中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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低氧诱导因子-1α沉默对膀胱癌细胞株BIU-87增殖、侵袭及转移的影响
目的 采用RNA干扰技术(RNAi)技术观察低氧诱导因子-1α (HIF-1α)对人膀胱癌细胞株BIU-87增殖、侵袭及转移的影响.方法 体外培养BIU-87细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot检测低氧(90％氮气+5％氢气+5％二氧化碳)和常氧下及HIF-1α-siRNA转染前后BIU-87中HIF-1α、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达；采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测HIF-1α-siRNA转染后的细胞增殖水平,细胞划痕和Transwell试验检测迁移和侵袭能力.结果 低氧8、24h条件下,HIF-1α蛋白(0.56 ±0.08、1.33 ±0.21)、MMP-2 mRNA(1.85±0.21、2.94±0.29)、MMP-2蛋白(0.68 ±0.11、1.37 ±0.22)、MMP-9 mRNA(2.08±0.32、3.49±0.44)、MMP-9蛋白(0.89 ±0.12、1.40±0.23)表达与正常氧条件比较HIF-1α蛋白(0.33±0.05)、MMP-2 mRNA(0.95 ±0.13)、MMP-2蛋白(0.47±0.07)、MMP-9 mRNA(1.21±0.17)、MMP-9蛋白(0.58±0.14)表达均显著升高(均P＜0.05),HIF-1α mRNA(1.05 ±0.09、0.96 ±0.11)与正常氧条件(1.16±0.13)比较无明显变化；HIF-1α-siRNA转染后与转染前比较能有效沉默HIF-1α；与转染前(1.12 ±0.17、315.25±40.94、96.86±9.85)比较,HIF-1 α-siRNA能降低增殖、侵袭及迁移细胞数(0.63 ±0.08、139.62±19.67、69.17±7.39)(均P＜0.05); BIU-87中PCNA mRNA(0.57±0.07)、PCNA蛋白(0.52±0.09)、MMP-2 mRNA(0.64±0.08)、MMP-2蛋白(0.53±0.07)、MMP-9 mRNA(0.49±0.06)、MMP-9蛋白(0.69±0.07)表达与转染前比较显著降低(0.99±0.14、0.80±0.13、1.06±0.13、0.87 ±0.12、0.99±0.12、1.12±0.14) (P ＜0.05).结论 低氧下,HIF-1 α-siRNA通过沉默HIF-1α,降低PCNA、MMP-2、MMP-9表达而抑制膀胱癌细胞增殖、侵袭及转移.
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不同种类气腹对腹腔感染大鼠免疫抑制和感染扩散的影响
目的 观察不同种类气腹对腹腔感染模型大鼠细胞因子及吞噬细胞免疫功能的影响和对感染扩散及细菌移位的影响.方法 Wistar大鼠40只,腹腔注射法建立腹腔感染大鼠模型,随机分为4组:对照组、CO2组、N2组和空气组.接种后12 h,麻醉后腹腔穿刺分别输入实验气体,对照组免气腹,持续30 min.术后24h和48 h,各组分别随机挑选5只大鼠,心脏穿刺取血测定肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-2水平,剖腹抽取腹腔液测定TNF-α水平和吞噬细胞活性.结果 (1)术后24 h,血清TNF-α(μgL)和血清IL-6水平(μg/L) CO2组(0.557±0.064;0.195±0.022)明显低于对照组(0.674±0.069；0.247±0.025)、空气组(0.682±0.068;0.256±0.019)和N2组(0.713±0.072；0.265±0.032) (P ＜0.05).(2)术后24h和48h,血清IL-2(μg/L)和腹腔液TNF-α(μg/L) C02组(1.763 ±0.548,1.694 ±0.519;0.774 ±0.095,0.945±0.089)明显低于对照组(3.332±0.753,3.587±0.764;1.029±0.104,1.253±0.175)、空气组(2.867±0.698,2.904±0.686;0.989±0.091,1.270±0.187)和N2组(3.095±0.712,3.112 ±0.725;1.075 ±0.110,1.353±0.201) (P ＜0.05,P＜0.01).(3)术后24 h和48 h,吞噬细胞的吞噬率和吞噬指数也有类似改变.结论 在腹腔感染情况下,CO2气腹较空气气腹、N2气腹或免气腹技术明显抑制机体体液免疫和吞噬细胞功能,增加了腹腔感染扩散和细菌移位的风险.
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鼠白细胞介素-33真核质粒的构建及其在GL261中的稳定表达
目的 构建鼠白细胞介素-33(IL33)真核表达质粒,建立并检测稳定表达IL-33的细胞株GL261.方法 从Genebank找出鼠IL-33基因全长序列(801 bp),人工合成、装载于表达载体pEZ-M03,扩增后酶切鉴定.将鉴定正确的质粒转染的小鼠胶质瘤细胞GL261,并用浓度为200 mg/L的G418筛选出阳性克隆,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测目的基因表达量；Western blot法检测目的蛋白的表达量,并观察转染后的GL261细胞体外生长状况.结果 成功构建鼠IL-33真核质粒pEZ-M03-mIL33,经过浓度为20 mg/L的G418工作液筛选出了稳定高表达鼠IL-33的细胞株GL261,且其生长状态未受到转染基因的影响(P＞0.05).Real-time PCR检测目的基因在瞬转、稳转细胞株中皆为高表达(P＜0.01).Western blot检测到稳转细胞株中目的蛋白明显高表达(P＜0.01).结论 本研究构建的鼠IL-33真核质粒能于GL261中获得稳定高表达.
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人脐带间充质干细胞与肌肉微粒共培养及其诱导干细胞成肌分化的研究
目的 观察肌肉微粒与人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)共培养体系中干细胞成肌分化的可行性及其分化能力.方法 体外分离、鉴定并扩增hUCMSCs,0.05％胰酶消化后制备干细胞悬液.手术切取新西兰白兔后肢骨骼肌,剪碎成＜1 mm3的肌肉微粒.按照1×105∶1的比例(n:mg)行干细胞与肌肉微粒的间接或直接共培养,分别通过Tranwell迁移实验、噻唑蓝(MTT)检测及免疫组织化学与流式细胞分析等方法观察共培养体系中hUCMSCs的迁移能力、增殖能力及成肌细胞标志物desmin的表达.结果 间接共培养体系建立12h后,hUCMSCs向肌肉微粒方向迁移率达(39.73±5.92)％,直接共培养体系建立5d后干细胞增殖及成肌转化达到高峰,干细胞增殖率可达原来的6倍,其分布以肌肉微粒为中心,呈向心性聚集排列,流式细胞术检测到desmin的阳性表达率为(21.57±2.39)％,与对照组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 通过与肌肉微粒共培养的方法,可以实现对hUCMSCs的成肌分化诱导,该方法是一种非化学性的简便、快速、有效的干细胞成肌肉诱导方法.
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超声心动图对阿霉素心肌病模型大鼠左心收缩功能的评价
目的 探讨超声心动图技术在评估阿霉素心肌病模型大鼠心功能的优势及应用价值.方法 将35只雄性Wistar大鼠按体质量随机分2组:一组制备阿霉素心肌病模型.正常对照组注射等量生理盐水.于实验第12周应用VIVID7彩色超声显像仪行二维、多普勒及M型超声检测评价其左心收缩功能,并作苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织学变化.结果 (1)死亡率:阿霉素心肌病组大鼠12周累计死亡10只,死亡率为40％.死亡原因为充血性心力衰竭；正常对照组无死亡.(2)大鼠心脏超声测定结果:阿霉素心肌病组大鼠左室收缩末期内径[(0.44±0.06)cm]及舒张末期内径[(0.67±0.07)cm]大于正常对照组(P＜0.01),左室短轴缩短率[(33.94±3.56)％]低于正常对照组(P＜0.01),主动脉射血速度[(0.71 ±0.10) m/s]低于正常对照组(P＜0.01),病理学结果证实阿霉素心肌病组大鼠心肌符合心肌病样改变.结论 阿霉素常规剂量多次静脉注射,可致大鼠发生心脏间质纤维化及心脏收缩功能降低.超声心动图技术能够敏感、快速、无创性地评价阿霉素心肌病大鼠左心室收缩功能的变化.
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右美托咪定对脊神经结扎大鼠大脑皮质一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性的影响
目的 观察鞘内注射右美托咪定(DEX)对脊神经结扎(SNL)大鼠大脑皮质中一氧化氮(N0)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性的影响,并探讨其作用机制.方法 采用大鼠L5/L脊神经结扎模型,随机分为对照组、假手术组、单纯SNL组、SNL后鞘内注射生理盐水组以及DEX治疗组.每组又据处死大鼠的时间不同而分为3个亚组:术后3、7、14 d组.于大鼠脊神经结扎后不同时间点(3、7、14 d)进行行为学评估后断头处死大鼠.取其大脑皮质,测定NO含量和NOS活性.结果 与对照组和假手术组比较,SNL组机械痛阈降低(3.12±0.71),NO含量、总一氧化氮合酶(TNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性在术后3d开始增高(分别为3.14±0.26、11.88±1.62、1.16 ±0.27),一直持续到术后14 d(分别为13.90±2.09、13.90±2.09、1.30±0.35)；与SNL组比较,DEX组机械痛阈升高(9.74±1.48),NO含量、TNOS和iNOS活性明显降低(分别为2.95±0.25、11.84±1.69、0.90±0.15).结论 大鼠大脑皮质中NO、TNOS、iNOS参与了SNL所致神经病理性疼痛的发生,鞘内注射DEX可显著减轻神经病理性疼痛大鼠机械性痛敏,其机制与其抑制脊髓和大脑皮质中NO、TNOS、iNOS的活性有关.
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前路减压植骨融合术后颈椎相邻节段生物力学变化
目的 观察颈椎前路减压植骨融合术后相邻节段生物力学变化.方法 采用EB复合树脂黏合的方法模拟颈椎前路减压植骨术后融合的效果,检测颈椎融合前、后相邻节段运动范围及生物力学的变化.结果 在2.0 Nm力矩不变的情况下,融合节段相邻间隙的运动范围为4.3°～8.0°,与融合前比较差异无统计学意义(P＞0.05)；加大力矩使融合后的颈椎尽量达到术前正常运动范围时融合节段相邻间隙运动范围明显增加,与融合前比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 颈椎融合术后如果仍要达到术前正常的运动范围,其相邻节段的运动范围明显增加,这可能是造成其退变的主要原因.限制颈部术后活动可以减少、甚至避免术后退变的发生.
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卡介苗对大鼠膀胱肿瘤细胞及正常移行上皮细胞的早期影响
目的 通过卡介苗(BCG)单独刺激膀胱肿瘤细胞和正常膀胱移行上皮细胞及代谢产物作用上述细胞,探讨BCG治疗膀胱肿瘤的机制.方法 建立大鼠膀胱肿瘤模型,将大鼠膀胱肿瘤细胞和正常移行上皮细胞原代培养.设普通培养液培养肿瘤细胞(A组),含BCG的培养液培养肿瘤细胞(B组),普通培养液培养正常移行细胞后的上清液培养肿瘤细胞(C组),含BCG培养液培养正常移行细胞后的上清液培养肿瘤细胞(D组)和含BCG培养液培养肿瘤细胞后的上清液培养肿瘤细胞(E组).酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测各组细胞上清液中干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10 (IL-10)的浓度.流式细胞术(FCM)和末端脱氧核苷酸转移酶介导缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡.结果 ELISA检测各组细胞上清液中IFN-γ的浓度无显著改变,波动于(6.5 ～8.5) ng/L.IL-10在B组[(17.165 ±3.434) ng/L],E组[(20.420 ±2.678) ng/L]水平明显高于其他3组；TNF-α在B组[(159.887±5.854) ng/L],D组[(126.227 ±4.812) ng/L]的浓度较其他3组差异有统计学意义(P＜0.05).各组细胞均未检测到凋亡的发生.结论 BCG作用于肿瘤细胞有抑制生长的作用,但不引发凋亡,肿瘤细胞自身能通过分泌IL-10、TNF-α参与调节,逃避免疫细胞对其的打击.
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氟比洛芬酯对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的上调作用
目的 观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后立即给予氟比洛芬酯(FA)治疗对大脑皮质磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)表达的影响及对缺血再灌注(I-R)损伤的保护作用.方法 雄性SD大鼠45只,随机均分为5组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I-R组)、脂微球组(Lip组)、FA 10 mg/kg组(FA10组)和FA 20 mg/kg组(FA20组).脑缺血后立即分别静脉注射相应剂量FA及其脂微球载体,制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,再灌注后24、48、72 h观察神经功能评分,并于72 h后处死大鼠,取大脑皮质用Western blot方法分析瞬时受体电位通道6(TRPC6)和p-CREB的表达；取大脑切片行2％2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色计算脑梗死体积.结果 (1)F10和F20组TRPC6和p-CREB表达均显著高于I-R组(P＜0.01).(2)再灌注后24、48、72 h,F10(12.30±0.84、12.67±1.02、13.17±0.91)和F20组(12.83±1.05、13.00 ±0.68、13.33±0.71)神经功能评分均显著高于I-R组(6.50 ±0.76、7.67 ±0.80、7.83±0.70) (P ＜0.01).(3)I-R组脑梗死体积(24.12±1.98)％显著大于F10组(12.42±1.10)％和F20组(11.73±1.06)％(P＜0.01).结论 FA可能通过TRPC6/CREB通路明显减轻大鼠局灶性脑I-R损伤.
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血清细胞角质蛋白19片段、神经元特异性烯醇化酶和胃泌素释放肽前体水平对原发性肺癌的诊断意义
目的 探讨血清细胞角质蛋白19片段(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胃泌素释放肽前体(ProGRP)水平对原发性肺癌的诊断价值.方法 采用电化学发光免疫分析法(ECLIA)测定CYFRA21-1和NSE,化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)测定ProGRP水平,分别检测161例原发性肺癌、45例肺良性疾病和72例表观健康体检者血清.结果 原发性肺癌组CYFRA21-1、NSE和ProGRP水平均高于肺良性疾病组和健康对照组(P＜0.05)；肺良性疾病组与健康对照组ProGRP水平比较,差异有统计学意义(P＜0.05).对肺癌的诊断效率,敏感度3项联合达72.67％,特异度CYFRA21-1高为97.44％,准确度为3项联合高(76.26％).CYFRA21-1和NSE水平对区分原发性肺癌组织学分级和TNM分期有统计学意义(P＜0.05),ProGRP水平对区分不同组织学类型原发性肺癌具有较好的诊断效率.结论 CYFRA21-1和NSE水平可鉴别肺部良恶性疾病,对原发性肺癌的组织学分级、TNM分期和分型具有较高的诊断意义；ProGRP水平对原发性肺癌组织学分型具有较高的诊断意义.
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肝脏缺血及再灌注时胃肠道动力、胃电图变化及丹参预处理的临床研究
目的 观察肝脏缺血再灌注造成胃肠道淤血后患者肠鸣音恢复时间、肛门排气时间、胃电图变化及丹参对胃肠运动各项指标的影响.方法 将术中行第一肝门阻断的32例患者,随机分为2组:IR组(缺血再灌注组)(n=15)和SM组(丹参预处理组)(n=17),两组均在术中行肝部分切除,pringle法行第一肝门阻断,阻断时间15～20 min,SM组在术前3d及术后5d连续给予丹参注射液20 ml/d静脉滴注.CO组(正常对照组)5例为同意受试工作人员.SO组(阴性对照组)12例为开腹手术而未进行肝门阻断的患者.观察行手术的3组患者肠鸣音恢复时间及肛门排气时间,4组患者记录术前、术后24、48、72 h胃电图变化.结果 IR组肠鸣音恢复时间为(31.13±4.31)h、肛门排气时间为(74.13±12.74)h,SM组分别为(27.65±3.33)、(68.47±11.02)h,均长于SO组[(19.17±3.07)、(28.17±4.86)h](P＜0.05),而SM组肠鸣音恢复、肛门排气时间快于IR组(P＜0.05)；术后SO、IR、SM组胃电振幅幅度[术后24h分别为(161.50±8.99)、(127.93±8.69)、(139.71 ±8.95) μV]、正常慢波比值(术后24 h分别为59.51±4.41、54.49±4.14、56.82±4.62)均较术前降低(P＜0.05),IR组下降明显,恢复慢,SO组术后48 h即恢复,SM组术后72 h恢复,而IR组术后72 h仍未恢复.结论 肝门阻断所致胃肠道淤血导致肠鸣音恢复时间、肛门排气时间均晚于未进行肝门阻断的SO组,胃电图观察亦为同样规律；肝门阻断所致胃肠道淤血时胃电图显示其胃肠运动弱于SO组.丹参可能通过改善微循环、减轻胃肠道水肿,在一定程度上促进胃肠运动尽快恢复.
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骨质疏松对磨损颗粒诱导骨溶解的影响
目的 观察骨质疏松对磨损颗粒诱导骨溶解的影响.方法 将42只6月龄雌性SD大鼠随机分成A、B和C共3组,A组和B组各18只,C组6只.A组大鼠切除双侧卵巢；B组暂不处理；C组分离双侧卵巢,但不切除.饲养3个月后,从A组和B组中各随机选取6只及C组的全部大鼠,处死后行全身骨密度检查,并取右侧胫骨行显微CT(μCT)和骨形态计量学检查.A组中剩余的12只大鼠随机分成A1和A2组,每组6只,A1组大鼠颅骨正中矢状缝骨外膜区域,注入5 mg的金属钛颗粒悬浮液；在A2组植入等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)；同法将B组分为B1和B2组.14d后处死所有剩余大鼠,对大鼠颅骨行μCT及病理切片以检测颅骨溶骨效应.结果 与B组和C组比较,A组的骨密度和胫骨骨形态计量学指标显著降低(P＜0.05),胫骨μCT检查示骨小梁稀疏.A1组和A2组大鼠颅骨行μCT检查溶骨不明显,病理切片检查示A1、A2、B1和B2组矢状缝骨外膜区域内溶骨面积分别为(0.262 ±0.009)、(0.130±0.013)、(0.307 ±0.013)、(0.178 ±0.011) mm2,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在动物模型中,骨质疏松能减缓磨损颗粒诱导的骨溶解过程.
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5-氟尿嘧啶诱导脂多糖激活的巨噬细胞凋亡的研究
目的 探讨5-氟尿嘧啶(5-Fu)对脂多糖(LPS)激活的大鼠巨噬细胞凋亡的影响及其机制.方法 自SD大鼠腹腔提取巨噬细胞,鉴定并判断其活力；LPS(1 mgL)刺激大鼠巨噬细胞建立体外炎症模型；设空白对照组、LPS组及不同浓度的LPS+ 5-Fu组,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,Hoechst染色观察细胞凋亡,并测定半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3活性,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法测定B淋巴细胞/白血病-2(bcl.2)、bax及p53基因表达的改变,Westem blot测定bcl-2、bax、p-Caspase-3及p53/p-p53蛋白表达的变化.结果 大鼠腹腔成功提取巨噬细胞；CCK-8结果显示5-Fu能促进LPS激活的巨噬细胞凋亡(0.749±0.011、0.694±0.009、0.549±0.009、0.525±0.010、0.441±0.014、0.336±0.012比1.036±0.47,P＜0.05);Hoechst染色也观察到LPS+5-Fu组巨噬细胞凋亡显著增加；LPS+ 5-Fu组Caspase-3活性强于LPS组(12.29±0.34、12.75±0.44、15.25±0.58、17.01±0.54比10.92 ±0.24,P ＜0.05);LPS +5-Fu组bcl-2 mRNA的表达显著低于LPS组,且呈剂量依赖性关系(1.99±0.11、1.14 ±0.11、0.76±0.04、0.37±0.05比4.14±0.27,P＜0.05),bax及p53 mRNA的表达则显著高于LPS组,亦呈剂量依赖性关系(38.32±1.70、63.24±4.82、73.83±5.79、166.00±7.00比3.19±0.29,P＜0.05和3.60±0.18、5.47±0.25、6.30±0.13、8.49±0.38比3.16±0.06,P＜0.05)；Western blot结果也显示:5-Fu作用LPS激活的巨噬细胞bcl-2蛋白表达显著下降,bax、p-Caspase-3及p53/p-p53蛋白的表达显著升高.结论 5-Fu的确能诱导LPS激活的大鼠巨噬细胞凋亡,其机制可能与p53途径有关,通过影响Caspase-3、bcl-2及bax活化而促进凋亡.
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敲低E2F1基因对肾透明细胞癌细胞株Caki-2细胞增殖和侵袭力的影响
目的 观察敲低E2F1基因后对肾透明细胞癌细胞株Caki-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 选取肾透明细胞癌细胞株Caki-2,应用脂质体lipo2000将E2F1小干扰RNA(siRNA)序列和阴性对照E2F1序列转染进细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测转染后E2F1的表达,并通过MTS和Transwell法检测细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化.结果 转染siRNA-E2F1组的E2F1 mRNA水平为(37.770±3.782)×10-5,比较未转染组(130.100±6.301) ×10-5和阴性对照组(134.600±7.163)×10-5明显降低(P＜0.05),E2F1蛋白水平也明显降低.在Caki-2中敲低E2F1后24、48、72、96 h MTS吸光度(A)值明显下降(P＜0.05),转染后48 h细胞迁移实验中,转染siRNA-E2F1组的穿膜细胞数为(38.330±4.041),比较未转染组(83.000±8.888)和阴性对照组(87.330±6.429),穿膜细胞数明显减少(P＜0.01)；在细胞侵袭能力实验中,转染siRNA-E2F1组的穿膜细胞数为(78.330±7.572),比较未转染组(143.300±10.066)和阴性对照组(147.000±14.000),穿膜细胞数明显减少(P＜0.01).结论 在肾透明细胞癌细胞株Caki-2中敲低E2F1基因表达后,其细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降.
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白细胞介素-17在糖尿病大鼠肾组织中表达与肾小管-间质病变的关系
目的 观察白细胞介素-17 (IL-17)在糖尿病大鼠肾组织中的表达,探讨其与肾小管-间质病变的关系.方法 90只大鼠随机分为对照组(Con组)、1型糖尿病组(T1DM组)及2型糖尿病组(T2DM组),以50 mg/kg链脲佐菌素(STZ)制备1型糖尿病模型,以高脂高糖饮食及25 mg/kgSTZ制备2型糖尿病模型.于2周、4周末采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血、尿中IL-17水平；4周末采用免疫组织化学染色及Western blot检测肾组织中IL-17及转化生长因子-β1(TGF-β1)水平.结果 糖尿病大鼠2、4周末血、尿中IL-17升高；IL-17在Con组肾组织无表达,仅在糖尿病大鼠肾小管-间质中表达,T1DM组0.2357±0.0410,T2DM组0.1809±0.0090(P＜0.05)；TGF-β1肾组织表达,T1DM组0.1412±0.0610,T2DM组0.2809±0.0420 (P＜0.05)；肾组织IL-17与尿液IL-17水平呈正相关(r=0.715,P＜0.05).结论 IL-17参与糖尿病肾小管-间质病变的发生；IL-17和TGF-β1在1型和2型糖尿病发展为糖尿病肾病中的作用机制存在差异.
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核因子-κB受体活化因子配体单克隆抗体对骨髓瘤小鼠调节性T细胞分化的影响
目的 观察核因子-κB受体活化因子配体(Rankl)单克隆抗体对骨髓瘤小鼠体内调节性T细胞(Treg)分化的影响.方法 用Rankl单克隆抗体通过尾静脉注射干预人骨髓瘤小鼠皮下模型后,检测肿瘤局部Treg浸润及Rankl的表达,小鼠模型分空白对照组A、高剂量组B、低剂量组C.结果 抗体干预后,3组小鼠腹部皮下包块直径:A组(0.970±0.216) cm,B组(0.560±0.164) cm,C组(0.410±0.152) cm(P ＜0.05)；流式细胞分析小鼠外周血Treg比率:A组(8.19±1.27)％,B组(6.32±0.74)％,C组(3.84±0.43)％(P＜0.05)；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿块局部Rankl mRNA表达(ACt值):A组0.565±0.029,B组3.390±0.333,C组1.041±0.083(P＜0.0l).结论 骨髓瘤细胞可能通过表达Rankl促进Treg的分化,抑制机体正常免疫,利用Rankl单克隆抗体阻断这一信号通路可以减少Treg的分化.
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分化抑制因子1、3及基质金属蛋白酶9在脑转移瘤组织中的表达及意义
目的 观察分化抑制因子1(Id-1)、Id-3和基质金属蛋白酶9(MMP-9) mRNA、蛋白在脑转移瘤组织中的表达,探讨它们在脑转移瘤形成和发展过程中的作用及机制.方法 对39例脑转移瘤标本采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法,观察Id-1、Id-3、MMP-9 mRNA及蛋白表达,并探讨它们表达之间的相关性.结果 Id-1、Id-3、MMP-9 mRNA在脑转移瘤中的相对表达量分别为0.75±0.07、0.83 ±0.06、0.72±0.09,明显高于正常脑组织(P＜0.05)；三者蛋白在脑转移瘤中的阳性表达率分别为92.3％、94.9％、79.5％,与正常脑组织比较表达明显增高(P＜0.05).Id-1、Id-3与MMP-9 mRNA及蛋白表达均呈显著正相关(r=0.569,P＜0.01;r=0.386,P＜0.05).结论 Id-1、Id-3、MMP-9在脑转移瘤的形成与发展中发挥重要作用,且三者存在一定的协同作用.
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猪主动脉内皮细胞株的建立和鉴定
目的 建立猪主动脉内皮细胞株,为以猪为供体的异种移植研究提供必要的细胞水平研究平台.方法 分离健康幼猪主动脉内皮细胞并用携带链霉素抗性和猿猴病毒40大T抗原(SV40LT)基因的慢病毒转染细胞.检测SV40LT基因和α-1,3-半乳糖转移酶(α-1,3-GT)基因和d-1,3-半乳糖抗原表达.后测定2类细胞与人血清发生反应的能力.结果 聚合酶链反应(PCR)结果显示,SV40LT基因在转染后细胞内高表达(P＜0.05).原代细胞倍增时间约为21 h,而细胞株倍增时间约18h.2类细胞均具有吞噬低密度脂蛋白(LDL)和表达血管性假性血友病因子(vWF)因子特性(P＞0.05).α-1,3-GT基因和α-1,3-半乳糖抗原在2类细胞内表达均无差异[荧光强度分别为(498.2±3.5)和(500.6±3.2),P＞0.05].与人血清共培养时,随血清浓度升高,2类内皮细胞的增殖能力下降、细胞凋亡率增加,并均可结合人IgM抗体、C3和C5b-9 (P ＞0.05).结论 猪动脉内皮细胞株具有与原代内皮细胞相同的形态结构和表型特征,并具有和人血清发生免疫反应的能力.
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表没食子儿茶素没食子酸酯通过转化生长因子-β1/信号传导与转录激活因子-3信号通路抑制恶性黑素瘤上皮-间质转化
目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)能否通过转化生长因子-β1 (TGF-β1)/信号传导与转录激活因子-3(STAT3)信号通路对恶性黑素瘤上皮-间质转化(EMT)产生影响.方法 采用倒置相差显微镜观察不同浓度的EGCG(5、25、50 mg/L)对TGF-β1(5μg/L)刺激的B16黑素瘤细胞作用24h后细胞形态、迁移能力和侵袭力变化.Western blot法检测细胞磷酸化STAT3(p-STAT3)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达.建立B16肿瘤动物模型,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组瘤组织E-cadhein mRNA表达.结果 (1) TGF-β1(5μg/L)刺激B16细胞后细胞间连接不紧密,形态为长梭形,不同浓度EGCG(5、25、50 mg/L)作用于TGF-β1(5μg/L)刺激B16细胞24h后细胞连接较为紧密,且随浓度增加改变更加明显,细胞划痕间距逐渐增大,Transwell小室检测穿膜数依次为97.00 ±9.97、60.30±4.00、38.75 ±7.18,侵袭力与EGCG浓度呈负相关(r=-0.92,P＜0.05).(2)不同浓度EGCG刺激组p-STAT3的表达逐渐降低,E-cadherin表达逐渐升高,且呈浓度依赖性,p-STAT3与E-Cadherin表达亦呈负相关(r=-0.805,P＜0.05).(3) EGCG干预后肿瘤组织中E-cadhein mRNA水平明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 EGCG具有明显抑制B16细胞EMT作用,其机制与抑制TGF-β1/STAT3信号通路相关.
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复方861合剂对肝星状细胞HSC-Tc-fos和c-jun基因表达的影响
目的 观察中药复方861合剂对肝星状细胞c-fos和c-jun基因表达的影响.方法 在培养的肝星状细胞株中分别加入不同浓度的复方861合剂(终质量浓度1.00,0.50,0.25 g/L)；于8、24、48、72h 4个时间点分别收集细胞,提取肝星状细胞总RNA；用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定c-fos和c-jun的基因表达水平.结果 复方861合剂3组HSC-T细胞c-fos基因表达水平在8 h(0.13 ±0.04、0.20 ±0.05、0.36±0.09)、24 h(0.10±0.03、0.16 ±0.04、0.30±0.05)、48 h(0.08 ±0.02、0.12 ±0.03、0.26±0.04)、72 h(0.06 ±0.01、0.09±0.02、0.21 ±0.03)4个时间点均明显低于对照组(0.63±0.13、0.50±0.12、0.43±0.06、0.32±0.04)；c-jun基因表达水平在8h(0.20±0.04、0.36 ±0.06、0.53 ±0.10)、24 h(0.17 ±0.04、0.32 ±0.07、0.47 ±0.10)、48 h(0.13 ±0.03、0.30±0.06、0.40±0.08)、72 h(0.10±0.02、0.23±0.03、0.32 ±0.04)4个时间点也均明显低于对照组(0.93±0.13、0.80 ±0.12、0.63±0.10、0.32±0.04).随剂量加大,HSC-T细胞c-fos、c-jun基因表达水平逐渐降低；3组间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 复方861合剂对肝星状细胞c-fos和c-jun基因表达有明显的下调作用.
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SOCS-1在小鼠内毒素急性肝损伤的表达变化及其抗免疫损伤作用
目的 观察细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS-1)在内毒素-脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肝损伤中肝组织的表达变化,探讨SOCS-1调控肝脏免疫炎性损伤作用的可能机制.方法 72只雄性BALB/c小鼠随机分为以下3组,每组24只小鼠.A组:急性肝损伤模型组(ALI组),半乳糖胺(D-GaIN)溶于无菌0.9％氯化钠注射液,用1 mol氢氧化钠调至pH 7.0,与LPS同时腹腔注射,所用D-GaIN和LPS剂量分别为0.02μg/只和4.00 μg/只；B组:内毒素耐受组(ETT组),LPS溶于无菌0.9％氯化钠注射液,以0.002 μg/kg小剂量腹腔注射,1次/d,连续5次,于LPS第5次注射24h后腹腔注射D-GaIN/LPS,剂量和处理与ALI组相同；C组:正常对照组,腹腔注射0.9％氯化钠注射液0.2ml.上述各实验组小鼠分别于注射D-GaIN/LPS或0.9％氯化钠注射液6、12、24h后的3个时间点留取小鼠血及肝脏标本.观察肝组织病理变化；检测小鼠肝组织中SOCS-1 mRNA和蛋白的表达；同时检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α以及血清氨酸氨基转移酶(ALT)和总胆红素(TBiL)水平.结果 ALI组肝组织可见大片肝细胞变性、坏死以及汇管区有较多的炎性细胞浸润等病理改变,ALI组小鼠肝组织SOCS-1 mRNA和蛋白的表达均明显上调,造模后6h即明显高于正常对照组,且分别于12 h达到高峰(P＜0.05)；ETT组的肝组织病理改变明显轻于ALI组,其血清TNF-α、ALT、TBiL水平明显低于ALI组(P＜0.05),而ETT组的SOCS-1 mRNA和蛋白的表达则较ALI组上升更为明显(P＜0.05).结论 LPS导致的小鼠ALI可诱导SOCS-1在肝组织的表达增多；内毒素耐受时,对其后大剂量LPS的再次刺激而引起肝脏损害减轻、TNF-α释放减少,则可能与肝组织SOCS-1进一步高表达有关；该研究提示SOCS-1在调控肝脏免疫炎性损伤中可能具有抗损伤作用.
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微小RNA-34b及靶基因c-Myc在膀胱癌中的作用
目的 探讨微小RNA(miR)-34b及c-Myc在膀胱癌中的作用及验证两者相互作用关系.方法 分别通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-34b与c-Myc基因在36对膀胱癌及瘤旁组织中的表达,分析两基因表达与肿瘤分类(肌层浸润型与非肌层浸润型)及病理分级的关系.然后,采用Transwell法观察miR-34b及c-Myc对膀胱癌细胞T24侵袭能力的影响,采用生物信息学软件及荧光素酶实验验证miR-34b及c-Myc是否存在直接作用.结果 与瘤旁组织比较,c-Myc在膀胱癌中表达升高(3.27±0.68)倍,肌层浸润组c-Myc表达为非肌层浸润组的(2.48±0.32)倍,其表达水平随着病理分级升高而升高(P＜0.05).相反,miR-34b在膀胱癌中表达降低(2.13±0.43)倍,肌层浸润组miR-34b的表达明显低于非肌层浸润组,后者为前者的(3.78±0.25)倍,miR-34b表达水平随着病理分级升高而降低(P＜0.05).过表达miR-34b或沉默c-Myc后膀胱癌细胞T24的侵袭能力均降低.生物信息学软件及荧光素酶实验证实c-Myc为miR-34b的直接靶基因.结论 miR-34b表达下调可能通过上调其靶基因c-Myc而增加膀胱癌的恶性程度.
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抑制Dicer基因对肾透明细胞癌细胞株769-P细胞增殖和迁移的影响
目的 观察抑制Dicer基因后对肾透明细胞癌细胞株769-P细胞增殖和迁移的影响.方法 选取肾透明细胞癌细胞株769-P,应用脂质体介导方法转染Dicer siRNA序列和对照Dicer Mock序列细胞,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot方法检测转染后Dicer的表达,并通过MTS和Transwell方法检测细胞增殖和细胞迁移能力的变化.结果 与未转染组和转染Dicer Mock序列组比较,转染Dicer siRNA序列组的Dicer mRNA水平在转染后24、48、72 h明显降低(分别为0.001 562 ±0.000 132、0.000492±0.000039、0.000752±0.000114,P＜0.01),且在转染后48 h明显,转染Dicer siRNA序列组的蛋白水平在转染后48 h也明显降低(1.062±0.207,P＜0.01).转染Dicer siRNA序列组的MTS吸光度(A)值在转染后24、48、72、96 h明显增高(分别为0.451±0.016、0.544 ±0.017、0.612±0.016、0.651±0.015,P＜0.01),Transwell穿膜细胞数在转染后48 h也明显增多(93.100±8.999,P＜0.01).结论 抑制Dicer基因在肾透明细胞癌细胞株769-P中表达后,其细胞增殖能力和细胞迁移能力明显增强.
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去分化重编排脂肪干细胞在张应力刺激下成骨分化的研究
目的 探讨去分化重编排脂肪干细胞在张应力刺激下的成骨分化并探讨其分子机制.方法 分离人脂肪干细胞(hASCs),取第3代hASCs进行去分化重编排并标记为去分化重编排脂肪干细胞(De-hASCs).张应力刺激条件下,将De-hASCs和hASCs在成骨诱导液中培养1周.并于培养4d和7d后检测碱性磷酸酶(ALP)活性,Runx2的mRNA和蛋白表达水平,骨形态发生蛋白(BMP)-2和基质金属蛋白酶(MMP)-3的mRNA表达水平.结果 张应力刺激4d后,De-hASCs组的ALP活性高于hASCs组,但差异无统计学意义(P＞0.05).张应力刺激7d后,De-hASCs组ALP活性高于hASCs组,且差异有统计学意义(P＜0.05).张应力刺激4d和7d后,De-hASCs组Runx2的mRNA和蛋白表达水平均明显高于hASCs组,且差异有统计学意义(P＜0.05).张应力刺激4d和7d后,De-hASCs组BMP-2和MMP-3的mRNA表达水平均明显高于hASCs组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 张应力刺激条件下,去分化重编排脂肪干细胞具有更强的成骨分化能力,且与其上调BMP-2和MMP-3基因表达相关.
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生物反应器内构建组织工程心脏瓣膜
目的 去细胞瓣膜上种植人主动脉瓣膜间质细胞,生物反应器内构建组织工程心脏瓣膜.方法 PEG交联去细胞瓣,GRGDSPC多肽共价修饰.RGD-PEG-去细胞瓣上种植人主动脉瓣膜间质细胞,缝制于生物反应器内.接种2、4、8h后,细胞计数观察细胞黏附情况.体外培养10d后行形态学观察和DNA含量测定.结果 免疫荧光检测显示,GRGDSPC多肽与PEG-去细胞瓣有效共价接枝.接种2、4、8h后,RGD-PEG-去细胞瓣组和单纯去细胞瓣组细胞计数分别为:(4.98±0.46)×107/L比(3.35 ±0.15)×107/L,(5.71 ±0.29)× 104 个/ml比(3.55±0.18)×107/L,(5.97±0.45)×107/L比(3.62±0.18) ×107/L,P＜0.05.RGD-PEG-去细胞瓣组较单纯去细胞瓣组DNA含量明显增高,(25.98±2.45)μg/瓣叶比(19.61±1.94)μg瓣叶,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 生物反应器内,GRGDSPC接枝的PEG-去细胞瓣复合支架,可促进种子细胞的黏附,改善瓣膜支架生物学性能.
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纳米金联合5-氟尿嘧啶对裸鼠肝癌血管及肿瘤生长的影响
目的 观察纳米金联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对裸鼠H22肝癌血管及肿瘤生长的影响.方法 6周龄BALB/C裸鼠21只,从右腋皮下注入H22肝癌细胞,肿瘤形成直径7～8mm大小,随机分3组.5-Fu单药组从肿瘤周围及瘤内注入5-Fu溶液0.2ml(浓度为1.25 g/L)；联合组则增加注射纳米金(浓度为500nmoL/L)溶液0.2ml；对照组用等量生理盐水处理,连续用药7d.处死裸鼠,测量肿瘤体积.免疫组织化学染色计算肿瘤微血管密度(MVD)、微血管成熟周细胞覆盖度(MPI).Western blot检测G蛋白信号调节蛋白-5(RGS-5)的表达.高效液相色谱检测肿瘤组织中5-Fu的浓度.结果 (1)联合组、单药组及对照组其肿瘤体积分别为(1.487±0.859)、(2.137±1.047)、(5.462±1.233) cm3；肿瘤MVD分别为(23±7)、(43±12)、(67±l7)血管数/mm2；肿瘤MPI分别为(69.7±16.2)％、(37.5±l1.3)％、(17.3±9.4)％.联合组在降低肿瘤体积、MVD及提高MPI方面,较单药组及对照组差异有统计学意义(P＜0.05).(2)联合组与单药组其肿瘤组织内5-Fu浓度分别为(8.25±0.66)、(5.37±0.41) mg/L.联合组其化疗药物浓度明显高于单药组,两者差异有统计学意义(P＜0.05).(3) Western blot检测联合组RGS-5表达量较单药组及对照组减少.结论 纳米金能提高5-Fu在实体瘤内浓度,增强抗肿瘤生长作用；纳米金可以抑制RGS-5蛋白表达、上调MPI,影响肿瘤血管形态.
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丹参对肝星状细胞c-fos和c-jun基因表达的影响
目的 观察丹参对肝星状细胞c-fos和c-jun基因表达的影响.方法 在培养的肝星状细胞株中分别加入不同浓度的丹参(终质量浓度分别为0.8、0.4g/L)；于8、24、48、72 h4个时间点分别收集细胞,提取肝星状细胞总RNA；用逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)方法测定c-fos和c_jun的基因表达水平.结果 丹参两组HSC-T细胞c-fos基因表达水平在8 h(0.30±0.08、0.48±0.11)、24 h(0.26 ±0.09、0.43±0.10)、48 h(0.20±0.06、0.36 ±0.09)、72 h(0.13 ±0.04、0.23±0.06)4个时间点均明显低于对照组(0.63±0.13、0.50±0.12、0.43 ±0.06、0.32±0.04)；c-jun基因表达水平在8 h(0.43±0.12、0.69±0.14)、24 h(0.38±0.09、0.56±0.10)、48 h(0.27±0.08、0.46±0.10)、72 h(0.20±0.04、0.34 ±0.06)4个时间点也均明显低于对照组(0.93±0.13、0.80±0.12、0.63±0.10、0.46±0.07)；随剂量加大,HSC-T细胞c-fos、c-jun基因表达水平逐渐降低；两组间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 丹参对肝星状细胞c-fos和c-jun基因表达有明显的下调作用.
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槲皮素对兔缺血再灌注心肌还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、一氧化氮合酶基因和蛋白表达的影响
目的 观察槲皮素对兔缺血再灌注心肌还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NOX2)、一氧化氮合酶(NOS)基因和蛋白表达的影响.方法 建立成年家兔心肌缺血再灌注模型,结扎左缘支30 min,再灌注12h.实验分4组:空白对照组(control)、缺血再灌注组(I/R)、槲皮素组(Que)、槲皮素+缺血再灌注组(I/R+ Que).采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot方法检测心肌NOX2、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA和蛋白的表达.结果 I/R组NOX2 mRNA和蛋白表达分别为1.73±0.41、3.46 ±0.84,iNOS mRNA和蛋白表达分别为0.29±0.11、0.29 ±0.11,较对照组明显增高(P＜0.01),eNOS变化不明显(P＜0.01).给予槲皮素后,Que组NOX2 mRNA和蛋白表达分别为0.40±0.08、0.56 ±0.28,eNOS mRNA和蛋白表达分别为0.22±0.07、0.95±0.23,iNOS mRNA和蛋白表达分别为0.02±0.01、0.87±0.31;I/R+ Que组NOX2 mRNA和蛋白表达分别为1.03 ±0.31、2.05 ±0.49,eNOS mRNA和蛋白表达分别为0.32±0.09、1.12±0.36,iNOS mRNA和蛋白表达分别为0.16 ±0.05、3.17±1.29;较对照组水平明显降低(P＜0.01).结论 心肌缺血再灌注后,NOX2、iNOS表达增加；槲皮素明显减少心肌缺血再灌注后NOX2、iNOS和eNOS的表达.
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UC001kfo通过调控α-平滑肌肌动蛋白参与肝癌细胞侵袭转移的研究
目的 探讨UC001kfo对肝癌细胞侵袭的影响及调控目标是否为α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA).方法 以肝癌细胞HepG2为细胞模型,分为UC001 kfo RNA干扰组(UC001 kfo-siRNA组)和阴性对照组,每组3个复孔,实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测沉默效率,细胞划痕试验和Transwell小室试验分析HepG2侵袭转移能力,RT-qPCR检测α-SMA mRNA的表达,并将UC001kfo和α-SMA的表达量进行相关分析.结果 划痕试验结果显示,阴性对照组、UC001 kfo-siRNA组48 h迁移距离分别为(17.55 ±0.44)um,UC001kfo-siRNA组(10.55±0.41) μm,差异有统计学意义(P ＜0.01)；Transwell小室侵袭试验结果显示,UC001kfo-siRNA组穿膜细胞数[(56±10)个]明显少于阴性对照组[(141±21)个,P＜0.01]；RT-qPCR结果显示UC001 kfo-siRNA组UC001 kfo相对阴性对照组的表达量为0.23 ±0.20,α-SMA的表达量为0.36 ±0.17,与阴性对照组比较两者表达差异有统计学意义(P＜0.05),相关分析表明α-SMA与UC001kfo的表达量呈正相关(r=0.997,P＜0.05).结论 UC001kfo通过调控α-SMA的表达促进肝癌细胞的迁移侵袭.
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激活γ-氨基丁酸B型受体对糖尿病神经痛大鼠脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基表达的影响
目的 利用γ-氨基丁酸B型受体(GABAR)受体激动剂(巴氯芬)和拮抗剂(CGP55845),探讨激活GABAB受体对糖尿病神经痛大鼠脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NMDA-2B、NR2B)表达的影响.方法 62只SD雄性大鼠随机分为两组:正常对照组(C组)和糖尿病神经痛模型组(D组),腹腔分别注射生理盐水或链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg).50只大鼠腹腔注射STZ,4周后36只大鼠成功制备成糖尿病神经痛(DNP)模型并鞘内置管,根据鞘内给药(共20μ1)随机分为3组(n=12):DNP对照组(D1组):生理盐水10 μl+生理盐水10μ；巴氯芬组(D2组):生理盐水10 μ1+巴氯芬0.5μg;CGP55845+巴氯芬组(D3组):CGP55845 10 μg+巴氯芬0.5 μg；12只同周龄正常大鼠腹腔注射生理盐水并鞘内置管作为C组,鞘内注射生理盐水10μl+生理盐水10μl.4组大鼠两次鞘内注射间隔15 min,连续4d,每天鞘内注射前、后30 min测定大鼠50％机械缩足阈值(PWT),各时点分别为:T1、T2、T3、T4,后1次测完后取大鼠脊髓背角,采用分子生物学方法测定p-CREB、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和NR2B受体表达变化.结果 与C组比较,D1、D3两组大鼠T1-T4各时点PWT明显降低(P＜0.05),p-CREB和NR2B蛋白表达及NR2B mRNA表达明显增多(P＜0.05)；与D1组比较,D2组大鼠各时点PWT显著升高(P＜0.05)；与D1组p-CREB(0.76 ±0.13)、NR2B(1.28 ±0.14)蛋白表达、NR2B mRNA表达(0.83±0.10)比较,D2组p-CREB (0.45±0.08)和NR2B(0.88 0.13)蛋白表达及NR2B mRNA表达(0.53±0.08)显著降低(P＜0.05).4组间比较,CREB蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 激活GABAB受体可使糖尿病神经痛大鼠脊髓背角p-CREB、NR2B蛋白表达下调,抑制糖尿病神经痛.
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自噬参与压力诱导兔髓核细胞退变的研究
目的 观察自噬是否参与压力诱导兔髓核细胞退变,探讨压力诱导髓核细胞退变机制.方法 从3月龄兔胸腰段脊柱提取兔髓核细胞培养,取第2代兔髓核细胞,1 Mpa压力环境下培养12、24、48 h.细胞活力与细胞毒性检测观察压力对细胞生长的影响,透射电镜观察压力条件下细胞的微观结构,单丹磺酰尸胺(MDC)染色观察细胞内自噬性空泡结构及自噬率,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)观察自噬相关基因在压力条件下的表达.结果 压力导致细胞衰老及死亡,透射电镜见细胞内存在自噬体结构,MDC染色后行流式细胞学检测显示12、24、48 h自噬率分别为(1.580±0.171)％、(7.930±0.252)％、(13.530±1.206)％,PCR结果显示压力诱导自噬相关基因(LC3B、Beclin-1)表达量与正常条件下表达明显增多(P＜0.05),且随着压力培养时间延长,LC3B、Beclin-1表达量也明显增多(P＜0.05).结论 自噬参与压力诱导细胞退变的过程,为压力诱导椎间盘髓核细胞退变的防治提供新的途径.
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不同浓度血小板衍生因子BB和碱性成纤维细胞生长因子对人肌腱细胞增殖和胶原形成的影响
目的 观察低浓度血清条件下不同浓度的血小板衍生因子BB(PDGFBB)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在人肌腱细胞体外培养中对人肌腱细胞的增殖和胶原形成的影响.方法 在含0％和1％胎牛血清(FBS)的c-MEM培养基中,加入PDGFBB(5、10、50 μg/L),bFGF(5、10、50 μg/L)进行人肌腱细胞培养,10％ FBS的培养组作为对照组.使用拉马拉蓝测定细胞增殖速度及天狼猩红染色定量肌腱细胞胶原产生.结果 培养基内加入50 μg/L PDGFBB+50 μg/L bFGF可以把FBS的使用量降至1％,并达到10％ FBS的增殖速率(约4倍增加),差异无统计学意义(P＞0.05)；50 μg/LPDGFB +50 μg/L bFGF明显抑制肌腱细胞胶原形成(0.211 ±0.002) ng,与对照组比较[(0.485±0.068) ng],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 使用50 μg/L PDGFBB+50 μg/L bFGF添加于α-MEM培养基,可以把FBS使用量降至1％,不但可以达到10％ FBS的增殖速率,还能够抑制肌腱细胞的胶原产生.
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兔脂肪间充质干细胞的生物学特性及其成骨诱导分化的研究
目的 探讨脂肪间充质干细胞的分离培养方法,观察其生物学特性及成骨分化潜能.方法 将成年日本大耳白兔的腹股沟白色脂肪组织分离取出,通过1％Ⅰ型胶原酶消化逐步提取脂肪间充质干细胞,待细胞融合约80％时传代,定期用倒置显微镜观察细胞间充质干细胞的超微结构、表面分子标志表达,收集第3、5、10、15代细胞,描绘其生长曲线,加入成骨诱导培养液进行诱导分化并观察.结果 脂肪间充质干细胞各代的生长曲线无明显差异,均成“S”形.Gomori萘酚磷酸酯法染色显示其胞质内富含碱性磷酸酶颗粒、Von Kossa染色显示聚集的细胞团能形成矿化结节.脂肪间充质干细胞表面标志检测结果为:CD29和CD44阳性,CD34和CD45阴性.结论 脂肪间充质干细胞来源广泛、含量丰富、生物学性能稳定,具有成骨分化潜能.
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含有WW结构域的氧化还原酶基因对人骨肉瘤细胞MG-63生长抑制作用及机制
目的 探讨含有WW结构域的氧化还原酶的基因(WWOX)的表达对人骨肉瘤细胞株MG-63的生长抑制作用及机制.方法 构建WWOX重组真核表达质粒,转染入骨肉瘤细胞株MG-63,流式细胞仪膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V/PI)双染色法检测MG-63的凋亡,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MG-63中B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)与WWOX基因的扩增,Western blot 法检测MG-63中bcl-2和WWOX蛋白的表达.结果 建立稳定表达WWOX的骨肉瘤细胞模型,流式细胞仪Annexin V/PI双染法显示转染WWOX组骨肉瘤细胞较转染WWOX组和对照组凋亡明显增加[(8.21±0.03)％比(1.13±0.03)％比(1.12±0.02)％,P ＜0.05],转染WWOX组的WWOX mRNA表达明显增加(1.612±0.072),WWOX蛋白表达明显升高(1.680 ±0.072),与其他组比较差异有统计学意义(P＜0.05),转染WWOX组的bcl-2 mRNA表达明显降低(0.194±0.088),bcl-2蛋白表达明显降低(0.236 ±0.053),与其他组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 转染WOX的骨肉瘤细胞MG-63表达增加,bcl-2表达降低,骨肉瘤细胞的凋亡增加,可能与bcl-2的表达下调有关.
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微小RNA145对人脐静脉血管内皮细胞增殖迁移的影响
目的 观察微小RNA145 (miR145)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖和迁移能力的影响.方法 转染miR145模拟物和阴性对照序列进入人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测转染后HUVECs细胞的增殖能力,Transwell小室检测转染后HUVECs细胞的迁移能力.用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR145候选靶基因去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)的mRNA表达水平,Westem blot检测ADAM17蛋白的表达水平.结果 转染48 h后,转染miR145模拟物组的吸光度(A)值(0.34±0.01)明显低于阴性对照组A值(0.44 ±0.01,P＜0.01)；转染72 h后,转染miR145模拟物组的A值(0.60±0.09)也显著低于阴性对照组A值(0.86±0.05,P＜0.01).转染miR145组的细胞迁移穿过Transwell小室膜的细胞数[(135±6)个]明显少于阴性对照组穿过小室膜的细胞数[(205±30)个,P＜0.05].转染miR145模拟物组的ADAM17的mRNA和蛋白水平均呈现下调,Real-time PCR的相对值为0.34 ±0.15(P＜0.01)；Western blot灰度值为0.65±0.21(P ＜0.05).结论 miR145能够显著抑制HUVECs的增殖和迁移能力,且miR145可能通过ADAM17实现调控血管内皮细胞增殖和迁移功能.
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拓扑异构酶Ⅱ对人脑胶质瘤多药耐药性的逆转作用
目的 观察拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)逆转胶质瘤多药耐药的效果.方法 依托泊苷诱导构建多药耐药细胞株U251/MDR,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测该细胞株的多药耐药性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TopoⅡ在U251和U251/MDR中的表达变化.采用小干扰RNA(siRNA)技术沉默耐药细胞株中TopoⅡ的表达后,检测其对化疗药物敏感性变化.结果 成功构建多药耐药细胞株U251/MDR,替莫唑胺、依托泊苷、长春新碱、阿霉素、环磷酰胺对U251/MDR的半数抑制浓度(IC50)分别为:(12.58±0.53)、(12.41±0.49)、(3.98±0.38)、(4.13±0.28)、(20.88±0.62) mg/L,对亲本细胞U251的IC50值分别为:(3.42±0.36)、(3.86±0.22)、(2.14±0.25)、(1.87±0.09)、(5.35±0.37) mg/L,U251/MDR中TopoⅡ的表达明显升高,沉默TopoⅡ的表达后,耐药性被成功逆转,沉默前后替莫唑胺、依托泊苷、长春新碱、阿霉素、环磷酰胺对其的IC50值分别为:(13.16±0.45)/(4.58 ±0.27)、(12.18±0.39)/(4.96±0.18)、(3.87 ±0.27)/(2.36±0.15)、(4.86±0.19)/(1.24±0.08)、(19.96±0.56)/(7.38±0.24) mg/L.结论 TopoⅡ可以逆转胶质瘤的多药耐药性.
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百里醌联合阿霉素对体内外骨肉瘤生长的影响
目的 探讨百里醌联合阿霉素对人骨肉瘤细胞生长的影响及其机制.方法 应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞存活率；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot检测bax及B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)的表达；建立裸鼠骨肉瘤皮下移植瘤模型,计算抑瘤率,免疫组织化学法检测裸鼠肿瘤组织中细胞核增殖抗原(Ki-67)、bax及bcl-2的表达.结果 阿霉素或百里醌单独及阿霉素联合百里醌作用骨肉瘤细胞后,细胞存活率分别为(78.94±8.75)％、(67.41±5.26)％和(38.81 ±3.58)％,细胞早期凋亡率分别为(8.85±1.25)％、(11.26±2.51)％和(27.15±3.25)％,联合用药组细胞存活率均低于各单药组和对照组(P＜0.05),联合用药组细胞凋亡率均高于其他各组(P＜0.05)；阿霉素联合百里醌作用于骨肉瘤细胞后,骨肉瘤细胞中bax蛋白表达明显增加,丽bcl-2的表达显著减少；体内实验显示百里醌组、阿霉素组和联合用药组抑瘤率分别为37.51％、48.37％和66.85％,联合用药组与各单药组及对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；与对照组比较,联合用药组裸鼠肿瘤组织中Ki-67和bel-2的阳性表达明显减弱,而bax的表达明显增强,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 百里醌联合阿霉素可明显增强阿霉素对体外及体内骨肉瘤细胞的生长抑制作用,该作用可能通过下调bcl-2及上调bax表达而实现.
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自噬机制在雷帕霉素对肝癌细胞化疗增敏中的研究
目的 观察雷帕霉素联合应用表阿霉素抑制HepG2细胞的程度,并探讨自噬在其中的作用.方法 分组用药后,测定对HepG2细胞增殖的抑制作用；流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位,荧光染色法检测自噬体形成以及Western blot测定p62、Beclin1、人微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ的蛋白表达水平.结果 联合用药后,抑瘤率(67.00±2.45)％较单药组(23.00±1.85)％显著增加(P＜0.05),线粒体膜电位(荧光比61.14％)较单药组(荧光比25.73％)明显下降(P＜0.01),自噬囊泡增多,并明显增加了LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值以及p62表达.结论 雷帕霉素阻断雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路可诱导HepG2细胞自噬,联合表阿霉素时能增加自噬水平,提高HepG2细胞的化疗敏感性.
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桥梁分子1-S的SH3结构域对胶质瘤细胞增殖和运动能力的影响
目的 观察桥梁分子1-S(ITSN1-S)的SH3结构域对恶性胶质瘤细胞LN229增殖和运动能力的影响,并探讨其相关分子机制.方法 将ITSN1-S的全长和去除SH3结构域的ITSN1-S(即EH1-EH2-CC片段)分别连接人双酶切后线性化的PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体中作为实验组,用不作处理的PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体作为对照组,通过慢病毒转染上述3个重组质粒进入LN229细胞,筛选稳定表达的细胞克隆；Western blot检测目的蛋白的表达；噻唑蓝(MTT)实验检测连续培养6d各组胶质瘤细胞的增殖；软琼脂克隆形成实验检测连续培养2周的各组胶质瘤细胞克隆形成能力；划痕试验检测各组胶质瘤细胞在0、3、6、9、12、24 h的非定向运动能力.结果 MTT实验和软琼脂克隆形成实验均证明ITSN1-S全长组细胞的增殖能力比EH1-EH2-CC片段组和空载体对照组显著增强(P＜0.05),但EH1-EH2-CC片段组和空载体对照组两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).第6天时ITSN1-S全长组、EH1-EH2-CC片段组和空载体对照组细胞增殖率分别为(523.60±32.12)％、(409.54±31.33)％和(353.89±13.98)％；第14天时ITSN1-S全长组克隆形成率达(46.49±2.34)％,而EH1-EH2-CC片段组和空载体对照组克隆形成率分别为(23.00±1.66)％和(17.68±3.47)％.划痕试验12 h时ITSN1-S全长组细胞的运动速度比EH1-EH2-CC片段组和空载体对照组明显提高(P＜0.05),但EH1-EH2-CC片段组和空载体对照组两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).24 h时ITSN1-S全长组运动距离为(0.39±0.02) mm,EH1-EH2-CC片段组和空载体对照组分别为(0.30±0.02) mm和(0.29±0.01)mm.结论 ITSN1-S参与调节胶质瘤细胞的增殖和运动,ITSN1-S中SH3结构域是影响胶质瘤细胞增殖与运动能力的主要功能结构域.
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红色/绿色荧光蛋白示踪胶质瘤干祖细胞在肿瘤血管形成中的作用
目的 探讨胶质瘤干祖细胞在胶质瘤血管形成过程中所起的作用.方法 将转染红色荧光蛋白(RFP)基因的胶质瘤干祖细胞,原位(25μ,1×106个细胞)或皮下(200μl,1×106个细胞)植入4～6周龄的表达绿色荧光蛋白(GFP)的裸小鼠内,2～3周致瘤后取移植瘤组织压成簿片后在荧光、激光共聚焦显微镜下观察肿瘤血管.结果 在22个标本中根据颜色区分出血管的组成细胞有宿主源性(绿色)、肿瘤源性(红色)和两者的融合细胞(黄色)；组成肿瘤血管的细胞类型有:内皮依赖(EC),遍布肿瘤组织内；肿瘤细胞依赖型(TC)的血管拟态(VM)和EC/TC嵌合型(马赛克血管,MC).其中VM、MC多位于肿瘤组织中心,肿瘤边缘未见到.结论 携RFP的胶质瘤干祖细胞移植入表达GFP的裸小鼠体内的移植瘤模型是研究肿瘤血管发生的良好模型；胶质瘤干/祖细胞可能是肿瘤血管形成的启动细胞.
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谷氨酰胺对大鼠重症急性胰腺炎肠道屏障损伤及动力障碍的影响
谷氨酰胺(Gln)是肠黏膜细胞代谢的重要物质,我们观察Gln对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜屏障的影响,探讨其保护作用及机制.一、材料和方法1.一般材料:健康清洁级雄性SD大鼠36只,体质量200～ 230 g,南京大学医学院附属鼓楼医院实验动物中心提供.按随机数字法分为对照组、SAP组和Gln组,每组12只.采用逆行胰胆管注射5％牛磺胆酸钠(Sigma公司)建立SAP模型.假手术组只翻动十二指肠后关腹.谷氨酰胺组于造模前2d开始,应用灌胃针经口灌注谷氨酰胺颗粒,剂量为1.5 g/(kg·d)(重庆药友制药有限公司).假手术组及SAP组每天给予相同剂量的生理盐水灌胃直至结束.
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凉血愈肠汤灌胃对放射性肠炎模型大鼠肠上皮细胞的增殖调节作用
急性放射性肠炎是腹盆腔部肿瘤放射治疗后引起的小肠和结肠损伤,可导致肠腺细胞再生受阻,绒毛破坏,导致毒血症,后果严重,临床治疗棘手[1].我们使用放射诱导的大鼠肠损伤模型,观察凉血愈肠汤对于肠上皮细胞增殖的影响.一、材料和方法1.材料:体质量220 ～ 250 g的雄性SD大鼠购于北京华阜康生物科技公司.凉血愈肠汤来自第二炮兵总医院中药房,超敏链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)试剂盒购自福州迈新生物技术公司,细胞核增殖抗原(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)单克隆抗体购自武汉博士德生物公司,溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)购自Sigma公司,BrdU抗体购自上海泛柯生物技术公司.
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人乳腺癌细胞Rab25基因与雌激素受体、孕激素受体的关系
Rab25蛋白是Rab蛋白亚家族Rab11中的一员,目前国外已有文献报道Rab25与乳腺癌发生及发展关系密切[1-2],但未报道Rab25对乳腺癌细胞的影响以及对雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)表达的影响.本研究旨在观察Rab25蛋白对乳腺癌的影响.一、材料与方法1.材料:LipofectaminTM 2000转染试剂盒,In-Fusion PCR Cloning试剂盒,人乳腺癌细胞株MCF-7、MM231、SK-BR-3和感受态大肠杆菌DH-5α等.
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高压氧对小室模型毛囊重建效率的影响
目前治疗瘢痕性秃发主要依赖于自体毛发移植.该法不适用于供区不足的患者.高效率的毛囊重建是研究热点.体外重建技术尚未成熟,但已有小室法、注射法等动物模型.小室法是将细胞注入裸鼠背部创面上的小室[1].注射法是将细胞注入裸鼠皮下[2].小室法毛发能长出体表但较费时.注射法较快捷但毛发不能长出体表[3].只有小室法需形成覆盖创面的上皮.上皮化过程可能是影响小室法毛囊重建效率的原因之一.高压氧能促进创面上皮化及皮片成活[4].但小室中的细胞为外源性且排列无序,其成活方式不明.本研究旨在观察就高压氧对小室模型的作用.
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组织型纤溶酶原激活物通过细胞外信号激酶和p38途径调节血管内皮细胞生长因子表达的研究
研究表明,组织型纤溶酶原激活物(t-PA)可通过激活与肿瘤相关的血管新生来参与促进恶性肿瘤的生长和侵袭[1],于是我们设想,是否可通过将外源性t-PA基因转染到血管内皮细胞中,在促进纤溶酶原活性、溶解深静脉内血栓的同时,上调血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达,从而也达到促进静脉损伤内膜的修复和血栓机化再通的多重功效.一、材料和方法1.材料:人脐静脉内皮细胞(HUVECs)由苏州大学分子与生物学实验室提供,重组腺病毒颗粒Adt-PA参照文献[2]由作者构建并保存.
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改良联体模型小鼠适应性的观察
动物联体模型的发展已有100多年历史,近年来实际应用该模型的逐渐增多[1].我们将传统联体模型改良,探讨该模型对动物的影响.一、材料与方法1.实验动物:健康清洁级C57BL/6雄性或雌性小鼠,鼠龄8 ～ 10周,由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供,合格证号:ScXK渝20090103.2.分组及手术方法:联体组共13对,采用改良Bunster等[2]的方法建立联体模型:将两只小鼠肘关节远端沿着肱骨和肋骨侧面皮肤剪开,直到腰围线末端,长约4～5 cm(1只剪左侧,另1只剪右侧),钝性分离皮下使裸露面积扩大.
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p21-激活激酶1诱导结直肠癌转移机制的研究
我们前期的研究表明,上调p21-激活激酶1(Pak1)基因的表达能促进结直肠癌细胞的迁移和侵袭.其机制在于,Pak1以激酶依赖性的方式激活细胞外信号调节激酶(ERK)-黏着斑激酶(FAK)-丝氨酸(Ser)-910通路,导致有利于细胞移动的细胞骨架重组[1].我们拟从Pak1基因调控血管形成和基质金属蛋白酶(MMPs)表达/活性两个方面探讨其诱导结直肠癌转移的机制.
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关节镜下后交叉韧带胫骨止点撕脱骨折的治疗
后交叉韧带(PCL)是一种特殊类型的PCL损伤,治疗较为棘手[1].以往PCL胫骨止点撕脱骨折多采用空心螺钉固定、缝线或钢丝固定[2-4],手术操作复杂、创伤大、费用高.郑州大学第一附属医院骨科2009年3月至2012年4月,在关节镜下复位、单纯克氏针固定PCL胫骨止点撕脱骨折13例,获得良好的临床疗效.一、资料与方法1.一般资料:2009年3月至2012年4月间郑州大学第一附属医院骨科行关节镜下PCL胫骨止点撕脱骨折复位单纯克氏针治疗13例,其中男10例,女3例;年龄(26.31 ±5.36)岁,新鲜损伤10例,陈旧损伤3例;5例为平移型,8例为反转型.
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转化生长因子β1对体外培养的尿道细胞结缔组织生长因子蛋白及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响
尿道狭窄是指尿道任何部位的机械性管腔异常狭小,使尿道内阻力增加而产生的排尿障碍性疾病.有研究表明,尿道狭窄术后2年内尿道再狭窄的复发率在50％～75％[1].发病机制尚未完全明了.转化生长因子-β1(TGF-β1)是已知与组织发生纤维化狭窄形成关系为密切、具代表性的细胞因子.本研究旨在观察TGF-β1对体外培养的尿道黏膜上皮细胞和成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)蛋白和Ⅰ型胶原蛋白合成的影响,探讨TGF-β1与尿道狭窄的关系.
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异柠檬酸脱氢酶-2基因小干扰RNA对人肝癌细胞SMMC-7721的抑瘤作用
能量代谢在肿瘤发生发展中起重要的作用,其中三羧酸循环的异柠檬酸脱氢酶(IDH)在许多肿瘤中发生突变,可能是因为这些突变通过激活原癌基因或抑制抑癌基因的途径导致肿瘤发生.目前国内外对IDH-2基因研究主要集中于神经胶质瘤和急性髓性白血病[1],在肝癌中报道尚少.我们利用小干扰RNA (siRNA)技术抑制人肝癌细胞株SMMC-7721中IDH-2基因的表达,探讨IDH-2在肝癌中发生与发展的作用.
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腹腔置管引流对大鼠重症急性胰腺炎肠黏膜免疫屏障损伤的影响
我们采用腹腔置管引流技术,探讨其对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肠黏膜免疫屏障损伤的影响及可能的作用机制.一、材料与方法1.动物分组与模型制备:将72只大鼠随机分为3组,每组24只.(1)A组:参照Aho等[1]的方法,建立大鼠SAP模型.(2)B组:SAP模型制备成功后,在大鼠下腹部置人引流管.(3)C组:仅进行开腹手术,翻动胰腺后关腹.
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鞘内注射携带神经毒素的磁性纳米复合微球的荧光成像研究
已有发现,携带神经毒素(N-异丙基丙烯酰胺单体)的磁性纳米颗粒可被靶向输送到心房自主神经节并在局部释放其携带的神经毒素以起到去自主神经支配的作用[1].本研究旨在制备携带神经毒素的磁性纳米复合微球及其在鞘内的荧光成像效应.一、材料和方法1.材料:傅立叶变换红外光谱仪(FTIR,VERTEX 70,布鲁克,埃特林根,德国);Nicolet 5-DXB傅立叶变换红外光谱仪(赛默飞世尔科技,波士顿,美国);振动样品磁强计(VSM,7404型,美国);透射电子显微镜(TEM,TECNAI G2 20,FEI,艾恩德霍芬,荷兰);动态光散射仪(DLS,纳米激光粒度仪ZS90,英国).
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肝细胞癌微环境中淋巴细胞叉状头/翅膀状螺旋转录因子的表达及意义
CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)是近年来发现的一群通过细胞间接触和产生抑制性细胞因子发挥免疫负调控功能的T细胞亚群,参与了多种肿瘤的微环境构成[1-3].叉状头/翅膀状螺旋转录因子(FOXP3)被发现特异性地表达于CD4+ CD25+的Treg细胞中,被视为CD4+ CD25+ Tregs的特异性标志物[4].我们应用免疫组织化学方法观察肝细胞癌(HCC)肿瘤微环境和癌旁非肿瘤组织中淋巴细胞FOXP3的表达,分析其与HCC临床病理特征关系,探讨其在HCC发病过程中的生物学意义.
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大黄素对重症急性胰腺炎大鼠外周血单核细胞Toll样受体4表达的调节作用
单核巨噬细胞表面Toll样受体4(TLR4)的表达,进一步诱导多种细胞因子的产生是重症急性胰腺炎(SAP)发病机制中的可能环节.本研究旨在观察大黄素干预治疗对SAP大鼠外周血单核细胞TLR4表达的调节作用,探讨其治疗SAP的可能机制.一、材料与方法1.实验动物与主要试剂:选用SPF级雄性SD大鼠,体质量(250 ±50)g,购自武汉大学实验动物中心(动物合格证号Y20110212).
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直视下大鼠气管插管方法
大鼠是诸多实验常选用的实验动物,由于大鼠自身的特点:呼吸频率快、口腔狭窄、舌体大、声门不易暴露等,造成了直视下气管插管的困难[1].我们总结了一种简单、有效、安全的气管内插管方法,报道如下.一、材料与方法1.材料:动物:SD大鼠40只,体质量200～ 300 g.仪器:小动物呼吸机、监测仪、洗耳球、棉签、纱布、组织钳、手电筒、16 G套管针、听诊器、2-0号线.药品:0.2％戊巴比妥钠.
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RNA干扰鼠尾同源盒转录因子2基因沉默逆转人胃癌裸鼠耐药模型耐药性的研究
多药耐药(MDR)的产生是胃癌化疗失败的主要原因,而特异性核转录因子鼠尾同源盒转录因子2(Cdx2)的高表达可阻碍化疗药物甲氨碟呤(MTX)破坏细胞[1],但Cdx2沉默在胃癌多药耐药中的作用尚不明确.本实验旨在观察RNA干扰介导Cdx2基因沉默对人胃癌耐顺铂细胞SGC-7901/DDP裸鼠皮下移植瘤模型化疗敏感性的影响.
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兔皮肤和肉膜之间放置扩张器的研究
兔是温顺的实验动物,手术麻醉不需插管,注水不需麻醉,至今仍是很多人做埋置扩张器研究的实验对象.对于埋置层次:有的学者认为应该放在肉膜下;但也有学者认为可将扩张器放置在皮肤和肉膜之间,以限制皮肤的滑动,充分扩张皮肤.然而容量大的扩张器放置在皮肤和肉膜之间容易引起皮肤坏死.我们分别在兔的皮肤和肉膜之间分别放置10、20、30、50、80 ml的扩张器,用来观察究竟在皮肤和肉膜之间可放置多大的扩张器而不至于出现皮肤坏死.
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载脂蛋白A5启动子片段荧光表达载体的构建及瞬时表达
载脂蛋白家族新成员载脂蛋白A5(apoA5),主要存在于VLDL、HDL及CM中,apoA5基因过表达和基因缺乏小鼠模型研究已为apoA5与TG浓度呈负相关提供直接证据[1].我们通过基因工程方法构建含有apoA5启动子片段的荧光表达载体,瞬时转染人原代肝癌细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测apoA5基因表达.
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胰腺癌抑癌基因/Smad4和转化生长因子-βⅡ型受体在非小细胞肺癌的表达及意义
我们利用Western blot分析、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学技术,检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织中胰腺癌抑癌基因4(DPC4)/Smad4和转化生长因子-βⅡ型受体(TβRⅡ)的表达,探讨其与非小细胞肺癌(NSCLC)发病的关系.一、资料与方法1.临床资料:选用2008年1月至2009年12月唐山市工人医院胸外科术前未经放疗和化疗的原发性NSCLC手术患者60例.其中男40例,女20例.年龄33～78岁,平均(55.2±6.1)岁.
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大鼠原发脑挫伤灶和邻近脑组织在继发性脑损伤发生发展中的作用
创伤性脑损伤(TBI)后,炎性反应强弱与继发性脑损伤程度有着直接关系[1-2],本研究旨在观察大鼠原发脑挫伤灶和邻近脑组织在继发性脑损伤发生发展中的作用.一、材料与方法1.动物分组及试剂:健康雄性SD大鼠,体质量250～ 280 g,由苏州大学实验动物中心提供.随机分为对照组(Sham组,6只)和打击组(STBI组,42只),打击组按外伤后处死的时间分为STBI-1 h、STBI-3 h、STBI-6h、STBI-12 h、STBI-24 h、STBI-3 d和STBI-7 d共7个亚组.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒购于Fermentas公司;肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、E-选择素(E-selectin)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购于美国RD公司;一抗TNF-α、核因子(NF)-κB-p65购于Bioworld公司;二抗羊抗兔即用型链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒购于武汉博士德公司.
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雌激素受体和孕激素受体在乳腺癌组织中的表达与超声造影增强特征的关系
目的 探讨乳腺癌的超声造影增强特征与雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的相关性.方法 观察45例乳腺癌的超声造影增强特征,并与乳腺癌组织中ER、PR的表达进行相关分析.结果 乳腺癌造影后27例血流灌注缺损,25例向心性增强.乳腺癌的增强特征与ER的表达水平明显相关(P＜0.05),向心性增强及血流灌注缺损多发生在ER阴性肿瘤.以向心性增强判断ER表达的灵敏性为48％,特异性为85％；以血流灌注缺损判断ER表达的灵敏性为48.1％,特异性为88.9％.乳腺癌的增强特征与PR的表达水平无明显相关(P＞0.05).结论 乳腺癌超声造影增强特征与ER的表达水平相关.
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慢性牙周炎伴2型糖尿病患者牙周基础治疗后血清白细胞介素-6和瘦素的变化
目的 观察慢性牙周炎伴2型糖尿病患者经牙周基础治疗后血清白细胞介素-6(IL-6)和瘦素(leptin)的变化.方法 选择河南省商丘市第一人民医院2009年6月至2012年2月慢性牙周炎伴2型糖尿病患者34例作为观察组,同期慢性牙周炎患者不伴有全身系统性疾病34例作为对照组,两组均进行牙周基础治疗.分别在治疗前和治疗后3个月记录两组患者探诊出血(BOP)、牙周探诊深度(PD)、附着丧失(AL)以及血清IL-6、leptin水平的变化.结果 治疗前观察组血清IL-6和leptin水平分别为(3.42±0.31) μg/L及(1.24±1.13)μg/L,均高于对照组[(3.12±0.34)、(1.01 ±0.50) μg/L],差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后3个月,两组患者BOP阳性率、PD、AL、血清IL-6和leptin水平均比治疗前明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 慢性牙周炎伴2型糖尿病患者经牙周基础治疗后牙周状况明显改善,血清IL-6、leptin水平明显降低.
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同种异体骨混合自体骨复合骨形态发生蛋白-2修复胫骨骨缺损的研究
目的 观察同种异体骨混合自体骨复合骨形态发生蛋白-2 (BMP-2)修复胫骨骨缺损的临床疗效.方法 采用同种异体骨混合自体骨复合BMP-2修复胫骨骨缺损17例,其中内固定术后骨不连硬化骨去除后骨缺损11例,感染性骨折不愈合去除感染骨后骨缺损6例,均采用植骨结合髓内、外固定治疗,术后1、3、6个月、1年复查X线评价骨折愈合情况,并采用Johner-Wruhs评分评估治疗效果.结果 所有患者平均随访14个月(10 ～ 38个月).骨缺损均得以修复,骨折愈合,无感染复发,创面均闭合.Johner-Wruhs评分优良率为94％.结论 同种异体骨混合自体骨复合BMP-2所构成的“三合一”植骨模式,在修复胫骨骨缺损中来源广泛、成骨可靠、安全性高.
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透明质酸及透明质酸酶1对膀胱癌术后的监测作用
目的 检测尿透明质酸(HA)、透明质酸酶1(HYAL1)在预测无浸润膀胱肿瘤的复发和肌肉浸润中的作用.方法 随访144个膀胱肿瘤患者(110个无肌肉浸润者、34个肌肉浸润者),检测患者尿液HA和HYAL1水平,膀胱癌复发和浸润的HA、HYAL1联合检测是由单因素和多因素模型完成的.结果 在非浸润性膀胱癌患者尿标本中,有复发或浸润的患者HYAL1的水平较高(210.6±68.4、240.3±62.2),比较无复发或浸润的患者HYAL1的表达则为(168.5 ±6.6、210.4±7.9,P＞0.05).在多因素分析中,HYAL1与复发(敏感度59.6％,P＜0.05)和肌肉浸润(敏感度76.8％,P＜0.01)均有相关.结论 HA、HYAL1可能是膀胱癌术后监测复发或肌肉浸润潜在的肿瘤标志物.
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Survivin和突变型p53在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨Survivin和突变型p53(mp53)在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义,并分析两者表达的相关性.方法 应用免疫组织化学方法检测86例膀胱尿路上皮癌中Survivin和mp53的蛋白表达,每例标本均选用癌中心、癌旁组织,并选正常膀胱黏膜作为对照.结果 Survivin 和mp53在癌组织中的表达明显高于癌旁组织,而且在正常黏膜中均无表达.在膀胱癌不同病理分级中,Survivin阳性表达率分别为:G1组68.00％、G2组85.29％、G3组92.59％,mp53分别为:G1组72.00％、G2组88.24％、G3组96.30％；在不同分期中,Survivin阳性表达率分别为:Tis～T1组为75.00％、T2～T4组为94.12％,mp53分别为:Tis～T1组为80.77％、T2～T4组为94.12％；在淋巴结转移组和非转移组:Survivin阳性表达率为96.00％、77.05％,mp53分别为:96.00％、81.97％,各组间差异均有统计学意义(P＜0.05),而且两者表达呈正相关(r=0.452,P＜0.05).结论 Survivin 和mp53高表达与膀胱尿路上皮癌的恶性程度密切相关,可能在膀胱癌的发生发展中起协同作用.
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环乳晕切口在乳腺癌保乳手术中的应用
目的 探讨环乳晕切口在乳腺癌保乳手术中的应用.方法 对114例分别经环乳晕切口(A组)、肿块表面切口(B组)行乳腺癌保乳手术的患者的术后并发症、美容效果等方面进行分析.结果 A组46例,占40.4％,B组68例,占59.6％.术后随访6～42个月,平均随访28个月.两组患者在术后乳头、乳晕感觉障碍以及局部复发、远处转移等方面差异无统计学意义(P＞0.05)；A组在乳房对称性、瘢痕等美容评价优于B组(P＜0.01).结论 经环乳晕切口行乳腺癌保乳手术不影响预后,并改善了患者乳房的美容效果.
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前列腺癌患者外周血差异显示编码3基因mRNA的表达
目的 探讨前列腺癌(PCa)患者外周血中差异显示编码3基因(DD3) mRNA的表达及其与临床分期及Gleason评分的关系.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测63例PCa患者及61例良性前列腺增生(BPH)患者外周血中DD3 mRNA表达,同时分析不同临床分期和病理分级与DD3 mRNA表达的关系.结果 PCa患者外周血中DD3 mRNA表达率为82.5％,BPH组无表达,差异有统计学意义(P＜0.1).不同临床分期的DD3 mRNA表达差异有统计学意义(P＜0.05),不同Gleason评分的DD3 mRNA阳性表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 外周血DD3 mRNA表达和前列腺发生发展密切相关.
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影响125I粒子植入治疗头颈部复发或转移癌疗效的因素
手术和放疗为主的综合治疗已在头颈部肿瘤中广泛应用,但30％ ～ 40％的患者在短期内即出现局部复发[1],由于头颈部解剖结构复杂,周围正常组织剂量限制或患者本身不能耐受等原因使再程放疗或再次手术受限,临床处理十分棘手.125Ⅰ粒子植入以其疗效肯定、微创、并发症少的优势逐渐被重视,在前列腺癌[2]、胰腺癌[3]、消化道肿瘤[4-5]等治疗领域广泛开展,并在头颈部复发或转移癌中显示出广阔的应用前景[6].精确设定周边剂量,合理确定粒子活度及分布,严格进行术后验证均成为提高125Ⅰ粒子治疗头颈部恶性肿瘤疗效的关键因素.现综述如下.
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基于动物模型的精索静脉曲张致男性不育发病机制研究进展
精索静脉曲张(VC)是指由于静脉回流受阻或瓣膜失效血液返流等因素导致精索静脉的伸长、扩张及迂曲,是导致男性不育的外科疾病中常见的一种,其在不育男性中的发病率为25％ ～40％,多数发生于左侧[1].VC导致男性不育的机制并不完全清楚,目前研究较多的是睾丸生精细胞凋亡及氧化应激损伤等.现就近4年来基于动物模型的VC致男性不育发病机制研究进展进行综述.
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微小RNA对T细胞的调控及机制
恶性肿瘤是在多种致癌因素的作用下,细胞的某些生长调控基因发生突变或异常表达引发细胞异常增生[1].在对肿瘤免疫应答过程中细胞免疫起主要作用,体液免疫起协同作用.若肿瘤抗原免疫原性强引发适应性免疫应答,若免疫原性弱引发固有免疫应答.2002年Dunn等[2]提出的"肿瘤免疫编辑学说"包括清除、平衡和免疫逃逸3个阶段.清除阶段为免疫监视期;若部分肿瘤细胞未被清除,则进入平衡期,肿瘤细胞保持静止状态或积聚变化;若免疫系统仍未完全清除肿瘤细胞,导致某些变异肿瘤细胞耐受或抑制抗肿瘤免疫应答而进入逃逸期,肿瘤细胞的生长不仅不受免疫系统控制,更利用免疫系统快速生长、转移和逃逸.免疫系统和肿瘤相互作用过程中发挥了免疫监视和免疫逃逸双重作用[3].
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血管紧张素-Ⅱ腹腔注射建立小鼠主动脉夹层动物模型
目的 应用血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)腹腔注射建立小鼠主动脉夹层模型.方法 8月龄C57BL/6J小鼠40只,雌雄不拘,随机分为2组.实验组20只,每8h腹腔注射血管紧张素Ⅱ,剂量为每天4.5 mg/kg;对照组20只,每8h腹腔注射去甲肾上腺素,剂量为每天12 mg/kg.分别于注射30 min后应用鼠尾测压器检测并记录小鼠血压(收缩压).精心饲养14 d,中途死亡小鼠直接解剖,取出主动脉.14 d后,存活小鼠颈椎脱臼处死,解剖取出主动脉,大体及光镜观察.结果 实验组小鼠检测血压为(134.5:3.5) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),对照组检测血压为(132.9±2.7) mm Hg,两组血压差异无统计学意义(P＞0.05).实验组中有7只小鼠大体标本观察有主动脉夹层发生,另有12只标本光镜下观察发现内膜明显增厚,中膜变薄,可见断裂,符合主动脉夹层组织病理学表现.对照组所有标本大体及光镜下观察均无明显组织病理学改变.结论 腹腔注射Ang-Ⅱ能建立小鼠主动脉夹层模型.
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ApoE-/-小鼠颈总动脉粥样硬化动物模型的建立
目的 探讨建立载脂蛋白E(ApoE-/-)小鼠颈动脉粥样硬化动物模型的有效方法.方法 C57BL/6小鼠3只,ApoE-/-小鼠6只,共分为3组.A组:C57BL/6小鼠(n=3)给予普通饲料喂养；B组:ApoE-/-小鼠(n=3)给予高脂饲料喂养；C组:ApoE-/-小鼠(n=3)给予高脂饲料结合颈动脉部分结扎术.1周后采用超声检测C组ApoE-/-小鼠左、右颈总动脉中点的收缩期峰值流速(PSV)和血流方向；5周后检测血脂,油红O染色观察各组小鼠左颈总动脉粥样斑块形成.结果 C组ApoE-/-小鼠术后1周左颈总动脉PSV为(9.4±0.8)cm/s,较右颈总动脉PSV(102.0±7.8) cm/s显著减少(P＜0.01),同时舒张期出现反向血流；ApoE-/-小鼠在高脂喂养5周后出现明显高脂血症；油红O染色可见C组ApoE-/-小鼠形成进展型纤维粥样斑块.结论 颈总动脉部分结扎术加高脂饮食法建立ApoE-/-小鼠颈总动脉粥样硬化模型可有效缩短造模时间.
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小干扰RNA沉默zeste基因增强子同源物2对阿霉素诱导胃癌细胞MKN28衰老的影响
目的 观察小干扰RNA(siRNA)沉默zeste基因增强子同源物2(EZH2)对阿霉素诱导胃癌细胞MKN28衰老的影响.方法 体外化学合成EZH2基因特异性小干扰RNA,脂质体Lipofectamine2000介导转染人胃癌细胞MKN28；实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测特异性siRNA对EZH2基因mRNA水平的沉默效果；采用阿霉素诱导细胞衰老,衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测各组细胞衰老情况,激光共聚焦显微镜检测各组细胞胞核中衰老相关异染色质灶(SAHF)的形成.流式细胞仪和噻唑蓝实验(MTT)检测siRNA对细胞周期和生长的影响,并比较在阿霉素诱导下各组细胞的相应变化.结果 EZH2 siRNA能有效抑制MKN28细胞中EZH2 mRNA表达,促进阿霉素诱导的MKN28细胞衰老和SAHF形成,EZH2 siRNA+阿霉素组细胞SA-β-gal染色阳性率和SAHF形成比例明显高于对照组,分别为(87.88±2.66)％、(96.27±1.71)％和(42.01±7.50)％、(51.72±2.97)％,且EZH2 siRNA能阻滞MKN28细胞周期于G0/G1期,比例为(47.41±10.68)％,抑制细胞增殖,并促进阿霉素的阻滞细胞周期和抗增殖效应.结论 EZH2 siRNA可有效抑制胃癌细胞MKN28中EZH2表达,促进阿霉素诱导的胃癌MKN28细胞衰老,抑制细胞增殖.
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放射性125I粒子低剂量持续照射抑制人胃癌细胞株BGC-823增殖的作用
目的 观察放射性125I粒子低剂量持续照射对人胃癌细胞株BGC-823增殖的抑制效应.方法 125I粒子对体外培养的人胃癌细胞株BGC-823进行2、4、6、8Gy的照射,采用噻唑蓝(MTT)观察细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡比率,Western blot检测凋亡相关蛋白bax和B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)表达的变化.结果 随着照射的剂量增加,与对照组比较,BGC-823细胞增殖和线粒体膜电位明显下降(P＜0.05或P＜0.01)；同时流式细胞分析显示细胞凋亡率增加(P＜0.01).Western blot检测凋亡相关蛋白bcl-2和bax表达比值也逐渐下降(P＜0.01).结论 放射性125I粒子低剂量持续照射能够有效促使人胃癌细胞株BGC-823凋亡而抑制其增殖.
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过氧化物酶增殖体受体γ调节血管内皮生长因子D的表达
目的 探讨活化后的过氧化物酶增殖体受体γ(PPAR-γ)对血管内皮生长因子D(VEGF-D)的调节作用及其机制.方法 用200、100、50、0μmol/L浓度的罗格列酮(ROS)干预胃癌BGC-823细胞48 h后,分别用细胞免疫组织化学法、Western blot法检测细胞株中第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因抑癌基因(PTEN)、VEGF-D的表达.用干预后的细胞注射裸鼠建立胃癌移植瘤模型,免疫组织化学法检测瘤体组织中PTEN、VEGF-D的表达.结果 细胞免疫组织化学、裸鼠瘤组织免疫组织化学结果显示PTEN在200、100、50 μmol/L ROS组中的表达显著高于0 μmol/L组(P＜0.01),VEGF-D在3组中的表达显著低于0μmol/L组(P＜0.01).两者在200、100、50 μmol/L组中的表达差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示,用200、100、50、0μmol/L的ROS干预后,PTEN/β-actin的灰度比分别为:1.47、1.06、0.77、0.49；VEGF-D/β-actin 灰度比分别为:0.67、0.94、1.35、1.79,两者在4组中的表达差异有统计学意义(P＜0.01).ROS能缩小裸鼠瘤体体积,提高抑瘤率,并呈剂量依赖性,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 ROS活化后的PPAR-γ能抑制VEGF-D的表达,其机制可能与上调PTEN表达有关.
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肽基脯氨酰顺反异构酶和钙结合蛋白S100A9在胃癌组织中的表达及意义
目的 探讨胃癌组织中肽基脯氨酰顺反异构酶(Pin1)和钙结合蛋白S100A9的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学法检测46例胃癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织中Pin1和S100A9表达水平.结果 Pin1胃癌组织的阳性表达率为36.96％ (17/46),明显高于癌旁组织阳性表达率17.39％ (8/46),两者差异有统计学意义(P＜0.05),S100A9胃癌组织的阳性表达率为63.04％ (29/46),明显高于癌旁组织的阳性表达率28.26％(13/46),两者差异有统计学意义(P＜0.01).Pin1表达水平与胃癌TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05),S100A9表达水平与胃癌组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 PIN1和S100A9的过度表达与胃癌的发生、发展和转移密切相关.
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微小RNA-21在含奥沙利铂的二药联合方案治疗晚期胃癌患者中的意义
目的 探讨微小RNA-21(miR-21)在胃癌组织中表达的意义,并评估miR-21与含奥沙利铂的二药联合方案治疗晚期胃癌患者临床预后的相关性.方法 入组患者均为不能手术或手术后复发的转移性胃癌.化疗方案为奥沙利铂联合替吉奥(S-(1))或奥沙利铂联合去氧氟脲苷.从52例福马林固定后石蜡包埋(FFPE)的胃癌组织样本中筛选鉴定出可以作为预后标志物的miRNA.从胃癌患者FFPE肿瘤组织样本和正常胃组织中分别提取出总RNA,应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)定量分析miRNA(包括let-7g、miR-200c、miR-140、miR-21、miR-192、miR-181b)表达水平,并分析其与胃癌患者预后的相关性.结果 胃癌组织中miR-21表达水平显著高于正常胃组织(5.43±7.95比1.00).多因素生存分析显示:miR-21高表达胃癌患者总生存期显著低于miR-21低表达患者,中位生存期分别为5.03(2.67 ～7.40)和8.74(6.58～10.89)个月,与miR-21低表达胃癌患者比较,其死亡风险比(HR)为8.11[95％可信区间(CI):2.47 ～26.59,P＜0.01]；2个疗程后疗效较好者生存期显著高于疗效较差者,疗效为部分缓解(PR)、稳定(SD)、进展(PD)的患者中位生存期分别为8.41(5.29 ～11.52)、10.57(5.68～15.47)和5.10(3.11 ～7.08)个月.相对于PR患者,SD、PD患者的HR分别为0.96(95％CI:0.36 ～2.54,P＞0.05)和6.65(95％ CI:2.08 ～21.24,P＜0.01).结论 胃癌组织中存在微小RNA异常表达,其中miR-21高表达与晚期胃癌不良预后显著相关.
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亚甲基四氢叶酸还原酶C667T基因多态性对以5-氟尿嘧啶为基础化疗的晚期胃癌患者生存期的影响
目的 观察亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR) C667T基因多态性与5-氟尿嘧啶(5-Fu)为基础的化疗方案治疗晚期胃癌的疗效.方法 收集经病理学确诊的晚期胃癌59例.所有病例化疗前抽取外周静脉血,提取DNA,用连接酶检测反应技术(LDR)检测研究对象的MTHFR基因型.患者均采用经5-Fu为基础的联合化疗方案.结果 59例晚期胃癌患者MTHFR T/T基因型患者的无进展生存期(PFS)明显优于C/C型(8.70个月比5.47个月x=9.209,P＜0.01),MTHFR T/T基因型患者的PFS明显优于C/T型(8.70个月比5.08个月,x=9.405,P＜0.01),MTHFR C/T基因型患者的PFS与C/C型比较差异无统计学意义(5.47个月比5.08个月,x=0.092,P＞0.05).结论 MTHFR基因型对预测以5-Fu为基础化疗方案治疗晚期胃癌的疗效有较好的临床意义.
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Endoglin和脾酪氨酸激酶在胃癌组织中的表达及意义
目的 观察胃癌组织中Endoglin标记的微血管密度计数(MVD)和脾酪氨酸激酶(Syk)的表达.方法 应用免疫组织化学法检测50例胃癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织中Endoglin标记的MVD和Syk表达水平.结果 Endoglin标记的MVD胃癌组织的表达强度为(62.62±4.08),明显高于癌旁组织的表达强度(45.79±3.37),两者差异有统计学意义(P＜0.01)；Syk胃癌组织的阳性表达率为44.00％ (22/50),明显低于癌旁组织阳性表达率92.00％ (46/50),两者差异有统计学意义(P＜0.01)；Endoglin标记的MVD表达强度与胃癌TNM分期、组织学分化程度、淋巴结转移明显相关(P＜0.05),Syk表达水平与胃癌TNM分期、淋巴结转移明显相关(P＜0.05).结论 胃癌组织中Endoglin和Syk表达水平的检测有助于判断胃癌病情和预后.
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多种胃癌细胞株中切除修复交叉互补基因1与顺铂作用的关系
目的 探讨6种胃癌细胞株中切除修复交叉互补基因1(ERCC1)与顺铂作用的关系.方法 常规培养6种胃癌细胞株；SYBR Green实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法及Western blot法检测6种胃癌细胞株的ERCC1 mRNA及蛋白的表达；不同浓度顺铂作用6、12、24、48 h后,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞存活率,并计算半数抑制浓度(IC50),Spearman等级相关分别计算ERCC1 mRNA、蛋白表达与顺铂作用的相关性.结果 6种胃癌细胞株ERCC1 mRNA的相对表达量为1.40±0.12、1.35±0.12、3.91 ±0.21、2.92±0.21、4.45 ±0.14、2.26±0.41,ERCC1蛋白表达灰度分析值为0.58 ±0.04、0.33±0.07、1.07 ±0.13、0.40±0.05、1.38±0.17、0.79 ±0.11,顺铂半数抑制浓度(IC50,mag/L)分别为36.88±1.29、39.89±1.21、49.72±1.12、44.65±1.05、63.12 ±0.67、54.39 ±0.98(12 h);4.18 ±0.14、4.50 ±0.11、6.23 ±0.27、5.06 ±0.22、12.05 ±0.17、5.85 ±0.06(24 h);2.99±0.09、2.86±0.09、4.70±0.13、3.38±0.07、7.86±0.29、3.54 ±0.03(48 h),ERCC1 mRNA与顺铂IC50的等级相关系数分别为0.89(24 h)、0.94(48 h).结论 ERCC1 mRNA的表达与顺铂作用呈等级相关,ERCC1蛋白表达与顺铂作用无相关,ERCC1 mRNA可应用于临床试验来预测胃癌患者对顺铂的敏感性.
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与格尔德酶素对胃癌细胞的作用及其机制
目的 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和格尔德酶素(GA)两者联合应用对胃癌细胞凋亡的影响,探讨两者是否具有协同作用及其机制.方法 体外培养胃癌细胞株SGC-7901,分为TRAIL组、GA组、GA+ TRAIL组及空白对照组,分别加入0.1 mg/L的TRAIL、0.4 mol/L GA溶液、0.1 mg/L的TRAIL+0.4mol/L GA溶液以及普通培养液,分别于12、24、36、48、60、72 h采用噻唑蓝(MTT)比色法检测SGC-7901细胞的增殖,于药物作用48 h后采用流式细胞技术检测SGC-7901细胞的凋亡,采用免疫组织化学染色检测GA和TRAIL干预48h前后SGC-7901细胞内蛋白激酶B(Akt)和细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达改变.结果 TRAIL、GA和TRAIL+ GA处理胃癌SGC-7901细胞48h后,细胞增殖抑制率分别为(25.28±2.37)％、(40.64±3.52)％、(69.75±3.41)％,细胞凋亡率分别为(13.60±0.27)％、(24.62±0.34)％、(38.82±0.43)％,SGC-7901细胞内p-Akt及p-ERK蛋白的表达均明显减少.结论 GA和TRAIL均可抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,促进胃癌SGC-7901细胞凋亡,而且两者具有协同作用；Akt和ERK信号通路是GA和TRAIL抑制细胞增殖的可能机制.
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微小RNA-200a在胃癌中抑制上皮-间质转化的研究
目的 探讨微小RNA-200a (miR-200a)在胃癌中的差异性表达及其对上皮-间质转化(EMT)的调控机制.方法 分别采用原位杂交和免疫组织化学检测64例不同级别胃癌组织和10例正常胃黏膜组织miR-200a的表达和EMT相关蛋白锌指E-盒结合同源异形盒-1(ZEB1)/ZEB2、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和β-连环素(β-catenin)的表达.结果 与正常胃黏膜组织比较,胃癌中miR-200a明显下调(P＜0.05),WHOⅢ/Ⅳ级胃癌组织中miR-200a的表达低于WHO Ⅰ/Ⅱ级(P＜0.05).与正常胃黏膜组织比较,ZEB1/ZEB2、N-caderin和β-catenin在胃癌组织中表达明显上调,而E-cadherin表达明显下调.Speamen等级相关分析得出,miR-200a与ZEB1/ZEB2、N-cadherin和β-catenin呈负相关(P＜0.05),miR-200a与E-cadherin呈正相关(P＜0.05).结论 miR-200a抑制EMT的可能机制是miR-200a通过作用于其靶点ZEB1/ZEB2,促进E-cadherin的表达.
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胃癌淋巴结转移与趋化因子受体、诱导型一氧化氮合酶表达的关系
目的 探讨胃癌中趋化因子受体(CXCR4)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达及其与胃癌淋巴结转移的关系.方法 免疫组织化学SP法检测80例胃癌、癌旁组织手术切除标本CXCR4、iNOS的表达,探讨其与淋巴结转移的关系.结果 胃癌组织中CXCR4 (58.7％)和iNOS(77.5％)的蛋白表达率均明显高于癌旁组织,合并淋巴结转移的胃癌标本CXCR4 (70.8％)、iNOS(89.6％)表达明显高于无转移者(P＜0.05).结论 CXCR4和iNOS在胃癌的发生中有协同作用,两者可能共同参与肿瘤淋巴结转移.
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SPARCL1在胃癌中的表达及临床意义
目的 探讨SPARCL1基因在胃癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学方法检测106例胃癌组织、正常胃黏膜和淋巴结病理切片中的SPARCL1蛋白.结果 SPARCL1的表达在正常黏膜中明显高于胃癌组织和转移淋巴结组织(P＜0.01),其表达与胃浆膜侵犯、淋巴结转移、淋巴结转移度(LNR)、肿瘤部位、远处转移、临床分期及生存时间等均有明显相关(P＜0.05),而且是胃癌重要的独立预后因素(P＜0.05).结论 SPARCL1表达下调可能促进胃癌的发生、发展及转移并影响预后.
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Hedgehog信号通路与E钙黏蛋白在甲基硝基亚硝基胍诱导人胃黏膜上皮细胞的表达及意义
目的 探讨甲基硝基亚硝基胍(MNNG)作用于人胃黏膜上皮细胞(GES-1)后E钙黏蛋白与Hedgehog(Hh)信号通路的表达及意义.方法 荧光共聚焦显微镜观察细胞的E钙黏蛋白表达并测量各组细胞的平均荧光强度值,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞Shh mRNA、Gli1 mRNA的表达并进行半定量数据分析.结果 荧光免疫显示环靶明干扰组平均荧光强度为213±35,小于GES-1细胞组的825±134,大于MC细胞组的57±12(P ＜0.05)；半定量RT-PCR显示环靶明干扰组Gli1 mRNA值为0.3241±0.0023,显著低于MC细胞组的0.5792±0.0134 (P＜0.05).结论 Hh阻断剂环靶明作用于MC细胞后,Glil mRNA表达降低,E钙黏蛋白表达升高,提示Hh信号通路可能通过Gli1参与调控E钙黏蛋白表达.
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胃癌腹膜转移相关蛋白表达研究
目的 应用比较蛋白组学研究胃癌腹膜转移形成相关的蛋白质分子标志物.方法 以胃癌细胞株(BGC823)和腹膜高转移潜能的胃癌细胞株(SCG7901)为研究对象,采用双向凝胶电泳(2-DE)对其进行总蛋白的分离,两组之间的差异蛋白通过质谱分析和蛋白数据库搜索鉴定,并用Western blot法对差异蛋白点进行进一步检测验证.结果 腹膜高转移潜能的胃癌细胞株(SCG7901)与胃癌细胞株(BGC823)比较,共鉴定出20个有意义的蛋白质,其中11个蛋白仅在SCG7901细胞株中表达明显增高,9个蛋白仅在BGC823细胞株中表达明显增高.对于SCG7901细胞株高表达的叉头蛋白3(Foxp3),应用Western blot法在蛋白水平上验证了2-DE结果.结论 腹膜高转移潜能的胃癌细胞株(SCG7901)与胃癌细胞株(BGC823)的蛋白质表达差异有统计学意义.
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鱼藤素联合顺铂对人胃癌细胞株MGC-803的协同抑制作用
目的 观察鱼藤素联合顺铂对入胃癌细胞株MGC-803的杀伤、增殖抑制作用.方法 鱼藤素(1.56、3.12、6.25 mg/L)联合顺铂(0.78、1.56、3.12、6.25、12.50、25.00 mg/L)作用于MGC-803细胞,采用噻唑蓝(MTT)法及形态学观察检测细胞增殖抑制及凋亡诱导作用,应用等效线图分析协同效应及流式细胞术检测细胞周期分布.结果 鱼藤素与顺铂联合作用48 h,顺铂的半数抑药浓度(IC50)分别为4.69、3.34、1.45 mg/L,较单独应用7.66 mg/L明显降低(P＜0.05),细胞的凋亡率明显增加,合用指数(CI)值小于1；1.56 mg/L的鱼藤素作用48 h后,MGC-803细胞G1期比例由28.1％增加至41.4％.结论 鱼藤素与顺铂联合应用具有明显的抗肿瘤作用,且鱼藤素特异性的阻滞G1期细胞,并与顺铂产生协同作用.
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唑来膦酸对胃癌耐药细胞株SGC-7901/ADR的生物学作用
目的 观察唑来膦酸(ZOL)对人胃癌耐阿霉素(ADM)细胞株SGC-7901/ADR侵袭和黏附的影响,探讨ZOL是否具有逆转该细胞株对ADM的耐药作用及其机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测1×10-4 mol/L的ZOL联合0.5 mg/L的ADM对SGC-7901/ADR细胞黏附作用的影响；Transwell实验分析上述浓度的ZOL和ADM对细胞侵袭力的影响；酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清液基质金属蛋白酶(MMP)-2、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达水平的变化；实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞MMP-2、基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-2、MMP-9、ICAM-1、CD44mRNA表达水平的改变.结果 (1)1×10-4 mol/L的ZOL单药及联合0.5 mg/L的ADM与细胞共同孵育6h,黏附率分别为:对照组(C组)44.32％,ZOL单药组(Z组)34.73％,ZOL+ ADM组(Z+A组)31.30％,与C组比较,单药能够抑制细胞的黏附力(P＜0.05),Z+A组细胞黏附能力进一步下降(P＜0.01)；(2)在研究侵袭能力的实验中,C组、Z组、Z+A组每个高倍视野中细胞数(个)分别为:103.73±7.84、97.64±9.62、71.58±10.57,与对照组比较,联合用药时抑制作用显著(P＜0.05)；(3) ELISA结果显示,与C组比较、Z组及Z+A组均能够显著降低细胞上清液中的MMP-2和ICAM-1蛋白表达水平(P＜0.05或P＜0.01),与Z组比较,Z+A组差异统计学意义(P＜0.01).(4)在Real-time PCR实验中,以C组作为参考标准,药物和细胞共同孵育后,上清液CD44 mRNA表达在C组、Z组、A组、Z+A组分别为1.0000 ±0.1083、0.2601±0.0041、0.4681 ±0.0314、0.0950±0.0052,同时ICAM-1、MMP-2、MMP-9mRNA的表达在各组中也表现出类似结果.结论 ZOL对人胃癌耐ADM细胞株SGC-7901/ADR具有抑制降低细胞黏附和侵袭能力的作用,一定程度上逆转该细胞株对ADM的耐药,这些作用和下调ICAM-1、MMP-2、MMP-9、CD44 mRNA及上调TTMP-2 mRNA的表达水平相关.
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巨噬细胞对胃癌细胞增殖及侵袭力的影响
目的 观察巨噬细胞对胃癌细胞生物学行为的影响,以探讨肿瘤相关性巨噬细胞(TAMs)在胃癌侵袭转移中的作用.方法 将人单核细胞株THP-1体外诱导为巨噬细胞,并与胃癌细胞株AGS共培养模拟胃癌微环境,观察并分析其对胃癌细胞增殖力和侵袭力的影响.结果 胃癌细胞与巨噬细胞共培养后,增殖能力有所减弱,倍增时间为(38.42±2.68)h,而未经共培养者倍增时间为(24.36±2.91) h(P ＜0.001)；而体外侵袭实验显示胃癌细胞共培养后及未共培养时侵袭细胞计数分别为308±15和168±4,侵袭力增强(P＜0.01).巨噬细胞对胃癌细胞的作用与其分泌细胞因子相关.THP-1细胞激活并分化为巨噬细胞后,培养上清中白细胞介素(IL)-8及IL-1β表达量分别增加了40和20倍(P＜0.01)；肿瘤坏死因子(TNF)-α表达量增加了8倍(P＞0.05).结论 巨噬细胞可增强胃癌细胞的侵袭力,该作用可能与其分泌的细胞因子IL-8及IL-1β和TNF-α增高有关.
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siRNA沉默缺氧诱导因子-2α对胃癌细胞SGC7901凋亡的影响和机制
目的 探讨缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)沉默对胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响及其机制.方法 常规培养SGC7901细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot法检测低氧组(90％氮气+5％氢气+5％二氧化碳)和正常氧条件下HIF-2α、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达；合成针对HIF-2α的小干扰RNA(HIF-2α-siRNA)；Western blot检测HIF-2α-siRNA的转染效果；细胞计数试剂盒(CCK)法检测HIF-2α-siRNA转染后的细胞增殖,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率；FQ-PCR和Western blot检测转染前后bcl-2、bax、Caspase-3的表达.结果 低氧条件下,HIF-2α(2.94±0.31、0.61±0.08)、bcl-2 (2.0l±0.29、1.05±0.09) mRNA和蛋白表达与正常氧条件下HIF-2α(1.06±0.15、0.23±0.04)、bcl-2(1.08±0.16、0.34±0.05)比较明显升高,bax (0.54±0.06、0.48 ±0.05)、Caspase-3(0.45±0.05、0.58 ±0.07)mRNA和蛋白表达与正常氧条件bax (0.97 ±0.13、0.74±0.12)、Caspase-3 (0.96±0.12、0.89 ±0.14)比较则明显降低(P＜0.05)；HIF-2α-siRNA转染后与转染前比较能有效沉默HIF-2α；HIF-2α-siRNA转染后[(0.47±0.05)％]与转染前[(0.89±0.12)％]比较能抑制增殖水平,与转染前[(8.15±0.97)％]比较,转染后[(20.16±3.09)％]凋亡率升高(P＜0.05)；与转染前(0.96 ±0.09、1.37 ±0.21、1.13±0.19、0.82±0.16、0.97 ±0.13、0.69±0.11)比较,转染后可降低bcl-2 mRNA和蛋白表达(0.43±0.06、0.78±0.12),升高bax(2.91 ±0.28、1.51 ±0.28)、Caspase-3 mRNA和蛋白表达(2.42 ±0.34、1.34 ±0.21) (P＜0.05).结论 低氧下,HIF-2α-siRNA可通过降低bcl-2表达、升高bax、CasDase-3表达而诱导SGC7901细胞凋亡.
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胃外科实验研究的发展方向
进入21世纪以来,我国胃外科随着社会经济的发展,也保持着飞速的发展.特别是转化医学的推动下,胃外科实验研究也顺应这一趋势,朝着更注重临床实用价值、更立足解决临床问题的方向转变.胃外科医生应时刻关注这些变化,以更好的提高临床诊疗和科研能力.
关键词：
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
