中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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阻抑结缔组织生长因子表达对瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响
目的 观察结缔组织生长因子(CTGF)RNA干扰对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)增殖以及I型胶原合成的影响.方法 设计合成3条CTGF小干扰RNA(siRNA)序列并克隆到pRNAT-6.1/Neo载体中;实时定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测KF中CTGF和I型胶原的表达,计算KF细胞数目.结果 合成的3个CTGF siRNA载体中CTGF siRNA3的干扰效果强,将CTGF mRNA的相对表达量从3.13±0.17降至0.71±0.02,并能将KF中的I型胶原的mRNA水平从2.04±0.10降至0.60±0.04(P<0.01).KF对照组5 d的细胞数目为(10.50±0.25)×10~4,而CTGF siRNA3组5d的细胞数目为(6.83±0.29)×10~4(P<0.01).结论 CTGF RNA干扰能抑制KF的CTGF表达,产生抑制I型胶原合成和细胞增殖的生物学作用.
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肝细胞性肝癌及门静脉癌栓差异表达蛋白质组分析及意义
目的 观察人肝细胞性肝癌(HCC)及门静脉癌栓(PVTT)组织蛋白质表达谱的改变,筛查在转移中起重要作用的关键蛋白质分子.方法 用双向凝胶电泳(2-DE)对3对HCC组织及PVTT组织的总蛋白质进行分离,两组间差异蛋白点用质谱和数据库搜索鉴定,并用组化和荧光定量聚合酶链反应(PCR)进一步验证.结果 鉴定出10个差异表达蛋白,包括Ki-67、MTH-SP75、NM23等.对在M组织中表达显著增高的Ki-67,应用组化和荧光定量PCR检测出两组间存在差异并且在HCC组织中Ki-67的表达与PVTT呈正相关.结论 HCC转移与多种蛋白有关,其中Ki-67高表达可能在肝癌转移中起重要作用.
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结直癌组织中GP-96肽复合物的提取纯化和体外免疫效应
目的 建立从人结直癌组织中提取gp-96肽复合物方法,并检测体外免疫效应.方法 采取三步蛋白纯化法,即硫酸铵沉淀法、ConA亲和层析法、阴离子交换蛋白亲和层析法,从10例结直癌组织提取、纯化gp-96肽复合物;SDS-PAGE和Western blot鉴定gp-96肽复合物;检测GP-96肽复合物的体外免疫效应.结果 该方法提取的蛋白质经SDS-PAGE和Western blot鉴定,证实是gp-96肽复合物,蛋白质得率为50μg/g;体外免疫效应分析:肿瘤组中gp96肽复合物组肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度为(801.54±109.25)ng/L,与阳性对照组(509.17±65.34)ng/L、阴性对照组(156.19±32.08)ng/L比较明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);健康人对照组与肿瘤组比较,gp96肽复合物组比较差异有统计学意义(P<0.01).肿瘤组中gp96肽复合物组IL-10浓度为(95.71±17.55)ng/L,与阳性对照组(334.55±69.00)ng/L、阴性对照组(205.75±42.04)ng/L比较,差异有统计学意义(P<0.01);健康人对照组和肿瘤组比较,sp96肽复合物组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 使用该方法提取结直癌组织中gp-96肽复合物具有操作简单、重复性好、获得率高、体外免疫效应强等特点.
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自噬相关基因Beclin1和MAPLC3在乳头状甲状腺癌的表达及意义
目的 检测人甲状腺乳头状癌标本中自噬相关基因Beclin1和微管相关蛋白轻链3(MAPLC3)的表达,并探讨其意义.方法 采用 Western blot方法检测甲状腺乳头状癌(PTC)组织和甲状腺良性疾病组织中以及正常甲状腺组织中Beclin1和MAPLC3蛋白的表达.结果 Westernblot检测Beclinl在甲状腺乳头状癌的相对表达量为3.05±0.43,与甲状腺良性疾病组织(5.48±0.63)和正常甲状腺组织(5.93 ±0.88)中的相对表达量比较差异有统计学意义(F=205.30,P<0.05);MAPLC3在甲状腺乳头状癌的相对表达量为2.17±0.37,与甲状腺良性疾病组织(3.18 ±0.49)和正常甲状腺组织(3.55±0.53)中的相对表达量比较差异有统计学意义(F=91.53,P<0.05).结论 Bedim和MAPLC3蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达明显低于甲状腺良性疾病组织以及正常甲状腺组织,表达的差异有统计学意义.自噬相关基因在甲状腺癌组织中的表达下降,可能与甲状腺癌的发生、发展相关.
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核因子-κB反义寡核苷酸对肝纤维化小鼠肝组织核因子-κB活性和病理改变的影响
目的 应用核因子(NF)-κB反义寡核苷酸(ASON)治疗肝纤维化小鼠模型,观察NF-κB p65 ASON对小鼠肝组织NF-κB活性和肝纤维化程度的影响,探讨NF-κB p65 ASON治疗肝纤维化的可能机制.方法 实验小鼠分组:正常组(8只)、肝纤维化模型组(8只)、反义寡核苷酸(NF-κB p65 ASON)治疗组(8只)、正义寡核苷酸(SON)治疗组(8只)、错义寡核苷酸(MSON)治疗组(8只)、NF-κBp65 ASON对照组(8只)、SON对照组(8只)和MSON对照组(8只);采用凝胶迁移率变动分析(EMSA)检测NF-κB DNA结合活性;病理切片(Masson染色)评价肝纤维化小鼠模型肝纤维化程度.结果 NF-κB p65 ASON治疗组小鼠肝组织NF-KB活性(12411.75±502.78)、肝纤维化病理积分(1.13±0.64)比模型组(16 346.88 ±449.05、2.88±0.64)明显降低,差异有统计学意义(P<0.01).soN治疗组(16460.38±575.26、2.75±1.17)和MSON治疗组(15 959.25±746.27、3.00±0.53)的NF-κB活性、肝纤维化病理积分与模型组比较差异无统计学意义(P>0.01).结论 NF-κB p65 ASON能显著抑制小鼠肝组织的NF-κB活性,降低肝纤维化程度.
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淋巴细胞P-gp表达水平对他克莫司免疫抑制作用的影响
目的 观察在不同P-gp表达水平的状况下,他克莫司对PHA刺激的淋巴细胞活化及IL-2产生的抑制作用.方法 以健康人P-gp水平(14.5%)为对照,收集78例移植患者术后淋巴细胞样本,分为低表达组(15%～20%)和高表达组(20%).有丝分裂原PHA刺激淋巴细胞转化以淋巴细胞分裂指数和白细胞介素(IL)-2为指标,观察他克莫司对不同p-gp水平淋巴细胞活化的抑制作用.结果 他克莫司浓度在(5～10)ug/L之间,可明显抑制PHA刺激的健康人淋巴细胞的增殖反应(25%)和IL-2的产生(15 ng/L);P-gp低表达组的淋巴细胞,其增殖指数和IL-2的产生可分别为30%、15 ng/L,与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);p-gp高表达的淋巴细胞,其分裂指数和IL-2产生可分别达40%-50%和(30～35)ns/L,与正常对照组和低度表达组差异有统计学意义(P<0.05).应用P-gp特异的功能抑制剂维拉帕米后,各组间淋巴细胞活化率和IL-2的产生差异无统计学意义(P>0.05).结论 淋巴细胞P-gp表达水平的增高,可通过降低细胞内的他克莫司浓度,减弱他克莫司对淋巴细胞的免疫活化抑制作用.
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Hedgehog信号通路对肝星状细胞激活和增殖的影响
目的 观察Hedgehog信号通路在肝星状细胞(HSC)中的表达情况及Hedgehog信号通路对HSC激活和增殖的调控作用.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测大鼠HSC细胞株rHSC-99中Hedgehog信号通路各成分的表达.构建含Ihh、Smo、Gli2的干扰片段的质粒,分别转染HSC,用SYBR Green荧光定量PCR的方法检测转染后Ihh、Smo、Gli2的表达,Western blot方法检测HSC中α-SMA表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测转染后HSC细胞培养上清中I型胶原含量的变化,用噻唑蓝(MTT)比色法检测转染后HSC的增殖情况.结果 Hedgehog信号通路中Ihh、Smo、Ptc、Gli2、Gli3在HSC中表达;荧光定量PCR结果显示转染含Ihh、Smo、Gli2的siRNA质粒后的HSC中相应基因Ihh、Smo、Gli2的mRNA表达明显下降(0.254±0.130、0.221±0.150、0.235 4±0.110比1,P<0.01);Western blot结果显示HSC中α-SMA表达明显下降(0.191±0.014、0.357±0.021、0.086±0.016比1.143±0.017,P<0.01);EHSA结果显示转染后的HSC中I型胶原分泌明显减少(22.9 4±2.0、16.4±1.4、17.6±1.8比40.7±4.3,P<0.01);MTT结果显示细胞增殖受到抑制(0.204±0.019、0.226±0.014、0.228±0.015比0.412±0.016,P<0.05).结论 HSC表达Hedgehog信号通路中的Ihh、Smo、Ptc、Gli2、Gli3,下调Hedgehog信号通路可以抑制HSC激活和增殖.
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中间纤维对兔关节软骨细胞基质合成代谢的影响
目的 观察细胞骨架中间纤维破坏对培养的兔关节软骨细胞基质合成代谢的影响.方法 1个月龄新西兰白兔,无菌条件下切取双膝关节软骨,酶解法分离软骨细胞,接种于6孔板培养待细胞贴壁后弃去培养液并随机分为2组.对照组用DMEM/F12正常培养,中间纤维破坏组(简称IF破坏组)利用含5 mmoL/L丙烯酰胺的DMEM/F12培养,使细胞骨架中间纤维破坏.分别在换液后第4天和第7天以阿尔新蓝法检测2组细胞上清液中糖胺多糖(GAG)含量,同时检测上清液中羟脯氨酸含量以评估2组细胞胶原的合成量.结果 两组软骨细胞在换液后第4天和第7天时上清液中GAG含量差异无统计学意义(P>0.05);但2组上清液中GAG含量均随培养时间的延长而升高(P<0.05).IF破坏组上清液中羟脯氨酸含量在换液后第4天时与对照组差异无统计学意义(P>0.05),而第7天时明显低于对照组(P<0.05);对照组第7天上清液中羟脯氨酸含量较第4天有增高趋势,但统计学检验差异无统计学意义(P>0.05),而IF破坏组第7天上清液中羟脯氨酸含量与第4天相同.结论 软骨细胞GAG的合成具有时间累积效应,破坏中间纤维对软骨细胞GAG的合成没有影响,而破坏中间纤维可降低离体培养的关节软骨细胞羟脯氨酸的合成,表明中间纤维在软骨细胞胶原的合成中有着重要作用.
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藤黄酸对膀胱癌细胞株BIU-87生长的抑制作用
目的 探讨GA(藤黄酸)对膀胱癌细胞株BIU-87生长的抑制作用及其机制.方法 分别以倒置相差显微镜、噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术观察GA对BIU-87的形态学改变作用、生长抑制效应、凋亡诱导以及周期阻滞作用.结果 倒置相差显微镜观察发现,GA作用后BIU-87细胞变圆、脱壁,部分死亡、漂浮;MTY法显示,GA对BIU-87具有明显的生长抑制作用,并随着药物浓度的增加(0～3 μmol/L)而逐渐增强,IC50为1.7μmol/L;流式细胞术检测发现,GA浓度为1.5、3.0μmol/L时凋亡率分别为(34.6±5.2)%和(58.6±6.9)%,显著高于对照组的(2.2±0.8)%;GA浓度为0、1.5、3.0 μmol/L,作用48 h后,G_0～G_1期细胞数分别是(35.0±1.2)%、(35.0±1.5)%、(46.0±3.1)%;而S期细胞比例分别为(33.5±0.7)%、(34.1±0.6)%、(15.6±3.3)%,并呈剂量依赖性阻滞BIU-87细胞周期于G_0/G_1期.结论 GA对BIU-87细胞有明显生长抑制作用,这可能与诱导BIU-87凋亡、阻滞其细胞周期进程有关.
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bcl-2及其重要功能结构域在调节成纤维细胞NIH3T3凋亡中的研究
目的 以成纤维细胞NIH3tT13作为细胞模型,探讨bel-2 Loop Domain结构域在成纤维细胞凋亡中的作用地位.方法 构建正常和Loop Domain结构域突变bcl-2基因的真核表达质粒,用于成纤维细胞转染;脂质体介导,分别将(1)空载体质粒(2)携带bcl-2基因质粒和携带突变基因的质粒转染成纤维细胞(NIH3T3),转染后用肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激NIH3T3细胞诱导凋亡,应用流式细胞仪(FCM)检测各组细胞凋亡,应用华联小鼠全基因表达谱芯片检测各组细胞基因表达谱的变化.结果 成功构建bcl-2基因和Loop domain中突变的真核表达载体;成功将携带突变基因、野生基因的质粒转染入NIH3T3细胞;各组转染后用TNF-α刺激细胞诱导凋亡,FCM检测发现,TNF-α刺激细胞17 h后,NIH3T3未转染细胞凋亡明显增加,细胞凋亡率为(53.18 ±8.18)%,NIH3T3转染野生型bcl-2质粒组与NIH3T3未转染细胞组比较细胞凋亡率明显下调;NIH3T3转染突变bcl-2质粒组与NIH3T3未转染细胞组比较细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);NIH3T3转染野生型bcl-2质粒组与NIH3T3转染突变bcl-2质粒组比较细胞凋亡率明显上调;基因芯片检测发现:转染bcl-2基因的NIH3T3细胞凋亡基因与转染空质粒组下调,转染Loopdomain突变的真核表达载体的NIH3T3细胞凋亡基因比转染bcl-2基因的NIH3T3细胞上调.结论 证实bcl-2基因Loop domain结构域突变对bcl-2基因功能产生明显影响,bcl-2基因Loop domain结构域突变使NIH3T3细胞凋亡产生明显变化.
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Wnt激活剂SB-216763对软骨细胞的作用
目的 观察Wnt激活剂SB-216763对于软骨细胞的作用.方法 将兔关节软骨细胞与SB-216763共同培养,采用免疫细胞化学染色检测SB-216763对于软骨细胞表达β-catenin的影响和分泌Ⅱ型胶原的能力,以噻唑蓝(MTT)比色法检测软骨细胞的增殖活性、用Alcian blue染色法检测软骨细胞分泌硫酸化糖胺聚糖的能力.结果 与SB-216763共同培养的软骨细胞,核βcatenin表达阳性者较对照组明显增多(28.00±2.76比18.17±2.14,P<0.01)、增殖活性显著增强(P<0.01),但Ⅱ型胶原的分泌受到抑制,硫酸化糖胺聚糖分泌显著减少(P<0.01).结论 SB216763可以作为Wnt信号通路的激活分子,其激活Wnt信号通路后促进软骨细胞的增殖,但抑制软骨细胞分泌Ⅱ型胶原和硫酸化糖胺聚糖.
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液体复苏对重症急性胰腺炎早期体液代谢的影响
目的 观察不同剂量和张力液体复苏对重症急性胰腺炎早期体液代谢的影响.方法 取杂种犬60条随机分为4组,每组5条犬,研究设计为2×2析因实验设计,给予不同补液剂量,分别按50ml/kg和100ml/kg,每种补液又分两种补液张力(等张和高张)进行液体复苏,采用自身胆汁逆行主胰管注射法制模.制模后第1～3天每日补液,测定血浆钠离子浓度、血浆醛固酮激素(ALD)水平,记录出量和体液隔离量.结果 低剂量补液血浆钠离子浓度下降程度轻、出量减少和血浆醛固酮激素水平升高,在第3天差异均有统计学意义(P<0.05);高剂量补液可使出量增加,血浆钠离子浓度和血浆醛固酮激素水平也明显下降,但并未减少体液隔离量,反而导致体液在体内储留.高张力补液在补液剂量相同的前提下增加出量,能减少体液隔离量,并能提高晶体渗透压和降低醛固酮的水平,在第3天差异均有统计学意义(P<0.05).结论 补液剂量和补液张力均对SAP体液代谢产生影响,补液量大,能使机体丢失的体液得到及时补充,但易发生血浆晶体渗透压下降和体液隔离量增大;高张力补液不仅增加出量,同时能提高血浆Na离子浓度,避免血浆晶体渗透压降低.
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吡咯烷二硫代氨基甲酸酯治疗大鼠骨关节炎
目的 观察吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对大鼠骨关节炎(OA)形态学的影响,探讨PDTC用于OA治疗的可能性.方法 通过前交叉韧带切断的方法建立大鼠OA动物模型,将20只大鼠动物模型分为实验组(10只)和对照组(10只),于造模后每隔48 h肌肉注射PDTC10 ms/ks,对照组仅肌注PDTC的载体生理盐水0.1 ml,术后6周后处死大鼠,进行大体观察和光镜观察,比较两组差异有统计学意义.结果 注射PDTC的实验组大鼠软骨的软骨大体评分明显优于对照组,实验组和对照组的Mankin's评分分别为5.70±1.70,8.20±2.10,两者间差异有统计学意义(P<0.05).结论 PDTC能有效延缓实验性OA软骨的退变过程.
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人乳腺癌组织中血小板活化因子的表达及临床意义
目的 观察人乳腺癌组织血小板活化因子(PAF)的表达.方法 应用免疫组织化学染色检测PAF在10例晚期乳腺癌及其癌旁正常组织中的分布和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析PAF受体mRNA表达水平.结果 90%(9/10)的乳腺癌组织中PAF受体mRNA和PAF表达增强,而癌旁组织中80%(8/10)PAF受体mRNA和PAF表达减少,两者差异有统计学意义(P<0.05).结论 中晚期乳腺癌中PAF表达增强,可能在乳腺癌的发病过程中发挥作用.
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肝细胞性肝癌生长激素受体的基因分析
目的 对肝细胞性肝癌生长激素受体(GHR)的表达进行基因分析.方法 分别采用放射配体法、半定量的逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)对40例肝细胞性肝癌(HCC)组织进行GHR的检测,以8例正常肝组织作为对照,并随机选择15例RT-PCR阳性扩增产物直接进行DNA序列测定.结果 在蛋白表达水平,应用放射性配体法于正常肝组织与34例HCC组织中检测到GHR,对照组肝组织GHR的RT值为(40.2932±3.5667)fmol/mg·蛋白,K_d为(0.6167±0.1007)nmol/L;HCC组织GHR的RT为(19.8870±3.7549)fmol/mg·蛋白,K_d值为(0.6247±0.2011)nmol/L,与正常肝组织比较,HCC组织GHR的RT降低(P<0.05),而K_d无显著性改变(P>0.05),有6例肝癌组织在蛋白水平未检测到GHR;半定量的RT-PCR法发现GHRmRNA在正常肝组织的表达率为100%,在HCC组织的表达率为90%(36/40),GHR mRNA在正常肝组织与HCC组织的表达量两者之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 大部分肝细胞性肝癌组织在蛋白与mRNA水平均表达GHR,肝癌与正常肝组织GHR在蛋白表达水平上差异的原因可能并非由于两者在mRNA水平表达量的不同所造成.在肝癌受体功能未明的情况下,目前rhGH在肝癌患者中的使用应慎重,以免促进肿瘤的增殖与复发.
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腺病毒骨形态发生蛋白2绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓基质干细胞成骨及示踪作用
目的 观察腺病毒介导的人骨形态发生蛋白绿色荧光蛋白基因(Ad-GFP-hBMP-2)转染对骨髓间质干细胞(bMSCs)成骨能力的影响.方法 取日本大耳白兔4只自双侧股骨远端抽取骨髓培养bMSCs.以Ad-GFP-hBMP-2基因(实验组)及Ad-GFP(对照组)基因转染bMSCs后,用ALP检测试剂盒检测两组细胞的ALP活性;原位杂交检测两组细胞I型胶原的表达;Western blot 检测细胞中BMP-2的表达.将转染后24 h的bMSCs接种到裸鼠体内,术后第4、8、12周观察成骨情况.结果 转Ad-GFP-hBMP-2基因组和Ad-GFP组各时间段ALP分泌量差异分别有统计学意义(P<0.01);实验组I型胶原原位杂交实验组为阳性.实验组成骨阳性率为90%,对照组为40%.结论 bMSCs经Ad-GFP-hBMP-2基因转染后能高效表达BMP-2并诱导成骨.腺病毒介导人BMP-2转基因可以提高bMSCs的成骨能力.
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不同浓度TH黏蛋白对草酸钙成核、生长、聚集的影响
目的 观察不同浓度TH黏蛋白(THM)对体外成石系统内一水草酸钙(COM)的成核、生长和聚集的影响.方法 盐析法提取THM,利用原子分光光度计测定0、10、50、100 mg/LTHM人工尿体外成核和种籽晶溶液内Ca~(2+)变化,偏光显微镜计数COM数目.结果 THM为0、10、50、100mg/L时,Ca~(2+)减少量0.81、0.57、0.51、0.96mmol/L;成核数3.20×10~4、2.32×10~4、1.83 × 10~4、2.85×10~4;生长率53.9%、48.7%、34.6%、19.8%;聚集率33.2%、11.7%、9.4%、66.2%,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 在生理浓度范围内,THM可以抑制尿结石的形成,且随浓度增加其抑制作用逐渐增强,但超过一定浓度时,其转为结石促进剂.
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同种异体神经复合体修复兔坐骨神经缺损的研究
目的 用种植胎兔雪旺细胞的去细胞同种异体神经复合体修复兔缺损的坐骨神经,观察坐骨神经再生及功能恢复.方法 健康成年新西兰白兔48只,体质量1.5-2.0 kg,随机分成2组.两组动物均切除一段坐骨神经,造成2.0 cm长的缺损.实验组:用种植胎兔雪旺细胞的同种异体神经复合体修复坐骨神经.对照组:仅用去细胞同种异体神经修复.术后4、8、16周进行大体观察、标本光镜和电镜观察且进行量化分析、肌湿重检测.结果 手术区局部均未出现明显的排斥反应,实验组足部溃疡愈合情况优于对照组,实验组再生神经纤维数目、有髓神经纤维轴突直径、髓鞘厚度4、8、16周分别为(906.25±30.68,1726.25±51.89,2825.13±22.79)、(5.35±0.62,5.46±0.38,5.59±0.80),(1.65±0.37,1.75±0.41,1.83±0.49)均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).小腿三头肌湿重于术后4周两组间差异无统计学意义(P>0.05),实验组术后8、16周分别为(5.62±0.99,7.38±0.26)恢复优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 种植雪旺细胞的去细胞同种异体神经复合体对神经再生及功能恢复有更好的促进作用.
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兔脑脊液经视神经路径回流到淋巴系统的研究
目的 探讨兔视神经鞘蛛网膜下腔(SAS)内脑脊液淋巴回流的路径及初步机制.方法 (1)X线脑池造影:经枕大池注射欧乃派克(0.1 ml/min),注射后1、10、20、30及60min分别行X线摄影;(2)Microfil(R)脑池灌注:在5～10 min内,经枕大池注射Microfil(R)20 ml,手术显微镜和光镜下观察其分布.结果 造影剂注射后20 min,视神经鞘SAS开始显影并向眼球和眶周扩散.Microfil(R)主要分布在颈深淋巴管,包绕在视神经周围,并在视神经人视网膜处集中分布.光镜检查示Microfil(R)沿视神经鞘SAS长轴纵行分布,动脉及静脉内未见.结论 视神经鞘脑脊液经结膜周围淋巴管回流到颈部淋巴系统,这种回流路径对阐明颅内压增高视力损害机制有一定意义.
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有、无垫片钛网植骨对终板-钛网界面应力分布影响的比较
目的 比较有、无垫片钛网植骨对颈椎前路椎体次全切除减压终板-钛网界面应力分布的影响.方法 利用Ansys 9.0软件的建模功能,建立有、无垫片钛网植骨钢板固定手术模型.分别对模型施加80 N预载荷及1.8 Nm力矩,使其产生轴向压缩、前屈和后伸运动,选取终板.钛网界面7个接触点,提取各个点的von Mises应力,然后进行比较.结果 在各种工况下,有垫片钛网植骨C4下终板-钛网界面(5.43、5.74、6.88)Mpa和C6上终板-钛网界面7个各个接触点的应力(7.61、8.23、9.97)Mpa分别小于无垫片钛网植骨C4下终板-钛网界面(7.46、8.12、10.04)Mpa和C6上终板-钛网界面相应接触点的应力(10.65、11.59、14.27)Mpa.结论 有垫片钛网植骨能够降低终板-钛网界面的应力,避免终板应力的过度集中,从而降低钛网下沉的发生率.
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丙酸睾酮对萃取神经修复大鼠坐骨神经缺损的促进作用
目的 观察丙酸睾酮对甘油萃取神经修复大鼠坐骨神经缺损的促进作用.方法 取SD大鼠60只,手术造成左侧坐骨神经1 cm缺损.每组20只.A组:甘油萃取的坐骨神经修复左侧缺损并注射丙酸睾酮(TP)50 g/L,0.1 ml,2次/周;B组仅以甘油萃取的坐骨神经修复缺损;C组以同种异体神经修复.术后16周,比较各组运动神经传导速度恢复率(RRMNCV)和腓肠肌复合动作电位波幅恢复率(RRCMAP);再生有髓神经纤维计数恢复率(RRMFP)及患侧小腿三头肌湿重/健侧小腿三头肌湿重率(ITSWW/UTSWW).结果 术后16周,A、B、c三组RRMNCV分别为(59.06±10.33)%、(45.80±9.05)%、(23.45±4.60)%;RRCMAP分别为(76.64±5.01)%、(64.55±4.20)%、(20.44 ±3.82)%;RRMFP分别为(79.11±2.55)%、(63.67±4.97)%、(29.76±5.68)%;ITSWW/UTSWW分别为(70.37±9.54)%、(56.77±6.08)%、(33.75±7.89)%,三组比较差异有统计学意义(P<0.05).结果 说明A组修复效果好,B组次之,C差.结论 丙酸睾酮对甘油萃取神经修复大鼠坐骨神经缺损具有促进作用.
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β-连环蛋白在骨折愈合期间的信号传导作用及其机制
目的 观察β-连环蛋白在骨折愈合期间变化,探讨其在骨折愈合期间发挥信号传导作用机制.方法 对32只鼠进行随机分组,制作胫骨骨折模型.应用Western blot分析对骨折愈合不同时间点β-连环蛋白水平进行测定,逆转录-聚合酶链反应(RT-PeR)技术检测骨折愈合期间Wnts和它们受体表达,组织形态学测量观察β-连环蛋白信号传导拮抗剂Dkk-1对骨折愈合影响.结果 β-连环蛋白在骨折愈合期间高表达.Dkk-1腺病毒处理骨痂样本显示β-连环蛋白水平低于未用Dkkl骨痂样本.Wnt-4、Wnt5b以及受体Fz-1和Lrp-6骨折愈合期间呈高表达.Ad-Dkk1组和对照组的骨和软骨占整个骨痂组织量比例、小梁骨直径(μm)、数量(每毫米)、小梁骨间隔(μm)分别为(11.33±2.52)%/(35.67±3.06)%、(14.33 ±2.51)%/(47.33±4.04)%、(720.00±77.70)μm/(189.33 ±83.36)μm、13.67±2.05/32.33 ±2.62、(1.25 ±0.96)μm/(4.00±0.82)μm.两组差异有统计学意义(P<0.01).结论 β-连环蛋白在骨折愈合中发挥重要作用,激活β-连环蛋白的治疗措施可能有助于骨折的愈合.
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癌组织K-ras基因突变和血清CEA的联合检测预测结直肠癌肝转移的意义
目的 观察结直肠癌组织中K-ras瑚基因突变,检测患者外周血清CEA水平,探讨两者与结直肠癌肝转移的关系.方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法和基因测序技术检测100例结直肠癌组织中K-ras基因1号外显子12、13密码子突变,化学发光法检测患者血清CEA水平,结合其临床资料分析.结果 100例结直肠癌组织中K-ras基因突变者39例(39.0%),其中12号密码子突变31例,13号密码子突变8例.36例肝转移组中K-ras基因突变23例(23/36,63.9%);64例无肝转移组中K-ras基因突变16例(16/64,25.0%).36例有肝转移患者外周血清CEA水平为(66.79±127.46)μg/L,其中25例(25/36,69.4%)出现不同程度CEA升高;64例无肝转移患者外周血清CEA水平为(4.93±4.62)μg/L,其中24例(24/64,37.5%)CEA升高.两个指标联合检测,肝转移组的阳性率(22/36,61.1%)明显高于无肝转移组的阳性率(5/64,7.8%),P<0.01.其预测结直肠癌肝转移的敏感性及特异性分别为61.1%和92.2%.结论 K-ras基因突变、血清CEA水平与结直肠癌肝脏转移有密切相关,联合检测癌组织K-ras基因突变和血清CEA水平可预测结直肠癌肝转移.
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缺氧诱导因子-1α小干扰RNA联合顺铂诱导人食管鳞癌细胞凋亡
目的 观察缺氧诱导因子(HIF)-1α小干扰RNA联合顺铂(DDP)对人食管鳞癌TE-1细胞凋亡的影响.方法 人工合成HIF-1α小干扰RNA,体外培养人食管鳞癌TE-1细胞分为4组:A组用生理盐水处理,B组用DDP处理,C组用小干扰RNA处理,D组用小干扰RNA和DDP协同处理;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测HIF-1α mRNA的表达,Western blot法检测HIF-1α蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 RT-PCR法检测A、B、C和D组细胞的HIF1α mRNA表达分别为(0.5325±0.0809)、(0.5003±0.0726)、(0.0986±0.0171)和(0.0849±0.0133),Western blot法检测HIF-1α蛋白表达分别为(0.7280±0.0268)、(0.7115±0.1293)、(0.2362±0.0266)和(0.1917±0.0234),其中D组与A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.01),与C组比较差异无统计学意义(P>0.05);A、B、C和D组的细胞凋亡率分别为(3.23±0.61)%、(29.88±3.48)%、(34.48±5.69)%、(56.37±7.99)%,其中D组与其他3组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 HIF-1α小干扰RNA能够提高DDP的细胞毒性作用,两者联合能有效促进人食管鳞癌TE-1细胞的凋亡,显著提高化疗效果.
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三种不同免疫状态小鼠皮肤创面愈合过程中基质细胞衍生因子-1的表达
目的 观察3种不同免疫状态小鼠皮肤创面愈合过程中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的基因表达.方法 采用差异性贴壁法分离纯化BALB/C雄性小鼠骨髓源性干细胞(BMSCs),取第3代BMSCs进行成脂、成骨诱导鉴定;同时另取第3代BMSCs,经尾静脉注射到3.5 Gy放射性损伤后的雌性BALB/C鼠、裸鼠、SCID鼠体内,小鼠背部皮肤制作一直径为1.5 cm的创面,建立骨髓移植嵌合体皮肤创伤动物模型,观察创面的愈合过程,并于伤后1、3、5、7、14 d获取创面组织,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测创面组织中SDF-1的基因表达.结果 提取的BM-SCs可以成功进行成骨、成脂诱导分化;创面愈合过程中BALB/C鼠SDF-1基因表达于伤后1 d即有增高,5 d达峰值(P<0.01),然后逐渐下降,14 d创面基本愈合时接近对照组.裸鼠、SCID鼠创面中SDF-1基因表达于伤后逐渐增高,7 d达峰值(P<0.01),与BALB/C鼠比较,SDF-1基因表达峰值延后,14 d创面未愈,SDF-1基因表达仍高于对照组.结论 皮肤创面愈合过程中,SDF-1趋化BMSCs,参与创面愈合的炎症反应期和增殖期的修复过程,在创面愈合中起着重要作用;机体的免疫功能也将影响BMSCs募集,从而影响创面愈合.
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生物型硬脑膜补片修补大鼠全层腹壁缺损
目的 探讨运用生物型硬脑膜补片修补大鼠全层腹壁缺损的可行性,并与涤纶布补片修补比较.方法 分别采用脑膜建补片和涤纶布修补12对大鼠全层腹壁缺损,术后2、8、16周分批处死大鼠采集标本,观察创面感染情况、缺损愈合速度、缺损愈合组织的厚度、镜下病理情况.结果 脑膜建补片组大鼠无死亡,12例缺损全部修复成功.涤纶组大鼠死亡2例,10例缺损修复愈合.脑膜建补片组织愈合较快,镜下炎症反应较轻,但愈合组织厚度差异无统计学意义.结论 脑膜建补片能很好地诱导结缔组织增生,修复腹壁缺损.
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调节性CD4~+CD25~+T细胞的分离纯化及免疫功能研究
目的 制备调节性CD~+ CD25~+T细胞(Treg)分析其免疫功能,诱导局部免疫耐受防治同种异体复合组织移植(CTA)排斥反应.方法 采用免疫磁珠法(MACS)从雄性大鼠脾脏细胞分离CD4~+CD25~+Treg(1×10~6),2%锥虫蓝染色检测活性、流式细胞术分析其纯度,在5 mg/L抗CD3的刺激下观察其反应性、增殖及其与200 U/ml细胞介素(IL)-2的关系.结果 从8只雄性大鼠脾脏分选出的CD4~+CD25~+Treg活性平均为(97.90±0.36)%及纯度为(96.05±0.41)%,CD3刺激呈低反应,按比例培养抑制率为89%,IL-2可使CD4~+CD25~-抑制逆转.结论 MACS能快速分选出较高纯度的CD4~+CD25~+Treg,并且活性良好在体外具有免疫无能及免疫抑制作用,能满足动物CTA排斥反应研究的需要.
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β1整合素表达下调对结肠癌肝转移的抑制作用
目的 探讨β1整合素表达下调对人结肠癌细胞(HT-29)肝转移的抑制作用.方法 采用脂质体将β1整合素反义寡核苷酸(ASODN)转染到HT-29细胞内,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测β1整合素的表达.Transwell侵袭室方法检测HT-29体外侵袭转移能力.裸鼠开腹于脾脏被膜下注射转染的HT-29建立肝转移模型,30 d后处死裸鼠,计算肝转移癌的数量与大小,免疫组织化学(SP法)观察转移癌中β1整合素的表达.结果 与对照组比较,实验组β1整合素mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);Transwell体外侵袭实验实验组迁移的细胞数明显减少(P<0.05);体内裸鼠肝转移实验组转移癌数量(4.00±0.93)个/只、平均体积(10.10±6.50)mm3/只、平均重量(0.0440±0.0008)g/只、免疫组织化学肝转移癌中β1整合素表达阳性细胞百分率(28.60±3.79)%均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 β1整合素表达下调对结肠癌肝转移具有抑制作用.
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中电导型钙依赖钾通道在糖尿病大鼠阴茎海绵体中的表达及意义
目的 探讨糖尿病对大鼠阴茎海绵体中电导钙激活性钾通道蛋白(IKCa)表达的影响以及意义.方法 选用SD雄性大鼠35只,随机选择25只用于制作糖尿病动物模型,剩余10只用于空白对照.造模成功后饲养8周,注射阿朴吗啡(APO),观察大鼠阴茎勃起,同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测IKCa mRNA和蛋白在大鼠海绵体的表达.结果 DM组大鼠阴茎勃起和IKCa mRNA及蛋白表达均显著低于STZ组和NDM组(P<0.05),STZ组和NDM组之间大鼠阴茎勃起情况和IKCa mRNA及蛋白表达无统计学意义(P>0.05).绪论糖尿病可降低大鼠阴茎勃起功能,IKCa在糖尿病大鼠海绵体表达明显降低.糖尿病对大鼠阴茎勃起功能的影响与阴茎海绵体IKCa表达减少密切相关.
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RGDS-GG-KLAKLAKK多肽对人骨肉瘤细胞黏附迁移和侵袭力的影响
目的 研究多肽RGDS-GG-KLAKLAKK对体外培养人骨肉瘤细胞MG-63黏附迁移和侵袭力的影响,并探讨其作用机制.方法 将不同浓度(0、25、50、75、100μmoL/L)的多肽RGDSGG-KLAKLAKK与MG-63细胞混合培养,用比色法测量多肽RGDS-GG-KLAKLAKK对MG-63细胞黏附力的抑制作用,通过transwell小室侵袭模型检测多肽对MG-63细胞侵袭力的影响.观测多肽对骨肉瘤细胞自发肺转移模型抗肿瘤转移的影响.结果 MG-63骨肉瘤细胞对纤维连接蛋白(Fn)的黏附被多肽GDS-GG-KLAKLAKK对明显抑制(P<0.05).25、50、75、100 μmol/L的多肽RGDS-GG-KLAKLAKK对MG-63细胞侵袭力的抑制率分别为(18.3±2.9)%、(28.5±4.8)%、(40.4±5.6)%和(66.7±7.8)%,对比空白对照组(0μmol/L多肽)差异有统计学意义(P<0.05).多肽RGDS-GG-KLAKLAKK对MG-63骨肉瘤细胞浸润能力有明显抑制作用.MG-63骨肉瘤细胞接种于裸鼠后给予多肽RGDS-GG-KLAKLAKK治疗,与对照组比较,有明显的肺重减轻、肺转移灶减少(P<0.05).结论 多肽RGDS-GG-KLAKLAKK能够抑制人骨肉瘤MG-63细胞的体外黏附、侵袭和转移.
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消化道肿瘤环氧合酶-2表达与凋亡抑制蛋白及化疗药敏性的关系
目的 探讨消化道肿瘤环氧合酶(COX)-2表达与凋亡抑制蛋白及体外化疗药敏性的关系.方法 对84例胃癌、大肠癌标本进行噻唑蓝(MTT)比色法体外化疗药物敏感性实验,并进行COX-2、p53、Survivin、bel-2免疫组织化学染色.结果 肿瘤组织COX-2、p53、Survivin、bel-2表达率分别为70.3%、64.3%、89.3%、60.7%;COX-2与Survivin、bcl-2表达呈正相关(r=0.5072、0.3783,均P<0.01).在肿瘤COX-2强表达组,紫杉醇(PTX)、表阿霉素(eADM)、羟基喜树碱(OPT)对肿瘤细胞抑制率明显低于弱表达组(均P<0.05);p53强表达与PTX、顺铂(DDP)对肿瘤细胞的抑制率明显降低有关(均P<0.05);Survivin强表达时,长春新碱(VCR)、DDP对肿瘤细胞抑制率明显降低(均P<0.05);bcl-2强表达时,5-氟尿嘧啶(5-Fu)、VCR、eADM、奥沙利铂(OXA)对肿瘤细胞抑制率明显低于弱表达组(均P<0.05).结论 消化道肿瘤COX-2通过抑制肿瘤细胞凋亡参与了肿瘤的多药耐药.
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抗表皮生长因子受体单克隆抗体联合5-氟尿嘧啶、健择对胰腺癌的作用
目的 观察抗表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)、健择对胰腺癌的作用.方法 将人胰腺癌肿瘤细胞悬液注射于裸鼠背部皮下,建立肿瘤模型.干预组腹腔注射鼠抗人EGFR单克隆抗体(MMAb-2)、5-Fu、健择及其配伍联合用药;对照组注射生理盐水.干预4周后处死裸鼠,评价干预效果.结果 MMAb-2单独应用对胰腺癌细胞增殖有抑制作用(P<0.05),MMAb-2联合应用5-Fu、健择对胰腺癌细胞增殖的抑制作用明显增强(P<0.05),MMAb-2组裸鼠体质量及其白细胞计数明显高于化疗组(P<0.05).结论 抗EGFR抗体单独应用有确切的抗肿瘤疗效;与化疗联合应用可以增效;对裸鼠机体免疫功能无明显毒性.
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溃疡性结肠炎及大肠癌易感性与谷胱甘肽转硫酶P1基因型的关系
目的 探讨谷胱甘肽转硫酶(GST)P1基因型与溃疡性结肠炎(UC)及散发性大肠癌(SCRAC)易感性的关系.方法 采用聚合酶链反应技术(PCR)检测354例(UC96例、SCRAC 118、健康人群140例)的GSTP1基因型,比较该基因型在各组之间的分布差异.结果 GSTPI基因突变型(Ile/Val+VaL/VaL)频率在UC组和SCRAC组中明显增高,与对照组比较,差异有统计学意义(48.96%比31.43%,P<0.01,OR=0.478,95%CI:0.280～0.817;45.77%比31.43%.P<0.05,OR=0.534,95%CI:0.327～0.903);分层分析发现VaL/VaL基因型在远端UC中的分布频率高于广泛结肠UC(X~2=5.682,P<0.05,OR=3.594,95%CI:1.218～10.608);VaL/VaL基因型与SCRAC病变部位无关(P>0.05),但在Dukes C期和低分化SCRAC中分布频率明显增高(P<0.05).结论 GSTPI基因型与湖北汉族人群UC和SCRAC的易感性相关.
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肝癌患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化及其意义
目的 探讨应用流式细胞术检测肝癌患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化及意义.方法 应用三色免疫荧光流式细胞仪测定37例肝癌患者及30例肝硬化患者外周血T细胞亚群CD4~+CD25~+/CD~+比值.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血中转化生长因子β1(TGF-B1)的表达水平.结果 肝癌患者外周血CD4~+CD25~+/CD4~+比值较肝硬化患者显著增高,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);肝癌患者外周血中CD4~+CD25~+T细胞水平与肝癌原发肿瘤的大小、TGF-βl呈正相关(P<0.05).结论 肝癌患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞增多,对肝癌患者具有免疫抑制作用.
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血管内皮生长因子转染内皮祖细胞治疗大鼠缺血后肢的研究
目的 使用血管内皮生长因子(VEGF)转染内皮祖细胞(EPC)治疗大鼠缺血后肢,观察EPC、VEGF转染EPC对大鼠缺血后肢的新生血管和肢体成活的影响.方法 制作SD大鼠后肢缺血模型,将动物随机分为3组,每组6只.将构建的VEGF基因真核表达载体转染入骨髓来源的EPCs后通过尾静脉注射人大鼠体内,并与使用磷酸盐缓冲液(PBS)或EPC的动物进行比较,观察转染VEGF的EPCs在缺血部位的聚集和形成新生血管的情况.结果 (1)动物总残肢率比较,CELL组、VEGF组较PBS组明显增加的肢体恢复率(P<0.05),CELL组肢体恢复率较VEGF组差(P<0.05).(2)毛细血管密度与PBS组比较,各时间点中CELL、VEGF组MVD均明显增多(P<0.05).(3)缺血肢体VEGFa的表达:VEGF组的VEGF蛋白表达较PBS组、CELL组、明显增多(P<0.05);(4)手术后7、14、28 d,与PBS对照组比较,CELL、VEGF组细胞的血流灌注有较大程度的恢复(P<0.01).结论 VEGFa基因转染EPCs对缺血部位的血管新生有重要影响,联合应用VEGFa基因和EPCs治疗缺血后肢有较好的协同作用.
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骨保护蛋白基因转染成骨细胞后的表达及对其生物学行为的影响
目的 将人骨保护蛋白(OPG)基因转入体外培养的人成骨细胞,研究OPG基因在转染成骨细胞中的表达,并分析OPG基因转染对成骨细胞生物学行为的影响.方法 首先行人成骨细胞体外培养,然后用质粒peDNA3.1-hOPG转染成骨细胞,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测转染细胞OPG mRNA和蛋白质的表达.观察OPG基因转染后成骨细胞的增殖情况,对成骨细胞表达的碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)的含量进行检测,观察转基因细胞的生物学特性.结果 RT-PCR和Western blot检测结果表明在OPG基因转染后,成骨细胞表达的OPGmRNA和蛋白质含量均较未转染组增加.在OPG基因转染后,可明显促进成骨细胞的增殖,成骨细胞表达的ALP和BGP的含量均显著上升,而且在量效图中可以观察到随着OPG基因转染剂量增加,其增加程度也增加.结论 成骨细胞可作为转基因的受体细胞,成功表达目的 基因.转染OPG基因的成骨细胞可稳定、高效的表达OPG.OPG基因转染成骨细胞生物学特性稳定,而且可明显促进转染成骨细胞的成骨特性的表达.
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人骨肉瘤中p53、p21~(WAF1/CIP1)和增殖细胞核抗原的表达及相互关系
目的 探讨细胞周期相关基因p21~(WAF1/CIP1)、p53和增殖细胞核抗原(PCNA)在人骨肉瘤中的表达和相互关系.方法 应用LSAB法,对40例骨肉瘤、20例骨软骨瘤患者的病变组织和20例正常人骨组织分别以p53、p21~(WAF1/CIP1)、PCNA蛋白的单克隆抗体作免疫组织化学检测.结果 骨肉瘤组织中p53、p21~(WAF1/CIP1)、PCNA蛋白的阳性反应率和阳性反应强度均明显高于骨软骨瘤和正常骨组织,其差异有统计学意义(P<0.05).p53标记指数与p21~(WAF1/CIP1)标记标数以及p21~(WAF1/CIP1)与PCNA标记指数间呈正相关(t值分别为2.93和4.20,P<0.01).结论 骨肉瘤组织中有p53、p21p21~(WAF1/CIP1)和PCNA的过表达,其表达的强度与肿瘤的恶性程度和预后相关.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A对肝癌细胞蛋白质差异表达谱的影响
目的 观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂-曲古抑菌素A(TSA)对肝癌细胞(BEL-7402)蛋白质表达谱的影响.方法 采用150 g/LTSA处理BEL-7402细胞16hr为试验组,未处理的细胞为对照组,分别抽提其总蛋白质,蛋白定量恒定为200 mg.经第一向固相pH梯度等电聚焦电泳和第二向垂直平板SDS-PAGE,凝胶银染后获得二维凝胶图并扫描输入计算机进行软件分析.将三次重复实验所获得的二维凝胶图进行统计学分析.将差异表达的蛋白质斑点从银染后的二维凝胶中切下,进行质谱分析.结果 实验组BEL-7402细胞90%～95%的蛋白质表达与对照组一致,5%～10%的蛋白质为差异表达;通过质谱对差异点的鉴定,获得了16个差异表达蛋白质,包括:Triosephosphate isomerase、47-KDa heat shock protein、TRAF1,5(up)、annexin A1、Heat shock70 protein、prohibitin、thioredoxin peroxidase、DP-1等分子,这些蛋白质涉及基因表达调控、信号转导、细胞代谢、抑制细胞增殖等众多分子事件.结论 TSA能够通过影响蛋白质的差异表达影响BEL-7402肝癌细胞的生长和增殖.
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明胶-白芨胶/丹参多孔材料的生物相容性
目的 观察明胶-白芨胶/丹参多孔材料的生物相容性.方法 小鼠腹腔注射材料浸提液,观察其急性毒性反应;家兔耳缘静脉注射浸提液,观察其发热反应;分光光度法分析0.02 s/ml浓度浸提液溶血率;噻唑蓝(MTr)比色法观察3种浓度(0.10、0.02、0.01 g/m1)浸提液对L929细胞生长的影响;材料植入SD大鼠皮下,分别于第1…2 4 8周取出,评价材料组织相容性.结果 浸提液腹腔注射未引起小鼠急性毒性反应;注入家兔耳缘静脉内未引起发热反应;浸提液溶血率为2.59%,符合规定;3种浓度浸提液在l d时RGR分别为102.8、101.2、100.5,3 d时RGR分别为104.5、100.6、103.4,7 d时RGR分别为109.7、104.6、106.7;材料在体内约8周完全降解,未见异常反应.结论 明胶.白芨胶/丹参多孔材料无毒性,无热源性,无溶血性及细胞毒性,具有良好的生物相容性.
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SFRP1和APC基因在先天性巨结肠症中的甲基化和异常表达
先天性巨结肠症(HSCR)的病因和发病机制目前尚不明确,普遍认为是多种因素共同作用的结果.近来发现Wnt信号异常激活与HSCR发病有关~[1].Wnt拮抗因子分泌型Frizzled相关蛋白(SFRP)家族第一个成员SFRPI和多发性腺瘤样息肉病蛋白(APC)均为Wnt信号的重要抑制因子.本研究对SFRP1和APC基因在HSCR中甲基化及表达状态进行检测,以探讨SFRP1和APC表达异常在HSCR发病机制中的作用.
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利用成年猪脊柱制作胸腰段后凸畸形模型
脊柱胸腰段后凸畸形的病因主要有先天性脊柱畸形、胸腰段脊柱骨折、强直性脊柱炎、脊柱结核、椎体肿瘤、软骨发育不全等.2006年4月至2007年2月,我们针对上述问题,利用成年猪脊柱制作胸腰段后凸畸形模型,进行相关的生物力学实验.
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窦房结功能损伤犬心房颤动模型的建立
窦房结功能障碍(SND),如病态窦房结综合征是临床上常见而严重的缓慢性心律失常,是由窦房结和(或)其周围组织的病变,导致窦房结起搏和(或)窦房传导障碍,产生多种心律失常的综合征,尤其是慢-快综合征(心动过缓-心动过速综合征)合并的阵发性心房颤动(AF),SND伴发AF的倾向是其病程自然发展的一部分,AF的反复发作可以引起血栓栓塞,可导致心力衰竭,增加死亡率~[1]
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骨细粒棘球蚴病动物模型的放疗效果
包虫病是一种常见的严重危害人体健康的人畜共患寄生虫病.在人体囊型包虫病中,骨细粒棘球蚴病约占0.5%～4.0%~[1].虽然骨细粒棘球蚴病的患病率很低,但其生物学行为相对肝、腹腔包虫而言更为复杂,临床上药物治疗效果不佳,手术难以根治,而且致残率较高.本研究旨在观察探讨了骨细粒棘球蚴病动物模型不同放射剂量3个月及6个月时的治疗效果.
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三苯氧胺对Survivin基因的作用及其机制
三苯氧胺(TAM)是乳腺癌内分泌治疗的一线药物,近年来学者发现TAM可以通过诱导凋亡作用,从而杀伤乳腺癌细胞~[1].Survivin是一种新型凋亡抑制因子,它广泛表达于胚胎、胎儿组织,及大多数常见的肿瘤组织~[2].本实验旨在观察Survivin在TAM所诱导的乳腺癌细胞凋亡过程中所起的作用,并探讨其机制.
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邻苯二甲酸二丁酯致尿道下裂雄性仔鼠生殖结节发育异常的研究
我们通过对邻苯二甲酸二丁酯(DBP)孕鼠染毒后子代尿道下裂雄性大鼠生殖结节进行病理学检查,并应用定时定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对生殖结节中Sonic hedgehog(Shh)信号通路中的关键因子:Shh、骨形态发生蛋白4(Bmp4)和受体补片1(Ptch1)的mRNA表达水平进行检测,从病理学和分子水平探讨DBP致尿道下裂的作用机制.
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NEDD4-1对脑胶质瘤U251细胞迁移和侵袭的作用
PTEN是易突变的肿瘤抑制基因之一,其突变缺失与胶质瘤形成发展及其侵袭性有密切的关系~[1-4].故调节PTEN活性可影响肿瘤侵袭性.泛素连接酶神经前体细胞表达的进行性下调基因4-1(NEDD4-1)可促进PTEN降解,在PTEN缺失致肿瘤过程中扮演复杂角色~[5].本实验将NEDD4-1及其shRNA转染入U251细胞,观察对细胞迁移和侵袭的影响.
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垂体瘤中Ikaros的异常表达及其临床意义的研究
垂体瘤是一种常见的肿瘤,约占中枢神经系统肿瘤的15%-20%.其中,功能性垂体腺瘤约占70%,临床表现为GH、PRI和ACTH等激素过度分泌所导致多种内分泌如身体发育异常、不育、心血管疾病、血压升高等.
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带蒂回肠替代输尿管长段缺损的研究
临床上对输尿管长段狭窄或缺损的处理比较棘手~[1].我们根据Yang-Monti规则使用显微外科技术建立了家兔带蒂回肠替代输尿管长段缺损的动物模型~[2],观察替代段输尿管的成活和通畅、术侧肾功能的影响和相关并发症.
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老年雌鼠膀胱功能障碍与雌激素及一氧化氮的关系
一氧化氮(NO)作为一种神经递质和信号传导分子,通过与其他神经递质及激素的相互作用,调节平滑肌舒张~[1].NO由其前体左旋精氨酸经一氧化氮合酶(NOS)催化产生,NOS分3种亚型:内皮型NOS(eNOS)、神经型NOS(nNOS)和诱生型NOS(iNOS).我们通过观察不同雌激素水平下,老年雌鼠尿动力学参数和膀胱组织NO及NOS亚型的改变,探讨膀胱功能与雌激素和NO的关系.
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缓激肽触发C6胶质瘤细胞内Ca~(2+)内流诱发的Ca~(2+)释放及其意义
小剂量缓激肽(8K)选择性开放肿瘤的血脑屏障的具体机制尚不太清楚.为进一步明确BK作用后细胞内钙离子升高模式的差异及其意义,我们对细胞外钙内流与细胞内钙库释放之间的关系进行了深入探讨,并对缓激肽刺激后细胞内实时Nitric Oxide水平变化及其与细胞内钙离子升高之间的联系进行了初步的研究.
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锌原卟啉对肝癌细胞株HepG2顺铂化疗敏感性的影响
血氧红素酶-1(H0-1),又称热休克蛋白32,是血红素分解的起始酶和限速酶,具有抑制各种细胞凋亡、抗炎及抗氧化应激等重要生物学作用~[1-3].本研究应用HO-1特异性抑制剂锌原卟啉(Zn-PP)联合顺铂(CDDP)干预人肝癌HepG2细胞,探讨ZnPP抑制HO-1表达对肝癌细胞CDDP化疗敏感性的影响及其可能的机制.
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外源性谷胱甘肽预处理对成人心脏瓣膜术后肾功能的影响
我们通过对行单纯心脏瓣膜置换手术的患者术前予静脉滴注还原型谷胱甘肽进行干预,监测围术期肾功能指标的变化,观察还原型谷胱甘肽作为外源性给予的一种抗氧化药物对于行体外循环下心脏瓣膜置换手术患者的肾功能是否有保护作用.
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CD基因修饰神经干细胞抑制C6细胞增殖的研究
本研究旨在利用神经干细胞(NSCs)作为基因的传递载体,观察大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因/5-氟胞嘧啶(5-FC)系统在体外对胶质瘤细胞增殖的抑制作用.
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急性胆道梗阻模型建立研究
大鼠胆总管结扎(BDL)模型已有描述,并提出胆道梗阻的急性期是胆管结扎后1周~`[1].本研究详述BDL后不同时间点相关变化,为急性胆道梗阻模型的建立提供实验依据.
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体内筛选骨肉瘤血管内皮特异性结合肽
体内噬菌体技术则将噬菌体展示技术与动物模型相结合,可以更好地进行肿瘤组织特异性结合肽的筛选.Pasqualini等~[1]和Wadih等~[2]利用该方法筛选出了特异结合脑和肾的噬菌体克隆,1997年他们成功筛选到一条恶性黑色素瘤及乳腺癌上整合蛋白的特异性亲和短肽,,把该肽与化疗药物耦联后进行动物实验,收到了很好的抗肿瘤效果.
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脊柱内固定器械稳定性测试的不稳模型
脊柱内固定器械广泛用于治疗诸如创伤、肿瘤、先天性畸形以及脊柱退变等疾病,随着学科的发展,内固定器械也不断发展.任何一种新的器械应用于临床之前必须进行一系列生物力学测试.
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人胃癌组织FAF1 mRNA和蛋白表达的相关性
FAF1(Fas-associated factor 1)是新近发现的一种能够增强Fas诱导凋亡作用的蛋白,且在胃癌组织中有特异性低表达~[1].我们采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)和免疫组织化学法联合检测人胃癌、癌旁及正常胃组织中FAFI mRNA和蛋白的表达,观察FAF1表达在人胃癌发生发展中的作用.
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α干扰素对肾癌细胞生长的影响
近年来,关于干扰素(WN)在肾癌治疗方面的研究多为临床研究,体外研究报道尚少.我们2008年4月至2008年10月通过对肾癌786-0细胞株体外培养,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测IFN-α对肾癌细胞的抑制率,运用流式细胞仪(FACS)检测IFN-α对肾癌细胞凋亡的影响,探讨IFN-α对肾癌细胞生长的影响.
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反义-miR221/222上调p27~(kip1)抑制胶质瘤生长的研究
微小RNA(microRNA或miRNA)是长度约21～25核苷酸的非编码RNA,在转录后水平对其靶基因的表达进行负调控~[1].国外已在体外实验中证实miR221/222可以通过抑制p2727~(kip1)表达促进肿瘤细胞生长~[3,4]
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腺病毒介导CD-TK融合基因对肾癌细胞的杀伤作用
肾癌是常见的泌尿系肿瘤,发病率仅次于膀胱肿瘤.自杀基因治疗在晚期肿瘤的综合治疗中发挥了重要作用.单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因/无环鸟昔(GCV)及大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶(CD)基因/5-氟胞嘧啶(5-FC)系统治疗机制不同,联合可产生协同效应.本研究旨在探讨联合TK/GCV、ClD/5-FC系统在肾癌治疗中的价值.
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猪血纤维蛋白材料的物理性能及其生物相容性
目前,组织工程血管支架材料的研究热点之一为可降解生物材料,纤维蛋白可能是心血管组织工程较理想的支架材料~[1].在本实验中,我们通过测试猪血纤维蛋白胶所制备的凝固膜和管形支架的理化性能和生物相容性,探讨该材料是否能进一步运用于血管组织工程领域.
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单纯疱疹病毒胸苷激酶基因在前列腺癌免疫治疗中的研究
肿瘤的发生发展与肿瘤逃逸密切相关,而在肿瘤逃逸的因素中,肿瘤细胞自身分泌的免疫抑制因子具有重要作用.我们用携带显性负相的转化生长因子(TGF)-βⅡ型受体基因的慢病毒感染人CTL,使其对TGF-β失敏感,为晚期前列腺癌的治疗探索一条新的治疗途径.
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大鼠胰腺癌和非癌胰腺组织希佩尔林道病基因和缺氧诱导因子-1α表达及意义
希佩尔林道病基因(VHL)为一种抑癌基因.缺氧诱导因子(HIF)-1α是一种转录因子.一些研究结果证实VHL和HIF-1α表达水平与恶性肿瘤进展、血管生成、转移发生及侵袭能力密切相关"~[1-4].且新近研究证实恶性肿瘤中VHL基因突变及其蛋白表达水平与HIF-1α表达水平密切相关~[5].
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锂对膀胱癌细胞增殖及上皮间质转化的影响
锂是双相情感精神障碍的主要治疗剂,但有研究结果显示,锂还有抑制原代细胞和细胞株增殖的作用,例如前列腺癌细胞、肝癌细胞、晶状体细胞、肺癌细胞等~[1].我们用氯化锂(LiCl)作用于膀胱癌T24细胞,观察其对T24细胞增殖活性的影响,探讨LiCl对膀胱癌T24细胞上皮间质转化的作用机制.
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重组超抗原SEB-scFv融合蛋白的体内抑瘤作用
以单克隆抗体(mAb)作为载体的宫颈癌靶向治疗目前取得了一定的进展,但是多次使用会产生人抗鼠抗体反应(HAMA),限制其临床应用,同时完整抗体分子量大、穿透能力差、血液清除率慢致使肿瘤/血比值低,为克服mAb的上述缺点,我们在克隆出抗宫颈癌单克隆抗体轻、重链可变区基因的基础上,利用重组聚合酶链反应反应(PCR)方法制备抗宫颈癌单链抗体(ScFv),并将其与金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因融合,构建表达出融合蛋白SEB-scFv,注射到宫颈癌动物模型体内,进行抑瘤作用的初步研究.
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镁锌合金对成骨细胞整合素表达的影响
我们前期的实验研究结果表明镁锌合金具有良好的生物安全性和生物相容性,在治疗骨折和骨缺损方面具有潜在的优势~[1-4].但细胞与材料相互作用机制仍有待进一步的研究.我们在基因表达水平进一步研究了镁锌合金对成骨细胞整合紊(Itg)α2、α5和β1的mRNA表达的影响.
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颈7神经根切断后大鼠不同颈脊髓节段内C-fos和c-jun基因的表达
神经根型颈椎病是骨科和麻醉除痛门诊常见的疾患,通过临床资料发现神经根型颈椎病所导致的感觉运动障碍不局限于病变的神经根支配区,为手术及除痛治疗定位带来困难~[1].我们切断大鼠颈7神经根,于不同时间点观察不同节段颈脊髓内c-fos和c-jun基因表达,推断颈脊髓之间可能存在着神经通路联系.
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食管癌易感性与CYP1 A1基因多态性和环境因素的关系
除很少一些疾病纯粹由遗传(如先天性遗传病)或环境因素(如车祸)引起外,绝大多数疾病是遗传和环境因素共同作用的结果,尤其是对于复杂性状的慢性病,基因和环境因素的交互作用在其中扮演着十分重要的"角色".
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带血管的大鼠全胸腺移植模型的建立
胸腺移植可使宿主的前体T细胞在移植的供体胸腺内进行发育,从而导致供体特异性的移植耐受形成.非血管化的胸腺组织移植后移植胸腺组织因缺血导致中央坏死~[1]."胸腺肾"和"胸腺心"移植可使移植的胸腺间接得到血管化~`[2,3].
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CT引导下臭氧消融术联合神经根阻滞治疗腰椎间盘突出症
目的 探讨CT引导下臭氧消融术联合神经根阻滞治疗腰椎间盘突出症的穿刺的准确性、治疗的安全性以及疗效.方法 选择200例腰椎问盘突出症患者,随机分为2组:A组100例,单纯行臭氧消融术,B组:100例,臭氧消融术联合神经阻滞治疗,治疗前1d、治疗后3d、3、6个月测定疼痛视觉模拟评分(VAS),治疗总有效率来评估治疗效果(比较常用的是MacNab法评价疗效).结果 两组患者治疗后3d、3、6个月VAS值较治疗前1 d明显降低(P<0.01或P<0.05),B组治疗后3d,3、6个月VAS值较A组明显降低(P<0.05),A组治疗后3d、3、6个月总有效率分别为90%、85%、79%,B组治疗后3d、3个月、6个月总有效率分别为100%、90%、85%,B组治疗后3d、3个月、6个月总有效率较A组提高.结论 CT引导下臭氧消融术联合神经根阻滞治疗腰椎间盘突出症,近期(3 d)总有效率100%,提高中远期(3、6个月)总有效率.
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多色荧光原位杂交在预测非肌层浸润性膀胱癌复发中的应用
目的 探讨荧光原位杂交(FISH)技术在判断膀胱癌复发的应用.方法 对20例正常人和51例非肌层浸润性膀胱癌患者术后行FISH检测,根据正常人检测结果建立阈值,分析膀胱癌患者FISH结果与膀胱癌复发的相关性.结果 平均随访21个月,22例患者发生肿瘤复发,其中FISH呈阳性19例(86%),呈阴性3例(14%);29例未复发FISH呈阳性16例(55%),呈阴性13例(45%).可见54%FISH检测阳性患者和19%FISH检测阴性患者出现了肿瘤复发.FISH检测呈阳性较呈阴性患者的膀胱癌复发概率大(P<0.05).结论 FISH在预测非肌层浸润性膀胱癌术后复发风险的判断中起重要作用.
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肿瘤发生发展及多药耐药与microRNA的研究进展
微小RNA(mieroRNA)是近年来在真核生物中新发现的一类长19～25个核苷酸的内源性非编码单链RNA分子,通过碱基配对与相应的靶mRNA的3'UTR结合,导致靶mRNA降解或转录后翻译抑制~[1,2].
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双足鼠脊柱侧凸模型手术方法改良
目的 双足鼠脊柱侧凸模型是一种理想的脊柱侧凸动物模型.目前建模手术方法死亡率较高.本研究拟从手术方法上探究提高建模手术成功率的方法.方法 在15只1个月龄大鼠中,采用双上肢去神经和右侧肋骨栓系(4-0无创缝线)法建模,术中不分离脊旁肌.观察死亡率.结果 术中肋骨栓系时,所有大鼠膈肌活动良好,未出现气胸或大血管损伤.无大鼠在手术中或术后一周内死亡.结论 建模术中不分离脊旁肌、右侧肋骨栓系和栓系用4-0无创缝线,成功使得建模手术死亡率降为零,是一种较好的手术方法.
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肾小管上皮细胞体外缺血再灌注新模型的建立
目的 建立稳定的体外大鼠肾小管上皮细胞(NRK cells)缺血再灌注模型,寻找建立模型的佳条件.观察大鼠Ppif基因在该模型中的表达.方法 体外培养NRK细胞,以氧糖剥夺(krebs)液及使用去氧剂连二亚硫酸钠(Na_2 S_2O_4 mmol/L)和厌氧产气袋充以N_2和CO_2(95%N_2/5%CO_2),以模拟体外NRK细胞缺血再灌注,Annexin V/PI染色后,流式细胞仪检测细胞凋亡率,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ppif基因(CypD的编码基因)的mRNA表达.结果 去氧去糖40 min再复氧复糖后,NRK细胞凋亡率于16h达到高值(P<0.05).Ppif mRNA再灌注16 h时达高峰,48 h开始回落,各时段与0 h比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 本模型可以模拟体内缺血再灌注机制,去氧去糖40 min后再复氧复糖16 h是体外NRK细胞缺血再灌注诱导凋亡的佳条件.
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大鼠肝损伤动物模型的建立
目的 探讨制作SD大鼠肝损伤动物模型的方法.方法 选用SD大鼠40只,随机分成对照组和模型组,每组20只,模型组切除大鼠肝脏的70%,对照组在同样的条件下打开关闭腹腔,分别在术前和术后12h、1、3、5、7、14 d检测两组大鼠的肝功能指标,术后14 d光镜观察肝脏的病理变化.结果 模型组肝功能指标AST、ALP和DBIL在术后12 h至7 d,ALT和TB在术后12h至5d与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),至术后14d两组大鼠肝功能各项指标比较差异均无统计学意义(P>0.05);术后14 d光镜观察大鼠肝脏组织切片,对照组大鼠肝细胞之间排列疏松,细胞棱角较锐利,肝窦较宽,模型组大鼠出现肝细胞水肿,肥大,嗜酸性变的代偿性病理变化.结论 切除大鼠肝脏总体积的70%可有效建立大鼠肝损伤的模型.
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改良大鼠杏仁核电点燃癫痫模型的建立
目的 建立一种改良的实用可靠的大鼠杏仁核电点燃癫痫模型.方法 55只Wistar大鼠随机分成3组,其中空白对照组10只,手术对照组10只,刺激组35只.记录点燃过程中大鼠发作症状及脑电表现.点燃后灌注取脑,进行GFAP(胶原纤维酸性蛋白)免疫组化染色和TUNEL(原位DNA末端标记)染色,并与空白对照组和手术对照组进行比较.结果 26只大鼠在(15.85±5.04)d成功点燃.点燃组海马区GFAP阳性细胞计数(67.26±4.52)较手术对照组(43.73±1.71)、空白组(46.51±3.83)显著增加(P<0.05).点燃组海马区TUNEL染色阳性细胞计数(26.03±2.57)较手术对照组(11.36±2.09)、空白组(10.28±2.34)显著升高(P<0.05).结论 改良的杏仁核电点燃癫痫模型在症状学、电生理和神经病理等方面的改变与人类颢叶癫痫高度相似.
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胆管癌分子生物学特性研究进展
胆管癌是一种起源于胆管细胞伴有胆管细胞分化的上皮细胞肿瘤,早在1990年中华医学会的调查就发现胆管癌的发病率以每年5%的速度上升[1],发病隐匿、缺乏理想的早期诊断标志物、对常规放化疗缺乏敏感性,这些原因造成胆管癌患者预后极差.加强胆管癌分子生物学特性的研究是改善胆管癌诊疗现状的重要的途径之一.
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调节性树突状细胞在脓毒症中的意义及其应用价值
严重创、烧伤及外科大手术应激后常常并发脓毒症(sepsis),进一步发展可导致脓毒性休克、多器官功能障碍综合征(MODS),是临床危重患者主要死亡原因之一.深入探索严重创、烧伤后脓毒症发生、发展的确切机制具有重要的理论意义及实用价值.
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pEGFP-Survivin对GBC-SD细胞生长的抑制及对化疗敏感性的影响
目的 观察重组质粒pEGFP-Survivin对胆囊癌细胞(GBC-SD)化疗敏感性的影响.方法 以噻唑蓝(MTT)比色法检测GBC-SD、GBC-SD/EGFP和GBC-SD/Survivin 3种细胞的增殖活性;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot测各组细胞中Survivin mRNA和蛋白质水平的表达;以合适浓度的顺铂(DDP,3.0 ms/L)作用相同的时间后,用MTY法检测3种细胞存活率,流式细胞仪测细胞凋亡,并用MIT法筛选IC_(50)值,TUNEL法观察细胞核改变;另外检测DDP作用后各组细胞的Caspase-3蛋白酶活性的变化.结果 GBC-SD和GBC-SD/EGFP细胞的增殖活性大致相同,而GBC-SD/Survivin细胞的增殖活性明显下降;RT-PCR和Western blot均发现GBC-SD/Survivin细胞中的Survivin表达水平较其余两种细胞明显下降(分别下降了74.7%和71.5%);在给予了DDP作用后,GBC-SD/Survivin细胞存活率和IC_(50)[(2.03±0.24)ms/L]明显较低,细胞凋亡率较高(84.3%),而3种细胞用TUNEL法染色后均可见棕色凋亡细胞核.给予了DDP作用后,各组细胞Caspase-3活性均呈现先升高后下降的趋势,但GBC-SD/Survivin细胞中Caspase-3的活性明显高于另外两种细胞.结论 pEGFP-Survivin表达的Survivin shRNA能明显降低GBC-sD细胞中Survivin的表达,提高对化疗药物的敏感性.
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体外稳定表达DMBT1胆囊癌细胞株GBC-SD的建立及其特性
目的 建立稳定表达脑恶性肿瘤缺失基因1(DMBTl)的胆囊癌细胞株GBC-SD,研究其增殖特点.方法 将DMBTl全长表达质粒以脂质体为介导转染胆囊癌细胞株GBC-SD,G418筛选阳性克隆5～6周,免疫组织化学、Western blot及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测DMBT1蛋白及mRNA表达,噻唑蓝(MTT)绘制生存曲线及、血清下测细胞生存抑制率及免疫荧光观察细胞凋亡.结果 稳定转染后,实验组DMBT1蛋白相对表达量为0.82±0.11,对照组为0.24±0.03,实验组mRNA相对表达量为0.87±0.12,对照组为0.29±0.03,差异均有统计学意义(P<0.01);实验组无明显对数生长期且较早进入衰亡期,在无血清培基中增殖抑制率随时间增高,72 h达(43.3±5.0)%;实验组无血清培基中凋亡率达(22.0±2.5)%,对照组(7.0±1.1)%,差异有统计学意义(P<0.01).结论 成功在体外建立稳定表达DMBT1的胆囊癌细胞株,DMBT1在体外抑制胆囊癌细胞增殖,无血清下诱导其凋亡.
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大鼠肝内胆管癌发生发展与调节性T细胞动态变化的相关性
目的 探讨大鼠外周血、脾脏、肝肿瘤组织中CD4~+CD25～+Foxp3～+调节性T细胞动态变化与肝内胆管癌发生发展之间的关系.方法 实验组大鼠40只,每日饮用0.03%硫代乙酰胺溶液,对照组大鼠40只,正常饮水.自诱癌第10周起至第24周,每隔2周处死实验组及对照组大鼠各5只,流式细胞仪检测外周血、脾脏CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞数量,免疫组织化学法检测组织内Foxp3蛋白表达.结果 (1)在诱癌的过程中,大鼠肝脏依次发生以胆管腺体增生(12～14周),重度不典型增生(16周),浸润性癌(18～24周)为主的病理变化.(2)自诱癌第14周起,大鼠外周血Treg占CD4~+T细胞比例实验组和对照组分别为(4.25±0.64)%和(3.76±0.60)%,差异有统计学意义(P<0.01),实验组Treg比例之后逐渐升高,到18周时到高峰,为(6.18±0.64)%,此后开始下降.大鼠脾脏中Treg占CD4~+T细胞比例诱癌第18周实验组和对照组分别为(5.22±1.20)%和(3.30±0.24)%,差异无统计学意义(P>0.05),实验组Treg比例第20周时达到高峰(8.54±0.36)%.(3)实验组大鼠肝肿瘤组织、癌旁肝组织Treg在18周时较对照组升高(P<0.05),且随着肿瘤的进展持续升高.结论 外周血、脾脏Treg参与肝内胆管癌良性病变到恶性病变转变的这一过程,与肿瘤的发生有关,肿瘤微环境内Treg浸润水平与肿瘤进展密切相关.
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肿瘤干细胞标记物CD24、CD44、ESA和CD34在胆道肿瘤中的表达
目的 观察肿瘤干细胞标记物CD24、CD44、ESA和CD34在胆道肿瘤中的表达,初步明确其能否用于胆道肿瘤干细胞的分选.方法 运用组织化学和流式细胞术检测CD24、CD44、ESA和CD34在人胆道肿瘤细胞株和组织中的表达率.结果 CD24、CD44和ESA在人胆管癌和胆囊癌细胞株及组织中均有表达,胆管癌细胞株QBC939和胆囊癌细胞株GBC-SD中CD24~+CD44~+ ESA~+平均表达率分别为86.1%和92.7%,人胆管癌和胆囊癌组织标本CD24~+ CD44~+ ESA~+表达率为0.62%和0.83%;而CD34在胆管癌和胆囊癌细胞及组织中均无表达.结论 CD24、CD44和ESA是人胰腺癌干细胞和人乳腺癌干细胞表面标记物,其在人胆管癌和胆囊癌中的表达率和以上两者肿瘤干细胞的分选比例十分相似,有可能是胆道肿瘤干细胞表面标记物.
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胆管癌患者血清肿瘤标志物的筛查和鉴定
目的 通过双向凝胶电泳-质谱技术寻找胆管癌患者血清肿瘤标志物.方法 收集8例胆管癌和8例胆管结石患者血清,应用Albumin and IsG Removal kit去除其中的高丰度蛋白等成分,双向凝胶电泳技术分离血清蛋白样本,蛋白分离凝胶采用考马斯亮蓝染色,GPS Explorer~(TM)software凝胶图像分析软件对图像进行数据分析,通过基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱技术进行鉴定.结果 胆管癌和胆管结石患者血清双向凝胶电泳图谱中发现25个差异蛋白质点,20个差异蛋白质点获得成功鉴定,去除相同重复蛋白质后,有8种差异蛋白在胆管结石患者血清中高表达和7种差异蛋白在胆管癌患者血清中高表达.结论 胆管癌与胆管结石患者的血清蛋白中存在较多差异表达的蛋白质,利用双向凝胶电泳技术有望筛选出与胆管癌相关的肿瘤标志物.
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胆囊癌血清标志物的蛋白质组学研究
目的 分析胆囊癌患者和健康人血清蛋白质组的差异,筛选胆囊癌血清分子标志物.方法 以6例健康人和6例早胆囊癌患者的血清为样本,图像分析两组血清图谱寻找差异蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对差异蛋白点进行鉴定.Western blot和免疫组织化学方法检测差异蛋白质S100A10和结合珠蛋白在胆囊癌患者和健康人血清中的表达.结果 建立了健康人和胆囊癌患者血清样品的二维凝胶电泳图谱,质谱鉴定出24种非冗余的血清蛋白质.Westernblot证实了S100A10蛋白和结合珠蛋白在胆囊癌患者和健康人血清中的差异表达.免疫组织化学证实胆囊癌组织中S100A10及结合珠蛋白高表达.结论 24种血清差异蛋白质为筛选胆囊癌的血清分子标志物提供了实验依据.
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干扰X连锁凋亡抑制蛋白基因对人胆管癌QBC939细胞增殖及凋亡的作用
目的 观察反义寡核苷酸(ASODN)对人胆管癌QBC939细胞株X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因的抑制作用及对癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 脂质体法将ASODN转染入QBC939细胞中,转染12、24、48 h后荧光显微镜观察转染后细胞状态及转染率,应用噻唑蓝(MTT)比色法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和流式细胞仪法测定1.11μmol/L时细胞生长抑制率、XIAP mRNA表达和细胞周期及凋亡率.结果 转染效率可达95%;与对照组比较,1.11μumol/L细胞抑制率为(27.63±1.15)%(24 h),(42.95±1.07)%(48 h);mRNA下调23%(P<0.05);G_0/G_1期细胞、凋亡率高于对照组约27.34%、9.94%(P<0.05).结论 ASODN能有效下调QBC939细胞XIAP基因表达,抑制细胞增殖并诱导凋亡.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
