中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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羟乙基淀粉130/0.4对大鼠肝脏缺血/再灌注损伤的保护作用
目的 探讨羟乙基淀粉130/0.4(HES130/0.4)对大鼠肝脏缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 40只雌性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(IR组)、缺血/再灌注+7.5％高渗盐水组(IR+ HS组)、缺血/再灌注+羟乙基淀粉组(IR+ HES组),每组10只.IR+ HES和IR+ HS组在肝缺血60 min后分别静脉持续泵入HES130/0.4、7.5％ HS(13 ml/kg),再灌注120 min.收集血液进行血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)测定,取部分肝组织行超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)测定及病理学检查.结果 与Sham组比较,血清ALT、AST、肝组织MDA等指标在IR组[(481.64±86.32) IU/L、(793.16±86.51) IU/L、(6.45±0.63) nmol/(mg·蛋白)]、IR+HS组[(461.44±76.35) IU/L、(784.58±81.05) IU/L、(6.25±0.69) nmol/(mg·蛋白)]及IR+ HES组[(230.23±51.85) IU/L、(330.14±23.52) IU/L、(5.04±0.62) nmol/(mg·蛋白)]均升高(P＜ 0.05);SOD活性[(129.35±17.05)、(133.64±16.60)、(160.25±28.80) U/(mg·蛋白)]降低(P＜0.05);肝组织病理学评分升高(P＜0.05).结论 给予羟乙基淀粉130/0.4(HES130/0.4)对大鼠肝脏缺血/再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与加速氧自由基清除,降低氧自由基介导的脂质过氧化反应有关.
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富血小板血浆对光老化皮肤中胶原蛋白的影响
目的 通过建立光老化皮肤模型,观察富血小板血浆(PRP)对光老化皮肤中的抗衰老作用.方法 SPF级大耳白兔12只,随机分为实验组和对照组.采用UVA灯照射颈部及背部裸露皮肤24 h的方法制备光老化模型,实验组用PRP注射到真皮浅层,对照组则为生理盐水注射.分别于注射前后取颈背部皮肤行常规苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察细胞;免疫组织化学法分析Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原.结果 对照组HE染色未见明显改变,实验组较前胶原纤维排列紧密,弹力纤维总面积增加,成熟胶原纤维明显增多,新生的胶原纤维减少,弹力纤维减少、纤细.对照组Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原未见明显改变,差异无统计学意义(P＞0.05),实验组Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原可见明显改变,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 作为皮肤老化指标的Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原,在注射PRP后的皮肤中的表达可见明显改变.
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远端缺血后处理减轻大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤中微小RNA-146a的表达变化
目的 观察远端缺血后处理减轻大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤中微小RNA(miRNA)-146a的表达变化,探讨远端缺血后处理的保护机制.方法 将24只雄性大鼠随机分为3组(每组8只):假手术组(Sham)、远端缺血后处理组(RIPC)和肢体缺血再灌注组(LIR).检测各组大鼠肺组织中miRNA-146a含量、Toll样受体4(TLR4)含量、丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(M PO)活性、湿干重比(W/D)比值及光镜下肺组织病理学改变.结果 与Sham组比较,LIR组和RIPC组大鼠肺组织中miRNA-146a的表达量明显降低(P＜0.05),TLR4表达水平明显升高(P＜0.05);与Sham组[(3.44±0.33) nmol/mg、(1.95±0.12) U/g、4.03 ±0.40]比较,LIR组和RIPC组MDA含量[(4.49±0.54)、(4.00 ±0.39) nmol/mg]、MPO活性[(2.55±0.31)、(2.26±0.32)U/g]及W/D比值(5.61±0.79、4.80 ±0.63)明显升高(P＜0.05).与LIR组比较,RIPC组大鼠肺组织中miRNA-146a的表达量明显升高(P＜0.05),TLR4、MDA、MPO水平及W/D比值明显降低(P＜0.05).光镜下Sham组肺组织结构正常;RIPC组肺组织结构基本完整;LIR组肺组织损伤明显.结论 远端缺血后处理明显减轻肢体缺血再灌注后引起的肺损伤,其机制可能与miRNA-146a抑制TLR4蛋白表达和相关炎性介质的释放有关.
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葫芦素B对人结肠癌细胞株LS174-T的生长抑制作用
目的 检测葫芦素B对于人结肠癌细胞的抑制作用.方法 0.01、0.10、1.00、10.00、100.00 μmol/L浓度的葫芦素B分别作用于LS174-T细胞24、48、72 h.细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期.荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-PCR)检测转录信号转导子与激活子3 (STAT3)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、及Ten mRNA水平.结果 CCK-8结果显示,0.01 μmol/L和100.00 μmol/L的葫芦素B作用24 h,细胞增殖抑制率分别为(5.22±2.02)％、(73.90±1.85)％.100.00 μmol/L的葫芦素B作用24和72 h,细胞增殖抑制率分别为(73.90±1.85)％、(98.84±0.51)％(P＜0.05).流式细胞仪检测发现,与对照组比较,1.00 μmol/L浓度处理组处于G2/M期细胞的比例升高[(6.33±0.74)％比(30.43±4.09)％],Go/G1期细胞比例下降[(78.50±4.72)％比(43.20±5.65)％,P＜ 0.05].FQ-PCR结果显示,0.10μmol/L和10.00 μmol/L浓度组作用24 h,STAT3 mRNA表达分别为0.7500±0.0038、0.660 0±0.005 5,表达下降(P＜0.05).0.10μmol/L浓度组作用24、48 h,Caspase-3 mRNA表达分别为4.30±0.29、6.79±0.13,表达上升(P＜0.05).结论 葫芦素B对人结肠腺癌细胞株LS174-T的增殖具有抑制作用.
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丙泊酚预先给药对急性肺损伤大鼠自噬相关蛋白Beclin-1表达的影响
目的 探讨丙泊酚预先给药对脂多糖(LPS)所致急性肺损伤的影响及其机制.方法 将45只雄性SD大鼠随机分为3组:对照组(C组)、LPS组(L组)和LPS+丙泊酚组(LP组),每组15只.C组尾静脉注射生理盐水;L组尾静脉注射LPS 7.5 mg/kg;LP组在尾静脉注射LPS7.5 mg/kg的基础上加用丙泊酚30 mg/kg.实验结束后放血处死大鼠,取肺组织进行病理学检查并测定肺湿/干重比(W/D);计算肺湿/干比重比值(W/D比值)、MPO活性及肺泡灌洗液中总蛋白含量,光镜下行WBC计数,同时Western blot检测肺组织中Beclin-1表达.结果 与C组比较,L组肺组织中W/D比值、WBC计数及总蛋白含量[5.21±0.27、(6.57 ±1.25)×106/L、(2.01±0.32)g/ml]均明显升高(P＜0.05),Beclin-1蛋白的表达水平(0.31 ±0.11)明显升高;与L组比较,W/D比值、WBC计数及总蛋白含量[4.41 ±0.21、(2.67±0.38)×106/L、(0.27 ±0.11) g/ml]明显降低(P＜0.05),Beclin-1蛋白的表达水平(0.47 ±0.15)亦明显升高.结论 丙泊酚具有肺保护作用,且该作用可能与其增加细胞内自噬相关基因Beclin-1表达有关.
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振荡电场刺激对少突胶质前体细胞活化及髓鞘再形成的影响
目的 观察振荡电场刺激(OFS)对脊髓少突胶质前体细胞(OPCs)活化为成熟少突胶质细胞及髓鞘再形成的影响.方法 48只SD大鼠采用Allen's打击法建立脊髓损伤模型,随机分为实验组和对照组.实验组植入刺激器给予振荡电场刺激,对照组只植入振荡电场刺激器但不施加刺激.在实验开始后的4d、7d、10d、14d取两组大鼠脊髓进行免疫荧光染色观察成熟少突胶质细胞的表达;4周和6周取大鼠脊髓行固蓝染色观察髓鞘形成情况,同时检测各组大鼠BBB功能学评分.结果 成熟少突胶质细胞的表达在4 ～14d时呈现递增的趋势,但实验组成熟少突胶质细胞在表达数量和体积上明显优于对照组,同时细胞排列更加有序;在6周时,实验组脊髓白质内的平均髓鞘面积相对比和BBB评分与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).而4周时,BBB评分两组之间差异有统计学意义,平均髓鞘面积相对比之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 振荡电场刺激可以促进少突胶质前体细胞活化为成熟少突胶质细胞,促进髓鞘的再形成从而改善脊髓损伤后的神经功能恢复.并且,运动功能的改善较髓鞘的形成可以更早和明显.
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RhoC基因对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞增殖、凋亡的影响
目的 观察RhoC蛋白在骨髓瘤组织中的表达及其对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞增殖、凋亡的影响.方法 利用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测55例多发性骨髓瘤组织及7例骨髓组织中RhoC基因的表达,采用RhoC小干扰RNA (siRNA)转染RPMI 8226细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测RhoC mRNA和蛋白的表达;分别在转染后24、48、72 h通过噻唑蓝(MTT)法观察RhoC siRNA对细胞增殖的影响;转染后加入膜联蛋白V(Annexin V)和碘化丙锭(Pl)检测RhoC siRNA对细胞凋亡的影响.结果 与对照组比较,RhoC基因在多发性骨髓瘤组织中高表达(P＜0.05);RhoC siRNA转染细胞72 h后,RhoC mRNA和蛋白的表达量分别为1.90±1.03、0.22±0.03,与其对照组比较均明显降低(P＜0.05);细胞生长抑制率[(89.02±7.03)％]及早期凋亡细胞比例[(12.02±1.12)％]明显高于对照组(P＜0.05).结论 RhoC siRNA具有抑制RPMI 8226细胞增殖,促进凋亡的作用.
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不同剂量氯胺酮对骨癌大鼠痛行为学及腰段脊髓胶质细胞活化的影响
目的 观察不同剂量氯胺酮对骨癌大鼠痛行为学及腰段脊髓胶质细胞活化的影响,探讨氯胺酮治疗骨癌痛的机制.方法 将雌性SD大鼠24只,随机分为4组(n=6):A组(对照组):左侧胫骨上段骨髓腔注入3μl Hank液;B组(模型组):左侧胫骨上段骨髓腔注入3μl MADB-106大鼠乳腺癌细胞(4.8×109/L);C组(氯胺酮10 mg/kg);D组(氯胺酮20 mg/kg);C、D两组造模同B组.从第14天开始,A、B组大鼠腹腔分别注射生理盐水1ml,C、D组大鼠腹腔分别注射氯胺酮10 mg/kg(1 ml)及20 mg/kg(1 ml),1次/天,连续4d.术前及术后22 d,各组大鼠隔日观察机械痛及辐射热痛阈值变化.第22天,取大鼠脊髓L4～6节段,采用免疫组织化学法观察骨癌痛大鼠腰段脊髓中星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应阳性产物及OX42标记的小胶质细胞阳性产物分布及变化.结果 A组大鼠对机械、辐射热痛刺激的缩爪阈值在术后各时间点组内比较差异无统计学意义(P＞0.05);B、C、D组大鼠对辐射热痛刺激缩爪阈值在术后的前6d与A组比较升高(P＜0.05),术后14～ 22 d,与A组大鼠对机械痛刺激缩爪阈值和辐射热痛阈值比较,B、C组降低(P＜0.05),而D组差异无统计学意义(P＞0.05).大鼠腰脊髓背角Ⅰ～ⅣGFAP、OX42免疫反应吸光度值B组(57.05±2.03、72.04 ±2.25)、C组(52.02±2.08、69.32 ±2.14)比A组(30.62±1.06、42.34 ±3.16)升高(P＜0.05),D组与A组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 骨癌痛模型大鼠患侧腰段脊髓背角星形胶质细胞和小胶质细胞均被广泛激活,20 mg/kg氯胺酮可以显著抑制其激活.
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人股动脉粥样硬化并高血压患者血浆脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶和内脂素水平的变化
目的 探讨血浆脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶(L-PGDS)及内脂素水平与人股动脉粥样硬化并高血压及其相关危险因素的关系.方法 根据股动脉内膜-中层厚度(IMT)将152例患者分为股动脉粥样硬化组102例,健康对照组50例.股动脉粥样硬化组根据有无高血压分为股动脉粥样硬化并高血压组(48例),股动脉粥样硬化无高血压组(54例),测定空腹血浆L-PGDS与内脂素水平,所有受试者测定血压、身高、体质量、血脂、空腹血糖,计算体质量指数(BMI).结果 与对照组比较股AS患者血浆内脂素水平为(5.02±2.89) μg/L,明显偏高,血浆L-PGDS水平为(0.58±0.11) mg/L (P＜0.05).股AS合并高血压患者与股AS患者比较,血浆内脂素水平[(28.89 ±4.33) μg/L]及L-PGDS水平[(0.90 ±0.30) mg/L]均明显升高(P＜0.05).血浆内脂素与TG、LDL-C、CRP、BMI、IMT、DBP呈正相关,与年龄、HDL-C呈负相关(P＜0.05),血浆L-PGDS与年龄、SBP呈正相关,与BMI、IMT及LDL-C、CRP水平呈负相关.血浆内脂素与L-PGDS水平呈负相关(P＜0.05).结论 人股动脉粥样硬化并高血压患者血浆内脂素及L-PGDS水平明显改变,可能通过多种途径参与了动脉粥样硬化并高血压病的病理生理过程.
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细胞外基质蛋白SRPX2对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响
目的 检测细胞外基质(ECM)SRPX2蛋白在结肠癌组织中的表达,观察上调SRPX2表达对结肠癌SW480细胞的影响.方法 采用免疫组织化学方法在结肠癌组织芯片中检测SRPX2的表达;采用pCDNA 3.1-SRPX2质粒转染SW480细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测24、48、72 hSW480细胞的增殖能力,Transwell侵袭和迁移实验检测转染后SW480细胞的侵袭、迁移能力.结果 免疫组织化学检测结果示SRPX2在结肠癌中表达较癌旁组织明显增强(P＜0.01);MTT检测示48 h及72 h SRPX2转染组细胞增殖水平明显增加(P＜0.05);Transwell法检测,SRPX2转染组结肠癌细胞迁移及侵袭能力明显增强(P＜0.01).结论 SRPX2在结肠癌组织中表达增强,并可增强结肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,可能起到促癌作用.
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导水管周围灰质内注射黑皮质素受体4型拮抗剂HS014抑制乳腺癌骨转移模型大鼠骨癌痛
目的 观察导水管周围灰质内注射黑皮质素受体4型(MC4R)拮抗剂对骨癌痛模型大鼠疼痛行为学及腰段脊髓星形胶质细胞活化的影响,探讨其治疗骨癌痛的机制.方法 选择雌性SD大鼠18只,随机分为3组(n=6):A组(对照组):左侧胫骨上段骨髓腔注入3μl生理盐水(NS);B组(模型组):左侧胫骨上段骨髓腔注入3μl MRMT-1大鼠乳腺癌细胞(1×103/μl),导水管周围灰质(PAG)内注射NS 0.5μl;C组(HS014组):造模同B组,PAG内注射MC4R拮抗剂HS0140.5μl.术后每24 h在PAG内注射HS014(0.5 μg/0.5μl)或NS 1次,连续注射至术后13 d.大鼠与术前及术后1、3、7、14 d给药后60 min内,采用热板测痛仪测试大鼠的热痛阈值.第14天取大鼠脊髓L4～L6节段,采用免疫组织化学方法观察骨癌痛大鼠腰段脊髓星形胶质细胞阳性产物分布及变化.结果 A组大鼠对热痛阈值在术后各时间点组内比较差异无统计学意义(P＞0.05);B、C组大鼠对热痛阈值在术后的前6d与A组比较升高(P＜0.05);术后7～14d,与B组大鼠对热痛阈值比较,C组明显降低(P＜0.05).大鼠腰脊髓背角胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应吸光度值C组(50.15 ±1.98)比B组(59.46 ±2.55)降低(P＜0.05).结论 导水管周围灰质内注射MC4R拮抗剂HS014抑制乳腺癌骨转移模型大鼠骨癌痛,其机制可能是抑制脊髓星形胶质细胞激活.
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阿托伐他汀对动脉粥样硬化形成及脂蛋白受体表达的影响
目的 观察阿托伐他汀对动脉粥样硬化及脂蛋白受体表达的影响.方法 采用显微外科缝合法造成兔颈动脉狭窄,并联合高胆同醇饮食建立兔颈动脉粥样硬化模型,应用阿托伐他汀进行干预,应用苏木素-伊红(HE)、Masson染色切片观察不同时间颈动脉壁的病理改变,以内膜/中膜厚度比值(I/M)及内膜/中膜面积比值(SI/SM)评价动脉粥样硬化程度,免疫组织化学法检测颈动脉内膜脂蛋白受体LOX-1的表达.结果 采用显微缝合联合高脂饮食法成功诱导颈动脉内膜增厚及动脉粥样硬化斑块形成,6周他汀组I/M及SI/SM (0.49 ±0.51、0.11 ±0.09)均明显低于对照组(0.88±0.39、0.28±0.13,P＜0.05);12周他汀组I/M及SL/SM(0.68±0.43、0.61±0.22)均明显低于对照组(2.64 ±0.62、1.88 ±0.47,P＜0.05);颈动脉内膜脂蛋白受体LOX-1表达6、12周(0.04±0.02、0.72±0.18)均低于同期对照组(2.12±0.67、5.06±0.78,P＜0.05).结论 应用显微缝合联合高脂饮食法成功建立兔颈动脉粥样硬化模型,阿托伐他汀可抑制或延缓动脉粥样硬化斑块形成及脂蛋白受体LOX-1表达.
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癌相关成纤维细胞通过上调WNT10B促进乳腺癌细胞增殖
目的 观察成纤维细胞对乳腺癌细胞MCF-7表达WNT10B和增殖能力的影响.方法 Transwell实验共培养1.0 ×105个MCF-7细胞和1.0×105个成纤维细胞2d,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测成纤维细胞对MCF-7表达WNT10B的影响;三维立体培养2.0×102个MCF-7和5.0×103个成纤维细胞12d,检测MCF-7细胞克隆形成率(CFE).结果 与正常乳腺成纤维细胞(NBFs)共培养2d后,MCF-7细胞中WNT10B的相对表达量为2.1706±0.0646,与癌相关成纤维细胞(CAFs)共培养2d后,MCF-7细胞中WNT10B的相对表达量为3.8642±0.1052,CAFs促进MCF-7细胞表达WNT10B作用更明显(P＜0.05).三维立体共培养实验中,空白对照组中MCF-7细胞的克隆形成率是(6.67±1.89)％,NBFs细胞组中MCF-7细胞克隆形成率是(8.83±2.52)％,与空白对照组比较略有升高,差异无统计学意义(P＞0.05);CAFs细胞组中MCF-7细胞克隆形成率是(37.83±2.02)％,与空白对照组和NBFs组比较均有明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);在CAFs细胞组加入WNT10B单抗后,MCF-7细胞克隆形成率是(11.67±2.56)％,与加入单抗前比较明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CAFs可以通过上调WNT10B促进乳腺癌细胞增殖.
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高迁移率族蛋白B-1在非诺贝特治疗心肌肥厚过程中的作用
目的 观察非诺贝特是否可通过调控高迁移率族蛋白B-1(HMGB1)从而影响心肌肥厚的发生发展,并探讨其机制.方法 体外培养乳鼠心肌细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)与Western blot法检测非诺贝特对心肌细胞内HMGB1表达水平及HMGB1核转位的影响;建立心肌肥大小鼠模型,分为非诺贝特组(n=5)与生理盐水组(n=5)进行比较,观察两组小鼠心肌细胞中HMGB1表达和转位,以及心肌肥大的进展.结果 体外实验表明,过氧化物酶体增殖激活物受体-α(PPARα)激动剂非诺贝特具有下调乳鼠原代心肌细胞HMGB1的表达作用(RNA水平:P＜0.05;蛋白水平:P＜0.05),且该作用呈时间依赖性和剂量依赖性.研究还发现加入非诺贝特后心肌细胞释放HMGB1的能力降低(P＜0.05),并可以逆转炎症条件下的HMGB1高表达.体内实验进一步证明了非诺贝特可以下调肥大心肌细胞HMGB1的表达,并且促进其从胞质至胞核的转位过程.结论 非诺贝特可能调控HMGB1在心肌细胞的表达与转位,从而调控心肌肥大疾病的进展.
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洛铂诱导胆管癌RBE细胞凋亡及其对B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3/半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-8和细胞色素C凋亡相关因子影响
目的 观察洛铂对胆管癌RBE细胞抗肿瘤作用及B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、actived-半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8和细胞色素C(Cyt-C)转录及表达的影响.方法 不同浓度洛铂干预胆管癌RBE细胞一定时间,噻唑蓝(MTT)比色法检测RBE细胞的生长抑制,流式细胞法检测细胞周期,膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙锭(PI)双染检测凋亡率,Western blot及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测bax、bcl-2、actived-Caspase-3、Caspase-8、Cyt-C蛋白及mRNA表达的变化.结果 MTT结果显示随浓度升高及时间延长,药物对细胞增殖抑制作用增强(P＜0.05),24 h的半数抑制剂量(IC50)值为11.82 mg/L.随药物浓度增加G0/G1期与G2/M期细胞增加,S期细胞比例减少(P＜0.05).Annexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)/PI检测显示洛铂能诱导RBE细胞凋亡,与对照组比较有更高的凋亡率(Pp＜0.05).Western blot及Real-time PCR检测结果显示bax、actived-Caspase-3、Caspase-8和胞质内Cyt-C转录和表达升高,bcl-2转录水平降低.结论 洛铂对胆管癌RBE细胞的增殖具有明显的抑制作用,其可能通过增加bax、抑制bcl-2的转录和表达,释放Cyt-C激活Caspase-8、Caspase-3诱导RBE细胞凋亡.
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右美托咪啶对心肺复苏后大鼠血清硫化氢、神经元特异性烯醇化酶与S100β浓度的影响
目的 观察右美托咪啶对心肺复苏后大鼠血清硫化氢(H2S)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及S100β浓度的影响.方法 将60只健康的雄性大鼠分为3组:假手术组(A组)、常规复苏组(B组)、右美托咪啶组(C组)各20只,比较各组大鼠窒息前和心肺复苏后的PaO2、PaCO2水平,测定各组大鼠心肺复苏后的神经功能缺损评分(NDS)和血清H2S、NSE与S100β浓度.结果 经过心肺复苏后,B、C两组大鼠PaO2 [(45.48 ±5.98)和(48.26 ±6.93) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)]较窒息前[(92.15±2.87)和(91.89±2.76) mmHg]明显降低,PaCO2[(57.32±7.15)和(53.68 ±3.58) mmHg]较窒息前[(32.98±2.14)和(32.70±3.32) mmHg]明显升高(P＜0.05).B、C组大鼠的不同时点的NDS评分差异有统计学意义(P＜0.05);B、C组比较,第24、48和72小时的NDS评分(45.97±5.78、41.32±4.79、40.56±4.43和32.25±4.22、25.82±3.98、17.96±2.79)差异有统计学意义(P＜0.05).B、C组大鼠的不同时点的H2S、NSE与S100β浓度差异有统计学意义(P＜0.05);B、C组比较,第4、12、24、48和72小时的H2S和NSE浓度差异有统计学意义(P＜0.05);B、C组比较,第12、24、48和72小时的S100β浓度差异有统计学意义(P＜0.05).结论 右美托咪啶增加大鼠血清中H2S的浓度,降低NSE和S100β的浓度,对心肺复苏大鼠具有一定程度的脑保护作用.
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京尼平交联对兔脱细胞气管基质生物力学性能及血管生成的影响
目的 研究兔脱细胞组织工程气管支架的制备,进而行京尼平交联探讨其对脱细胞气管基质生物力学性能及血管生成性能的影响.方法 采用去污剂-联合酶法(DEM)对新西兰兔气管行脱细胞处理,对组织体系结构及机械性能评估,随后用京尼平交联,行生物力学测试及血管再生实验研究.结果 经7个周期DEM脱细胞处理能够获取保存有与原生组织相似的层次结构、机械性能及强烈的血管再生特性的组织工程脱细胞气管.DNA量化结果显示:脱细胞基质中DNA含量为(42.39±6.66) ng/mg,与原生组织的(586.78±53.56) μg/L比较,减少了92.78％ (P＜0.01).与原生样本及脱细胞样本比较,1％京尼平交联气管基质弹性模量明显增加(P＜0.05).与其他样本比较,经1％京尼平交联气管基质能够显著诱导血管生成.结论 7个周期DEM处理能够有效获取长段无免疫原性脱细胞兔组织工程气管.通过京尼平交联能够有效提高脱细胞气管机械性能,且不影响脱细胞气管基质血管生成性能,也不诱发体内炎性反应.
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可诱导性“all-in-one”短发夹结构RNA基因敲减质粒系统构建
目的 构建“all-in-one”可诱导敲减质粒,为慢病毒敲减质粒实验提供一个切实可行的构建质粒的方法.方法 使用特异性限制性核酸内切酶对可诱导性PLKO-Tet-On载体质粒进行剪切,与使用软件设计好的具有黏性末端的短发夹结构RNA的核酸序列进行拼接.拼接后的质粒经过大肠杆菌转化扩增后进行慢病毒包装.获得的病毒对特定细胞进行特定基因的敲减.利用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot等方法对敲减效果进行评估,从而获得敲减效果好的克隆.结果 构建的3组质粒经测序结果表明干扰序列准确插入.以小鼠乳腺癌细胞4T1的性别决定区Y框蛋白2(SOX2)基因敲减效果为例,转染细胞经多氧西林诱导后3组基因在mRNA水平上的敲减效果分别为(83.50 ±7.10)％、(62.30±10.20)％、(77.40±4.57)％;当多氧西林为100 μg/L时,3组干扰RNA在SOX2蛋白水平上敲效果满意.结论 建立药物可诱导性敲减特定基因的短发夹敲减质粒是一种切实可行并且更加严谨的实验方法.
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肿瘤坏死因子预处理减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤
目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)的影响及其机制,以及TNF-α预处理效果是否与剂量有关.方法 将40只Wistar大鼠随机分为4组:假手术组(SO组)仅行开腹及肝门游离;缺血再灌注模型组(IR组)采用Pringle's法阻断肝门30 min,再灌注6h;低剂量TNF-α预处理组(LTPC组)术前30 min给予TNF-α 1 μg/kg腹腔注射,此后操作同IR组;高剂量TNF-α预处理组(HTPC组),术前30 min给予TNF-α2 μg/kg腹腔注射,此后操作同IR组.检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST),采用免疫组织化学法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白和核因子κB(NF-κB) p65蛋白表达,以及肝细胞凋亡指数(AI).结果 与IR组[(642.8±149.3)、(730.6±103.0)U/L]比较,血清ALT、AST水平在LTPC组[(336.8±79.4)、(392.7±109.3) U/L]和HTPC组[(349.8±98.4)、(425.5±101.1) U/L]明显降低(P＜0.05);肝细胞凋亡评分AI降低(P＜0.05),肝组织内bcl-2蛋白阳性表达升高(P＞0.05),而NF-κB p65阳性表达降低(P＜0.05).上述指标在LTPC组与HTPC组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 低剂量TNF-α预处理通过抑制NF-κB p65蛋白表达、激活凋亡抑制基因bcl-2蛋白表达,减轻大鼠HIRI.
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自噬相关蛋白Beclin-1和核因子κB在大鼠呼吸机相关肺损伤中的表达及其意义
目的 探讨机械通气相关性所致肺损伤(VILI)过程中自噬相关蛋白Beclin-1和核因子κB(NF-κB)表达的意义.方法 健康雄性无特定病原体(SPF)级SD大鼠30只,鼠龄7周,体质量200 ～ 250 g,实施麻醉和气管切开术后分别接受不同潮气量(VT)的通气(通气时间均为4h).随机分为以下3组:对照组(A组,仅切开气管保留自主呼吸);常规通气组(B组,VT=10 ml/kg);损伤通气组(C组,VT=40 ml/kg).A组在气管切开即刻,其他组在机械通气结束后放血处死大鼠,Western blot检测肺组织Beclin-1和NF-κB的表达,计算肺湿/于重(W/D)比值、髓过氧化物酶(MPO)活性及肺泡灌洗液中总蛋白含量,光镜下行白细胞计数(WBC).结果 在大潮气量机械通气4h后,肺组织中W/D、总蛋白、WBC计数和MPO水平[6.13 ±0.37、(4.12±0.29) g/ml、(5.89±0.75)×106/L、(6.75±1.18) U/g]均显著增加(P＜0.05);肺组织中Beclin-1、NF-κB表达水平(1.21±0.14、0.47±0.11)均显著增加,且两者呈负相关.结论 自噬能够减轻大鼠呼吸机相关性肺损伤的发生,其机制可能抑制NF-κB的活性有关.
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Desmuslin基因过表达对曲张静脉源性平滑肌细胞增殖及迁移功能的影响
目的 通过Desmuslin (DMN)重组逆转录病毒表达载体感染曲张大隐静脉源性平滑肌细胞(SMCs),观察上调DMN的表达后对SMCs功能的影响,探讨DMN与下肢静脉曲张发生发展的关系.方法 贴块法行曲张静脉源性SMCs原代培养,免疫荧光细胞化学法鉴定SMCs的纯度;分别运用已制备好平均滴度为(2.80±1.46)×106 cfu/ml的pRetroQ-AcGFP1-C1-DMN重组逆转录病毒与pRetroQ-AcGFP1-C1空载逆转录病毒感染SMCs;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot检测转染效率;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测比较SMCs的增殖活性;Transwell技术检测SMCs的迁移活性.结果 免疫荧光细胞化学法显示特异性的平滑肌α-肌动蛋白(α-actin)染色阳性的细胞数占总细胞数的99％以上;DMN过表达组的DMN mRNA水平为空载组的(8.3±1.1)×104倍(P＜0.01),DMN蛋白表达为空载组的(4.5±1.2)倍(P＜0.01);DMN过表达组SMCs增殖活性为空载组的(48.2±4.5)％(P＜0.01);DMN过表达组细胞的迁移活性为空载组的(44.3±4.7)％(P＜0.01).结论 在曲张静脉源性SMCs中上调DMN的表达后显著抑制SMCs的增殖及迁移活性,DMN蛋白可能在下肢静脉曲张的发生发展中起着重要作用.
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氯胺酮预先给药对大鼠呼吸机相关肺损伤的影响
目的 探讨氯胺酮预先给药对大鼠呼吸机所致肺损伤(VILI)的影响及机制.方法 将60只雄性SD大鼠随机分为3组:对照组(C组),不行机械通气;大潮气量组(H组)和氯胺酮组(K组),每组15只.H组和K组接受机械通气,参数均设为:潮气量40 ml/kg,呼吸频率40次/分.K组在机械通气前给予腹腔内注射氯胺酮(10 mg/kg).4h后放血处死大鼠,测定肺湿/干重比(W/D);检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白含量、白细胞总数以及血清和BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-d)水平,Western blot测定肺组织中核因子κB (NF-κB)的表达.结果 与C组比较,在大潮气量机械通气4h后,H组BALF中总蛋白含量、肺W/D值、WBC计数和TNF-α水平[(2.18±0.41) g/ml、5.51 ±0.30、(7.10±1.30)×106/L、(451.69±112.35) ng/L]均显著升高(P＜0.05);肺组织中NF-κB表达水平(0.47 ±0.09)也显著升高;与H组比较,在大潮气量机械通气4h后,H组BALF中总蛋白含量、肺W/D值、WBC计数和TNF-α水平[(0.29 ±0.12) g/ml、4.48±0.24、(2.56 ±0.41)× 106/L、(198.57±59.76)ng/L]均显著降低(P＜0.05);肺组织中NF-κB表达水平(0.33 ±0.08)也显著降低.结论 氯胺酮预先给药能减轻大鼠VILI,其机制可能与降低了肺内炎性细胞因子的释放和抑制了NF-κB通路有关.
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多烯紫杉醇对食管癌EC109细胞增殖、凋亡的影响
目的 观察多烯紫杉醇对食管癌EC109细胞株增殖、凋亡的影响.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测多烯紫杉醇对EC109细胞生长的抑制作用,采用流式细胞仪技术检测多烯紫杉醇对EC109细胞周期和细胞凋亡的影响,Western blot测定多烯紫杉醇对EC109细胞蛋白激酶B(Akt)-1蛋白表达的影响.结果 MTT结果显示多烯紫杉醇作用EC109细胞株后,抑制率随浓度增高而增高(P＜0.05),流式细胞仪检测结果显示,多烯紫杉醇作用于EC109细胞48 h后,G2/M期细胞均显著增多(P＜0.05);细胞凋亡检测结果显示,多烯紫杉醇均能明显诱导EC109细胞凋亡(P＜0.05),多烯紫杉醇10.00 nmol/L组的作用效果佳,Western blot结果显示多烯紫杉醇明显抑制Akt-1蛋白的表达.结论 多烯紫杉醇对人食管癌EC109细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞分裂阻滞于G2/M期,并诱导肿瘤细胞凋亡.
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猪脾射频热凝对机体免疫功能的影响
目的 观察射频保脾及脾切除术后机体免疫功能的改变.方法 使用随机分组的方法将实验用长白猪分为正常对照组(10头)、射频保脾组(10头)、脾切除组(10头).分别于术后1、4、12、24周采静脉血检测机体免疫功能指标:使用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清IgM、IgG、C3、C4水平;使用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞CD4+、CD8+比例.结果 在体液免疫方面,IgM水平在射频保脾术后无明显变化,而脾切除组术后IgM水平显著降低;IgG、C3、C4血浆浓度以及CD4+、CD8+T淋巴细胞比例在术后监测中,各组差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 射频保脾对机体短期内体液免疫功能无明显损害,脾切除术后对机体短期体液免疫功能有损害;而无论是射频保脾还是脾脏切除对机体远期体液免疫功能及细胞免疫功能可能无明显影响.
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地塞米松对骨关节炎软骨细胞增殖、活力影响及乳铁蛋白的干预作用
目的 观察地塞米松(Dex)对人骨关节炎软骨细胞(HACs)增殖力和活力的影响以及乳铁蛋白(LF)的干预作用.方法 体外培养HACs,在浓度为25 mg/L的Dex和不同浓度LF(12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 mg/L)的培养基中培养72 h,采用噻唑蓝(MTT)法测定HACs的增殖力,LIVE/DEAD染色法检测HACs存活力,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和免疫细胞化学染色法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)/ERK基因的表达.结果 Dex显著抑制HACs的增殖力及活力(P＜0.01),并伴随着ERK mRNA和p-ERK/ERK蛋白表达明显下调(P＜0.05).单纯Dex及各浓度LF组均能以浓度依赖方式显著抑制Dex诱发的HACs增殖力下降,各组分别为(38.9±1.3)％、(55.6±3.1)％、(94.4±1.4)％、(111.1±3.2)％、(127.8±2.5)％和(150.0±4.3)％(P＜0.01).12.5 mg/L的LF并未明显促进软骨细胞的存活力(P＞0.05),而25.0～ 200.0 mg/L的LF可以抑制Dex诱发的HACs的存活力下降,各组分别为(73.2±3.7)％、(82.1±5.1)％、(89.1±4.5)％和(95.5±2.9)％(P＜0.01),呈明显的浓度依赖性,同时ERK基因mRNA和p-ERK/ERK蛋白表达的下调得到显著改善(P＜0.05).结论 LF可阻止Dex诱导的HACs增殖力及活力抑制,其作用机制可能与明显上调增殖基因ERK的mRNA和蛋白水平的表达有关.
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指数富集配基系统进化技术筛选三阴乳腺癌适配子中聚合酶链反应扩增条件的优化及单链DNA的制备
目的 优化三阴乳腺癌(TNBC)适配子筛选中单链DNA(ssDNA)文库扩增条件,探讨次级ssDNA佳制备方法.方法 构建ssDNA文库,设置不同的模板量(1012、1011、1010、109、108、107、106、105条带)、循环数(9、12、15、18、21、24、27、30)、DNA聚合酶量(0.025、0.050、0.100、0.200、0.400 U/μl)进行聚合酶链反应(PCR)扩增;对比3种制备次级ssDNA的方法,取其中佳方法进行筛选.结果 20μl体系优扩增条件为:ssDNA模板量108个条带、扩增循环数为12、DNA聚合酶量为0.100 U/μl;不对称PCR法所得ssDNA量多.结论 确立了ssDNA文库优扩增条件及次级ssDNA佳制备方法,为进一步筛选TNBC特异性适配子提供实验基础.
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老鹳草素对成骨细胞增殖和骨保护素表达的影响
目的 观察老鹳草素对成骨细胞增殖和骨保护素(OPG)表达的影响.方法 培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,噻唑蓝(MTT)法观测老鹳草素对成骨细胞增殖能力的影响.免疫细胞化学染色法和原位杂交技术检测老鹳草素对成骨细胞OPG蛋白和mRNA表达的影响.结果 MTT法测得对照组成骨细胞吸光度值为0.777±0.088、10-12 ～ 10-8 mol/L老鹳草素组分别为0.958±0.054、0.943±0.029、0.918±0.070、0.899±0.048和0.793±0.074;与对照组比较,除10-8 mol/L组外,差异有统计学意义(P＜0.01).对照组和10-11～10-8 mol/L老鹳草素组OPG蛋白平均吸光度值分别为0.231±0.022、0.249±0.015、0.255±0.021、0.302±0.025和0.328±0.021;OPG mRNA平均吸光度值分别为0.297 ±0.041、0.307±0.039、0.318 ±0.035、0.394±0.036和0.429±0.050,提示老鹳草素呈浓度依赖性上调成骨细胞OPG表达.结论 老鹳草素具有促进成骨细胞增殖的作用,OPG表达上调可能是其中的机制之一.
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果胶季铵盐衍生物与兔骨髓间充质干细胞生物相容性研究
目的 探讨果胶季铵盐衍生物与骨髓间充质干细胞(BMSCs)的生物相容性.方法 体外培养兔BMSCs,将BMSCs与果胶季铵盐衍生物复合进行体外培养.分别于第3、6、9天检测细胞与材料的黏附性、细胞增殖活性及行碱性磷酸酶(ALP)活性测定.结果 BMSCs能较好的黏附于胶季铵盐衍生物上;增殖检测结果显示,在第3天(实验组0.281±0.003、对照组0.204±0.013)、第6天(实验组0.513 ±0.016、对照组0.583±0.031)时,实验组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),第9天(实验组1.108±0.124、对照组0.645 ±0.049)时两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);在各时间点,ALP活性测定结果实验组明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 果胶季铵盐衍生物与BMSCs有较好的生物相容性,可作为组织工程载体材料应用于骨缺损的修复.
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荷载肿瘤干细胞抗原的树突状细胞对抗肿瘤免疫反应的影响
目的 观察荷载肿瘤干细胞抗原的树突状细胞(DC)疫苗对抗肿瘤免疫反应的影响.方法 通过流式细胞分选法筛选肿瘤细胞中乙醛脱氢酶阳性(ALDH+)细胞;利用无血清培养基中细胞克隆球形成实验和皮下成瘤实验,验证所得ALDH+细胞是否具有肿瘤干细胞特性;然后通过冻融裂解法制备肿瘤干细胞抗原;通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测白细胞介素-12(IL-12)分泌量,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测DC诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对普通肿瘤细胞及肿瘤干细胞的杀伤作用.结果 Hepa1-6 ALDH+细胞所占比例为3.27％,B16 ALDH+细胞所占比例为3.40％;所得ALDH+细胞具有肿瘤干细胞特性;肿瘤干细胞抗原与阴性对照组比较,可使DC分泌更多IL-12(P ＜0.05),能诱导针对普通肿瘤细胞更强的CTL杀伤作用(P＜0.05);肿瘤干细胞抗原与各对照组比较,可以诱导针对肿瘤干细胞更强的CTL杀伤作用(P＜0.05),尤其效应细胞与靶细胞比值(E∶T)为40∶1时,在Hepa1-6和B16两种细胞株中对肿瘤干细胞杀伤率分别达到(56.5±4.6)％和(60.5±5.5)％.结论 荷载肿瘤干细胞抗原的DC可以促进抗肿瘤免疫反应,诱导针对肿瘤干细胞及肿瘤细胞更强的CTL杀伤作用.
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糖尿病大鼠肩关节病理改变及其机制
目的 探讨糖尿病大鼠肩关节病理改变及其形成机制.方法 选取体质量为240～260 g之间的SPF级雄性SD大鼠45只,随机分为两组,即对照组(20只)和模型组(25只).对照组采用维持饲料喂养.模型组持续高糖高脂饲料喂养1个月后,链脲佐菌素(STZ) 30 mg/kg注射诱导建立2型糖尿病模型(T2DM).造模成功后,留取各组大鼠双侧肩关节软骨、滑膜及周围肌肉(包括肌腱)等软组织,行苏木素-伊红(HE)染色,在光镜下观察各部位组织形态学变化;酶联免疫吸附法检测各组血浆及肌肉前列腺素E-2(PGE-2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量;样本碱水解法检测肌腱羟脯氨酸(HYP)的含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测上述指标mRNA的相对表达量.结果 模型组和对照组肩关节出现病理改变的比例分别为76.19％和10.00％,差异有统计学意义(P＜0.05).两组出现病理改变的关节软骨、滑膜、肌腱的镜下特点基本相似,主要变现为关节软骨面粗糙,部分可见细胞外基质浅层裂开,软骨外观呈丝绒状;滑膜肥厚与纤维化,滑膜细胞肥大增生;肌腱中胶原纤维结构疏松而紊乱,部分断裂.模型组血浆及肌肉PGE-2的含量分别为(39.13±7.72)、(42.18±12.73) ng/L,较对照组(18.86±6.35)、(21.39±7.18)ng/L比较均升高(P＜0.05).模型组血浆及肌肉TGF-β1的含量分别为(23.44 ±7.28)、(29.14 ±7.33) μg/L,较对照组(10.58 ±3.52)、(12.43 ±4.56) μg/L比较均升高(P＜0.05).模型组与对照组肌腱HYP的含量分别为(119.42 ±27.18)、(64.19±10.45)μg/g,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).模型组软组织中TGF-β1、PGE-2及HYP mRNA的相对表达量分别为5.78±0.90、8.29±1.76、13.89±3.18,明显高于对照组的1.89±0.27、3.06 ±0.60、7.22±2.05,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 T2DM可导致大鼠肩关节软骨、滑膜及周围肌肉等软组织出现炎性改变及纤维化,与肩周炎肩周软组织自然退变病理特点一致,可认为是肩周炎的成因之一.
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低频超声辐照携链激酶微泡靶向促溶深静脉血栓的研究
目的 探讨低频超声辐照携带溶栓药物的微泡造影剂在体外的溶栓效率及其影响因素.方法 制备全血凝块、超声微泡造影剂和链激酶溶液,低频超声功率选择1.2 W/cm2,连续辐照20 min.实验分为3组:A:对照组,加入2 ml生理盐水;B:单纯链激酶组,加入2 ml链激酶溶液;C:超声+微泡+链激酶组,加入2 ml微泡链激酶溶液,处理完毕后将血块分别称重.结果 溶栓药物不影响微泡稳定性,经超声辐照携链激酶微泡溶栓前后的血块质量组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01),B、C两组比较差异有统计学意义(P＜0.01),其中C组溶栓效率达50.7％.结论 低频超声辐照携链激酶微泡在体外明显促溶深静脉血栓.
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小干扰RNA抑制Vimentin表达对反应性星形胶质细胞的影响及其在胶质瘢痕形成中的意义
目的 观察小干扰RNA (siRNA)干扰波形蛋白(Vimentin)表达对反应性星形胶质细胞的影响并探讨其在中枢神经系统损伤后胶质瘢痕形成中的意义.方法 利用siRNA干扰技术沉默Vimentin表达,转染“#”字法激活的星型胶质细胞,并利用Western blot分析寻找有效的Vimentin沉默靶点,并采用噻唑蓝(MTT)法分别于24、48、72、96 h检测反应性星形胶质细胞.结果 转染效率高的siRNA-Vim为24 h,细胞转染效率＞80％;3条siRNA中siRNA-Vim-3对Vimentin的表达有明显的沉默效应.星形胶质细胞转染48 h后,siRNA-Vim组细胞数明显少于对照组(P＜0.05).siRNA-Vim作用于反应性星形胶质细胞48 h后,反应性星形胶质细胞增殖受到明显抑制,与其他各组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Vimentin对体外实验中的反应性星形胶质细胞增殖有显著的抑制作用,说明其在中枢神经系统损伤后的胶质瘢痕形成过程中起重要作用.
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鞘内注射普瑞巴林复合吗啡对大鼠骨癌痛的镇痛作用
目的 观察鞘内注射普瑞巴林复合吗啡对大鼠骨癌痛的镇痛作用.方法 制备骨转移疼痛模型大鼠20只,随机分为4组(n=5):A组为鞘内注射生理盐水(NS)20 μl;B组为鞘内注射普瑞巴林(PGB) 30 μg;C组为鞘内注射吗啡(Mor)2 μg;D组为鞘内注射普瑞巴林(PGB) 30 μg+吗啡(Mor)2 μg.比较造模、给药后3、7、10d时的大鼠疼痛阈变化.结果 各时间点B组大鼠机械缩爪反射阈值(MWT) [3 d:25.1 g;7 d:25.6 g;10 d:24.9 g]、热刺激缩爪反应潜伏期(TWL) [3 d:(5.3±0.2) s;7 d:(5.2±0.8)s;10 d(5.2±0.4)s],均较A组明显增加(P＜0.05);各时间点C组大鼠MWT[3 d:27.8 g;7 d:28.1 g;10 d:28.7 g]、TWL[3 d:(5.8±0.5) s;7 d:(5.9±0.7) s;10d(5.8±0.4)s],均较A组明显增加(P＜0.05);各时间点D组大鼠MWT[3 d:39.8 g;7 d:40.2 g;10 d:41.1g]、TWL[3d:(9.8±0.7) s;7d:(9.7±0.2) s;10d(10.0±0.2)s],均较B、C组明显增加(P＜0.05).结论 鞘内注射普瑞巴林复合吗啡可提高骨癌痛大鼠的MWT、TWL,对骨癌痛大鼠有较好的镇痛作用.
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XAV939对胃癌细胞株MKN-45的增殖及Wnt/β-连环蛋白信号通路的抑制作用
目的 观察XAV939对胃癌细胞株MKN-45增殖及Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路的作用.方法 检测XAV939对胃癌细胞株MKN-45细胞的增殖抑制作用,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测β-catenin和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1) mRNA表达,Western blot法检测Axin 1、β-catenin、磷酸化β-catenin(p-β-catenin)和Cyclin D1的表达.结果 不同浓度的XAV939对胃癌细胞株MKN-45细胞增殖的抑制率分别是22.5％、39.1％、52.5％、62.1％(P＜0.05);不同浓度的XAV-939处理组的β-catenin、Cyclin D1 mRNA表达下降(分别为0.727±0.031、0.467±0.051、0.353±0.035、0.293±0.031,P ＜0.05;0.690 ±0.161、0.487±0.231、0.360±0.257、0.216±0.197,P ＜0.05),β-catenin、Cyclin D1蛋白表达下降而Axin 1和p-β-catenin蛋白表达上升.结论 XAV-939可抑制以胃癌细胞株MKN-45的增殖,机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin通路.
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硫化氢对2型糖尿病大鼠骨质疏松的作用
目的 应用硫化氢对糖尿病骨质疏松模型大鼠干预,观察硫化氢对2型糖尿病骨质疏松的影响.方法 选取2个月龄的SD大鼠90只进行造模,其中25只设立为正常对照组(A组),29只为糖尿病组(B组),30只为硫化氢处理糖尿病组(C组),在造模成功后的2、4、6周对大鼠进行血糖、糖耐量及骨密度测定.结果 2、4、6周后空腹血糖,C组分别为(12.32±2.89)、(13.32±2.12)、(12.42±2.74) mmol/L,B组分别为(14.71 ±4.87)、(16.71 ±5.39)、(17.71±5.23) mmol/L,C组血糖水平相对于B组空腹血糖的状况改善明显,差异有统计学意义(P＜0.05).2、6周后行骨密度测定,C组分别为(1.52±0.21)、(1.24±0.23) g/cm2,B组分别为(1.12 ±0.10)、(1.03±0.10) g/cm2,B组骨密度明显低于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 硫化氢可以抑制糖尿病所致的骨质疏松.
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血管抑素基因治疗Lewis肺癌移植瘤小鼠的疗效研究
目的 探讨血管抑素基因(PAng)治疗Lewis肺癌移植瘤小鼠的效果.方法 45只Lewis肺癌移植瘤模型的小鼠,根据对肺癌移植瘤小鼠治疗方式的不同将其随机分为3组,每组小鼠15只,分别为A组(空白组)、B组(空白脂质体组)以及C组(PAng组),观察治疗前后肿瘤体积、重量的变化以及比较肺表面转移灶数目和小鼠的平均生存周期.结果 PAng组小鼠治疗21 d后的移植肿瘤体积为(189 ± 20) mm3,与A组(5 324±246) mm3、B组(5 367 ±326) mm3比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);PAng组小鼠治疗21 d后的移植肿瘤重量为(3.54 ±0.48)g,与A组(4.21 ±0.58)g、B组(4.26 ±0.59)g比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);PAng组小鼠治疗后的肺表面转移灶数目为(4.30 ±0.42)个、平均生存周期为(54.6±6.52)d,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用PAng的治疗方式具有比较理想的治疗效果.
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完全腹膜化腹腔内置网片修补兔腹股沟疝的研究
目的 探讨腹腔镜脐正中襞覆盖网片修补兔腹股沟疝手术的安全性和可行性.方法 将健康新西兰雄兔64只随机分成两组,每组32只,一组行完全腹膜化腹腔内置网片修补术(TPIPOM);另一组行腹腔镜腹腔内网片植入术(IPOM),两组于术后第7、15、30、60天各取8只镜下测量两组兔内环口破裂瞬间所能承受的抗压值;切除TPIPOM修补区域,组织切片观察脐正中襞、网片与腹膜组织融合情况.结果 研究期内兔无死亡.术后IPOM组发现肠粘连6例,TPIPOM组未发现肠粘连,差异有统计学意义(P＜0.05).两组兔均未发现肠穿孔、肠坏死、疝复发等并发症.TPIPOM组抗压值在术后第7、15、30、60天均优于IPOM组,差异有统计学意义(P＜0.05).脐正中襞、网片与腹膜融合良好,未出现萎缩.组织切片观察:TPIPOM修补区域愈合符合慢性非细菌性炎症修复过程.结论 腹腔镜脐正中襞覆盖网片修补兔腹股沟疝手术安全、可靠.
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CT门静脉成像三维重建联合彩色多普勒超声用于门静脉高压症犬选择性贲门周围血管离断加食管下段横断术后评估
CT门静脉成像可以显示门静脉系统血管及侧枝血管的情况,彩色多普勒超声可以了解门静脉系统的血流情况.我们通过联合采用CT三维影像重建和超声技术,观察了肝硬化门静脉高压症犬选择性贲门周围血管离断加食管下段横断术后食管下段新生血管及血流变化.
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大鼠脂肪变供肝肝移植模型的建立
我们在Kammada二袖套法[1]基础上,通过40对大鼠脂肪变供肝肝移植的实验,建立了大鼠脂肪变肝移植模型.一、材料与方法1.实验动物:供体为4周龄清洁级雄性SD大鼠40只,高脂饮食30 d,体质量为300 g左右;受体为雄性SD大鼠40只,体质量320 g左右,均购自福建医科大学动物中心.2.脂肪肝模型的建立:100 ～ 110 g大鼠40只高脂饮食30 d建立脂肪肝模型.
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大鼠胃空肠吻合口慢波传导和胃排空的研究
关于胃空肠Roux-en-Y吻合口电活动的改变及其对胃排空的影响报道尚少,本研究旨在建立大鼠模型,探讨胃空肠吻合口慢波传导和胃排空的变化.一、材料与方法1.模型建立[1]:40只SD雄性大鼠(体质量200～ 250 g)随机均分成对照组4周(a组)、实验组4周(b组)、对照组16周(c组)和实验组16周(d组).实验组切除幽门后距Treitz韧带3 cm切断空肠,行胃空肠Roux-en-Y吻合,胃空肠吻合口两侧3 mm处浆膜下各植入铂金微电极1枚.对照组行幽门切断再吻合术,幽门上下植入电极,导线经皮下隧道至项部穿出.
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长骨骨折术后迟发性感染致骨折不愈合的研究
本研究旨在观察血清降钙素元(PCT)和白细胞介素-6(IL-6)在骨科感染诊断中的作用,探讨其作为细菌性感染的敏感标志物在感染导致的长骨骨折不愈合的早期预测作用.一、资料与方法1.研究对象:根据骨折不愈合诊断及排除标准和迟发性感染诊断标准,结合临床症状作出诊断;急性感染根据临床表现和实验室检查明确诊断.骨折按Gustilo-Anderson分类,包括肱骨、桡骨、尺骨等类型.
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主动脉夹层147例治疗分析
主动脉夹层拥有极高的病死率和致残率,其发生发展也有可能和基因相关[1];孙氏(Sun's)手术在治疗A型主动脉夹层,特别是急性、复杂夹层有良好的效果;新型覆膜支架等新技术拓宽了腔内隔绝术(TAVER)的适应证范围.我院收治胸主动脉夹层147例,我们对其进行了相对个体化的治疗,现报道如下.
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负压封闭引流技术治疗感染性糖尿病足
2012年1月至2012年12月,我科采用负压封闭引流(VSD)技术治疗部分糖尿病足患者,现报道如下.一、资料与方法1.临床资料:糖尿病足患者43例(男23例,女20例),平均年龄65岁(40 ～79岁);糖尿病平均病程6年(3个月～ 20年);糖尿病足平均病程60d(7d～2年).空腹血糖水平高值为30 mmol/L,平均(20.42±0.64)mmol/L.入选标准为白细胞计数(WBC)＞10×109/L,踝肱指数(ABI)0.7 ～ 1.5,Wagner分级为3、4级,需脓肿切开引流术控制感染的患者.VSD组与换药组在年龄、糖尿病病程、糖尿病足病程和踝肱指数比较,差异无统计学意义(P＞0.05),具有可比性.
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右美托咪定对大鼠单肺通气时细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12的作用
单肺通气(OLV)可诱发炎性反应、氧化应激等而导致急性肺损伤(ALI),而细胞凋亡在OLV诱导的ALI发生中起关键作用.右美托咪定(DEX)是一种高选择性的α2受体激动剂,可抑制天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspases)介导的细胞凋亡而减轻肺损伤[1].我们建立大鼠原位OLV模型,探讨DEX对大鼠OLV时细胞凋亡及Caspase-12的作用.
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扩大翼点入路手术治疗对冲性颞叶脑挫裂伤85例
我们采用扩大翼点入路手术治疗颞叶脑挫裂伤85例,现报道如下.一、资料与方法1.一般资料:2011年1月至2013年12月收治的本组85例患者中男61例,女24例,年龄14 ～71岁.车祸伤49例,高处坠落伤14例,摔伤22例,着力部位为头枕部或顶枕部.入院时格拉斯哥昏迷评分(GCS)评分3～7分为24例,8 ～12分为45例,13 ～ 15分为16例.所有患者均行头颅CT检查:表现为颞叶密度不均匀的斑片状病灶,均合并蛛网膜下腔出血,28例合并有颞叶血肿,19例合并有硬膜下血肿,16例同时合并有颞叶血肿和硬膜下血肿.
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高压氧对肝外伤手术后恢复的影响
肝外伤是腹部外伤中较常见而严重的损伤,其发生率仅次于脾破裂而居第2位.其中严重肝外伤的伤情复杂,并发症多、病死率高.高压氧治疗已被广泛应用于一氧化碳中毒、坏疽、脑卒中、急性心肌梗死等缺血缺氧性疾病,并取得较好效果.有研究表明高压氧可改善肝外伤术后肝组织的修复.其机制尚未完全明了.本研究旨在探讨高压氧治疗肝外伤术后患者血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)活性的变化和临床意义.
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拓扑异构酶Ⅱα在膀胱癌中的表达及其与蒽环类药物疗效的关系
膀胱癌是我国泌尿系统肿瘤中常见的肿瘤之一,近年,我国膀胱癌发病率正在逐年升高,膀胱癌术后复发率较高,行经尿道膀胱肿瘤电切术(TUR-BT)的膀胱癌患者术后行膀胱灌注蒽环类药物可以降低患者术后肿瘤复发,拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)是蒽环类化疗药物的重要作用分子靶点[1],我们采用液相芯片技术检测膀胱癌组织中TopoⅡα的表达,分析其与各项临床指标的相关性及与蒽环类药物的敏感性.
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控制甲床渗血在仅吻合动脉的指尖再植中的应用
指尖离断是临床常见的手外伤,再植成活后不仅外形好,而且功能满意.2012年5月至2013年5月我们对22例24指指尖离断患者使用了去除整块甲板,控制甲床出血的治疗方案(CNBBP).该方案使用简单,成功率高,现报道如下.一、资料和方法1.一般资料:本组22例24指,男21例,女1例;年龄18～59岁.拇指1指(平均年龄37.5岁),其中示指8指,中指6指,环指4指,小指5指.受伤至再植时间1～6 h.损伤原因:重物砸伤3例,机器绞伤4例,滚筒压伤5例,绳索勒伤5例,刀切伤2例,电锯伤3例.
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甘精胰岛素促进结肠癌细胞增殖的研究
有研究结果显示,甘精胰岛素可能参与肿瘤的发生、发展和转归[1-2].我们研究甘精胰岛素对结肠癌LoVo细胞的影响.一、材料与方法甘精胰岛素保存于4℃.LoVo细胞培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基中,37℃、5％ CO2、相对饱和湿度.细胞外信号调节激酶(ERK)1/2抑制剂PD98059在甘精胰岛素孵育前先作用于LoVo细胞60 min.将生长期LoVo细胞接种于96孔板,24 h贴壁后加入不同浓度甘精胰岛素继续培养48 h加入细胞计数试剂盒(CCK-8)溶液,Bio-Rad酶联免疫检测仪于570 nm波长检测吸光度(A)值.流式细胞术检测凋亡.Western blot 法检测ERK磷酸化水平.SPSS 13.0进行统计学分析,计量资料以均数±标准差表示,组间差异采用单因素方差分析.
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肱三头肌舌形瓣人路与尺骨鹰嘴截骨入路治疗肱骨远端C3型骨折疗效比较
肱骨远端C3型骨折属严重的关节内粉碎性骨折,治疗极为困难[1].2006年8月至2013年8月,我科分别采用肱三头肌舌形瓣入路和尺骨鹰嘴V形截骨入路治疗肱骨远端C3型骨折52例,现报道如下.一、资料与方法1.一般资料:自2006年8月至2013年8月,我科收治52例肱骨远端C3型骨折患者,均为闭合性骨折.男22例,女30例;平均年龄49.2岁.
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新型血管模拟装置在腔内血管外科体外实验中的应用
我们前期成功研发了新型血管体外模拟装置并获批国家实用新型专利(授权号:2010201324467),本课题探讨其用于腔内血管外科体外实验的可行性和安全性,旨在为腔内血管外科提供一种直观、便捷和稳定的体外模拟操作装置.一、材料与方法新型体外血管模拟循环装置为自行设计研发,主要由主动脉血管模型、控制主机和实验操作箱三部分组成,已获批国家实用新型专利(授权号:2010201324467) [1].
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B细胞异位基因-2在大肠癌中的表达及其意义
本研究旨在探讨B细胞异位基因-2(BTG2)在结肠癌中表达及意义,现报道如下.一、材料与方法1.材料:收集2008年1月1日至2013年12月31日期间天津市第五中心医院肛肠外科行大肠癌手术切除标本100例,分为石蜡和冰冻组织.男64例,女36例;中位年龄56岁.另选正常大肠黏膜和大肠腺瘤标本各40例作为对照.
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大鼠慢性移植物血管病变模型的建立
慢性排斥反应是影响心脏移植术后远期生存的重要影响因素,其组织学表现为慢性移植物血管病变.我们通过建立异基因型大鼠间的主动脉移植模型,尝试建立慢性移植物血管病变的动物模型,现报道如下.一、材料和方法1.材料:清洁级雄性大鼠,供体为Wistar大鼠,25只;受体为SD大鼠,25只.体质量250 ～ 300 g之间,均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供.
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一种肠外瘘诊断的方法
肠外瘘是临床较为严重的一种并发症,常发生于肠梗阻术后、胃肠道恶性肿瘤、炎症性肠病、创伤等[1].我们在早期经肠道应用石蜡油促进肠道蠕动功能恢复的过程中,探讨石蜡油对诊断肠外瘘的价值,现报道如下.一、资料与方法1.一般资料:收集2010年5月至2013年5月我院接受治疗的87例患者为研究对象,其中男40例,女47例,年龄19 ～ 67岁;原有疾病:腹部外伤35例,胃肠道恶性肿瘤20例,肠梗阻32例.
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猪全腹腔脏器整体移植术中血液动力学的变化
全腹腔脏器整体移植(MVTx)是指肝脏、胃、胰十二指肠复合体及小肠的串联移植,所有移植器官悬吊于一个由腹腔动脉干、肠系膜上动脉及相应的门静脉引流通道组成的中心主干上,作为一个单元整体植入受体腹腔中.MVTx实验中,出血、血液动力学及代谢的改变是导致实验动物死亡的大原因[1].本研究旨在探讨在猪MVTx实验中对受体猪血液动力学的监测及处理方法.
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芹菜素对PC-3裸鼠移植瘤半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达的影响及其意义
本研究旨在检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白及mRNA表达的变化,观察芹菜素对PC-3裸鼠移植瘤生长和凋亡的影响.一、材料与方法1.材料:雄性BALB/c(nu/nu)裸鼠30只;人前列腺癌细胞株PC-3;R&D公司生产的人Caspase-3酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒;Fermentas公司生产的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒;β-肌动蛋白(β-actin)、Caspase-3引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成.
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股神经阻滞对全身麻醉下全膝置换患者炎性反应的影响
本研究旨在观察股神经阻滞对全身麻醉下全膝关节置换术(TKA)患者围术期血浆中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6水平的影响.一、资料与方法1.一般资料:经我院伦理委员会审核批准,患者或家属签署知情同意书.择期拟行TKA患者40例,性别不限,年龄45 ～ 65岁,体质量指数18 ～ 25 kg/m2,美国麻醉医师协会(ASA)分级Ⅰ～Ⅱ级.排除标准:术前肝肾功能障碍者、合并严重呼吸及循环等系统疾病者.随机分为空白对照组(Ⅰ组)和股神经阻滞组(Ⅱ组),每组20例.
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基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9及其抑制剂-2在诱导多能干细胞来源神经干细胞受损中的表达
神经损伤与细胞外基质(ECM)中基质金属蛋白酶(MMPs)及抑制剂(TIMPs)的调节有关[1].我们通过采用H2O2的刺激在体外造成诱导多功能干细胞来源的神经干细胞(iPSCs-NSCs)的损伤,观察MMP-2、MMP-9和TIMP-2在神经损伤过程中的变化.一、材料与方法1.iPSCs向NSCs诱导分化:将小鼠来源的iPSCs(由中国科学院广州生物医药与健康研究院提供)与成纤维细胞共同培养,细胞铺满瓶底70％后,悬浮培养2d.然后用含1μmol/L维甲酸培养基培养2d后,无血清培养基悬浮培养.待神经球形成后,加入500 μmol/L H2O2,24h后收集细胞检测.
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他达拉非在彩色多普勒超声诊断勃起功能障碍中的应用
阴茎勃起功能障碍(ED)是成年男性的常见病[1].阴茎彩色多普勒超声检查(CDDU)是目前用于诊断血管性ED有价值的方法之一[2].我们将口服他达拉非结合视听性刺激用于阴茎的CDDU诊断,探讨其有效性及安全性.一、资料与方法1.一般资料:本组30例患者,平均年龄(31.03 ±7.24)岁,主诉为阴茎勃起硬度差,或阴茎疲软快,病程均超过3个月.国际勃起功能评分表(IIEF-5)评分均小于22分,血清性激素均位于正常范围.
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RNA干扰下调高迁移率蛋白A2基因表达对人膀胱癌5637细胞增殖和凋亡的影响
高迁移率蛋白A2(HMGA2)是小分子非组蛋白染色体蛋白.HMGA蛋白在多能胚胎干细胞和恶性肿瘤中含量丰富,但在正常体细胞中检测不到或含量很低,说明HMGA2基因参与调控基因转录、DNA修复和胚胎发育等过程[1].我们采用小干扰RNA(siRNA)特异性沉默HMGA2基因在人膀胱癌5637细胞的表达,观察其对5637细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响.
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粪便中Wnt拮抗基因甲基化诊断大肠癌的作用
本实验旨在检测大肠肿瘤患者粪便中SFRPs基因启动子甲基化的状况,探讨其作为大肠癌筛选标志物的可行性.一、资料与方法1.一般资料:粪便样本取自武汉大学中南医院住院患者,包括48例大肠癌患者、35例腺瘤患者和32例增生性息肉患者.大肠癌及大肠良性病变诊断均经手术后病理或内镜活检病理检查证实.选择30名年龄匹配的结肠镜检查阴性的健康人为对照组.所有样本均独立进行粪便潜血试验(FOBT)检测.
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人血清代谢谱检测在胃癌诊断中的应用
目的 探讨应用人血清代谢谱检测诊断胃癌的价值.方法 利用气相色谱联合质谱分析技术,对40例胃癌患者和40例正常对照者的血清代谢谱进行检测.获得的代谢组学数据通过多维统计分析方法建立胃癌诊断模型,并对该模型进行验证.结果 通过气相色谱联合质谱分析共获得44种代谢物,其中包括氨基酸、有机酸、碳水化合物、脂肪酸和类固醇等多种代谢物,利用正交偏小二乘判别分析(OPLS-DA)建模后可以较好地区分胃癌组和对照组(R2Ycum=0.854,Q2cum=0.768,P＜0.05),但不能区别不同TNM分期的各组胃癌(R2Ycum=0.438,Q2cum=0.289,P＞0.05).该模型对于胃癌的诊断敏感性和特异性可达到92％和80％.结论 血清代谢谱检测有助于胃癌诊断.
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关节镜下微骨折治疗膝骨性关节炎临床疗效研究
目的 探讨关节镜下微骨折在治疗膝骨性关节炎的临床疗效.方法 将患者随机分为关节清理组和微骨折组,各40例.关节清理组清理骨性关节炎退变组织,包括游离体、剥脱软骨和骨赘等、髌股关节高压及髌骨活动轨迹异常者行外侧支持带松解,刨削增生的滑膜.微骨折组对软骨破坏裸露区进行磨削后打孔的微骨折技术处理.根据患者临床症状改善程度、美国特种外科医院膝关节评分(HSS膝关节评分)标准综合评定及Tegner运动评级评定治疗疗效.结果 80例均获随访,时间11～15(13.1±0.5)个月,关节清理组显效9例,有效22例,无效9例,有效率为77.5％.微骨折组显效22例,有效15例,无效3例,有效率为92.5％,两组治疗效果比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 关节镜下微骨折较关节清理临床疗效更显著,是一种简便、疗效显著的治疗方法.
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腹腔镜与开放手术阴茎癌腹股沟淋巴结清扫术治疗效果比较
目的 探讨腹腔镜与开放手术治疗腹股沟淋巴结清扫术的效果.方法 遵循随机对照的实验方法,将阴茎癌患者随机分为两组,腹腔镜下腹股沟淋巴结清扫术治疗阴茎癌9例,同期按照经典的腹股沟淋巴结清扫术治疗阴茎癌9例,分析患者患侧、手术方式、原发肿瘤分期及年龄差异均无统计学意义.通过统计学分析手术时间、术中出血量、术后引流管、尿管留置时间、术后住院时间及并发症,比较两种术式的手术效果.结果 两组患者手术均获成功,无中转开放或改变术式者.腹腔镜组与开放组的手术时间分别为(157 ±20)、(127±18) min,术中出血量分别为(23±8)、(21±17)ml,清扫淋巴结分别为(14±6)、(19±6)枚,差异均无统计学意义(P＞0.05);留置引流管时间分别为(47±10)、(161±41)h,导尿管留置时间分别为(92±46)、(175±26)h,术后住院时间分别为(6.0±0.8)、(8.0±0.5)d,差异均有统计学意义(P＜0.05).腹腔镜组1例患者出现穿刺位点愈合延迟,余未发生其他并发症.开放组1例患者左侧切口约2 cm延迟愈合,1例患者左侧出现皮瓣漂浮,加压包扎并制动后愈合.结论 腹腔镜腹股沟淋巴结清扫术是一种安全、可行的手术方式,与开放手术比具有手术时间短、并发症少、恢复快、术后住院时间短等优势,尤其可避免皮瓣坏死、皮下血肿.
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微小RNA-15b在结直肠癌中的表达及其细胞生物学功能
目的 观察微小RNA(miR)-15b在结直肠癌中的表达及其对直肠癌SW480细胞株生物学功能的影响.方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测40例结直肠癌组织及40例相应正常结直肠组织中miR-15b的表达,同时采用瞬时转染技术对SW480细胞株中miR-15b表达进行下调,通过Transwell、噻唑蓝(MTT)及锥虫蓝染色分别检测细胞的迁移、增殖及存活.结果 miR-15b在结直肠癌组织中的表达水平为8.397±1.245,明显高于正常组织的3.201±1.122,差异有统计学意义(P＜0.01).miR-15b在结直肠癌组织中的表达与TMN分期和淋巴结转移有关(P＜0.05).miR-15b表达下调后,细胞的增殖、迁移及生存能力能力明显下降.结论 miR-15b表达与结直肠癌的发生及发展相关,高miR-15b有助于直肠癌细胞的迁移、增殖及存活.
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外周血中乳腺上皮小黏蛋白、人乳珠蛋白表达与乳腺癌预后的关系
目的 探讨外周血中乳腺上皮小黏蛋白(SBEM) mRNA、人乳珠蛋白(hMAM) mRNA的表达水平与乳腺癌预后的关系.方法 利用Nested-逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测92例乳腺癌术后患者,40例非乳腺癌患者外周血SBEM、hMAM mRNA,并对92例乳腺癌患者进行临床随访分析.结果 SBEM、hMAM mRNA仅在乳腺恶性肿瘤外周血中表达,Kaplan-Meier生存分析结果显示:乳腺癌患者外周血中SBEM mRNA阳性表达组生存率47.7％小于阴性组85.1％(P＜0.01),hMAM mRNA阳性表达组生存率46.3％小于阴性组84.0％ (P＜ 0.01),差异有统计学意义.SBEM、hMAM mRNA阳性表达有相关(P＜0.01).结论 外周血中SBEM、hMAM mRNA检测有助于判断乳腺癌预后,两种肿瘤标志物的联合检测提高了检测灵敏度.
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甲胎蛋白阳性和癌胚抗原阳性胃癌的临床病理特征研究
目的 探讨甲胎蛋白(AFP)阳性,癌胚抗原(CEA)阳性胃癌患者临床病理特征及两者联合分析时与胃癌临床病理特征间的关系.方法 分析860例胃癌患者术前血清AFP阳性,CEA阳性者的临床病理特征.结果 与阴性者比较,AFP阳性患者病理分化程度更低(低分化者92.3％比69.5％),分期更晚(Ⅲ±Ⅳ期88.5％比59.9％),淋巴结阳性率更高(80.8％比59.1％),更易浸润神经(46.2％比27.2％,P＜0.05);CEA阳性患者病理分化程度更低(低分化者78.5％比70.4％),肿瘤浸润层次更深(T4者84.1％比59.4％),分期更晚(Ⅲ+Ⅳ期78.5％比55.0％),淋巴结阳性率更高(75.2％比54.5％),更易浸润脉管(34.1％比21.0％)(P＜0.05).联合分析,AFP(+)-CEA(+)、AFP(+)-CEA(-)、AFP(-)-CEA(+)、AFP(-)-CEA(-)在分化程度、临床分期、淋巴及脉管浸润方面差异有统计学意义(P＜0.05).结论 术前血清AFP,CEA阳性与胃癌临床病理密切相关.
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中性粒细胞与淋巴细胞比值变化对肺大细胞神经内分泌癌患者预后的影响
目的 探讨肺大细胞神经内分泌癌患者手术治疗前后外周血中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)对预后的影响.方法 分析28例肺大细胞神经内分泌癌患者临床资料,单因素分析年龄、吸烟指数、病理类型、肿瘤分期、术前术后NLR、和术前NLR/术后NLR比值等对预后的影响,差异有统计学意义的单因素进入Cox回归模型进行多因素分析.结果 单因素分析显示年龄(P＜0.05)、吸烟指数(P＜0.05)、病理类型(P＜0.05)、肿瘤分期(P＜0.05)、术前NLR≥2.5(P ＜0.05)和术后NLR≥3.5(P＜0.05)影响患者预后.Cox回归分析显示肿瘤分期(P＜0.05)、术前NLR≥2.5(P ＜0.05)和术后NLR≥3.5(P ＜0.05)为影响患者术后生存率的独立危险因素.结论 对于接受手术的肺大细胞神经内分泌癌患者,术前术后NLR升高可能提示其预后不良.
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脂联素及其受体在肝细胞性肝癌组织中的表达
目的 探讨脂联素及其受体——脂联素受体1(AdipoR1)、脂联素受体2(AdipoR2)和T-钙黏蛋白(T-cadherin)的表达与肝细胞性肝癌(HCC)临床病理特征的关系.方法 免疫组织化学法检测脂联素及其受体在42例HCC交界组织(含癌组织及癌旁组织)的表达.结果 脂联素(2.88±1.06比5.98 ±0.95)、AdipoR1(2.36±1.38比5.43±1.04)、AdipoR2(2.29±1.55比5.14±1.22)及T-cadherin(2.17±1.34比5.21±1.18)在HCC癌组织中的表达低于癌旁组织,且在伴有癌栓的癌组织中表达亦显著降低.脂联素(2.30±1.16比3.06 ±0.98)、AdipoR2(1.20±1.48比2.63±1.43)在伴卫星灶的癌组织表达低于不伴卫星灶的癌组织;直径＞5 cm的癌组织中T-cadherin表达(1.59±1.33)低于直径≤5 cm的癌组织(2.56±1.23).结论 脂联素及其受体表达下调可能在HCC肝内转移过程中起一定作用.
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结直肠癌患者围手术期血小板和血小板/淋巴细胞比值变化及其与预后的关系
目的 观察手术前后血小板计数(PLT)与血小板/淋巴细胞比值(PLR)变化及其与结直肠癌预后的关系.方法 分析我院260例结直肠癌根治术患者,根据术前PLT和PLR值中位数(分别为216×109/L和138)以及手术前后的变化进行分组,采用单因素分析和Cox回归模型进行生存分析.结果 单因素分析显示术前PLR＜ 138组的生存明显优于对照组(P＜0.05),而在Ⅲ期患者中术前PLT ＜216×109/L或PLR＜ 138者的生存均明显优于对照组(P＜0.05);多因素分析显示术前PLR≥138是结直肠癌的独立危险因素[相对危险度(RR):0.526;95％可信区间(CI):0.324 ～0.854;P＜0.01].结论 术前PLT和PLR可以评估结直肠癌患者的预后,对Ⅲ期患者的预测价值更高.
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黏蛋白1在食管鳞癌中的表达及其与临床病理特征及预后的关系
目的 探讨黏蛋白1(MUC1)在食管鳞癌和正常食管组织中的表达与临床病理特征及预后的关系.方法 采用免疫组织化学法检测76例食管鳞癌组织和19例正常食管黏膜组织MUC1的表达;采用x2检验判断其相关性、Kaplan-Meier法进行生存分析、Log-rank检验判断生存差异性、采用Cox比例风险模型进行多因素分析判定独立预后因素.结果 MUC1在正常食管黏膜仅在细胞膜及部分细胞核微弱表达,而在食管鳞癌组织中,MUC1以细胞核表达为主,部分表达于细胞膜,这与MUC1作为一种跨膜糖蛋白在正常组织中的定位不完全相同.MUC1在食管鳞癌组织与正常食管黏膜组织中表达的阳性率分别为72.4％(55/76)和10.5％ (2/19),两者差异有统计学意义(P＜0.01);食管鳞癌患者中,有、无淋巴结转移者的MUC1阳性表达率分别为86.1％(31/36)和60.0％(24/40),两者差异有统计学意义(P＜0.01).伴有MUC1阳性表达患者的5年生存率为16.4％(9/55),阴性表达患者5年生存率为47.6％(10/21),两者差异有统计学意义(P＜0.01).Cox回归分析显示,N分期(P＜0.01)及MUC1的阳性表达(P＜0.05)是独立的预后不良因素.结论 MUC1在食管鳞癌组织中表达增高且以细胞核表达为主,MUC1与淋巴结转移相关.伴有MUC1阳性表达患者的5年生存率明显低于阴性表达患者,MUC1可以作为评估患者预后的分子生物学指标.
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B7-H1、B7-H3、B7-H4在胃癌中的表达及其临床意义
目的 探讨B7-H1、B7-H3及B7-H4在胃癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学的方法,检测85例胃癌患者手术标本B7-H1、B7-H3、B7-H4的表达,以及它们与各项临床病理特征之间的关系.结果 B7-H1在胃癌患者中的阳性率为68.6％(59/85),其表达与年龄、性别、肿瘤浸润深度、远处转移、分化程度、TNM分期均无明显相关,但与淋巴结转移明显相关(P＜0.05),淋巴结转移组的B7-H1的阳性率高于未转移组(x2=8.594,P＜0.01).B7-H3在胃癌患者中的表达率为5.9％ (5/85),B7-H4的表达率为41.1％ (30/85).B7-H3、B7-H4的表达与年龄、性别、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、分化程度、TNM分期等临床病理特征均无明显相关(P＞0.05).结论 胃癌表达B7-H1水平与淋巴结的转移明显相关,表明B7-H1在胃癌的淋巴结转移有重要作用.
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经内镜黏膜下隧道肿瘤切除术治疗食管固有肌层肿瘤
目的 探讨经内镜黏膜下隧道肿瘤切除术(STER)治疗食管固有肌层肿瘤的疗效及临床应用价值.方法 分析福建省立消化内镜中心经胃镜及超声胃镜证实食管固有肌层肿瘤,按照知情同意原则并接受STER治疗的患者28例,标本予以病理学检查明确诊断,术后随访观察疗效及安全性.结果 28例均由STER完整切除,肿瘤大小1.0～6.0cm,手术时间(黏膜切开至黏膜隧道完全封闭)27 ～115 min,平均71 min,隧道长度为3～8 cm,平均隧道长度为4.3 cm.完整缝合窗口所用金属夹6 ～15枚,平均10枚.完整切除率100％.术后病理检查证实27例为平滑肌瘤,l例为颗粒细胞瘤,切缘均阴性.除1例出现皮下气肿(经保守治疗后愈合),余术后均未出现出血、感染等并发症.术后随访0 ～21个月,无病变残留或复发.结论 STER治疗食管固有肌层肿瘤具有完整切除率高、手术时间短、并发症少等优点.
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细胞核增殖抗原在肾细胞癌组织中的表达及其意义
目的 探讨细胞核增殖抗原(Ki-67)在肾细胞癌组织中表达的临床意义.方法 应用免疫组织化学方法检测Ki-67在70例肾细胞癌组织及30例正常肾脏组织中的表达.结果 肾细胞癌组织中Ki-67表达阳性率为64.29％-Ki-67表达与肾细胞癌分级、分期明显相关(P＜0.05),与肾癌的病理类型无明显相关(P＞0.05).结论 检测Ki-67有助于反映肾细胞癌生物学行为.
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血管紧张素Ⅱ受体在曲张下肢静脉中的表达及临床意义
目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1)和AngⅡ2型受体(AT2)在曲张下肢静脉中的表达及临床意义.方法 收集动脉搭桥手术中采用的正常大隐静脉44例为对照组,下肢静脉曲张52例为曲张组.采用Western blot和间接免疫荧光法,检测正常下肢大隐静脉以及曲张静脉AT1和AT2的表达.结果 AT1和AT2在曲张大隐静脉中的表达(1.0473±0.0732、1.837 5±0.1064)高于正常大隐静脉(0.7560±0.0235、0.944 2±0.567 1,P＜0.05),以AT2表达增高更为显著,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 AT1和AT2的异常表达,可能导致血管重构并参与曲张静脉的发展.
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高迁移率族蛋白B1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在乳腺癌中的表达及意义.方法 收集手术切除的20例乳腺癌患者的乳腺癌组织及其癌旁组织标本,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HMGB1基因的表达.从本院2012年1月至2012年12月手术的乳腺癌数据库中按时间顺序连续选择100例不同分期的乳腺癌组织及癌旁组织蜡块标本,采用免疫组织化学法检测HMGB1蛋白的表达,分析HMGB1表达与乳腺癌临床病理特征之间的关系.结果 与癌旁组织比较,HMGB1在乳腺癌组织中的基因表达量及蛋白表达率均较高,分别15.94±1.42比1.29±0.41、66％比18％(P＜0.01);HMGB1蛋白表达程度与淋巴结转移和组织学分级明显相关(P＜0.05),而与年龄、恶性肿瘤家族史及肿瘤直径无明显相关(P＞0.05).结论 检测HMGB1基因及蛋白水平表达有助于乳腺癌的早期诊断及预后分析.
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神经传导异常在先天性胆管囊肿发病机制中的作用
目的 观察先天性胆管囊肿(CCC)肝外胆道中Cajal间质细胞和神经递质的表达,探讨神经传导异常在CCC发病中作用.方法 随机选取CCC患儿38例,男15例,女23例,所有患儿行囊肿切除、胆道重建术,分别切取CCC囊肿远、近端管壁和胆囊壁作为远端组、近端组和胆囊组.免疫荧光染色检测各组标本中Cajal间质细胞表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测标本中乙酰胆碱和一氧化氮的合成关键酶——胆碱乙酰转移酶(CHAT)和神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达,所有数据应用SPSS 13.0软件进行统计分析.结果 Cajal间质细胞在囊肿远端与近端、囊肿远端与胆囊表达比较差异有统计学意义(P＜0.01),而在囊肿近端与胆囊间差异无统计学意义(P＞0.05).CHAT在近端组(1.39±0.11)、胆囊组(1.32±0.14)表达均少于远端组(1.78±0.21)(P＜0.01);近端组和胆囊组之间差异无统计学意义(P＞0.05).nNOS在近端组(1.64±0.16)、胆囊组(1.60±0.13)表达均多于远端组(1.14±0.11)(P＜0.05);近端组和胆囊组之间差异无统计学意义(P＞0.05).CHAT和nNOS在Ⅰ型CCC远端(1.95 ±0.27、1.14 ±0.12)和Ⅳ型CCC远端(1.81 ±0.08、1.11 ±0.13)表达差异均无统计学意义(P＞0.05);而在Ⅰ型CCC近端(1.04±0.17、1.95 ±0.24)和Ⅳ型CCC近端(1.39 ±0.13、1.70 ±0.20)表达差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CCC肝外胆道不同部位Cajal间质细胞及其调控的兴奋性和抑制性神经递质的表达差异是导致CCC形成的原因之一;两种递质的表达分布异常可能造成不同类型的CCC发病.
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触珠蛋白在甲状腺乳头状癌组织芯片中的表达及临床意义
目的 观察触珠蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达,探讨其在甲状腺乳头状癌发生发展中的作用.方法 构建人甲状腺乳头状癌组织微阵列,采用免疫组织化学方法检测触珠蛋白在112例甲状腺乳头状癌,67例结节性甲状腺肿以及50例正常甲状腺组织中的表达.结果 112例甲状腺乳头状癌组织中触珠蛋白阳性表达率为79％,与结节性甲状腺肿(12％)和正常甲状腺组织(8％)比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结节性甲状腺肿和正常甲状腺组织触珠蛋白的表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 触珠蛋白与人甲状腺乳头状癌发生密切相关,而且对甲状腺乳头状癌的发展起重要作用.
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长链非编码RNA AK054978在胃癌组织的表达及其临床意义
目的 筛选并鉴定胃癌相关长链非编码RNA(LncRNA)在胃癌组织中的表达.方法 利用基因芯片筛选出胃癌组织及配对癌旁组织表达差异的LncRNA,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测目标LncRNA在61例胃癌手术标本中的表达,结合病理特征探讨目标LncRNA的临床意义.结果 LncRNA AK054978在81.97％(50/61)样本中表达上调(P＜0.01),上调水平与胃癌大小(P＜0.01)、组织分级(P＜0.01)、浸润深度(P＜0.01)、淋巴结转移(P＜0.01)、TNM分期(P＜0.01)、脉管神经浸润(P＜0.01)等临床病理特征呈正相关.结论 胃癌组织中LncRNAAK054978的高表达可能与胃癌的发生、发展、侵袭、转移相关.
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新辅助化疗对不同分子亚型晚期乳腺癌的疗效和预后的影响
目的 探讨表阿霉素联合多西他赛的新辅助化疗(NAC)在不同分子分型乳腺癌中的疗效以及预后的影响.方法 收集采用NAC的83例晚期乳腺癌患者的临床资料,分析不同分子亚型和各生物学因子化疗前后的变化与NAC疗效的关系.结果 NAC后总有效率(RR)为81.9％(68/83),病理完全缓解(pCR)为7例(8.4％),临床完全缓解(cCR) 12例(14.5％),部分缓解(PR)49例(59.0％),病情稳定(SD)15例(18.1％),无疾病进展病例.不同分子亚型与NAC疗效相关,各分子亚型之间在pCR、cCR方面差异无统计学意义(P＞0.05).ERBB2+亚型组、Basal-like亚型组的CR和RR优于Luminal亚型组.雌激素受体(ER)、细胞核增殖抗原(Ki-67)化疗前后变化与疗效相关.Ki-67阳性组与阴性组在(pCR+ cCR)和(PR +SD)间差异有统计学意义(P＜0.05).各分子亚型在29个月无病生存率(DFS)和总生存率(OS)方面差异无统计学意义(P＞0.05).不同疗效患者间DFS差异有统计学意义,cCR患者优于PR患者.结论 乳腺癌分子分型可以作为NAC疗效的预测指标,ERBB2+亚型和Basal-like亚型获益更多,ER和Ki-67化疗前后变化与疗效相关,Ki-67高表达可作为预测NAC的敏感性指标,各分子亚型3年内的生存率无差异.NAC达到的不同疗效将会影响患者的无病生存率.
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三维可视化技术指导闭合性肝外伤个体化诊治
目的 研究三维可视化技术在闭合性肝外伤诊治中的临床应用价值.方法 选择2010年6月至2014年6月20例严重肝破裂患者,其中男17例,女3例,年龄19～61岁,平均年龄33.2岁.应用腹部医学图像三维可视化软件对患者肝脏损伤情况进行三维重建,指导闭合性肝外伤的诊治.结果 本组20例患者经三维重建,观察患者出血范围、已形成血肿大小、腹部血管损伤情况,个体化决定治疗方案,患者经治疗恢复良好,住院期间无并发症发生.结论 三维可视化技术可以为闭合性肝外伤提供清晰、可视化的诊断参考,对患者个体化治疗决策的制定具有积极作用.
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数字化导向模板在骨科骨折内固定手术中应用的研究
目的 观察数字化导向模板在骨科骨折内固定术中应用的效果.方法 选取股骨颈骨折患者5例,颈椎骨折患者4例,胸椎骨折患者4例,内踝骨折患者6例,应用Mimics软件,制做各种骨折的个性化模板并应用于这些患者的手术中,观察治疗效果.结果 通过数字化导向模板可以较准确地置入长度、方向适宜的螺钉,减少操作时间及手术风险.结论 通过三维软件可模拟手术操作,提高术中螺钉放置的精确性,值得在手术中推广应用.
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非转移性细胞-5在结肠癌组织中的表达及其意义
目的 探讨非转移性细胞-5(NME5)基因在结肠癌发生发展中的意义.方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测35例结肠癌患者肿瘤组织及癌旁组织NME5基因mRNA的表达水平,通过Western blot以及免疫组织化学法分别检测4例及64例结肠癌患者肿瘤组织及癌旁组织NME5的蛋白表达水平.结果 Real-time PCR结果显示,35例样本中19例(54.3％)样本的癌旁组织中NME5 mRNA的表达水平是结肠癌组织的2倍以上,癌旁组织中NME5mRNA的表达水平(14.61 ±2.63)显著高于结肠癌组织(17.86±1.72,P＜0.05).Western blot结果 显示,4例样本中3例样本的癌旁组织NME5蛋白表达明显高于肿瘤组织.免疫组织化学结果显示,NME5蛋白在正常组织中高表达[70.31％ (45/64)],在肿瘤组织中无表达或弱表达[82.81％(53/64)].NME5的表达水平与肿瘤分期(P＜0.01)和分化(P＜0.01)呈高度负相关.结论 NME5基因在正常组织及早期分化良好的结肠癌组织中较高表达,可能参与抑制结肠癌的发生发展.
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趋化因子CXCL12与其特异性受体CXCR4在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系
目的 通过检测趋化因子受体4(CXCR4)与趋化因子CXCL12在人胃癌组织中的表达,及其与胃癌临床病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测35例正常胃组织、95例胃癌组织中CXCR4、CXCL12的表达,分析两者与临床病理特征之间的关系.结果 CXCR4蛋白在正常胃组织、胃癌组织、淋巴转移癌、肝脏转移癌、腹膜转移癌的阳性表达率分别为0(0/35)、72.6％(69/95)、89.2％ (69/95)、89.4％ (58/65)和100.0％ (14/14);CXCL12蛋白在正常胃组织、胃癌组织、淋巴转移癌、肝脏转移癌、腹膜转移癌的阳性表达率分别为48.6％(17/35)、84.2％(72/95)、69.2％(45/65)、52.6％(10/19)、35.7％ (4/14).胃癌CXCR4、CXCL12蛋白表达与肿瘤大体形态、浸润深度、淋巴管和血管的侵袭、淋巴结、肝脏和腹膜转移明显相关,而与年龄、性别、肿瘤位置和肿瘤大小无明显相关.胃癌组织中CXCR4与CXCL12蛋白表达呈正相关(r=0.509,P＜0.05).结论 CXCR4和CXCL12的阳性表达与胃癌的发生、增殖、生长及转移等生物学行为密切相关.
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体温控制对重型颅脑损伤患者脑脊液S-100B蛋白、乳酸脱氢酶表达及预后的影响
目的 观察温度控制对重型颅脑患者S-100B蛋白、乳酸脱氢酶(LDH)表达及预后的影响.方法 80例重型颅脑损伤患者分为两组:实验组和对照组.对照组常规治疗,实验组在常规治疗基础上施行体温控制,维持在33 ～ 35 ℃.分别于体温控制前和体温控制后1、3、5d收集患者脑脊液标本,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑脊液中S-100B和LDH的蛋白水平.伤后3～6个月随访,进行格拉斯哥预后评分(GOS),判断预后差异.结果 实验组在处理前和第1、3、5天S-100B蛋白水平分别是2.62、2.08、1.39、1.13μg,/L,对照组在处理前和第1、3、5天的S-100B蛋白水平分别是2.58、2.27、1.76、1.41μg/L,实验组在处理前和第1、3、5天的LDH蛋白水平分别是108、76、47、19 U/L,对照组LDH在处理前和第1、3、5天的蛋白水平分别是101、92、66、31 U/L,实施体温控制后的组内比较,S-100B和LDH均逐渐降低,差异有统计学意义(P＜0.05);实施体温控制后的组间比较,实验组S-100B和LDH的蛋白水平低于对照组(P＜0.01);实验组GOS评分为3.79分,对照组评分为2.68分,实验组显著优于对照组(P＜0.01).结论 体温控制可显著降低重型颅脑损伤患者脑脊液中S-100B蛋白和LDH表达水平,减少继发性不良反应的发生,改善预后.
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膝关节假体无菌性松动时滑膜中白细胞介素-17及肿瘤坏死因子-α的表达
目的 观察膝关节假体无菌性松动时关节滑膜中白细胞介素-17(IL-17)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达.方法 实验组选择40例膝关节置换术后翻修的患者,对照组为20例初次行膝关节置换的患者.观察滑膜的镜下病理性改变;应用免疫组织化学及实时定量逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)分别在蛋白质及mRNA水平上检测标本中IL-17及TNF-α的表达.结果 翻修组较初次置换组,滑膜出现以巨噬细胞为主的炎性细胞浸润,实验组中IL-17在蛋白水平的表达(0.10 ±0.01)较对照组中(0.03±0.01)明显增加,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).实验组中TNF-α在蛋白水平的表达(0.13±0.03)较对照组中明显增加(0.05±0.01),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).在mRNA水平,IL-17在实验组中的表达较对照组中的表达增加1.62倍(P＜0.05),TNF-α在实验组中的表达较对照组中的表达增加1.98倍(P＜0.05).IL-17及TNF-α蛋白及mRNA的表达呈正相关(r=0.81、0.63,P＜0.05).结论 IL-17及TNF-α可能参与了膝关节假体的无菌性松动.
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Survivin和p53在乳腺癌中的表达及其临床意义
目的 探讨乳腺癌患者血清中Survivin抗体的阳性率及其与乳腺癌患者肿瘤组织中P53表达的相关性;两者与临床病例诊断及预后因素分析的相关性.方法 对92例乳腺癌患者的血清和肿瘤组织标本,分别应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Survivin抗体的含量,免疫组织化学法检测p53的表达,并将这两种细胞因子与淋巴结转移及临床病理特征进行相关分析.结果 Survivin抗体阳性率为15.00％ (14/92),p53阳性率为34.78％ (32/92).两者与临床病理特征的相关分析结果表明,Survivin抗体和p53高表达与乳腺癌患者淋巴结转移呈负相关(P＜0.05).结论 联合检测Survivin和p53蛋白表达有助于预测淋巴结转移及判断预后.
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丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal 1型基因N34S突变与慢性胰腺炎发病的关系
目的 分析丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal 1型(SPINK1)基因N34S突变在不同类型慢性胰腺炎中的发生率,探讨SPINK1基因突变与慢性胰腺炎发病的关系.方法 采集79例慢性胰腺炎患者及60例健康对照者的血液标本,提取基因组DNA;聚合酶链反应(PCR)对SPINK1基因进行扩增,TspR1酶切进行限制性片段长度多态性分析(RFLP);部分病例PCR产物进行DNA序列分析,证实SPINK1基因N34S突变.结果 共检测到6例SPINKI N34S突变,其中特发性胰腺炎4例,胆源性胰腺炎1例,酒精性胰腺炎1例,自身免疫性胰腺炎及健康对照组未检出该基因突变.结论 SPINK1基因N34S突变在特发性胰腺炎中发生率较高,而胆源性胰腺炎、酒精性胰腺炎和自身免疫性胰腺炎中该突变与健康对照组比较差异无统计学意义,提示该突变与特发性胰腺炎发病相关.
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半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-8对非小细胞肺癌脑转移的预测价值
目的 探讨半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-8在非小细胞肺癌脑转移中的预测价值.方法 采用免疫组织化学方法研究284例手术治疗的非小细胞肺癌患者Caspase-8的表达,利用Kaplan-Meier法评价脑转移发生时间与Caspase-8表达的关系.结果 284例患者中,女104例,男180例;平均年龄(62.5±10.5)岁;中位随访时间29.5个月(12 ～ 108个月),随访期间共有8.1％ (23/284)的患者发生了脑转移.在Caspase-8高表达组脑转移发生率为14.0％ (15/107),而Caspase-8低表达组脑转移发生率仅为4.5％(8/177).单因素和多因素Cox回归模型提示,Caspase-8是肺癌脑转移的独立危险因素.Caspasc-8高表达能够预测早期的脑转移(Log-rank检验,P＜0.05).结论 Caspase-8高表达与非小细胞肺癌患者术后脑转移明显相关,Caspase-8可以作为肺癌脑转移高危患者筛选的标志.
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唑来膦酸与顺铂异序联合应用对肺腺癌A549细胞抑制作用的比较
目的 比较唑来膦酸与顺铂异序联合对肺腺癌A549细胞的抑制作用.方法 按照唑来膦酸和顺铂药物处理的不同顺序将肺腺癌A549细胞分为4组(唑来膦酸和顺铂的药物浓度分别为1.560 0 mmol/L和0.312 5mg/L):(1)A组(对照组):肺腺癌A549细胞常规培养,不作药物处理;(2)B组(同时用药组):同时加入唑来膦酸和顺铂孵育48 h;(3)C组(顺铂+唑来膦酸组):顺铂孵育24 h后,加入唑来膦酸孵育24 h;(4)D组(唑来膦酸+顺铂组):唑来膦酸孵育24 h后,加入顺铂孵育24 h.采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞体外增殖水平;膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙锭(PI)双染色法检测各组细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测各组细胞DNA损伤检查点蛋白调节因子1(MDC1)、DNA切除修复交叉互补基因1(ERCC1)和受体相关蛋白80(RAP80)基因mRNA的表达.结果 A、B、C、D组细胞生长抑制率分别为0、(39.16±4.94)％、(46.94±3.45)％、(38.43±4.84)％,B、C、D组均显著高于A组(P＜0.05),B、D组均显著低于C组(P＜0.05);各组细胞凋亡率分别为(0.53±0.15)％、(32.3±0.50)％、(36.53±0.31)％、(29.33±2.48)％,B、C、D组均显著高于A组(P＜0.05),B、D组均显著低于C组(均P ＜0.05);B、C、D组细胞中MDC1和RAP80基因mRNA的表达(0.374±0.022和1.127±0.018、0.320±0.023和1.036±0.0279.416±0.016和1.181±0.041)均显著低于A组(0.677±0.028和1.548±0.038-P＜0.05),且B、D组均显著高于C组(P＜0.05);各组细胞ERCCl基因mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 顺铂联合唑来膦酸可抑制肺癌A549细胞的增殖,诱导其凋亡,并有顺序依赖性,以顺铂序以唑来膦酸效果更显著;其作用可能与下调MDC1和RAP80基因mRNA表达有关.
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染色体1p/19q杂合性缺失与少突胶质细胞肿瘤临床病理特征的关系
目的 探讨染色体1p/19q杂合性缺失与少突胶质细胞肿瘤临床病理特征的关系.方法 采用荧光免疫原位杂交技术检测73例少突胶质细胞肿瘤1p/19q杂合性缺失,并随访观察预后.结果 少突胶质细胞肿瘤年轻患者(＜ 60岁)1p/19q缺失高于老年患者(＞60岁,P＜0.01);好发部位(额、顶、枕叶)的少突胶质细胞肿瘤1p/19q缺失与其他部位比较差异无统计学意义(P＞0.05),与性别及肿瘤级别均无明显相关(P＞0.05);少突胶质细胞肿瘤患者存在1p/19q联合缺失的中位生存时间为74个月,5年总生存率为72％;仅存在1p缺失者中位生存时间为43个月,5年总生存率为29％;而不存在1p/19q缺失者中位生存时间39个月,5年总生存率为18％.1p/19q联合缺失者中位生存时间长于仅存在1p缺失组,差异有统计学意义(P＜0.05);且1p/19q缺失组中位生存时间也长于1 p/19q未缺失组,差异有统计学意义(P＜0.05).仅存在1p缺失组中位生存时间虽然长于不存在1p/19q缺失组,但差异无统计学意义(Pp＞0.05).结论 少突胶质细胞肿瘤1p/19q缺失与患者年龄明显相关,与患者性别、肿瘤发生部位及肿瘤级别无明显相关;少突胶质细胞肿瘤中染色体1p/19q杂合性缺失对患者的化疗敏感性及预后有关,可以作为分子分型的标准.
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上皮型钙依赖性黏附蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的 观察上皮型钙依赖性黏附蛋白(E-Cadherin)在乳腺癌组织的表达,分析其与乳腺癌临床病理特征的关系,探讨其在乳腺癌中的临床意义.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)方法研究110例乳腺癌患者癌组织标本中E-Cadherin表达,同时回顾性分析E-Cadherin的表达特点与原发肿瘤临床病理特征的关系.结果 乳腺癌组织中E-Cadherin 的表达与乳腺癌患者的年龄相关,E-Cadherin在＜35岁的乳腺癌患者组织中的表达水平低于＞35岁乳腺癌患者(42.9％比64.6％,x2=4.736,P＜0.05).E-Cadherin表达与乳腺癌组织的组织学分级、人表皮生长因子受体-2(Her-2)的表达呈负相关(rs=-0.279,P＜ 0.05;(rs=-0.311,P＜0.05),同时E-Cadherin阳性患者淋巴结转移率显著低于E-Cadherin阴性者(75.6％比35.4％,x2=17.187,P＜0.05),E-Cadherin阳性患者5年生存率显著高于E-Cadherin阴性患者(76.9％比40.0％,P＜0.05).结论 检测E-Cadherin表达有助于评估乳腺癌的生物学特性及预后.
关键词： 乳腺癌 上皮型钙依赖性黏附蛋白 -
人类白细胞抗原-DQA1基因拷贝数多态性与胃癌发生的关系
目的 探讨人类白细胞抗原(HLA)-DQA1基因拷贝数多态性与胃癌易感性的相关性,以及其与幽门螺杆菌(Hp)感染在胃癌发生中的交互作用.方法 利用微阵列-比较基因组杂交定位和AccuCopy多重基因拷贝数检测技术,对53例经病理检查确诊的胃癌患者和50例体检的正常人群的HLA-DQA1基因拷贝数多态性进行检测.利用Logistic回归模型分析HLA-DQA1基因拷贝数多态性与胃癌易感性的关系,以及与Hp感染的交互作用对胃癌易感性的影响.结果 HLA-DQA1基因拷贝数多态性分布和Hp感染阳性率在两组对象中不同,差异有统计学意义(P ＜0.05);HLA-DQA1基因拷贝数＞2型人群胃癌易感性显著增加[比值比(OR)=1.79,95％可信区间(CI):1.13 ～ 3.22,P＜0.05];HLA-DQA1基因拷贝数＞2且Hp感染阳性人群胃癌易感性显著增加(OR=3.31,95％CI:1.69～7.88,P ＜0.05).结论 HLA-DQA1基因拷贝数多态性与胃癌易感性密切相关,而与Hp感染无明显相关,但两者在胃癌发生进展过程中共同发挥交互作用.
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基于iTRAQ的定量蛋白组学分析鉴定下肢动脉硬化闭塞症潜在的血清生物标记物
目的 应用蛋白组学技术检测出有助于下肢动脉硬化闭塞症(LASO)疾病诊断和治疗的生物标志物.方法 收集23例LASO患者和23例健康志愿者的血清,应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)结合二维液相色谱串联质谱(2D LC-MS/MS)技术鉴定LASO患者和正常人的差异表达蛋白,并利用Western blot法进行验证.结果 LASO患者与正常人比较,检测出20种表达量差异2倍以上的蛋白质,其中表达上调的蛋白有12种,下调的有8种.应用Westerm blot法验证高表达的嗅质蛋白-1(OLFM1),LASO患者血清中其表达量要明显高于对照组(2.05±0.66比0.96±0.18,P＜0.01).结论 利用iTRAQ技术鉴定出LASO组与正常组的差异蛋白,可能成为诊断LASO的特异性血清生物标记物,并作为潜在的治疗靶点.
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膜联蛋白A2在肿瘤发生中的研究进展
膜联蛋白A2(ANXA2)是一类钙离子介导的磷脂结合蛋白,分布于细胞核、细胞质以及细胞膜外表面,储钙离子细胞器附近,主要在人类内皮细胞、单核/巨噬细胞、骨髓细胞以及某些肿瘤细胞中表达.Annexin A2广泛参与细胞膜形成、细胞膜的转运、吞噬、吞饮、细胞骨架形成、细胞增殖、分化、凋亡、抗凝、抗炎以及信号转导等多个生物学过程[1].多项研究表明,Annexin A2的表达失调参与到多种肿瘤发生、复发、侵袭转移的过程中,是一种潜在的肿瘤标记物,本文将重点就Annexin A2在恶性肿瘤发生中的研究进展作一综述.
关键词： -
红系核转录因子2-相关因子2和动脉粥样硬化的研究进展
动脉粥样硬化是常见且重要的心血管病理特征之一,可引起全身多系统疾病,其致死致残率远远超过了其他疾病[1].动脉粥样硬化的发生和机体抗氧化防御机制的不足有很大的关系,而在人体的抗氧化防御机制中红系核转录因子(NFE)2-相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路起着很重要的作用.但是也有研究表明Nrf2在动脉粥样硬化中会起到消极作用.因此,明确Nrf2对动脉粥样硬化的作用机制对指导临床治疗有着重要的意义.
关键词： -
阿霉素、卡介苗温敏凝胶膀胱癌灌注疗效研究
目的 探讨表阿霉素(EPI)、卡介苗(BCG)联合温敏凝胶用于膀胱癌灌注治疗的效果及可行性.方法 将大鼠依据是否给予BCG及EPI进行分组,建立大鼠膀胱癌模型,测定治疗前后大鼠体质量、膀胱重量水平以及尿液中肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)的变化,并检测细胞增殖抗原标志物(Ki-67)的表达水平.结果 BCG-EPI组膀胱重量[(101.2±8.2)g]明显低于对照组[(124.7±13.3)g,P＜0.01];10周末,TRAIL浓度EPI-BCG组为(404.24±71.33) ng/L,较对照组[(242.11±77.24) ng/L]明显升高(P＜0.05);EPI-BCG组Ki-67增殖指数为(6.3±2.8)％,较对照组[(13.1±6.9)％]明显降低(P＜0.01).结论 BCG、EPI联合温敏凝胶增强了膀胱组织的免疫应答,治疗效果更加显著和持久,减少了频繁膀胱灌注,为临床上治疗膀胱癌提供了新的思路.
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免疫磁珠法分离膀胱癌CD133+细胞及生物学行为研究
目的 探讨免疫磁珠法分离膀胱癌5637细胞株中CD133+细胞的方法,观察CD133阳性、阴性细胞间生物学行为的差异.方法 采用免疫磁珠法分选出膀胱癌5637细胞株中CD133+细胞,流式细胞仪检测分选纯度,通过噻唑蓝(MTT)实验、平板克隆形成实验、细胞划痕实验、分化能力检测研究其生物学行为.结果 流式细胞仪检测CD133+细胞在膀胱癌5637细胞中比例为1.45％,经免疫磁珠法分选所得CD133+细胞比例为93.45％;CD133+细胞的增殖、迁移能力明显强于CD133-、未分选的肿瘤细胞(P＜0.05);平板克隆形成实验结果示CD133+组[(89.333±4.530)％]细胞克隆形成率明显高于CD133-组[(22.667±4.041)％,P＜0.05].流式细胞仪检测CD133+细胞培养2d后其纯度降至48.19％,4d后其纯度与分选前无明显差异.结论 免疫磁珠分选技术可高效快捷获得CD133+细胞,CD133+细胞具有自我更新、迁徙、生成其他表型肿瘤细胞等干细胞样特性.
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精子相关抗原9在前列腺癌细胞迁移和侵袭中的作用
目的 观察精子相关抗原9(SPAG9)对前列腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)从mRNA水平评估SPAG9在20例前列腺癌与相应的癌旁组织及在人正常前列腺上皮细胞和前列腺癌细胞株中的表达.应用RNA干扰技术下调SPAG9在前列腺癌细胞株PC-3中的表达,采用RT-qPCR和Western blot方法评估SPAG9基因沉默效果.采用细胞划痕实验和Transwell侵袭实验比较SPAG9基因沉默前后细胞迁移和侵袭能力的改变.结果 80％(16/20)的前列腺癌中SPAG9的表达显著高于相应癌旁组织,且SAPG9的表达与Gleason评分(P＜0.05)和TNM分期(P＜0.05)密切相关.SPAG9基因在3种细胞株中从低到高依次为:人正常前列腺上皮细胞RWPE-1、低侵袭性前列腺癌细胞株LNCaP、高侵袭性前列腺癌细胞株PC-3,前两者与后者比较差异均有统计学意义(P＜0.01).特异性SPAG9基因的小干扰RNA(siRNA)能够有效沉默PC-3细胞中SPAG9 mRNA和蛋白的表达,同时在降低PC-3细胞中SPAG9表达后,发现细胞的迁移[(41.19 ±7.50) μm比(10.39±1.75) μm,P＜0.05]和侵袭[(192.50±26.00)个比(98.65±13.90)个,P＜0.05]能力均显著降低.结论 SPAG9基因表达在前列腺癌细胞迁移和侵袭中发挥重要作用.
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缺血再灌注肾损伤微环境影响骨髓间充质干细胞表面CXC趋化因子受体-4表达
目的 观察缺血再灌注(I/R)肾损伤微环境对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)表面CXC趋化因子受体-4(CXCR4)表达及肾保护性细胞因子分泌的影响.方法 制作不同浓度I/R肾损伤组织匀浆,与BMSCs共培养.激光共聚焦显微镜观察BMSCs表面CXCR4受体表达;Transwell实验检测BMSCs向基质细胞源性因子-1(SDF-1)的迁移能力;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测基质细胞源性因子-1α(SDF-1α)、CXCR4、肝细胞生长因子(HGF) mRNA表达.结果 I/R肾损伤匀浆诱导BMSCs表面CXCR4表达明显上升(P＜0.01);该表达可被CXCR4中和抗体所抑制(P＜0.05).CXCR4表达增加后,BMSCs向SDF-1的迁移能力增强[(26.72±5.61)、(30.44 ±6.03)、(38.92 ±6.79)/cm2比(18.47 ±5.02)/cm2,P＜0.01].I/R肾损伤匀浆能够显著上调SDF-1α mRNA表达,但各组间表达差异无统计学意义(P＞0.05).肾损伤匀浆能够显著上调CXCR4mRNA(3.11 ±0.24比2.02 ±0.17,P＜0.01)和HGF mRNA(3.01 ±0.46比1.99 ±0.21,P＜0.01)表达,表达随匀浆浓度增加而升高,升高的表达可被CXCR4中和抗体所抑制(1.86±0.11,1.78±0.22,P＜0.05).结论 I/R肾损伤微环境能够通过提高BMSCs表面CXCR4受体表达促进BBMSCs迁移,活化的BMSCs上调保护性细胞因子表达,形成有利于肾损伤修复的微环境.
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原发性高血压大鼠阴茎海绵体组织中电导型钙激活性钾通道的表达
目的 检测内皮依赖性超级化因子(EDHF)通路关键性物质中电导型钙激活性钾通道(IKCa)在原发性高血压大鼠阴茎海绵体组织的表达,探讨高血压对大鼠阴茎海绵体中IKCa表达的影响.方法 健康雄性原发性高血压大鼠(SHR) 20只及同系正常(WKY)大鼠10只,无创血压仪测量大鼠尾部收缩压(SBP),颈部皮下注射阿扑吗啡(APO)检验大鼠阴茎勃起,将大鼠分为高血压勃起功能障碍组(HBP-ED)、高血压组(HBP)和对照组(Control).运用Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检验大鼠阴茎海绵体中IKCa蛋白和mRNA的表达.结果 SHR组收缩压为(202.43±9.89)mmHg(1 mmHg =0.133 kPa),与WKY组[(127.21±3.48) mmHg]比较差异有统计学意义(P＜0.01),Western blot和RT-PCR显示IKCa蛋白及mRNA在WKY、HBP及HBP-ED组中的表达均呈递减变化,其中HBP-ED组显著低于WKY组(P＜0.01)及HBP组(P＜0.01),WKY组与HBP组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 高血压性勃起功能障碍可能与IKCa在原发性高血压大鼠阴茎海绵体中的表达低下密切相关.
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干扰ALKBH3基因表达对人前列腺癌LNCaP细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用
目的 探讨靶向沉默ALKBH3基因表达对人前列腺癌LNCaP细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响及其机制.方法 建立人前列腺癌LNCaP细胞裸鼠皮下移植瘤模型,瘤体局部注射重组质粒ALKBH3-小干扰RNA(siRNA)作为实验组,空质粒载体为对照组,生理盐水为空白组.绘制移植瘤生长曲线,采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测移植瘤细胞的凋亡,采用免疫组织化学法和Western blot法检测移植瘤组织中ALKBH3、增殖细胞核抗原(PCNA)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的表达.结果 实验组移植瘤的生长速度低于对照组和空白组.TUNEL法检测结果显示空白组和对照组的积分吸光度值分别为460.2±203.5和588.5±241.3,均低于实验组的积分吸光度值(6558.2±1 567.1,P＜0.05).免疫组织化学结果检测显示实验组移植瘤组织ALKBH3蛋白的表达水平(0.26±0.03)低于空白组(0.43±0.07)和对照组(0.48 ±0.06,P＜0.05);实验组移植瘤组织PCNA蛋白的表达水平(0.16±0.02)低于空白组(0.28±0.05)和对照组(0.31±0.05,P＜0.05);实验组移植瘤组织bcl-2蛋白的表达水平(0.31 ±0.05)低于空白组(0.55±0.12)和对照组(0.49±0.11,P＜0.05).Western blot检测结果显示实验组移植瘤组织ALKBH3蛋白的相对表达水平(0.16±0.05)低于空白组(0.78±0.27)和对照组(0.85±0.31,P＜0.05);实验组移植瘤组织PCNA蛋白的相对表达水平(0.13 ±0.02)低于空白组(0.49±0.17)和对照组(0.45 ±0.13,P ＜0.05),实验组移植瘤组织bcl-2蛋白的相对表达水平(0.23 ±0.04)低于空白组(0.41±0.15)和对照组(0.44±0.19,P＜0.05).结论 靶向沉默ALKBH3基因表达可以诱导细胞凋亡,抑制人前列腺癌LNCaP细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,其作用机制可能与抑制PCNA和bcl-2表达有关.
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次黄嘌呤脱氢酶基因多态性与肾移植患者急性排斥反应的关系
目的 观察肾移植患者与霉酚酸(MPA)作用位点相关的次黄嘌呤脱氢酶(IMPDH)基因多态性对急性排斥反应的影响.方法 对105例肾移植患者采用基因测序法进行IMPDH基因多态性检测,并随访统计上述患者移植后1年内急性排斥反应的发生率,按照IMPDH不同基因型分组,分析IMPDH基因多态性与移植后1年内急性排斥反应的相关性.结果 105例患者中,所测3个位点中IMPDH1 rs2278293 GG型35例(33.33％),GA型49例(46.67％),AA型21例(20.00％);IMPDH1 rs2278294 GG型22例(20.95％),GA型49例(46.67％),AA型34例(32.38％);IMPDH2 rs11706052 GA型14例(13.33％),AA型91例(86.67％).单因素分析显示肾移植后1年内IMPDH1 rs2278293、rs2278294位点GG型患者急性排斥反应的发生率明显高于GA+AA型患者,差异有统计学意义(P＜0.05).两位点联合分析显示GG-GG型患者移植后1年内急性排斥反应的发生率更高,与GA+ AA型者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 携带IMPDH1rs2278293、rs2278294的GA或AA型患者移植后1年内急性排斥反应发生率更低,对霉酚酸酯的治疗效果更好.
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去除尼古丁和焦油的香烟烟雾提取物对大鼠睾丸间质细胞氧化应激损伤及睾酮的影响
目的 观察去除尼古丁和焦油的香烟烟雾提取物(CSE)对大鼠睾丸间质细胞氧化应激损伤及血清睾酮的影响.方法 30只SD雄性大鼠随机分为3组:对照组(PBS组)、CSE组及抗氧化组[CSE+还原型谷胱甘肽(GSH)组].60 d后放射免疫法检测血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平;用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性;硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)活性;苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织形态学变化,并用电镜观察睾丸间质细胞和精子细胞的超微结构变化.结果 HE染色结果显示,CSE组曲细精管及间质组织结构无明显改变,但是电镜下CSE组睾丸间质细胞中出现线粒体水肿,线粒体嵴消失及溶酶体增多.与PBS组[T(6.02 ±0.75)μg/L,SOD(38.07±1.39),MDA (0.50±0.066) U/mgprot]比较,CSE组T值[(2.58±0.81) μg/L]、SOD活性[(28.28 ±1.27) U/(mg·prot)]降低,MDA活性[(0.65±0.070) U/(mg·prot)]升高,差异有统计学意义(P＜0.05),对照组与抗氧化组差异无统计学意义(P＞0.05);FSH、LH 3组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 去除尼古丁和焦油的香烟烟雾提取物对睾丸间质细胞的损伤及血清睾酮的影响与氧化应激有关.
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阿托伐他汀预处理通过增加内皮型一氧化氮合酶表达保护大鼠肾缺血再灌注损伤
目的 观察阿托伐他汀预处理对大鼠急性肾缺血再灌注损伤的保护作用,并探讨其可能机制.方法 将18只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组及阿托伐他汀组,在缺血再灌注处理前2周开始对阿托伐他汀组大鼠经腹腔注射阿托伐他汀[20 mg/(kg·d)],假手术组及缺血再灌注组同法给予等量生理盐水.分析再灌注48 h后各组大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、一氧化氮(N0)水平以及其肾脏组织中髓过氧化物酶(MPO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)表达水平.结果 与缺血再灌注组比较,阿托伐他汀预处理可降低BUN(mmoL/L,78.59±10.47比128.54±6.69)及Cr(μmol/L,19.44±9.30比31.44±9.87)水平,增加NO(μmol/L,94.65±10.33比67.50±8.32)水平,减少MPO(U/g,1.25±0.14比1.68±0.12)表达,增加SOD[U/(mg·酶蛋白),139.0±10.6比109.0±4.7]及eNOS表达,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 阿托伐他汀预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤有保护作用,作用其机制可能与eNOS的诱导合成增多,NO产生增多有关.
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URG11在前列腺癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨URG11基因在前列腺癌组织中的表达及临床意义.方法 68例前列腺癌患者临床资料和组织标本,采用免疫组织化学方法观察URG11在前列腺癌组织和良性前列腺增生组织中的表达.结果 前列腺癌组织URG11阳性率为70.6％;对照组阳性率为21.6％,两组比较差异有统计学意义(x2=34.32,Pp＜0.01).URG11在前列腺癌组织的表达强度与Gleason评分、TNM分期呈正相关(r=0.354、0.740,P＜0.05),而与患者年龄无明显相关(P＞0.05).结论 URG1 1在前列腺癌组织中高表达,与前列腺肿瘤的发生、发展密切相关.
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基质金属蛋白酶-2和血管内皮生长因子在肾细胞癌组织中的表达及其相关性
目的 探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在肾细胞癌组织中表达的临床意义.方法 选取70例肾细胞癌组织及同期30例正常肾脏组织,采用免疫组织化学方法检测MMP-2、VEGF的表达.结果 肾细胞癌组织中MMP-2和VEGF阳性表达率分别是65.71％和68.57％,且两者表达呈正相关(P＜0.05).两者表达水平均与肿瘤病理分级及临床分期有关.结论 联合检测MMP-2与VEGF有助于反映肾细胞癌生物学行为.
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京尼平阻断线粒体解耦联蛋白2对激素非依赖性前列腺癌细胞产能及生长的抑制作用
目的 从能量生成角度研究京尼平(Genipin)对激素非依赖性前列腺癌(AIPC)的抑制作用是否与线粒体解耦联蛋白2(UCP2)被阻断有关,并探讨其临床意义.方法 以低、中、高(40、80、120 μmol/L)剂量Genipin干预PC-3细胞培养基48 h,噻唑蓝(MTT)和流式细胞仪检测细胞增殖及凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot检测UCP2表达,荧光探针检测细胞内Ca2含量,分光光度计检测线粒体膜电势(△ψm)、膜通透性转换孔(mPTP)变化及三磷酸腺苷(ATP)含量.结果 Genipin能显著抑制PC-3细胞增殖,其中对照组及低、中、高剂量组细胞凋亡率分别为(7.60±1.48)％、(9.38±1.01)％、(20.77±1.14)％、(23.48±1.99)％,Genipin可降低UCP2表达,此时细胞内Ca2含量明显增加,且mPTP开放程度增加及△ψm减小,ATP生成明显减少,其中对照组及低、中、高剂量组ATP含量分别为(0.120 ±0.015)、(0.110 ±0.013)、(0.080 ±0.007)、(0.050 ±0.008) mmol/L,以上改变均与Genipin浓度呈正相关,且各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Genipin能明显抑制AIPC细胞的增殖,该抑制作用可能与其阻断UCP2,导致线粒体功能异常,ATP生成减少有关.
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微小RNA-143和微小RNA-29a对膀胱癌细胞的影响及其与Ras相关结构域家族1A基因甲基化的关系
目的 观察微小RNA(miR)-143和miR-29a对T24膀胱癌细胞株生长、侵袭能力的影响,并探讨其与Ras相关结构域家族1A(RASSF1A)基因甲基化的关系.方法 化学合成miR-143和miR-29a的模拟物(mimics),并转染T24膀胱癌细胞株.通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)验证miRNA mimics的转染效果.根据转染mimics的不同,分为WT组(不作任何处理的T24细胞)、NC组(转入不含miRNA的mimics的阴性对照)、M1组(转入含miR-143的mimics)、M2组(转入含miR-29a的mimics).利用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率和细胞周期改变,Transwell法检测细胞侵袭能力,RT-PCR和Western blot检测RASSF1A基因转录水平和蛋白质表达,甲基化特异性PCR(MSP)检测RASSF1A基因甲基化状态.结果 RT-PCR证实两组mimics转染成功.WT、NC、M1和M2组的细胞凋亡率分别为2.5％、3.4％、12.4％和13.3％.M1和M2组S期细胞有所增加.NC、M1和M2组细胞侵袭抑制率分别为2.0％、16.5％和13.2％,M1和M2转染组高于NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR和Western blot检测显示,转染miR-29a的M2组RASSF1A基因转录水平和蛋白质含量较NC组增加,但与M1组比较差异无统计学意义(P＞0.05).MSP检测结果显示,WT、NC和M1组RASSF1A基因均呈完全甲基化,M2组呈部分甲基化状态.结论 转染miR-143和miR-29a可使T24膀胱癌细胞株细胞凋亡增加、侵袭能力减弱.转染miR-29a可以部分抑制RASSF1A基因甲基化,从而使该基因转录水平和蛋白质表达增加.
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类固醇生成因子-1表达下调在介导促肾上腺皮质激素对H295R细胞醛固酮和皮质醇急慢性分泌调控中的作用
目的 观察促肾上腺皮质激素(ACTH)刺激人肾上腺皮质癌H295R细胞后对醛固酮和皮质醇的调控影响,并探讨类固醇生成因子-1(SF-1)基因沉默在介导该反应中的作用.方法 用慢病毒包装携带SF-1特异性短发夹RNA(shRNA)序列的载体pLVX-shRNA-SF-1,同时设立阴性及空白对照组,转染人肾上腺皮质癌H295R细胞,转染后48 h应用Western blot和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测SF-1表达水平.设置100 nmol/L ACTH刺激实验组和对照组细胞,检测刺激1h后类固醇急性调节蛋白(StAR) mRNA表达水平,检测刺激48 h后醛固酮合成酶CYP11B2和皮质醇合成酶CYP11B1 mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定同时期醛固酮和皮质醇激素的含量,比较两组细胞醛固酮和皮质醇增幅.结果 实验组细胞SF-1在蛋白水平和mRNA水平分别下降了69％和71％ (P＜0.05).ACTH刺激1h时实验组比对照组StARmRNA表达水平升高1.4倍,两组细胞醛固酮水平分别为(91.59 ±4.28)和(79.90±2.41) ng/L(P＜0.05),但皮质醇水平分别为(23.72±1.50)和(23.74±1.40) ng/L(P ＞0.05).刺激48 h时实验组CYP11B2基因表达水平是对照组细胞的13倍,但醛固酮表达含量分别为(129.50 ±6.87)、(131.52 ±7.56) ng/L(P＞0.05);实验组CYB11 B1 mRNA表达水平仅为对照组细胞的1.18倍(P＞0.05),但皮质醇含量为(28.95 ±1.51)和(33.08±1.67) ng/L(P＜0.05).两种激素在ACTH刺激后对比各自增幅,对照组分别为实验组的1.37倍和1.80倍(P＜0.05).结论 SF-1表达下调可以降低醛固酮和皮质醇对ACTH的敏感性和反应性.
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压力灌注对不同程度积水肾线粒体损伤的影响
目的 观察急性肾盂内压升高对不同程度积水肾线粒体损伤的影响.方法 采用腰大肌包埋法建立新西兰大白兔轻度和重度肾积水模型,轻度积水组分为M0、M1、M2和M3组,重度积水组分为S0、S1、S2和S3组,对应分别以0、20、60、100 mmHg(1 mmHg =0.133 kPa)压力进行肾盂灌注,观察肾组织标本线粒体超微结构改变和线粒体膜电位的变化.结果 轻度积水组经100 mmHg灌注后(M3),线粒体空泡化比例为(66.33 ±4.42)％,JC-1多聚体/单体荧光强度(Q2/Q4)的值为0.36±0.07,和对照组(M0)比较差异有统计学意义(P＜0.05),但M1和M2组变化不明显(P＞0.05);与对照组(S0)比较,重度积水组经60、100 mmHg灌注后(S2和S3),线粒体空泡化比例分别为(85.67±8.61)％和(87.50±5.77)％,Q2/Q4的值分别为0.42±0.07和0.23±0.04,差异有统计学意义(P＜0.05),但S1与SO比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 肾盂灌注压力的升高会导致线粒体空泡化和膜电位降低,不同程度积水肾对肾盂内压升高的耐受能力存在差异.
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丙酮酸激酶M2亚型在肾透明细胞癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)在肾透明细胞癌组织及癌旁组织中的表达及临床意义.方法 收集48例肾透明细胞癌组织及其配对的癌旁组织,采用Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及免疫组织化学的方法检测PKM2在肾透明细胞癌组织和配对癌旁组织中的表达水平,并分析其表达水平与肾透明细胞癌临床病理特征的关系.结果 Westernblot和FQ-PCR结果提示:肾透明细胞癌组织中PKM2蛋白的相对表达量为1.585±0.112,癌旁组织的相对表达量为0.760±0.097.肾透明细胞癌组织中PKM2 mRNA的相对表达量为5.060±0.471,癌旁组织的相对表达量为3.431±0.221.免疫组织化学提示:PKM2的阳性染色颗粒主要位于细胞质内,PKM2在28例肾透明细胞癌组织中高表达(58.33％),在癌旁组织中仅5例高表达(10.41％),提示PKM2在肾透明细胞癌组织的表达强度明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P＜0.05).PKM2在肾透明细胞癌组织中的表达,随Fuhrman分级和TNM分期的增高,有升高趋势.结论 PKM2在肾透明细胞癌组织中高表达,其表达随病理分级和临床分级的的升高呈升高趋势,PKM2可能在肾透明细胞癌的发生、发展中起重要作用.
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微小RNA-129在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞株PC-3增殖的影响
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-129在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞株PC-3增殖的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测37例前列腺癌及其癌旁组织中miR-129的表达.用miR-129模拟物片段(has-miR-129 mimic)转染前列腺癌PC-3细胞,Real-time PCR法检测转染后48 h细胞中miR-129的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)分别检测后续培养0、24、48、72 h后PC-3细胞增殖的变化.结果 前列腺癌组织中miR-129的表达(1.088 1±0.578 5)低于相应的癌旁组织(1.498 6±0.782 8,P＜0.05).has-miR-129 mimic转染后PC-3细胞中miR-129的表达量是对照组的435倍(P＜0.01),后续培养48 h后转染组细胞吸光度值(0.714 7±0.072 1)明显低于对照组(0.878 4±0.057 3,P＜0.05).结论 miR-129在前列腺癌组织中低表达,过表达miR-129可以抑制前列腺癌细胞增殖.
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臭氧氧化预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1/凋亡诱导因子通路的影响
目的 观察臭氧氧化预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)/凋亡诱导因子(AIF)通路的作用.方法 将30只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和臭氧氧化预处理组,每组10只,进行如下实验:(1)假手术组:切除大鼠右肾后缝合腹壁;(2)缺血再灌注组:切除右肾后,用无创伤血管夹夹闭左肾动、静脉45 min进行缺血,然后开放血管夹进行再灌注;(3)臭氧氧化预处理组:手术步骤与缺血再灌注组相同,但在术前15d内,每天对该组大鼠经直肠吹入氧气和臭氧的混合气体5.0 ～5.5ml[臭氧浓度为50 mg/L,1.0 mg/(kg·d)].全自动生化分析仪检测大鼠血清肌酐和尿素氮,观察大鼠肾组织的病理改变和细胞凋亡,免疫组织化学法检测PARP-1/AIF的表达,Western blot检测PARP-1、AIF的含量.结果 假手术组、缺血再灌注组和臭氧氧化预处理组的血清肌酐(μmol/L)和尿素氮(mmol/L)分别为19.34±2.27、130.18±23.48、70.91±15.69;7.52±1.98、28.81±10.62、16.54±6.18,苏木素-伊红(HE)染色可见臭氧氧化预处理可以明显减轻因缺血再灌注导致的肾小管上皮细胞变性坏死.与假手术组比较,缺血再灌注组和臭氧氧化预处理组PARP-1、AIF水平均显著升高,而臭氧氧化预处理组的上述指标又明显低于缺血再灌注组.假手术组、缺血再灌注组、臭氧氧化预处理组大鼠肾组织的细胞凋亡指数分别为(3.87±1.50)％、(32.45±4.70)％和(23.47±3.10)％,3组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 臭氧氧化预处理能减轻大鼠肾脏IRI损伤,其机制可能与臭氧氧化预处理抑制细胞凋亡通路PARP-1/AIF的表达有关.
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pRV-Display-NY-ESO-1真核表达质粒的构建及其在Myc-CaP细胞株中的稳定表达
目的 构建pRV-Display-NY-ESO-1真核表达质粒,建立并检测稳定表达纽约人食管鳞状细胞癌抗原(NY-ESO-1)的Myc-CaP细胞株.方法 从Genbank查找NY-ESO-1基因全长序列,聚合酶链反应(PCR)扩增目的片段,克隆至pDisplay载体,构建pDisplay-NY-ESO-1真核表达质粒,双酶切证实NY-ESO-1插入后,PCR扩增并定向连入pRV载体,构建pRV-Display-NY-ESO-1真核表达质粒,同时构建pDisplay-绿色荧光蛋白(GFP)作为阳性对照.经酶切、测序鉴定后,用Phoenix细胞产生逆转录病毒,脂质体转染法将重组质粒转入Myc-CaP细胞,并用Western blot和流式细胞术鉴定稳定转染的Myc-CaP细胞中NY-ESO-1的表达.结果 经PCR、测序鉴定成功构建pRV-Display-NY-ESO-1真核重组质粒.表达GFP的Phoenix细胞和Myc-CaP细胞在倒置荧光显微镜下均可见绿色荧光.Western blot检测Myc-CaP细胞中NY-ESO-1表达阳性,流式细胞术鉴定携带目的基因的Myc-CaP细胞纯度均大于80％.结论 pRV-Display-NY-ESO-1真核重组质粒稳定高表达于Myc-CaP细胞.
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应用自制装置建立微侵袭小鼠急性脊髓损伤模型
目的 构建自制的脊髓打击仪以及简易棘突间的牵开及稳定装置,探讨利用其建立保留椎板微侵袭小鼠急性脊髓损伤模型的可行性.方法 利用电动推杆、压力传感器等制备脊髓打击仪及棘突间的牵开稳定装置;将32只成年雌性KM小鼠随机分成4组,利用上述装置分别以无打击(0 g)、轻度(5 g)、中度(10 g)、重度(20 g)打击力建立保留椎板的小鼠脊髓损伤模型.术后12 h每组随机取2只小鼠行脊髓损伤区苏木素-伊红(HE)染色病理切片,并在术后1、3、7、14d行小鼠后肢运动评分(BBB评分).结果 成功制造了脊髓打击仪及简易棘突间牵开稳定装置,并建立了保留椎板的微侵袭小鼠脊髓损伤模型;脊髓损伤的病理学检查结果及后肢运动评分在不同打击力度下差异有统计学意义(P＜0.05).结论 应用自制的装置可建立稳定、可靠的保留椎板的微侵袭小鼠脊髓损伤模型,有助于脊髓损伤研究的进一步开展.
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前列腺癌实验研究现状与展望
前列腺癌是全世界范围内危害男性健康的主要疾病之一.前列腺癌的自然病史相差很大,既可以终身无任何症状,亦可表现出高度侵袭性,很快发生转移.对于已发生转移的进展性前列腺癌,内分泌治疗是标准治疗方式,然而经过一段时间的内分泌治疗后,几乎所有的前列腺癌都会进展为激素非依赖性前列腺癌.目前对于激素非依赖性前列腺癌尚无有效治疗方法,其预后都很差.
关键词：
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
