受体门静脉输注供肝NK细胞),n=18.分别于术后第7天收集外周血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)分泌水平,同时切取移植肝行病理学检查,Western blot法检测移植肝精氨酸酶-1(Arg-1)蛋白的表达.结果 与A组比较,B组移植肝组织急性排斥反应程度明显加重,外周血TGF-β1分泌水平[(28.00±6.08) μg/L比(11.00±0.57) μg/L),P＜0.01]和移植肝组织Arg-1表达[(0.687±0.040)比(0.487 ±0.030),P＜0.05]均降低;但是,经供肝NK细胞门静脉输注后的C组移植肝组织急性排斥反应程度较B组明显减轻,外周血TGF-β1分泌水平[(11.00±0.57)μg/L比(27.60±1.45) μg/L,P＜0.05]和移植肝组织Arg-1表达[(0.487±0.030)比(0.605±0.080),P＜0.05]均升高.结论 供肝NK细胞可以减轻大鼠肝移植术后急性排斥反应,其机制可能与Arg-1蛋白的表达上调有关.
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大蒜素对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响
目的 观察大蒜素对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(RAFLSs)凋亡的影响.方法 收集RA患者的滑膜组织标本,RA的诊断标准符合美国风湿病学协会修订的诊断标准.采用胰蛋白酶消化法分离滑膜细胞.用光学显微镜观察细胞的形态,流式细胞术分析体外培养的RAFLSs表面标记的白细胞分化抗原90(CD90)的表达.选用不同浓度的大蒜素(0、100、200、300 μmol/L)处理RAFLSs 24 h.利用DNA片段化凋亡检测法检测大蒜素对RAFLSs凋亡率的影响.结果 分离出的RAFLSs中CD90表达的阳性率大于95％.经100 μmol/L大蒜素处理,RAFLSs的凋亡率为(6.7±1.1)％,与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).200 μmol/L与300 μmol/L组的凋亡率分别为(12.9±2.1)％、(19.7±1.8)％,与100 μmol/L组比较,3组之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 大蒜素能够促进RAFLSs的凋亡,而且呈剂量依赖关系.
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负压封闭引流对猪软组织金黄色葡萄球菌感染创面愈合的影响
目的 观察负压封闭引流时负压值的大小对猪皮肤软组织感染金黄色葡萄球菌创面生长的影响.方法 猪皮肤软组织感染金黄色葡萄球菌创面模型,样本共32个,分别给予1 ～32编号,采用随机数字表法将32个创面模型随机分为4组,每组8个样本.负压值-10、-25、-50 kPa为治疗组,常规换药为对照组.作用时间均为72 h.取治疗前后创面中心及周围脓液稠厚处的脓液行细菌计数,并观察创面的一般情况.结果 与常规换药组比较,细菌计数在负压值为-25 kPa时明显减少(P＜0.01),分泌物减少,黄色脓液组织明显减少,肉芽组织新鲜,创面明显缩小,伤口周围无组织水肿,愈合时间缩短,伤口愈合好.结论 负压封闭引流技术能抑制金黄色葡萄球菌的生长,但负压值为-25 kPa时更能有效减少创面黄色脓液分泌物的产生,抑制金黄色葡萄球菌的生长增殖,刺激新鲜肉芽组织的生成,缩短创面愈合的时间.
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法尼酯衍生物X受体与不同引流方式下梗阻性黄疸大鼠部分肝切除术后肝再生的关系
目的 探讨法尼酯衍生物X受体(FXR)与不同引流方式下梗阻性黄疸(OJ)大鼠部分肝切除术(PH)后肝再生差异的关系.方法 120只健康雄性大鼠随机分为4组:正常大鼠70％肝切除组(Control组)、梗阻性黄疸未引流切除组(OJ组)、梗阻性黄疸内引流切除组(ID组)、梗阻性黄疸外引流切除组(ED组).术后0、4、12、24、48、72 h等时间点检测大鼠血清总胆汁酸(TBA)含量,残肝组织FXR mRNA和蛋白表达、胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1) mRNA表达.结果 ED组PH后12～72 h各时点增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达率为(19.52±1.87)％、(30.16 ±2.65)％、(46.44±2.66)％、(44.36±3.82)％,均明显低于ID组和Control组(P ＜0.05);ED组TBA含量各时点分别为(20.38 ±4.33)、(25.87±8.68)、(35.05±6.87)、(49.66±6.65)、(60.44±7.66)、(52.36±8.82) μmol/L,均低于Control组和ID组(P＜0.05);CYP7A1 mRNA相对表达量ED组各时段分别为1.75±0.09、1.68±0.14、1.53±0.16、1.25±0.16、1.17±0.18、1.24±0.16,均高于Control组和ID组(P＜0.05),ID组各时点FXR mRNA相对表达量分别为1.52±0.18、1.80 ±0.12、1.89±0.12、2.56±0.09、2.39±0.20、2.02±0.24,均高于ED组(P＜0.05),FXR蛋白表达与FXR mRNA基本一致;各项指标ID组与Control组各时点差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经外引流的梗阻性黄疸大鼠部分肝切除后肝再生较内引流明显抑制的原因与胆酸丢失有关,可能机制为低表达的FXR抑制了肝再生.
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比较C6胶质瘤细胞和稳定表达绿色荧光蛋白的C6胶质瘤细胞的生物学特性
目的 通过慢病毒转染C6胶质瘤细胞建立稳定表达绿色荧光蛋白(EGFP)的C6细胞株.方法 用含2个启动子延长因子-1α(EF-1α)和CMV的慢病毒转染C6胶质瘤细胞,荧光显微镜下观察表达EGFP的C6细胞,噻唑蓝(MTT)法比较C6和EGFP-C6胶质瘤细胞生长曲线;建立裸鼠皮下和大鼠颅内胶质瘤模型评价其致瘤性,测量肿瘤体积、苏木素-伊红(HE)染色、免疫组织化学法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色、磁共振成像(MRI)监测肿瘤体积.结果 在倒置和荧光显微镜下观察EGFP-C6细胞形态与C6细胞相似,MTF方法检测其细胞增殖能力(0.53±0.02)与C6细胞(0.51±0.01)相似,裸鼠皮下模型结果表明C6细胞和EGFP-C6细胞的肿瘤体积[(2.20±0.91) cm3比(2.10 ±0.84) cm3]、HE染色、GFAP的表达未见明显区别,并且颅内模型结果也表明,C6细胞和EGFP-C6细胞的肿瘤体积[(19.5±2.3)cm3比(20.5±2.3) cm3]、荷瘤鼠生存期、成瘤率及颅外转移率未见明显区别.结论 成功建立以EGFP为生物标记的C6细胞株,其生物学特性与C6细胞相似.
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上皮钙黏蛋白和Snail在肝细胞癌中的表达及意义
目的 检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和锌指转录抑制因子Snail在肝细胞癌(HCC)组织中的表达,探讨其在HCC发生发展中的意义.方法 采用实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)法检测36对HCC及癌旁组织中的E-cadherin和Snail mRNA表达,分析两者在HCC中的表达意义及相关性.结果 E-cadherin mRNA在HCC中的表达水平明显低于癌旁组织(0.41±0.18比1.00±0.14,P＜0.01),而Snail mRNA在HCC中的表达水平明显高于癌旁组织(1.78±0.34比1.00±0.25,P＜0.01);两者均与HCC的肝内转移、包膜是否完整、血管侵犯及分化程度密切相关(P＜0.05);两者在HCC中的表达呈负相关(r=-0.835,P＜0.01).结论 E-cadherin和Snail与HCC的侵袭和转移密切相关,可能在HCC侵袭和转移中发挥重要作用.
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大鼠脊髓血供网络的同步辐射类同轴相位衬度成像
目的 应用同步辐射类同轴相位衬度成像技术(IL-XPCI)重现大鼠脊髓微血管的二维和三维结构,并建立稳定性和重复性良好的成像方法.方法 取SD雄性大鼠6只,脊髓标本在不行血管造影的条件下,经灌注固定、梯度脱水后于上海光源X射线成像与生物医学应用光束线站进行扫描和成像,观察大鼠脊髓微血管成像效果.结果 大鼠脊髓微血管的相位衬度信息表现为显著的边缘增强效应,在无造影的条件下,同步辐射类同轴相位衬度成像技术成功再现了脊髓血供的三维网络结构,可分辨细血管直径达7.4 μm左右.结论 同步辐射类同轴相位衬度成像技术在血管相关脊髓疾病的研究中具有广阔的应用前景.
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腺病毒靶向干扰S期激酶相关蛋白2基因对膀胱癌细胞生物学行为的影响
目的 观察沉默S期激酶相关蛋白2(Skp2)基因对细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白27(P27KiP1)、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)的表达调控及对膀胱癌细胞生长活性的影响,探讨其在肿瘤侵袭、凋亡中的作用机制.方法 采用Western blot法检测经腺病毒载体(Ad-Skp2)转染后膀胱癌细胞株EJ的Skp2、P27kip1和PTEN的表达改变;用细胞划痕实验、Boyden小室体外侵袭实验、吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色法、噻唑蓝(MTT)比色法反映转染后细胞迁移力、外侵袭力、凋亡及生长活性的变化.结果 转染后48 h的膀胱癌EJ细胞,Skp2蛋白表达开始下降,以转染后96 h明显;而P27kiP1和PTEN在转染96 h后,表达显著增加(P＜0.05);转染后的EJ细胞体外侵袭力下降[(11.7±1.2)％比(69.5±1.4)％,P＜0.05],迁移能力减弱(P＜0.05),细胞凋亡增多(11.8％比45.6％,P＜0.05),生长活性降低(P＜0.05).结论 膀胱癌细胞中的Skp2表达下调可能通过负向调控P27kipl、PTEN而影响癌细胞的分裂周期,从而使癌细胞衰老,终诱导凋亡.
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Notch1调控Srcasm在人食管鳞状细胞癌TE1细胞株中的表达
目的 探讨人食管鳞状细胞癌中Notch1参与调节人食管鳞状细胞癌TE1细胞株中Srcasm负调控Src家族酪氨酸激酶Fyn的机制.方法 分别转染pcDNA3.1-Notch1质粒DNA(2 μg)、pcDNA3.1-Srcasm质粒DNA(2μg)、Double(pcDNA3.1-Notch1质粒DNA 1μg和pcDNA3.1-Srcasm质粒DNA 1 μg)、pcDNA3.1空载体(2μg)至人食管鳞状细胞癌TE1细胞株中,观察Notch1对Srcasm表达的影响.结果 pcDNA3.1-Notch1质粒DNA的转染,原来低表达Srcasm的TE1细胞株中,Srcasm蛋白的表达明显增高.结论 人食管鳞状细胞癌TE1细胞株中Notch1可能是Srcasm的上游信号分子.
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细胞因子诱导的杀伤细胞及上清液对肺炎克雷伯杆菌的作用
目的 观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)及CIK细胞培养上清液对肺炎克雷伯杆菌的体外抑菌作用.方法 体外诱导制备CIK细胞,流式细胞术分析第1、7、14、21天CIK细胞表型,微量肉汤稀释法检测CIK细胞对肺炎克雷伯杆菌(细菌接种后浓度为1.0×105 cfu/ml,效靶比为40∶1、20∶1、10∶1、5∶1)、上清液、及联合浓度梯度的阿米卡星(AK)、哌拉西林(PIPC)后对菌株的低抑菌浓度(MIC)值,确定其体外抗菌活性.结果 CD3+ CD56+细胞于培养第14 ～21天时所占比例维持在45％以上;吸光度(A)值检测结果示24 h时各浓度CIK细胞对细菌杀伤作用差异无统计学意义(F =3.065,P＞0.05);上清液组未见明显细菌生长;AK、PIPC的MIC值分别为2 mg/L和512 mg/L;CIK细胞联合AK、PIPC未降低后两者的MIC值,但上清液联合AK、PIPC后,两者的MIC值分别降至低接种浓度0.25 mg/L和64.00 mg/L以下.结论 CIK细胞对肺炎克雷伯杆菌无抗菌活性,且联合抗生素后无增效反应,但其上清液具有体外抑菌作用.
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维生素E干预激素性股骨头坏死早期细胞凋亡的研究
目的 观察维生素E(vitamin E)对激素性股骨头坏死早期骨细胞凋亡的影响.方法 将36.只家兔分为3组(12只/组).模型组,耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素10 μg/kg,24h后臀肌注射甲基强的松龙,20 mg/kg,共3次,间隔24h/次.vitamin E组,同模型组方法造模,同时饲以vitamin E[0.6 g/(kg·d)].对照组:于相同时间点注射等量生理盐水.于4周和6周,分批处死家兔,观察股骨头组织病理学改变、原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测,免疫组织化学链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测.结果 (1)制模后4、6周vitamin E组的空骨陷窝率为(15.87±1.97)％、(25.09±2.67)％,低于模型组的(20.02±2.21)％、(27.79±1.39)％(P＜0.05).vitamin E组骨细胞凋亡指数为(20.99±2.95)％、(33.93±1.62)％,低于模型组的(26.46±3.37)％、(39.90±3.74)％(P＜0.05).(2)制模后4周,vitamin E组股骨头组织B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)阳性细胞比率为(9.81±1.01)％,高于模型组的(8.26±1.13)％(P＜0.05);半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3阳性染色中,vitamin E组阳性表达比率(55％)介于模型组(68％)与对照组(5％)之间.结论 vitamin E可以减少激素诱导的骨细胞凋亡,减少股骨头坏死的发生.vitamin E可能通过促进bcl-2的表达和抑制Caspase-3的表达来抑制骨细胞凋亡.
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纳米金对HepG2细胞血管内皮生长因子表达和分泌的影响
目的 观察纳米金(AuNP)对HepG2细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达和分泌的影响.方法 实验分为不同浓度AuNP(5、10、20 μg/L)处理组和对照组,HepG2细胞常规消化种板,培养24h后:AuNP处理组分别加入浓度为5、10、20 μg/L的AuNP溶液1 ml;对照组加入等量无血清培养液,继续培养12h后:采用Western blot法检测HepG2细胞内VEGF的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HepG2细胞VEGF的分泌水平;噻唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞增殖率.改变HepG2细胞的培养条件(37℃/4℃),观察AuNP对HepG2细胞VEGF分泌的影响.建立肝癌腹水瘤模型进一步观察AuNP对模型小鼠腹水VEGF水平及腹水量的影响.结果 体外实验:各组HepG2细胞分泌的VEGF浓度分别为:对照组(351.64±7.89)ng/L;5μg/L AuNP组(285.62±3.45) ng/L;10 μg/L AuNP组(121.72±3.10) ng/L;20 μg/L AuNP组(9.83±2.28) ng/L,P＜0.05.各AuNP处理组(5、10、20 μg/L) HepG2细胞增殖率分别为:(98.98±7.57)％、(91.09±11.46)％、(92.13±5.65)％,各组AuNP对HepG2细胞增殖影响差异均无统计学意义(P＞0.05).体内实验:腹水瘤模型小鼠腹水VEGF水平及腹水体积分别为:对照组(62.95±11.93) ng/L、(13.22±1.03) ml;AuNP处理组(27.12 ±8.58) ng/L、(5.21 ±0.62) ml,P＜0.01.结论 AuNP可以明显抑制HepG2细胞VEGF的表达和分泌,体内实验证实AuNP能够降低腹水瘤模型小鼠腹水VEGF水平,明显减少腹水量.
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调节自噬对贝伐单抗诱导的肺癌A549细胞凋亡的影响
目的 观察白噬在血管抑制药物贝伐单抗诱导的肺癌A549细胞凋亡中的作用.方法 设置空白对照组、贝伐单抗(16μmol/L)组、3-甲基腺嘌呤(3-MA,8μmol/L)组和3-MA+贝伐单抗组4个实验组.收集各实验组细胞组,膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素(Annexin Ⅴ-FITC)和单丹磺酰戊二胺(MDC)染色后,荧光显微镜下定性观察荧光表达;流式细胞术定量检测细胞凋亡、Westernblot检测自噬相关蛋白Beclin 1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达.结果 (1)作用48 h,贝伐单抗对A549细胞的半数抑制浓度(IC50)为16 μmol/L,3-MA对A549细胞抑制率10％的浓度(IR10)为8μmol/L; (2)与单用贝伐单抗[(43.92±1.38)％]比较,3-MA联合贝伐单抗显著增加了细胞凋亡率[(87.46±5.97)％,P＜0.01],Beclin l和LC3的表达显著下调(P＜0.05).结论 3-MA可能是通过抑制白噬信号通路,显著增加了贝伐单抗诱导的肺癌细胞凋亡.
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蛋白酶体抑制剂MG132与顺铂联合应用对肺癌A549细胞凋亡的影响
目的 观察蛋白酶体抑制剂MG132联合顺铂(DDP)应用对肺癌A549细胞凋亡相关蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-9和核转录因子-κB (NF-κB)表达的变化.方法 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测30 μmol/L MG132和/或20 mg/L DDP对肺癌A549细胞抑制率的影响;Hoehest 33342染色观察细胞的形态变化;流式细胞术(FCW)检测细胞凋亡率;采用Western blot法检测细胞中NF-κB、Caspase-9蛋白的表达.结果 CCK-8检测结果显示MG132与DDP能有效抑制细胞的增殖,呈浓度及时间依赖性.流式细胞术检测显示,MG132+DDP联合用药组凋亡率为(65.43±1.09)％,与MG132组的(23.23±0.96)％和DDP组的(24.86 ±0.40)％比较,细胞凋亡率明显提高(P＜0.05).Western blot法结果显示联合用药组较单用药组细胞凋亡相关蛋白Caspase-9表达明显增强,核转录因子NF-κB表达显著减少.结论 MG132与DDP联合应用可明显提高细胞凋亡率,其机制可能是通过降低细胞NF-κB的表达,并提高Caspase-9的表达而实现的.
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整合素连接激酶在瘢痕转化生长因子-β1/Smad3信号通路中的作用
目的 观察整合素连接激酶(ILK)在转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3信号通路中的作用,探讨ILK对瘢痕成纤维细胞分化影响的作用机制.方法 体外分离培养瘢痕成纤维细胞后,实验分为4组:对照组、ILK小分子干扰RNA(siRNA)组、TGF-β1组、ILK siRNA+TGF-β1组.采用荧光标记的免疫细胞化学法检测各组成纤维细胞中ILK的表达变化,应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各组成纤维细胞中ILK mRNA、Smad3 mRNA及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA的表达.结果 免疫荧光图像显示,经siRNA沉默后,成纤维细胞的ILK表达水平下调;经TGF-β1(5μg/L)刺激后,ILK表达水平明显上调.FQ-PCR检测结果显示:经ILK siRNA转染后,成纤维细胞的ILK mRNA(0.522±0.113)、Smad3 mRNA (0.222±0.089)及α-SMA mRNA(0.118±0.080)表达水平同时下降;应用TGF-β1刺激后,成纤维细胞的ILK mRNA (2.233±0.511)、Smad3 mRNA(2.891±0.475)及α-SMA mRNA(2.581 ±0.826)表达水平重新上升,与对照组及ILK siRNA组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在瘢痕成纤维细胞中,Smad3及α-SMA的mRNA水平可以被ILK上调,而TGF-β1又可以诱导ILK的表达,ILK可能参与Smad蛋白的调控,对TGF-β1/Smad3信号通路诱导的促成纤维细胞分化作用产生影响.
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内皮祖细胞移植对兔布加综合征门静脉高压的作用
本研究旨在观察内皮祖细胞(EPCs)对兔布加综合征(BCS)模型门静脉压力(PVP)的影响,现将结果报道如下.一、材料与方法1.材料:健康成年家兔24只,体质量2.0 ～2.5 kg.EGM-2MV BulletKit培养基、人纤维连接蛋白、异硫氢基荧光素(FITC)标记荆豆凝集素-1(FITC-UEA-1)和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acLDL)购自美国Sigma公司,FITC标记的抗CD133单克隆抗体和藻红蛋白标记的抗CD34单克隆抗体购自美国Bioscience公司.
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微生态肠内营养在胃大部切除术后的应用观察
患者胃肠道手术后常常存在营养不良、肠道菌群失调,阻碍康复.我们自2009年12月至2011年12月对因胃癌而行胃大部切除术的患者使用微生态制剂联合肠内营养,取得良好疗效,现报道如下.一、临床资料1.一般资料:2009年12月至2011年12月温州医学院附属第一医院普外科因胃癌而行根治性远端胃大部切除,D2淋巴结清扫、毕2式吻合术的患者68例,其中男50例,女18例,平均年龄46.7岁.治疗期间伴发感染、吻合口漏或胃无力的患者排除.术后随机分为减压组22例、对照组23例、实验组23例.
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保留自主呼吸在胸腔镜手术中的应用
传统胸腔镜技术大都需在全麻双腔气管插管保持单肺通气下进行,可造成插管相关并发症、呼吸机相关心肺功能受损及术后出现恶心呕吐、咽喉疼痛等[1].为避免全麻插管所造成的不利影响,非气管插管局麻镇静技术逐渐应用于胸腔镜下肺大疱、肺结节、肺叶切除及肺减容手术[2].本研究旨在探讨非气管插管保留自主呼吸下行胸腔镜手术的安全性及可行性.
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CD227对乳腺癌细胞侵袭转移的影响及机制
CD227也被称为mucin,是1种细胞表面蛋白,主要表达于呼吸道、乳腺、胃肠道等上皮组织近管或腺腔面[1].有研究提示CD227强阳性表达与预后可能相关[2].我们在乳腺癌细胞株(MCF-7细胞)中探讨CD227对乳腺癌细胞侵袭转移的影响及其机制.一、材料与方法1.材料:乳腺癌细胞株MCF-7购自ATCC公司;质粒构建相关试剂购自北京天根生化科技公司产品;转染试剂脂质体、引物和逆转录试剂盒购自上海英骏公司;细胞侵袭实验材料购自美国康宁公司.相关抗体如CD227、血小板衍生生长因子-1(PDGF1)及相关二抗购Santa Cruz公司;细胞培养相关试剂如新生牛血清、DMEM培养基及胰酶等购自Hyclone公司.
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人脐带Wharton胶来源干细胞移植对肝再生的影响
脐带Wharton胶来源的间充质干细胞(WJ-MSCs)是新型的间充质干细胞.能向骨、脂肪、肝细胞分化[1].研究证实WJ-MSCs免疫原性低[2-3].本实验旨观察WJ-MSCs能否促进大鼠肝脏再生.一、材料与方法1.材料:足月新生儿脐带(武汉大学中南医院)获产妇及家人知情同意.成年SD大鼠(武汉大学动物研究中心).胎牛血清(美国Gibco公司),异硫氰酸荧光素(FITC)标记的CD44、CD105,藻红蛋白(PE)标记的CD45、CD34,增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学试剂盒(武汉博士德公司)等.
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EphA2/EphrinA1在脑胶质瘤中的表达及临床意义
受体酪氨酸激酶家族成员受体EphA2及其配体EphrinA1在消化系统和生殖系统等[1]多种恶性肿瘤的发生发展中共同起复杂而重要作用,与肿瘤的增殖、血管生成、转移及不良预后密切相关.本研究旨在检测人脑胶质瘤组织与正常人脑组织中EphA2、EphrinA1的表达,并探讨两者在胶质瘤发生、发展中可能的作用.
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树突状细胞在动脉粥样硬化动脉壁内的分布
我们收集正常及动脉硬化性闭塞症(ASO)患者动脉标本,通过观察免疫原性CD1a、CD83、趋化因子受体7(CCR7)阳性血管树突状细胞(VDC),以及耐受性CD11b、树突状细胞表面特异的胞间黏附分子-3捕获非整合素(DC-SIGN)、Toll样受体(TLR-2)和吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)阳性VDC[1]在动脉粥样硬化(AS)病变动脉壁中的分布和含量变化.
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兔腹主动脉粥样硬化动物模型的建立
我们通过球囊拉伤联合高脂饲料诱导腹主动脉增生法建立兔腹主动脉粥样硬化模型,现报道如下.一、材料与方法1.材料:新西兰兔20只,实验组15只、对照组5只.普通球囊、微导丝、微导管、全自动生化分析仪等.2.内膜损伤术:麻醉后切开兔右后腿皮肤,分离出右股动脉,切开小口逆行置入导丝,在导丝引导下置入球囊导管,通过压力泵维持球囊压力15 atm缓慢拉回球囊,将球囊压力减至0 atm,重置到原位置,重复3次,退出球囊导管,缝合皮肤.随机分成4、8、12周组.
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腹腔镜联合胆道镜保胆取石的疗效观察
目前腹腔镜胆囊切除术及已广泛用于临床.它具有创伤小、康复快等优点.我们对腹腔镜联合胆道镜保胆取石术治疗胆囊结石74例,现报道如下.一、资料与方法1.一般资料:选取2009年3月至2013年3月我院收治的胆囊结石患者74例,其中男34例,女40例,年龄35 ～ 65岁,平均年龄为48.5岁;病程4个月～10年;主要症状为腹痛、发热等;均无腹部手术史;术前B超检查均提示胆总管及肝内胆管无结石,胆总管无明显增粗.手术器械采用美国Stroz公司的腹腔镜操作系统,日本Olympus公司的CHF P20纤维胆道镜系统,美国Cook公司REF NTSE-045065-UDH(4.5 Fr/65 cm)取石网篮.
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重组人生长激素促进狭长窄蒂皮瓣成活及碱性成纤维细胞因子表达的研究
我们设计狭长窄蒂皮瓣局部注射重组人生长激素(rhGH)实验,探讨rhGH对内源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、CD34表达及微血管数的影响,为rhGH促进狭长窄蒂皮瓣成活及扩展皮瓣临床应用提供理论依据.一、材料与方法1.实验材料:健康SD大鼠,雌雄不拘,体质量350 ～370 g(由苏州工业园区爱尔麦特科技有限公司提供),rhGH(安科生物),鼠bFGF、CD34免疫组织化学试剂盒,bFGF酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(均购于博士德生物公司).
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基质细胞衍生因子-1通过CXC趋化因子受体-4、CXC趋化因子受体-7提高脂肪干细胞促血管新生能力
我们应用基质细胞衍生因子-1(SDF-1)通过CXC趋化因子受体-4(CXCR4)、CXC趋化因子受体-7(CXCR7)提高脂肪干细胞(ADSCs)分泌及促血管新生能力.一、材料与方法参照文献[1]方法原代培养ADSCs,P4代ADSCs以L-DMEM+ 1％胎牛血清(FBS)培养.实验分5组:SDF-1刺激组加入终质量浓度0.5 mg/L的SDF-1,CXCR4封闭组、CXCR7封闭组分别以10 mg/L兔抗人CXCR4、CXCR7单抗(Cell Signaling公司)预处理2h再加入SDF-1,全封闭组以两种抗体同时封闭,对照组不作处理.2d后收集条件培养基(CM).
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直肠拭子培养对经直肠前列腺穿刺活检术后感染的影响
我们在经直肠前列腺穿刺活检术(TRUSP)前进行直肠拭子培养(RSC),根据药敏结果选择敏感的抗生素预防性治疗,观察对术后感染的影响[1-2].一、材料与方法1.对象:2009年至2013年我科男性患者658例,年龄52 ～81岁.纳入标准:血清前列腺特异抗原≥10 μg/L,直肠指检前列腺质地异常,血、尿常规、凝血功能正常,血糖控制满意.排除标准:血、尿常规、凝血时间明显异常,有严重心血管疾病.随机选择行RSC患者共216例,标为实验组;未行RSC的442例患者直接行TRUSP,标为对照组.
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小肠腺癌组织中表皮生长因子受体的基因状态及其意义
目的 检测小肠腺癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)基因扩增以及突变.方法 应用EGFR突变型抗体(针对EGFR 19位外显子E746-A750缺失以及21位外显子L858R点突变),采用免疫组织化学方法检测53例小肠腺癌组织芯片以及24例手术切除的小肠腺癌组织中EGFR突变以及总EGFR表达,并采用基因测序的方法检测24例手术切除标本中EGFR基因突变.结果 77例小肠腺癌标本EGFR 19位外显子E746-A750缺失率为9.1％,21位外显子L858R突变率为6.5％,总的EGFR阳性表达率为45.5％.77例小肠腺癌标本中EGFR阳性表达率、EGFR 19位外显子E746-A750缺失及21位外显子L858R点突变阳性率与患者年龄、性别、肿瘤分化程度以及分级、分期无明显相关(P＞0.05).结论 小肠腺癌组织内EGFR发生基因突变的概率较小,大部分的小肠腺癌不适合应用EGFR-酪氨酸激酶抑制剂进行治疗.
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人端粒酶逆转录酶mRNA在胆囊癌患者外周血中的表达
目的 探讨人端粒酶逆转录酶mRNA(hTERT) mRNA在胆囊癌患者外周血中的表达及临床意义.方法 选择50例胆囊癌(胆囊癌组)、50例腺瘤性息肉(腺瘤性息肉组)患者,另选取50例正常体检者(对照组),采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测外周血hTERT mRNA.结果 胆囊癌组hTERT mRNA阳性率(66％)明显高于腺瘤性息肉组(14％,P＜0.05),腺瘤性息肉组阳性率(14％)高于对照组(0,P＜0.05),hTERT mRNA在T3+T4与T1+T2间及淋巴结阳性、阴性间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胆囊癌外周血hTERT mRNA阳性率明显增高,与胆囊癌浸润深度与有、无淋巴结转移有关.
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左心房导管输注去甲肾上腺素在先天性心脏病合并重度肺动脉高压患者围术期的应用
目的 探讨围手术期经左心房导管应用去甲肾上腺素对先天性心脏病合并重度肺动脉高压患者的疗效.方法 收集我院择期在体外循环下行先天性心脏病修复术患者40例,患者均合并重度肺动脉高压.将患者随机分为2组(n=20):对照组(C组)和左心房导管输注去甲肾上腺素组(L组).C组与L组均在心脏复跳后经中心静脉导管持续泵人多巴胺、多巴酚丁胺、肾上腺素、硝酸甘油,与此同时L组经左心房导管输注去甲肾上腺素.记录并行循环(T1)、CPB停机后15 min(T2)、术毕(T3)、术后24 h(T4)各时间点各组血流动力学参数、血乳酸数值.观察术后患者主、肺动脉压力倒置率、右心衰发生率、机械通气时间、ICU停留时间、术后肺部并发症发生率和病死率.结果 将C组与L组术后主、肺动脉压力倒置率(11例比1例);右心衰发生率(16例比1例;80％:5％);机械通气时间[(123.00±13.50)h比(76.00±7.25) h];ICU停留时间[(8.00±1.60)d比(5.00±0.70)d];术后肺部并发症发生率(14例比2例;70％:10％);病死率(2例比0例;10％:0％)进行比较,并经统计学分析后得出,L组数值均低于C组(P＜0.05).结论 通过左心房导管输注去甲肾上腺素这一治疗方法来维护适当的心排血量和外周血管阻力,能有效减少先天性心脏病合并重度肺动脉高压患者术后并发症的发生,降低患者死亡率.
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基于核磁共振技术对二尖瓣置换术血清代谢组学研究
目的 应用基于核磁共振(NMR)代谢组学技术观察体外循环(CPB)二尖瓣置换术(MVR)机体代谢变化.方法 风湿性心脏病二尖瓣病变患者20例,行MVR手术,分别于术前、术中及术后各时点采集静脉血,应用基于NMR代谢组学技术对血浆进行分析及数据处理.结果 CPB下MVR手术缬氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、2-同戊二酸、肌酸、酮体、乙酸、血脂、乳酸等9种物质血浆代谢谱明显变化.结论 CPB引起机体一些氨基酸、葡萄糖及脂肪酸严重的代谢紊乱.
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程序性细胞死亡5基因在胆道闭锁患儿胆管组织中的表达及意义
目的 观察促凋亡基因程序性细胞死亡5基因(PDCD5)在胆道闭锁(BA)及胆总管囊肿(CC)患儿胆管组织中的表达,探讨促凋亡基因PDCD5在BA发病机制中的作用.方法 分别取18例BA和11例CC患儿的胆管组织,应用Westem blot与荧光实时定量聚合酶链反应(FQPCR)方法分别检测PDCD5在BA与CC患儿胆管组织中的表达,对其表达进行定位和定量分析.结果 PDCD5在CC组胆管组织中的Ct值为(6.7292±1.1690),高于BA组的相应CT值(4.012 5±1.073 5,P＜0.05).应用2-△△CT计算出CC与BA中PDCD5基因表达量的比值为1.00∶6.57.PDCD5在BA组胆管组织中mRNA转录水平明显高于对照组;Western blot结果显示,PDCD5在BA组胆管组织中蛋白表达量明显高于CC组.结论 PDCD5在BA患儿胆管组织中的蛋白和基因水平表达均增强.PDCD5可能参与BA的胆管上皮细胞的凋亡,从而参与BA的炎性反应.
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CD147和RhoE在乳腺癌组织中的表达及其生物学意义
目的 探讨CD147和RhoE在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌临床生物学行为的关系.方法 应用免疫组织化学法检测71例乳腺癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织中CD147和RhoE的表达水平.结果 CD147在乳腺癌组织中表达率为74.65％,在癌旁组织中表达率为19.72％,差异有统计学意义(P＜0.01),CD147表达水平与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移有关(P ＜0.05);RhoE在乳腺癌组织中表达率为46.48％,在癌旁组织中表达率为84.51％,差异有统计学意义(P＜0.01),RhoE表达水平与乳腺癌TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 联合检测CD147和RhoE有助于判断乳腺癌的发展趋势及评估预后.
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后腹腔镜下原位低温肾脏部分切除术的临床研究
目的 探索安全有效、简单易行的后腹腔镜下肾脏低温保护技术.方法 拟行后腹腔镜下肾脏部分切除术患者22例,分为研究组和对照组.其中男12例,女10例,年龄为37～69岁,平均年龄52岁;4例为血管平滑肌脂肪瘤,18例为肾透明细胞癌.研究组在阻断患侧肾脏肾动脉后用冰盐水循环灌注系统使肾脏温度降至25℃以下后施行后腹腔镜下肾脏部分切除术;对照组同样在阻断肾动脉后施行患侧肾脏的后腹腔镜下肾脏部分切除术,但不采用肾脏低温技术.比较两组患者肾脏温度和直肠温度变化,以及两组手术前后总肾及患肾肾小球滤过率(GFR)变化.结果 22例患者手术顺利;术后无继发出血、感染及漏尿.研究组冷缺血时间(47.2±3.8) min,平均低肾脏温度为(17.73±0.91)℃,肾脏温度达到25℃需(4.6±0.4) min;对照组热缺血时间(27.8±1.5) min,平均低肾脏温度为(38.08±0.33)℃;研究组术前ECT示总肾GFR为(66.24±3.98) ml/min,患肾GFR为(30.57±4.07) ml/min;术后1个月总肾GFR为(53.89±7.53) ml/min,患肾GFR为(20.92±4.49) ml/min;术后3个月总肾GFR为(54.49±7.92) ml/min,患肾GFR为(21.63 ±5.21) ml/min;术后6个月总肾GFR为(54.77±7.84)ml/min,患肾GFR为(21.73±9.99) ml/min;对照组术前ECT示总肾GFR为(66.49±9.87) ml/min,息肾GFR为(30.65±5.45) ml/min;术后1个月总肾GFR为(54.89±9.61) ml/min,患肾GFR为(17.90±3.50) ml/min;术后3个月总肾GFR为(55.68±10.02) ml/min,患肾GFR为(18.09±3.39) ml/min;术后6个月总肾GFR为(55.82±5.12) mL/min,患肾GFR为(18.17±3.39) ml/min.术后随访1～16个月,未见局部复发、无转移.结论 本研究采用的后腹腔镜下肾脏低温保护技术简单易行、效果确切,易于临床推广.
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前列地尔对冠状动脉搭桥术后患者心肺功能的影响
目的 观察前列地尔脂微球载体制剂对冠状动脉搭桥术后患者心肺功能的影响.方法 选取我院60例冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者,随机分为观察组和对照组,每组30例,两组患者术后均给予抗炎、营养心肌及机械通气等基础治疗,观察组术后静脉缓慢滴注稀释至30 ml生理盐水的前列地尔10μg,3次/天,共2d.检测两组患者术后0.5、6.0、12.0h动脉血氧分压(PaO2)及氧合指数(PaO2/FiO2)的变化,应用右心漂浮导管检测两组患者术后48h右心室射血分数(RVEF)、肺循环阻力(PVRI)的变化.结果 给药前(术后0.5 h):观察组PaO2为(82.3±8.4) mmHg(1 mmHg =0.133 kPa)与对照组的(83.1±8.5) mmHg,观察组(PaO2/FiO2)为(212.8 ±10.4) mmHg,与对照组(214.3±10.7) mmHg比较,差异无统计学意义(P＞0.05);给药后(术后6.0、12.0 h):观察组PaO2为(96.0±9.8)、(108.0±10.6) mmHg,与对照组(84.3±6.1)、(86.7 ±7.3) mmHg比较,观察组(PaO2/FiO2)为(248.6±18.9)、(280.9±34.8)mmHg与对照组(220.5±16.1)、(245.9±28.2) mmHg比较,差异有统计学意义(P＜0.01);术后48.0 h:观察组RVEF(0.53±0.05)与对照组(0.46±0.04)比较,观察组PVRI[(203±28) ml]与对照组[(235±33) ml]比较有显著改善(P＜0.05).结论 前列地尔脂微球载体制剂可提高冠状动脉搭桥术后患者PaO2及PaO2/FiO2,改善患者心功能,提高患者氧合代谢,有助于冠状动脉搭桥术患者术后心肺功能的恢复.
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埃兹蛋白和肺癌肿瘤抑制物1在肝癌组织中的表达及其与预后的关系
目的 探讨埃兹蛋白(Ezrin)和肺癌肿瘤抑制物1(TSLC1)在原发性肝癌(PLC)组织中的表达及两者与PLC临床病理特征和预后之间的关系.方法 采用免疫组织化学法检测66例PLC、30例肝硬化和15例正常肝组织中Ezrin和TSLC1表达水平.结果 Ezrin蛋白在PLC、肝硬化和正常肝组织中的表达率分别为81.82％ (54/66) 、60.00％ (18/30)和26.67％ (4/15),两两比较差异有统计学意义(P＜0.01),TSLC1蛋白在PLC、肝硬化和正常肝组织中的表达率分别为37.88％(25/66) 、63.33％(19/30)和93.33％(14/15),两两比较差异有统计学意义(P＜0.05);Ezrin表达水平与PLC肿瘤大小、血管浸润、TNM分期有关(P＜0.05),TSLC1表达水平与PLC血管浸润、TNM分期有关(P＜0.05).结论 Ezrin和TSLC1可作为评估PLC患者的不良预后指标.
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雌激素受体α基因PvuⅡ和XbaⅠ多态性与乳房肥大的关系
目的 探讨雌激素受体(ER)α基因Pvu Ⅱ和Xba Ⅰ多态性与乳房肥大的关系.方法 选取乳房肥大的女性患者28例,以乳房大小形态正常的健康女性69例作为对照,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术检测两组ERα基因的Xba Ⅰ和PvuⅡ多态性.结果 (1)ERα基因PvuⅡ基因型分布:乳房肥大组:pp型、Pp与PP型分别是25.00％、57.14％和17.86％;正常对照组:PP、Pp与PP型分别是10.14％、68.12％和21.74％,两组差异无统计学意义(P＞0.05);(2)ERα基因Xba Ⅰ基因型分布为:乳房肥大组:xx、Xx与XX分别为25.00％、64.29％和10.71％;正常对照组:xx、Xx与XX分别为63.77％、10.14％和26.09％,两组差异有统计学意义(P＜0.01).(3)Xba Ⅰ酶切多态性相对易感度分析:乳房肥大组:X/x两等位基因的比值比(OR)值为1.657 0[95％可信区间(CI):0.873 5 ～3.143 1],提示X基因是该疾病的易感基因;隐性基因型xx/X携带者的OR值为0.189 4(95％ CI:0.070 6～0.507 8),杂合子/纯合子基因型的OR值为15.9429(95％ CI:5.311 0 ～47.858 0),提示乳房肥大症发生与Xx基因型有关.结论 ERα基因XbaⅠ基因多态性可能与乳房肥大的发生有关,与杂合基因型Xx有关,乳腺发育不良的发生可能与XbaⅠ和PvuⅡ酶切多态性基因型相关.
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鼻胆管冲洗预防胆总管结石内镜取石术后复发的研究
目的 探讨鼻胆管冲洗(BTI)预防胆总管结石患者经内镜逆行胰胆管造影术(ERCP)取石后复发的有效性.方法 连续收集2008年1月至2010年1月我院肝胆外科收治的接受ERCP取石的胆总管结石患者142例,随机分为BTI组(n=71)和常规处理组(n=71),前者取石术后给予BTI,后者给予常规处理.对所有患者入院时相关临床资料进行收集,并对所有患者出院后24个月内胆总管结石复发情况进行随访(每2个月随访1次),依据是否发生胆总管结石复发将患者分为复发组和未复发组,并对两组相关资料进行统计学分析.结果 经随访后,复发组和未复发组患者分别为40例和102例.两组组间基线资料比较表明年龄、体质量指数、合并十二指肠乳头憩室人数、胆总管直径、接受BTI人数及结石数目差异有统计学意义(P＜0.05);将上述6项指标引入多因素Logistic回归分析,结果显示胆总管直径增加[相对危险度(RR)=1.35,95％可信区间(CI):1.12 ～1.48,P＜0.01]、合并十二指肠乳头盘憩室(RR=1.42,95％ CI:1.26 ～ 1.61,P＜0.01)、未接受BTI(RR=1.54,95％CI:1.31 ～1.77,P＜0.01)及结石数目较多(RR=1.46,95％ CI:1.35 ～ 1.57,P＜0.01)是ERCP取石术后结石复发的独立危险因素;未接受BTI处理预测患者胆总管结石复发的受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.659(P ＜0.01,95％ CI:0.613 ～0.693);Kaplan-Meier生存曲线提示常规处理组患者结石复发率增高(39.44％比16.90％,P＜0.05).结论 胆总管结石患者经ERCP取石术后给予BTI处理可以降低结石复发率.
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尿苷磷酸葡萄糖醛酸转移酶A1基因多态性与伊立替康为主化疗方案不良反应的关系
目的 探讨尿苷磷酸葡萄糖醛酸转移酶A1(UGT1A1)*28和UGT1A1*6基因多态性与伊立替康治疗实体恶性肿瘤患者化疗不良反应发生率之间的关系.方法 外周血中抽提基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因片段,直接测序法分析67例恶性实体肿瘤患者UGT1A1*28和UGT1 A1*6基因多态性.记录接受含伊立替康方案化疗患者在治疗中出现的不良反应,比较不同基因型患者之间的不良反应程度以及发生率的差异.UGT1A1* 28突变型TA6/7和TA7/7中出现3～4级腹泻9例(56.3％);3～4级血小板减少7例(43.8％),均高于野生型(25.5％、13.7％).UGT1 A1*6突变型G/A+ A/A中出现3～4级腹泻12例(50.0％);明显高于野生型组(11.6％).结果 67例患者中,UGT1A1 * 28基因启动子区TA序列呈6次重复的野生型(TA6/6)有51例(76.1％),TA序列6次和7次重复的杂合突变型(TA6/7)有12例(17.9％),TA序列7次重复的纯合突变型(TA7/7)有4例(6.0％).UGT1 A1 * 6基因型为野生型(G/G)有43例(64.2％),杂合突变型(G/A)有18例(26.9％),纯合突变型(A/A)有6例(9.0％).UGT1A1* 28突变型TA6/7和TA7/7中出现3～4级腹泻9例(56.3％);3～4级血小板减少7例(43.8％),均高于野生型(25.5％、13.7％).UGT1A1*6突变型G/A+A/A中出现3～4级腹泻12例(50.0％);明显高于野生型组(11.6％).突变型和野生型组之间腹泻等不良反应发生率差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在采用含伊立替康方案化疗恶性肿瘤患者中,UGT1A1 * 6位点突变型增加发生3级以上腹泻;UGT1A1* 28位点突变型增加发生3级腹泻和血小板减少的风险.
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脆性组氨酸三联体基因启动子区甲基化及其蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达
目的 探讨甲状腺乳头状癌(PTC)中脆性组氨酸三联体基因(FHIT)启动子区域甲基化状态及其与蛋白表达的相关性.方法 运用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测60例PTC及其相对应癌旁组织(NCE)中的FHIT基因启动子区甲基化状态;采用Western blot法检测上述组织中FHIT蛋白的表达.结果 在NCE中,无1例出现FHIT基因启动子甲基化,而在PTC组织中,有38.3％ (23/60)出现甲基化,并且甲基化发生率与其病理学分级、TNM分期及淋巴结转移有关(P＜0.05);在NCE和PTC中,FHIT蛋白阳性率分别为100.0％(60/60)和41.7％ (25/60,P＜0.05),在PTC组中,FHIT蛋白表达与其病理学分级、TNM分期及淋巴结转移有关(P＜0.05);FHIT基因启动子区甲基化与其蛋白表达明显相关(x2=6.094,P＜0.05).结论 FHIT基因启动子区甲基化可能是基因失活的重要机制之一,在PTC的发生、发展中起重要的作用.
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肿瘤放疗敏感性与多药耐药相关蛋白的关系
三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白(ABC)超家族是1个跨膜蛋白家族,依靠ATP供能对多种的底物进行跨膜转运.ABC家族由7个不同的亚家族A-G组成,多药耐药相关蛋白(MRP)即为C亚家族,所以又被称为ABCC家族.目前定义MRP/ABCC包含9个成员,分别为MRP1/ABCC1、MRP2/ABCC2、MRP3/ABCC3、MRP4/ABCC4、MRP5/ABCC5、MRP6/ABCC6、MRP7/ABCC10、MRP8/ABCC11和MRP9/ABCC12.
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半乳凝素-9临床研究进展
半乳凝素-9(Gal-9)是一个“串联重复”的半乳糖凝素,存在两个保守的碳水化合物识别域(CRD)[1],一个由148个氨基酸残基组成的N-末端糖识别结构域(N-CRD)和由149个氨基酸残基组成的C-末端糖识别结构域(C-CRD),该“串联重复”能诱导活化的T淋巴细胞凋亡[2].X射线晶体学显示鼠型N-CRD为二聚体形式,人型N-CRD则为单体形式,而人型C-CRD为三聚体形式[2].人型Gal-9根据N-CRD和C-CRD的连接肽长度不同分为3个亚型,即:Gal-9(S)、Gal-9(M,也被称为ECA凝集素或尿酸转运蛋白)和Gal-9 (L)[3].这些亚型的表达是不均匀的,例如:T细胞选择性地高表达Gal-9(M)和Gal-9(L),但Gal-9(S)表达少[4].所有这些Gal-9亚型都具有较强的嗜酸性粒细胞趋化活性[5].然而,也有报道Gal-9亚型的活性差异,Gal-9 (L)抑制而Gal-9(S)和Gal-9(M)促进结肠癌细胞黏附血管内皮[6].此外,Gal-9连接肽的结构及长度也可以影响多价体的形成,影响Gal-9与聚糖配体的结合能力[7].另一方面,重组的Gal-9基因缺失突变,导致其中的连接肽序列完全被剪切,只保留了CRD的相关活性,即趋化嗜酸性粒细胞和诱导T细胞凋亡.表明连接肽对于Gal-9功能发挥是非必要的[8].Itoh等[9]也发现截断的连接肽更有助于Gal-9的结构稳定.
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瞬时受体电位V6在前列腺癌雄激素非依赖转化中的研究进展
前列腺癌(PCa)是男性泌尿系统常见的肿瘤之一,在我国发病率及死亡率呈上升趋势[1].目前雄激素剥夺治疗是治疗进展期PCa的主要方法[2],但通常治疗12～18个月后PCa对雄激素剥夺治疗不再敏感而转化为雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC),需要更有效的治疗方法.瞬时受体电位(TRP)是一类广泛存在于各种细胞的通道蛋白,参与感觉传导、细胞信号转导及调节发育等重要作用.多数研究显示其有可能成为PCa诊断和治疗的新靶点,其中以TRPV6研究为广泛,现对TRPV6在PCa雄激素非依赖转化过程中作用的相关进展进行综述.
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结直肠癌肝转移裸小鼠模型研究进展及影像学诊断方法的评价
结直肠癌患者中有50％ ～ 60％发生肝转移,肝转移是结直肠癌治疗失败的主要原因之一.建立一种较理想的动物模型对于研究结直肠癌肝转移十分重要.现就不同种类的结直肠癌肝转移裸小鼠移植模型进行综述,以方便研究人员根据研究的实际情况和特点选择适合的模型.一、原位细胞悬浮液注射原位细胞悬浮液注射是指将肿瘤细胞悬浮液接种到盲肠或者结肠部位.该方法的优点是能够模拟结直肠癌在人体内的扩散过程[1],而缺点在于“原发性”肿瘤生长和转移需要的时间过长,肝转移发生率相对较低,肠梗阻致死率高[2],因此限制了这种模型的应用.一些研究人员在注射肿瘤细胞100 d后观察中发现,发生肝转移的实验动物比例依然低于75％[3-4].该模型的另一特点是接种某些特定肿瘤细胞株时具有较好的转移潜能,但对于其他肿瘤细胞株则效果较差[5].总体来说,该方法稳定性低、缺乏可预测性,在后续的研究中可操作性较差.
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恶性黑色素瘤的外科治疗和机制研究进展
恶性黑色素瘤(MM)发病率呈逐年上升,每年的新发病例超过10000例.因其恶性程度高,早期易发生淋巴和血道转移,预后效果差.现就恶性黑色素瘤治疗的研究进展作一综述.一、恶性黑色素瘤的外科治疗进展1.显微外科技术的进展:显微外科技术是一种通过显微镜精确定位肿瘤浸润深度,再切除直至基底切缘无癌肿的外科技术,适用于直径大于2 cm,具有恶性、侵袭性组织学形态或者侵及周围神经的肿瘤;复发的恶性皮肤肿瘤;边界不清,孤立的皮肤肿瘤[1].
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结直肠癌腹膜转移的研究现状及其争议
结直肠癌是中国常见恶性肿瘤之一,在上海、广州等地区,已经上升到恶性肿瘤的第2位,目前发病率仍在不断上升.腹膜转移长期以来被视为预后差的结直肠癌,占结直肠癌患者的25％;死于结直肠癌的患者中,腹膜转移的发生率高达40％～80％,是仅次于肝转移的第2位结直肠癌死亡原因.由于当前在中国还没有实施和推广结直肠癌的筛查措施,因此中国中晚期结直肠癌、腹膜转移的比例更加明显高于欧美、日本等发达国家.
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p55PIK上调血管内皮生长因子促进结肠癌细胞血管的生成的作用
目的 观察p55PIK对结肠癌细胞(HT29)的血管内皮生长因子(VEGF)分泌及其对成瘤的影响,探讨肿瘤中p55PIK与血管生成之间的关系.方法 以携带有p55PIK基因的腺病毒感染肿瘤细胞,用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测空白组以及感染空腺病毒和p55PIK腺病毒的肿瘤细胞中VEGF mRNA水平表达差异;用Western blot的方法检测肿瘤细胞VEGF蛋白水平的表达差异;并以感染空腺病毒和感染p55PIK腺病毒的HT29细胞种植裸鼠,观察p55PIK对成瘤性的影响;以移植瘤行免疫组织化学染色,比较p55PIK、VEGF和CD31在组织中表达水平的差异.结果 细胞内过表达p55PIK后,VEGF mRNA表达水平较对照组和空腺病毒组增高2.7倍(P＜0.01),蛋白表达水平也明显增高(P＜0.01);成瘤性明显增强,移植瘤的生长速度增快,3组肿瘤重量分别为(0.057 ±0.040)、(0.060±0.030)、(0.225 ±0.070) g(P ＜0.01).过表达p55PIK组的肿瘤组织中VEGF和CD31的表达水平明显增高.结论 过表达p55PIK的肿瘤细胞成瘤性的增强可能是通过提高VEGF的表达,从而促进肿瘤血管的生成来实现的.
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溃疡性结肠炎患者中组织血型抗原基因多态性及单倍型研究
目的 探讨组织血型抗原基因[岩藻糖基转移酶(FUT)2和FUT3]多态性及单倍型与溃疡性结肠炎(UC)的相关性.方法 收集233例UC患者和292例对照者,采用单碱基末端延伸(SNaPshot)技术检测FUT2(C357T/ A385 T/G428 A)及FUT3(T59G/G508A/T1067A)6个基因位点的多态性,并进行单倍型分析.结果 在UC组和对照组中,FUT2和FUT3基因6个位点的等位基因和基因型频率分布差异均无统计学意义(P＞0.05).但分层分析发现,广泛结肠型UC患者中FUT3 (T59G)的等位基因(G)和基因型(TG±GG)的频率低于远端结肠型UC患者[17.5％(35/200)比25.9％ (69/266);31.0％ (31/100)比45.9％ (61/133),P＜0.05].单倍型分析发现各单倍型频率分布差异无统计学意义(P＞0.05).结论 FUT2基因多态性与UC的易感性无明显相关;FUT3 (T59G)基因突变可能影响UC患者的病变部位.
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结直肠腺癌组织神经内分泌分化对预后的影响
目的 探讨伴神经内分泌分化(NED)细胞结直肠腺癌的临床病理特点及预后.方法 分析中山大学孙逸仙纪念医院胃肠外科同一治疗组2008年收治的82例结直肠腺癌病例的临床资料,应用免疫组织化学方法,重新对这些病例进行神经内分泌特异性指标嗜铬粒蛋白A(CgA)和突触素(Syn)染色并进行生存分析.结果 本组82例患者中,有15例(18.3％)患者出现CgA和/或Syn阳性.其中TNM分期Ⅱ期患者6例,Ⅲ期6例,Ⅳ期3例;高分化6例,中分化6例,低分化3例;肿瘤位于直肠4例,乙状结肠4例,降结肠1例,横结肠1例,升结肠5例.NED组复发转移率为66.7％,而无NED组为29.8％,两者差异有统计学意义(,=7.16,P＜0.01).并且NED组结直肠癌患者的5年生存率为26.7％ (4/15),明显低于无分化组的5年生存率[52.2％(35/67)],两者差异有统计学意义(x2=4.506,P＜0.05).结论 结直肠腺癌出现NED,是本病预后不良的一个重要影响因素,免疫组织化学染色对诊断具有参考价值.
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锌指蛋白217在结直肠癌中的表达及临床意义
目的 探讨锌指蛋白217(ZNF217)基因在结直肠癌中的表达特点及其临床意义.方法 应用Western blot检测10例人新鲜结直肠癌和癌旁正常黏膜中ZNF217蛋白表达,并采用免疫组织化学法检测114例结直肠癌组织、癌旁正常黏膜以及淋巴结中ZNF217蛋白表达.结果 ZNF217蛋白在结直肠癌中高表达81例,癌旁正常黏膜中高表达38例,转移淋巴结中高表达51例,癌组织和转移淋巴结ZNF217蛋白表达明显高于正常组织(P＜0.05),伴有远处转移的癌组织高表达41例,临床Dukes C、D期53例,伴有淋巴结转移的癌组织高表达58例,癌胚抗原(CEA)＞5μg/L的癌组织高表达45例,ZNF217高表达患者和低表达患者平均生存时间分别为(31.8±7.6)个月和(49.7±8.5)个月,ZNF217的表达水平与远处转移、临床Dukes分期、淋巴结转移、CEA以及患者的生存时间密切相关(P＜0.05).而且,ZNF217表达水平越高,患者死亡风险越高,是结直肠癌独立的预后因素之一(P＜0.05).结论 ZNF217蛋白表达上升很可能引起结直肠癌的发生、发展、转移,并使患者生存时间缩短.
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大肠癌细胞及相关成纤维细胞18F-脱氧葡萄糖摄取能力研究
目的 观察人大肠癌细胞及其相关成纤维细胞(CCAFs)共培养前后的18F-脱氧葡萄糖(18 F-FDG)摄取能力的变化,分析CCAFs的糖代谢特征及其对肿瘤代谢的影响.方法 分别改变反应细胞数(1 ×104、5×104、1 ×105、3×105、5×105)、18F-FDG反应时间(40、60、80、100、120 min)、反应放射性活度(1.85、3.70、7.40、14.80、29.60 kBq)以及初始葡萄糖浓度(0、2.78、5.55、11.10 mmol/L),筛选出CCAFs与18F-FDG结合的佳条件,并测定CCAFs-大肠癌细胞共培养4d前后Caco-2及HCT116两种大肠癌细胞和CCAFs的18F-FDG摄取率.结果 CCAFs结合18F-FDG的佳条件为:细胞数为5×105个/瓶,18F-FDG放射性活度为3.70 kBq,反应时间为100 min,葡萄糖浓度为0mmol/L,细胞结合率为(42.80 ±4.47)％.线性回归方程为:Y=(2.661+0.463E4X1-0.195X2-2.412X3)×100％,F=51.140,P＜0.05;共培养前后CCAFs的18F-FDG结合率差异无统计学意义(P＞0.05),Caco-2细胞共培养前后结合率分别为(28.650 0±4.760 0)％、(18.821 5±1.5100)％ (P＜0.05);HCT116细胞共培养前后18F-FDG结合率分别为(24.974 3±2.8300)％、(17.7202 ±2.6200)％,共培养的CCAFs与肿瘤细胞比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CCAFs的18F-FDG摄取能力明显大于大肠癌细胞,而且CCAFs与大肠癌细胞共培养,可明显抑制后者对18F-FDG的摄取而对CCAFs的摄取能力无明显影响,提示CCAFs可能是大肠癌组织中葡萄糖摄取的重要细胞成分.
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朊蛋白表达对结直肠癌细胞增殖及侵袭能力的影响
目的 观察阮蛋白(PrPC)在结直肠癌细胞株中的表达及其对细胞增殖及侵袭能力的影响.方法 采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot检测结直肠癌细胞株HCT-116、SW480、Lovo中PrPC的表达,然后构建prpC慢病毒小干扰RNA(siRNA)载体,转染Lovo及SW480细胞株,对照组转染空白质粒,采用噻唑蓝(MTT)法和侵袭小室实验检测PrPC表达下调后细胞的增殖及侵袭能力.结果 PrPC在Lovo及SW480细胞中的mRNA表达水平分别为8.19±1.12、7.48±1.21,明显高于HCT-116细胞(3.56±1.03),差异有统计学意义(P＜0.05).同时,prpC在Lovo及SW480细胞中的蛋白表达水平也高于HCT-116细胞.prpC表达下调后Lovo及SW480细胞的增殖及侵袭能力均明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 PrPC表达与结直肠癌细胞的增殖及侵袭能力密切相关.
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肝再生磷酸酶-3通过细胞外调节蛋白激酶上调丝氨酸蛋白酶抑制剂E3促进Lovo细胞侵袭
目的 探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)对丝氨酸蛋白酶抑制剂E3(serpinE3)的影响及机制,以及PRL-3和serpinF3对结肠癌Lovo细胞侵袭性的影响.方法 通过Western blot方法,分别检测已经稳转入PRL-3载体的Lovo-P细胞和对照组Lovo-C细胞中serpinE3的表达水平,Transwell小室检测Lovo细胞侵袭性.再给予细胞外调节蛋白激酶(ERK)特异性抑制剂U0126(10 μmol/L)预处理Lovo-P细胞6h,观察serpinE3表达的变化,检测Lovo-P细胞侵袭性的改变.结果 Western blot检测结果显示在转染人PRL-3的Lovo-P细胞中,serpinE3表达明显上调,Lovo-P细胞侵袭性增强[(378±13)个比(269±15)个,P＜0.05];而当特异性阻断ERK后,Lovo-P细胞中的serpinE3表达下调,并且细胞侵袭性也降低[(21l±9)个比(358±19)个,P＜0.05].结论 PRL-3能够通过ERK诱导serpinE3表达上调的方式,增加Lovo细胞的侵袭性.
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不同方式阻断“肠-淋巴”途径对肠道缺血再灌注损伤的影响
目的 比较不同方式阻断“肠-淋巴”途径,对内毒素、细胞因子和肺功能的影响,探讨“肠-淋巴”途径的作用.方法 SPF级SD大鼠,随机分为5组(n=10):正常对照组(blank);假手术组(Sham);肠道缺血/再灌注组(I/R);肠道缺血/再灌注+淋巴管结扎组(I/R+L)和肠道缺血/再灌注+淋巴引流组(I/R +D).结果 I/R、I/R +L、I/R+D、blank和Sham组血清内毒素水平分别是(0.039 4±0.0025)、(0.0299±0.0039)、(0.028 9±0.003 1)、(0.0252±0.0042)和(0.026 2±0.001 3)Eu/ml;细胞因子分别是肿瘤坏死因子-α(TNF-α):(49.92±7.48)、(36.85±13.46)、(27.67±10.12)、(18.86±12.70)和(25.80±11.19) ng/L;白细胞介素(IL)-6:(41.78 ±9.75)、(19.14±1.48)、(19.20 ±4.14)、(8.69±0.76)和(11.57±2.90) ng/Lo I/R、I/R+L、I/R +D组显著高于blank组和Sham组(P＜0.05);阻断淋巴通路后,I/R+L组和I/R+D组血中的内毒素和细胞因子浓度明显低于I/R组(P＜0.05);I/R+L、I/R +D组的一氧化氮(NO)、总一氧化氮合酶(tNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)浓度与blank组和Sham组比较显著增高(P＜0.05);I/R+L、I/R+D组的NO和I/R+D组的iNOS浓度显著低于I/R组(P＜0.05).结论 肠淋巴管结扎或淋巴液引流阻断“肠-淋巴”途径能减轻肠道缺血再灌注导致的局部炎性反应和远隔组织的损伤,淋巴液引流略优于淋巴管结扎,但差异无统计学意义.
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去乙酰化酶Sirt3沉默对缺氧条件下肠上皮Caco-2细胞缺氧诱导因子-1α表达的影响及其对肠上皮屏障功能的作用
目的 采用RNA干扰(RNAi)技术,使去乙酰化酶Sirt3基因表达下调或缺失,观察其下调或缺失后对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响及其对肠屏障功能的作用.方法 体外培养Caco-2细胞,分别检测跨上皮电阻(TER),常氧和低氧(1％O2)条件下Sirt3-小干扰RNA(siRNA)转染前后HIF-1α和紧密连接蛋白:ZO-1、Occludin、Claudin-1的mRNA与蛋白表达.结果 常氧与低氧条件下,Sirt3-siRNA转染后Sirt3的蛋白表达分别下降52％、35％;HIF-1α的蛋白表达(0.72±0.01、0.93 ±0.01)比转染前(0.38 ±0.01、0.81±0.03)明显升高(P＜0.01);低氧条件下,Sirt3-siRNA转染后Occludin、Claudin-1、ZO-1的蛋白(0.71 ±0.03、0.69±0.01、0.72±0.02)和mRNA (0.80±0.01、0.84±0.01、0.88 0.03)表达比转染前明显降低(P＜0.01);低氧条件下,经Sirt3-siRNA转染后TER下降30.8％.结论 缺氧条件下,Sirt3可以调控HIF-1α的表达.沉默Sirt3后紧密连接蛋白表达降低,从而影响肠屏障功能.
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假基因Cripto-3 mRNA在人大肠癌组织中的临床意义
目的 探讨假基因Cripto-3(Cr-3)在人大肠癌组织中的临床意义.方法 收集人大肠癌和正常大肠黏膜组织,采用荧光实时定量聚合酶链反应法检测组织中mRNA水平,分析其表达与患者性别、肿瘤发生部位、分化程度、浆膜侵袭、淋巴结转移及Duke's分期的相关性,并作统计学处理.结果 在大肠癌组织中Cr-3阳性率为75.0％ (27/36),在正常大肠黏膜组织中,Cr-3阳性率为0％ (0/36,P＜0.05).进一步发现Cr-3阳性率分别与浆膜层侵袭、淋巴结转移和Duke's分期有关(P＜0.05);而与患者性别、肿瘤发生部位和分化程度无关(P＞0.05).结论 假基因Cr-3可能是大肠癌基因诊断和治疗中重要靶点之一.
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水通道蛋白-8对结肠癌细胞株HT-29多药耐药因子的影响
目的 通过转染过表达水通道蛋白-8(AQP-8)的真核表达载体,观察AQP-8对结肠癌HT-29细胞株多药耐药因子表达的影响.方法 取对数生长期的人结肠癌HT-29细胞株用于实验.构建绿色荧光蛋白(GFP)-AQP-8真核表达载体并转染至HT-29细胞,通过Western blot检测GFP-AQP-8转染效率;采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率;通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot检测转染GFP-AQP-8的HT-29细胞多药耐药因子P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)及拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)的mRNA和蛋白相对表达量.结果 Western blot结果显示,GFP-AQP-8转染后结肠癌HT-29细胞AQP-8mRNA相对表达水平(0.976 ±0.086)与对照质粒GFP-N1转染组(0.140 ±0.024)比较显著上调(P＜0.05).MTT分析结果显示,转染了GFP-AQP-8的结肠癌HT-29细胞增殖抑制率[(22.86±3.75)％]与GFP-N1组[(1.12±0.17)％]比较显著升高(P＜0.05);与转染GFP-N1的对照组[(4.95±0.58)％]比较,转染了GFP-AQP-8的HT-29的细胞凋亡率显著增加[(14.08±2.37)％,P＜0.05].FQ-PCR和Western blot结果显示,GFP-AQP-8组P-gp、GST-π和TopoⅡ的mRNA表达水平(分别为0.44±0.05、0.34±0.03、0.38±0.05)比转染GFP-N1的对照组各基因mRNA表达水平(分别为0.99±0.12、1.02±0.12、0.96±0.14)均明显降低(P＜0.05),GFP-AQP-8组P-gp和GST-π蛋白表达水平(分别为0.28±0.04、0.37±0.05)与转染GFP-N1对照组表达水平(分别为0.83±0.08、0.75±0.10)比较明显下降(P＜0.05),TopoⅡ的蛋白表达在GFP-AQP-8组(0.60±0.08)与GFP-N1组(0.62±0.07)比较变化不明显(P＞0.05).结论 过表达AQP-8可抑制HT-29细胞生长,该抑制作用可能与抑制耐药基因P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达有关.
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肿瘤睾丸抗原丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶31在大肠癌组织中的表达及其临床意义
目的 筛选大肠癌相关肿瘤睾丸抗原丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶31(STK31),为大肠癌的诊断和靶向治疗提供依据.方法 样本取自本院大肠癌患者及正常人,包括血液、原发灶(癌灶),其中大肠癌45例(转移18例、非转移27例)及正常人为对照(15例).提取样本RNA后逆转录合成cDNA,利用聚合酶链反应(PCR)扩增技术测定STK31在各组织中的表达水平,并进行统计学分析.结果 转移性大肠癌原发灶(0.007 78±0.010 80)与非转移癌原发癌灶中(0.00240±0.005 31),STK31的表达量差异有统计学意义(P＜0.01);未转移大肠癌(0.000 481±0.000458)与转移性大肠癌(0.000 177±0.000 223)外周血中STK31的表达量差异有统计学意义(P＜0.05),两者与正常人(0.000 275±0.000312)外周血比较STK31的表达量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 STK31在转移大肠癌肿瘤组织中的表达明显升高,可作为大肠癌转移的预测因素.
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肿瘤性巨噬细胞对结肠癌细胞侵袭性的影响
目的 观察肿瘤性巨噬细胞(TAMs)在肿瘤微环境中对人结肠癌细胞侵袭性的影响.方法 模拟肿瘤微环境,分别通过Transwell共培养小室将TAMs(1×109/L)和结肠癌细胞Lovo(1×109/L)及SW480(1×109/L)进行共培养24h,收集TAMs 24 h的上清液加入Lovo(l×109/L)及SW480(1×109/L)中培养24 h,再经Transwell侵袭实验检测两株细胞的侵袭性.结果 肿瘤细胞共培养后均提高了侵袭性,其中Lovo[(344±220个比(230±12)个,P＜0.05],SW480[(303±23)个比(211±18)个,P＜0.05];而加入TAMs上清的肿瘤细胞侵袭性未获得明显的增强,其中Lovo[(257±22)个比(221±17)个,P＞0.05];SW480[(233±11)个比(209±19)个,P＞0.05].结论 TAMs在肿瘤微环境能够与结肠癌细胞相互作用,从而提高结肠癌细胞侵袭性.
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遗传性非息肉病性大肠癌微卫星不稳定临床病理和错配修复基因变异的研究
目的 检测新疆哈萨克遗传性非息肉病性大肠癌(HNPCC)大家系微卫星不稳定和错配修复基因表达,探讨两者的关系及对HNPCC家系检测的意义.方法 以调查随访完整的哈萨克HNPCC大家系105例成员为研究对象,采用免疫组织化学技术,检测所有成员大肠组织中hMLH1、hMSH2蛋白表达.从石蜡包埋组织中提取DNA,选择BAT25、BAT26、D2S123、D5S346和D17S250 5个微卫星位点行聚合酶链反应(PCR).结果 HNPCC家系的17例肿瘤患者中MSI的阳性率为100％,其中高度微卫星不稳定(MSI-H)的患者16例(94.1％);低度微卫星不稳定(MSI-L)的患者1例(5.9％);这17例患者均存在hMLH1或hMSH2表达阴性.家系88例未发病成员MSI-H者44例(50.0％),这44例成员中有40例hMLH1或hMSH2表达阴性.结论 HNPCC患者中MSI-H的患者与错配修复基因hMLH1及hMSH2表达缺失、较早的发病年龄、右半结肠癌的发生率及低分化癌的发生之间有较好的一致性.
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微管不稳定蛋白和Endoglin在大肠癌组织中的表达
目的 探讨微管不稳定蛋白(Stathmin)和Endoglin标记的微血管密度计数(MVD)在大肠癌中的表达及其与临床病理学参数之间的关系.方法 收集46例大肠癌患者手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,运用免疫组织化学法检测Stathmin和Endoglin标记的MVD在组织中表达水平.结果 Stathmin大肠癌组织的表达率为69.57％ (32/46),明显高于癌旁组织表达率[34.78％ (16/46)],两者差异有统计学意义(P＜0.01),Stathmin表达水平与大肠癌组织学分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移明显相关(P＜0.05);Endoglin标记的MVD大肠癌组织的表达强度为(68.27±5.66)个,明显高于癌旁组织的表达强度[(41.51±4.52)个],两者差异有统计学意义(P＜0.01);Endoglin标记的MVD表达强度与大肠癌浸润深度、TNM分期、淋巴结转移明显相关(P＜0.05).结论 联合检测Stathmin和Endoglin有助于判断大肠癌临床生物学行为.
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O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶在结肠癌干细胞中的表达及其与结肠癌5-氟尿嘧啶获得性耐药的关系
目的 探讨DNA修复蛋白O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)在结肠癌干细胞中的表达及其与结肠癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)获得性耐药的关系.方法 构建人结肠癌细胞5-Fu耐药模型,检测MGMT在耐药组与对照组中的表达差异,观察MGMT在CD133+和CD133-细胞中的表达水平,比较耐药组和对照组CD133+结肠癌干细胞分布比例.结果 MGMT在耐药组和对照组中的蛋白表达量分别为104.21±13.16和48.37±12.45,耐药组中的表达水平明显高于对照组(P＜0.01);CD133+细胞在耐药组和对照组中的比例分别为(1.77±0.75)％和(3.43±0.25)％,耐药组分布比例明显低于对照组;MGMT在耐药组和对照组CD133-细胞中的表达量均显著高于CD133+细胞,耐药组与对照组之间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MGMT高表达与结肠癌5-Fu获得性耐药密切相关,耐药组中异常的CD133+结肠癌干细胞分布比例提示其也参与了获得性耐药,但并不通过MGMT分子所介导.
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反式转录激活因子-氨基端24个氨基酸穿膜融合多肽对结直肠癌血管形成的影响
目的 观察反式转录激活因子-氨基端24个氨基酸(TAT-N24)穿膜融合多肽对结直肠癌血管形成的影响.方法 对结直肠癌细胞Lovo过表达p55PIK和/或同时给予p55PIK的特异性抑制剂TAT-N24后,通过Western blot法检测乏氧诱导因子-1α的表达,通过双荧光素酶报告系统检测血管内皮生长因子-A的启动子活性,并用酶联免疫吸附试验检测其蛋白分泌,后通过体外血管形成实验检测p55PIK及TAT-N24对结直肠癌血管形成的影响.结果 过表达p55PIK促进结直肠癌细胞株Lovo中乏氧诱导因子-1α的表达,进而增强血管内皮生长因子-A的启动子活性(p55PIK组比对照组,常氧:9.1±1.1比1.0±0.2,乏氧:14.5 ±1.6比1.0±0.3),并且促进其在培养基上清中的分泌[p55PIK组比对照组,常氧:(412±23) mg/L比(150±18) mg/L,乏氧:(859±203) mg/L比(233±12) mg/L],而且其条件培养基可促进脐静脉内皮细胞形成血管,而TAT-N24可拮抗上述过程,抑制结直肠癌的血管形成.结论 p55PIK可促进结直肠癌的血管形成,而TAT-N24作为其特异性抑制剂,可抑制结直肠癌的血管形成.
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脾脏功能与脾脏外科研究现状与展望
由于脾脏并非生命所必需,人们对脾脏的认识经历了一个长期曲折的过程[1]:由错误走向正确、确认功能直到深入探索.近年来国内外患者对该领域的研究也取得了不少进展.我们结合新文献及我们在此领域20余年的探索结果,对脾脏功能与脾脏外科的一些进展进行简单总结,探讨对该领域值得进一步研究的方向.
关键词：
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
