中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
氯喹抑制人结直肠癌干细胞转移能力及机制
目的 观察氯喹(CQ)对结直肠癌干细胞转移能力的影响,并探讨其机制.方法 利用流式细胞仪从LoVo细胞和人结直肠癌小鼠移植瘤模型(xhCRC)单细胞悬液中分选出CD133+细胞和CD133-细胞,利用体外细胞球体形成实验检测两群细胞自我更新能力.利用Transwell侵袭和迁移实验检测浓度为10μmol/L和50 μmol/L CQ对CD133+ LoVo细胞和CD133+ xhCRC细胞转移能力的影响.通过膜联蛋白V(Annexin V)-藻红蛋白(PE)/7-氨基放线菌素D(7-AAD)细胞凋亡检测试剂盒检测CQ对CD133+ LoVo细胞和CD133+ xhCRC细胞凋亡的影响;Western blot检测CQ对凋亡相关蛋白裂解半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)和上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Snail的表达的影响.结果 体外球体形成实验结果显示,CD133+细胞比CD133-细胞具有更强的体外形成球体的能力(P =0.004).Transwell侵袭实验结果显示,在CD133+ LoVo细胞中,浓度为10、50 μmol/L的CQ处理细胞24 h,穿过小室的细胞数分别为71、42个,与对照组(115个)比较,差异有统计学意义(P=0.008、0.001,实验组间比较,P=0.009);在CD133+ xhCRC细胞中穿过小室的细胞数分别为41、22个,与对照组(61个)比较,差异有统计学意义(P =0.044、0.001,实验组问比较,P=0.036);Transwell迁移实验结果显示,在CD133+ LoVo细胞中,浓度为10、50 μmol/L的CQ处理细胞24 h,穿过小室的细胞分别为179、95个,与对照组(290个)比较,差异有统计学意义(P=0.001、0.000,实验组间比较,P=0.000),在CD133+ xhCRC细胞中穿过小室的细胞分别为61、43个,与对照组(97个)比较,差异有统计学意义(P=0.017、0.002,实验组间比较,P=0.096).细胞凋亡实验结果显示,浓度为10 μmol/L和50 μmol/L的CQ处理CD133+ LoVo细胞,细胞凋亡率分别为(2.9±0.4)％、(17.7±1.5)％,与对照组[(0.1±0.6)％]比较,差异均有统计学意义(P=0.001、0.000),实验组间比较,P=0.000);处理CD133+ xhCRC细胞,细胞凋亡率分别为(9.7±0.4)％、(17.6±2.3)％,与对照组[(1.0±0.6)％]比较,差异有统计学意义(P=0.003、0.000,实验组间比较,P=0.005).Western blot证实CQ可促进凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3的表达并呈剂量依赖关系,E-cadherin的表达随CQ浓度的增加逐渐减少.结论 CQ可抑制结直肠癌癌干细胞(CSCs)的转移能力,下调EMT相关蛋白表达并诱导其凋亡.
-
榄香烯对肺腺癌耐药株SPC-A-1/顺铂耐药性的逆转作用及其机制
目的 探讨榄香烯是否参与肺癌细胞对顺铂(DDP)耐药性的调节及其潜在的分子机制.方法 首先,观察不同剂量DDP对肺癌细胞株SPC-A-1及其耐药株SPC-A-1/DDP细胞活性的影响.其次,以低剂量榄香烯处理两种细胞株,24 h后检测细胞对DDP的敏感性以及耐药相关蛋白水平,并检测细胞自噬水平的改变,检测自噬关键调节蛋白Beclin-1的水平.再次,以15 μg/ml DDP处理SPC-A-1/DDP细胞同时施加榄香烯、Beclin-1过表达或Beclin-1干扰处理,24 h后检测耐药性、Beclin-1和耐药相关蛋白水平.结果 与SPC-A-1相比,SPC-A-1/DDP对DDP不敏感(67.00 ±0.40,P =0.000).低剂量的榄香烯增加SPC-A-1/DDP细胞对DDP的敏感性(43.00 ±0.27,P=0.000),伴随多药耐药相关蛋白-1(MRP-1)和P-糖蛋白(P-gp)表达的减少(1.55 ±0.22,P=0.000;1.34-0.12,P=0.000),并促进细胞自噬和自噬关键调节蛋白Beclin-1水平的升高(2.69土0.20,P=0.000).过表达Beclin-1与榄香烯对SPC-A-1/DDP细胞耐药性有类似逆转作用(16.00±1.50,P=0.010).与此相反,干扰Beclin-1基因能拮抗榄香烯对细胞耐药性的逆转作用(46.00±3.10,P=0.010).结论 榄香烯通过诱导Beclin-1介导的自噬增加SPC-A-1/DDP对DDP的药物敏感性.
-
和厚朴酚抑制糖酵解增强索拉菲尼抗肝癌细胞活性
目的 观察和厚朴酚(Honokiol)联合索拉菲尼(Sorafenib)对肝癌细胞株HepG2的抑制作用.方法 免疫组织化学检测78例人肝癌组织中乳酸脱氢酶A(LDHA)表达,免疫荧光检测Sorafenib对HepG2细胞LDHA表达的影响,比色法检测细胞上清乳酸含量,噻唑蓝(MTT)试验及克隆形成试验检测HepG2细胞增殖,膜联蛋白V(Annexin V)染色及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3活性试验检测细胞凋亡.结果 肝癌组织LDHA表达评分明显高于正常肝组织[(3.74±0.98)分比(1.92±0.63)分](p=0.024),2.5μm Sorafenib作用2d后,HepG2细胞LDHA表达升高,细胞上清乳酸含量由(17.23±3.42) mmol/L增至(28.34±8.19) mmol/L(P=0.001):10 μm Honokiol联合Sorafenib作用后,肿瘤细胞糖酵解水平下降,细胞增殖率由(74.35 ±13.64)％降至(38.16土5.75)％(P=0.008),凋亡率由18％升高至47％ (P =0.029).结论 Honokiol增强Sorafenib对肝癌细胞的杀伤作用,其机制可能与抑制肝癌细胞糖酵解及诱导细胞凋亡有关.
-
乙肝病毒X蛋白抑制高迁移率族蛋白B1的表达和活性氧的产生
目的 观察乙肝病毒X蛋白(HBX)表达对宿主细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和活性氧(ROS)的影响.方法 在正常肝细胞系LO2中过表达HBX蛋白;利用Western blot和ROS检测剂双氯荧光素(DCFH-DA)检测HMGB1的表达、ROS的产生和核因子(NF)-κB信号通路的变化;然后利用NF-κB和ROS的激活剂分别刺激细胞,验证NF-κB对HMGB1和ROS的调节作用.结果 Western blot结果显示HBX的过表达显著抑制HMGB1的表达,下调2.4倍(P =0.025).通过对绿色荧光的观察发现HBX对ROS的产生具有抑制作用.Western blot结果证明HBX过表达可以抑制NF-κB(p65)及其抑制子IκB的磷酸化;鱼藤酮和LPS分别刺激HBX过表达细胞后发现,NF-κB(p65)及其抑制子IκB的磷酸化增强、HMGB1、ROS和Toll样受体4(TLR4)的表达量增加,提示HMGB1与NF-κB信号通路间是相互正调控关系.结论 HBX通过抑制NF-κB信号通路,进而抑制HMGB1的表达和ROS的产生,同时抑制宿主细胞对炎性细胞因子的释放.
-
上调微小RNA-148a对胰腺癌AsPC-1细胞抑癌基因前脑啡肽原、p16和Ras相关区域家族1A基因表达的影响
目的 观察上调微小RNA-148a(miR-148a)表达对胰腺癌AsPC-1细胞抑癌基因前脑啡肽原(ppENK)、p16和Ras相关区域家族1A基因(RASSFlA)甲基化、蛋白表达及细胞增殖的影响.方法 利用LipofectamineTM2000转染miR-148a模拟物(miR-148a mimics)至胰腺癌AsPC-1细胞.实验细胞分为3组:空白对照组(转染脂质体)、阴性对照组(转染阴性对照序列)、实验组(转染miR-148a mimics).转染后72 h,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞中miR-148a表达水平;甲基化特异性聚合酶链反应(MsP)检测ppENK、p16和RASSF1A基因启动子甲基化;Western blot法检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)及ppENK、p16和RASSF1A蛋白表达水平;噻唑蓝(MTT)法检测细胞体外增殖活力.结果 实验组miR-148a的表达量显著高于空白对照组及阴性对照组(4.63±1.32比1.00±0.30比0.93±0.37,P=0.002),而DNMT1蛋白表达量则显著降低(1.00±0.00比1.04±0.19比0.27±0.15,P=0.001).空白对照组和阴性对照组ppENK、p16和RASSF1A基因甲基化阳性,而实验组ppENK和p16基因甲基化阴性,RASSF1A基因部分甲基化.实验组ppENK、p16和RASSF1A蛋白表达量均显著高于两个对照组(ppENK:2.06±0.32比1.00±0.00比1.叭±0.21,P=0.002;p16:2.02±0.12比1.00±0.00比0.96±0.12,P=0.000;RASSF1A:1.95±0.37比1.00±0.00比1.09±0.12,P=0.002).实验组细胞体外增殖活力显著减慢(P=0.026).结论 上调胰腺癌AsPC-1细胞miR-148a的表达后,抑癌基因ppENK、p16和RASSF1A发生去甲基化,蛋白质重新表达,并抑制癌细胞增殖,其作用机制与miR-148a靶向抑制DNMT1表达有关.
-
Twist对人脑胶质瘤细胞增殖凋亡的影响及其机制
目的 探讨Twist对人脑胶质瘤细胞生长凋亡的影响及其机制.方法 人脑胶质瘤细胞U251转染rwist小干扰RNA(siRNA)和siRNA对照(control),反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测转染后细胞中Twist mRNA和蛋白的表达水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、信号转导与转录激活因子-3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白水平.结果 U251细胞转染siRNA control后,细胞增殖活性(0.97 ±0.12,P=0.406)、凋亡率[(11.92±1.10)％,P=0.788]和细胞中Cleaved Caspase-3 (0.23±0.06,P=0.198)、STAT3 (0.96 ±0.12,P=0.165)、p-STAT3 (0.15 ±0.05,P=0.890)、Twist水平(mRNA及蛋白水平分别为0.98 ±0.07、0.86±0.06,P值分别为0.152与0.671)与没有转染的U251细胞比较差异无统计学意义.U251细胞转染Twist siRNA后,细胞增殖活性(0.62±0.05,P=0.004)和p-STAT3水平(0.05±0.01,P=0.010)降低,细胞凋亡率[(45.62±4.36)％,P=0.000]和Cleaved Caspase-3水平(0.84 ±0.07,P=0.001)增加,与没有转染的U251细胞比较差异有统计学意义.结论 下调Twist后的人脑胶质瘤细胞增殖能力下降,凋亡增多,这可能与抑制STAT3信号通路有关.
-
抑制激肽释放酶10基因对结肠癌细胞增殖和凋亡及顺铂敏感性的影响
目的 通过小干扰RNA (siRNA)抑制激肽释放酶10(KLK10)基因在结肠癌细胞中的表达,观察其对结肠癌细胞增殖和凋亡及顺铂(DDP)敏感性的影响.方法 实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测KLK10 mRNA在正常结肠细胞株NCM460和结肠癌细胞株HRT-S1、HCT116中的表达水平;利用Lipofectamine(R)RNAi MAX转染试剂将KLK10特异性siRNA转染进入结肠癌细胞株HRT-S1、HCT116;采用噻唑蓝(MTF)、流式细胞术(FCM)法检测siRNA干扰KLK10基因对HRT-S1、HCT116细胞增殖和凋亡的影响;使用Western blot法检测细胞周期蛋白(Cyclin) D1和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白水平上的表达变化.结果 KLK10mRNA在结肠癌细胞株HRT-S1和HCT116中表达较正常结肠细胞明显升高(P =0.001);siRNA干扰KLK10基因后,KLK10mRNA表达水平在结肠癌细胞株HRT-S1和HCT116中明显降低(尸=0.002).siRNA干扰KLK10基因后,Cyclin D1蛋白表达水平在HCT1 16细胞株中明显降低(P=0.027),但在HRT-S1细胞株中差异无统计学意义(P =0.081);siRNA干扰KLK10基因后,bcl-2蛋白表达水平在HCT116和HRT-S1细胞株中均明显降低(P =0.038、0.016).siRNA抑制KLK10基因后,在HRT-S1和HCT116细胞株中,DDP的半数抑制浓度(IC50)值降低(P=0.032和0.022),结肠癌细胞的增殖被抑制;DDP+ siRNA-KLK10组中HCT116和HRT-S1细胞凋亡率较DDP+ si-scramble组明显升高(P=0.028、0.036).结论 抑制KLK10基因可以显著抑制结肠癌细胞增殖能力,能够促进肿瘤细胞凋亡,增强肿瘤细胞对DDP的敏感性;抑制KLK10基因可能通过抑制Cyclin D1和bcl-2的表达,从而抑制结肠癌细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡.
-
曲妥珠单抗融合UL16结合蛋白2激活自然杀伤细胞治疗乳腺癌
目的 探讨靶向人类表皮生长因子受体2(Her-2)的曲妥珠单抗(Trastuzumab)与UL16结合蛋白2(ULBP2)的融合蛋白(T-ULBP2)激活自然杀伤(NK)细胞,杀伤乳腺癌细胞SK-BR-3的治疗策略及治疗效果.方法 使用重叠聚合酶链反应(PCR)法通过G4S柔性肽将曲妥珠单抗重链C末端及人ULBP2胞外区基因连接,构建人工程载体pCDNA3.1中,通过脂质体转染法将质粒转入人胚肾细胞HEK-293中进行表达.流式细胞术检测T-ULBP2对乳腺癌SK-BR-3细胞的结合能力.噻唑蓝(MTT)法检测T-ULBP2是否保留亲本曲妥珠单抗对SK-BR-3细胞的增殖抑制能力.通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)实验验证T-ULBP2激活NK细胞杀伤肿瘤细胞的效果.流式细胞术检测T-ULBP2是否可以诱导NK-92细胞的活化.结果 成功表达融合蛋白T-ULBP2.流式细胞术检测T-ULBP2与乳腺癌细胞SK-BR-3的结合率为79.5％,与亲本曲妥珠单抗结合率(72.9％)相当.结论 成功构建并表达了T-ULBP2.T-ULBP2具有与亲本曲妥珠单抗相似的乳腺癌细胞结合能力和抑制肿瘤增殖能力.
-
丹参酮用于SD大鼠扩张预构皮瓣瘢痕整复的研究
目的 观察丹参酮应用于SD大鼠烫伤后预构扩张皮瓣修复瘢痕的效果,并探讨其作用机制.方法 取40只SD大鼠制作烫伤并预构颈部扩张轴向皮瓣模型.从中随机选取10只造模成功的大鼠为干预组,实施转移皮瓣瘢痕整复术并灌服丹参酮胶囊;另随机取10只为空白对照组,给予皮瓣瘢痕整复和安慰剂.术后第7天,分别取两组各10只大鼠的1 cm2移植皮瓣,石蜡包埋.免疫组织化学二步法检测皮瓣组织中超氧化物歧化酶(SOD)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达,计算机图像半定量法测定并比较SOD和VEGF蛋白的表达强度.结果 40只SD大鼠烫伤并预构扩张皮瓣造模成功25只,干预组和对照组各10只大鼠皮瓣瘢痕修复手术均顺利.丹参酮灌服后大鼠的转移皮瓣成活百分比高于对照组(P=0.021),且干预组SOD和VEGF蛋白的表达强度均高于对照组(P =0.003,P=0.005).结论 丹参酮可以提高烫伤大鼠预构扩张皮瓣整复瘢痕的疗效,其机制可能是增强了移植皮瓣组织中SOD和VEGF蛋白的表达.
-
缺氧诱导因子-1α在布-加综合征大鼠模型肝组织的表达及意义
目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在布-加综合征(B-CS)大鼠模型肝组织的表达及与肝纤维化的关系.方法 54只雄性Wistar大鼠按数字随机表法随机分为模型组、假手术组和正常组,分别在实验的第2、4、6周处死各组大鼠各6只,肝组织切片染色后观察病理变化.采用免疫组织化学法测定标本中HIF-1α、α-平滑肌肌动蛋白(0-SMA)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子(PDGF)水平,计算机图像分析测定肝组织纤维化面积比例.结果 模型组肝组织出现肝细胞变性、坏死、纤维组织增生等纤维化改变,且随时间延长逐渐加重,假手术组和正常组肝组织无明显病理改变.第2、4、6周时,模型组HIF-1 0(F=288.400、369.540、964.230,均P=0.000)、α-SMA(F=145.520、334.060、671.710,均P=0.000)、VEGF(F=624.390、612.660、1 875.410,均P =0.000)、PDGF(F=84.950、467.880、671.340,均P=0.000)和纤维化面积比例(F=117.22、196.90、451.95,均P=0.000)均显著高于假手术组和正常组,假手术组和正常组之间差异均无统计学意义.随时间延长,模型组HIF-1α、α-SMA、VEGF、PDGF和纤维化面积比例均显著增加(F=133.020、74.970、139.250、78.660、84.490,均P=0.000).第2、4、6周时,模型组HIF-1α的表达与α-SMA(r=0.865、0.822、0.878,P=0.026、0.045、0.021)和纤维化面积比例(r=0.860、0.835、0.823,P=0.028、0.039、0.044)均呈正相关.结论 B-CS大鼠模型肝组织存在HIF-1α表达量升高及纤维化改变,且HIF-1α与纤维化的进展具有明显相关性.
-
贝伐单抗联合NP方案对肺癌移植瘤小鼠肿瘤生长和血管的影响
目的 观察贝伐单抗联合NP化疗方案对肺癌移植瘤小鼠肿瘤生长和血管的影响.方法 将60只PC-9荷瘤小鼠随机分为对照组、单抗组、化疗组和联合组,对照组给予等体积磷酸盐缓冲液(PBS),单抗组小鼠尾静脉注射贝伐单抗6 mg/kg,化疗组小鼠给予腹腔注射吉西他滨4mg/kg和顺铂4 mg/kg,联合组小鼠同时给予贝伐单抗、吉西他滨和顺铂.自治疗起分析3组小鼠肿瘤生长、死亡率,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测3组小鼠外周血中血管内皮生长因子(VEGF)的水平,采用免疫组织化学分析肿瘤组织中微血管密度.结果 与对照组比较,单抗组、化疗组和联合组荷瘤小鼠肿瘤生长速度明显减缓(t=2.091,P=0.021;t=2.103,尸=0.025).而联合组小鼠PC-9肿瘤的生长速度较单抗组和化疗组更缓慢(=2.913,P=0.010;=3.016,P=0.009).与对照组比较,单抗组、化疗组和联合组小鼠荷瘤后存活率明显延长(尸=0.011,P=0.007).而联合组荷瘤小鼠的生存率较单抗组和化疗组明显延长(P=0.005、P=0.002).单抗组和联合组小鼠肿瘤组织中VEGF mRNA和蛋白质水平较对照组和化疗组明显下降(t=6.193,P=0.000;t=6.693,P =0.000;t=10.198,P=0.000;t=11.183,P=0.000).联合治疗组和化疗组小鼠肿瘤组织中微血管密度较对照组和化疗组明显减少(t=3.187,P=0.000;t=3.481,P=0.000).结论 贝伐单抗联合NP化疗方案可显著抑制肿瘤血管形成、抑制肿瘤生长和延长荷瘤小鼠生存时间.
-
基于白细胞介素-11受体α靶点的131I-CGRRAGGSC对乳腺癌细胞的抑制作用
目的 通过氯胺-T法构建基于白细胞介素-11受体α(IL-11Rα)靶点的标记产物131I-CGRRAGGSC,观察其对高表达IL-11Rαt乳腺癌细胞抑制作用.方法 采用氯胺-T法碘标酪氨酸修饰CGRRAGGSC;噻唑蓝(MTT)法、Transwell和划痕实验检测131I-CGRRAGGSC对乳腺癌细胞增殖及迁移的影响;Western blot检测0.000、2.775、5.550 MBq/ml 131I-CGRRAGGSC处理乳腺癌细胞24h后,细胞内IL-11Rα和信号转导与转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白的表达变化.结果 成功制备131I-CGRRAGGSC,其放化纯度达95％以上;不同浓度131I-CGRRAGGSC(4.625、9.250、18.500、37.000 MBq/ml)对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的增殖抑制率分别是(21.46±1.08)％、(37.95±2.59)％、(49.18±0.77)％、(60.34 ±0.19)％(F=389.4,P =0.000)和(27.59±2.15)％、(41.67±0.92)％、(54.53±1.07)％、(64.84±1.69)％ (F=328.6,P =0.000);Transwell结果显示2.775、5.550 MBq/ml 131I-CGRRAGGSC对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的迁移抑制率分别是(32.05±4.44)％、(45.92±2.55)％(f=4.688,p=0.009)和(21.99±1.18)％、(39.45±1.36)％(t=16.760,P=0.000);划痕实验也证实131I-CGRRAGGSC抑制MDA-MB-231细胞,而对MCF-7细胞作用不明显;Western blot检测发现随着131I-CGRRAGGSC浓度的增加,其处理乳腺癌细胞24 h后细胞内IL-11Rα、p-STAT3蛋白均逐渐降低,而STAT3蛋白的表达无明显变化.结论 131I-CGRRAGGSC对乳腺癌细胞迁移有抑制作用,可能与IL-11Rα阻断STAT3的磷酸化相关.
-
长链非编码RNA RGD1566401在大鼠急性胰腺炎中对外分泌细胞凋亡的作用
目的 观察长链非编码RNA (lncRNA)-RGD1566401(lncR-RGD1566401)在大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)中表达及对AR42J凋亡的影响.方法 分别用携带有lncR-RGD1566401目的基因的慢病毒(Lenti-lncRNA)和特异性lncR-RGD1566401抑制剂(lncRNA Smart Silencer)转染AR42J细胞株24h,转染空病毒(Lenti-NC)和特异性IncR-RGD1566401阴性抑制剂作为对照;以100 nmol/L雨蛙肽(Caerulin)体外诱导正常培养AR42J及转染后AR42J的凋亡,药物诱导24 h后运用流式细胞技术(FCM)检测各组AR42J细胞凋亡率,使用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测各组lncR-RGD1566401的表达,采用Western blot检测各组凋亡蛋白活性半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和p53表达量变化.结果 雨蛙肽体外诱导AR42J凋亡的凋亡率[(19.34±0.54)％]较对照组[(7.23±0.33)％]明显升高,lncR-RGD1566401表达量较对照组升高(5.43±0.31)倍,活性Caspase-3和p53表达量明显升高;转染携带有IneR-RGD 1566401目的基因的慢病毒组lncR-RGD1566401表达量较空病毒组升高(8.24±0.22)倍,差异有统计学意义(P=0.006);AR42J凋亡率[(38.20±0.37)％]较空病毒组[(22.60±0.96)％]明显升高,差异有统计学意义(P=0.016);活性Caspase-3和p53表达量明显升高;应用特异性lneR-RGD1566401抑制剂组较阴性对照组lncR-RGD1566401表达量降低(0.54±0.14)倍,差异有统计学意义(P =0.003),AR42J凋亡率[(13.60±0.33)％]较阴性对照组[(19.60±0.46)％]明显降低,差异有统计学意义(P=0.012),活性Caspase-3和p53表达量明显降低.结论 lneR-RGD1566401与大鼠AR42J细胞凋亡相关,上调lncR-RGD1566401的表达能够促进大鼠AR42J细胞凋亡.
-
晚期氧化蛋白产物抑制CD4+ CD25+调节性T细胞的增殖
目的 探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)对CD4+ CD25+调节性T细胞(Tregs)增殖的影响及机制,为临床上采取措施保持终末期肾病(ESRD)患者体内Tregs数量和功能正常奠定基础.方法 从人外周血单个核细胞分离Tregs和CD4+ CD25 T细胞(作为效应T细胞,Teff)、诱导树突状细胞(DC)后做如下处理:Tregs按5×104个细胞/孔培养于U型底96孔板,加入经丝裂霉素灭活的负载同种异体抗原的DC 5×104个细胞/孔和IL-2 100 U/ml,依据是否加入AOPP分为3组:对照组(加入血清白蛋白200μg/ml);AOPP组(加入AOPP 200 μg/ml)、抗氧化组[100 μmol/L还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶抑制剂DPI预处理lh后再加入200 μg/ml AOPP].3 H-TdR掺入法检测各组Tregs的增殖能力和免疫抑制功能,Western blot检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2 (p-ERKl/2)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化信号转导与转录激活因子5(p-STAT5)和p27kiPl等表达情况.结果 在AOPP存在的情况下,AOPP组Tregs 3 H-TdR掺入率为(36 213.3±3 385.9)每分钟放射性荧光闪烁计数(cpm),较对照组(65 557.0±3 981.6) cpm低(P=0.001).抗氧化组Tregs 3H-TdR掺入率为(44827.0±3694.6)cpm,较AOPP组高(P=0.041),低于对照组(P=0.003).AOPP组在Tregs∶ Teff为1∶1和1/2∶1的情况下,Tregs对Teff的抑制率分别为(27.3±4.0)％和(23.9±3.7)％,与同比例情况下的对照组抑制率[(68.5±7.9)％和(62.9±5.0)％]比较,差异均有统计学意义(P=0.001、0.001).AOPP组Tregs内p-ERK、p-Akt和p-STAT5的表达较对照组低(P =0.009、0.021、0.036),而p27kiPl表达较对照组高(P=0.036).抗氧化组Tregs内p-ERK、p-Akt和p-STAT5的表达较AOPP组显著性上调(P=0.034、0.030、0.042),但仍低于对照组(P =0.043、0.039、0.007);而p27kiPl表达较AOPP组低(P=0.048),但高于对照组(p=0.047).结论 AOPP可能通过氧化应激抑制Tregs细胞内p-ERK、p-Akt、p-STAT5活化和促进Tregs细胞内p27kipl的表达,进而抑制Tregs增殖.
-
低氧预处理对氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠的保护作用
目的 观察间断低氧预处理(IHP)对氯化锂-匹鲁卡品(Li-pilo)致痫大鼠的脑保护作用.方法 96只SD大鼠,随机分为对照组、癫痫组和4个间断低氧预处理+癫痫组.对5组大鼠通过腹腔注射氯化锂-匹鲁卡品建立癫痫模型.记录240 min的发作行为学视频用于分析,并通过水迷宫实验测试大鼠认识功能,并检测大鼠海马CA1区神经元凋亡率,组织学分级(HiG)及神经元密度(ND).结果 氯化锂-匹鲁卡品注射后50 ～ 150 min之间,癫痫发作的改良Racine评分达到峰值.间断低氧预处理+3d癫痫组大鼠平均峰值评分[(1.42±0.50)分,P=0.007]明显低于Seizure组[(4.15±0.72)分]和间断低氧预处理+1 d[(2.16±0.69)分,P=0.028],7 d[(2.26±0.53)分,P=0.030]及14 d[(3.96±0.87)分]癫痫组.间断低氧预处理+3d癫痫组大鼠平均逃避潜伏期[(38.75±15.32)s,P=0.012]明显短于癫痫组[(54.33 ±3.90)s,P=0.0ll]和间断低氧预处理+1d[(44.83±11.68)s,P=0.047],7 d[(44.73±11.18)s,P=0.045],其神经元凋亡率和HG也较高.癫痫组大鼠平均目标象限停留时间百分比和ND值[(29.63±4.95)％;(35.25±8.37)个/HP)明显低于Control组[(41.13±19.09)％,P=0.013;(110.35 ±9.87)个/HP,P=0.000],间断低氧预处理+ld癫痫组[((36.13±13.97)％,P=0.037;(65.31 ±7.25)个/HP,P=0.007],间断低氧预处理+3d癫痫组[(42.38±20.15)％,P=0.011;(98.50±14.20)个/HP,P=0.000]和间断低氧预处理+7d癫痫组[(33.94±8.75)％,P=0.040;(54.80±11.68)个/HP,P=0.010].结论 IHP预处理5d可以对癫痫模型大鼠提供明确的抗癫痫保护作用.
-
柴胡皂苷A对脑创伤大鼠认知功能的改善及其机制
目的 探讨柴胡皂苷A对脑创伤大鼠认知功能的保护作用及其机制.方法 成年雄性SD大鼠60只随机分为假手术组(S组,n=20)、创伤组(T组,n=20)和创伤+柴胡皂苷A组(A组,n =20).创伤前每天腹腔注射5 mg/kg柴胡皂苷A(A组)或等量生理盐水(S组、T组),连续5d.3组各随机抽取大鼠10只于创伤后第2天处死,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定海马组织中白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平;余大鼠创伤后3、4、5、6、7d,采用Morris水迷宫检测大鼠学习认知功能,且末次行为学测试后处死大鼠,采用ELISA法测定海马组织中脑源性神经生长因子(BDNF)的含量.结果 T组大鼠在创伤后3、4、5、6、7d的潜伏期和游泳距离分别为[(81±6)、(74±9)、(66±5)、(56±8)、(44±5)s;(1 047±106)、(886±78)、(734 ±81)、(620 ±58)、(507±53) cm],显著长于S组[(65±8)、(56±6)、(4l±5)、(28±5)、(14±5)s;(826±63)、(674±52)、(552±50)、(389 ±36)、(229±28) cm] (P=0.008;P=0.0ll);A组大鼠在创伤后3、4d潜伏期和游泳距离分别为[(78±9)、(67±8)s;(998±101)、(826 ±83) cm],均显著长于S组[(65±8)、(56 ±6)s;(826±63)、(674±52) erm] (P=0.012;P =0.009);A组大鼠在创伤后5、6、7d的潜伏期和游泳距离分别为[(48±5)、(32±5)、(21±5)s;(628±59)、(425±45)、(294 ±31) cm],均显著短于T组[(66土5)、(56±8)、(44±5)s;(734±81)、(620±58)、(507±53) cm] (P=0.013;P=0.010).T组IL-6、TNF-α的含量分别为[(84±7)、(150±9) pg/g],显著高于S组[(44±4)、(60±7) pg/g] (P=0.001,0.002)和A组[(53 ±5)、(76 ±7) pg/g] (P=0.001;P=0.001);T组BDNF含量为(366±42) pg/ml,显著低于S组的(738±78) pg/nl(P=0.001)和A组的(612±58) pg/ml(P =0.001).结论 柴胡皂苷A可改善创伤性脑损伤大鼠认知功能障碍,其机制可能与抑制海马炎性反应及提高与认知功能相关蛋白水平有关.
-
葛根素对人胆管癌RBE细胞凋亡的影响
目的 观察葛根素对人胆管癌(RBE)细胞增殖和凋亡的影响,及其相关基因表达量变化.方法 RBE细胞培养后,使用不同浓度(0、100、250、500、1 000、1 500 μg/ml)的葛根素处理细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;(500、1 000μg/ml)葛根素处理RBE细胞,流式细胞学技术(FCM)检测细胞凋亡;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bel-2相关X蛋白(bax)基因的表达;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达.结果 MTT法细胞活力检测显示高浓度葛根素(500、1000、1500μg/ml)以时间-剂量依赖的方式抑制RBE细胞的增殖,12 h抑制率[(8.14±1.85)％、(12.57±3.10)％、(18.26±2.74)％,P=0.000、0.005、0.003],24h抑制率[(22.38±2.77)％、(29.14±3.85)％、(37.43±2.11)％,P=0.005、0.007、0.002],48 h抑制率[(35.47±3.75)％、(40.81±2.52)％、(52.29 ±3.98)％,P=0.007、0.000、0.002]差异均有统计学意义;(500、1 000μg/ml)葛根素处理RBE细胞24h后,RBE细胞凋亡率[(14.2l±2.53)％、(22.87±2.74)％]较对照组[(3.246±2.25)％]明显升高,差异有统计学意义(P=0.013、0.008);凋亡基因bax表达量与对照组(0.98±0.04)比较升高[(2.37±0.17)、(3.78±0.41)倍,P=0.005、0.003] bcl-2表达量与对照组(0.99±0.03)比较下降(1.57±0.14、2.86 ±0.55)倍(P=0.002、0.008),差异均有统计学意义;活化半胱酰胺天冬氨酸特异性蛋白酶(Cleaved-caspase)-8、Cleaved-Caspase-9蛋白及bax蛋白表达水平升高(P=0.015、0.003、0.008),bel-2蛋白表达水平降低(P=0.021),差异均有统计学意义.结论 葛根素具有抑制RBE细胞增殖,促进其凋亡的作用.
-
沉默泛素特异性肽酶22对人胃癌细胞增殖的影响及其机制
目的 探讨泛素特异性肽酶22 (USP22)对人胃癌细胞增殖的影响及其作用机制.方法 设计、合成针对USP22特异性小干扰RNA (siRNA)片段,通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、Western blot筛选抑制效率高的siRNA片段以备后续实验;抑制USP22后,噻唑蓝(MTT)法检测胃癌细胞SGC-7901细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及凋亡变化;抑制USP22后,Western blot检测周期、凋亡相关蛋白的表达变化.结果 成功设计、合成针对USP22 siRNA片段,其抑制效率高达80％;USP22抑制后,胃癌细胞SGC-7901增殖明显受到抑制,细胞停滞于Go/G1期[(52.87±1.41)％比(73.73±1.78)％,t=15.491,P=0.000].同时凋亡率显著增加[(19.63±0.82)％比(4.54±0.46)％,=58.051,P=0.000];Western blot结果显示bel-2相关X蛋白(bax)表达水平显著上升(t =9.580,P=0.001)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)及pro-半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的表达量显著降低(t=6.674、7.269;P=0.000、0.000);磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及下游磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β)表达水平显著降低(t=13.512、6.846;P=0.003).结论 抑制USP22后,可能通过影响Akt活化,抑制胃癌细胞增殖及诱导细胞凋亡.
-
小干扰RNA沉默半乳糖凝集素3基因表达对胆管癌细胞增殖凋亡的影响及机制
目的 抑制半乳糖凝集素3(Galectin-3)基因表达对胆管癌细胞增殖凋亡的影响及机制.方法 反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测胆管癌组织中Galectin-3基因的mRNA及蛋白表达;si-Galectin-3转染HCCC-9801细胞,同时转染阴性对照组和正常对照组,转染48 h后Western blot检测Galectin-3、细胞核增殖抗原(Ki-67)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-eatenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和流式细胞仪分别检测细胞增殖及凋亡.结果 胆管癌组织中Galectin-3基因的mRNA(5.558±0.056)及蛋白表达(0.269±0.025)显著高于癌旁组织(0.977±0.031、0.037±0.011)(tmRNA=8.626,PmRNA=0.003;t蛋白表达=8.997,P蛋白表达=0.002);si-Galeetin-3组Galectin-3(0.094 ±0.012)、Ki-67 (0.201±0.025)、β-catenin(0.261±0.024)、Cyclin D1 (0.137±0.017)蛋白表达及细胞存活率[(95.26±3.42)％]均显著低于Normal组[(0.358±0.031)％、(0.426±0.032)％、(0.894 ±0.047)％、(0.435 ±0.031)％、(71.12士4.48)％](tGalectin-3=9.007,PGalectin-3=0.002;tKi-67=8.138,PKi-67=0.003;tβ-catenin=9.345,Pβ-catenin=0.002;tCyclin D1=9.977,PCyclin Dl=0.001;t细胞存活率=8.452,P细胞存活率=0.003);细胞凋亡率[(17.12±1.28)％]及Cleaved Caspase-3 (0.121±0.015)表达均显著高于对照组[(1.54±0.47)％、0.031±0.011](t细胞凋产亡率=10.002,P细胞凋亡率=0.001;tCleaved Caspase-3=9.879,PCleaved Caspase-3=0.001).结论 下调Galectin-3基因表达可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路降低HCCC-9801细胞增殖及诱导细胞的凋亡.
-
印第安刺猬蛋白与Yes相关蛋白1在儿童骨肉瘤组织的表达及其临床意义
骨肉瘤是好发于儿童的原发恶性骨肿瘤,发病率约占儿童恶性肿瘤的5％[1].目前,针对儿童骨肉瘤相关蛋白表达方面的研究逐渐成为热点,但关于儿童骨肉瘤印第安刺猬蛋白(IHH)与Yes相关蛋白1(YAPl)表达的研究目前较少.本研究旨在观察儿童IHH与YAP1表达.一、资料与方法1.一般资料:收集郑州大学第一附属医院2011年3月至2015年3月间儿童骨肉瘤的标本45例,其中男31例,女14例,年龄(10.2±2.4)岁,均获得随访.另选取儿童骨软骨瘤标本15例作为对照.
关键词： -
载脂蛋白M对深静脉血栓发生和发展的影响
本研究旨在探讨载脂蛋白M (ApoM)对小鼠深静脉血栓发生、发展的影响.一、材料与方法C57BL/6雄性ApoM+/+及ApoM-/-小鼠(鉴定法见文献[1])各24只,随机分人6、48 h的手术组和假手术组,每组6只.手术组结扎下腔静脉及远端分支,假手术组仅不结扎静脉,余同前.术后6、48 h,摘除小鼠眼球取血并分离血浆,检测活化部分凝血活酶时间(APTT)等指标.后开腹取出下腔静脉血栓,分别测量重量和长度.采用￡检验比较组间差异.
关键词： -
肾移植受者外周血中滤泡辅助性T细胞的表达特点
滤泡辅助性T细胞(Tfh)位于生发中心,给B细胞亲和力成熟、浆细胞分化和记忆B细胞形成提供必需的刺激信号,在机体抗体介导免疫应答中不可或缺….本研究旨在观察肾移植受者外周血中Tfh细胞表达特点,探讨其与调节性T细胞(Treg)、B细胞活化因子(BAFF)的相关性.一、材料与方法以2014年12月至2015年8月在苏州大学附属第三医院进行随访的肾移植受者为研究对象,来本院体检的健康人群为对照.收集临床检测资料,采用流式细胞术检测Tfh及Treg的表达频率、酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血浆中可溶性BAFF (sBAFF)和白细胞介素-21(IL-21)的表达水平.采用SPSS 17.0统计软件分析,以P＜0.05为差异有统计学意义.
关键词： -
肝癌解剖性肝切除术55例诊治分析
目前,外科手术治疗仍然是肝癌治疗的主要方法[1].我们分析2012年1月至2016年12月我院肝胆外科肝癌切除的临床效果,现报道如下.一、资料与方法1.一般资料:我院5年间收治单发、无转移、无门静脉癌栓肝癌患者55例,按手术方式不同将患者分为解剖性肝切除术组(A组),共28例,组内男女比例为23∶5,平均年龄为(48.54 ±+8.93)岁;非解剖性肝切除术组(B组),共27例,组内男女比例为27∶0,平均年龄为(51.25 ±9.86)岁.两组患者的年龄、肿瘤大小等方面比较差异均无统计学意义.
关键词： -
激活态雪旺细胞与非激活态雪旺细胞增殖相关基因DNA甲基化差异分析
外周神经损伤后雪旺细胞由非激活态雪旺细胞(SCs)转变为激活态雪旺细胞(ASCs)[1].细胞增殖发生变化,但基因层面机制仍不清楚.一、材料与方法应用DNA甲基化免疫共沉淀技术(MeDIP)检测ASCs与SCs之间的甲基化差异的增殖相关基因.通过DAVID和Cytoscape软件进行基因本体(G0)功能分析和基因组百科全书(KEGG) Pathway分析.二、结果ASCs增殖速率高于SCs.ASC与SCs共检测到912个甲基化差异基因与增殖功能相关,如胎盘生长因子、纤维母细胞生长因子2、纤维母细胞生长因子9、表皮生长因子.通过KEGG通路分析示磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)通路、Ras信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路等与增殖关系密切.
关键词： -
小干扰RNA沉默常染色体显性遗传非综合征性耳聋基因对肝癌细胞增殖的影响及其机制
我们通过小干扰RNA(siRNA)技术沉默肝癌细胞株SMMC-7721中常染色体显性遗传非综合征性耳聋(DFNA9)基因的表达,观察其对肝癌细胞增殖的影响,并探讨其作用机制.一、材料与方法1.材料:人肝癌细胞株SMMC-7721购自中国科学院上海细胞库.DFNA9-siRNA购自Santa Cruz公司,抗体购自美国Abeam公司.2.细胞计数试剂盒(CCK-8)检测并绘制细胞生长曲线:分别设立DFNA9-siRNA组、NC-siRNA组和空白组进行处理,测定并绘制不同处理组细胞生长曲线.
关键词： -
非人灵长类动物高纯度雪旺细胞原代培养方法
我们采用雌性食蟹猴腓肠神经为模型,目的在于探索一种利用少量周围神经组织在较短时间内获取大量高纯度雪旺细胞(SCs)的方法,为其临床应用奠定基础[1].本研究旨在探讨非人灵长类动物高纯度SCs原代培养方法.一、材料与方法雌性食蟹猴5只[syxk(津)2014-0002],体重(3.70±0.19) kg,实验过程经天津医科大学伦理委员会批准(伦审100702).麻醉后暴露双侧腓肠神经并结扎,7d后取出结扎远端的腓肠神经.剥除神经束膜及周围组织,剪碎至1 mm3,加入5ml0.2％胰蛋白酶(Sigma公司,T6424)和0.2％Ⅱ型胶原酶混合消化液(Sigma公司,C6885,4∶1),消化30 ～ 35 min至无明显组织块后终止消化,离心,弃上清.重悬细胞并计数,分别接种于层粘连蛋白包被的5个25 cm2培养瓶中,密度为(3.10±0.17)×105/ml.
关键词： -
肺动脉灌注对慢性阻塞性肺疾病患者接受体外循环心脏手术肺保护作用
目的 观察间断肺动脉灌注静脉血对体外循环(CPB)肺损伤的保护作用.方法 60例慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者[第1秒钟用力呼吸容积(FEV1)/肺活量(FC)＜70％]接受心脏瓣膜置换术,随机分为肺灌注组和对照组(n=30),肺灌注组CPB开始后间断灌注静脉血.检测外周血不同时间点[CPB开始前(T1)、CPB结束时(T2)、CPB结束后3 h(T3)、CPB结束后24 h(T4)、术后48 h(T5)]中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-10,测算插管后切皮前(T1a)、手术结束时(T2a)肺泡动脉血氧分压差(A-aD02)和氧合指数(0I),PiCC0监测仪连续收集切皮后(T1b)和关胸前(T2b)血管外肺水(EVLW),记录术后呼吸机使用时间、ICU停留时间及术后30 d内死亡率等临床指标.结果 CPB开后T2～T5各时间点NE、TNF-α和IL-10水平显著升高,灌注组NE低于对照组[(727.6±202.8)比(987.1±253.5) ng/ml,t=4.378,P=0.000;(460.4±162.4)比(579.5 ±215.5) ng/ml,t=2.418,P=0.019;(241.3±138.9)比(379.9土180.8) ng/ml;=3.329,P =0.002;(151.3±48.1)比(284.1±125.2)ng/ml,=5.423,P =0.000],TNF-α低于对照组[(43.1±17.8)比(58.8±20.2)pg/ml,t=3.194,P=0.002;(57.1±20.8)比(82.8±24.3) pg/ml,t =4.401,P=0.000;(42.3±19.7)比(63.3±26.5)pg/ml,t=3.,483,P=0.001:(31.2±15.3)比(50.5±22.3)pg/ml,t=3.908,P=0.000],而IL-10高于对照组[(109.7±29.8)比(88.4±26.3)pg/ml,t=2.935,P=0.005;(87.3±24.5)比(74.7±21.6) pg/ml,t =2.113,P=0.039;(66.5±17.2)比(54.3±14.2) pg/ml,t=2.996,P=0.004;(44.8±l0.8)比(39.7±8.5) pg/ml,t=2.033,P=0.047];手术结束各时间点灌注组OI高于对照组,A-aDO2及EVLW低于对照组[317±147比246±116,P=0.042;166±76比217±110,P=0.041;(12.0±2.7)比(14.1±3.2) ml/kg,P=0.006];灌注组趋向于较短的呼吸机使用时间和ICU停留时间[(159±72)比(209±106)h,P=0.037;(7±4)比(10±5)d,P=0.013].结论 CPB期间低温静脉血液肺灌注可能对肺具有保护作用.
-
趋化因子受体6在食管癌组织的表达及对食管癌细胞上皮-间充质转化的影响
目的 观察趋化因子受体6(CCR6)在食管癌组织的表达及其对食管癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响.方法 应用免疫组织化学技术检测99例食管鳞状细胞癌和11例食管正常组织中CCR6、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达,分析其与临床病理特征的相关性.应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人食管癌细胞株ECA-109、TE-1及正常食管细胞株HEEC中CCR6的表达.应用细胞计数试剂盒(CCK-8)、划痕和Transwell实验检测CCR6对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.应用RT-qPCR和Western blot实验测定CCR6-CCL20趋化作用对食管癌细胞EMT的影响.结果 CCR6在食管癌细胞株中高表达与正常食管细胞株中低表达,差异有统计学意义(8.00±1.23、4.57±1.12比1.00±0.32,t=11.000,P=0.000;t =6.100,P=0.001).CCR6在淋巴结转移组和未转移组的阳性表达率分别为87.1％和63.8％ (P =0.020);在TNM分期级别高组和级别低组的阳性表达率分别为87.9％和62.5％(P=0.038).食管癌细胞经CCL20刺激后,增殖能力显著降低,差异有统计学意义(0.35±0.02比0.49±0.03,t =7.003,P=0.002;0.38 ±0.033比0.48 ±0.04,t =3.719,P=0.021).ECA-109划痕24 h后,CCL20组的愈合速度显著升高,差异有统计学意义(1.34 ±0.02比1.00±0.04,t=4.680,P=0.009),封闭CCR6,愈合速度明显降低(1.36±0.06比1.00±0.04,t =4.344,P=0.012).ECA-109细胞Transwell实验结果显示:CCL20组细胞穿膜数量显著增高,差异有统计学意义(401.33 ±20.00比239.33 ±21.18,t=5.560,P=0.005);封闭CCR6后,穿膜细胞数量显著降低(311.33±12.12比401.33 ±20.00,t =3.849,P =0.018).CCL20刺激后,ECA-109中E-cadherin的mRNA和蛋白表达显著降低(t =9.758,P=0.001)、Vimentin的表达显著升高(t=6.352,P=0.003);封闭CCR6,E-cadherin的mRNA和蛋白表达显著升高(t=7.707,P=0.002)、Vimentin表达显著降低(t=6.095,P=0.004).结论 CCR6在食管癌淋巴结转移患者中呈高表达,CCR6及CCR6-CCL20趋化轴参与调控肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,可能参与调节食管癌细胞EMT的发生.
-
先天性心脏病与同源蛋白NKX2.5基因突变的关系
目的 探讨同源蛋白NKX2.5(NKX2.5)基因突变和广西壮族人群先天性心脏病(CHD)的关系.方法 应用聚合酶链反应以及DNA测序技术,对30例广西壮族CHD患者(包括房间隔缺损组8例,室间隔缺损组10例,法洛四联征5例,右室双出口2例,大动脉转位l例,肺动脉狭窄l例)以及30正常非CHD对照者(正常对照组)的NKX2.5基因的全部外显子和侧翼序列进行突变检测,并对单核苷酸多态性(SNP)位点进行基因分型,分析单个位点的基因性和等位基因频率与CHD是否有关.结果 所有CHD患者基因编码均未发现突变,而在NKX2.5基因外显子1区域发现1个SNP位点,这个位点位于上游63位碱基63A ＞G,导致第21位密码子由GAA转变成GAG,碱基替换后仍然编码谷氨酸(Glu),属于同义突变.基因型频率和等位基因频率的分布,在CHD组和正常对照组之间差异无统计学意义(两组基因型频率比较,x2=1.725,P=0.422;等位基因频率比较,x2=1.714,P=0.190).结论 NKX2.5基因突变与我国广西地区壮族CHD之间兀明显相关,该基因上的63A＞G的SNP与先天性心脏病之间无明显相关.
-
同种异体骨-腱-骨在膝交叉韧带重建中的应用
目的 探讨同种异体骨-腱-骨重建膝关节前后交叉韧带的疗效.方法 采用同种异体骨-腱-骨重建膝关节前后交叉韧带患者22例,男21例,女l例,年龄22 ～ 53岁,平均36.7岁,左膝13例,右膝9例.对患者进行主观评估(手术前后Lysholm评分)和客观评估(Lachman试验、轴移试验).结果 随访5-42个月(平均23.3个月),l例失访.术前Lysholm评分为(19.6±3.6)分(15 ～30分),术后随访21例,终随访评分为(83.9±16.2)分(41 ～99分),与术前比较差异有统计学意义(t=20.440,P=0.002).除1例患者移植物松弛外,其他患者Lachman试验、轴移试验均呈阴性,或较术前明显好转.本组所有病例术后均未发现有感染和疾病传播.结论 临床应用同种异体骨-腱-骨重建膝交叉韧带安全有效,避免了自体材料造成的再损伤及相应并发症.
-
胆囊癌组织鼠类肉瘤病毒癌基因突变与其临床病理特征及预后的关系
目的 探讨胆囊癌组织中鼠类肉瘤病毒癌基因(K-ras)突变及其与临床病理特征和生存预后的相关性.方法 收集胆囊癌手术患者79例,提取胆囊癌组织DNA,采用纳米探针检测K-ras基因第12、13位点密码子突变,分析K-ras基因突变与临床病理特征的相关性,并分析K-ras基因突变对胆囊癌患者预后的影响.结果 79例胆囊癌患者中K-ras基因突变率为63.3％(50/79),K-ras突变与临床分期、转移明显相关(P=0.003、0.000).生存分析结果显示K-ras基因突变组1年、2年无瘤生存率为67.9％、11.5％,野生组为88,3％、43.4％,差异均有统计学意义(P =0.047、0.009);K-ras基因突变组1年、2年总生存率为90.4％、43.0％,野生组为96.3％、70.6％,1年总生存率比较差异无统计学意义,2年总生存率比较差异有统计学意义(P =0.044).结论 K-ras基因突变与胆囊癌的转移、不良预后明显相关.
-
钙结合蛋白S100A2在胃癌组织的表达及其与启动子甲基化的关系
目的 探讨胃癌中钙结合蛋白S100A2的蛋白表达及其与基因启动子甲基化的关系.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测100例胃癌标本S100A2蛋白的表达,并选取20例正常胃黏膜组织作对照,并应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测其启动子甲基化.结果 正常胃黏膜组织中S100A2蛋白高表达率明显高于胃癌组(x2=18.352,P=0.001).在高/中分化组、黏膜层/黏膜下层组和无淋巴结转移的病例中,S100A2蛋白阳性表达率分别为61.22％、73.33％、70.59％,但随着胃癌分化程度的降低,侵及肌层/浆膜层或发生淋巴结转移,S100A2蛋白阳性表达率明显降低,分别为35.29％、43.53％、36.36％(x2值分别为6.732、4.537、10.531,P值分别为0.009、0.049、0.002).48例S100A2蛋白阳性表达病例中仅有4例出现启动子甲基化,而在52例阴性表达病例中启动子甲基化者达20例(x2=12.421,P=0.002).结论 S100A2蛋白表达下调可能与胃癌发生发展有关.S100A2蛋白表达降低常提示胃癌的低分化、高侵袭转移能力.S100A2基因启动子甲基化可以引起S100A2蛋白表达下调或缺失,与胃癌的发生发展密切相关.
-
肿瘤坏死因子超家族成员9在肝癌组织的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭的影响
目的 检测肿瘤坏死因子超家族成员9(TNFSF9)在人肝癌组织的表达,探讨TNFSF9过表达对肝癌细胞增殖和侵袭的作用及其分子机制.方法 免疫组织化学法和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测TNFSF9在50例人肝癌及癌旁组织的表达.利用慢病毒载体构建稳定过表达TNFSF9的肝癌HepG2细胞株,Real-time PCR和Western blot检测TNFSF9、增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平.噻唑蓝(MTT)法和Transwell实验检测TNFSF9过表达对肝癌细胞增殖和侵袭的影响.结果 与癌旁组织(0.30 ±0.03)比较,TNFSF9在肝癌组织的mRNA表达量较低(0.18 ±0.02),其蛋白在肝癌组织的阳性表达率较低(26.0％比54.0％,尸=0.004).体外实验结果显示,TNFSF9过表达减少PCNA和MMP-9蛋白的表达,并抑制肝癌细胞增殖活性;与对照组穿过小室的细胞数[(105.5±11.2)个]比较,TNFSF9组侵袭的肝癌细胞数([52.8±7.4)个]明显减少(P =0.000).结论 TNFSF9在人肝癌组织低表达,其过表达抑制肝癌细胞的增殖和侵袭潜能.
-
髓细胞白血病基因-1在胆管癌组织的表达及其临床意义
目的 探讨髓细胞白血病基因-1(MCL-1)在胆管癌组织中的表达及对预后的意义.方法 采用免疫组织化学技术检测MCL-1在70例胆管癌组织和15例非肿瘤胆道上皮组织中的表达.结果 免疫组织化学结果显示70例胆管癌、15例非肿瘤胆道上皮组织中MCL-1阳性表达率分别为72.9％、26.7％.MCL-1蛋白在胆管癌中的表达明显高于非肿瘤胆道上皮组织(x2=11.541,P =0.001).MCL-1蛋白表达与胆管癌的临床分期、淋巴结转移和组织学分级明显相关(x2=4.048,P =0.044;x2 =6.369,P=0.012;x2=6.466,P=0.039).MCL-1蛋白阴性表达组生存时间明显长于阳性表达组(x2 =5.980,P=0.015).结论 检测MCL-1有助于反映胆管癌发生发展及预后.
-
腹腔镜Roux-en-Y胃旁路术与腹腔镜迷你胃旁路术治疗效果比较
目的 探讨腹腔镜Roux-en-Y胃旁路术(LRY GB)与腹腔镜迷你胃旁路术(LMGB)治疗肥胖症的效果及安全性.方法 选取45例肥胖症患者随机分为LRYGB组(n=23)和LMGB组(n =22).记录的数据包括性别、年龄、体重、身高、体重指数(BMI)、手术时间、术后住院时间、手术并发症、血压、术后血糖及糖化血红蛋白等,并进行了12个月的随访.结果 LRYGB组与LMGB组患者在手术时间方面[(162.5±35.4) min比(120.7±39.8) min,P=0.036],两组比较差异有统计学意义;在术后住院时间上[(9.2±2.3)d比(7.4±2.5)d,P=0.042],两组比较差异有统计学意义;在手术并发症方面比较,差异无统计学意义(P =0.801).两组患者术后腰围、BMI、高血压及糖尿病指标等呈下降趋势,与术前比较差异有统计学意义:但两组间上述指标的差异均无统计学意义.结论 LRYGB和LMGB对肥胖症的治疗效果确切且安全,但LMGB手术时间更短,术后恢复更快.
-
单孔加单通道后腹腔镜与常规腹腔镜在治疗泌尿系上尿路肿瘤的对比
目的 探讨单孔加单通道后腹腔镜治疗泌尿系上尿路疾病的安全性、有效性及手术效果.方法 我科收治的66例病例,其中肾上腺腺瘤16例,肾肿瘤36例,肾盂肿瘤14例,遵照随机原则,分为两组,即单孔加单通道组和标准腹腔镜组,由同一术者同期行手术治疗.统计患者一般临床资料、术中出血量、手术时间、引流管留置时间,并进行对比.结果 66例手术均成功实施,无中转其他术式者.单孔组与标准组肾上腺腺瘤直径为(3.4±1.5)、(2.9±1.4) cm,术中出血量为(8.0±3.0)、(8.5±2.8)ml,手术时间为(98.0±11.0)、(100.0±13.0) min,术后引流管留置时间为(2.5±0.5)、(3.5±0.5)d;肾肿瘤病理均为透明细胞癌,肿瘤直径为(5,4±1.5)、(5.9±1.3) cm,术中出血量为(17.0±4.0)、(20±5.0) ml,手术时间为(111.0±17.0)、(100.0±17.0) min,术后引流管留置时间为(3.5±0.5)、(4.4±1.4)d;肾盂癌根治术14例,术中出血量为(35.0±10.0)、(45.0±15.0)ml,手术时间为(120.0±10.0)、(110.0±13.0) min,术后引流管留置时间为(4.5±0.5)、(6.5±1.5)d.两组在性别、年龄、体重指数(BMI)、肿瘤直径、术中出血量、手术时间比较差异无统计学意义,引流管留置时间比较差异有统计学意义.结论 单孔加单通道后腹腔镜治疗泌尿系上尿路疾病安全、有效,与标准腹腔镜手术比较,具有创伤小,引流管留置时间短等优点,且与传统单孔腹腔镜手术比较,具有操作空间大、器械碰撞率低等优势.
-
微小RNA与慢性骨髓炎发病机制的研究进展
微小RNA(miRNA,miR)是存在于真核生物中的一类非编码单链小分子RNA,它在细胞的分化、增殖、凋亡中起着重要作用.近年,随着对miRNA功能研究的不断深入,人们发现越来越多的疾病与其相关.其中,miRNA在慢性骨髓炎疾病发生、发展中的作用日益明晰.本文回顾了近年对miR-24、miR-29、miR-223等在成骨分化中含量变化以及在细菌刺激下miRNA含量变化等的研究,在信号传导层面上详细阐述了各miRNA在细菌刺激下对成骨分化的影响.
-
软骨组织工程中骨软骨复合支架与宿主的接合界面问题研究进展
组织工程支架在软骨的修复中起到重要的作用,近年来骨软骨复合支架因能够起到同时修复软骨与软骨下骨的作用逐渐受到重视.骨软骨复合支架的远期稳定性与支架和宿主的接合程度相关,移植的骨软骨双相支架存在支架软骨相与宿主软骨的接合问题、支架软骨相与支架骨相的接合问题以及支架骨相与宿主软骨下骨的接合问题.本文就近年来骨软骨复合支架与移植宿主组织的接合问题进行探讨,总结骨软骨复合支架在3种接合问题上的研究进展.
-
大豆异黄酮抗骨质疏松作用的研究进展
大豆异黄酮结构与雌激素相似,可以与雌激素受体结合,具有弱的雌激素样活性.近年来的研究结果表明,大豆异黄酮可以促进骨形成,抑制骨吸收,对雌激素缺乏引起的骨质疏松具有较好的防治作用.因此,本文就近年来大豆异黄酮抗骨质疏松的研究进展进行综述.
-
肝脏缺血再灌注损伤机制研究进展
肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)是一个多因素参与、共同作用的复杂病理生理过程,直接关系到临床预后,深入探讨HIRI病理生理变化及机制,制订合理的干预治疗策略,努力提高患者预后,一直备受国内外学者研究关注.研究证实,HIRI的发生机制与代谢性酸中毒、钙超载、氧自由基、细胞凋亡、内皮素及一氧化氮浓度的失衡、补体系统、黄嘌吟氧化酶、热休克蛋白、Ktüpffer细胞、淋巴细胞及中性粒细胞的活化等众多因素有关.
-
外周血鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1 V600E检测在甲状腺乳头状癌中的研究进展
鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1 (BRAF) V600E基因突变检测是甲状腺乳头状癌(PTC)临床诊断、治疗决策、疗效判断及预后评估方面的重要手段.研究结果显示,外周血BRAF V600E与组织学水平的BRAF V600E具有良好的相关性,而且外周血BRAF V600E突变检测具有创伤更小、操作便捷、可以实时动态监测等优点,预计这将是未来PTC研究的发展趋势.
-
磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基δ基因的研究进展
磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基δ(PIK3CD)基因编码催化亚基pll08,其在经典通路磷酸肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)中具有重要的作用,日益受到人们的关注和有关学者的重视.但是目前国内对PIK3CD基因的研究不多,因此本文就近年来PIK3 CD基因的研究进展进行综述,旨在加深人们对PIK3CD基因的认识和理解.
-
丝氨酸苏氨酸激酶受体相关蛋白在肿瘤发生发展中的作用研究进展
丝氨酸苏氨酸激酶受体相关蛋白(STRAP)由Datta教授先发现并命名.起初发现STRAP能够与转化生长因子-β(TGF-β)受体和Smads家族蛋白中的Smad7相互作用而负性调节经典的TGF-β信号通路转导.由于Smad依赖的TGF-β信号通路能够抑制细胞生长,而且许多研究报道STRAP在多肿瘤组织中表达上调,比如结肠癌、肺癌及乳腺癌等.因此,早期的生物学功能研究结果表明STRAP具有促癌基因的特性.随着研究深入,人们发现STRAP作为WD40超家族蛋白成员之一,不仅仅起到促肿瘤生长的作用,而且具有多样化的生物学功能.WD40结构域具有的转角平台结构为STRAP与其他蛋白相互作用提供了作用平台,为STRAP调节多种蛋白的功能提供了结构基础.由于STRAP自身不具有酶活性,使得STRAP调节的生物过程都是通过与其他蛋白相互作用实现的.在本文中我们将对STRAP在肿瘤中的作用研究进展进行系统综述.
-
区域动脉灌注治疗重症急性胰腺炎的研究进展
重症急性胰腺炎是临床常见的一种急危重症,其发病凶险,进展迅速,发病机制复杂,至今仍缺乏特效的治疗药物和治疗方法.持续性区域动脉灌注能够明显增加局部药物浓度,从而提高疗效,已被逐渐应用于治疗重症急性胰腺炎.动脉的选择和药物的选择是区域动脉灌注治疗重症急性胰腺炎的两个关键所在,动脉的高选择性和药物的复合灌注是区域动脉灌注治疗重症急性胰腺炎的理想方式.
-
足细胞标记蛋白在恶性肿瘤中表达的意义
足细胞标记蛋白是一种带有大量负电荷的CD34相关性唾液酸黏蛋白.它不仅正常表达于肾脏足细胞、造血干细胞、血管内皮细胞、间皮细胞、神经元和血小板,近来研究结果显示在多种恶性肿瘤中也有异常表达,尤其与恶性肿瘤的浸润性及转移有关.因此,深入研究足细胞标记蛋白在恶性细胞中表达的意义对恶性肿瘤的诊断和治疗有重要意义.本文综述足细胞标记蛋白在恶性肿瘤中的表达及其意义.
-
大鼠心跳骤停复苏后肝移植供肝模型的建立
目的 建立一种稳定的大鼠心跳骤停复苏后供肝原位肝移植模型.方法 在Kammada二袖套法的基础上进行改良,通过在供肝获取前夹闭供体腹主动脉5 min后再开放的方法来模拟供体移植前心跳骤停心肺复苏成功肝脏的血流动力学变化,关腹3h后行大鼠原位肝移植,建立大鼠心跳骤停复苏后供肝肝移植模型.同时建立不夹闭供体腹主动脉的对照组,并检测供肝获取时两组供体血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平.结果 共实施大鼠心跳骤停复苏后供肝原位肝移植手术50例,成功46例,手术成功率为92％.供、受体手术时间分别为(49±4) min和(54 ±5) min,无肝期为(17 ±2) min.供肝获取时夹闭组血清ALT水平为(73.2±8.7)U/L,AST水平为(204.9±28.8)U/L;而对照组ALT与AST水平分别为(46.1 ±5.4) U/L和(127.6±15.1)U/L,差异有统计学意义(P=0.037、0.023).结论 在二袖套法基础上建立的大鼠心跳骤停复苏后供肝肝移植模型稳定、可靠、重复性强.本模型模拟了临床上供体捐献前曾出现过心跳骤停且成功复苏后供肝的血流动力学变化.
-
肖氏反射弧临床研究现状及展望
肖氏反射弧理论是被国际公认的在神经科学研究上的重大突破,有重要的临床应用价值并已在国内外初步应用于临床.目前在全世界各地开展了肖氏反射弧手术超过3 000例,但临床疗效存在着一定的争议.相信通过本文的详细分析和讨论,以及后续实验和临床研究的进一步完善,肖氏反射弧手术疗效会更好,并发症会更少,手术更加简单,在基层医院也能得到广泛开展.肖氏反射弧理论及其衍生的一系列重要发现将大大促进了神经损伤修复的研究,更好地造福广大患者.
-
巨噬细胞分化抗原-1通过脾酪氨酸激酶通路促进破骨细胞分化
目的 探讨巨噬细胞分化抗原-1(Mac-1)分子在核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导下破骨细胞分化中的作用.方法 用RANKL及巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导C57BL/J6小鼠脾细胞,并使用抗CD11b及CD18抗体进行处理,1周后进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,测定细胞TRAP染色阳性率并进行统计学分析;用相同方法于载有骨片的96孔板上培养破骨细胞,利用抗CD11b、CD18抗体,干扰CD11b基因表达的慢病毒及其对照空载病毒转染,对骨片进行扫描电镜拍照并计算骨陷窝面积;提取各组细胞总核糖核酸(RNA)并进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR),测定各组蛋白质对应信使RNA(mRNA)表达水平.结果 对照组、抗CD11b抗体组、抗CD18抗体组及双抗体组平均每孑孔 TRAP阳性细胞数分别为(29.5±4.7)、(17.1±3.8)个(P =0.026)、(26.2±5.1)个(P=0.124)、(19.4±4.3)个(P=0.018),骨陷窝面积分别为(6.1±3.4)、(2.2±1.1)10-2 mm2/片(P=0.0l1)、(5.8±2.9) 10-2 mm2/片(P=0.124)、(2.4±1.3)10-2 mnm2/片(P=0.027),对照病毒组及病毒转染组骨陷窝面积分别为(5.6±3.2)、(1.3 ±0.9)10-2 mm2/片(P =0.006);相对于对照组和抗CD18抗体组,抗CD11b抗体处理的两组活化T细胞核因子-1(NFATc1)、脾酪氨酸激酶(Syk)和c-Fos mRNA表达下调.与对照病毒组比较,病毒转染组NFATc1、Syk和c-Fos mRNA表达下调.结论 Mac-1分子通过其亚基CD11b上调Syk与c-Fos,促进NFATc1的表达,终发挥促破骨细胞分化效应,而CD18亚基不具备促进作用.
-
初级纤毛在多发性骨软骨瘤形成中的作用及其机制
目的 比较多发性骨软骨瘤软骨细胞(MOCC)与正常骨骺生长板软骨细胞(NEGPC)初级纤毛的差异,探讨软骨细胞表面的初级纤毛在多发性骨软骨瘤(MO)中的作用.方法 培养MOCC和NEGPC,激光共聚焦显微镜观察MOCC和NEGPC表面初级纤毛的形态和发生率;甲苯胺蓝染色及磺酰罗丹明B比色(SRB)法观察MOCC和NEGPC软骨细胞形态及增殖特点;化学染色法比较MOCC和NEGPC两组软骨细胞功能成熟程度[阿尔新蓝和碱性磷酸酶(ALP)染色]的差异.结果 体外培养MOCC和NEGPC细胞呈多角形或梭形,甲苯胺蓝染色细胞中出现紫色异染颗粒.免疫荧光染色MOCC细胞表面初级纤毛发生率[(25.265±1.766)％]低于NEGPC细胞[(53.943±3.631)％],差异有统计学意义(F=232.692,P=0.000).随着细胞生长时间的延长,两组软骨细胞的吸光度(A)值均处于增加状态,但MOCC细胞始终低于NEGPC细胞.组织化学染色MOCC细胞阿尔新蓝染色较浅,而NEGPC细胞着色较深;MOCC细胞ALP染色形成面积[(7.387±2.045) mm2]低于NEGPC[(14.768±2.072) mm2],差异有统计学意义(F=16.835,P=0.020).结论 软骨细胞表面的初级纤毛与MO地形成密切相关,MO软骨细胞表面初级纤毛减少,可能导致骨骺生长板内软骨细胞的增殖、成熟、分泌功能下降.
-
磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路下p53基因对骨肉瘤细胞增殖及转移的抑制作用
目的 观察p53基因对骨肉瘤细胞增殖和迁移能力影响并探讨其可能机制.方法 使用细胞计数试剂盒(CCK-8)对p53的抑制增殖作用进行评估.分别使用划痕法和侵袭小室法(Transwell)分析其转移和侵袭潜能.终应用免疫组织化学对S2448p哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达进行探测.结果 MG63细胞株和hFOB细胞株在p53浓度为100 nmol/L时,划痕愈合率(％)分别为22.37±1.35和76.84±0.97;侵袭抑制定量结果分别为417.35士3.67和386.54±2.78.体内p53基因在50～500 nmol/L的半数抑制浓度范围内能够有效抑制骨肉瘤细胞株(MG63)和人体正常成骨细胞株(hFOB1.19)的细胞增殖.结论 p53基因能够通过磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B/mTOR信号通路抑制骨肉瘤的细胞增殖并降低迁移的可能.
-
基于虚拟现实技术的显微血管吻合虚拟手术系统的研究
目的 研发一种基于虚拟现实技术的显微断指血管吻合手术系统,探索一种显微外科临床手术教学及培训的新方法.方法 从本院手术室和科室采集各类数据,通过3 d MAX和Autodesk Maya进行建模,血管模型管径仅为1 mm,建立显微镜模块,放大倍数为15×,然后在Unreal Engine 4中制作和运行虚拟手术软件,并使用OBS STUDIO制作手术直播单元.选择来自本科室的医师和外科住培学员,并将住培学员分为培训组和未培训组,培训组接受虚拟手术系统操作训练后,与未培训组及专家组对比,进行统计学处理.结果 使用3 d MAX和Autodesk Maya建造的模型保真度高,使用Unreal Engine 4制作的虚拟手术系统可真实还原显微镜下断指血管吻合的手术流程,精确度可达到毫米级.该系统中的手术直播单元可提供由细节到整体的手术观摩.培训组与未培训组之间的差异有统计学意义(P=0.003);而培训组与专家组之间的差异无统计学意义(P=0.170);未培训组与专家组之间差异有统计学意义(P=0.016).结论 该系统在显微外科手术培训及教学上有应用价值,有助于训练无显微镜下微小血管吻合经验的外科医师,可以让使用者在短时间内提高虚拟手术操作技能.
-
组蛋白去乙酰化酶4在退变人终板软骨中的表达变化及意义
目的 通过比较组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)在正常和退变人终板软骨组织中的表达差异,探讨其在终板软骨退变进程中的作用.方法 获取44例经手术治疗的患者术中废弃终板软骨组织,其中颈椎外伤8例定义为正常组,多节段脊髓型颈椎病36例定义为退变组(CDD),利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot和免疫荧光分别检测正常组和退变组中HDAC4表达,Real-time PCR检测两组软骨表型基因蛋白聚糖(AGN)、Ⅱ型胶原蛋白(COLⅡ)、人性别决定区Y框蛋白9(SOX9)、Runt相关转录因子2(Runx2)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)和X型胶原蛋白(COLX)表达,比较退变组中HDAC4与各软骨表型基因之间相关性.结果 退变组HDAC4表达水平较正常组明显下降(退变组:0.324 ±0.107,正常组:1.000±0.202,t=9.260,P=0.000),Western blot和免疫荧光结果与Real-time PCR结果一致.退变组AGN、COLⅡ表达水平较正常组明显下降(退变组AGN:0.364±0.054,正常组AGN:1.000±0.049,t=15.110,P=0.000;退变组COLⅡ:0.282±0.063,正常组COLⅡ:1.000±0.280,t=4.328,P=0.012);退变组Runx2、MMP-13和COLX表达水平较正常组明显上升(退变组Runx2:2.676±1.444,正常组Runx2:1.000±0.811,t=4.480,P=0.000;退变组MMP-13:3.310±2.207,正常组MMP-13:1.000 ±0.517,t=5.624,P=0.000;退变组COL X:3.017±1.872,正常组COL X:1.000±0.439,t=5.789,P=0.000).HDAC4与Runx2、COL X均呈负相关(r1=-0.576,P=0.000:r2=-0.382,P=0.021).结论 HDAC4在退变终板软骨中表达明显降低,HDAC4减少可能直接或间接导致Runx2和COLX表达上调.调控HDAC4表达有望能成为延缓和阻止终板软骨退变新的治疗靶点.
-
去铁胺对高铁环境下成骨细胞分化的影响
目的 观察去铁胺(DFO)对于高铁环境[利用枸橼酸铁铵(FAC)提供铁离子制作高铁环境]下成骨细胞分化的影响.方法 通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法确定FAC及DFO的干预计量.实验分为3组:对照组、50 μmol/L FAC干预组、FAC+ DFO组(50 μmol/L FAC干预同时加入20 μmol/L DFO).干预后3组细胞分别行碱性磷酸酶(ALP)染色和活性定量,茜素红染色、钙结节计数,对成骨相关基因[Runt相关基因2(Runx2)、锌指转录因子SP7、骨γ羧基谷氨酸(Bglap)、骨保护素(0PC)]利用实时荧光定量核酸扩增检测系统(QPCR)检测其mRNA的表达水平.结果 CCK-8结果显示,50tμmol/L FAC干预组成活率为(95.6±0.7)％,20 μmol/L DFO干预组成活率[(97.6±0.5)％]不影响细胞活性,各组差异无统计学意义(P =0.427).与对照组比较,FAC干预组,成骨相关基因Runx2、Sp7、Bglap、OPG表达下降;而FAC+ DFO干预组与FAC干预组比较成骨相关基因表达上升,差异有统计学意义(P=0.026).ALP染色及活性定量和茜素红染色及结节计数与对照组比较,FAC组结节计数(36±3)下降,而FAC+ DFO组结节计数(120±6)比FAC组上升,差异有统计学意义(P=0.017).结论 在高铁环境中,成骨细胞分化受到抑制;DFO干预可在一定程度上恢复高铁环境下成骨细胞分化.
-
微小RNA-410对人髓核细胞增殖及分泌表达的影响
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-410对人髓核细胞增殖及分泌表达的影响.方法 实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人髓核细胞转染miR-410 mimics后miR-410表达水平;转染后细胞培养12、24、48、72 h,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;双荧光素酶报告基因检测miR-410与低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的靶标关系;Western blot检测聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原蛋白α1链(Col2A1)和HIF-1α的表达水平.结果 与scramble组比较,转染miR-410 mimics后miR-410的表达显著增加(0.85±0.12比2.74±0.34,P=0.015).CCK-8结果显示与scramble组比较,转染miR-410 mimics后细胞存活率逐渐增加,并存在时间依赖性,72 h时显著(1.15 ±0.12比0.62±0.05,P=0.003);miR-410过表达使Aggrecan和Col2A1蛋白表达量显著上升(0.96±0.08比3.23 ±0.29,P=0.003;0.96 ±0.06比2.45 ±0.18,P=0.000).双荧光素酶报告基因检测结果表明miR-410与HIF-1α存在直接的靶标关系(0.32 ±0.15,P=0.000);miR-410过表达抑制HIF-1α蛋白表达水平(0.53 ±0.04,P=0.007).结论 miR-410过表达促进人髓核细胞增殖并增加Aggrecan和Col2A1表达,其机制可能与靶向抑制HIF-1 α表达有关.
-
细胞程序性死亡蛋白5联合阿霉素对人尤文肉瘤细胞凋亡的协同作用及其机制
目的 观察重组细胞程序性死亡蛋白5(rhPDCD5)和阿霉素对人尤文肉瘤细胞株A673的化疗增敏作用,探讨PDCD5在尤文肉瘤化疗中与阿霉素的协调作用机制.方法 体外培养人尤文肉瘤细胞株A673,使用噻唑蓝(MTT)法检测实验组(rhPDCD5 10 μg/ml)和对照组对不同浓度梯度阿霉素的增殖抑制表现;流式细胞技术研究A673细胞在rhPDCD5组(rhPDCD5 10 μg/ml)、阿霉素组(1 μmol/L阿霉素)、联合组(rhPDCD5 10 μg/ml+lμmol/L阿霉素)的凋亡率;并通过Western blot实验分析rhPDCD5蛋白对尤文肉瘤细胞株凋亡信号通路的调控作用.结果 体外培养尤文肉瘤细胞株加入rhPDCD5蛋白后并无明显的凋亡促进作用,而联合使用阿霉素后凋亡率为67.88％,明显高于阿霉素组14.66％;Western blot结果显示rhPDCD5联合阿霉素可明显抑制B细胞淋巴瘤/白血病(bcl)-2、bcl-xl蛋白表达,而增加bcl-2相关X蛋白(bax)和Cleaved Caspase-3的表达,对Bid表达无明显作用.结论 PDCD5蛋白单用对尤文肉瘤细胞无明显促凋亡作用,但可明显增加阿霉素化疗敏感性,该作用与上调凋亡蛋白有关.
-
降钙素基因相关肽对骨质疏松大鼠骨髓基质干细胞增殖及分化的影响
目的 观察降钙素相关基因肽(CGRP)对骨质疏松大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化能力的影响,探讨其促进骨质疏松性骨折愈合的细胞/分子作用机制.方法 3个月龄SD大鼠,行双侧卵巢切除术,术后常规喂养,术后6个月用显微CT(Micro-CT)行骨密度检测,确定骨质疏松模型建立成功;处死骨质疏松大鼠,采用全血贴壁法分离BMSCs,用流式细胞仪进行鉴定;以培养基中加入不同浓度(10-7～ 10-10 mol/L)的CGRP建立实验组,用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖能力;碱性磷酸酶(ALP)活性检测及茜素红染色法观察CGRP对骨质疏松大鼠BMSCs成骨分化及细胞外基质矿化能力的影响;采用反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ALP、Ⅰ型胶原蛋白(COLL-1)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、骨粘连蛋白(Osteonectin)、Run家族转录因子(RunX2)等成骨相关细胞基因mRNA的表达;使用Western blot分析来检测RunX2及Osteonectin的蛋白含量.结果 成功分离培养出骨质疏松大鼠BMSCs;CCK-8法测定细胞增殖能力,CGRP各浓度组较对照组均增加,且呈剂量依赖关系,7d时对照组吸光度(A)值为0.5804±0.0150,CGRP组中10-7 mol/L为0.8041±0.029 9 (P=0.000),10-8 mol/L为0.788 6±0.028 0(P=0.000),10-9 mol/L为0.743 6±0.028 8(P=0.001),10-10 mol/L为0.6933 ±0.0292(P=0.004),差异有统计学意义;ALP活性测定结果显示,各CGRP组较对照组ALP活性均增高,14 d时对照组为4.633 ±0.423,CGRP组中10-7 mol/L为44.047±2.446 (P=0.000),10-8 mol/L为42.030±2.626(P=0.000),10-9 mol/L为39.333 ±0.527(P=0.000),10-10 mol/L为24.647±1.135(P =0.000)[单位:10-3μmol/(min·mg)],差异有统计学意义;钙结节染色均呈阳性,而对照组无显色;基因检测结果提示,各CGRP组的基因表达较对照组升高,7d时ALP空白组为0.999 5±0.205 0,10-7 mol/L为2.578 4 ±0.210 1 (P=0.001),10-10 mol/L为2.351 2 ±.0.201 2(P=0.001);BMP-2空白组为0.9795±0.200 1,10-7 mol/L为3.4279±0.255 2 (P=0.000),10-10 mol/L为2.9149 ±0.202 3 (P=0.000);COLL-Ⅰ空白组为1.029 5±0.202 2,10-7 mol/L为2.5187 ±0.2400(P=0.001),10-10 mol/L为2.347 8±0.201 4(P=0.001);RunX2空白组为0.9932± 0.2132,10-7 mol/L为2.4989±0.262 0(P =0.002),10-10 mol/L为2.2198 ±0.2503(P=0.003);Osteonectin空白组为1.019 5±0.200 1,10-7 mol/L为1.972 8±0.212 3(P=0.005),10-mol/L为1.8642±0.250 1(P =0.010),差异有统计学意义;蛋白检测结果提示各CGRP组的RunX2及Osteonectin蛋白表达较对照组均升高.结论 适当浓度(10-7～10-10 mol/L)的CGRP可以促进骨质疏松大鼠BMSCs的增殖,呈浓度依赖性,同时可提高其成骨分化能力,CGRP可能在治疗骨质疏松骨折的骨修复中发挥重要作用.
-
微小RNA-499-5p对骨肉瘤细胞增殖能力的影响
目的 检测微小RNA-499-5p(miR-499-5p)在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤细胞增殖能力的影响,并探讨其调节机制.方法 实时定量聚合酶链反应(PCR)法用来检测骨肉瘤组织、瘤旁组织及骨肉瘤细胞株中miR-499-5p的表达量.细胞计数试剂盒(CCK-8)法及Western blot 分别用来研究miR-499-5p对骨肉瘤细胞增殖能力的影响及探讨miR-499-Sp调节骨肉瘤细胞增殖的相关机制.结果 在骨肉瘤组织中,miR-499-5p表达量显著升高(肉瘤旁组织中表达量为0.34±0.09,而骨肉瘤组织中的表达量为1.47 ±0.18,P=0.008);此外,miR-499-5p在骨肉瘤细胞株HoS、MG-63及Hu09中的水平(分别为1.65±0.03、1.13 ±0.11、1.87±0.14)显著高于其在人骨髓间充质干细胞hMSCs中的水平(0.56±0.19,P =0.005);CCK-8实验结果表明,与空白及阴性对照组比较,在转染miR-499-5p mimics后48、72、96 h,MG-63细胞的增殖能力明显增强(P=0.030);流式细胞术检测细胞凋亡的结果表明,过表达miR-499-5p组内MG-63细胞的凋亡率为(0.87±0.19)％,显著低于空白组及阴性对照组内细胞的凋亡率[分别为(5.49±0.53)％、(6.72±0.85)％,P=0.030];此外,我们通过靶基因预测软件、结合RT-qPCT及Western blot结果初步认为miR-499-5p可通过转录后调节程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的表达而发挥上述促癌效应.结论 miR-499-5p在骨肉瘤组织中高表达且其在体外可促进骨肉瘤细胞的增殖.
-
微小RNA-181对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及分子机制
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-181对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制.方法 定量聚合酶链反应(qPCR)检测入骨肉瘤组织和对应的正常组织、正常成骨细胞NHOst和人骨肉瘤细胞株中miR-181表达水平.miR-181模拟物及NC-miRNA转染MG63或U2OS细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞增殖;细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力变化;细胞流式术检测细胞分布情况;Western blot检测MAP3K10表达水平;生物信息学软件TargetScan预测m iR-181的靶作用位点,并通过荧光素酶活性实验证实miR-181的靶作用位点.结果 与人正常组织比较,骨肉瘤组织中miR-181表达下降(t正常组织=5.487,P正常组织=0.009),与成骨细胞NHOst比较,MG63、Saos2、U20S和HOS骨肉瘤细胞中miR-181表达也显著下降(tMG63 =0.489,PMG63=0.000;tSaos2 =0.548,Psaos2=0.005;tu2Os=0.431,Pu2Os=0.000;tHos=0.392,PHos=0.009);CCK-8检测细胞增殖结果表明,与NC-miRNA转染组比较,miR-181转染组骨肉瘤细胞增殖速率显著下降,差异有统计学意义(tMG63 =0.469,PMG63 =0.007;tU2OS =0.372,PU2os=0.000);MG63细胞迁移及侵染实验结果表明,与NC-miRNA转染组比较,miR-181显著抑制骨肉瘤细胞迁移与侵染比例(迁移:tMG63=0.541,PMG63=0.006;侵染:tMG;63 =0.473,PMG63=0.001);MAP3K10是miR-181的直接靶位点.结论 miR-181通过靶向MAP3K10信号通路抑制骨肉瘤细胞MG63和U20S增殖并促进其凋亡.
-
腺相关病毒介导血红素加氧酶-1基因转移对大鼠脊髓损伤的保护作用
目的 观察血红素加氧酶-1(HO-1)过表达对脊髓损伤(SCI)后运动功能恢复的影响,并探讨其机制.方法 96只健康雄性SD大鼠,应用完全随机法分为假手术组(Sham组)、单纯SCI组(SCI组)、空载体组[AAV-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)组]和HO-1过表达腺相关病毒载体组(AAV-HO-1组),采用重物压迫脊髓损伤模型;采用Basso-Beattie-Bresnahan (BBB)评分评估大鼠后肢运动功能;原位缺口末端标记法(TUNEL)检测脊髓组织细胞凋亡;荧光显微镜下观察EGFP表达;免疫荧光染色显示脊髓组织中神经元核性蛋白(NeuN)阳性细胞的表达;Western blot测定脊髓组织中HO-1、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白表达.结果 SCI后ld,可观察到AAV-EGFP组和AAV-HO-1组脊髓组织有EGFP表达;AAV-HO-1组与SCI组和AAV-EGFP组比较,凋亡细胞数量[分别为(21.50±8.02)％、(49.83±13.60)％、(44.83±11.74)％]、bax蛋白表达量(分别为1.15 ±0.19、1.96±0.24、1.77±0.30)明显减少,差异有统计学意义(分别为F=30.630,P=0.000;F=29.900,P=0.000),而AAV-HO-1组与SCI组和AAV-EGFP组比较,HO-1(分别为1.96士0.28、1.48 ±0.23、1.54 ±0.16)、bcl-2蛋白表达量(分别为0.69±0.13、0.35±0.11、0.29 ±0.10)明显增加,差异有统计学意义(分别为F=23.900,P=0.000;F=68.140,P=0.000);SCI后7、14、21 d,AAV-HO-1组BBB评分[分别为(8.00±1.79)、(11.67±2.16)、(13.83 ±2.22)分]明显高于SCI组[分别为(5.17±1.94)、(6.17±1.72)、(7.50±1.97)分]和AAV-EGFP组[分别为(4.67±1.51)、(5.67±1.86)、(7.17±2.14)分],差异有统计学意义(分别为F =152.900,P =0.000;F=109.700,P =0.000;F =75.880,P =0.000).SCI后21 d,AAV-HO-1组(108.5 ±27.74)的NeuN阳性细胞较SCI组(50.00 ±20.93)和AAV-EGFP组(55.83±13.57)明显增加,差异有统计学意义(F=40.740,P=0.000).结论 H0-1过表达能明显提高SCI后运动功能的恢复,对SCI具有保护作用.
-
SRC基因和WWOX基因在骨肉瘤组织的表达及其临床意义
目的 探讨SRC基因以及WWOX基因在骨肉瘤中的表达以及临床预后的相关性.方法 选取我院经病理学确认的骨肉瘤石蜡标本106例,并以骨软骨瘤20例为对照组,经免疫组织化学实验并分析两者表达与患者临床预后相关性.结果 基因SRC在观察组中表达的阳性率(74.5％)明显高于对照组(25.0％);基因WWOX在观察组中表达的阳性率(47.2％)低于对照组(75.0％),差异有统计学意义(P=0.044、0.027).基因SRC在骨肉瘤远处转移(48.1％)以及患者的随访中3年生存率(64.6％)、5年生存率(53.2％)和生存分析差异有统计学意义(P=0.026、0.033、0.042、0.033);基因WWOX在骨肉瘤远处转移(24.0％)以及患者的随访中3年生存率(80.0％)、5年生存率(72.0％)和生存分析差异有统计学意义(P=0.048、0.034、0.025、0.024).结论 基因SRC在骨肉瘤中高表达与骨肉瘤患者临床预后明显相关,基因WWOX在骨肉瘤患者中低表达与骨肉瘤患者临床预后明显相关.
-
小鼠软骨前体细胞ATDC5中沉默骨膜蛋白基因能延缓软骨退变
目的 观察骨膜蛋白(Postn)在骨关节炎软骨面的表达,探讨其对软骨退变的作用及作用机制.方法 把C57/BL6小鼠随机分为实验组和对照组,实验组小鼠右膝关节采用内侧半月板不稳定(DMM)法建立骨关节炎模型,对照组则只切开皮肤和关节囊,采用番红O-固绿及甲苯胺蓝染色观察关节软骨面的变化及用免疫组织化学检测关节软骨面Postn的表达水平.然后通过体外实验用白细胞介素(IL)-1β诱导ATDC5软骨前体细胞株发生骨关节炎,再采取siRNA oligo于扰Postn基因的表达,继而通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测OA相关因子的表达水平.结果 动物实验中,相对于Sham组,DMM组关节软骨厚度明显变薄(DMM 4周比Sham 4周,P =0.000;DMM 8周比Sham 8周,尸=0.001);国际骨关节炎研究学会(OARSI)评分明显升高(DMM 4周比Sham 4周,P=0.005;DMM 8周比Sham 8周,P=0.002);Postn的阳性细胞率明显增多(DMM 4周比Sham 4周,P=0.000;DMM 8周比Sham 8周,P=0.004).体外实验中,相对于NC组,IL-13+ siScramble组中Postn(1.65±0.23,P=0.008)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13),1.75±0.24,P=0.005)、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶5(ADAMTS-5,4.63±1.58,P=0.017)、血管内皮生长因子(VEGF,6.24±0.90,P=0.001)、Runt相关转录因子2(Runx2,1.54 ±0.14,P=0.003)表达升高,但10型胶原A1(COL10al,1.12±0.12,P=0.161)差异无统计学意义.而相对于IL-1β+siScramble组,IL-1β+siPostn组Postn (0.51 ±0.17,P=0.002)、MMP-13(0.79 ±0.09,P=0.003)、ADAMTS-5 (0.90±0.11,P=0.叭5)、VEGF (1.04±0.62,P=0.001)、Runx2(0.82 ±0.14,P=0.003)、COL10al (0.77±0.11,P=0.020)的表达均不同程度的下降.结论 Postn在DMM骨关节炎软骨面表达升高.ATDC5软骨前体细胞中沉默Postn基因能延缓软骨退变.
-
动态拉伸对兔膝软骨细胞糖胺多糖合成的影响
目的 观察不同强度的循环动态拉伸(CTS)对原代培养的兔膝关节软骨细胞糖胺多糖(GAG)合成的影响.方法 1个月龄新西兰兔6只,无菌手术切取双膝关节软骨,采用0.4％Pronase酶和0.025％Ⅱ型胶原酶消化分离得到关节软骨细胞,来源于同一只兔的软骨细胞分为3部分,分别接种在3块BioFlex培养板上,通过Flexercell 5000系统对单层培养的兔膝软骨细胞施加CTS刺激,加载条件为0.3Hz正弦波形,时长为6 h/d,加载强度分别为0％、5％、15％的CTS刺激.于加载后24、36、48和60 h用倒置显微镜观察细胞形态,并分别抽取上清用阿尔新蓝染色沉淀法测量GAG浓度.采用重复测量资料的单因素方差分析比较不同强度CTS刺激组上清液中GAG浓度的差异.结果 细胞力学加载后可见周边部软骨细胞由多角形变为纺锤形,沿培养皿半径垂直方向排列.随拉伸强度的增加,上清中GAG浓度依次上升,各组总平均浓度分别为[(4.7±1.3)比(6.3±1.1)比(8.0±1.8) ng/ml],差异有统计学意义(F=15.970,P=0.000);同一时间点,随CTS拉伸强度的增大,上清液中GAG的含量逐渐增高,各时间点3组浓度分别为[24 h:(2.3±0.5)比(3.3±0.6)比(3.9 ±0.6)ng/ml;36 h:(4.0 ±0.7)比(4.6±0.8)比(6.8 ±0.2) ng/ml;48 h:(5.5±0.7)比(6.8±0.7)比(8.5±0.8)ng/ml;60 h:(6.9±1.2)比(10.8±1.3)比(13.0 ±1.1) ng/ml],且差异有统计学意义(F=6.062,P=0.036;F=16.720,P=0.004;F=12.570,P=0.007;F=19.790,P=0.002),同一采样时间采用组间LSD法两两比较差异均有统计学意义.随加载总时间增加,上清中GAG浓度逐渐增加,各组分别为[0％ CTS组:(2.3±0.5)比(4.0±0.7)比(5.5±0.7)比(6.9±1.2) ng/ml;5％ CTS组:(3.3±0.6)比(4.6±0.8)比(6.8±0.7)比(10.8±1.3)ng/ml;15％ CTS组:(3.9±0.6)比(6.8±0.2)比(8.5±0.8)比(13.0±1.1)ng/ml],且差异有统计学意义(0％ CTS组:F=4.640,P =0.037;5％ CTS组:F=23.580,P=0.000;15％ CTS组:F=9.638,P=0.005).且加载总时间与加载强度之间存在交互效应,时间越长,加载组上清中GAG浓度越大.结论 CTS可促进单层贴壁兔膝关节软骨细胞合成GAG,作用效果随拉伸强度和时间的增加而增大.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
