中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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缺氧诱导因子-1抵抗缺氧诱导的肿瘤细胞凋亡
目的 通过对结肠癌SW480细胞中缺氧诱导因子-1(HIF-1)的有效干扰,观察沉默HIF-1后对肿瘤细胞缺氧环境下凋亡的影响.方法 以三气培养箱诱导缺氧环境,pGenesil-11 质粒为载体转染SW480细胞沉默HIF-1.透射电镜观测肿瘤细胞的形态学变化;荧光染料Hoechst 33258、DNA Ladder检测细胞凋亡.结果 与第3天(0.19±0.02)、第15天(0.20±0.03)比较,第7天(0.16±0.02)时RNA干扰效果好(P<0.05).RNA阳性干扰组结肠癌SW480细胞:电镜下可见凋亡小体形成等形态学变化;细胞凋亡荧光检测,染色呈强蓝色荧光,并可见核碎裂;DNA Ladder检测出现细胞凋亡时典型的梯状条带.结论 HIF-1具有对抗缺氧诱导的肿瘤细胞凋亡的作用.
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芬太尼复合七氟醚诱导无肌松插管的量效关系
目的 观察芬太尼复合七氟醚诱导无肌松插管的半数有效量(ED_(50)).方法 择期短小手术患者26例,ASA Ⅰ-Ⅱ,年龄25～45岁纳入研究.8%七氟醚肺活量诱导,跟睑反射消失后,维持呼气末七氟醚浓度3%,按照改良Dixon序贯法调整芬太尼剂量(剂量梯度为0.4 μg/kg),静脉注射芬太尼4 min后气管插管.记录麻醉诱导前平均动脉压(MAP)、心率(HR)和熵指数(Entropy indices)的基础值以及捅管前后1 min及插管后3 min的变化.结果 8%七氟醚诱导,维持呼气末浓度3%,成功无肌松气管插管的芬太尼ED_(50)为(1.2±0.3)μg/kg,采用probit分析方法 芬太尼ED_(50)和ED95及(95%可信区间)分别为1.2 μg/kg(0.9～1.6) μg/kg和1.9 μg/kg(1.6～3.9) μg/kg.结论 8%七氟醚肺活量诱导,维持呼气末七氟醚浓度3%,无肌松满意气管插管的芬太尼ED_(50)为(1.2±0.3)μg/kg.
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碳酸酐酶Ⅸ与血管内皮生长因子在直肠癌组织中表达及其临床意义
目的 探讨直肠癌组织中碳酸酐酶Ⅸ(CA-Ⅸ)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达及与临床病理的关系.方法 应用蛋白免疫印迹方法 (Western blot)检测104例直肠癌、30例正常直肠组织、30例直肠腺瘤中CA-Ⅸ和VEGF的表达.结果 直肠癌组织中CA-Ⅸ和VEGF阳性表达率分别为72.1%和65.4%,高于正常直肠组织和腺瘤组织(P<0.05).CA-Ⅸ的表达与Dukes'分期及淋巴结转移相关,Dukes'分期A至C期CA-Ⅸ阳性率下降(P<0.05),淋巴结转移组CA-Ⅸ阳性率低于无淋巴结转移组(P<0.05).直肠癌组织和系膜组织VEGF的表达与淋巴结转移关系密切,N2组VEGF阳性表达率分别为81.3%和75.0%,高于NO组的53.7%和25.9%(P<0.05).CA-Ⅸ和癌组织和系膜组织的VEGF的表达无明显相关(r=0.092和r=-0.292).结论 CA-Ⅸ和VEGF表达与直肠癌发生、发展和浸润转移有关,但两者作用机制不同.
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转录因子E2F-1对裸鼠人胃癌细胞移植瘤生长的影响
目的 观察含有转录因子E2F-1的重组逆转录病毒载体(pLXSN-E2F-1)对裸鼠人胃癌细胞移植瘤E2F-1基因的表达和肿瘤生长的影响.方法 建立人胃癌MCC-803细胞裸鼠移植肿瘤模型,随机分为pLXSN-E2F-1组、pLXSN组、生理盐水组.隔天向各组分别注射相应药物0.2 ml,共7次,同时测量各组肿瘤体积.15 d后处死裸鼠,显微镜下观察移植瘤组织形态变化,用免疫组织化学法、半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测移植瘤中E2F-1基因的表达,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡指数.结果 与生理盐水组和pLXSN组比较.pLXSN-E2F-1组肿瘤生长速度明显减慢(P<0.05);病理学观察确认所取组织为恶性肿瘤组织;免疫组织化学结果 显示pLXSN-E2F-1组的肿瘤细胞细胞质内有较多棕褐色颗粒沉着,pLXSN组和生理盐水组肿瘤细胞细胞质内均未见或偶见棕褐色颗粒沉着;半定量RT-PCR和Western blot结果 均显示pLXSN-E2F-1组E2F-1表达较pLXSN组和生理盐水组明显上调(P<0.05);pLXSN-E2F-1组的凋亡指数(15.4±4.1)%,显著高于pLXSN组(8.3±2.2)%和生理盐水组(8.1±2.3)%(P<0.05).结论 逆转录病毒载体pLXSN-E2F-1瘤内注射可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长.
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一种气管导管固定技术在脊柱侧凸矫形术及唤醒试验中的应用
目的 观察一种气管导管固定技术在俯卧位脊柱侧凸矫形术麻醉中应用的效果.方法 将60例脊柱侧凸矫形术患者随机分为2组,导管固定组(A组,n=30)及常规方法 组(B组,n=30).A组行加强钢丝气管导管插管成功后,将导管放置正中,用食指推开舌体,用无菌绷带围绕气管导管进行填塞至门齿内侧,留5 cm绷带于口外,3 L输液贴膜穿过气管导管后固定于口部周围.B组常规固定导管.结果 A组胶带干燥且固定良好,而B组浸湿并松动.A组导管固定后在口内笔直无弯曲,头位改变移动度(8±3)mm.B组在口内有弯曲,移动度(26±4)mm.结论 采用自创气管导管固定技术防止脊柱手术中体位改变和术中唤醒造成的气管导管脱出,操作简单价廉且提高了麻醉的安全性.
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~(125)I粒子平面插植剂量学研究
目的 观察同活度、同数量~(125)I粒子单平面布源的剂量分布.方法 利用计算机三维治疗计划系统(TPS)模拟9颗2.96×10~7Bq(贝克)~(125)I粒子9种分布模式,求出60、80、130、145、200Gy剂量分布曲线及曲线包含的面积、长径、短径.结果 粒子不同分布时相同等剂量曲线包含的面积、长径、短径存在差异.60、80、130、145、200Gy等剂量曲线内面积大的粒子排列分别为:X1.5Y1.5、X1Y1.5、X1Y1(2)1.5、X1Y1、X1Y1(2)0.5,对应的面积分别为:1641.91、1166.42、791.09、718.27、474.63 mm~2.结论 同活度、同数量~(125)I粒子的不同布源方式直接影响剂量分布.同一剂量曲线内面积大时的粒子排列剂量分布较均匀,靶区内无剂量学冷点,可能会有较好疗效.
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复合骨在兔腰椎融合过程中相关基因表达调控的影响
目的 观察复合骨即重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)/异体骨不同时间点融合骨组织中BMP-2、血管内皮生长因子(VEGF)的表达.方法 将新西兰大白兔60只随机分为3组,在L5、L6横突间行后路植骨融合术,分别植入复合骨条、自体骨条及异体骨条,于术后第1、2、3、4、5周取融合标本,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)分析内源性BMP-2和VEGF基因水平的变化.结果 术后第3周,复合骨组BMP-2为(5.3519±1.0384),VEGF为(0.9257±0.2534),均达到峰值且高于异体骨组和自体骨组(P<0.05),之后则缓慢下降.第4周后,内源性BMP-2表达仍保持较高水平,但VEGF的水平与自体骨组和异体骨组差异无统计学意义(P>0.05).结论 复合骨能有效地诱导内源性BMP-2和VEGF的表达,促进了成骨效应.
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肺腺癌A549细胞CD133~+CD44~+表型在裸鼠体内成瘤能力的研究
目的 探讨肿瘤标志物CD133和CD44的表达与人肺腺癌A549细胞株在裸鼠体内形成肿瘤能力的关系.方法 使用单细胞克隆的方法 ,筛选出能够持续增殖分裂的肿瘤细胞,应用免疫荧光方法 和流式细胞仪检测CD133和CD44在具有增殖分裂能力的A549细胞和普通A549肿瘤细胞的表达情况;按表达结果 对A549细胞进行分组,应用单克隆方法 对各组细胞进行培养,并按不间密度注射于裸鼠皮下,观察各个组别的成瘤能力.结果 (1)在倒置显微镜下观察肿瘤细胞生长情况,发现多数细胞死亡,1周后仅有4.11%的细胞能够增殖分裂形成克隆.(2)具有增殖分裂能力肿瘤细胞的免疫荧光结果 :CD133阳性率为19.0%,CD44阳性率为57.0%;普通A549肿瘤细胞免疫荧光结果 :CD133阳性率为2.5%,CD44阳性率为34.0%;具有分裂增殖能力的肿瘤细胞CD133和CD44阳性表达率显著高于普通A549肿瘤细胞(P<0.01).(3)裸鼠体内成瘤能力实验提示:CD133~+CD44~+(A组)细胞成瘤能力显著高于CD133~-CD44~-(B组)、CD133~-CD44~+(C组)和CD133~+CD44~-(D组)细胞(P<0.05);裸鼠瘤块病理检查证实均为腺癌,各脏器检查未发现转移:在接种CD133~+CD44~+(A组)细胞的瘤块组织中发现除了有CD133~+CD44~+细胞外,还有CD133~-CD44~-细胞.结论 肺腺癌A549细胞株中CD133~+CD44~+细胞在裸鼠体内的成瘤能力显著高于其他细胞.
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脑灌注压对创伤性脑损伤后急性脑缺血的影响
目的 观察不同脑灌注压(CPP)对创伤性脑损伤后急性脑缺血的影响.方法 实验家兔60只,随机分为正常对照组(无损伤组)、高CPP组(90～110)mm Hg、中CPP组(70～80)mm Hg、低CPP组(50～60)mm Hg、极低CPP组(35～45)mm Hg.采用Feeney's自由落体撞击法建立急性局灶性脑挫裂伤模型,伤后80 min静脉给予升压和降压药物调控血压使CPP达到设计要求,同步进行脑血流、CPP测定,并进行图像分析,且观察不同CPP下颅脑损伤后急性脑缺血动物脑含水量及神经组织超微结构改变.结果 对照组局部脑血流量(rCBF)为156.18±6.22;高CPP组实验组rCBF为140.03±17.32,中CPP组rCBF为100.46±21.37,低CPP组rCBF为86.46±10.30,极低CPP组rCBF为60.36±8.32.对照组脑含水量为(78.21±0.26)%;高CPP组实验组脑含水量为(80.15±0.52)%,中CPP组脑含水量为(80.27±0.36)%,低CPP组脑含水量为(81.18±0.62)%,极低CPP组脑含水量为(81.34±0.83)%.实验组脑组织含水量高于对照组(P<0.01);实验组rCBF较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);高CPP组rCBF明显高于低CPP组及极低CPP组,差异有统计学意义(P<0.01);中CPP组rCBF虽低于对照组及高CPP组,而高于低CPP组及极低CPP组,但组间比较筹异无统计学意义(P>0.05).低CPP组及极低CPP组脑含水量、超微结构较对照组差异有统计学意义(P<0.05).结论 在缺血急性期及时有效地改善脑循环、恢复脑供血是阻止脑缺血发展成为脑组织不可逆损伤的重要环节.
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睾丸特异表达基因-1在小鼠隐睾模型中的表达及其意义
目的 探讨睾丸特异表达基因-1(TSEG-1)在小鼠隐睾模型中的定位、定量表达变化及其意义.方法 将46只雄性昆明新生小鼠随机分为对照组(n=10)、丙二醇(溶剂)注射组(n=15)、17β-雌二醇注射组(n=21),应用苏术素-伊红(HE)染色观察睾丸组织形态学改变,原位杂交、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和实时定量PCR检测TSEG-1 mRNA的定位和定量变化.结果 17β-雌二醇注射组发生隐睾,而对照组和丙二醇注射组睾丸位置正常.与对照组比较,17β-雌二醇组睾丸组织80%曲精小管管腔消失,Ⅰ～Ⅳ级生精细胞数目减少,60%精母细胞或精子细胞核皱缩,90%精子发生障碍.在对照组睾丸组织中,TSEG-1 mRNA表达水平是模型组25倍,主要定位于精母细胞和早期精子细胞,而隐睾组TSEG-1 mRNA表达水平显著下调.结论 17β-雌二醇诱导小鼠隐睾模型是制作隐睾模型的有效方法 ,新基因TSEG-1可能参与雌激素诱导隐睾模型的发生过程.
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脆性组氨酸三联体基因对胆管癌细胞凋亡的影响
目的 观察脆性组氨酸三联体(FHIT)基因对胆管癌细胞株QBC939凋亡的影响,探讨FHIT基因对细胞周期蛋白Cyclin D1的调控作用.方法 通过构建重组人FHIT真核表达质粒转染QBC939细胞,应用流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡的变化,并通过荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测胆管癌细胞Cyclin D1表达的变化.结果 成功构建出重组人FHIT真核表达质粒并转染入QBC939细胞,转染后QBC939细胞的凋亡率明显增高(25.8%比30.9%比55.4%,P<0.05);并且Cyclin D1 mRNA表达下降至原细胞株的0.03倍,该基因蛋白质的表达也明显下降(0.33±0.02对比0.33±0.01比0.14±0.02,P<0.05).结论 FHIT基因可以促进QBC939细胞凋亡,并能下调Cyclin D1基因的表达.
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WNT激活剂促进人骨髓基质干细胞向软骨细胞分化的研究
目的 观察WNT激活剂SB-216763是否具有促进人骨髓基质干细胞(hMSCs)向软骨细胞分化的功能.方法 6例hMSCs,将成软骨细胞诱导分化的hMSCs与SB-216763共同培养,光镜下计数Alcian blue染色阳性的软骨岛的数目、以Alcian blue染色法定量检测由hMSCs分化而来的软骨细胞分泌硫酸化糖胺聚糖的能力,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测软骨细胞标志基因SOX9、Collagen Ⅱ、Aggrecan的表达变化.结果 在hMSCs成软骨诱导分化过程中,SB-216763可以显著增加软骨岛的数目(133.17±16.58比9.67±1.87,P<0.01),显著增加hMSCs分化的软骨细胞分泌硫酸化糖胺聚糖的量(1.6～2.6倍,P<0.01),并促进SOX9、Collagen Ⅱ和Aggrecan基因的表达.结论 SB-216763可以促进体外hMSCs向软骨细胞的分化和成熟.
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胶质瘤间质血管增生和细胞增殖与环氧化酶-2基因的关系
目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)基因与胶质瘤间质血管增生和细胞增殖的关系.方法 用原位杂交方法 检测胶质瘤组织中COX-2 mRNA的表达;用免疫组织化学检测同等标本中细胞增殖指数(Ki-67LI)及微血管密度(MVD)的表达;并将COX-2 mRNA与Ki-67、CD34作相关分析.结果 胶质瘤中COX-2 mRNA表达阳性率为62.69%,对照脑组织中无阳性表达.COX-2 mRNA阳性着色定位于微血管周围,呈棕黄色园环状表现.C0x-2 mRNA表达阳性率在低度恶性胶质瘤(Ⅰ、Ⅱ级)中为37.14%(14/35),而在高度恶性胶质瘤(Ⅲ、Ⅳ级)中为87.50%.在低度、高度恶性胶质瘤中MVD分别为12.54±3.11和20.31±5.49;其Ki-67LI分别为12.29±5.12和23.31±7.14.COX-2 mRNA表达为阴性和阳性胶质瘤中其MVD分别为16.90±6.48和9.46±2.15,其Ki-67LI分别为18.73±8.87和11.10±2.93.结论 COX-2 mRNA在胶质瘤组织中的表达与胶质瘤间质血管增生和细胞增殖密切相关;MVD和Ki-67U在COX-2 mRNA表达为阴性和阳性组织中比较差异有统计学意义.
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卡巴胆碱对犬烧伤休克早期口服补液效果的影响
目的 观察卡巴胆碱对50%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烧伤早期口服补液效果的影响.方法 Beagle犬17条,先期行颈动、静脉、胃及膀胱置管,24 h后用凝固汽油燃烧造成50%TBSAⅢ度烧伤.随机分为不补液组、胃内补液组和胃内补液+卡巴胆碱组.伤后第1个24 h不补液组无治疗,其余2组于伤后30 min开始经胃内输注葡萄糖-电解质液或葡萄糖-电解质液复合卡巴胆碱(20 μg/kg).第1个24 h补液量为4 ml·kg~(-1)·%TBSA~(-1);伤后24 h起各组动物均实施静脉补液,至72 h处死动物.测定两胃内补液组伤后8 h内胃排空率,各组72 h内平均动脉压(MAP)、心输出量(CO)、尿量、血浆肿瘤坏死因子(TNF)-α含量以及伤后72 h脏器组织一氧化氮合酶(NOS)活性变化.结果 伤后3组MAP、CO、尿量及胃排空率均显著降低,血浆TNF-α含量显著增高.两胃内补液组MAP和CO高于不补液组;胃内补液+CAR组CO和胃排空率伤后4 h起显著高于胃内补液组(P<0.01),伤后24 h尿量也显著多于胃内补液组,伤后2、4和8 h血浆TNF-α含量以及伤后72h心、肝和空肠组织NOS活性显著低于胃内补液组(P<0.01或P<0.05).结论 卡巴胆碱能提高50%TBSA烧伤早期口服补液的复苏效果,其作用机制可能与促进胃排空和减轻炎症反应有关.
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尿酸对帕金森病大鼠学习记忆能力的影响及其机制
目的 探讨尿酸(UA)对六羟多巴胺(6-OHDA)诱导的SD大鼠帕金森病(PD)模型学习记忆能力的影响及其机制.方法 将雌性SD大鼠分为对照组(A组)、PD组(B组)、尿酸处理组(C1-C5组),每组各15只;PD造模成功后第1～6天C1、C2、C3、C4、C5组分别腹腔注射0.1、1、5、10、20 ms/(ks·d)的尿酸,A、B组分别腹腔注射等剂量生理盐水.第3周对各组行Y型电迷宫测试.第4周断头处死大鼠,用分光光度计测定纹状体内脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量,用免疫组织化学鉴定酪氨酸羟化酶(TH)、Caspase-3.结果 A组学习成绩平均为(4.12±1.57)次,记忆成绩平均为(3.17±1.19)次.与A组比较,B组和C1-C5组学习记忆能力明显下降(P<0.01),损毁侧纹状体内MDA含量明显增加,黑质TH阳性细胞计数明显减少,Caspase-3阳性细胞计数明显增多;与B组比较,C2、C3、C4组学习记忆能力明显增强(P<0.01),损毁侧损纹状体内MDA含量明显减少,黑质TH阳性细胞计数明显增多,Caspase-3阳性细胞计数明显减少,C1、C5与B组比较差异无统计学意义(P>0.01);同时C2、C3组与C1、C4、C5组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 PD大鼠学习记忆能力明显下降,适当剂量的尿酸可改善PD大鼠学习记忆能力,其机制可能与尿酸降低氧化应激,减少多巴胺能神经元凋亡,保护多巴胺能神经元有关.
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幽门螺杆菌热休克蛋白60诱导的抗原调节性T细胞及其对小鼠动脉粥样硬化的影响
目的 观察幽门螺杆菌热休克蛋白60(HP-HSP60)诱导的抗原特异性T细胞接种对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块的影响.方法 制备小鼠骨髓单核细胞,体外诱导HP-HSP60特异性调节性T细胞分化,并接种CD4~+CD25~+T_(reg)细胞后,观察其对小鼠动脉粥样斑块形成的影响.结果 阿司匹林处理的树突状细胞CDS0(43.0%)和CD86(41.1%)表达减少,形态学表现为未成熟树突状细胞,但其能诱导更多的特异性CD4~+CD25~+T_(reg)细胞(13.0±1.94)%,实验组粥样斑块面积(2.37±0.96)mm~2显著小于对照组(P<0.05).结论 未成熟树突状细胞可诱导出HSP60抗原特异性调节性CD4~+CD25~+T_(reg)细胞,后者在体内能明显抑制动脉粥样斑块的形成.
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抑制骨桥蛋白表达对肺癌侵袭、增殖的影响
目的 观察抑制骨桥蛋白(OPN)表达对肺癌细胞株A549侵袭、增殖的影响.方法 构建针对人OPN mRNA干扰质粒pENTR~(TM)/U6-INF(pINF-1)及对照质粒pENTR~(TM)/U6-CTR(pCTR),将其转染A549细胞.Western blot测定OPN的表达;噻唑蓝(MTY)比色法检测A549增殖力;Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭力的改变.结果 与空白对照组(1.23±0.16)比较,转染72 h后pINF-1组OPN蛋白表达(0.17±0.07)下降85%;转染 pINF-1后,A549细胞增殖力下降56%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).Matrigel实验示,与空白对照组(72.4±6.5)比较,转染pINF-1组细胞穿过人工基底膜的数量(15.2±2.8)明显减少,差异有统计学意义(P<0.01).结论 pINF-1可以特异性抑制肺癌细胞株A549中OPN的表达,可显著降低其侵袭力和增殖.
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内皮抑素联合放疗对lewis肺癌小鼠中缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子的影响
目的 观察重组人血管内皮抑制素(YH-16)对不同放疗处理的lewis肺癌小鼠缺氧诱导因子(HIF)-1α和血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 将60只lewis肺癌细胞小鼠随机分为5组:空白对照组、大剂量单次放疗组、小剂量分次放疗组、大剂量单次放疗联合YH-16组、小剂量分次放疗联合YH-16组.作相应处理后绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率,用免疫组织化学测定各组HIF-1α和VEGF的阳性表达,并对HIF-1α、VEGF和抑瘤率进行相关分析.结果 抑瘤率和HIF-1α及VEGF表达呈负相关(r分别为-7.823、-8.314,P<0.05),而HIF-1α与VEGF表达则无明显线性关系.结论 放疗前使用YH-16,可降低lewis肺癌小鼠组织中HIF-1α和VEGF的表达,使放疗敏感性增加.
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脾亢患者血小板计数与脾动脉血流量及血清一氧化氮水平间关系
目的 探讨脾亢患者血小板计数与脾动脉血流量及血清一氧化氮(NO)水平间关系.方法 肝硬化伴脾亢患者36例(脾亢组),健康体检者10例(对照组).血清NO浓度测定用硝酸还原酶法,脾动脉血流量由彩色多普勒超声仪测量.结果 脾亢组和对照组血小板计数分别为(60.75±27.77)×10~9/L、(212.40±71.76)×10~9/L(P<0.01);脾动脉血流量分别为(482.50±263.61)、(181.20±61.85)ml/min(P<0.01);血清NO水平分别为(97.646±20.990)、(50.774±19.400)μmol/L(P<0.01).脾亢组血小板计数与脾动脉血流量显著负相关(r=-0.422,P<0.05),血清NO水平与脾动脉血流量呈显著正相关(r=0.746,P<0.01).结论 血清NO水平升高导致脾动脉血流量增加可能在脾亢发生发展中起着重要作用.
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缺血预处理对大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制
目的 观察心肌细胞凋亡及其机制在大鼠心肌缺血再灌注损伤和缺血预处理中的作用.方法 将40只大鼠随机分成4组:对照组(A组)、60min缺血再灌注组(B组)、120min缺血再灌注组(C组)、缺血预适应组(D组);应用TUNEL法检测心肌组织的凋亡;心脏病理改变用光学和电子显微镜观察;检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、bcl-2和bax因子.结果 D组心肌细胞凋亡指数(11.36±4.23)%明显优于B组(18.14±7.69)%和C组(15.59±6.31)%,D组TNF-α、bel-2和bax的表达也明显优于B、C二组.结论 缺血预处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注后心肌细胞的凋亡;TNF-α、bcl-2和bax表达的抑制与缺血预处理保护机制有关.
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人类脑动脉瘤血管平滑肌细胞表型蛋白与雌激素受体表达
目的 探讨正常人体动脉血管和脑动脉瘤的血管平滑肌(VSMC)雌激素受体(ERs)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和结蛋白(Desmin)表达变化的关系.方法 临床取材8例非动脉瘤患者手术区头部动脉血管和脑动脉瘤切除标本18例.采用免疫组织化学和形态学分析方法 检测正常动脉血管和脑动脉瘤ERs、α-SMA和Desmin的表达.结果 脑动脉瘤VSMC的ERα和ERβ表达水平均高于对照动脉血管表达水平,差异有统计学意义(P<0.01).脑动脉瘤VSMC的α-SMA和Desmin的表达水平均低于对照动脉血管表达水平,差异有统计学意义(P<0.01).脑动脉瘤VSMCERs的表达与α-SMA和Desmin的表达水平明显相关.结论 人类脑动脉瘤VSMC的ERs表达水平普遍升高,其VSMC表型蛋白表达水平普遍降低,两者之间呈负相关,这可能与脑动脉瘤的形成有关.
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心肺复苏后延迟开始低温对新生猪缺氧缺血性脑损伤的影响
研究结果表明早期低温是治疗围生期新生儿缺氧缺血性脑损伤有效的措施之一~([1]).在临床实践中,新生儿从诊断窒息性脑损伤到开始实施低温治疗需要一定的时间.本研究旨在观察低温治疗延迟至心肺复苏后4 h开始对新生猪缺氧缺血性脑损伤的影响.
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大鼠前肢足垫皮肤交感节后神经元定位及手汗症术式
原发性手汗症是一种无明显诱因引起的手部汗腺分泌亢进的病态~([1]),胸交感神经切断术是目前唯一长期有效的治疗方法.我们通过辣根过氧化物酶(HBP)逆行示踪对支配大鼠前肢足垫皮肤的交感节后神经元在交感神经链中的位置进行定位,并探讨胸交感神经链切断术的治疗机制、术式选择及其与术后代偿性多汗的关系.
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放射性~(125)I粒子对家兔胆管的放射性损伤
放射性~(125)I粒子植入是组织间放疗的一种,可明显提高肿瘤靶区的剂量,在多种实体肿瘤应用广泛.粒子植入对周围组织器官可产生一定的放射性损伤,本行实验旨在观察不同剂量放射性~(125)I粒子植入在不同时间对胆管的放射性损伤,探讨粒子植入胆管周围的可行性.
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p53、Ki-157、c-Myc在大肠癌手术切缘组织中的联合检测及其意义
我们应用组织芯片技术和免疫组织化学方法观察110例大肠癌组织和相应切缘(癌旁5 cm)组织中p53、Ki-67、c-Myc的表达进行检测~([1-2]),探讨它们作为大肠癌手术切缘联合检测分子标记物的特异性.一、材料与方法1.材料:随机调取南京大学医学院附属鼓楼医院病理科2002至2004年存档的各类大肠癌组织和相应切缘组织标本各110例.所有病例临床资料完整,所有标本均经10%福马林固定,常规处理后石蜡包埋,保存完好.p53兔抗人单克隆抗体工作液和Ki-67鼠抗人单克隆抗体工作液购自北京中杉公司;c-Myc鼠抗人单克隆抗体浓缩液购自美国Thermo Fisher-Scientific公司,稀释成浓度为1:300的工作液.
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剪切分散法提取嗅鞘细胞及其三步顺序法纯化培养
嗅鞘细胞(OECs)移植是治疗脊髓损伤有前景的方法之一,近年来成为研究热点.传统OECs的提取需经胰酶消化、洗涤离心等多道步骤,过程繁琐、耗时,易造成细胞损伤、活力下降~([1]).OECs的纯化也是难点,目前尚无统一的标准~([1]).本实验旨在建立剪切分散法提取OECs及低浓度胰酶有限消化、短时差速贴壁、抗有丝分裂三步顺序法纯化细胞.
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缺血性脑损伤后MicroRNA 210及其靶基因ephrinA3的表达变化
Mir-210为缺氧特异性微小RNA(microRNA),缺氧环境下表达稳定上调~([1]);且有证据表明内皮细胞中过表达mir-210可下调其靶基因ephrinA3的蛋白表达,进而显著促进内皮细胞形成血管~([2]).我们通过构建大鼠急性脑缺血模型,观察脑缺血后各时间点缺血皮质区mir-210及其靶基因ephrinA3的表达变化,对其在脑缺血后血管新生过程中可能起到的调控作用进行了初步探讨.
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下腹部手术直切口皮下脂肪不缝合的皮内缝合法
本研究旨在分析传统的妇产科腹部切口皮内缝合法与下腹部手术直切口皮下脂肪不缝合的皮内缝合法两种的利弊,现将结果报道如下.一、资料与方法1.一般资料:从2007年1月至2009年4月在我院妇产科住院拟作开腹手术的302例患者随机分为2组,采用不同的缝合方法关腹:一组为研究组,共150例,常规缝合腹膜和前鞘后,应用4-0可吸收缝合线连续褥式缝合皮内,而不缝合脂肪层;另一组为对照组,共152例,采用传统的缝合方法,缝合腹膜及前鞘后,1-0丝线缝合皮下脂肪层组织,再用4-0可吸收缝合线连续褥式缝合皮内.两组均在术后第1天和第3天换药,第5天出院.
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高迁移率族蛋白A1在前列腺癌及癌旁组织中的差异表达
我们从mRNA水平和蛋白水平半定量检测高迁移率族蛋白A1(HMGA1)在前列腺癌组织及其相应的癌旁正常前列腺组织中的表达,探讨HMGA1的表达与前列腺癌发生、发展的相关性.一、材料与方法1.材料:选取2004年7月至2007年12月期间在第四军医大学唐都医院泌尿外科行手术切除的40例前列腺癌组织标本,另取40例相应的癌旁正常前列腺组织标本作为对照,置-80℃超低温冰箱中保存备用.
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SD大鼠肾后动脉的应用解剖
自1978年Hashimoto等~([1])通过结扎肾后动脉提高血压成功诱导大鼠颅内动脉瘤后,国内外学者对该模型逐步改进.本研究旨在观察大鼠肾后动脉走向及分支的解剖,为模型建立提供依据.一、材料与方法60只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠,体质量100～150 g,由南昌大学动物实验室提供.大鼠用3%戊巴比妥钠麻醉后,仰卧位固定,自鼠剑突下1 cm处行腹部正中切口进入腹腔,翻开网膜及肠管,找到腹后壁的双肾动静脉,用6×放大镜仔细观察和解剖双肾动脉及其分支肾前、肾后动脉的位置结构及走行.本研究通过南昌大学动物伦理学会认证和许可.
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不同程度永久性脊髓缺血动物模型的建立
腹主动脉结扎建立的脊髓缺血动物模型,存在着缺血性和淤血性并发症.我们选择性结扎兔不同水平的腰动脉,建立不同程度的脊髓缺血动物模型.
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人脑胶质瘤组织中同源盒HOXA1-A4基因mRNA表达
同源盒基因是生物发育分化的主控基因,对DNA合成的转录过程起调控作用.目前,关于同源盒基因在胶质瘤组织中表达的报道尚少~([1]).本研究旨在观察人脑胶质瘤肿瘤组织中同源盒基因HOXA1、HOXA2、HOXA3和HOXA4基因mRNA表达.一、材料与方法1.一般资料:2007年3至2008年8月收集吉林大学中日联谊医院神经外科28例胶质瘤标本,按2000年WHO神经系统肿瘤分类标准进行分级,其中WHOⅠ～Ⅱ级12例,为低恶组,WHOⅢ～Ⅳ16例,为高恶组.此外,9例取自外伤或癫痫脑叶切除患者的脑组织作为正常对照.
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siRNA抑制小胶质细胞上TLR4的表达
应用siRNA转染体外培养的原代大鼠大脑皮质和海马神经元,干扰外源导人基因或内源基因的表达已取得成功.我们设计了4条大鼠小胶质细胞Toll样受体4(TLR4)的siRNA,对比研究基因干扰对小胶质细胞上的TLR4基因表达和蚩白水平的影响.
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抗菌可吸收缝线与普通缝线在颈椎前路手术切口缝合中的应用比较
目的 观察抗菌可吸收缝线与普通缝线在骨科颈椎病颈前路手术切口缝合中的应用效果.方法 比较这2种缝线缝合切口的各35例行颈前路手术的颈椎病患者的缝合时间、缝线费用、术后切口感染、裂开、脂肪液化、术后住院时间及瘢痕形成等;并应用决策树分析比较其成本-效果.结果 缝合时间、缝线费用、术后住院日、瘢痕形成在两组间差异有统计学意义(P<0.05);以切口愈合效果为优作为治疗结点,抗菌可吸收缝线与普通缝线的每病例平均治疗费用分别为639.1元和1117.7元.结论 使用抗菌可吸收缝线缝合颈前路手术切口,患者术后住院日短,瘢痕小,成本-效果好.
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microRNA在肝细胞肝癌诊断和治疗中的研究进展
作为一种遗传相关性的复杂性疾病,肝癌的发生发展是一个由多基因参与的、多步骤、多阶段的由体内外多因素相互作用的复杂过程~([1]),涉及编码和非编码基因结构和表达水平的异常.随着对非编码基因的逐步认识,那些曾被作为冗余的片段,已经发现在细胞的生命活动中发挥着极为重要的作用,其中认识较为深刻的是microRNA(miRNA)~([2]).
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兔膝关节置换术后感染模型的建立
目的 建立兔膝关节置换(TKA)术后感染模型.方法 设计制作兔膝关节假体,新西兰兔48只行右膝TKA,4周后随机分为4组:对照组膝关节腔内接种无菌0.45%NaCl溶液,实验A、B、C组分别接种5×10~3、5×10~5、5×10~7CFU耐甲氧西林金葡菌(MRSA);监测血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP),4周后处死,取材行细菌培养和血培养.结果 感染率:对照组0(0/12);实验A组58.3%(7/12);B组100.0%(12/12);C组100.0%(12/12).血培养阳性率:对照组0(0/12);实验A组0(0/12);B组0(0/12);C组41.7%(5/12).实验组CRP、ESR显著升高,分别于第3、7天达峰值并维持在较高水平.结论 兔TKA术后4周接种5×10~5CFU的MRSA可成功建模.
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血红素氧合酶-1在HO-1/Luc小鼠原位肝脏移植模型中的表达
目的 应用活体生物萤光成像技术(BLT)无创定量检测血红素氧合酶-1(HO-1)在活体动物肝脏移植模型中的时空表达.方法 建立小鼠原位肝脏移植模型(HO-1/Luc转基因小鼠8只,wildtype小鼠40只),使用活体生物萤光成像技术连续检测HO-1在移植术后HO-1/Luc转基因小鼠中的转录.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HO-1 mRNA水平,免疫组织化学方法 (IHC)行HO-1的表达定位.结果 移植肝脏发出的萤光信号早于移植后1 h被检测到(P<0.05),随后信号不断增强在6 h达到峰值.与移植术前比较,除0、48 h外信号差异均有统计学意义(P<0.05).移植后48 h信号衰减至基础水平.与移植术前比较,RT-PCR方法 测得HO-1 mRNA于0～9 h均显著升高(P<0.05),其中于3 h达到峰值,12 h降至基础水平.IHC证实肝脏细胞是移植后HO-1表达上调的主要部位.结论 活体生物萤光成像技术可实时定量检测肝脏移植后HO-1的表达.
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黑色素瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24促进阿霉素杀伤肝癌细胞MHCC-97L机制的研究
目的 探讨黑色紊瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24(MDA-7/IL-24)基因促进阿霉素(ADM)杀伤肝癌细胞,逆转肝癌细胞多药耐药(MDR)的机制.方法 以人肝癌细胞株MHCC-97L为实验对象,使用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪比较Ad. MDA-7联合ADM处理组与ADM组、Ad. MDA-7组对肝癌细胞MHCC-97L和正常肝细胞L02的作用差异.观察MDA-7/IL-24对多药耐药的逆转作用.荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测MDR-1、STAT-3、bcl-2、bax mRNA的变化.Western blot检测gp-170、STAT-3、bcl-2、bax蛋白的表达的变化.结果 MTT表明Ad. MDA-7对正常肝细胞LO2无生长抑制作用(P>0.05).LO2细胞Ad. MDA-7联合ADM组与ADM组细胞生存率差异无统计学意义(P>0.05).低浓度(100 VP/cell)的Ad. MDA-7联合正常肝细胞的IC50浓度的ADM(1.5 mg/L)使得细胞抑制率从ADM组的17.46%上升到79.50%,生长抑制逆转4.55倍(P<0.05).MDR-1mRNA相对表达量从(16.49±0.11)下降至(5.48±0.05).STAT-3 mRNA相对表达量从(13.17±0.08)上升至(21.57±0.11).bcl-2及BAX表达与其他实验组比较差异均有统计学意义(P<0.05).联合实验组P-170蛋白的表达量较其他组明显降低,而磷酸化STAT-3蛋白的表达量亦增加.结论 Ad. MDA-7具有逆转肝癌细胞MHCC-97L多药耐药的作用,其下调MDR-1 mRNA的表达的同时,并通过活化STAT-3信号通路的表达促进肝癌细胞凋亡.
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肝癌边缘群细胞抑癌基因Tg737杂合性缺失的检测及其意义
目的 检测肝癌边缘群(SP)细胞中Tg737基因的杂合性缺失(LOH),探讨其与肝癌临床特征的关系及意义.方法 胶原酶结合机械消化法分别制备95例肝癌细胞及癌旁正常肝细胞悬液,Hoeehst33342染色并结合流式细胞仪分别分选肝癌及癌旁的边缘群细胞,分别提取DNA后以同一患者的外周血DNA为对照,采用PCR-SSCP-银染方法 检测肝癌和癌旁中SP细胞Tg737基因5个微卫星位点的LOH,然后进一步分析微卫星LOH情况与原发性肝癌临床特征的关系及意义.结果 95例肝癌边缘群细胞中,Tg737基因5个位点LOH发生的平均频率是71.24%,频率高点为G64212(78.75%),其中24例(25.30%)标本中检出3个以上微卫星标记位点存在LOH.其中SHGC-57879和G64212的LOH与肝癌的转移和TNM分期密切相关(P<0.01).结论 肝癌边缘群细胞中Tg737基因的高频率LOH与原发性肝癌的临床分期和远处转移相关,提示肝癌干细胞中的基因组不稳定性是影响肝癌病理进程的重要因素.
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脾切除对肝前性门静脉高压大鼠肝脏种植型肿瘤的诱导型一氧化氮合酶mRNA表达和肿瘤微血管密度的影响
目的 观察脾切除对肝前性门静脉高压大鼠肝脏种植型肿瘤组织的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达和肿瘤微血管密度(MVD)的影响.方法 采用门静脉部分结扎的方法 建立20只肝前性门静脉高压大鼠的模型,3周后将其随机分为2组:施行脾切除手术组(A组)、不施行脾切除手术组(B组),脾切除1周后在A、B组大鼠的肝脏上种植Walker256瘤株,2周后肿瘤组织取材.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 测定各组肿瘤组织标本的诱导型iNOS mRNA的表达量;免疫组织化学方法 染色进行肿瘤微血管计数;测定A、B组大鼠肝脏种植肿瘤的长、短径,计算肿瘤体积.结果 A、B两组iNOS mRNA表达量分别为2.32±0.24、2.98±0.28(P<0.05),A、B两组的肿瘤MVD分别为(18.76±1.21)/HP、(19.98±1.28)/HP(P<0.05),iNOS mRNA的表达量及肿瘤MVD的变化呈正相关(r=0.4751,P<0.05).结论 施行脾切除术可以降低肝前性门静脉高压大鼠肝脏种植型肿瘤iNOS mRNA的表达,导致一氧化氮(NO)的合成、释放减少,削弱了肿瘤血管生成的促进因素,使肿瘤组织MVD降低.该手术有助于降低肝脏肿瘤的侵袭能力.
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内源性大麻素诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡中Caspase-3的作用
目的 检测内源性大麻素(AEA)是否诱导人肝癌高转移细胞株MHCC97H细胞凋亡、以及Caspase-3在细胞凋亡过程中的作用.方法 分别于AEA(100 μmol/L)作用细胞前后,应用Annexin V Binding方法 、流式细胞仪检测细胞凋亡率;荧光活性检测试剂盒检测细胞Caspase-3活性;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 ,检测Caspase-3、bcl-2及bax的mRNA表达.结果 AEA作用细胞3、6、12、24 h,细胞凋亡率分别为(14.13±2.17)%、(27.04±3.21)%、(34.98±7.74)%及(81.35±9.71)%,其中24 h的细胞凋亡率与对照组(12.72±0.44)%比较,差异有统计学意义(P<0.01).AEA作用细胞24 h,细胞的Caspase-3活性由142.0±5.8增加至226.0±6.4(P<0.01);Caspase-3 mRNA的表达由0.24±0.13升高至0.54±0.32(P<0.05);如预先加入Caspase-3抑制剂(Z-VAD-FMK)后再加入AEA,则细胞的Caspase-3活性不再升高90.0±4.3.RT-PCR方法 未检测到bcl-2 mRNA及bax mRNA的表达.结论 AEA对人肝癌高转移细胞MHCC97H具有凋亡诱导作用,Caspase-3参与了凋亡的调控.
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解耦联蛋白-2基因敲除减轻高脂饮食诱导小鼠脂肪肝缺血再灌注损伤
目的 观察解耦联蛋白-2(UCP-2)基因在脂肪肝缺血再灌注损伤中的作用,探讨以UCP-2为靶点的脂肪供肝预处理新途径.方法 实验动物分为3组:实验组(A组):UCP-2基因敲除小鼠,给予高脂饮食(n=20);空白对照组(B组):野生型同系小鼠,给予正常饮食(n=20);阴性对照组(C组):野生型同系小鼠,给予高脂饮食(n=20).喂养6个月,建屯小鼠脂肪肝模型.各组小鼠阻断门静脉缺血15 min,再灌注24 h后处死,检测肝组织中UCP-2基因表达及三磷酸腺苷(ATP)、活性氧族(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;并行血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)检测及肝组织病理学检测.结果 高脂饮食喂养6个月后成功建立小鼠脂肪肝模型;Western blot证实A组小鼠UCP-2无表达,C组表达明显高于B组;A组ALT、AST、ATP、ROS、LDH的定量值为:(55.33±5.51)、(128.33±7.02)U/L、(28.00±2.00)nmol/L、(165.33±7.09)、(1176.00±22.27)U/pmt;B组上述指标为(25.00±4.58)、(85.33±4.51)U/L、(24.33±4.16)nmol/L、(147.33±7.51)、(707.33±31.64)U/prot;C组为(142.67±13.01)、(220.67±7.02)U/L、(8.67±1.53)nmol/L、(65.00±5.00)、(1748.33±42.52)U/prot,A组和C组差异有统计学意义(P<0.05);病理检测表明A组损伤轻于C组.结论 抑制解耦联蛋白-2基因表达能在减轻小鼠脂肪肝急性损伤.
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体在人肝细胞肝癌的原发灶及其门脉癌栓中的表达及意义
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体DR4、DR5、DcR1、DcR2在人肝细胞肝癌的原发灶及其门脉癌栓中的表达及意义.方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测20例人肝细胞肝癌的原发灶及其门脉癌栓和20例未发生转移的原发性肝癌组织中TRAIL受体mRNA的表达水平.结果 死亡受体DR4、DB5在无转移的肝癌组织分别为(3.59±0.87)、(1.98±0.54),伴有门脉癌栓的肝癌原发灶组织(分别设定为1)及其门脉癌栓组织中的表达量分别为(0.62±0.28)、(0.31±0.12),呈递减趋势(P<0.05).诱捕受体DcR1、DcR2在伴有门脉癌栓的肝癌组织中的表达量分别为(0.29±0.04)、(0.54±0.08),显著低于无转移的肝癌组织(分别设定为1)(P<0.05).而在伴发PVTT的HCC中,门脉癌栓组织与其肝癌原发灶组织中DcR的表达量差异无统计学意义(P>0.05).DR的表达水平与肿瘤的分化程度(r=0.461,P<0.05)及门静脉浸润情况(r=0.587,P<0.05)呈显著正相关.DR的表达水平与肿瘤的大小及血清甲胎蛋白(AFP)浓度无明显相关(P>0.05).结论 TRAIL死亡受体DR的表达下调可能与肝癌的恶性进展密切相关.TRAIL 途径诱导凋亡在肝癌转移过程中可能起到重要的作用.
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银杏叶提取物对黄曲霉毒素B_1诱导的大鼠肝癌的化学预防作用
目的 探讨银杏叶提取物(EGb761)对黄曲霉毒素B_1(AFB_1)致大鼠肝癌(HCC)发生发展的干预作用及其机制.方法 A组(AFB_1组28只)、B组(AFB_1+EGb761组29只)和C组(对照组14只)3组大鼠,定期肝活检并于第64周全部处死,观察实验肝癌发生过程中大鼠肝组织病理学、肝癌发生率、丙二醛(MDA)及8-羟基鸟嘌呤核苷(8-OHdG)蛋白表达的变化.结果 B组大鼠诱癌各时期肝脏损害均较A组轻,增生性病变发生亦较迟,肝癌诱发率(26.92%)明显低于A组(76.00%)(P<0.01),对照组无肿瘤发生.在各检测点(实验第14、28、42、64周),B组大鼠肝组织MDA含量(nmoL/mg蛋白)分别为0.14±0.01、0.24±0.01、0.36±0.01、0.60±0.01,均显著低于A组的0.27±0.01、0.66±0.01、0.56±0.01、0.93±0.02(P<0.05),在第64周时还明显低于C组的0.84±0.03(P<0.05);B组在第28、42和64周时8-OHdG蛋白的表达强度均显著低于A组(P<0.05).结论 EGb761能够明显抑制AFB_1诱发大鼠肝癌的发生,这可能与其降低了自由基所致的脂质过氧化反应、减轻AFB_1诱导的氧化损伤有关.
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p53对肝癌细胞中GADD45β表达诱导的影响及其调控机制
目的 观察p53对肝癌细胞GADD45β诱导的影响并探讨其机制.方法 转染p53全序列建立Hep3B~(+p53);比较S腺苷蛋氨酸对Hep3B~(+p53)的GADD45β表达诱导及其对近端启动子活性影响;比较DNA合成能力和细胞克隆形成能力及其对Caspase基因的影响.结果 Hep3B~(+p53)可以稳定表达p53蛋白;p53转染能使S腺苷蛋氨酸对Hep3B~(+p53)中GADD45β的表达诱导由0.0089增加至0.0192和0.0371,同时使启动子中3个核因子(NF)-κB活性分别增强1倍、50%和25%,Hep3B~(+p53)的DNA合成能力降至80.99%和42.53%,细胞克隆形成能力的抑制率为15.04%和90.42%;Hep3B~(+p53)的Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的活性无明显变化.结论 p53在肝癌细胞的GADD45β表达诱导中有重要作用,增强转录调节因子的表达水平是其可能的作用机制.
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基于iTRAQ技术筛选肝细胞癌微血管侵犯的生物标记物
目的 利用核素标记的相对和绝对定量(iTRAQ)技术比较肝内无血管侵犯和微血管侵犯的肝细胞癌(HCC)患者的血清,筛选并鉴定其差异表达的蛋白质,以作为HCC微血管侵犯的生物标记物.方法 收集无血管侵犯和微血管侵犯的HCC患者血清各15例,组内等量混合后利用免疫亲和柱去除14种高丰度蛋白,iTRAQ试剂标记后的样本利用二维色谱分离,经串级质谱鉴定及相对定量.结果 鉴定得到75种蛋白质,其中差异表达的蛋白有20种(上调或下调20%),微血管侵犯组较无血管侵犯组上调的蛋白有12种,下调的有8种.结论 鉴定出多种与肝癌微血管侵犯相关的生物标记蛋白,为肝细胞癌转移和复发的预测和术后的干预治疗提供了实验依据.
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合用阿伐斯汀增强索拉非尼对肝癌生长转移的抑制作用
目的 观察合用阿伐斯汀(avastin)与索拉非尼(sorafenib)对人肝癌裸鼠模型的抑制效果.方法 采用人肝癌裸鼠原位模型LCI-D20,分为对照组、serafenib单用组(30mg/kg灌胃,1 d1次)、sorafenib与avastin合用组、avastin单用组(5 mg/kg腹腔注射,1周2次),治疗4周后观察肿瘤体积、肺转移、血浆血管内皮生长因子(VEGF),定量比较肿瘤微血管密度(MVD)和肿瘤血管内皮细胞凋亡指数,观察各组荷瘤鼠生存期.结果 对照组、sorafenib治疗组、mrafemb与avastin合用组、avastin治疗组肿瘤体积分别为(5.70±0.17)、(1.10±0.18)、(0.60±0.12)和(2.10±0.28)mm~3;肺转移灶数目分别为(191±23)、(98±18)、(31±19)和(98±20)个;血浆VEGF分别为(1689±612)、(3762±1195)、(1844±746)和(420±161)ng/L;中位生存期分别为70、87、112、80 d.4组肿瘤微血管密度分别为(3.77±0.44)%、(1.28±0.15)%、(0.56±0.08)%、(1.32±0.18)%;肿瘤血管内皮细胞凋亡指数分别为(12.6±1.8)%、(32.6±8.7)%、(54.3±11.9)%、(26.8±6.5)%;与sorafenib治疗组比较,avastin与sorafenib合用明显抑制血浆VEGF(P<0.05)、降低肿瘤体积(P<0.05)、抑制肺转移灶数目(P<0.01),延长荷瘤鼠生存期(P<0.05),降低肿瘤微血管密度(P<0.05)和促进肿瘤血管内皮细胞凋亡(P<0.05).结论 sorafenib在肝癌裸鼠模型中上调血浆VEGF导致耐药,avastin下调VEGF,通过促进肿瘤血管内皮细胞凋亡和降低肿瘤微血管密度,进一步增强sorafenib对肝癌生长和转移的抑制作用,并延长荷瘤鼠生存期.
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边缘群细胞在肝癌耐药中的作用及其机制
目的 观察肝癌细胞株Li-7中边缘群在肝癌耐药中的作用,并分析其可能机制.方法 流式细胞术分选边缘群和主群细胞后,MTS法比较阿霉素作用下两亚群细胞增殖能力,流式分析ABCG2/BCRP表达,观察边缘群细胞的耐药作用.利用P13K抑制剂LY294002,分析Akt信号通路对边缘群细胞表型及耐药现象的作用.结果 边缘群细胞占Li-7细胞总数(2.07±0.22)%,阿霉素作用后其增殖能力高于主群细胞,吸光度值第9天(0.33±0.06比0.05±0.02,P<0.05),第12天(0.58±0.09比0.04±0.02,P<0.01),ABCG2/BCRP荧光强度高于主群细胞(212.72±21.01比96.36±18.36,P<0.05).LY294002作用后,边缘群细胞比例降至(0.96±0.21)%,阿霉素作用后细胞存活率由(64.93±6.96)%降至(38.73±5.25)%(P<0.01).结论 Li-7细胞边缘群耐药性较强,其机制与有功能的ABCG2/BCRP及Akt信号通路有关.
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双层法氧合冷保存心跳停搏大鼠肝细胞移植研究
目的 观察双层法(TLM)氧合冷保存较UW保存能否改善心跳停搏供体(NHBD)肝细胞存活率和功能.方法 SD大鼠为供体,建立NHBD模型,NAPs大鼠为受体.根据热缺血时间(WIT)15 m/n和30 m/n分成2组;按TLM、UW分别保存3、12 h和未保存再各分5个亚组(n=5).检测NHBD肝细胞存活率和ATP水平,观察肝细胞移植(HTx)后肝细胞形态和功能.结果 TLM3、12 h组肝细胞存活率分别显著高于UW 3、12 h组[(69.7±4.1)%和(69.1±2.0)%比(55.1±2.3)%和(53.3±2.0)%;P<0.01];TLM 3、12 h组AlP水平分别显著高于UW 3、12 h组(3.25±0.79和3.06±0.67比2.25±0.53和1.63±0.40;P<0.05或P<0.01).HTx后几乎所有时间点TLM组血清白蛋白(ALB)水平都显著高于UW组(P<0.05或P<0.01).在HTx 14d后,形态学显示TLM组肝细胞保持强活力,糖原和ALB染色呈强阳性.结论 TLM氧合冷保存可显著改善和逆转NHBD肝细胞存活率和功能,减少NHBD肝细胞缺血性损伤.
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大鼠肝缺血及再灌注所致小肠过氧化损伤及丹参的保护作用
目的 观察大鼠肝缺血再灌注小肠过氧化损伤及丹参预处理的保护作用.方法 首先将SD大鼠随机分为正常对照组(CO组)、假手术组(SO组)、缺血再灌注组(IR组)、丹参预处理组(SM组),分别在肝缺血30、45、60 min时取上段空肠进行大体病理学检测;然后在肝缺血45 min条件下,动物亦随机分为4组(CO组、SO组、IR组、SM组),按再灌注后不同时间(0、3、12、24、72 h)分为5个亚组,每组5只.SM组在阻断第一肝门30 min前经尾静脉推注丹参注射液6 g/kg加生理盐水40 ml/kg,其余各组按40 ml/kg给予生理盐水尾静脉注入,SO组开腹后仅解剖肝门,不钳夹肝蒂.分别在再灌注0、3、12、24、72 h取上段空肠行病理学检查、丙二醛(MDA)含量测定、髓过氧化物酶(MPO)活性测定.结果 空肠黏膜损伤评分随肝缺血时限延长而加重;在肝缺血45 min再灌注不同时限点SM组空肠黏膜损伤较IR组明显减轻,且肠组织MDA含量、MPO活性均低于IR组(P<0.05).结论 肝缺血再灌注所致小肠明显淤血性损伤,MDA含量、MPO活性升高,丹参预处理对肝缺血再灌注所致小肠损伤具有保护作用.
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肝硬化脾功能亢进患者肝组织中铁过载及铁调素mRNA表达的意义
目的 探讨肝硬化合并不同程度脾功能亢进(脾亢)患者肝组织中铁过载及铁调素(hepcidin)mRNA表达的意义.方法 收集肝硬化合并轻、中及重度脾亢患者肝活检标本各10例,共30例(肝硬化组),外伤性肝破裂手术标本10例(对照组),采用原子分光光度计检测肝组织铁元素含量;采用化学发光法检测血清铁蛋白的含量;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织hepcidin mRNA的表达.结果 肝硬化脾亢患者按脾功能亢进程度分为轻、中及重度3组,其肝组织中铁元素含量明显递增,分别为(0.1205±0.0021)、(0.1624±0.0028)和(0.1716±0.0032)mmol/g,均明显高于正常肝组织(0.0639±0.0025)mol/g(P<0.05),表现为铁过载;肝硬化组血清铁蛋白的含量为(436.2±51.6)μg/L,显著高于对照组的(152.5±38.7) μg/L(P<0.01);肝硬化组hepcidin mRNA的表达水平为1.73±0.26,明显高于对照组的0.68±0.22(P<0.01);而且各组的hepcidin mRNA表达水平与血清铁蛋白含量之间具有显著相关性(肝硬化组r=0.735,对照组r=0.648,P<0.01).结论 肝硬化脾亢患者的肝组织中存存铁过载,并随脾亢程度加重而明显增加;hepcidinmRNA是调节铁代谢平衡并影响肝硬化进程的重要因素.
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熊果酸对肝癌细胞株Bel-7404转移及侵袭能力的影响
目的 观察熊果酸(UA)对肝癌细胞株Bel-7404细胞转移侵袭能力及相关基因基质金属蛋白酶(MMP)-2、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-2 mRNA和蛋白表达水平的影响.方法 选用3个组:A组(UA 50 μmol/L)、B组(顺铂10mg/L)和C组(DMEM空白对照)对Bel-7404细胞进行处理,用细胞迁移实验及Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测细胞中MMP-2、TIMP-2 mRNA及蛋白的表达水平.结果 对Bel-7404细胞作用48 h后,A、B两组细胞的迁移速率(35.2±8.7)、(30.5±8.6)μm/h及侵袭穿膜细胞数(21.2±5.3)、(20.2±5.7)个、MMP-2 mRNA 0.24±0.06、0.23±0.05及蛋白0.21±0.01、0.24±0.04表达水平均较C组(75.6±8.7)μm/h、(54.8±7.8)个、0.46±0.11、0.42±0.06明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01),而TIMP-2 mRNA0.87±0.05、0.83±0.06及蛋白0.98±0.06、0.95±0.09表达水平均比C组0.31±0.02、0.59±0.02高,差异均有统计学意义(P<0.01);A、B两组间细胞的迁移速率、侵袭穿膜细胞数、MMP-2和TIMP-2 mRNA及蛋白表达水平的比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 UA可抑制肝癌Bel-7404细胞株的迁移侵袭,其机制可能与MMP-2表达下调而TIMP-2表达上调有关.UA 50 μmol/L对Bel-7404细胞迁移侵袭能力的抑制作用与顺铂10 mg/L具有相同的效果及机制.
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泡球蚴感染小鼠所致肝损伤基因表达谱的变化
目的 观察泡球蚴感染小鼠肝脏基因表达谱的变化.方法 采用开腹直视下肝左叶注射泡球蚴混悬液构建小鼠肝泡型包虫病动物模型.运用包含25000个小鼠基因的36 K小鼠全基因组寡核苷酸芯片,检测感染8周后小鼠肝脏的基因表达.荧光定量逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)法验证芯片结果 .结果 小鼠肝脏受泡球蚴侵染8周后,共有108条基因表达发生改变,功能聚类分为新陈代谢、信号转导、细胞生长、转录调节、细胞骨架、凋亡、免疫应答及运输等11类.荧光定量RT-PCR验证正确.结论 泡球蚴感染可以导致小鼠肝脏基因表达谱发生的改变,涉及多个基因表达调控途径.
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肝移植物胆管病的研究进展
肝移植术后的胆道并发症通常是指具有临床表现又有放射学依据、需行介入治疗或手术治疗的胆道狭窄、梗阻、胆漏及胆栓/泥形成等.其发生率为20%～34%,在右半肝活体肝移植的受体则高达15%～64%.其中,有6%～13%需再次肝移植,病死率可高达19%,是影响患者生活质量及导致移植肝功能丧失甚至死亡的主要原因之一~([1-2]).
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外科临床研究:我的感悟
临床外科走过了20世纪后半期的辉煌时代.今日外科的成就,不能不使人想到Hunter(John Hunter1728～1793,英国人),他是个达尔文主义者.他善于对自然界事物的观察,将零星的资料整理成系统化理论,他喜爱对自然资料样品的收藏,身后建成Hunter解剖博物馆,为外科病理学打下基础;他将解剖学、动物实验观察用于外科;他教他的学生如何将病理学、生理学知识应用于外科;他教学时的名言:"空想干吗,实验试试"(why think,try the experiment?);对问题"试看有无改进已是走了改进路程的一半".
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
