中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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胃癌DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化基因修饰的相关性
目的 探讨DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化在胃癌肿瘤细胞对多基因修饰的相关性.方法 收集我科2007年10月至2008年01月间8例胃癌患者肿瘤组织和正常胃黏膜组织,采用染色质免疫共沉淀联合芯片技术(ChIP-chip)对两种组织细胞在全基因组范围内的组蛋白H3K27三甲基化检测后挑选出4个阳性基因.随后采用染色质免疫共沉淀-实时定量聚合酶联反应(ChIP-qPCR)验证芯片结果,采用MeDIP-qPCR方法检测阳性基因的DNA甲基化水平.结果 ChIP-qPCR验证4个阳性基因结果与CpG岛芯片检测结果一致,胃癌肿瘤细胞4个基因DNA甲基化水平与正常胃壁细胞比较差异有统计学意义(P值均<0.05).结论 和正常胃黏膜组织细胞比较,胃癌肿瘤细胞多个基因DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化存在显著改变,DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化基因修饰存在相互作用.
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RUNX3基因在不同肝组织中的蛋白表达水平及其意义
目的 探讨RUNX3基因在6种不同肝组织中的蛋白表达及其相互关系和意义.方法 采用免疫组织化学(SP)法分别检测51例肝癌组织、23例肝增生结节组织、40例肝硬化组织、9例乙肝组织、5例脂肪肝组织和14例正常肝组织的RUNX3蛋白表达水平,并对其结果进行分析.结果 51例肝癌组织中弱阳性率、中度阳性率、强阳性率分别为41.18%(21/51)、3.92%(2/51)、3.92%(2/51);23例肝增生结节组织中弱阳性率、中度阳性率、强阳性率分别为60.87%(14/23)、4.35%(1/23)、13.04%(3/23);加例肝硬化组织中弱阳性率、中度阳性率、强阳性率分别为30.00%(12/40)、22.50%(9/40)、35.00%(14/40);9例乙肝组织中弱阳性率、中度阳性率、强阳性率分别为44.44%(4/9)、11.11%(1/9)、44.44%(4/9);5例脂肪组织中弱阳性率、中度阳性率、强阳性率分别为0%(0/5)、20.00%(1/5),80.00%(4/5);14例正常肝组织中弱阳性率、中度阳性率、强阳性率分别为0%、0%、100%(14/14).前三者与后三者差异分别有统计学意义(P<0.05),后三者之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 RUNX3基因的蛋白表达在肝癌形成过程中随癌前期病变向癌的方向发展呈递进性下降,RUNX3基因蛋白表达水平的渐进性下降可能与肝癌的发生发展明显相关.
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CIDEA基因在脂肪瘤间充质干细胞中的表达及其与脂肪肿瘤的关系
目的 检测CIDEA基因在脂肪瘤间充质干细胞中的表达,并探讨其与脂肪组织肿瘤的关系.方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测6例脂肪瘤间充质干细胞和6例正常脂肪组织来源干细胞中CIDEA的表达水平.结果 CIDEA在脂肪瘤间充质干细胞中的表达显著低于正常脂肪来源干细胞,提示其在脂肪瘤间充质干细胞中表达的下降或缺失可能与肿瘤干细胞引发脂肪组织肿瘤相关.结论 CIDEA与脂肪细胞的分化呈现相关性,其表达的下降或缺失可能与脂肪组织肿瘤的发生发展有关.
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高表达蛋白hSav1对人胚肾HEK293增殖能力的影响
目的 观察高表达人Salvadorl(hSav1)蛋白对人胚肾293(HEK293)细胞增殖的影响.方法 构建含有绿色荧光蛋白(GFP)的hSav1质粒GFP-N1-hSav1;将构建好的GFP-N1-hSav1质粒在脂质体Lipofectamine 2000的介导下转染HEK293细胞,荧光显微镜下观察质粒转染效率;分别在转染后12、24、36、48 h通过噻唑蓝(MTT)比色法计算细胞增殖抑制率,抑制率=[(对照-空白)-(给药-空白)]/(对照-空白)×100%;转染后36 h加入5-溴-2'-脱氧尿苷(BrdU),通过其掺入比率来显示hSav1对细胞增殖的影响.结果 质粒GFP-N1-hSav1构建成功,转染效率为70%-80%左右,蛋白hSav1明显高表达;MTT结果显示转染质粒后12、24、36、48 h,高表达蛋白hSav1组的细胞增殖抑制率分别为2%、5%、15%、23%,而阴性对照分别为2%、3%、2%、2%;BrdU结果显示,在HEK293细胞中高表达蛋白hSav1后细胞增殖抑制率为(27.3±3.8)%,阴性对照组的细胞增殖抑制率为(12.9±5.3)%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 在人胚肾HEK293中高表达蛋白hSav1可明显抑制细胞增殖能力.
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改进型左侧精索静脉曲张对大鼠睾丸酶及增殖细胞核抗原的影响
目的 观察改进型左侧精索静脉曲张(ELV)对大鼠睾丸酶及增殖细胞核抗原(PCNA)的影响.方法 利用改进的方法建立青春期SD大鼠左精索静脉曲张的模型21只;假手术组SD大鼠15只作对照组.术后3个月,取部分睾丸组织匀浆提取上清液,比色法定量检测乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)活性,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定PCNA的浓度.结果 实验组左睾丸内的LDH、G6PDH活性分别为(8.17±3.47)、(34.00±16.29)U/mg,与对照组同侧(11.98±2.26)、(54.88±20.87)U/mg比较下降,与实验组右睾丸(12.69±3.97)、(78.03±25.28)U/mg比较也下降,差异均有统计学意义(P<0.05);实验组左睾丸内的SDH活性(1.22±0.41)U/mg与对照组同侧(1.74±0.43)U/mg比较下降,差异有统计学意义(P<0.05),与实验组右睾丸(1.62±0.56)U/mg比较下降,差异无统计学意义(P>0.05);实验组左睾丸内PCNA(669.10±205.39)mU/ml与对照组同侧(776.81±231.72)mU/ml比较下降,和实验组右睾丸(800.81±172.02)mU/ml比较也下降.差异均无统计学意义(P>0.05).结论 改进型ELV致睾丸酶活性降底和PCNA的变化,这些变化可能是影响生育能力的因素之一.
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体外培育牛黄复方制剂抗血吸虫病门静脉高压家兔肺组织病变的研究
目的 探讨体外培育牛黄复方制剂对血吸虫病门静脉高压肺组织病变干预作用及其机制.方法 采用光镜和电镜方法,观察20例血吸虫病门静脉高压家兔毗喹酮对照组和20例体外培育牛黄复方制剂干预组肺组织的形态学改变;用免疫组织化学技术检测20例血吸虫病门静脉高压家兔毗喹酮对照组和20例体外培育牛黄复方制剂干预组肺绀织的纤维连接蛋向(FN)、层粘连蛋白(LN)的表达.结果 血吸虫病门静脉高压家兔毗喹酮对照组肺组织呈肺泡腔渗出液较多,可见较多巨噬细胞,肺泡毛细血管扩张,毛细血管三层屏障结构模糊,体外培育牛黄复方制剂干预组肺组织部分区域肺泡间隙纤维轻微增多,I型上皮、基底膜、内皮结构基本完整,肺泡腔无明显渗出;血吸虫病门静脉高压家兔毗喹酮对照组肺组织FN、LN表达呈阳性或强阳性,体外培育牛黄复方制剂干预组肺组织FN、LN则呈阴性或弱阳性表达,两者差异有统计学意义(P<0.01).结论 体外培育牛黄复方制剂能够有效预防血吸虫病家兔门脉高压症的肺部并发症,它是通过改善肺微循环、降低细胞外基质含量来抑制肺组织病变.
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CO2气体灌注内镜甲状腺手术的研究
目的 观察内镜甲状腺手术CO2充气对机体病理生理的影响,探讨CO2充气内镜甲状腺手术临床应用的可行性.方法 通过动物颈部灌注CO2气体压力及其内镜甲状腺切除术实验,检测动物在术前、术中30、60 min和手术结束各时段心率(HR)、呼吸频率(BR)、PH、PaO2、PaCO2和BE.依据CO2气体灌注内镜甲状腺手术的基础,分析经前胸壁入路内镜甲状腺切除术31例临床资料.结果 应用6mmHg CO2(1 mmHg=0.133 kPa)充气压力建立操作空间,实验动物的BR、HR、PH、PaO2、PaCO2和BE在手术过程中无明显变化.应用12 mmHg CO2充气压力建立操作空间,实验动物的BR、HR、PH、PaO2、PaCO2和BE变化差异均有统计学意义(P<0.01).临床31例患者均顺利完成手术,其中行甲状腺部分切除加例,甲状腺次全切11例.平均手术时间113 min,平均术中出血量6 ml,术后平均引流时间2.83 d,术后平均住院时间4 d.术后无喉上、喉返神经损伤及甲状旁腺损伤,无高碳酸血症出现.所有病例随访1～10个月均无不适.结论 严格掌握手术适应证及禁忌证,掌握其并发症的特点和防治措施,完善相应的围手术期处置,临床上将CO2气体灌注压力控制在4～6 mmHg,进行内镜甲状腺切除术安全可行,具有良好的微创、美观效果.
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大鼠肝移植物中T-bet+/GATA-3+和ROR-γt+/FOXP3+细胞随排斥程度的动态变化及意义
目的 检测Th1、Th2、Th17和iTreg CD4+T细胞亚系特征性表达的核转录因子以探究它们在大鼠肝移植急性排斥中的动态变化及意义.方法 Kamada"二袖套"法建立大鼠肝移植急性排斥模型,按Banff标准对排斥程度进行分级;免疫组织化学方法检测Th1、Th2、Th17和iTreg特征性表达的核转录因子,对阳性细胞计数.结果 与对照组比较,轻度排斥组、中度排斥组和重度排斥组中T-bet+(对照组:19.3±5.1;轻度排斥组:63.7±9.7;中度排斥组:40.9±13.6;重度排斥组:32.3±3.3)细胞数和RORγt+(对照组:6.5±1.4;轻度排斥组:8.3±2.3;中度排斥组:26.8±3.2;重度排斥组:39.2±12.8)细胞数显著升高(P<0.01);轻度排斥组中GATA-3+(对照组:7.1±1.3;轻度排斥组:6.4±3.1;中度排斥组:23.2±9.1;重度排斥组:42.6±14.1)细胞数无明显升高(P>0.05),中度排斥组中明显升高(P>0.05),重度排斥组显著升高(P<0.01);轻度排斥组FOXP3+(对照组:9.5±2.4;轻度排斥组:13.5±4.8;中度排斥组:24.5±4.9;重度排斥组:39.3±11.7)细胞数无明显升高(P>0.05),中度、重度排斥组显著升高(P<0.01).结论 大鼠肝移植术后急性排斥的发生与T-bet+、GATA-3+、RORγt+和FOXP3+细胞相关;在排斥早期,T-bet+/GATA-3+平衡与排斥的发生相关性比RORγt+/FOXP3+平衡更强.
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MBD1甲基化调控胰腺癌BxPC-3细胞株mdr1转录及其表达的研究
目的 观察MBD1通过对mdr1转录区域结合位点甲基化影响,在转录水平间接调控胰腺癌mdr1基因表达.方法 应用RNA干扰技术对人胰腺癌细胞株BxPC-3中MBD1基因进行抑制;应用定量荧光聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术、MSP(甲基化专用聚合酶链式反应)方法分别检测转染前后细胞株中的mdr1 mRNA的表达差异和转录区域结合位点甲基化变化.结果 成功构建并转染MBDI siRNAs至人原位胰腺腺癌细胞BxPC-3(BxPC-3)细胞中,证实MBDI mRNA水平明显下调(下调幅度为93.19%).MBD1下调后,mdr1 DNA转录区域(-110GC和-50GC)甲基化分别上调(上调幅度分别为181.98%和409.57%);mdr1 mRNA表达明显下调(下调幅度为97.79%).结论 MBD1可通过对mdr1转录区域结合位点甲基化的影响,在转录水平间接调控胰腺癌mdr1基因表达.
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骨肉瘤肺转移与血管内皮生长因子和微血管密度的关系
目的 探讨骨肉瘤盱市转移与血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的关系.方法 用免疫组织化学法检测30例骨肉瘤组织中VEGF的表达和MVD.结果 VEGF在骨肉瘤中的阳性率表达分别为70.00%(21/30),其中有肺转移的病例阳性率为92.31%(12/13).无肺转移病例的阳性率为52.94%(9/17),差异有统计学意义(P<0:05).骨肉瘤组织中VEGF阳性表达与骨肉瘤的组织学分型无明显相关(P>0.05).骨肉瘤中VEGF表达强度与MVD呈正相关(r=0.799,P<0.01);有肺转移的骨肉瘤患者其瘤组织中MVD与无肺转移的骨肉瘤患者其瘤组织中MVD差异有统计学意义(P<0.05),有肺转移的明显高于无肺转移的病例.结论 VEGF是促进微血管生成的主要细胞因子,检测VEGF表达与MVD值可作为判断肿瘤预后的重要指标.
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胃癌患者唾液蛋白质组学分析
目的 应用差异蛋白质组学方法筛选唾液中与胃癌相关的蛋白质分子.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离胃癌患者和正常人群唾液总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质;Western blot 验证蛋白质组学分析的结果.结果 通过两组人群唾液的双向凝胶电泳图谱分析发现15个差异蛋白质斑点,质谱鉴定出9种蛋白质,在胃癌患者唾液中高表达的有3个,其余6个在胃癌患者唾液中低表达.Western blot对表达增高的蛋白鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)进行检测,结果与蛋白质组学分析结果一致.结论 蛋白质组学研究是筛选胃癌患者唾液中特异性标记物的有效手段.
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基质金属蛋白酶-13 mRNA在骨巨细胞瘤中的表达及其意义
目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)-13在骨巨细胞瘤(GCT)中的表达及其与Jaffe病理学分级和Campanacci放射学分级之间的关系.方法 根据Jaffe病理学分级和Campanacci放射学分级,分别将45例骨巨细胞瘤患者分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测骨巨细胞瘤MMP-13 mRNA的表达,分析其相关性.结果 Jaffe病理学分级Ⅰ组中MMP-13 mRNA比值为0.58±0.06,Ⅱ组为0.65±0.04,Ⅲ组为0.62±0.05,组间MMP-13 mRNA比值的差异无统计学意义(P>0.05).Campanacci放射学分级Ⅰ组中MMP-13 mRNA比值为0.42±0.05,Ⅱ组为0.63±0.07,Ⅲ组为0.85±0.09,组间MMP-13 mRNA比值的差异有统计学意义(P<0.01),呈正相关(P<0.05).结论 MMP-13可作为判断骨巨细胞瘤Campanacci放射学分级的指标之一.
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下咽鳞癌患者血清比较蛋白质组学研究
目的 从蛋白质组学角度探讨下咽癌血清蛋白质组指纹图谱.方法 采集58例下咽癌患者和41正常对照者血清,应用CM10芯片和PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机检测,对下咽癌组和正常组及下咽癌组内不同亚组间的血清蛋白质指纹图谱比较,寻找相关差异蛋白,初步建立分类树诊断模型和放疗敏感性预测模型.结果 下咽癌组与正常对照组间有9个差异蛋白质峰(P<0.05);建立的下咽癌决策分类树诊断模型诊断符合率为90.10%;下咽癌颈淋巴结转移组和无转移组差异无统计学意义(P>0.05);分化较差组和分化较好组有1个蛋白差异有统计学意义(P<0.05);化疗敏感组和不敏感组差异无统计学意义(P>0.05);放疗敏感组和不敏感组比较,P≤0.05时有5个差异蛋白峰,均在放疗敏感组高表达.Biomarker Pattern软件建立的下咽癌放疗敏感性分类树预测模型,灵敏度100.00%,特异度83.33%.结论 下咽癌和正常对照比较血清中存在特异性的差异表达蛋白,下咽癌放疗敏感组患者血清中m/z为6115.75的蛋白较放疗不敏感组高表达(P<0.01).
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应用结肠癌基因表达谱数据整合分析筛选肿瘤相关基因
目的 通过结肠癌基因表达谱数据整合分析筛选肿瘤相关基因.方法 基因芯片技术构建的结肠癌基因表达谱与转录组公共数据库SAGE DGED信息相结合,筛选肿瘤相关基因.定量聚合酶链反应(PCR)验证基因差异表达.组织芯片(腺癌22例、腺瘤20例、正常8例)和免疫组织化学技术检测基因蛋白表达.结果 119条基因(上调17条、下调102条)在基因芯片与SAGEDGED中表达变化结果一致.定量PCR检测TGFBI、NME1、IFITM3、FCGBP和TSPAN1基因表达,结果与基因表达谱数据一致.IFITM3蛋白表达在结肠腺瘤(20%,4/20)和腺癌(55%,12/22)中表达较正常结肠组织(0,0/8)明显升高(P<0.05).结论 基因芯片数据和SAGE DGED相结合,可快速、准确筛选结肠癌肿瘤相关基因.
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H2-B1基因转染小鼠内皮细胞对其免疫原性的影响
目的 转染pEGFP-N1-H2B1质粒载体至小鼠血管内皮细胞(VEC),观察导入H2-B1基因后VEC免疫原性的变化,探讨借鉴母胎免疫耐受模型诱导心脏移植术后免疫耐受的机制.方法 以未处理的VEC为对照,采用流式细胞仪和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别于转染H2-B1基因后24、48、72 h检测质粒转染效率以及H2-B1基因的mRNA相对表达量;将同源小鼠外周血单个核细胞(PBMC)和VEC按100:1和10:1两种不同效靶比混合,观察PBMC对靶细胞杀伤活性的变化.结果 H2-B1基因组H2-B1基因在VEC中的mRNA表达量明显高于对照组(0.5mg/L组,P<0.05;1.0 mg/L组,P<0.01).H2-B1基因转染48 h后,当效靶比为100:1时,与对照组细胞毒性14.29%比较,0.5 mg/L基因组细胞毒性为4.28%,提示转染H2-B1基因组PBMC对VEC的毒性作用明显降低(P<0.05).结论 H2-B1基因可能具有免疫调节功能,可降低VEC的免疫原性,抑制PBMC对VEC的杀伤活性,诱导免疫耐受.
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血管内皮生长相关因子在胰腺癌组织中的表达
目的 观察胰腺癌组织中的血管内皮生长相关因子:色素上皮衍生因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达以及胰腺癌中PEDF和VEGF平衡关系的变化与其预后的关系.方法 用SP免疫组织化学方法检测51例胰腺癌标本,观察PEDF和VEGF在胰腺癌中的表达以及相应的微血管密度(MVD),并和肿瘤血管密度、肿瘤浸润深度、肿瘤大小、血管侵犯、肿瘤病理TNM分期、淋巴结转移、远处转移等临床病理指标作单因素和多因素COX回归分析.结果 PEDF/VEGF与MVD之间明显关系(P<0.01),PEDF/VEGF值大小与肿瘤病理TNM分期(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.01)、远处转移(P<0.05)有密切关系.Kaplan-Meier生存曲线分析,51例患者根据PEDF/VEGF值是否大于0.5分为两组,其中PEDF/VEGF≥0.5组生存曲线明显高于PEDF/VEGF<0.5组(log-rank test,P<0.01).PEDF/VEGF比值(风险系数0.390;P<0.05)、淋巴结转移(风险系数3.38;P<0.01)、远处转移(风险系数3.447;P<0.01)是胰腺癌独立的预后指标.结论 PEDF/VEGF比值可较好反映胰腺癌中的血管增生;它与胰腺癌患者的临床分期、淋巴结转移及远处转移相关,是胰腺癌重要的预后因子之一.
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膀胱癌CK20及Ki-67的表达及相关性
目的 探讨角蛋白20(CK20)和Ki-67在膀胱癌中的表达与膀胱癌的侵袭、转移及预后的关系.方法 用免疫组织化学SP法检测154例膀胱癌组织中CK20和Ki-67的表达.结果 CK20在103例肿瘤组织中有表达,阳性率为66.9%.CK20的表达和膀胱癌的T分期及远处转移呈正相关(P<0.05).Ki-67在126例肿瘤组织中有阳性表达,阳性率为81.8%.Ki-67在膀胱癌组织的表达与肿瘤病理分级、T分期、远处转移呈正相关(P<0.05).Spearman等级相关分析表明两者明显相关(P<0.05).结论 CK20及Ki-67可能参与了膀胱癌的侵袭与转移,CK20与Ki-67可作为预后判断因子,结合病理分级和临床分期分析能提高对膀胱癌患者预后判断的准确性.
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脊髓小胶质细胞在SD大鼠骨癌痛中的变化
目的 观察SD大鼠一侧胫骨注射同系Walker 256癌细胞后脊髓小胶质细胞的变化.方法 腹水传代Walker 256癌细胞种植于大鼠一侧胫骨建立骨癌痛模型,25只雌性SD大鼠,体质量150～180 g,随机均分为5组:对照组(N)、热杀死肿瘤细胞组(K)、骨癌痛早期组(C1,种植后第6天)、骨癌痛中期组(C2,种植后第12天)、骨癌痛晚期组(C3,种植后第18天).结果 骨癌痛大鼠在出现自发痛行为与机械性痛觉过敏的同时,两侧脊髓L4～L6 OX-42免疫组织化学染色显著增强,细胞明显增大,染色加深,与N组及K组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);OX-42染色增强以C1组为显著,术后第6～18天逐步降低,C1组与C2或C3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 胫骨注射Walker 256癌细胞后激活脊髓小胶质细胞;小胶质细胞在两侧脊髓灰质后角均有激活,反映了本模型骨癌痛特征中"镜像痛"的产生机制;小胶质细胞在骨癌痛早期激活为明显.
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核因子-κB活化受抑对TRAIL诱导前列腺癌细胞株PC-3M凋亡效能的影响
目的 观察二硫代氨基甲酸毗咯烷(PDTC)对核因子(NF)-κB活化的抑制作用,探讨PDTC对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导激素耐受型前列腺癌细胞株PC-3M凋亡的促进作用.方法 根据单用TRAIL(25、50、100 μg/L)或PDTC(25、50、100μmoL/L)或两者合用[25/25、25/50、25/100、50/25、50/50 PDTC(μmoL/L),TRAIL(μg/L)]等不同干预情况将PC-3M细胞分组,以细胞免疫组织化学和凝胶电泳迁移率(EMSA)检测法分析NF-κB核转位的活化情况,并通过MTY和流式细胞分选法研究PDYTC的参与对TRAIL诱导凋亡能力的影响.结果 EMSA和细胞免疫组织化学结果显示TRAIL单独诱导PC-3M细胞凋亡过程中引起NF-κB的显著活化,但是经PDTC预处理的PC-3M细胞中NF-κB的核转位受到抑制.导致其对细胞凋亡的保护作用丧失.检测凋亡显示PDTC作为NF-κB的强抑制物本身并不具有明显的细胞毒性,TRAIL+PDTC作用组的杀伤效应显著增强,远远超过单用TRAIL组对细胞的杀伤率(P<0.01).结论 TRAIL杀伤激素耐受型前列腺癌细胞的作用受到NF-κB活化的影响,抑制NF-κB活化可以显著增强TRAIL的凋亡诱导效用.
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绿茶多酚改善环孢素A抑制血管舒张的作用
目的 观察绿茶多酚(GTP)对环孢素A(CsA)抑制血管舒张作用的改善,并探讨其机制.方法 将30只SD大鼠随机平均分为3组:CsA组、对照组和CsA+GTP组.建模5周后,检测体质量、肾功能:血尿素氮(BUN)、肌酐(Cre);并取胸主动脉环,观察乙酰胆碱(Ach)诱发的血管舒张反应、左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)和吲哚美辛预处理对舒张反应的影响、去内皮细胞的血管舒张反应.并检测血管组织一氧化氮(NO)水平.结果 实验5周后,CsA组大鼠体质量(253.2±8.1)g低于对照组(292.1±9.5)g;CsA+GTP组体质量(287.9±9.7)g高于CsA组;CsA组BUN、Cre含量高于对照组;CsA+GTP组BUN、Cre低于CsA组;差异均有统计学意义(P<0.05).CsA组大鼠Ach引起的动脉环的大舒张度为(42.5±4.3)%,低于对照组的(81.2±7.6)%和CsA+GTP组的(70.1±6.5)%,差异有统计学意义(P<0.05).用L-NAME预处理后,CsA组和CsA+GTP组动脉环的舒张幅度分别为(40.3±3.7)%和(45.8±4.2)%,均低于对照组的(79.4±6.8)%;用吲哚美辛预处理后对照组和CsA+GTP组的舒张反应高于CsA组;差异均有统计学意义(P<0.05).去内皮细胞的各组血管中,血管舒张反应被明显抑制,各组血管的舒张百分比差异无统计学意义(P>0.05).CsA组大鼠血管组织中NO含量显著低于对照组和CsA+GTP组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CsA可导致血管组织NO水平下降,引起NO介导的内皮依赖性血管舒张功能异常.应用绿茶多酚后,则升高其血管组织中NO水平,改善内皮依赖性的血管舒张功能.
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胃癌发生与XPC基因单倍型的关系
目的 探讨XPC基因多态性位点rs2228000和rs2228001位点与胃癌发生风险的关系.方法 采用聚合酶链反应.限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,对203例胃癌患者和210例对照者进行XPC基因rs2228000位点和rs2228001位点多态性检测;并采用PHASE 2.0软件构建这两个多态性位点的单倍型,以非条件Logistic回归校正混杂因素,进行多态性与胃癌风险相关性的统计学分析.结果 XPC基因多态性位点rs2228000与rs2228001在胃癌与正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05).该两个SNPs构建的单倍型AT与CT与胃癌的易感关联的差异有统计学意义(P<0.01),OR值分别为2.62,10.51;分层分析显示AT与cT单倍型在性别、吸烟、饮酒、年龄分层中的差异均有统计学意义(P<0.05),且在AT单倍型中随年龄的增大,OR值逐渐增高,在<50岁、50～60岁、>60岁3个年龄层中OR值分别为1.91(95%CI:1.08～3.38)、3.49(95%CI:1.50～8.15)、5.43(95%CI:1.58～18.67).结论 XPC基因rs2228000与rs2228001多态性位点的单倍型与胃癌的发生明显相关.
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小干扰RNA对肾癌786-O细胞Survivin表达及其增殖的抑制作用
目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞Survivin基因表达及其增殖、凋亡的影响.方法 设计、合成1对Survivin编码基因序列特异的siRNA,用脂质体包裹转染人肾癌786-O细胞,分不同浓度组(10、50、100 nmol/L),采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测Survivin mRNA及蛋白表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,免疫组织化学TUNEL法榆测细胞凋亡.结果 Survivin siRNA能有效下调Survivin基因表达水平,抑制了细胞生长,促进其凋亡.并呈剂量依赖性(3组的mRNA 88.3%、62.4%、43.8%,蛋白87.7%、62.4%、46.5%,增殖抑制率11.6%、41.2%、57.5%,凋亡率14.2%、29.4%、38.1%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 Survivin基因siRNA能抑制人肾癌786-O细胞Survivin基因表达,进而抑制其增殖,促进其凋亡.
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基质细胞衍生因子-1对神经干细胞的趋化作用
目的 观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对神经干细胞(NSCs)迁移的影响.方法 由GFP转基因SD大鼠胚胎脑组织获取NSCs并进行传代培养,免疫细胞化学染色法检测SDF-1特异性受体CXCR4的表达,利用Blind-Well小室体外迁移体系观察不同浓度的SDF-1(0、1、10、50、100、500、1000μg/L)对NSCs定向迁移数量的影响,随后分别使用CXCR4激动剂和阻断剂处理NSCs,再次利用上述方法观察适浓度SDF-1时NSCs的迁移.结果 成功分离培养得到能够稳定表达GFP的NSCs,且CXCR4在该种NSCs上有表达.体外趋化实验结果表明,SDF-1对NSCs有较强的趋化作用,随着SDF-1浓度的升高,发生迁移的细胞数量也随之增加,并于SDF-1浓度为500μg/L时达到高峰;CXCR4特异性激动剂和阻断剂分别能够增强和减弱SDF-1对NSCs定向迁移的趋化作用.结论 SDF-1与其特异性受体CXCR4相互作用,能够对NSCs的定向迁移产生靶向性作用.
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热休克蛋白70-2基因沉默诱导大鼠精原细胞凋亡及其机制
目的 探讨热休克蛋白(HSP)70-2基因沉默对精原细胞的影响及其机制.方法 构建HSP70-2特异的短发夹RNA(shRNA)质粒载体,并转染大鼠精原细胞;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSP70-2 mRNA表达,Western blot检测HSP70-2、Cyclin DI、bcl-2和box蛋白表达,应用流式细胞术分析细胞周期和凋亡.结果 HSP70-2基因沉默组的HSP70-2蛋白表达量为0.93±0.13,明显低于阴性对照组1.31±0.10(P<0.01);流式细胞术检测结果显示,与转染Scrambled的阴性对照组比较,转染pGenesil-1-HSP70-2重组质粒组的PC3细胞在G1期出现明显细胞周期阻滞和细胞凋亡,G1期阻滞细胞比例为(80.09±2.37)%,凋亡率为(7.44±2.41)%,而阴性对照组分别为(61.85±2.31)%和(1.09±0.57)%(P<0.05).与阴性对照组比较,转染后细胞bcl-2、Cyclin D1表达水平显著降低,而bax表达水平升高.结论 HSP70-2基因沉默能诱导精原细胞凋亡,其机制可能是通过Cyclin D1蛋白调节细胞周期并通过上调box蛋白表达促进细胞凋亡.
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三磷酸腺苷结合盒转运体成员2在人脑胶质瘤中的表达及其与神经巢蛋白表达的关系
目的 探讨三磷酸腺苷结合盒转运体成员2(ABCG2)在人脑胶质瘤组织中的表达及其与胶质瘤分级和神经巢蛋白(nestin)表达的关系.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测ABCG2在52例不同病理级别胶质瘤中的mRNA表达;免疫组织化学SABC法检测ABCG2和nestin的蛋白表达.结果 ABCG2在脑胶质瘤中的mRNA表达与正常脑组织比较呈过表达(P<0.05),且随着病理级别的升高而增加(P<0.05);免疫组织化学显示ABCG2在52例胶质瘤中的阳性表达率为32.7%(17/52),并与病理级别明显相关(x2=4.62,P<0.05),主要呈亲血管分布;ABCG2的表达与nestin的表达明显相关(x2=7.60,P<0.05).结论 ABCG2在人脑胶质瘤中的表达随着病理级别的升高而逐渐增加,且与nestin的表达呈正相关;脑肿瘤干细胞可能与神经干细胞具有一定的同源性.
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肝细胞癌中HBx的表达及其与肿瘤病理分级的关系
目的 检测乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)在肝细胞癌中的表达并探讨其与肝癌病理分级的关系.方法 用免疫组织化学法检测41例肝癌患者肿瘤组织中HBx蛋白的表达,与临床资料进行相关分析,并应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、PCR及Western blot法检测肝癌患者肿瘤组织及血清中HBx的表达.结果 肝癌组织中HBx的总体阳性检出率为27/41(65.85%),HBx+与HBx-者肿瘤组织低分化比例分别为11/27(40.74%)及2/14(14.29%),差异有统计学意义(P<0.01),且肿瘤组织低分化比例随HBx阳性表达程度的增加而增加,HBx强阳性表达者肿瘤组织低分化比例高达4/6(66.67%);RT-PCR对肿瘤组织HBx mRNA的检出率为10/16(62.50%),PCR对血清中HBx拷贝的检出率为1/7(14.29%),Western blot对血清中HBx蛋白的检出率则为6/7(85.71%).结论 肝癌肿瘤组织中HBx的表达与肿瘤的病理分级呈负相关,肿瘤组织低分化比例随HBx阳性表达程度的增加而增加.
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计算机图像分析在评价大鼠急性胰腺炎模型病理变化中的应用
目的 应用计算机图像分析评价大鼠胰腺炎模型的病理变化,探讨数字化评价大鼠胰腺炎模型的可行性.方法 用5%牛磺胆酸钠胆胰管内注射建模,分别于操作完成后3、6、12、24、48 h处死动物.用数字切片扫描系统及图像分析软件对胰腺的坏死、水肿、出血及炎细胞浸润进行分析及统计.结果 处理后48h胰腺的病理变化[炎细胞:(67.00±49.49)个/200倍视野;坏死:(49.86±21.74)%;出血:(14 445.60±6940.35)μm2;水肿:9.58±0.81]较其他时段有显著的加重(P<0.05);图像分析的诊断一致性(k=0.7)优于人工方法(k=0.3).结论 用计算机图像分析评价大鼠胰腺炎模型的病理改变具有客观性强、所得数据精准、不同实验方法间可比性强等优点.
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大鼠盆神经节胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶阳性神经元对尿道外括约肌的支配
目的 观察大鼠盆神经节(MPG)中胆碱乙酰转移酶(ChAT)、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元对尿道外括约肌(EUS)的支配.方法 24只成年SD大鼠随机分为A组(n=12)和B组(n=12).应用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪技术结合免疫组织化学和酶组织化学双标技术,观察A组大鼠MPG中ChAT阳性神经元和还原型辅酶Ⅱ(NADPH,NOS标志物)阳性神经元对EUS的支配.B组大鼠MPG内注射麦芽凝集素-辣根过氧化物酶(WGA-HRP)进行顺行神经追踪.结果 A组大鼠HRP标记神经元散在分布于MPG内.HRP标记神经元中43.3%(155/358)为ChAT免疫反应阳性,14.5%(49/339)为NADPH组化反应阳性.B组大鼠EUS内有HRP阳性神经末梢.结论 大鼠盆神经节中的神经元对EUS有直接支配,其神经递质有乙酰胆碱和一氧化氮.
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小剂量高渗氯化钠羟乙基淀粉40对自然杀伤细胞和血小板CD41的影响
目的 观察术中高渗氯化钠羟乙摹淀粉40注射液(HSS40)对恶性肿瘤患者体内自然杀伤细胞(NK细胞)和血小板活化分子CD41影响.方法 将76例手术患者随机分两组:输血组(A组)38例、HSS40组(B组)38例.于麻醉前1 h、术后1、3、7 d抽取外周血,细胞检测仪检测CD56和CD41含量;以乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞活性.结果 组间比较:CD56术后第3、7天B组高于A组,差异显著(25.560±11.026比15.648±6.729;29.040±10.221比15.035±6.758,P<0.01),NK细胞活性术后第7天两组比较差异有统计学意义(19.939±6.994比15.307±5.107,P<0.05);CD4,术后l d B组明显低于A组(7.740 4-4.101比10.752 4-5.493,P<0.01).组内比较:A组术后第3天NK细胞活性下降(P<0.05),术后第7天下降明显,与术前比较差异有统计学意义(P<0.01),B组术后第7天NK细胞活性与术前比较差异有统计学意义(P<0.05),CD56术后第3天有所上升(P<0.05),术后第7天上升明显,与术前比较差异有统计学意义(P<0.01).两组CD41术后1～7 d均明显高于术前水平(P<0.01).结论 手术和输血可导致术后NK细胞活性降低,血小板CD41含量明显升高,术中输注HSS40,术后NK细胞活性及数目不同程度升高,且降低血小板CD41含量.
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骨髓来源半成熟树突状细胞诱导大鼠小肠移植免疫耐受
目的 观察髓样分化因子88(MyD88)沉默的半成熟树突状细胞(DC)诱导大鼠小肠移植模型免疫耐受.方法 供体乃44大鼠,受体Wistar大鼠.随机分为3组(n=6).A组(半成熟DC组)移植前7d经阴茎背静脉注射半成熟MyD88沉默DC(2×106细胞数),B组(未成熟DC组)移植前7 d经阴茎背静脉注射未成熟DC(2×106细胞数)和C组(阴性对照组)移植前7 d经阴茎背静脉注射1 ml生理盐水.3组均于注射7 d后行大鼠异位节段性小肠移植术,观察统计各组受体存活情况,检测受体血清中的促炎症因子白细胞介素(IL)-2、干扰素(IFN)-γ等的变化.结果 半成熟MyD88沉默DC组[(13.7±1.2)d,n=6]较未成熟DC组[(8.0±1.0)d,n=6,P<0.05]和阴性对照组[(6.0±0.8)d,n=6,P<0.05)存活时间显著延长,同时受体血清中IL-2和IFN-γ等促炎症因子的表达明显降低(P<0.05),病理改变亦较轻微.结论 MyD88沉默的半成熟DC具有独特的表形和功能,能够诱导受体产生特异性免疫耐受,显著延长受体术后的存活时间.
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SLC35F2在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的 探讨人类溶质载体家族35成员F2(SLC35F2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及意义.方法 选取于我中心行手术治疗的NSCLC患者52例,43例使用Trizol法处理肿瘤组织提取总RNA,9例将手术切除标本制成冰冻切片,使用激光捕获显微切割(LCM)技术分离得到NSCLC组织中的单一纯净癌细胞提取总RNA,两组均采用荧光实时定量PCR SYBR GREEN法检测SLC35F2基因表达,并与癌旁正常肺组织进行对比.结果 普通方法与LCM方法检测的SLC35F2基因在NSCLC细胞或组织中的表达量均明显高于其在癌旁正常肺组织中的表达(NSCLC 2.460±0.970比癌旁正常0.006±0.001,P<0.05),相关性分析及方差分析均证实病理分期与SLC35F2在NSCLC组织中相对表达量明显相关(早期0.30±0.14比晚期4.80±1.93,P<0.01).结论 SLC35F2可能是与NSCLC发病相关的原癌基因.
关键词： 人类溶质载体家族35成员F2 非小细胞肺癌 -
自体负载肿瘤抗原树突状细胞治疗大鼠甲状腺癌
目的 观察自体负载肿瘤抗原树突状细胞(DC)对大鼠甲状腺癌的治疗作用.方法 建立Wistar荷瘤大鼠动物模型,随机分为治疗组和对照组,治疗组静脉输入负载肿瘤抗原DC、对照组输入生理盐水,检测分析2组血清中自细胞介素(IL)-12、IL-8表达水平,以及瘤重、瘤体体积及大鼠存活.结果 治疗组与对照组瘤重、瘤体体积、存活期、IL-12及IL-8表达水平分别为:(3.56±0.79)g比(4.97±0.56)g、(3.98±0.84)cm3比(5.06±0.58)cm3、(36.0±3.0)d比(28.0±3.2)d、(368.9±21.7)ng/L比(227.7±13.4)ng/L和(218.9±19.3)ng/L比(371.2±24.1)ng/L(P值分别<0.01、<0.01、<0.05、<0.01、<0.01).结论 自体负载肿瘤抗原DC对甲状腺癌具有较好的抑瘤效应,可延长荷瘤鼠的生存期.
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改性壳聚糖防粘连膜防止心肌梗死模型兔心脏与周围组织粘连
目的 观察改性壳聚糖防粘连膜对心肌梗死兔心脏与周围组织粘连程度的影响.方法 25只日本长耳白兔,开胸结扎冠状动脉制备心肌梗死模型,随机分为对照组(A组)和改性壳聚糖防粘连膜组(B组),A组正常关胸,B组关胸前在心脏和胸壁间置入改性壳聚糖防粘连膜.每组造模型成功各11只.术后3个月A组存活8只、B组存活9只.分别行在体磁共振电影和二次开胸,分级评价粘连程度.采用Wilcoxon秩和检验.结果 磁共振电影评价粘连程度,A组轻度粘连、中度粘连、重度粘连分别为2只、2只、4只;B组分别为7只、2只、0只.差异有统计学意义(P<0.05).开胸评价粘连程度,A组无粘连、轻度粘连、中度粘连、重度粘连分别为1、1、2、4只;B组分别为3、4、2、0只.差异有统计学意义(P<0.05).结论 改性壳聚糖防粘连膜可以减轻心肌梗死模型兔心脏与周围组织粘连.
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胃旁路术对糖尿病大鼠糖脂代谢的影响
目的 观察Roux-en-Y胃旁路术对糖尿病Coto-Kakizaki(CK)大鼠糖脂代谢的影响.方法 18只GK大鼠随机等分为Roux-en-Y胃旁路手术组(RYGB组)、假RYGB组和对照组;观察手术后1、2、4、12周各组大鼠空腹血糖、C肽和体质量增加值变化,同时观察手术后4周、12周血浆糖化血红蛋白、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量变化.结果 手术前3组大鼠各检测指标差异无统计学意义(P>0.05).手术后1、2、4、12周RYGB组大鼠空腹血糖(7.0±0.8比6.5±1.0比6.3±1.5比5.6±1.7比4.3±0.5,P<0.01)明显降低,空腹C肽(0.21±0.06比0.28±0.09比0.52±0.06比0.71±0.06比0.78±0.06,P<0.01)显著升高;手术后4、12周大鼠糖化血红蛋白(9.71±1.34比9.09±1.21比7.34±1.17,P<0.01)、甘油三酯(1.32±0.17比0.87±0.05比1.22±0.15,P<0.01)、低密度脂蛋白胆固醇(1.61±0.25比1.21±0.20比1.16±0.15,P<0.01)明显降低,高密度脂蛋白胆同醇(0.83±0.10比1.11±0.12比1.23±0.16,P<0.01)明显升高(P<0.01).各组大鼠体质量增加值差异均有统计学意义(P<0.05).假RYGB组和对照组其余各检测指标的变化差异均无统计学意义(P>0.05).结论 Roux-en-Y胃旁路术可改善非肥胖糖尿病GK大鼠血糖和血脂代谢,且与体质量变化无关.
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胰岛素增加肿瘤细胞化疗敏感性的研究
目的 探讨胰岛素对肿瘤细胞化疗敏感性的影响及机制.方法 以胰岛素和甲氨蝶呤(MTX)或5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理人结肠癌细胞SW480,小鼠结肠癌细胞CT-26及小鼠乳腺癌细胞4T1,噻唑蓝(MTT)法分析细胞活力,荧光显微镜和流式细胞术观察肿瘤细胞对荧光标记MTX的摄取,并利用小鼠荷瘤模型,观察胰岛素及低MTX糖对MTX化疗疗效的影响.结果 (1)胰岛素增加MTX和5-Fu的细胞毒作用4.1%-11.5%.(2)胰岛素增加肿瘤细胞对MTX摄取141.9%.(3)胰岛素及低血糖状态增强MTX抑瘤作用20.1%.结论 胰岛素及低血糖状态增加肿瘤细胞对化疗药物的吸收,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.
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镁锌合金在体外对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响
目的 观察镁锌合金(Mg-zn)在体外的降解及对小鼠前成骨细胞(MC313-E1)增殖、分化和矿化的影响,探讨Mg-Zn成为新型骨科内植物材料的可行性.方法 Mg-Zn和纯镁(Mg)试样置入模拟体液(SBF)中,3 d后通过电化学方法和静态浸泡失重的方法来测定其腐蚀电位及腐蚀速率;在Mg-Zn上接种MC3T3-E1细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测1、3、5、7、9 d时细胞增殖活性,采用碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测14、28 d时细胞ALP活性,并用四环素荧光染色检测14d时矿化结节.与左旋聚乳酸(PLLA)作对照研究.结果 Mg-Zn的腐蚀电位增高,腐蚀速率降低;培养第5、7、9天后,Mg-Zn成骨细胞增殖活性明显高于PLLA(P<0.01);14、28 d时,Mg-Zn ALP活性明显高于PuA(P<0.01);Mg-Zn矿化结节面积明显大于PLLA(P<0.01).结论 Mg-Zn明显改善了Mg的耐腐蚀性能,同时能促进MC333-E1细胞的增殖、分化和矿化功能,具有良好的生物相容性.
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外周血淋巴细胞白细胞介素-2 mRNA监测在肾移植术后早期急性排斥反应诊断中的应用
目的 探讨实时定量聚合酶链反应(PCR)监测外周血淋巴细胞(PBL)白细胞介素(IL)-2 mRNA表达在肾移植术后早期急性排斥反应(AR)诊断中的应用.方法 对2008年5月至2009年8月进行肾移植术的68例患者,测定术前、术后第1、3、7、14 d PBL的IL-2 mRNA表达.依据围手术期急性排斥反应的有尤分为AR组和对照组.结果 术后6～20 d共有9例患者发生AR.术前、术后第1、3天,AR组和对照组患者PBL的L-2 mRNA表达分别为(0.182±0.230)和(0.176±0.015)、(0.174±0.018)和(0.168±0.023),(P>0.05);术后第7天,两组PBL的IL-2 mRNA表达分别为(0.270±0.056)和(0.195±0.053),(P<0.05);术后第14天,两组PBL的IL-2 mRNA表达分别为(0.320±0.043)和(0.181±0.034)(P<0.01).结论 实时荧光定量PCR检测PBL的IL-2mRNA表达可能是监测肾移植术后早期急性排斥反应的有效方法,并有助于AR的及时治疗和预后判断.
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肾移植患者不同免疫抑制方案对sCD30水平的影响
目的 观察肾移植患者术后不同免疫抑制方案对血清可溶性CD30(sCD30)水平的影响,并探讨其临床意义.方法 根据免疫抑制方案将肾移植患者分为环孢素(CsA)治疗组(79例)和他克莫司(FKS06)治疗组(33例),对患者临床资料、sCD30水平、肌酐值及血药浓度进行相关分析.结果 比较两组患者的临床资料、sCD30水平及第24月时肌酐值差异均无统计学意义(P>0.05);两组患者sCD30水平在手术后均逐渐下降,术后第7天开始较术前差异有统计学意义(P<0.05);线性回归分析提示,两组患者第24个月时肌酐值、血药浓度均与术前sCD30水平相关(P<0.05).结论 以CsA或FKS06为主的免疫抑制方案均能降低肾移植患者术后sCD30水平;并且sCD30水平与远期肾功能、血药浓度明显相关.
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蓝舌病毒湖北株对小鼠肾癌细胞体内外的杀伤效应
目的 观察蓝舌病毒湖北株(BTV-HBC3)对小鼠肾癌细胞株Renca体内外的杀伤效应.方法 接种1 MOI的BTV-HBC3于Renca细胞,观察Renca感染后的细胞病变效应(CPE),应用扫描电镜观察感染48 h后的超微结构,以噻唑蓝(MTT)比色法检测病毒分别以不同感染复数(MOI)感染Renca细胞后24、36、48 h的细胞存活率,并应用琼脂糖凝胶电泳分析感染后48 h的Renca细胞及其对照组病毒基因组.同时制备BALB/C小鼠Renca细胞荷瘤动物模型,观察应用BTV-HBC3处理后皮下荷瘤生长,并进行苏木素-伊红(HE)染色病理分析,应用免疫组织化学检测病毒蛋白的表达.结果 Renca细胞感染BTV-HBC348 h后,CPE程度大于90%,透射电镜下,胞质内可见增殖的病毒颗粒,呈晶格状排列.Renca细胞接种1 MOI的BTV-HBC3 24、36、48 h后细胞的存活率分别为(44.45±5.26)%、(30.47±4.77)%、(20.34±5.26)%,且该病毒对Renca细胞的杀伤作用呈现一定的量效关系;感染后细胞进行琼脂糖电泳可以检测到特异性长(L)、中(M)、短(S)3组分片段的病毒的dsRNA基因组;体内实验表明BTV-HBC3也明显抑制肿瘤生长(P<0.01);组织病理学观察中肿瘤组织未见坏死区,可见大片透明空泡样组织,肿瘤组织内可见腺体样结构,而小鼠其他各脏器组织切片中未见病毒感染,治疗组肿瘤组织可见病毒蛋白的阳性染色,其余组织器官经免疫组织化学分析未见病毒蛋白表达.结论 蓝舌病毒湖北株对小鼠肾癌细胞体内外具有显著的靶向杀伤效应.
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Decorin/fusin双基因修饰骨髓间充质干细胞趋化动力学及抗纤维化的研究
目的 观察双基因(Decorin/fusin)修饰骨髓间充质干细胞(MSCs)体外趋化动力学及对纤维合成的影响.方法 pLVX-puro为载体,pLTR-CMV-DCN、pLTR-CMV-FIB-DCN、pLTR-CMV-FIB-Fusin为质粒,构建慢病毒嵌合体融合基因载体;HEK293细胞包装,滴度1×107cfu/ml病毒液转染MSCs,puromycin抗性筛选、纯化.检测转染效率、基因表达情况、修饰MSCs体外趋化动力学及Transwell纤维合成.结果 基因转染效率为11%,筛选纯化后达30%;外源基因可稳定表达;修饰MSCs具有微环境依赖性体外趋化、穿膜及抗纤维合成能力.结论 双基因修饰MSCs可影响其基因表达和趋化动力学并因微环境变化而降低体外纤维合成.
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酵母双杂交系统筛选IEX-1相互作用蛋白
骨肉瘤恶性程度高,侵袭力强,易发生早期肺转移,预后差,严重影响青少年身心健康.近20年来,其5年生存率虽有所增加,但治疗一直处于平台期,化疗疗效没有较大提高[1].我们研究表明早期应答基因IEX-1与骨肉瘤相关,IEX-1在As2O3作用后,表达明显下调[2].
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N-乙酰半胱氨酸抑制NF-κB活化下调急性胰腺炎相关肺损伤中MCP-1的表达
有研究表明N-乙酰半胱氨酸(NAC)能下调趋化因子的表达,但是否与抑制核因子(NF)-κB的活化有关尚未完全阐明[1].我们通过建立大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)动物模型,观察NAC对NF-κB活化的影响,探讨趋化因子单核细胞趋化蛋白(MCP)-1在急性胰腺炎相关肺损伤中的作用.
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谷氨酰胺对食管癌术后的营养支持作用
本研究旨在观察手术后早期应用谷氨酰胺营养支持方法对食管癌患者术后营养状态的影响,探讨食管癌患者术后合理的营养支持方案.一、资料与方法1.研究对象:选择我院2008年8月至2010年1月收治的32例食管癌患者,其中男21例,女11例,年龄46～72岁,平均56.5岁.术前随机分为2组:常规胃肠外营养组(TPN组,对照组)16例和TPN+Gla-Gln组(实验组)16例.
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时间序列分析方法在胆囊炎发病率预测中的应用
我们运用Excel2003及EViews3.1分析2001年1月到2007年12月海西州地区胆囊炎发病资料,通过时间序列模型,观察时间序列模型在胆囊炎月发病率中的应用以及预测胆囊炎月发病率的发展趋势,探讨人群在各个时间段的胆囊炎发病特征.
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Ad-IL-24诱导U87-MG人脑胶质瘤细胞凋亡的研究
脑胶质瘤是中枢神经系统常见的恶性肿瘤,约占所有脑肿瘤的50%,目前多采用手术、放疗及化疗等常规疗法,但大部分患者预后不佳[1].我们利用已构建的腺病毒介导白细胞介素-24(IL-24)基因表达载体(Ad-IL-24),观察其对U87-MG人脑胶质瘤细胞的生长抑制和凋亡作用,并探讨其分子机制.
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经皮肾穿刺造瘘模型大鼠血清胱抑素C测定
经皮肾穿刺造瘘术是一种安全有效的微创技术[1].我们以血清胱抑素C(Cys C)观察大鼠肾穿刺造瘘模型中不同孔径、不同灌注压力对肾脏造成的损伤.
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组织胶水在手术切口缝合中的应用
"必勃朗"组织胶水即医用胶[由德国贝朗公司生产,注册号:国食药监械(进)字2005第3650808号(更)]是作用于人体表皮组织的快速黏合剂.我科自2009年2月至2009年10月采用该组织胶水处理腋臭手术切口取得了良好效果,现报道如下.
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重组人肝细胞生长因子联合粒细胞集落刺激因子对血管新生的影响
有研究表明,重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)和重组人肝细胞生长因子(rhG-HGF)均能诱导下肢缺血区域的血管生成[1].本实验旨在兔下肢缺血模型上观察rhG-CSF和rhG-HGF联合应用对缺血肢体侧枝血管新生的影响.
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神经节苷酯对大鼠弥漫性脑损伤后学习记忆功能的保护作用
弥漫性脑损伤(DBI)后可出现神经元延迟性死亡,导致患者长期学习记忆功能障碍.我们通过研究神经节苷酯(GM-1)对大鼠DBI后学习记忆功能的改善作用.
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临时性下腔静脉滤器预防肺动脉栓塞临床研究
目的 观察临时性下腔静脉滤器在预防肺动脉栓塞(PE)中的安全性和有效性.方法 112例经多谱勒超声证实存在下肢深静脉血栓形成(DVT)患者,给置入TempofilterⅡ临时性下腔静脉滤器,分析其使用的安全性及预防PE中的作用.结果 112例植入TempofilterⅡ临时性下腔静脉滤器的患者1例出现滤器脱出,54(48.2%)例发现滤器上拦截到血栓,在滤器置人期间没有发生PE.结论 Tempofilter Ⅱ下腔静脉滤器的置人能有效拦截缸栓,防止PE发乍.
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应用MB49细胞建立三种膀胱癌模型
目的 探讨应用MB49细胞建立3种膀胱癌模型及其佳实验性治疗时机的选择.方法 采用MB49细胞2×106/50μl皮下注射建立膀胱癌皮下模型;5×105/50μl进行膀胱灌注可以建立膀胱癌原位模型;1×105/200μl通过尾静脉注射可以建立膀胱痛肺转移模型.同时通过对模型的观察可以确立模型建立的时间及治疗时机的佳选择.结果 皮下肿瘤模型在种植后第5天可以触及到实质性肿块,这是实验性治疗的佳时间.通过向膀胱内灌注肿瘤细胞可以获得比较稳定的原位模型,而术后1～3 d是实验性治疗的佳时机.观察期间限定在3周以内.膀胱癌肺转移模型可以通过向鼠尾静脉内注射肿瘤细胞而得到,实验性治疗的时机可以选择在术后10 d以内,观察期间也在3周以内.结论 用MIM9细胞可以建立膀胱癌的皮下模型,原位模型以及肺转移模型.模型的质量比较稳定,肿瘤的产生时间比较固定,可以获得实验性治疗时机的佳选择.
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裸鼠原位种植大肠癌肝转移三种建模方法的比较
目的 比较3种不同的人大肠癌裸鼠原位种植肝转移模型,建立稳定有效的人大肠癌裸鼠原位种植肝转移模型.方法 逐步传代法皮下成瘤传5代,采用84只BALB/C-nu/nu裸鼠,随机分为4组,结肠原位荷包缝合法和结肠原位纤维蛋白胶黏合法和结肠微注射1×106和1×105SW1116细胞法建立大肠癌裸鼠原位种植肝转移模型.各组裸鼠死亡后立即解剖观察原位以及肝脏、肺、脾脏、胰腺、肠系膜等脏器组织的转移并且进行苏木素-伊红(HE)染色进行镜下观察有无转移.结果 荷包缝合组和纤维蛋白胶组结肠原位种植肝转移成功率均为100%比微注射法50.0%和14.3%高,纤维蛋白胶法比其他两种方法所形成的结肠原位肿瘤和肝转移瘤均大而多.HE染色表明肝转移肿瘤性质与结肠原位种植瘤相同.结论 结肠原位纤维蛋白胶黏合法比较其他二种原位种植肝转移模型的手术成功率高,肝转移率高、操作简单.
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重视和积极开展非编码RNA与乳腺癌的相关研究
随着人类基因组计划的实施与广泛开展,人们逐渐认识到,乳腺癌的发生发展不但与编码基因有关,而且还与非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA)密切相关.ncRNA是一类具有调控功能但又不翻译成蛋白质的RNA分子,按其大小主要分为两类:短链非编码RNA(microRNA,miRNA)和长链非编码RNA(Longnon-coding RNA,lncRNA).它们通过剪切、转运、转录、加工及修饰对目的基因和相关蛋白表达进行调控,从而发挥生物学功能.
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乳腺癌组织CD44+CD24-/low细胞含量检测及其临床意义
目的 探讨乳腺癌组织中CD44+CD24-/low干细胞比例与各项临床指标的相关性.方法 新鲜乳腺癌组织标本68例.机械-酶法制成细胞悬液,流式细胞术检测CD44+CD24-/loe细胞的含量,探讨其含量与肿瘤分期、免疫组织化学、远处转移等的相关性.结果 (1)68例乳腺癌组织中的CD44+CD24-/low腺癌干细胞比例为0.1%～15.2%.(2)除ER组和远处转移组CD44+CD24-/low细胞的含量差异有统计学意义(P<0.05)外,年龄、肿瘤分期、腋窝淋巴结转移等组别,CD44+CD24-/low细胞的含量差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞比例与ER阴性表达、癌肿侵袭性和预后等临床指标明显相关.
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聚酰胺-氨纳米微粒介导5-氟尿嘧啶联合小RNA-21抑制乳腺癌细胞生长的研究
目的 观察聚酰胺-氨(PAMAM)纳米微粒介导5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合小RNA-21抑制乳腺癌细胞MCF-7生长的效果.方法 透析法制备5-Fu/PAMAM,孵育法同载miR-21抑制剂;透射电镜观察形貌;紫外分光光度计检测载药率和包封率;流式细胞仪检测转染效率及细胞凋亡;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭能力变化.结果 5-Fu/PAMAM形貌规整,包封率为(66.21±4.11)%,载药率为(31.77±0.73)%,转染效率为(60.54±6.97)%;联合治疗组肿瘤细胞生长缓慢,在观察截止期时生存率(55.85±3.71)%;联合治疗组细胞凋亡率(18.32±2.42)%,与对照组比较明显增多(F=58.326,P<0.01);联合治疗组视野内细胞数目仅为(18.96±3.14)个,侵袭能力显著降低(F=16.409,P<0.01).结论 PAMAM可以实现5-Fu和miR-21的同载,并有效抑制乳腺癌细胞的体外生长.
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乳腺癌细胞抗原负载的自体树突状细胞体内诱导特异性T细胞应答
目的 以乳腺癌细胞抗原体外负载自体树突状细胞(DCs)对24例乳腺癌患者进行自身免疫,探讨其体内诱导特异性T细胞免疫应答的能力.方法 新鲜癌组织制备成热休克凋亡细胞抗原负载外周单核细胞来源DC,分别在采血后第1、2、4、6周于患者腹股沟淋巴结富集区进行皮内注射,细胞剂量为4×10+～6×106/次.结果 DC免疫治疗后患者血清抗瘤免疫因子水平明显上升:白细胞介素(IL)-2治疗前为(33.8±7.2)ng/L,治疗后为(68.5±12.4)ng/L;IL-12治疗前为(48.5±10.9)ng/L,治疗后为(118.2±31.5)ng/L;肿瘤坏死因子(TNF)-α治疗前为(18.7±5.3)ng/L,治疗后为(78.3±11.5)ng/L;干扰素(IFN)-γ治疗前为(20.5±6.3)ng/L,治疗后为(92.6±14.9)ng/L,治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.01);DTH试验阳性率为7/10;4/10例IFN-γ+CD8+T细胞频率较治疗前明显增加.随访发现:除1例患者在治疗后3个月内疾病进展(PD),其余患者病情稳定无复发与转移症状(SD).结论 以乳腺癌细胞为抗原负载自体DC免疫患者,能够有效提高患者非特异免疫水平,激发体内特异性T细胞免疫应答,是一种安全、副反应较小、有效的乳腺癌辅助治疗手段.
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间质CD10和Ezrin在乳腺癌中的表达及其意义
目的 观察间质CD10和Ezrin在乳腺导管内癌及浸润性导管癌中的表达,探讨两者在乳腺癌发展中的作用.方法 采用免疫组织化学SP法测定60例导管内癌及60例浸润性导管癌中间质CD10和Ezrin的表达.结果 间质CD10的表达在浸润性导管癌中为阴性25例、弱阳性18例、强阳性17例,导管内癌中分别为36例、18例、6例,其在浸润性导管癌中的表达水平高于在导管内癌中的表达水平(Z=-2.465,P<0.05).Ezrin在导管内癌组的定位为癌细胞腔面15例(P>0.05).结论 间质CD10表达的增加和Ezrin在癌细胞内亚定位的改变可能促进乳腺导管内癌浸润的发生.
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siRNA干扰Ezrin表达对CCL5介导人乳腺癌细胞侵袭能力的影响
目的 探讨Ezrin在趋化因子CCL5促进人乳腺癌细胞MCF-7转移中的作用及其机制.方法 采用小干扰RNA(siRNA)方法下调人乳腺癌细胞中Ezrin的表达,Western blot检测siRNA对Ezrin mRNA和蛋白表达水平下调的变化.干扰后,趋化小室检测MCF-7细胞在不同浓度CCL5作用下的侵袭活性;Western blot检测细胞中总的Ezrin蛋白及磷酸化的Ezrin蛋白表达随CCL5趋化时间的变化.结果 与MCF-7细胞和转染空白质粒pSUPER细胞比较,在CCL5趋化作用下MCF-7细胞Ezrin蛋白的表达无明显增加(P>0.05),干扰后,在50μg/L CCL5作用下,MCF-7细胞表现出侵袭活性强(F=31.62,P<0.01),但仍较对照组明显降低(F=41.96,P<0.01).结论 趋化因子CCL5促进人乳腺癌细胞MCF-7的趋化与侵袭,Ezrin蛋白的激活在此过程中起着一定的作用.
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Nek2和β-连接素在乳腺浸润性导管癌中的表达和意义
目的 探讨中心体相关调节因子Nek2和β-连接素(β-cat)在人乳腺浸润性导管癌(IDC)和IDC伴发的导管内癌(DCIS)中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学方法(IHC)检测186例IDC、伴发的75例DCIS和80例癌旁正常组织及40例乳腺纤维腺瘤中Nek2和β-cat蛋白的表达定位及表达水平,并与其他多个临床病理参数进行比较分析.结果 IDC中不同组织学分级(x2=8.756;P<0.05)、不同肿瘤大小(x2=6.518;P<0.05)间Nek2细胞质表达不同,在其他指标分组间表达差异无统计学意义(P>0.05);Nek2细胞核表达在IDC中有32例(32/186),在伴发的DCIS中有15例(15/75);IDC中不同组织学分级(x2=45.493;P<0.01)、TNM分期(x2=9.510;P<0.01)、淋巴结转移(Z=-2.035;P<0.05)、雌激素受体(ER)表达(Z=-3.004;P<0.01)组间[β-cat细胞膜表达有差异,在其他临床病理参数组间差异无统计学意义(P>0.05);β-cat细胞质表达在不同TNM分期间差异有统计学意义(x2=8.194;P<0.05),在其他参数组间差异无统计学意义(P>0.05);伴发的75例DCIS中Nek2和β-cat表达在各病理学参数组间差异均无统计学意义(P>0.05),Nek2细胞质表达与β-eat细胞质表达正相关(r=0.226,P<0.05).IDC中Nek2细胞质表达与β-cat细胞质表达正相关(r=0.368,P<0.01).此外,在75例伴发DCIS的病例中,β-cat细胞膜表达率在DCIS中比IDC中要高(Z=-3.804,P<0.01).癌旁正常组织和纤维腺瘤中Nek2细胞质和细胞核均为低表达或阴性,β-cat细胞膜均为高表达而细胞质均为低表达.结论 研究中心体调节因子Nek2和β-cat的表达可能成为探讨乳腺浸润性导管癌发生发展机制的途径.
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乳腺癌干细胞放疗反应性和耐受机制的研究
目的 探讨乳腺癌干细胞对放疗的反应性以及耐受机制.方法 从人乳腺癌细胞株MCF-7中分离出乳腺癌干细胞并在体外进行悬浮培养成为细胞微球,用克隆形成实验检测它们对放射治疗的反应性,荧光实时定量聚合酶链反应(Real time PCR)技术检测乳腺癌干细胞和非干细胞在辐射处理前后ATM、p53、Her-2、Ku70/Ku80和Survivin的基因表达.结果 悬浮培养的MCF-7细胞在2 Gy辐射下的平均存活分数(SF2)=0.49,单层培养的MCF-7细胞的SF2=0.27(P<0.01);悬浮培养的MCF-7细胞ATM、p53、Her-2、Ku70/Ku80和Survivin的基因表达量分别是单层培养的MCF-7细胞的(5.29±1.36)倍、(1.37±0.73)倍、(2.10±0.57)倍、(4.69±1.45)倍和(1.80±1.29)倍.结论 乳腺癌干细胞比乳腺癌非干细胞具有更强的辐射抗性,具有更强的DNA修复能力是乳腺癌干细胞重要的抗辐射耐受机制之一.
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乳腺癌细胞凋亡及侵袭转移与诱导型一氧化氮合酶、抑癌基因PTEN及环氧合酶-2表达的关系
目的 探讨乳腺癌组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、抑癌基因PTEN和环氧合酶-2(COX-2)的表达与肿瘤细胞凋亡、侵袭转移的关系.方法 收集乳腺浸润性导管癌组织90例和乳腺良性病变组织30例,分别应用原位杂交法和免疫组织化学法检测组织中iNOS、PTEN和COX-2的mRNA及蛋白表达,用TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡.结果 在90例乳腺癌中iNOS、PTEN、COX-2的mRNA和蛋白表达率分别为66.7%、68.9%、51.1%和70.0%、65.6%、48.9%,凋亡指数为(4.98±0.57)%,与良性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01).iNOS表达与乳腺癌肿瘤大小、分期呈正相关,与凋亡指数负相关(P<0.05);PTEN表达与淋巴结转移、分期呈负相关,与凋亡指数正相关(P<0.05);COX-2表达与肿瘤分级、淋巴结转移、分期呈正相关(P<0.05).PTEN表达与iNOS表达呈负相关(P<0.05),与COX-2表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 iNOS、PTEN、COX-2的异常表达在乳腺癌的凋亡和侵袭转移中具有重要作用,PTEN的转录表达是iNOS促进乳腺癌进展的拮抗因素.
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乳腺癌中过氧化物酶体增殖激活受体γ和β-连环蛋白表达及临床意义
目的 探讨过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)和β-连环蛋白(β-catenin)在乳腺癌组织中的表达、相关性及与乳腺癌临床和预后的关系.方法 采用免疫组织化学法检测70例乳腺癌组织和20例乳腺良性肿瘤中PPARγ和β-catenin的表达,并进行临床分析.结果 乳腺癌PPARγ高表达率为34.3%(24/70),明显低于乳腺良性肿瘤;β-catenin在乳腺癌中异常表达率为67.1%(47/70),PPARγ和β-catenin蛋白表达呈显著负相关(r=-0.398,P<0.05).PPARγ蛋白表达水平与乳腺癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小及Ki-67表达负相关(P<0.05),与雌激素受体(ER)状态及总体生存率正相关(P<0.05);β-catenin蛋白异常表达与乳腺癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移正相关(P<0.05),与总体生存率负相关(P<0.05).结论 PPARγ和β-catenin表达与乳腺癌发展有关,检测PPARγ和β-catenin表达对判断乳腺癌生物学行为和预后具有参考价值.
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RNA干扰沉默JMJD2A基因表达对人乳腺癌细胞MCF-7的影响
目的 观察特异性小干扰RNA(siRNA)技术沉默JMJD2A基因表达对人乳腺癌细胞MCF-7生物学特性的影响.方法 体外化学合成JMJD2A序列特异性双链siRNA,经HiPerFect Transfection Reagent转染人乳腺癌细胞株MCF-7.收集siRNA干扰的细胞,Real time逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白印迹分别检测JMJD2A mRNA和蛋白的抑制水平,并采用WST-8法、流式细胞仪测定细胞增殖能力和细胞周期的变化,Transwell小室测定细胞侵袭、迁移能力的变化.结果 JMJD2A siRNA能有效抑制JMJD2A mRNA和蛋白的表达(P<0.05);经siRNA干扰后的细胞,细胞增殖能力显著减低[1.45±0.05比1.73±0.02(48 h A值),P<0.05];Go/G1期细胞百分比明显增加(53.80±1.80比44.84±1.86,P<0.05).S期细胞百分比明显减少(36.55±1.52比47.06±1.26,P<0.05);细胞侵袭、迁移能力明显降低(P<0.05).结论 采用siRNA干扰JMJD2A mRNA和蛋白表达后,能有效逆转乳腺癌细胞的某些恶性生物学特点,表明JMJD2A与乳腺癌的发生、发展及转移有一定关系.
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内皮祖细胞:肿瘤靶向治疗的潜在载体
目前恶性肿瘤已成为世界上发病率和死亡率高的疾病之一,且发病率仍处于上升趋势.对于恶性肿瘤,特别是晚期肿瘤尚缺乏较为有效的治疗手段.长期以来,外科手术、化疗和放疗一直是肿瘤治疗的主要方式.随着放射技术和相关生物学的发展,放疗逐渐成为肿瘤治疗的基本方法之一,约有60%的患者在病程的不同时期需要接受放射治疗.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
