中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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微小RNA-193a通过原肌球蛋白调控对人肺癌细胞株A549的侵袭和增殖的影响
目的 观察微小RNA(miR)-193a通过原肌球蛋白(TPMF)对人肺癌细胞株A549的侵袭和增殖的影响.方法 Western blot挑选肺癌细胞株中TPMF表达高的细胞株;使用TPMF沉默慢病毒(LV3-TPMF)沉默TPMF基因,使用绿色荧光蛋白(GFP)荧光以及Western blot检测LV3-TPMF沉默效率;Western blot和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-193a和TPMF之间的相关性;Transwell侵袭实验检测TPMF的沉默对肺癌细胞侵袭能力的影响;克隆实验检测TPMF的沉默对肺癌细胞增殖能力的影响;裸鼠生存率检测TPMF的沉默对肿瘤增殖的影响.结果 LV3-TPMF慢病毒可以有效下调TPMF蛋白的表达[(88.29±8.62)％比(17.82±4.91)％,P=0.010];沉默TPMF的表达可以抑制A549细胞的侵袭[(351.23 ±6.92)％比(83.26±3.57)％,P=0.023]和增殖能力[(103.82 ±5.12)％比(22.34±1.91)％,P=0.030];miR-193a和TPMF有直接相关关系,TPMF是miR-193a的直接作用靶点;沉默TPMF的表达可以延长裸鼠的生存率.结论 miR-193a可以通过沉默TPMF蛋白来抑制肺癌细胞的侵袭和增殖能力.
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微小RNA-24-3p通过靶向血小板源性生长因子受体B调控甲状腺乳头状癌细胞的增殖及迁移
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-24-3p对甲状腺乳头状癌(PTC)细胞增殖及迁移的调控作用.方法 应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察miR-24-3p在PTC中的表达.通过5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验、细胞计数试剂盒(CCK-8)、划痕实验和Transwell侵袭实验观察miR-24-3p在PTC中的作用.网站预测靶基因后,通过RT-PCR、Western blot及双荧光素酶报告实验,验证miR-24-3p的靶基因.结果 RT-PCR结果提示miR-24-3p在PTC组织中的表达量(0.28±0.02)明显低于癌旁组织(0.94 ±0.05,P=0.001),而其预测靶基因血小板源性生长因子受体B(PDGFRB)在PTC组织中呈高表达,在癌旁组织中无明显表达.在PTC细胞株TPCl中,转染miR-24-3p模拟物(mimic)的实验组细胞增殖为(EdU:19.3 ±2.5;CCK-8∶0.91 ±0.08)、划痕愈合面积为(23.6±3.5)％、侵袭细胞个数为(13.5±2.0)个,阴性对照组中细胞增殖为(EdU:38.0±2.6,P=0.006;CCK-8∶1.81 ±0.08,P=0.001)、划痕愈合面积为(42.6±2.5)％(P=0.020),侵袭细胞个数为(31.3±2.52)个(P =0.040),差异有统计学意义.Targetscan预测PDGFRB为miR-24-3p的靶基因.转染miR-24-3p mimic后PDGFRB蛋白的表达量(0.56 ±0.05)低于阴性对照组(1.19±0.12,P=0.020),但不影响PDGFRB mRNA的表达(27.34±1.37比27.57±1.62,P=0.070).双荧光素酶报告实验证实PDGFRB为miR-24-3p的直接靶基因.结论 在PTC中,miR-24-3p能通过抑制靶基因PDGFRB的表达,进而抑制PTC细胞的增殖及迁移.
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NVP-BEZ235对裸鼠胃癌移植瘤的作用
目的 观察NVP-BEZ235单用及联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对NCI-N87裸鼠移植瘤的影响.方法 制备人胃癌细胞株NCI-N87荷瘤鼠.分为对照组(每3d灌胃生理盐水0.02 ml/g,每3d腹腔注射生理盐水0.02 ml/g)、5-Fu组(每3d灌胃生理盐水0.02 ml/g,每3d腹腔注射5-Fu0.025 mg/g)、NVP-BEZ235组(每3d灌胃NVP-BEZ235 0.04 mg/g,每3d腹腔注射生理盐水0.02 ml/g)、联合用药组(每3d灌胃NVP-BEZ235 0.04 mg/g,每3d腹腔注射5-Fu 0.025 mg/g).记录肿瘤体积、重量.Western blot法检测凋亡相关蛋白、磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白、侵袭相关蛋白的改变.结果 构建裸鼠NCI-N87胃癌移植瘤模型,肿瘤相对体积比较:联合用药组(6.84±0.98)小于5-Fu组(8.47±1.44),差异有统计学意义(t=2.303,P=0.044).肿瘤重量(g)比较:联合用药组(0.83 ±0.16)小于5-Fu组(1.20±0.32),差异有统计学意义(t=2.524,P=0.038).Akt、磷酸化Akt (p-Akt)、mTOR相对表达量NVP-BEZ235组(0.56±0.05、0.23 ±0.04、0.50±0.03)显著低于对照组(0.96±0.11、0.68±0.03、0.64±0.12;t=9.739、21.823、3.366,P=0.000、0.000、0.006),联合用药组(0.53±0.06、0.20±0.03、0.51±0.07)显著低于5-Fu组(0.93±0.10、0.51±0.05、0.67±0.04;t8.234、12.489、4.628,P=0.000、0.000、0.002),4组之间差异有统计学意义(F=46.457、263.318、6.678,P =0.000、0.000、0.002).凋亡相关蛋白活化型半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、促凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)相对表达量,NVP-BEZ235组(1.28±0.06、1.39±0.08、0.59±0.04)显著高于对照组(0.94 ±0.10、0.99±0.11、1.07±0.07;t=8.660、8.077、17.456,P=0.000、0.000、0.000),联合用药组(1.57±0.09、1.70±0.10、0.37±0.07)显著高于5-Fu组(1.42±0.09、1.50±0.05、0.48±0.07;t =2.737、4.472、2.861,P=0.021、0.003、0.017),4组之间差异有统计学意义(F=71.181、81.393、199.848,P =0.000、0.000、0.000).基质金属蛋白酶(MMP)-9和血管内皮生长因子(VEGF)相对表达量,NVP-BEZ235组(0.44±0.04、0.30±0.05)显著低于对照组(0.59±0.06、0.41±0.03;t5.335、5.550,P=0.000、0.001),联合用药组(0.37±0.04、0.24 ±0.07)显著低于5-Fu组(0.58±0.12、0.36±0.04;t =4.144、3.691,P=0.006、0.005),4组之间差异有统计学意义(F=15.164、20.205,P=0.000、0.000).结论 NVP-BEZ235下调PBK/Akt/mTOR通路的活化水平,促进凋亡,抑制肿瘤的侵袭转移,与5-Fu具有协同作用.
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间充质干细胞对肺纤维化的治疗作用
目的 观察不同类型、不同剂量、同等剂量不同移植次数的间充质干细胞(MSCs)对肺纤维化的疗效.方法 72只雄性SD大鼠以随机数表法平均分为6组:A组于气管内注入0.1ml生理盐水;B、C、D、E、F组于气管内注入5 mg/kg博来霉素0.1ml.建模后1d,A、B组经尾静脉注射生理盐水1.0 ml,C组经尾静脉注射骨髓间充质干细胞(BMSCs)1×106,D组经尾静脉注射脐血间充质干细胞(UCB-MSCs)1×106,E组经尾静脉注射BMSCs 5 × 105,F组经尾静脉注射BMSCs 1×107.建模后8d,E组经尾静脉注射BMSCs 5×105.建模后28 d及42 d处死各组大鼠的一半,分别留取肺组织行病理学检查、测定大鼠肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、羟脯氨酸(HYP)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1 (TIMP-1)水平.结果 B组可见大鼠肺泡结构严重紊乱,大量胶原纤维沉积,B、C、D、E、F、A组肺纤维化评分依次降低[28 d时为(3.00±0.00)、(2.17±0.75)、(1.60±0.89)、(1.33±0.52)、(1.00 ±0.00)、(0.00±0.00)分,42d时为(3.00±0.00)、(2.40±0.55)、(1.75±0.96)、(1.50±0.84)、(-)、(0.00±0.00)分],肺组织TGF-β1、HYP、MMP-2/TIMP-1水平依次下降.肺组织TGF-β1、HYP、MMP-2/TIMP-1分别与肺泡炎程度评分、肺纤维化程度评分呈正相关(P =0.000).结论 MSCs可延缓肺纤维化进展,其机制可能与下调TGF-β1水平、改善MMP/TIMP失衡有关,选择UCB-MSCs或分次移植可提高MSCs对肺纤维化的治疗效果.
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Bafiomycin A1对小鼠急性胰腺炎的作用及其机制
目的 探讨Bafiomycin A1对小鼠急性胰腺炎的疗效及其作用机制.方法 BALB/c小鼠60只随机分为对照组、模型组、低剂量组和高剂量组(n=15).模型组、低剂量组和高剂量组小鼠经腹腔注射雨蛙素50μg/kg,每小时1次,共7次,建立急性胰腺炎模型.低剂量组和高剂量组小鼠经腹腔注射25和75μg/kg Bafiomycin A1,对照组和模型组经腹腔注射等体积生理盐水.4组小鼠分别在治疗后24h处死,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定小鼠血清淀粉酶(AMY)、炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-6,采用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠胰腺病变并评分(Schmidt评分);采用Western blot分析自噬底物p62和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的变化;采用免疫荧光分析胰腺组织p62的变化.结果 与模型组[(4910.98 ±349.43) U/L、(109.43±10.43) pg/L、(329.16±20.91) pg/L、(9.43±3.98)分]比较,低剂量组[(3 109.13±301.44)U/L、(80.18±9.34) pg/L、(215.32±18.43) pg/L、(6.48±3.18)分]和高剂量组[(1 432.33±187.43) U/L、(45.19±8.14) pg/L、(153.22±12.63) pg/L、(3.14±1.02)分]小鼠在治疗后24 h后AMY、TNF-α、IL-6以及Schmidt评分均显著下降,差异有统计学意义(P=0.000).与低剂量组比较,高剂量组小鼠在治疗后24h后AMY、TNF-α、IL-6以及Schmidt评分下降更显著,差异有统计学意义(P =0.000).与模型组(0.15±0.06、0.56±0.06)比较,低剂量组(0.39±0.09、0.75±0.09)和高剂量组(0.61±0.07、0.99±0.08)小鼠胰腺组织中P62和LC3明显堆积,差异有统计学意义(P =0.000).与低剂量组比较,高剂量组小鼠胰腺组织中p62和LC3堆积更加明显,差异有统计学意义(P =0.000).结论 Bafiomycin A1可以显著抑制急性胰腺炎小鼠胰腺组织的自噬水平,对胰腺组织起到一定的保护作用.
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木犀草素对小鼠结肠炎的作用
目的 观察木犀草素对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)的干预作用.方法 3％ DSS溶液诱导小鼠UC模型,40只C57BL/6小鼠随机均分为正常对照组、DSS模型组、木犀草素低、中、高剂量组,进行疾病活动指数评分(DAI);比较各组小鼠结肠长度,苏木素-伊红染色观察结肠组织病理变化;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测核因子相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、苯醌氧化还原酶(NQO1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)mRNA水平;Western blot检测核内Nrf2蛋白含量.结果 木犀草素各剂量组DAI明显低于DSS模型组[(3.17±0.65)、(2.03 ±0.40)、(1.27±0.25)分比(3.90±0.36)分,P=0.046、0.000、0.000];木犀草素各剂量组不同程度抑制结肠缩短[(4.27±0.75)、(5.17±0.35)、(5.97±0.50) cm比(3.67±0.65) cm],中、高剂量组与DSS模型组比较差异有统计学意义(P =0.003、0.001);结肠组织病理结果显示,木犀草素各剂量组病变程度较DSS模型组均减轻;RT-PCR结果显示,木犀草素各剂量组Nrf2、HO-1、NQO1含量较DSS模型组(0.18±0.08、0.16±0.13、0.19±0.10)均升高,差异有统计学意义(P =0.025、0.000、0.000;P=0.002、0.000、0.000;P=0.049、0.038、0.001);TNF-α、IL-6水平较DSS模型组(1.59±0.47、2.02±0.36)均下降,差异有统计学意义(P =0.005、0.002、0.001;P =0.002、0.000、0.000).Western blot结果显示,与DSS模型组比较,木犀草素各剂量组Nrf2核内蛋白含量明显增加,差异有统计学意义(0.13±0.62比0.28±0.50、0.37±0.80、0.51±0.92,P=0.026、0.002、0.000).结论 木犀草素干预能减轻实验性小鼠UC,其机制可能为激活Nrf2信号通路,促进Nrf2入核,进而上调下游靶基因HO-1、NQO1 mRNA水平,抑制促炎因子TNF-α、IL-6 mRNA的表达,增强结肠抗氧化活性,调控氧化/抗氧化平衡.
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鞣花酸对胶质瘤U251细胞增殖与侵袭的影响及其机制
目的 检测鞣花酸(EA)对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭能力的影响并探讨其机制.方法 利用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测EA对U251细胞增殖能力的影响;利用流式细胞术检测EA对U251细胞凋亡和周期的影响.利用划痕实验、Transwell侵袭实验检测EA对U251细胞侵袭的影响.应用Western blot检测EA对U251细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2表达水平的影响.结果 EA能够明显抑制U251细胞的增殖,抑制作用呈时间、浓度依赖性,处理细胞48 h的半数抑制(IC50)浓度为39.24 μg/ml;流式凋亡分析中对照组、40 μg/ml的凋亡率分别为(2.41±1.74)％、(34.07±0.28)％,差异有统计学意义(P=0.001),表明EA能促进U251细胞凋亡.流式周期分析中对照组、40μg/ml组S期细胞百分比分别为(20.45±0.28)％、(47.75±2.02)％,差异有统计学意义(P =0.000),表明EA能引起细胞周期S期阻滞.EA作用48 h后,U251细胞中bax、Caspase-3的表达水平升高,bcl-2的表达水平下降.对照组、EA 5μg/ml和10 μg/ml组24 h的划痕愈合率分别为(53.88±0.30)％、(36.82±0.56)％、(31.33±0.24)％,差异有统计学意义(P=0.000,P=0.000);Transwell侵袭实验中对照组、EA 5 μg/ml和10μg/ml组24h的穿膜细胞数分别为(168.2±7.1)、(66.4±2.5)、(38.6±1.5)个,差异有统计学意义(P=0.001,P=0.000).EA作用48 h后,U251细胞中MMP-9、MMP-2的表达水平下降.结论 EA能够抑制脑胶质瘤细胞U251的增殖和侵袭能力.
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基于胰腺脱细胞基质的胰腺腺泡细胞体外培养
目的 体外评估大鼠天然全胰腺脱细胞3D支架(3D-APB)促进种植细胞增殖和分化的功能.方法 利用改良灌注技术制备大鼠3D-APB,随即将实验分为4组,评估培养后第3、5、7、10天细胞的增殖活性及细胞分化功能.结果 3D-APB组细胞增殖率高于其他3组(P=0.011),而凋亡率低于其余3组(P=0.017),且差异有统计学意义;3D-APB组胰十二指肠同源结构域转录因子(PDX-1)和胰腺外分泌转录因子(PTF-1)蛋白表达均高于其余3组,且差异有统计学意义(PPDX-1 =0.013,PPTF-1=0.012);3D-APB组PDX-1和PTF-1基因表达含量均高于其余3组,且差异有统计学意义(PPDX-1 =0.013,PPTF-1=0.012).结论 3D-APB更有利于促进细胞增殖及分化,更适合应用于再生医学领域.
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流式细胞技术检测脑创伤小鼠脑源性微粒
目的 建立应用流式细胞技术定量检测脑源性微粒(BDMP)含量的方法,观察其可靠性与稳定性,利用该方法探究颅脑创伤模型小鼠脑组织中BDMP的含量变化.方法 流式细胞仪检测3份荧光标准品的浓度,每次间隔2h,连续测定5次,计算日内相对标准偏差(简称日内差);另取3份荧光标准品应用流式细胞仪检测其浓度,每次间隔24h,连续测定5d,计算日间相对标准偏差(简称日间差),依据日内差、日间差评价流式细胞仪的可靠性.提取小鼠脑源性微粒,利用流式细胞技术检测其浓度.结果 结果表明,3份荧光标准品的日内差分别为8.4％、5.4％、3.7％,平均值5.8％;3份荧光标准品的日间差分别为4.7％、5.8％、3.2％,平均值4.6％,均符合《中国药典》对生物样品检测相对标准偏差应小于15.0％的要求.应用流式细胞技术检测结果表明脑创伤小鼠脑组织中BDMP的总数为340 519.67-103 043.94,而健康小鼠脑组织BDMP总数为137 358.17±40 358.66,创伤组明显高于健康组(P=0.024).结论 应用流式细胞仪技术定量检测BDMP是可靠的、稳定的.应用此方法初步证实,与假手术组比较,颅脑创伤可导致脑组织产生更多的BDMP.
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胰岛素样生长因子结合蛋白3通过线粒体途径诱导软骨细胞凋亡
目的 观察外源性胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)对诱导软骨细胞凋亡的效应,探讨其是否通过“细胞核内蛋白Nur77-线粒体易位途径”诱导凋亡.方法 原代培养大鼠软骨细胞并传代2～3次后,转入无血清培养培养环境,添加不同浓度的外源性IGFBP-3以及设置对照组,同时处理24 h后,分别通过普通及荧光显微镜观察IGFBP-3对软骨细胞的形态学影响、细胞计数试剂盒(CCK-8)吸光度法和流式细胞仪检测软骨细胞凋亡比例、激光共聚交显微镜观察IGFBP-3诱导细胞核内受体Nur77.结果 (1)原代培养的单个软骨细胞贴壁后呈不规则多边形,生长至融合时呈“铺路石样”,经过数次传代,细胞由多边形逐渐伸展为成纤维细胞样;(2)普通明场和荧光显微镜下,均可见凋亡小体,表明外源性IGFBP-3软骨细胞能诱导软骨细胞凋亡;(3)CCK-8数值:空白组为1.43±0.03;阴性对照组为1.44±0.05;IGFBP-3组(0.5、1.0μg/ml与2.0μg/ml)分别为1.31±0.03、1.06±0.07、0.82±0.10;空白组与阴性对照组差异无统计学意义(P=0.845),IGFBP-3组内差异有统计学意义(P =0.000、0.000),IGFBP-3组与空白组和阴性对照组分别差异有统计学意义(P=0.000);(4)流式细胞仪结果:空白组为97.57％;阴性对照组为97.63％;IGFBP-3组(0.5 ～2.0μg/ml)分别为90.03％、80.03％和67.33％,统计学分析结果同CCK-8;(5)激光共聚交显微镜观察表明,IGFBP-3处理组中,细胞核内受体Nur77从细胞核易位至线粒体,而空白组和阴性对照组均未见此现象.结论 IGFBP-3可通过诱导Nur77从细胞核易位至线粒体,从而诱导软骨细胞凋亡.
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咖啡鞣酸对单纯疱疹病毒-1诱导单纯疱疹病毒感染过程中Toll样受体9信号通路的干预机制
目的 探讨咖啡鞣酸(CGA)对单纯疱疹病毒-1((HSV-1)感染BV2小胶质细胞诱导单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)细胞模型过程中Toll样受体9(TLR9)信号通路的干预机制.方法 用HSV-1刺激的BV2细胞建立HSE的细胞模型,然后用不同浓度梯度(25、50、100 ng/ml)的CGA进行处理.通过噻唑蓝(MTF)法测定细胞存活率.分别通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot测定TLR9、骨髓分化因子88 (Myd88) mRNA和蛋白的表达.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)以及RT-PCR测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达.结果 CGA治疗后细胞存活率显著改善[模型组为:(43.0±8.7)％;CGA组分别为(57.0±8.4)％、(64.0±7.6)％、(84.0±4.2)％],模型组TLR9、Myd88、TNF-α水平显著高于正常组(蛋白表达分别为:0.84±0.05比0.18±0.13,P=0.000;0.89±0.03比0.76 ±0.11,P=0.002;292.34±8.16比20.76±5.72,P=0.000;mRNA相对表达量分别为:3.01±0.87,P=0.000;5.79±0.72,P=0.000;20.12±10.17,P=0.000),CGA干预后,其水平显著低于模型组(P =0.000).结论 在HSV-1感染BV2小胶质细胞诱导HSE细胞模型中,咖啡鞣酸可以通过抑制TLR9信号通路中TLR9、Myd88分子的表达,从而抑制促炎因子TNF-α的释放,减轻炎性反应.
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瞬时感受器电位M7对胆管癌RBE细胞增殖凋亡的影响
目的 观察瞬时感受器电位M7(TRPM7)对胆管癌RBE细胞增殖凋亡的影响.方法 构建特异性小干扰RNA(siRNA)沉默RBE细胞TRPM7的表达,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测TRPM7沉默效果;噻唑蓝(MTT)实验检测RBE细胞增殖能力;流式细胞术检测RBE细胞周期及凋亡.结果 实验组TRPM7表达较空白对照组及阴性对照组明显降低(F =32.103,P=0.001),且增殖能力明显减弱(72 h各组吸光度值:0.643±0.104、0.617 ±0.044、0.471 ±0.060;F =26.166,P=0.000),G0/G1期细胞所占比例增高[72 h各组G0/G1期百分比:(66.400±1.033)％、(68.217±0.142)％、(70.727±0.115)％;F=67.748,P=0.000],凋亡细胞数增加[72 h各组凋亡细胞数百分比:(10.273±0.548)％、(9.257±1.893)％、(38.210±1.878)％;F=161.540,P=0.000].结论 沉默TRPM7可抑制胆管癌RBE细胞增殖,促进其凋亡.
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甘草甜素修复小鼠坐骨神经损伤的研究
目的 探讨甘草甜素治疗BALB/c小鼠坐骨神经损伤模型的疗效.方法 建立小鼠右侧坐骨神经损伤模型,随机分为对照组及甘草甜素低、中、高剂量组.术后第4、8周测定各组小鼠坐骨神经功能指数(SFI),术后第1天、第1、2、4、8周切取患侧脊髓(L4～L6段),行Westem blot分析和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR),检测生长相关蛋白43(GAP-43)和p75神经营养因子受体(p75 NTR)蛋白及mRNA表达水平.结果 各组术后SFI值均逐渐恢复,治疗组SFI显著优于对照组:高、中、低、对照组SFI分别为:术后4周:61.300±1.319、63.180±1.030、68.680±0.653、72.108±0.823;术后8周:41.440±0.373、46.210 ±0.747、50.830±0.866、61.350±1.123.高、中、低剂量组与对照组比较,术后4周:t=16.560、16.504、8.485,术后8周:t=37.581、25.088、16.577,均P=0.000.各组坐骨神经损伤同侧的L4～L6脊髓节段中,术后第1、2、4、8周各剂量组GAP-43蛋白及mRNA表达均显著高于对照组.高、中、低剂量组GAP-43 mRNA表达量与对照组比较,术后1周:t=114.858、110.170、12.810;术后2周:t=122.115、63.360、30.745;术后4周:t=28.027、20.757、15.967;术后8周:t=33.467、27.828、12.513;均P=0.000.术后各时间点治疗组p75NTR蛋白及mRNA表达均显著低于对照组,高、中、低剂量组p75NTR mRNA表达量与对照组比较,术后1周:t =55.937、33.212、12.364;术后2周:t=41.779、29.553、14.953;术后4周:t=37.000、22.638、18.198;术后8周:t=42.345、26.800、20.250;均P=0.000.结论 甘草甜素能促进小鼠坐骨神经损伤的神经再生,促进小鼠运动功能恢复,其机制可能与增加相应神经脊髓节段GAP-43表达及降低p75 NTR表达有关.
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膜联蛋白A2调控人脑胶质瘤细胞侵袭迁移的研究
目的 观察膜联蛋白A2(ANXA2)对人脑胶质瘤细胞侵袭迁移的调控作用.方法 将ANXA2小干扰RNA(siRNA)和siRNA control转染到脑胶质瘤细胞U87中记为ANXA2siRNA组和siRNA-NC组,同时设置Control组,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中ANXA2mRNA,Western blot检测细胞中ANXA2蛋白表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达.结果 siRNA-NC组细胞中ANXA2 mRNA(0.85±0.08)和蛋白(0.72 ±0.09)水平与Control组(mRNA和蛋白水平分别为0.87±0.05、0.75±0.07)比较差异无统计学意义(P值分别为0.258与0.751).siRNA-NC组细胞存活率[(98.87±11.74)％,P=0.695]、侵袭数目[(40.65 ±4.85)个,P=0.410]、迁移数目[(66.87±7.64)个,P=0.278]及E-cadherin(0.70±0.09,P=0.320)、MMP-2蛋白(0.29±0.02,P=0.196)水平与Control组比较差异无统计学意义.ANXA2siRNA组细胞存活率[(52.98±5.61)％,P=0.006]、侵袭数目[(23.22 ±2.25)个,P=0.002]、迁移数目[(41.68±3.87)个,P=0.002]、MMP-2蛋白(0.11 ±0.03,P=0.001)水平与Control组比较明显降低,E-cadherin蛋白(1.14±0.11,P=0.002)水平与Control组(0.72±0.06)比较明显升高.结论 干扰ANXA2表达能够抑制脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移,降低MMP-2表达水平,促进E-cadherin表达.
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原钙黏蛋白10基因在胃癌组织的表达及其临床意义
目的 观察原钙黏蛋白10(PCDH10)在胃癌组织中的表达并探讨其临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测202例胃癌患者癌组织及其相应的癌旁组织中PCDH10的表达,分析其与患者临床病理特征和预后的关系.结果 胃癌组织中PCDH10蛋白的低表达率为63.4％(128/202),显著高于癌旁组织(P =0.000).胃癌组织中PCDH10低表达与患者幽门螺杆菌感染状态(P =0.000)、肿瘤大小(P=0.000)、淋巴管侵犯(P=0.001)、浸润深度(P=0.000)、淋巴结转移(P =0.000)、远处转移(P =0.001)及TNM分期(P=0.000)显著相关,而与患者性别(P =0.757)、肿瘤诊断时年龄(P=0.312)、肿瘤部位(P=0.512)、肿瘤生长模式(P=0.366)、肿瘤分化程度(P=0.091)和静脉侵犯(P=0.056)无明显相关.Kaplan-Meier生存分析结果显示,PCDH10低表达的胃癌患者与PCDH10正常/高表达患者比较,其总生存期显著缩短,两者比较差异有统计学意义(P =0.000).但Cox多因素回归分析结果表明PCDH10低表达不是影响胃癌患者独立预后因素.结论 PCDH10在胃癌组织中表达下调,与肿瘤发生进展及患者预后显著相关.
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Krüppel样因子4基因高表达增强食管鳞癌细胞株对顺铂敏感性
目的 观察食管鳞癌细胞株中Krüppel样因子4(KLF4)启动子区甲基化水平对其表达及对顺铂耐药性的影响.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测7种食管鳞癌细胞株中KLF4甲基化及表达水平,筛选KLF4高甲基化及低甲基化水平细胞株(TE1及KYSE140).不同顺铂浓度下,使用噻唑蓝(MTT)法检测不同细胞株的增殖活性,使用流式细胞仪检测不同细胞株细胞凋亡及细胞周期.结果 细胞株CAES17、EC109、KYSE140、KYSE70和KYSE30中KLF4相对高表达,其启动子区呈低甲基化,细胞株TE1和KYSE510中KLF4相对低表达,其启动子区高甲基化.使用5-Aza-CdR去除其甲基化可恢复TE1细胞株KLF4表达.MTT法示,在顺铂终质量浓度为0.5、1.0、5.0、10.0 mg/L时,使用5-Aza-CdR处理TE1后细胞抑制率均增加(t =5.053,P=0.007;t=3.792,P=0.019;t=5.119,P=0.007;t=7.213,P=0.002),KYSE140细胞抑制率高于TE1(t=6.156,P=0.004;t=5.463,P=0.005;t=10.211,P=0.001;t=13.278,P=0.000).流式细胞仪检测示,顺铂终质量浓度为1.0 mg/L时,使用5-Aza-CdR处理TE1前后差异无统计学意义[(6.2±0.9)％比(7.0±0.7)％,P=0.290],TE1细胞株凋亡率低于KYSE140细胞株凋亡率[(6.2±0.9)％比(9.1±1.5)％,P=0.045].顺铂终质量浓度5.0 mg/L及10.0 mg/L时,使用5-Aza-CdR处理TE1后细胞凋亡率均增加(t=7.838,P=0.001;t=5.196,P=0.007).同时,顺铂终质量浓度5.0 mg/L及10.0 mg/L时,KYSE140细胞株的死亡率高于TE1细胞株(t=4.260,P=0.013;t=10.535,P=0.000).顺铂终质量浓度0.1 mg/L和0.5 mg/L时,经5-Aza-CdR处理后TE1细胞株和KYSE140细胞株均与TE1细胞株在S期细胞比例上差异有统计学意义.结论 食管鳞癌细胞株中KLF4启动子区甲基化抑制表达,顺铂作用下,KLF4高表达可增加食管鳞癌细胞株对顺铂敏感性,使细胞周期阻滞在S期.
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乳腺癌特异基因1修饰树突状细胞杀伤效应及安全评价
目的 探讨乳腺癌特异基因1(Bcsg1)修饰树突状细胞(DC)疫苗诱导细胞毒T淋巴细胞(CTL)对乳腺癌细胞的免疫杀伤效应及安全性.方法 将表达Bcsg1基因重组腺相关病毒(rAAV)转染外周血单个核细胞来源DC,诱导针对Bcsg1(+)乳腺癌细胞SKBR-3的靶向性CTL.流式细胞术检测成熟DC细胞表面分子及CTL活化标志;免疫荧光法检测活化后CTL分泌γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-4水平;细胞毒实验检测不同来源CTL对SKBR-3体外杀伤效应;对CTL细胞及培养液中残留DC及残留rAAV基因进行检测.结果 rAAV/Bcsg1组DC细胞高表达CD80(90.34±1.57)、CD83(85.14±1.54)、CD86(82.36±1.38)、人类白细胞抗原DR基因(HLA-DR)(78.16±1.13),与n-rAAV/Bcsg1组比较差异有统计学意义(P=0.000),rAAV/Bcsg1组DC诱导CTL活化程度明显上升;转染组CTL分泌IFN-γ[(2 616.53±163.81) pg/ml]、IL-4[(437.36±46.33) pg/ml]水平较对照组显著升高(P=0.000);在效靶比为40∶1时,对靶细胞杀伤率为(85.40±8.48)％,对非靶细胞杀伤率仅为(24.50±4.15)％;CTL制剂残留DC极少且CTL细胞及培养液未检出残留rAAV基因.结论 rAAV/Bcsg1转染DC能诱导出针对Bcsg1抗原的高效靶向杀伤性CTL,且无rAAV基因残留.
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姜黄素对结肠癌细胞耐药性的影响及机制
目的 探讨姜黄素(Cur)对人结肠癌细胞化疗耐药性的影响和机制.方法 采用药物持续接触浓度递增法建立对伊立替康(CPT-1 1)耐药的人结肠癌细胞株LoVo/CPT-11,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测其生长抑制率并计算耐药指数;Western blot检测耐药细胞的肿瘤干细胞(CSC)标志物CD44、CD133的表达变化.不同浓度的Cur(5、10、20μmol/L)分别联合CPT-11作用于耐药细胞,检测Cur对其耐药性的影响;另耐药细胞设对照组、Cur单药组、CPT-11单药组、混合组,检测各组中CSC标志物变化和CD133+细胞的比例.结果 LoVo/CPT-11细胞的耐药指数为6.21;与LoVo细胞比较,其CD44、CD133在蛋白表达水平均显著上调(1.63±0.42比0.59±0.07、0.75 ±0.13比0.24±0.02,P=0.023、0.019).5、10、20 μmol/L浓度的Cur分别联合CPT-11作用于LoVo/CPT-11细胞,测得CPT-11的半数抑制浓度(IC50)为(144.48±3.22)、(100.72±2.08)、(146.87±2.73) μmol/L,与对照组[(268.72±2.43),μmol/L]比较显著下调(P=0.031、0.020、0.036);另外,比较于CPT-11单药组,Cur单药组、混合组中CD44、CD133在蛋白表达水平均显著下调(2.11±0.45、1.79 ±0.55比3.04±0.64,P=0.041、0.034;1.34 ±0.13、0.52±0.04比1.60±0.15,P=0.044、0.020),并且CD133+细胞比例分别为(2.91±0.30)％、(1.12±0.15)％,均显著低于CPT-11单药组[(3.53±0.37)％,P=0.028、0.016].结论 CSC参与人结肠癌细胞化疗耐药性的产生,Cur可通过抑制CSC特性降低人结肠癌细胞的耐药性.
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转化生长因子-β3/胰岛素样生长因子-1联合基因转染诱导间充质干细胞成软骨细胞分化
目的 重组慢病毒介导转化生长因子(TGF)-β3/胰岛素样生长因子-1(HIGF-1)联合基因转染兔骨髓间充质干细胞,诱导其软骨细胞分化,比较与TGF-β3单基因转染诱导其软骨细胞分化的效率.方法 全骨髓贴壁法分离、培养骨髓间充质干细胞,流式细胞术检测细胞表面抗原,培养后通过重组慢病毒分别转染阴性对照(N组)、TGF-β3单基因(T组)、TGF-β3/HIGF-1联合基因(TB组),培养14 d后,荧光显微镜下观察各组细胞形态,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot分别检测性别决定区Y框蛋白9(SOX9)、蛋白多糖、Ⅱ型胶原在基因水平与蛋白水平的表达量.结果 流式细胞术检测造血干细胞标志物(CD34,2.07％)、白细胞表面抗原[人类白细胞抗原DR基因(HLA-DR),1.73％]均为阴性,透明质酸受体(CD44,82.79％)为阳性,荧光显微镜观察诱导后细胞形态多为多角形、方形或者类圆盘状;RT-PCR结果显示:T组SOX9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原基因表达量为0.645±0.024、0.587±0.018、0.616±0.019,显著高于C组(0.192 ±0.012、0.241±0.021、0.273 ±0.015),N组(0.211±0.014、0.224±0.016、0.232±0.022) (P =0.000);TB组基因表达量为0.832±0.013、0.746±0.024、0.951 ±0.026,显著高于T组(P=0.000).T组SOX9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原蛋白表达量为1.36±0.20、0.39±0.05、0.68±0.09,显著高于C组(0.58±0.11、0.12±0.08、0.23 ±0.15),N组(0.62±0.14、0.13 ±0.06、0.25±0.02,P=0.000);TB组蛋白表达量为1.83±0.13、1.35±0.24、1.51 ±0.26,显著高于T组(P=0.000).结论 TGF-β3/HIGF-1联合基因转染骨髓间充质于细胞能诱导其成软骨细胞分化,且联合基因转染效率高于TGF-β3单基因转染.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对脑损伤小鼠认知和氧化应激的影响
目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对脑外伤(TBI)小鼠认知功能和氧化应激的影响.方法 采用改良式自由落体脑外伤模型,将实验小鼠随机分为Vehicle组(Veh组)和ECGC治疗组.术后3d,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量,二氢乙锭(HEt)染色检测损伤部位活性氧(ROS)的积累,原位缺口末端标记法(TUNEL)试剂盒检测损伤部位凋亡细胞数量;术后28 d,Morris水迷宫实验检测小鼠空间学习和记忆能力,新物体识别实验评估小鼠非空间记忆和认知能力.结果 (1)Morris水迷宫结果显示TBI后第24 ～ 27天,EGCG治疗组逃避潜伏时间24 d (49.862±7.449)s、25 d(43.446 ±8.207)s、26 d(34.381 ±7.668)s和27 d(23.742 ±6.527)s,对比Veh组24 d(55.120±6.236)s、25 d(50.834±7.993)s、26 d(44.832±8.971)s和27 d(38.948 ±8.127)s更短,差异有统计学意义(n=6,F=9.890,P=0.010).第28天EGCG组小鼠穿越平台次数[(4.333±0.803)次]多于Veh组[(1.667±0.558)次],差异有统计学意义(t=2.728,P=0.021).EGCG组小鼠在目标象限停留时间[(41.305 ±3.643)s]长于Veh组[(23.198 ±3.516)s],差异有统计学意义(t=3.577,P=0.005).(2)新物体识别实验结果表明,和Veh组[(49.209±4.008)％]比较,EGCG的治疗组小鼠辨别指数明显增加[(65.284±4.572)％],差异有统计学意义(t =2.644,P=0.025).(3) EGCG治疗组的SOD(180.442 ±11.817) U/ml、MDA(587.518 ±59.306) nmol/L和GSH(71.071±5.763) ng/L水平与Veh组SOD(120.840±9.095) U/ml、MDA(966.613 ±70.115) nmol/L和GSH(49.731 ±5.218) ng/L比较,SOD和GSH表达量明显上调,MDA含量明显下降,差异有统计学意义(SOD:t =3.997,P =0.004;MDA:t =4.128,P=0.003;GSH:t =2.745,P=0.025).(4) EGCG治疗组ROS的表达量(1 265.542±100.780)与Veh组(1 631.329±126.300)比较明显下调,差异有统计学意义(t =2.264,P=0.047).(5)EGCG治疗组凋亡细胞数量[(21.667±3.602)个]明显少于Veh组[(39.167±4.078)个],差异有统计学意义(t=3.216,P=0.009).结论 小鼠脑外伤后,EGCG对小鼠的认知功能障碍和氧化应激损伤有明显改善作用.
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微小RNA-373靶定E2F转录因子5降低胶质瘤细胞恶性表型
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-373对胶质瘤细胞恶性表型的影响,探讨miR-373调控胶质瘤发生发展的分子机制.方法 利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测胶质瘤组织及正常脑组织中miR-373的表达水平;利用噻唑蓝(MTT)比色法及Transwell侵袭实验检测miR-373对胶质瘤细胞U251活性及侵袭能力的影响;通过生物信息学方法,筛选miR-373的靶基因,利用荧光报告载体实验结合Real-time PCR和Western blot验证miR-373对靶基因的直接调控作用.结果 将正常脑组织和人正常星形细胞株中miR-373的表达水平标化为1,胶质瘤组织和U251、U87、A172、U118细胞中miR-373的相对表达水平分别为0.36±0.14、0.21±0.04、0.32±0.05、0.35±0.04、0.56±0.12,差异有统计学意义(t=-7.862,P=0.006;t=-9.211,P=0.004;t=-8.090,P=0.005;t=-7.953,P=0.006;t=-6.254,P=0.007).miR-373转染U251细胞48 h后,细胞活性和侵袭能力与对照组比较显著降低[活性:0.25±0.03比0.63±0.08;穿膜细胞数:(41.5±5.7)个比(118.5±9.8)个;t=-12.561,P=0.002;t=-10.792,P=0.003].过表达miR-373后,含有E2F转录因子5的3'端非编码区域(E2F5 3'UTR)的荧光报告载体的细胞组荧光值为1.49±0.21,对照组的荧光值为2.23±0.32,差异有统计学意义(t=-9.804,P=0.004).结论 miR-373通过靶向抑制E2F5表达降低胶质瘤细胞的恶性生物学活性.
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骨髓间充质干细胞过表达碱性成纤维细胞生长因子对骨质疏松性骨折大鼠的治疗作用
目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSC)过表达碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对骨质疏松性骨折大鼠的治疗效果.方法 选取80只3个月龄雌性SD大鼠,分为对照组、模型组、BMSC组和BMSC+ bFGF组,模型组、BMSC组和BMSC+ bFGF组大鼠采用切除卵巢去势法建立骨质疏松骨折模型,模型组、BMSC组和BMSC+ bFGF组大鼠全部制作胫骨骨折模型.BMSC组和BMSC+bFGF组分别于术后第1、14、21天移植BMSC和过表达bFGF的BMSC,对照组和模型组大鼠给予等体积的生理盐水注射.采用Western blot分析BMSC中bFGF蛋白表达水平;采用骨密度仪测定各组大鼠骨密度;采用X线评分评价骨折愈合程度;采用三点弯曲实验分析胫骨生物力学参数变化;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关基因2(Runx2)和骨形态发生蛋白-2(BMP-2) mRNA水平.结果 Western blot结果显示BMSC+ bFGF组细胞bFGF表达水平明显上调.与模型组大鼠X线评分和骨密度(2.02 ±0.37、0.051 ±0.002)比较,BMSC组(3.12±0.46、0.800±0.004)和BMSC+ bFGF组(4.43±0.51、0.128±0.006)大鼠X线评分和骨密度明显增加(P=0.032、0.013;P =0.000、0.000),生物学参数(大载荷、弹性载荷、刚度和大挠度)显著改善(P=0.000).与BMSC组比较,BMSC+ bFGF组大鼠X线评分和骨密度显著增加(P=0.010、0.010),生物学参数(大载荷、弹性载荷、刚度和大挠度)显著改善(P =0.002、0.000;P =0.000、0.000).与模型组ALP、Runx2和BMP-2 mRNA水平(1.41 ±0.19、1.31 ±0.20、1.43±0.24)比较,BMSC组(2.16±0.33、2.48±0.31、3.17±0.33)和BMSC+ bFGF组(4.48±0.48、5.13±0.41、4.89±0.49)大鼠骨痂组织ALP、Runx2和BMP-2 mRNA水平明显增加(P=0.000).与BMSC组比较,BMSC+ bFGF组大鼠骨痂组织ALP、Runx2和BMP-2 mRNA水平增加更为显著(P =0.000).结论 BMSC中过表达bFGF可提高与骨形成相关蛋白的表达,增加骨密度,促进骨质疏松性骨折的愈合,增强骨折生物学应力.
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转化生长因子-β1与其受体阻断剂作用于人胆管癌细胞株后对转化生长因子-Smad轴的影响
目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)相关信号通路在胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用.方法 对胆管癌细胞株RBE细胞单独或联合应用TGF-β1及其受体阻断剂(TGFβRI)SB525334/SB431542,根据单独或联合用药共分为6个组.(1)观察细胞形态学改变.(2)Trasswell法检测RBE细胞迁移及侵袭性变化.(3)Western blot检测Smad4、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及Slug的蛋白表达变化.计量资料采用均数±标准差(x-±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA).结果 (1)TGF-β1引发RBE细胞的形态由上皮样向间质样转变.(2) Transwell法迁移性改变:空白对照组为(85.66±7.76)个,TGF-β1组为(118.17±12.69)个,SB431542组为(53.00±5.51)个、TGF-β1+ SB431542组为(86.33±9.67)个,SB525334组为(52.50±7.45)个,TGF-β1+ SB525334组为(81.00±7.62)个.TGF-β1组比空白对照组,迁移细胞数目明显增多(P=0.000),SB525334组、SB431542组比空白对照组,迁移细胞数目明显减少(P值均为0.000).Transwell法检测侵袭性改变:空白对照组为(73.83±9.47)个,TGF-β1组为(127.83±7.33)个,SB431542组为(59.83±7.28)个、TGF-β1+ SB431542组为(79.67±7.31)个,SB525334为(55.67±7.26)个,TGF-β1+ SB525334组为(76.00±8.51)个.TGF-β1组比空白对照组,侵袭细胞数目明显增多(P=0.000),SB525334组、SB431542组比空白对照组,侵袭细胞数目明显减少(P值分别为0.000、0.003).(3)Western blot实验中TGF-β1组中Smad4蛋白的表达水平较空白对照组明显增高,差异有统计学意义(P =0.000).E-cadherin、N-cadherin、Slug蛋白的表达水平在TGF-β1组与空白对照组中比较差异均有统计学意义(其P值分别为0.044、0.001、0.001);上述指标在SB431542组与空白对照组中比较差异均有统计学意义(其P值分别为0.001、0.000、0.000),其在SB525334组与空白对照组中比较差异均有统计学意义(其P值分别为0.001、0.000、0.000).结论 (1)TGF-β1可诱导RBE细胞的形态由上皮样向间质样转变.(2)TGF-β1可以促进REB细胞的迁移和侵袭作用,而TGFβRI可以阻断REB细胞的迁移和侵袭作用.(3)TGF-β1及TGFβRI能够影响N-cadherin、E-cadherin及Slug蛋白表达的变化:TGF-β1可促进N-cadherin、Slug蛋白表达的增加,促进E-cadherin蛋白表达的降低;TGFβRI可降低N-cadherin、Slug蛋白的表达,促进E-cadherin蛋白表达.
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糖类抗原19-9阳性和癌胚抗原阳性胃癌患者的临床病理特征研究
本研究旨在探讨糖类抗原19-9(CA19-9)阳性和癌胚抗原(CEA)阳性胃癌患者的临床病理特征及两者联合分析时与胃癌患者临床病理特征间的关系.一、资料与方法选取手术病理确诊的胃癌患者390例,术前病史及辅助检查排除消化道其他恶性肿瘤存在,所有患者未进行术前化疗.分别比较术前血清CA19-9及CEA不同水平的两组胃癌患者的临床病理特征.
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肺动脉注射尼卡地平预处理对体外循环诱发犬缺血再灌注损伤肺组织形态、凋亡及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白表达的影响
体外循环(CPB)技术诱发的肺缺血再灌注损伤及其引起的肺功能障碍是患者术后死亡常见原因之一.研究结果显示尼卡地平可减轻CPB后的肺功能障碍[1],但其对肺组织形态结构、凋亡及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)表达的影响尚无进一步研究.本课题拟研究肺动脉注射尼卡地平预处理对CPB诱发的犬肺缺血再灌注损伤时犬肺组织形态结构、凋亡及Caspase-3、bcl-2、bax表达的影响.
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核糖核苷还原酶M1在膀胱癌中的表达及其与吉西他滨药物疗效的关系
我们采用液相芯片技术检测膀胱癌组织中核糖核苷还原酶M1(RRM1)的表达,分析RRM1表达水平与吉西他滨药物的敏感性,现报道如下.一、资料与方法1.一般资料:分析唐山市人民医院泌尿外科自2013年1月至2016年9月的40例行经尿道膀胱肿瘤电切术的膀胱癌患者.患者年龄31～78岁,中位年龄为(57.6±8.9)岁;男23例,女17例;肿瘤大直径大小0.8～3.5cm,直径≥2 cm者16例,直径＜2 cm者24例;肿瘤单发为23例,肿瘤多发为17例.术后病理检查结果证实均为非肌层浸润性尿路上皮癌,其中高级别尿路上皮癌18例,低级别尿路上皮癌22例.术后均行吉西他滨药物膀胱灌注1年,随访1年间膀胱癌复发6例.
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全膝关节置换术后留置硬膜外镇痛泵与静脉自控镇痛泵镇痛效果比较
全膝关节置换术现已成为终末期膝关节骨关节炎的主要治疗方法.然而,膝关节置换术后约60％的患者会出现中重度的疼痛,如未能在围手术期进行有效遏制,会发展为慢性疼痛.疼痛刺激可诱发多种心血管并发症,延长患者住院时间,同时增加术后深静脉血栓的形成和肺部感染的风险[1].术后镇痛得当可抑制或减轻疼痛产生的应激反应,减少并发症的发生.自控镇痛技术(PCA)是近年来开始在临床上推广的镇痛方法,可以明显缓解患者围手术期的疼痛.临床上主要使用硬膜外自控镇痛(PCEA)或静脉自控镇痛(PCIA)两种方法.我们对膝关节置换术后应用PCEA和PCIA的镇痛效果进行比较,同时比较两种镇痛方式的并发症发生情况.
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人环磷酸腺苷依赖型蛋白激酶B抑制剂表达对胰腺癌细胞增殖与侵袭的影响
人环磷酸腺苷(cAMP)依赖型蛋白激酶B抑制剂(PKIB)是一种新的耐热蛋白,研究结果显示PKIB基因与乳腺癌、前列腺癌及肺癌等众多肿瘤的发展密切相关[1].本研究旨在观察PKIB表达程度的改变对胰腺癌细胞的增殖和侵袭影响.
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微小RNA通过抑制真核翻译起始因子5A2对胃癌MGC-803细胞生物学行为的作用机制
本研究通过构建微小RNA(miRNA,miR)-171的真核表达载体,探讨其在调控胃癌MGC-803细胞增殖中的作用,并分析miR-171对真核翻译起始因子5A2 (EIF5A2)的调控作用[1].一、材料与方法将传代的胃癌MGC-803细胞分为两组:A组:PEF miR-171和PSV2neo共转染组;B组:PEE和PSV2neo共转染组,取正常胃黏膜上皮细胞GES-1作为C组.A组为实验组,B、C两组分别为阳性对照组和阴性对照组.采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-171在两组胃癌MGC-803细胞中的表达,采用流式细胞法检测过表达的miR-171对胃癌MGC-803细胞凋亡的影响,利用噻唑蓝(MTT)法及碱性磷酸酶(ALP)法检测两组细胞的增殖情况,Western blot检测两组细胞中EIF5A2、细胞周期蛋白(Cyclin) D1和Cyclin D3的表达水平.
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基于癌症基因信息数据库分析载脂蛋白F在肿瘤中生物学意义
近年来,越来越多研究证明脂代谢在肿瘤的发生发展中起重要作用[1].载脂蛋白F(ApoF)属于载脂蛋白家族,参与了胆固醇与三酰甘油的转运[2].我们通过癌症基因信息数据库(TCGA)分析ApoF在肿瘤中的生物功能,探讨ApoF在肿瘤中的作用及其机制.
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改良回肠转位术对2型糖尿病大鼠胰高血糖素样肽-1和肠抑胃肽的影响
目前2型糖尿病(T2DM)的研究主要集中于肠-胰岛素轴.我们利用改良回肠转位术(MIT)探讨其机制.一、材料与方法1.动物模型:(1)实验动物:20只8～10周龄雄性G-K糖尿病大鼠(动物检疫合格证号:Y20150252、伦理材料批准号:2015-S-02-01),体重(300±20)g.按随机数字表法分为改良回肠转位术组(MIT组)和回肠转位术组(IT组),每组10只.(2)手术操作:术前禁食不禁水12h,腹腔注射1％戊巴比妥纳(3.5～4.5ml/kg),IT组按IT术方式手术[1],MIT组改变IT术手术转位回肠长度,分别于距回盲瓣5 cm和30 cm处截断回肠25 cm,以8-0 PDS线单层间断吻合近、远断端.取距Treitz韧带5 cm处截断空肠,并将转位肠段顺肠蠕动方向间置入空肠上段,并行端端吻合.
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脑室出血单双管脑室外引流并发症的比较
脑室出血是神经外科常见急重症,致残率及死亡率高,总体死亡率为42.6％ ～83.3％[1].目前针对脑室出血简单且行之有效的外科治疗方法是脑室外引流术.本研究旨在探讨单管、双管脑室外引流术在治疗脑室出血中并发症的差异.
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含sushi重复蛋白X连锁2对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响
含sushi重复蛋白X连锁2(SRPX2)是一种新发现的硫酸软骨素蛋白多糖.研究结果显示,其可参与血管生成过程[1].我们采用高表达SRPX2的质粒转染人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),观察SRPX2对HUVECs体外增殖、迁移及管腔形成能力的变化.
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七氟烷后处理增加脑缺血再灌注损伤后磷酸化蛋白激酶B表达
七氟烷是一种新型的吸入全身麻醉药,已在临床广泛应用.以往的研究结果已经证明七氟烷后处理具有神经保护作用,但其具体的机制尚未清楚,可能与磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)途径有关[1].我们利用七氟烷后处理,观察在中动脉闭塞(MCAO)模型中不同再灌注时间对磷酸化Akt(p-Akt)的影响.
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体外循环心脏手术后出血患者血浆纤维蛋白原水平的变化
目的 探讨围手术期纤维蛋白原(Fb)水平对体外循环(CPB)心脏手术后出血的预测价值.方法 将623例行成人CPB心脏手术患者分成2组,术后24 h胸腔引流量超过90百分位分布的患者定义为大量出血组,大量出血组及对照组分别为63例和560例.比较两组T0时间点(术前1d)和T1时间点(术后进入重症监护即刻)血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、Fb等凝血指标,分析预测术后大出血的相关危险因素.结果 T1时间点对照组和大量出血组的Fb水平差异有统计学意义(t=3.763,P=0.001);T1时间点血浆Fb水平与24 h胸腔引流量显著负相关(r=-0.114,P=0.000).多因素分析显示,T1时间点Fb水平[P=0.001,比值比(OR)=0.590,95％可信区间(CI):0.463～0.771]是预测大量出血的佳的围手术期实验室指标,术前Fb水平不是预测指标.其他常用的预测指标:体重指数(P=0.045,OR=0.814,95％ CI:0.991 ～1.010)、口服阿司匹林史(P=0.012,OR=1.248,95％ CI:1.050 ～1.484)、心脏手术史(P=0.027,OR=2.771,95％CI:1.469 ～3.142)、CPB时间(P=0.002,OR=1.614,95％ CI:1.196 ～2.179),T1时间点的Hb水平(P=0.014,OR=0.857,95％ CI:0.758～0.969)、PT(P=0.005,OR=1.212,95％ CI:1.124 ～1.323).受试者工作特征(ROC)曲线分析T1时间点血浆Fb水平预测术后出血的临界值为2.2 g/L.结论 术后入住重症监护室(ICU)时血浆Fb水平能够较准确预测CPB心脏手术后出血风险,低于该临界值2.2 g/L可能需要注射Fb浓聚物以减少术后失血.
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脑胶质瘤组织中趋化因子7的表达及其与病理、磁共振成像瘤周水肿的关系
目的 观察胶质瘤中趋化因子7(CCL7)的表达,探讨CCL7的表达与胶质瘤病理级别及磁共振成像(MRI)瘤周水肿的关系.方法 通过Western blot检测正常脑组织、低级别胶质瘤组及高级别胶质瘤组肿瘤组织中CCL7的表达,分析CCL7的表达强度与病理级别的关系;对比临床病理报告和影像学MRI瘤周水肿程度,分析胶质瘤病理分级和MRI瘤周水肿程度的关系;通过Spearman等级相关分析验证CCL7在胶质瘤组织中的表达强度与MRI瘤周水肿程度之间的相关性.结果 通过Western blot实验发现,胶质瘤组织中CCL7高表达,且高级别组(“-”者0例,“+”者4例,“(++)”者9例,“(+++)”者16例)CCL7的表达强度明显高于低级别组(“-”者3例,“+”者13例,“(++)”者6例,“(+++)”者0例)(P=0.027);通过查阅临床病理报告及影像学资料研究,可见高级别组(0级者0例,1级者4例,2级者9例,3级者16例)比低级别组(0级者5例,1级者13例,2级者3例,3级者1例)MRI瘤周水肿程度更为明显(P=0.019);通过Spearman等级相关分析,CCL7的表达强度与胶质瘤MRI瘤周水肿程度呈正相关(r=0.940,P=0.031).结论 胶质瘤中CCL7的表达及MRI瘤周水肿程度与其病理级别密切相关,胶质瘤恶性程度越高,CCL7的表达越强,MRI瘤周水肿越明显;且CCL7的表达强度与MRI瘤周水肿程度呈正相关.
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长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因3在胃癌组织的表达及临床意义
目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因3(SNHG3)在胃癌组织的表达及其临床意义.方法 利用癌症基因图集(TCGA)数据分析SNHG3在35例癌旁组织、56例Ⅰ期胃癌组织、123例Ⅱ期胃癌组织、169例Ⅲ期胃癌组织和41例Ⅳ期胃癌组织中的表达水平.利用Kaplan-Meier生存分析探讨SNHG3表达水平与胃癌患者的生存时间之间的关系.应用生物信息学手段分析SNHG3共表达基因影响的生物进程和信号通路.结果 lncRNA SNHG3在Ⅰ期胃癌(124.40±10.51,P=0.034)、Ⅱ期胃癌(128.10±9.88,P=0.003)、Ⅲ期胃癌(136.40±7.55,P=0.000)和Ⅳ期胃癌(125.10±13.34,P=0.004)中的表达水平均显著高于癌旁组织(67.16±8.19),并且SNHG3表达量高的胃癌患者的生存时间较短.生物信息学预测显示SNHG3广泛参与RNA剪接、电子呼吸链的传递、mRNA加工、细胞外基质组织、细胞黏附、骨架系统开发、胶原蛋白分解代谢过程、脂肪酸代谢、剪接复合物、癌症通路、磷酸肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路、RAP相关蛋白RAP-1A(Rap1)信号通路、Hippo信号通路等在内的多个生物学进程.结论 lncRNASNHG3在胃癌组织中显著高表达,SNHG3表达量高的胃癌患者生存期短.
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结直肠癌患者人类端粒酶反转录酶mRNA的表达及影响因素
目的 观察结直肠癌患者人类端粒酶反转录酶(hTERT) mRNA的表达,并分析其影响因素.方法 分析在我院接受治疗的80例结直肠癌患者,同时选取80例健康成年人的临床资料作为对照.观察两组患者结直肠组织hTERT mRNA表达,比较不同临床病理特征的结直肠癌患者结直肠组织hTERT mRNA的表达,分析影响结直肠癌患者hTERT mRNA表达的影响因素.结果 结直肠癌患者的结直肠组织hTERT mRNA阳性表达率为87.50％,明显高于正常对照组(6.25％);有腹腔淋巴结转移、组织学分型为管腺癌、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、分化程度为中低分化的结直肠癌患者其结直肠组织hTERT mRNA阳性表达率较高(x2=4.068、4.898、8.447、6.154;P=0.044、0.027、0.004、0.013),而不同年龄、性别、肿瘤部位和大小的结直肠癌患者结直肠组织hTERT mRNA阳性表达率比较,差异无统计学意义(x2=2.593、0.258、0.878、0.152、1.755;P=0.107、0.612、0.349、0.696、0.185);有无腹腔淋巴结转移、组织学分型是影响结直肠癌患者结直肠组织hTERTmRNA阳性表达率的危险因素,其比值比(OR)分别为4.115和3.985.结论 结直肠癌患者结直肠组织hTERT mRNA的阳性表达率较高,且与患者是否存在淋巴结转移、肿瘤分期和组织分型密切相关.
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放射治疗上调脑胶质瘤程序性死亡配体-1表达的机制与临床应用
目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)信号通路在放射治疗引起的程序性死亡配体-1(PD-L1)上调过程中的作用.方法 采用含有64例脑胶质瘤癌组织标本的组织芯片(TMA)检测PD-L1与EGFR在蛋白水平的相关性.使用人胶质瘤细胞株U87和U251进行体外实验探究EGFR通路在放射治疗诱导的PD-L1表达增高中的作用.结果 在64例脑胶质瘤患者中,28例(43.8％)患者PD-L1高表达,31例(48.4％)患者EGFR高表达;PD-L1高表达的患者其EGFR表达水平也相对较高,差异有统计学意义(x2=5.000,P=0.025).PD-L1的表达与脑胶质瘤患者的年龄(x2=11.460,P=0.001)以及分级(x2=7.110,P=0.008)有关.放射治疗对PD-L1的蛋白水平和mRNA水平均有显著上调作用,差异有统计学意义(t=10.292,P=0.000;t=52.171,P=0.000).此外,放射治疗能够提高EGFR通路中的磷酸化蛋白的表达,差异有统计学意义(t=10.485,P=0.001).阻断EGFR通路后,放射治疗提高PD-L1表达的能力被抑制,差异无统计学意义(t=0.758,P=0.490).放射治疗联合EGFR抑制剂与放射治疗联合PD-L1中和抗体比较具有相同的增强抗肿瘤免疫应答的能力;然而,三者联合应用无协同作用.结论 在脑胶质瘤中,放射治疗通过EGFR下游信号通路上调PD-L1的表达.
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血脂异常与肾结石发生风险的关系
目的 探讨各种类型的血脂异常与肾结石发生风险的关系.方法 选取我院住院治疗的肾结石患者308例为结石组,选取同期于我院体检的正常人群302例为对照组.记录两组的年龄、性别、体重指数(BMI)、高血压及糖尿病的患病率,测定血脂相关指标:三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),对比两组人群中TG、TC、HDL-C、LDL-C的数值,采用多因素Logistic回归分析上述几种血脂异常引起肾结石的独立危险因素.结果 结石组TG、TC、HDL-C、LDL-C的中位数分别为1.285、4.470、1.055、2.330 mmol/L,对照组TG、TC、HDL-C、LDL-C的中位数分别为1.225、4.690、1.390、2.580 mmol/L,两组间采用非参数秩和检验,TC(P =0.007)、HDL-C(P =0.000)、LDL-C(P =0.000)比较差异有统计学意义,提示结石组人群的血清TC、HDL-C及LDL-C水平均低于正常人群;对两组血脂异常患病率进行x2检验,结石组的高TG血症及低HDL-C血症的发病率明显高于对照组(P=0.000);采用多因素Logistic回归分析显示,高TG血症[比值比(OR) =2.181,P=0.017]和低HDL-C血症(OR=16.214,P=0.000)为肾结石发病的独立危险因素.结论 肾结石的发病人群多有血脂代谢紊乱,其中高TG血症和低HDL-C血症可能为肾结石发病的独立危险因素.
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食管鳞癌预后与E盒结合锌指蛋白2和E-钙黏蛋白表达的关系
目的 探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及预后意义.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测ZEB2和E-cadherin在218例ESCC患者癌组织(ESCC组)及60例ESCC患者癌旁＞5 cm的正常食管组织(对照组)中的表达,应用Cox回归模型分析预后影响因素.结果 ESCC组ZEB2表达率35.3％ (77/218)高于对照组18.3％(11/60)(x2=6.276,P=0.012),而E-cadherin表达率45.8％(100/218)低于对照组66.7％ (40/60)(x2=8.139,P=0.004),差异均有统计学意义(P＜0.05);ESCC组ZEB2与E-cadherin表达呈负相关性(r=-0.440,P=0.000);ESCC组ZEB2阳性表达率在肿瘤浸润深度(x2=4.104,P=0.043)、淋巴结转移(X2=10.640,P=0.001)和TNM分期(x2=11.080,P=0.001)密切相关;采用Cox比例风险模型分析显示ZEB2阳性表达可作为ESCC预后的独立因素.结论 食管鳞癌ZEB2阳性表达与上皮-间充质转化发生有关,且是预后不良的重要因素.
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低剂量吉西他滨化疗在溶质载体家族1号基因T1288A突变型胰腺癌中的疗效
目的 探讨低剂量吉西他滨化疗在溶质载体家族1号基因(SLC29A1) T1288A突变型胰腺癌患者中的疗效及不良反应.方法 以收治的SLC29A1基因T1288A突变型中晚期胰腺癌患者共72例,随机归入实验组(低剂量吉西他滨,600 mg/m2)36例和对照组(标准剂量吉西他滨,1000mg/m2)36例,观察评价化疗疗效及不良反应.结果 疗效比较中,实验组与对照组各项指标比较差异均无统计学意义.不良反应比较中,实验组白细胞减少、血小板减少、红细胞减少、恶心呕吐、肝损害、腹泻、皮疹和瘙痒、流感样症状发生率分别为3例(8.3％)、3例(8.3％)、4例(11.1％)、6例(16.7％)、2例(5.6％)、3例(8.3％)、1例(2.8％)、1例(2.8％);对照组为12例(33.3％)、15例(41.7％)、13例(36.1％)、20例(55.6％)、2例(5.6％)、4例(11.1％),1例(2.8％)、1例(2.8％),不良反应中白细胞减少(P=0.009)、血小板减少(P=0.001)、红细胞减少(P=0.013)、恶心呕吐(P=0.001),差异有统计学意义.通过随访观察两组6个月和1年生存期比较差异无统计学意义.结论 对于SLC29A1基因T1288A突变型胰腺癌患者,在一定范围内给予低剂量吉西他滨化疗,在不降低化疗疗效同时可有效减少化疗不良反应.
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甲状腺乳头状癌BRAFV600E基因突变与蛋白表达的临床研究
目的 探讨BRAFV600E基因突变与蛋白表达并存在甲状腺乳头状癌(PTC)患者中的表达及与临床病理特征的相关性.方法 收集164例PTC患者的癌组织,用荧光定量聚合酶链反应(PCR)及免疫组织化学法检测BRAFV600E表达,并结合其临床病理特点进行分析.结果 在PTC肿瘤组织中,86.6％ (142/164)存在BRAFV600E基因突变,80.5％ (132/164)存在BRAFV600E蛋白表达,90.1％ (130/143)的BRAFV600E基因突变患者中检测到BRAFV600E蛋白表达;其中,78.7％ (129/164)的患者同时检测到BRAFV600E基因突变及蛋白表达.同时存在BRAFV600E基因突变及蛋白表达的患者,具有较大的肿瘤病灶,更容易出现多病灶,更容易包膜侵犯,具有更高的淋巴结转移率及更晚的TNM分期(P =0.006、0.022).结论 PTC中BRAFV600E基因突变与蛋白表达具有较好的一致性,两者并存的患者具有更大肿瘤病灶,更易甲状腺包膜侵犯,更高颈部淋巴结转移率及更晚的TNM分期等临床病理特点.
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GATA结合蛋白3在肾母细胞瘤组织的表达及其临床意义
目的 探讨转录因子GATA结合蛋白3(GATA3)在肾母细胞瘤组织的表达及其对肾母细胞瘤临床病理参数的关系.方法 收集43例小儿肾母细胞瘤患者肾癌组织及癌旁正常组织,采用免疫组织化学法检测GATA3蛋白表达水平,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测GATA3 mRNA的表达水平;分析GATA3蛋白表达与患者临床病理参数的关系.结果 GATA3mRNA在肾母细胞瘤癌组织和癌旁正常组织中表达量分别为1.055±0.137和5.367±0.687,差异有统计学意义(P=0.002).GATA3在肾母细胞瘤组织中阳性表达率为25.6％,显著低于癌旁正常组织阳性表达率的90.7％,差异有统计学意义(P =0.011),GATA3表达水平与患儿肿瘤组织分级、临床分期及有无淋巴结转移明显相关.结论 肾母细胞瘤中GATA3表达显著下调,且与患者临床病理参数明显相关.
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中低位局部进展期直肠癌新辅助放化疗后肿瘤消退分级的预测因素研究
目的 探讨中低位局部进展期直肠癌新辅助放化疗后肿瘤消退分级(TRG)的预测因素.方法 分析68例接受术前新辅助放化疗的中低位局部进展期直肠癌患者临床病理资料,以TRG作为放化疗后敏感性的判断指标,分析临床和分子生物学指标与新辅助放化疗敏感性的关系.结果 TRG 0级者3例(4.4％),TRG 1级者14例(20.1％),TRG 2级者30例(44.1％),TRG 3级者13例(19.1％),TRG 4级者8例(11.8％).单因素分析结果显示,放化疗前T3(P=0.008)、放化疗前cN0(P =0.000)、K-ras基因野生型(P=0.007)与新辅助放化疗后的TRG高分级有关.多因素回归分析结果显示,放疗前T分期、N分期、K-ras基因型是影响TRG分级的预测因素.结论 放疗前早T分期、淋巴结阴性、K-ras基因野生型可能是局部进展期直肠癌新辅助放化疗后高敏感性的预测因素.
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腹主动脉瘤壁组织CD3+、CD68+及基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9的炎症发病机制
目的 探讨腹主动脉瘤壁组织中CD3+(T淋巴细胞)、CD68+(巨噬细胞)及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达及其作用.方法 应用免疫组织化学方法检测随机抽取的20例腹主动脉瘤组织与4例正常腹主动脉血管壁全层组织(对照组)CD3+、CD68+及MMP-2、MMP-9的表达,并采用图像分析技术进行定量分析.结果 在观察组中CD3+淋巴细胞及CD68+巨噬细胞的表达较正常组明显升高,其差异有统计学意义[(100.44±105.82) /HPF比(0.55±0.41) /HPF,Z=-3.083,P=0.002;(233.02±195.30)/HPF比(5.05±1.70) /HPF,Z=-2.758,P=0.006].观察组病变的血管壁组织中大量的MMP-2及MMP-9阳性颗粒,与正常组比较,其差异有统计学意义(0.0980±0.0496比0.0046±0.002 3,Z=-2.514,P=0.012;0.0248±0.014 6比0.030 0±0.022 2,Z=-0.308,P=0.002).结论 腹主动脉瘤组织中CD3+、CD68+及MMP-2、MMP-9的大量表达,在促进腹主动脉瘤体形成及瘤壁进一步扩张中具有重要作用.
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定量分析结直肠癌患者血浆循环游离DNA的临床价值
目的 定量分析结直肠癌患者血浆游离DNA(cfDNA)水平在结直肠癌诊断及预后判断中的临床价值.方法 收集本院接受手术的结直肠癌患者手术当天血浆标本178份和正常人血浆56份.利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测血浆cfDNA水平.利用ROC曲线评价cfDNA水平在结直肠癌各分期亚组的诊断价值.对Ⅳ期患者进行随访,分析cfDNA与患者生存期之间的相关性.结果 结直肠癌组cfDNA浓度显著高于健康体检组,差异有统计学意义[(63.07±65.38) ng/ml比(22.85±8.88) ng/ml,P=0.000)].Ⅲ～Ⅳ期结直肠癌组与健康体检组比较差异有统计学意义[血浆cfDNA浓度分别为(39.59 ±31.56)、(107.32±102.85) ng/ml比(22.85±8.88) ng/ml,均P=0.000)].血浆cfDNA水平在高、中、低分化肿瘤中分别为(29.42±18.29)、(54.69±75.05)、(9.67±103.18) ng/ml,差异有统计学意义(P=0.000).血浆cfDNA水平TNM分期密切相关.生存分析结果显示血浆cfDNA浓度与肿瘤患者总生存期(0S)明显相关.结论 血浆cfDNA水平对结直肠癌早期诊断价值有限,初次治疗时血浆cfDNA浓度是有效的预后指标.
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RhoC调节因子RhoGDIa基因在甲状腺乳头状癌组织的表达及其临床意义
目的 观察RhoC调节因子RhoGDIa在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达并探讨其临床意义.方法 采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测200例PTC组织及配对癌旁组织中RhoGDIa和微小RNA(miRNA,miR)-151-5p表达水平,探讨RhoGDIa表达与PTC患者临床病理特征及miR-151-5p表达的关系.结果 与癌旁组织比较,76.5％ (153/200) PTC组织中RhoGDIamRNA呈低水平表达,72.5％ (145/200) PTC组织中miR-151-5p呈高水平表达.相关分析结果显示PTC组织中RhoGDIa mRNA表达与miR-151-5p水平呈显著负相关(r=-0.925,P=0.000).与非转移组比较,淋巴结转移组PTC组织中miR-151-5p表达显著上调、RhoGDIa蛋白表达显著下调;miR-151-5p表达丰度与RhoGDIa蛋白呈负相关.RhoGDIa mRNA低表达与PTC患者性别(P=0.000)、病灶数量(P=0.004)、局部侵犯(P=0.002)、淋巴结转移(P=0.000)和临床分期(P=0.000)明显相关.结论 RhoGDIa在PTC组织中表达下调,与肿瘤进展明显相关,其表达可能受miR-151-5p负调控.
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微小RNA-150在甲状腺乳头状癌组织的表达及其对肿瘤增殖和凋亡的影响
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-150在甲状腺乳头状癌(PTC)组织中的表达及其对甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1生物学行为产生的影响.方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分别检测不同分期的PTC组织及癌旁组织中的miR-150表达水平;用脂质体2000(LipofectaminTM 2000)分别将miR-150类似物(miR-150mimics)及空白载体(miR-150 scramble)稳定转染到甲状腺乳头状癌TPC-1细胞株中,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞仪技术分别检测miR-150对于TPC-1细胞增殖、凋亡的影响.结果 PTC组织中miR-150的表达水平(0.573 8±0.050 9)显著低于癌旁组织中的水平(1.7680±0.1980)且差异有统计学意义(P=0.000);其表达水平随着肿瘤分期的增加而显著降低(P =0.005);CCK-8法检测:转染miR-150后的TPC-1细胞增殖能力显著低于空白对照组及空白载体组且差异有统计学意义(P=0.001),对照组和空载组间差异无统计学意义(P=0.070);流式细胞仪检测结果显示miR-150组细胞凋亡率[(14.79±1.85)％]显著高于对照组[(4.90±0.51)％]及空载组[(5.79±1.00)％]且差异有统计学意义(P=0.013),对照组和空载组间差异无统计学意义(P=0.472).结论 miR-150在PTC组织中呈低表达且表达水平与肿瘤分期相关;miR-150能抑制PTC细胞的增殖、促进其凋亡,在PTC的发生发展中起到抑癌基因的重要作用.
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肝再生机制研究及其临床应用进展
肝脏是一个具有强大再生能力的器官.经过几十年的研究,人们对肝脏再生的机制已有了初步的认识,特别是近几年随着分子生物学技术和基因编辑技术的发展,极大地促进了科研人员对肝脏再生的细胞来源和调控机制的理解.但是,肝脏再生特别是异常肝脏的再生依然存在很多疑惑,限制了相关的药物研发和临床应用,本文针对近期肝脏再生领域的一些新突破、新进展以及尚未解决的问题进行综述.
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微小核糖核酸在乳腺癌中的作用及其机制
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,其复发及远处转移是癌症相关性死亡的主要原因.目前应用于乳腺癌诊断的肿瘤标志物敏感性和特异性均较低,尚不能满足临床需要,其对治疗反应的疗效评估也是临床的难点问题,另外,乳腺癌的复发及转移难以监测.因此,急需开发一类对乳腺癌的敏感性及特异性均高,且可指导临床用药的生物标志物.作为生物体内广泛存在的小分子单链RNA,多种微小核糖核酸(miRNA)的表达变化都与乳腺癌发病进展或复发转移相关,其中有些miRNA也与肿瘤细胞的耐药关系密切.本文就miRNA表达水平与乳腺癌的关系,以及将miRNA作为乳腺癌肿瘤标志物的可行性作一综述.
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膀胱组织工程研究进展
泌尿系统的肿瘤、创伤、炎症和先天畸形等疾病均可使膀胱受损,目前利用肠道修复重建常伴随一系列的并发症.组织工程技术为解决这一问题提供了新的思路.本文就膀胱组织工程研究进展情况作一综述,详细阐述了在膀胱组织工程重建中所涉及的三大主要方面的研究现状,即支架材料的选取、种子细胞的培养与移植、生长因子的调节作用.并指出了目前所面临的一些挑战,例如膀胱组织工程支架材料的选取、组织工程膀胱移植到体内后营养供应问题等,都有待我们进一步深入研究解决.
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长链非编码RNA对胰腺癌生长和转移调控机制的研究进展
胰腺癌是难治愈的恶性肿瘤之一.其发病隐匿、早期诊断困难、早期出现远处转移使得仅有少数患者有机会采取根治性手术切除,5年生存率不足5％.研究结果显示,长链非编码RNA(lncRNA)可以从多个层面调控细胞生物学行为,与胰腺癌进展和转移密切相关.我们对lncRNA对胰腺癌生长和转移中调控机制研究的新进展进行总结,对lncRNA调控细胞周期、凋亡、自噬、上皮-间充质转化、肿瘤干细胞的机制等方面的新研究成果进行总结.
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脊柱侧凸动物模型的研究进展
脊柱侧凸的病因复杂,尚不完全清楚.动物模型研究已经成为探索脊柱侧凸发病原因甚至防治方法的重要途径.本文检索相关动物模型研究的新进展,并予以综述.
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长链非编码RNA-HOX转录反义RNA与微小RNA的相互调控在肿瘤中的研究进展
HOX转录反义RNA(HOTAIR)是首次被发现具有反式转录调控作用的长链非编码RNA(lncRNA).研究结果显示,HOTAIR在多种实体肿瘤中均呈高表达,且与肿瘤的发生发展、转移、临床预后密切相关.HOTAIR能调控多基因的表达,其与微小RNA(miRNA,miR)的相互调控关系成为了目前关注的焦点.近年来的研究结果表明,HOTAIR与miRNA的相互作用对肿瘤的增殖、侵袭、转移等生物学过程产生了重要影响.本文针对两者之间的相互调控及参与肿瘤发生发展的相关机制进行综述.
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Hedgehog信号通路与甲状腺癌
Hedgehog信号通路在哺乳类动物的胚胎的发育和组织分化起重要作用,控制着细胞的生长与增殖.研究结果显示Hedgehog信号通路异常激活与多种恶性肿瘤的发生有密切关系,参与肿瘤增殖、迁移、血管生成、上皮-间充质转化(EMT)、肿瘤干细胞调控及肿瘤耐药性形成等.Hedgehog信号通路的研究将为甲状腺癌的综合治疗和靶向治疗开辟了新的途径,本文将近年来Hedgehog信号通路与甲状腺癌发生发展的研究进展进行综述.
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恒河猴甲基苯丙胺依赖肠屏障损伤动物模型的建立
目的 以剂量递增方法形成甲基苯丙胺依赖,建立恒河猴甲基苯丙胺成瘾的肠道损伤动物模型.方法 选用体重8 ～ 10 kg的成年恒河猴5只,正常对照组A组(A1组:正常对照12周;A2组:正常对照24周)和甲基苯丙胺处理组B组(B1组:甲基苯丙胺浓度递增处理12周;B2组:甲基苯丙胺浓度递增处理12周后稳定给药至24周组;B3组:甲基苯丙胺浓度递增处理24周),每组各1只.静脉给药,起始浓度为每次0.1 mg/kg,2次/天,每周浓度递增每次0.05 mg/kg,1周加药5次,每2周称体重;抽血进行肠屏障损伤标志物测定;所有组取肠道组织进行苏木素-伊红(HE)染色.结果 正常对照组实验期间体重无明显变化,甲基苯丙胺处理的各组于8周开始出现体重下降2.5％ ～4.8％,12周开始显著下降7.6％～10.8％,终B1～B3组体重分别减轻7.6％、25.6％、33.3％;处理组血液二胺氧化酶(DAO)于第10周开始出现轻微上升17.5％～29.2％,第12周开始明显上升152.4％～188.4％,24周实验结束B2、B3组DAO值分别为27.32、49.69 U/ml.血液D-乳酸(D-LA)于12周出现明显上升200.0％～220.7％,后持续上升至24周(B2、B3组分别为28.47、38.36μg/ml);血液内毒素(LPS)变化趋势与D-LA一致,24周时B2、B3组分别为33.70、46.12 pg/ml.组织学结果显示正常对照组肠道除了轻微细胞浸润,无明显病理改变;而处理组各肠段出现不同程度的黏膜上皮糜烂、黏膜固有层腺体破坏及消失、肠绒毛变性坏死、肠壁变薄等情况.结论 采用甲基苯丙胺浓度递增处理,恒河猴血液肠屏障损伤标志物及肠道组织学异常改变,符合肠屏障损伤表型;数据表明成功建立甲基苯丙胺依赖肠道损伤非人类灵长类动物模型.
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人源结直肠癌异种移植瘤模型的建立
目的 优化人源结直肠癌异种移植瘤模型的建立.方法 选取86例未经放化疗的结直肠癌患者新鲜肿瘤组织标本,以18G留置针穿刺后扩大针眼,埋种肿瘤后夹闭免缝的方式移植于免疫缺陷小鼠后颈部皮下,定期监测移植瘤大小、成瘤时间,探索佳传代时机,组织染色对比各代肿瘤组织形态,免疫组织化学法检测各代肿瘤相关蛋白表达.结果 每例初始肿瘤建模时间为(16.5±2.8) min,原代移植成功率为79％,传代移植成功率为100％.原代移植成功率与肿瘤大体分型、分化程度、临床分期无关,原代肿瘤与子代肿瘤的形态结构、肿瘤蛋白表达相似.结论 本研究优化了人源结直肠癌异种移植瘤模型的建立,有效简化建模流程,缩短建模时间,建模成功率高,在肿瘤形态学和组织学特征上保持稳定.
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柚皮素对高侵袭性人肝癌细胞株MHCC97-H凋亡与上皮-间充质转化能力的影响及其机制
目的 探讨柚皮素(Nar)对高侵袭性人肝癌细胞株MHCC97-H凋亡及上皮-间充质转化(EMT)的影响及其分子机制.方法 常规培养高侵袭性人肝癌细胞株MHCC97-H.噻唑蓝(MTT)法检测0、40、80、160、320 μmol/L的Nar干预对细胞活性的影响.流式细胞术(FCM)检测Nar对MHCC97-H细胞凋亡率的影响.划痕实验及Transwell小室实验检测Nar对细胞EMT能力的影响.实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot方法检测Nar干预前后相关基因的表达变化.结果 MTT结果显示,Nar作用后,MHCC97-H细胞活性明显降低,0、40、80、160、320 μmol/L的Nar作用24 h后细胞的活性分别为(96.49±13.28)％、(73.65±8.93)％、(60.75±15.75)％、(37.31±7.77)％、(33.20±10.00)％ (F =31.028,P=0.000).FCM结果显示,与对照组比较,Nar作用后,MHCC97-H细胞的凋亡率明显升高(t=8.368,P=0.000).与对照组比较,Nar作用后MHCC97-H细胞的迁移、侵袭能力下降(t=2.964,P=0.014;t=8.899,P=0.000).RT-qPCR和Western blot结果显示,与对照组比较,Nar作用后MHCC97-H细胞凋亡及细胞外基质相关基因和蛋白发生改变.结论 Nar具有促进肝癌细胞凋亡、抑制细胞EMT的能力.
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锚蛋白B在肝癌组织中表达失衡并影响患者预后
目的 检测肝癌及癌旁组织中锚蛋白B(ANK2)的表达差异,分析其对肝癌患者预后的影响.方法 收集80例肝癌患者手术标本,利用实时定量聚合酶链反应及免疫组织化学法检测80例患者癌组织及癌旁组织中ANK2基因的表达情况;并根据肝癌组织中ANK2基因表达水平将患者分为高表达组和低表达组(n=40),利用Cox回归模型对患者预后进行单因素及多因素分析.结果 80例肝癌样本中,接近70％ (55/80)的癌组织样本中ANK2表达失调并明显高于癌旁组织;将患者根据ANK2表达水平分组后,可见低表达ANK2组患者总生存率(P=0.024)及无瘤生存率(P=0.011)均明显高于高表达组患者;Cox单因素和多因素分析结果表明ANK2表达水平是影响患者预后生存的独立影响因素.结论 ANK2基因在肝癌组织中表达异常增高,并可影响患者预后.
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辅助性T细胞22细胞在肝癌恶性腹水中募集和分化的机制
目的 研究辅助性T细胞(Th)22细胞在恶性腹水(MA)及同源外周血中的分布及其表型特征,探讨Th22细胞分化和募集浸润至腹腔的机制.方法 流式细胞术检测Th22细胞在MA和外周血中的分布和表型.重组人细胞因子刺激MA和外周血中初始CD4+T细胞,观察其分化成Th22细胞的情况.检测外周血来源的CD4+T细胞在体外向MA上清液趋化,并加入人抗CC类趋化因子(CCL) 20、抗CCL22、抗CCL27单克隆抗体观察阻断效应.结果 MA中Th22细胞比例[(3.22±0.40)％,n =37]明显高于对应外周血[(0.79 0.20)％,n=37,P=0.006)和健康对照组[(0.63±0.11)％,n=10,P=0.002],Th17细胞在MA中比例[(3.30±0.18)％]也明显高于对应外周血[(0.79±0.15)％,n =37,P=0.008]及健康对照组[(0.67±0.12)％,n=10,P=0.001],且两种细胞比例呈正相关(P=0.002).MA和外周血中Th22细胞的CD45 RO、CC类趋化因子受体(CCR)4、CCR6和CCR10表达水平高于CD45RA、CD62L、CCR3、CCR5.CD4+T细胞向Th22细胞分化过程中,白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β起促进作用,干扰素-γ(IFN-γ)起抑制作用,且Th22细胞受IL-6的促分化作用呈现时间剂量依赖性.MA上清液对外周血Th22细胞有明显的趋化效应,加入抗CCL20、抗CCL22、抗CCL27单克隆抗体则表现为阻断此趋化作用.结论 MA中的趋化因子与炎性细胞因子在腹膜腔内共同作用使MA中Th22细胞比例明显高于外周血,Th22细胞可能参与MA的发病过程并发挥一定的免疫调节作用.
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微小RNA-506在肝癌组织的表达及其临床意义
目的 检测肝细胞肝癌(HCC)组织中微小RNA(miRNA,miR)-506的表达,探讨miR-506在肝癌临床诊治中的意义.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测70例肝癌及其对应癌旁肝脏组织中miR-506的表达并结合临床资料进行分析.结果 miR-506在肝癌组织中的表达量相对值(0.32±0.04)低于对应癌旁肝脏组织的表达量(0.91 ±0.04,t=6.342,P =0.000).miR-506的表达与患者的肝内转移、TNM分期及癌栓等临床病理学特征明显相关(x2=6.534、5.452、5.736,P=0.011、0.020、0.017).结论 miR-506在肝癌中的表达均低于癌旁组织,miR-506基因的表达异常在肝癌的发生、发展中起重要作用.
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3.0T体素内不相干运动磁共振成像评价兔肝热缺血再灌注损伤
目的 探讨3.0T体素内不相干运动(IVIM)磁共振成像(MRI)评价兔肝热缺血-再灌注损伤(WIRI)的可行性及诊断价值.方法 健康成年、雄性新西兰大白兔50只,采用随机组法分为5组,每组10只.夹闭肝动脉和门静脉不同时间后再灌注6h建立肝热缺血-再灌注损伤模型,根据夹闭时间不同分为热缺血10 min、20 min、30 min和40 min组.假手术(Sham)组仅开腹并分离肝十二指肠韧带.所有实验兔行常规3.0T MRI扫描和IVIM检查,测量兔肝表观扩散系数(ADC)、真性扩散(Dslow)、假性扩散(Dfast)和灌注分数(PF)值.于MR检查后经耳缘静脉取血检测血清丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;处死实验兔,取冻存肝组织检测其丙二醛(M DA)、总超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)水平;并进行组织病理学检查.应用单因素方差分析比较多组之间IVIM参数差异;应用Pearson或Spearman相关性检验评价IVIM参数和生化指标之间的相关性;应用受试者工作特征(ROC)曲线评价IVIM参数的诊断效能.结果 与Sham组比较,不同热缺血时间组ADC、Dslow、Dfast和PF均减低,且随热缺血时间延长,其数值呈逐渐下降趋势(ADC分别为1.36 ±0.15、1.28±0.07、1.10±0.13、1.10±0.15和0.98 ±0.18,Dslow分别为1.29±0.14、1.24 ±0.07、1.08 ±0.11、1.03 ±0.18和0.94 ±0.15,Dfast分别为31.33 ±6.44、25.53 ±2.10、24.90±1.84、23.00±1.59和23.76±1.41,PF分别为30.44 ±2.80、26.26 ±4.41、24.50 ±2.24、19.97±3.39和17.42±3.25),组间IVIM各参数差异均有统计学意义(P =0.005).IVIM各参数与ALT、AST、LDH、MDA和MPO均呈显著负相关(P=0.005),与总SOD均呈显著正相关(P=0.005).ADC、Dslow、Dfast和PF评价兔肝热缺血-再灌注损伤均具有较高的诊断效能[曲线下面积(AUC)分别为0.876、0.824、0.897和0.937].光镜下表现:热缺血再灌注损伤组肝细胞水肿,炎性细胞浸润,肝窦及中央静脉扩张淤血,且随热缺血时间延长程度加重,晚期出现纤维组织增生及纤维化.结论 3.0T IVIM能无创、定量评价兔肝WIRI所致的病理生理变化.
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扩散张量成像在肝脏热缺血-再灌注损伤兔模型的应用价值
目的 探讨扩散张量成像(DTI)磁共振成像(MRI)对兔肝热缺血-再灌注损伤的应用价值.方法 健康成年新西兰大白兔20只,随机选取10只夹闭肝动脉和门静脉30 min,再灌注6h建立肝热缺血-再灌注损伤兔模型,另10只作为正常对照组.所有实验兔于Siemens MAGNETOMTrio Tim 3.0T MR行DTI MRI扫描,采集数据后用Siemens Nero 3D进行后处理,由2位经验丰富的影像专业医师分别测量兔肝表观扩散系数(ADC)、各向异性分数(FA)值,并使用组内相关系数(ICC)检验其一致性,观察是否具可重复性.磁共振(MR)检查后立即处死实验兔,经耳缘静脉取血检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、血清乳酸脱氢酶(LDH)水平;取冻存肝组织检测其总超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及髓过氧化酶(MPO)水平.采用两独立样本t检验比较组间ADC、FA值之间差异,组间临床化验指标差异采用非参数Mann-Whitney U检验,应用Spearman相关分析评价ADC值与临床化验指标的相关性,应用受试者工作特征(ROC)曲线评价ADC值诊断效能.结果 两名观察者所测ADC、FA值具有较高的一致性,ICC值分别为0.890、0.823.热缺血-再灌注损伤组和正常组兔肝的ADC值差异有统计学意义(P=0.000),分别为(1.46 ±0.14)×10.mm2/s、(1.83 ±0.20)×10-3 mm2/s,而FA值组间差异无统计学意义,分别为0.38 ±0.03、0.37 ±0.04(P=0.664).两组间ALT、AST、LDH、总SOD、MDA及MPO之间差异均有统计学意义(P=0.000).ADC值与ALT、AST、LDH、MPO及MDA之间均呈负相关(P=0.041、0.004、0.001、0.001、0.012),ADC值和总SOD之间呈显著正相关(r=0.782,P=0.000).ADC值评价兔肝热缺血-再灌注损伤具有较高的诊断效能[曲线下面积(AUC) =0.97],其佳诊断阈值为1.676×10-3 mm2/s,灵敏度为90％,特异度为100％.结论 DTI MRI能定量、无创评价兔肝热缺血-再灌注损伤引起的肝脏水分子扩散的变化,其评价指标ADC值与肝损伤的程度呈明显相关.
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盐诱导激酶1对人肝癌MHCC97-L和HEP3B细胞增殖、侵袭和迁移的影响
目的 观察盐诱导激酶1(SIK1)对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的调控作用.方法 将抑制剂转染肝癌MHCC97-L和HEP3B细胞株构建SIK1敲低组,通过实时聚合酶链反应(qPCR)检测SIK1的表达;噻唑蓝(MTT)法检测SIK1在1、2、3、4、5d时对细胞增殖的影响;细胞周期实验检测SIK1对细胞G1、S、G2期的影响;细胞凋亡实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测6、24、48 h时细胞的迁移能力.结果 SIK1在肝癌MHCC97-L和HEP3B细胞中相对表达低于正常肝脏细胞(0.51±0.01、0.33±0.02,tMHCC97-L=19.630,P=0.000;tHEP3B=24.940,P=0.000);转染SIK1抑制物后,肝癌MHCC97-L和HEP3B细胞内SIK1相对表达量明显降低(0.39±0.02、0.51±0.03,tMHCC97-L=11.479,P=0.000;tHEP3B=9.543,P=0.001);敲低SIK1后,MTT实验结果显示,明显促进MHCC97-L和HEP3B细胞的增殖(1.20±0.06比0.90±0.07,tMHCC97-L=5.630,P=0.005;1.09±0.11比0.63±0.05,tHEP3B=6.460,P=0.003);细胞周期实验结果显示:S期细胞比例高于对照组[(24.77±0.99)％比(17.22±1.01)％,tMaCC97-L=9.280,P=0.001;(21.63±0.94)％比(15.32±0.88)％,tHEP3B=8.460,P=0.001];G2细胞比例高于对照组[(16.75±0.50)％比(14.94±0.64)％,tMHCC97-L=3.860,P=0.018;(15.99±0.51)％比(13.97±0.44)％,tHEP3B=5.170,P=0.007],促进细胞从G1期向S期转变;细胞凋亡实验显示:MHCC97-L和HEP3B细胞凋亡率下降[(1.91±0.10)％比(3.27±0.31)％,tMHCC97-L =7.180,P=0.002;(2.01±0.14)％比(3.81±0.13)％,tHEP3B=16.600,P =0.000];划痕实验结果显示:明显促进MHCC97-L和HEP3B细胞迁移[(202.00±15.61)比(285.33±10.07) μm、(229.33±13.61)比(321.33±16.04) μm,tMHCC97-L =7.770,P =0.001;tHEP3B=7.570,P=0.002],差异有统计学意义.结论 降低SIK1的表达促进了MHCC97-L和HEP3B细胞株增殖、侵袭和迁移的作用.
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微小RNA-942在肝癌组织的表达及其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-942在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达及其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测70例肝癌和癌旁组织miR-942的表达;将Huh7细胞分别转染miRNA随机序列(阴性对照组)、miR-942模拟物(miR-942模拟物组)和miR-942抑制物(miR-942抑制物组)后,噻唑蓝(MTT)法和Transwell实验观察Huh7细胞增殖和侵袭能力变化;Western blot检测Huh7细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的蛋白表达.结果 miR-942在肝癌组织中表达量(0.92±0.08)与癌旁组织(0.42±0.05)比较显著上调(t=5.712,P=0.000);MTT细胞增殖实验结果显示5d后miR-942抑制物组Huh7细胞吸光度(A)值显著低于阴性对照组和miR-942模拟物组(0.79±0.02比1.02±0.04,t =7.513,P=0.001;0.79±0.02比1.51±0.12,t=8.621,P=0.001);Transwell结果显示miR-942抑制物组侵袭转移细胞数明显减少[(59.13±5.41)个比(97.26±11.13)个,t=11.712,P=0.000;(59.13±5.41)个比(99.42±12.13)个,t=12.113,P=0.000];Western blot结果显示PCNA和MMP-9蛋白在miR-942抑制物组的表达分别下调了80.1％和56.3％(t=5.231,P=0.000;t =6.415,P=0.000).结论 miR-942在肝癌组织中高表达,下调miR-942可抑制肝癌细胞的增殖和侵袭,其机制与下调PCNA和MMP-9表达有关.
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循环微小RNA-199a-3p下调可能早期预警肝移植后急性排斥反应
目的 筛选外周血中能够早期预警肝移植术后急性排斥反应的微小RNA(miRNA,miR).方法 雄性Lewis大鼠40只、BN大鼠80只,分别按体重采用随机数字法分组并采用改良二袖套法构建肝原位移植大鼠模型.免疫耐受组(IT组)采用BN大鼠作为供体,另一BN大鼠为受体;急性免疫排斥组(AR组)采用Lewis大鼠作为供体,BN大鼠为受体;未成熟树突状细胞(imDCs)免疫干预组[转化生长因子-β1(TGF-β1) imDCs组]术法同AR组,受体术前5d腹腔注射2×106个过表达TGF-β1的imDC.术后7d采下腔静脉血进行miRNA基因芯片检测,筛选组间符合差异倍数[FC(abs)] ＞2.0的差异性表达miRNA.结果 TGF-β1 imDCs组与IT组比较,miR-199a-3p、miR-331-3p和miR-203a-3p显著下调[miR-199a-3p:FC (abs)=27.997,P=0.017;miR-331-3p:FC(abs)=5.403,P=0.034;miR-203 a-3p:FC (abs)=24.593,P=0.022];AR组与TGF-β1 imDCs组比较,miR-199a-3p、miR-331-3p和miR-203 a-3p显著下调[miR-199a-3p:FC (abs)=459.128,P=0.000;miR-331-3p:FC(abs) =9.877,P=0.031;miR-203a-3p:FC(abs) =26.894,P=0.020].以miR-199a-3p的表达差异为显著[FC(abs) =459.128].结论 肝移植术后大鼠外周静脉血miR-199a-3p的下调可能早期预警急性排斥反应的发生.
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大数据促进肝脏外科实验研究进展
随着生物信息学的快速发展,SEER、TCGA、ONCOMINE等数据库的诞生,预示着生物大数据的时代来临,传统的循证医学研究逐渐向大数据时代的精准医学转变.本文将对基因组学、转录组学、蛋白质组学、流行病学等生物信息数据库在肝脏外科研究领域的作用作简要概述,旨在为以后的肝脏外科实验研究提供新的思路.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
