中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
人肝癌转移抑制基因存在的功能研究
目的 寻求人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的功能证据.方法 前期通过微细胞介导的染色体转移方法(MMCT),将正常人8号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞株C5F中获得的微细胞杂交克隆Ne08/C5F-1～10和大鼠肝癌细胞株CSF,分别被接种到6～7周龄雌性BALB/CA裸鼠皮下进行自发转移实验,观察皮下成瘤及肺部大体转移灶形成情况,肺组织连续切片并计数镜下转移灶,结果进行单因素方差分析.结果 所有微细胞杂交克隆均能皮下成瘤,微细胞杂交克隆的自发转移实验发现有6个杂交克隆出现肺转移表型的明显抑制(P<0.05),其中2个杂交克隆肺转移表型发生完全抑制.结论 人8号染色体对大鼠肝癌高转移细胞株CSF的成功导入改变了CSF的转移表型,提供了人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的直接的功能证据.
-
重组人肝再生增强因子可抑制大鼠肝星状细胞c-fos基因的表达
目的 观察重组人肝再生增强因子(hALR)对大鼠肝星状细胞c-fos基因表达的影响.方法 在培养的肝星状细胞株中加入高(200μg/L)、中(20μg/L)、低(2μg/L)3种浓度的hALR,于8、24、48、72 h四个时间点收集细胞,提取总RNA;用逆转录定量聚合酶链反应(PCR)方法测定c-fos的基因表达.结果 高、中、低浓度的hALR 3组肝星状细胞c-fos基因的表达水平在8、24、48、72 h四个时间点均明显低于对照组;低剂量组为对照组的50%～53%,中剂量组为对照组的38%～43%,高剂量组为对照组的26%～30%.结论 重组人肝再生增强因子对大鼠肝星状细胞c-fos基因的表达有明显抑制作用.
-
IRX1真核表达载体的构建及在胃癌细胞SGC-7901中的定位
目的 构建pEGFP-IRX1真核表达载体,体外转导至SGC-7901胃癌细胞株,观察IRX1基因转染后蛋白表达与细胞内定位.方法 PCR扩增IRX1全长1443 bp编码序列,将PCR扩增产物连接人pGEM-Teasy载体,经测序确认序列无误后,亚克隆入pEGFP-N1载体,构建pEG-FP-IRX1真核表达载体.采用Lipofectamine 2000转染SGC-7901胃癌细胞株,在荧光显微镜下观察外源性IRX1基因导入后在胃癌细胞内的表达与亚细胞定位.结果 成功构建有绿色荧光蛋白融合的IRX1真核表达载体,外源性IRX1基因在胃癌SGC-7901细胞中表达成功,在荧光显微镜下IRX1表达蛋白定位于细胞核内.结论 pEGFP-IRX1真核表达载体构建成功,并可在细胞内表达,这将为IRX1在胃癌内的功能研究奠定基础.
-
人肿瘤增殖细胞核抗原HLA-Ⅰ类分子限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的多参数预测
目的 预测人增殖细胞核抗原(PCNA)的HLA-Ⅰ类分子限制性细胞毒T淋巴细胞(CTL)表位.方法 使用基于矩阵法预测表位的BIMAS和SYFPEITHI数据库,以及基于蛋白体酶切割位点预测表位的PAProC数据库,对人肿瘤PCNA抗原的CTL表位综合评分.结果 得到针对HLA-A0201的位于PCNA氨基酸序列228～236(SMSADVPLV,分值为447 633.595)和22～30(LINEACWDI,分值为127 966.779)位置的两个可能表位;针对HLA-A24的位于113～121(DYEMKLMDL,分值为563 994.9)和143.151(EFARICRDL,分值为40540.7)的两个可能表位;针对HLA-A1101的位于72～80(LTSMSKILK,分值为1334.2680)和232～240(DVPLVVEYK,分值为736.9236)的两个可能表位.结论 实验提供了肿瘤抗原表位的多参数预测方法,为应用PCNA肽表位制备肿瘤疫苗奠定了基础.
-
缺氧诱导因子-1α和内皮素-1在胃肠道间质瘤中的表达及意义
目的 探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α,血管内皮素(ET)-1在胃肠道间质瘤(GISTs)中的表达及其在预后判断中的价值.方法 应用免疫组织化学SP法对76例GISTs检测,观察HIF-1α、ET-1在GISTs中的表达情况.结果 HIF-1α、ET-1在GISTs中的阳性表达率分别为73.68%(56/76)、65.79(50/76),两者的表达呈正相关(P<0.05),其与胃肠道间质瘤的组织学分级、肿瘤直径、浸润转移和核分裂数有关(P<0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤原发部位无关(P>0.05);HIF-1α、ET-1在极低和低危险,中度危险和高危险及直径<2 cm和直径>5 cm组间差异有统计学意义(P<0.05),阳性表达率随恶性程度的增加和肿瘤直径的增大而增加(P<0.05),在有浸润转移和核分裂数≥5/50HP组中的表达明显高于无浸润转移和核分裂数<5/50HP组中的表达(P<0.05).结论 HIF-1α、ET-1在GISTs中的表达有联合倾向,可能提示肿瘤的恶性程度及其预后,并可作为判断预后的有用标志物.
-
几丁糖联合聚乳酸薄膜预防硬膜外粘连的研究
目的 观察几丁糖加聚乳酸薄膜联合运用对椎板切除术后预防硬膜外瘢痕粘连的效果.方法 80只成年家兔[体质量(2.0±0.2)kg]制作椎板切除模型,在椎板缺损处分别覆盖等渗盐水(A组)、聚乳酸薄膜(B组)、几丁糖(C组)及几丁糖加聚乳酸薄膜(D组),术后12周对椎板切除部位进行大体观察、组织学观察及透射电镜比较各组间瘢痕形成和粘连情况.结果 B、C、D组的Rydell-Balazs粘连度评分、Nussvaum组织学评分均优于A组(P<0.01),D组优于B组和C组(P<0.01),B组与C组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 联合应用几丁糖加聚乳酸薄膜能有效预防硬膜外瘢痕粘连,比单独应用几丁糖或聚乳酸薄膜效果好.
-
自体骨髓移植治疗股骨头无菌性坏死
目的 探讨自体骨髓移植治疗股骨头坏死的疗效及其作用机制.方法 选用成年新西兰雄兔60只,造模后随机分为A、B、C三组.左侧股骨头作为对照组,不予处理,右侧为实验组.A组用米托蒽蓖按0.1 mg/kg量在数字减影型x射线机(DSA)导视下注入右侧股骨头内;B组在DSA下直接注入自体骨髓1 ml;C组先予以化疗(方法同A组),72h后注入自体骨髓1 ml.4个月后处死所有动物,取股骨头进行组织病理学及电镜观察.结果 A、B组内左右股骨头对比破骨细胞坏死数差异无统计学意义(P>0.05),而c组左右股骨头坏死数分别为40.60±4.11、21.23± 2.16,差异有统计学意义(P<0.05).C实验组镜下见大部分骨细胞结构清晰、完整,偶见坏死.结论 局部化疗+自体骨髓移植在细胞水平上对股骨头无菌性坏死具有一定的治疗作用.
-
靶向性蛋白激酶B1和环氧合酶-2 shRNA腺病毒载体的构建和在人胃癌细胞的表达
目的 构建靶向性蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)和环氧合酶-2(COX-2)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,观察其在人胃癌细胞株SGC-7901中的表达.方法 利用同源重组技术构建重组腺病毒载体pGSadeno-Akt1+COX-2(pGSadeno-A+C),经酶切及测序鉴定后转染人胚肾细胞HEK293包装成为重组rAd5-A+C腺病毒,并测定病毒的滴度.体外转染人胃癌细胞株SGC-7901后,Real-time PCR和蛋白印迹分别检测Akt1和COX-2 mRNA和蛋白质的表达.结果 成功构建rAd5-A+C重组腺病毒,测定包装的病毒滴度为1.0×1010pfu/ml.转染组Akt1和COX-2 mRNA表达明显下调,其△Ct值分别是(12.26±0.05)和(5.41±0.09),比rAd5-HK空载组(10.63±0.02)、(3.75±0.08)和对照组(10.57±0.02)、(3.73±0.08)增高(P<0.01),而空载组和对照组比较ΔCt值无明显变化(P>0.05).同样转染组Akt1和COX-2蛋白表达量与空载组和对照组比较分别下调70.5%和63.7%(P<0.01),空载组和对照组比较Akt1和COX-2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 靶向性Akt1和COX-2的shRNA腺病毒载体可以特异性抑制Akt1和COX-2的表达,可能成为胃癌靶向性Akt1和COX-2基因治疗的新策略.
-
膀胱尿路上皮癌患者外周血T淋巴细胞凋亡蛋白Fas的表达
目的 探讨膀胱尿路上皮癌与Fas介导的血T淋巴细胞凋亡的关系.方法 应用流式细胞仪检测52例膀胱癌患者和37例健康对照者外周血CD4Fas、CD8Fas阳性T细胞.结果 膀胱癌患者外周血CIM、CD8Fas阳性T细胞分别为(20.74±9.02)%、(7.51±5.93)%,对照组分别为(15.68±5.58)%、(4.27±3.08)%,肿瘤组较对照组明显增加(P<0.01).浸润组CD8Fas阳性T细胞数为(5.83±3.95)%,表浅组为(5.83±3.95)%,浸润组较表浅组明显降低(P<0.05).复发组CD4、CD8Fas阳性T细胞与初发组比较筹异无统计学意义(P>0.05).结论 血T淋巴细胞Fas表达的异常可能在膀胱癌的发生发展中起重要的作用.
-
肿瘤Ki-67抗原HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的鉴定
目的 鉴定Ki-67抗原HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位,为制备肿瘤疫苗提供依据.方法 根据BIMAS和SYFPEITHI数据库对人Ki-67抗原CTL表位综合评分结果,合成7条候选肽.通过T2-肽结合实验检测候选肽与HLA-A2分子亲和力;通过酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测HLA-A2阳性CTL细胞分泌IFN-γ能力,评价候选肽免疫原性.结果 合成的候选肽及阳性对照肽HIV-1 pel 476-484纯度均超过95%.T2-肽结合实验结果显示280～288位置Ki-67氨基酸序列LQGETQLLV与HLA-A2分子结合力较强,其能够诱导特异性CTL活化.结论 LQGETQLLV(280～288)是Ki-67抗原的HLA-A2限制性CTL表位.
-
H2O2诱导的肝星状细胞凋亡后胶原的变化
目的 观察Ⅰ型胶原(COL Ⅰ)和Ⅲ型胶原(COLⅢ)在H2O2诱导的肝星状细胞(HSC)凋亡后的变化.方法 用流式细胞术检测100 nmol/L的H2O2诱导HSC不同程度的凋亡;应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内COL Ⅰ、COLⅢ mRNA的表达及变化.结果 用100 nmol/L H2O2诱导HSC凋亡(凋亡率分别5.86%、58.55%、71.98%),COL Ⅰ、COL Ⅲ在活化的HSC-T6细胞内均高表达,且伴随凋亡的增加,表达急剧下降,COL Ⅰ的变化更明显.结论 诱导HSC凋亡可减少胶原基因的表达.
-
RNA干扰技术靶向P13K/AKT信号通路抵制胃腺癌SGC7901细胞侵袭转移的研究
目的 观察应用RNA干扰(RNAi)技术敲低PIK3R1、AKT1表达后在体外对胃腺癌SGC7901细胞侵袭的抑制作用.方法 将重组腺病毒质粒表达载体rAd5-A-P转染至SGC7901细胞.Realtime PCR和Western blot分别检测转染前后目的 基因mRNA和蛋白的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞外基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的浓度变化.划痕、Transwell、3-DMatrigel基质生长实验评价肿瘤细胞侵袭能力的变化.结果 rAd5-A-P可以有效抑制PIK3R1、AKT1的表达,MMP-2、MMP-9表达下调,基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-2表达上调,ELISA证实细胞外MM9-2、MMP-9浓度在治疗组明显减低.划痕实验显示rAd5-A-P转染组细胞转移运动能力明显减弱,Transwell穿过细胞数结果:对照组(105.0±4.0)和无义序列组(102.5±6.4),rAd5-A-P转染组(67.0±3.9),3-D的Matrigel基质生长实验显示与对照组和无义序列组比较,rAd5-A-P转染组细胞形成的细胞团块较小.结论 靶向AKT1、PIK3R1的RNAi技术可以序列特异性地抑制PIK3R1、AKT1表达,在体外明显抑制SGC7901细胞的侵袭能力.
-
不同门奇断流术式对门静脉高压症犬食管下段血管再生的影响
目的 观察不同断流术式对肝硬化门静脉高压症犬术后食管下段血管再生的影响.方法 将肝硬化门静脉高压症模型犬48条,随机分为A组(传统断流组)、B组(选择性断流组)、C组(吻合器断流组)及D组(对照组),每组12条,术后随机分为A1、B1、C1、D1和A2、B2、C2、D2组,分别于术后1、6个月处死取食管下段分段切片,其中C组取材时注意分清吻合口的上、下方,分别记为Ca、Cb.用免疫组织化学方法检测所取组织中血管特异性因子血管内皮生长因子(VEGF)、CD34及Ⅷ因子相关抗原(FⅧ-Rag)的表达.结果 术后1个月A1、B1、C1组食管下段各层VEGF的表达及CD34 MVD、FⅧ-Rag MVD明显低于D1组(P<0.05),B1组各指标明显低于A1组及C1b组,但明显高于C1a组(P均<0.05),C1a组各指标明显低于C1b组(P<0.05).术后6个月A2、B2组各指标分别较A1、B1组明显增高(P<0.05),C2a组仅外膜层各指标明显高于C1a组(P<0.05),而C2b组各层各指标明显高于C1b组(P<0.05).结论 3种不同断流术式术后1个月食管下段血管特异因子表达均下降,说明各断流术式近期可使食管下段血管减少,其中以吻合器断流术效果为明显.术后6个月,传统断流术及选择性断流术食管下段血管特异因子表达升高,而经腹吻合器门奇断流术吻合口上方黏膜下层和同有层食管下段血管特异因子表达无明显变化,表明后者术后吻合口上方食管下段血管再生明显低于其他断流术式.
-
胰岛素对百草枯诱导的PC12细胞的保护作用
目的 观察培养的PC12细胞中多巴胺D2受体(DA D2R)蛋白的表达,胰岛素对百草枯(paraquat,PQ)诱导的PC12细胞形态学、生存率和DA含量的影响.方法 应用免疫沉淀Western印迹分析技术对培养的PC12细胞中DA D2R表达的检测;应用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)法,观察PC12细胞暴露于不同浓度PQ组和胰岛素预先干预后再暴露于PQ组后细胞形态学和生存率的改变;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测空白对照PC12细胞组、PQ干预组、胰岛素组和胰岛素加PQ组PC12细胞上清液DA的浓度.结果 (1)Western法检测到培养的PC12细胞中有DA D2R蛋白的表达;(2)空白对照组PC12细胞形态胞体呈梭形,细胞突触完整;PC12细胞暴露T600 μmol/L PQ组24h,多数细胞胞体变圆、空泡变性、突触变短或消失.预加100 nmol/L胰岛素预处理20 min后、再暴露于600 μmol/L PQ组24 h,与空白对照组比较细胞形态略有改变,细胞形态呈梭形或不规则但非圆形,细胞突触又有生长;(3)PC12细胞生存率与PQ干预的浓度呈反向变化趋势;而胰岛素可以减少600 μmol/L PQ 24 h内对PC12细胞生存率的毒性损伤;(4)胰岛素可在一定程度上提高正常PC12细胞和600μmol/L PQ干预的PC12细胞上清液中的DA浓度,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 胰岛素对PQ损害的PC12多巴胺能神经元细胞有保护作用.
-
弥漫性脑损伤脑组织中bcl-2 mRNA、bax-mRNA的表达与凋亡率的变化
目的 探讨弥漫性脑损伤脑组织不同时间段bax-mRNA、bcl-2 mRNA表达及与脑细胞凋亡的关系.方法 依据Marmarou's弥漫性脑损伤动物模型有改进,应用SD雄性大鼠55只,随机分为两组:假手术(对照组)(n=5)和弥漫性脑损伤组(n=50),损伤组再按照不同时间段分组(n=5),损伤后大鼠自由进食饮水,按0.5、1、3、6、12、24、48、72 h、1周、2周等时间段提取大鼠皮层脑组织,一部分脑组织应用实时逆转录-聚合酶链反应(realtime RT-PCR)检测对照组与不同时间段外伤组bax-mRNA、bcl-2 mRNA表达,另取一部分皮层脑组织利用流式细胞仪进行脑细胞凋亡率测定.结果 对照组及各时间段外伤组bcl-2 mRNA Ct值分别为40.629±0.483、40.673±0.733、40.075±0.763、39.503±0.642、38.617±0.942、38.032±0.579、35.881±0.699、33.269±0.082、32.062±0.581、34.848±0.417、38.892±0.308,bcl-2 mRNA荧光强度对照组与不同时间段外伤组之间的比较组间差异有统计学意义(P<0.05);对照组及各时间段外伤组bax-mRNA Ct值分别为:27.787±0.523、30.117±0.477、30.669±0.367、31.263±0.413、31.696±0.304、31.724±0.409、32.313±0.391、33.59±0.325、34.271±0.366、31.191±0.342、30.475±0.659,bax-mRNA荧光强度对照组与不同时间段外伤组之间的比较组间差异有统计学意义(P<0.01);对照组及各时间段外伤组流式细胞仪测定凋亡率分别为:4.08±0.32、4.11±0.52、4.25±0.35、4.67±0.56、5.05±0.24、5.93±0.42、6.77±0.33、8.66±0.41、10.77±0.58、7.32±0.23、5.03±0.41.流式细胞仪测定凋亡率对照组与各时间段外伤组之间的比较组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 (1)外伤后bcl-2 mRNA表达有降低的趋势,72 h达到低点.(2)外伤后bax-mRNA表达有增高趋势,72 h达到高峰随后开始下降.(3)外伤后脑细胞凋亡有增高趋势,72 h达到高峰,脑细胞凋亡的增加,可能是外伤后脑神经功能减退或丧失的一个原因.
-
心肌梗死后移植骨髓间充质干细胞后全身细胞的分布
目的 观察经心肌梗死边缘区移植骨髓间充质干细胞(MSCs)24 h和2周后的全身分布.方法 雄性SD大鼠的MSCs用溴脱氧尿苷(BrdU)标记.将雌性SD大鼠经心梗3周后随机分为2组.第1组为标记细胞(3×10,50μl)经心肌注入心梗边缘区(n=12).第2组为等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)经心肌注入心梗边缘区(n=8).移植细胞24 h及2周后,体内细胞的分布情况通过实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测及病理切片免疫组织化学染色来评价.结果 细胞经心梗边缘区移植后可以分布在心脏以及心外脏器脾脏、肺脏和肝脏中.移植24 h后细胞主要在心脏中分布(467 467±191 387),其他脏器中的分布较少,而在2周后移植细胞在包括心脏(112 388±43 751)在内的各个脏器中的分布都很少,病理切片免疫组织化学染色结果显示与RT-PCR结果相符.结论 MSCs经心梗边缘区移植后主要在心脏中分布,同时脾脏、肺脏、肝脏中也有分布,但其分布数量随着移植时间锐减.
-
协同信号途径阻断和供体脾细胞输注诱导预存同种记忆性T淋巴细胞大鼠心脏移植物的耐受
目的 联合阻断OX40/OX40L和CD28/B7双协同信号途径和供体特异性脾细胞输注,诱导预存同种反应性记忆T淋巴细胞大鼠对同种心脏移植物的耐受.方法 建立大鼠预存同种反应性记忆T淋巴细胞的移植模型,采用免疫磁珠法分选CD8+CD44-记忆性T细胞;对过继转移供体特异性CD8+记忆性T细胞3 d的Lewis大鼠分别/合并输注AdCTLA4Ig、AdOX40Ig、供体脾细胞(DST),同时移植来至DA大鼠的心脏;48 h后取出心脏进行组织学分析、细胞因子表达分析,同时观察不同处理移植心脏存活时间.结果 AdCTLA4Ig+AdOX40Ig+DST组分别与AdCT-LA4Ig,AdOX40Ig和DST比较,心脏组织病理级别较低,白细胞介素(IL)-2及干扰素(IFN)-γ的表达水平也明显比其他组低很多,而心脏存活时间显著延长.结论 联合阻断OX40/OX40L和CD28/B7和供体特异性脾细胞输注能较好地诱导大鼠心脏移植物耐受.
-
胸腺修饰诱导同种异体静脉移植的免疫耐受研究
目的 观察大鼠胸腺内注射异基因抗原在同种异体异基因股静脉移植免疫耐受中的作用.方法 将48只SD大鼠随机分为4组:自体股静脉移植组(A组)、异体股静脉移植组(B组)、异体股静脉移植免疫抑制剂组(C组)、胸腺内注射供体组织相容性(MHC)抗原后移植组(D组).于2周后进行影像学、组织学、免疫学检测.结果 组织学检测结果显示:D组、C组急性排斥反应损伤较轻,B组血管壁的各层结构破坏重,可见大量炎性细胞浸润.B组受体大鼠血清干扰素(IFN)-γ浓度为(86.707±10.928)ng/L,显著高于A、C、D组[(29.328±4.170)、(69.076±8.059)、(63.355±4.895)ng/L,P<0.05];B组受体大鼠血清白细胞介素(IL)-4浓度为(23.656±3.369)ng/L,显著低于C、D组[(29.425±4.174)、(31.000±4.659)ng/L,P<0.05].结论 胸腺内注射异基因MHC抗原可诱导大鼠对同种异体血管移植的特异性免疫耐受.
-
表达端粒酶逆转录酶siRNA的溶瘤腺病毒对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用
目的 观察表达针对端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的小干扰RNA(hTERT siRNA)的溶瘤腺病毒(ZD55-hTERT)抑制肾癌移植瘤生长作用.方法 荷肾癌裸鼠随机分4组,每组8只.瘤体内分别注射ZD55-hTERT、增殖缺陷型腺病毒(Ad-hTERT)、溶瘤腺病毒ZD55-EGFP及磷酸盐缓冲液(PBS),每次注射病毒7×108pfu/只,连续注射3 d.注射后第7天,每组处死3只取肿瘤组织,免疫组织化学检测肿瘤hTERT、E1A表达及凋亡.第50天时处死动物测量肿瘤体积.结果 ZD55-hTERT、Ad-hTERT、ZD55-EGFP及PBS处理组肿瘤体积(mm3)分别为:124.1±27.5、609.0±102.5、499.8±77.1、1552.1±206.4,ZD55-hTERT处理组与各组之间差异有统计学意义(P<0.01).Ad-hTERT处理组肿瘤无E1A表达,ZD55-hTERT处理组E1A大量表达,表明病毒复制.ZD55-hTERT处理组肿瘤hTERT表达显著低于Ad-hTERT处理组,凋亡细胞阳性率均显著高于Ad-hTERT处理组.结论 表达hTERT siRNA的溶瘤腺病毒ZD55-hTERT具有更强的抑制肾癌生长作用.
-
长期高脂饮食诱导大鼠胰腺损伤的形态学演变
本研究通过对高脂饮食诱发的大鼠胰腺形态结构变化进行动态观察,为进一步探索长期高脂饮食与胰腺损害的发生机制提供研究基础.
-
人表皮生长因子受体4在13种实体瘤中的表达
HER4是由癌基因erbB4编码的第四人体表皮生长因子受体[1,2].本研究旨在检测HER4在13种实体肿瘤中的表达,探讨HER4过度表达与这些肿瘤临床生物学行为之间的关系.
-
过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响
过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.
-
5-脂氧合酶和血管内皮生长因子在肾癌中的表达及与预后的关系
5-脂氧合酶(5-Lox)是近年来发现的一个与肿瘤生长相关的新基因,已发现它在很多恶性肿瘤中呈高表达,如胃癌、肠癌,并且其表达与肿瘤的发展和患者的存活率相关,极具临床研究价值.我们采用免疫组织化学方法联合检测5-LoX和血管内皮生长因子(VEGF)在肾癌上的表达情况及相互关系,探讨它们作为肾癌的有效预后因素和预测指标的可行性.
-
肿瘤坏死因子受体相关因子6在小鼠急性胰腺炎中的定量表达
急性胰腺炎(AP)的发病机制尤其是分子机制不清楚.研究显示Toll样受体4(TLR4)在AP的发病过程中起重要的作用[1].我们采用雨蛙素诱导AP模型,探讨AP过程中,肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和TLR4的作用.
-
瘦素在骨关节炎患者血清中的表达
骨关节炎(OA)是一组多病因的关节退行性疾病,其主要病理特征为关节软骨破坏和骨赘增生.我们通过检测OA患者与正常人的血清瘦素水平,探讨瘦素在OA发生发展中的重要意义.
-
蜂毒素磁性纳米制剂对肝癌荷瘤鼠的治疗作用及其机制
我们通过小鼠H22肝癌皮下移植模型,探讨蜂毒素磁性纳米制剂对荷瘤小鼠的治疗作用及相关机制.
-
兔VX2腹膜转移癌模型的建立及转移特征
腹盆腔恶性肿瘤局域性进展往往形成腹膜癌,患者的中位生存期不足6个月[1].对于腹膜癌尚无标准治疗方案,为探讨对腹膜癌的治疗新模式,我们在小动物腹膜癌模型证明腹腔内化疗能延长宿主生存期的基础上,又用兔VX2瘤株建立大动物腹膜癌模型,并鉴定其自然临床病理特征.
-
应用二维电泳及质谱法筛选胰腺癌血清标志物
在中国,胰腺癌发病率逐渐增加,目前其肿瘤相关致死率已跃居第6位[1].早期发现是胰腺癌得以及时治疗的前提之一.目前缺乏理想的胰腺癌血清学标志物.蛋白质组学为肿瘤研究提供了新的思维和技术平台[2].在本研究中,我们初步探讨了二维电泳及质谱法筛选胰腺癌血清标志物中的应用,并希望发现一些与胰腺癌相关的标志物,为胰腺癌的早期诊断提供线索.
-
早期或超早期小骨窗开颅显微镜下治疗高血压脑出血
我们自2001年2月至2009年2月对76例高血压脑出血患者进行小骨窗开颅显微镜下颅内血肿清除术,取得了较好的疗效.
-
胰岛素样生长因子-1受体在肿瘤细胞的内化和泛素化分析
我们采用免疫印迹法(Western blot)、免疫沉淀技术(IP)和流式细胞仪(FACS)技术对鼠胚胎成纤维瘤三种细胞株胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的内化进行检测,探讨IGF-1R的内化在受体下行调节和β-arrestin在IGF-1R蛋白内化/泛素化降解中的作用.
-
三种免拆线的皮肤伤口美容缝合法
外伤伤口或手术切口的缝合通常行全层皮肤缝合,这种缝合方法缺点一是瘢痕大,二是瘢痕两侧有平行的点状瘢痕.用免拆线的真皮层缝合可以改变这种现象.
-
胶质细胞源性神经营养因子及神经黏附分子在胰腺癌神经浸润中的作用
近年来分子生物学研究表明神经营养因子家族成员及神经黏附分子在嗜神经浸润的肿瘤中常有异常表达.同时研究结果显示,神经营养因子家族成员--胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)可以通过神经黏附分子(NCAM)作为其受体发挥作用[1].但对于其两者在嗜神经浸润肿瘤中的相关性缺乏进一步研究.本实验选择GDNF作为切入点,结合其新发现的受体NCAM探讨其与胰腺癌的关系及两者在胰腺癌中的相关性.
-
干细胞抗原-1在大鼠阴茎海绵体组织中的表达
肌源性干细胞(MDSCs)是近年来发现的中胚层起源的多能干细胞.我们通过测定干细胞抗原-1(Sca-1)在不同月龄组SD大鼠阴茎海绵体平滑肌组织中的表达,观察阴茎海绵体中是否存在肌源性干细胞.
-
小分子干扰核糖核酸抑制乳腺癌细胞端粒酶逆转录酶表达提高阿霉素化疗的敏感性
人端粒酶逆转录酶(bTERT)是端粒酶活性的限速酶[1].抑制hTERT表达可有效抑制端粒酶活性[2],增加化、放疗的敏感性[3].本研究旨在研究hTERT基因表达被干扰后,阿霉素化疗敏感性的变化.
-
p33生长抑制基因1b启动子甲基化检测方法的建立与评价
琼脂糖珠包埋DNA修饰结合巢式-甲基化特异性PCR(nMSP)可提高检测的敏感性[1].我们应用该方法检测大肠癌细胞株中p33生长抑制基因1b(p33ING1b)启动子甲基化.
-
异基因大鼠全胰十二指肠移植模型的建立
为了研究和防治排斥反应,有必要建立稳定、符合胰腺移植免疫排斥反应特点的异基因大鼠全胰十二指肠移植(WPDT)模型.既往我们应用双套管+腹主动脉三通管外接法建立的WPDT模型[1],存在术后动脉玻璃套管容易栓塞、外接三通管难以管理、受鼠存活时间不能满足研究排斥反应要求等缺点,为此我们又通过改进动脉吻合方式,解决了上述问题.
-
乳腺癌脑转移与Slit/Robo信号通路的关系
乳腺癌患者发生脑转移的几率逐年呈上升趋势,临床上乳腺癌脑转移的机率可高达30%,从诊断乳腺癌到发现脑转移的中位时间为34个月[1].由于脑转移瘤患者其原发乳腺癌多为晚期,且脑转移瘤大多为实质性,易复发,如果未得到及时的治疗,其自然病程是进展性神经恶化,平均生存期为1～2个月,因此乳腺癌脑转移成为促进乳腺癌患者死亡的一个重要因素.
-
改良大鼠完全去胸腺免疫模型的建立
目的 在保证取出的胸腺不受损伤的前提下建立稳定的成年大鼠完全去胸腺模型.方法 150～300 g成年SD雄性大鼠30只,用手术聚光灯经大鼠颈前透照下,采用改良的2 ml甥料注射器自制的楔形气管插管套管,经口直视下行大鼠无创气管插管.连接小动物呼吸机支持呼吸下,开胸×10倍显微镜下摘除完整2叶胸腺.术中观察去除两叶胸腺是否完整,术后观察大鼠成活率,并随机选取9只大鼠用流式细胞仪检测术后3周内T细胞分化池的变化,3周后解剖及病理组织学检杳胸腺切除是否完全.结果 术后大鼠成活率100%,术中取出胸腺两叶均完整,术后3周解剖及病理组织学检查证实完全去胸腺率为100%.结论 该模型成活稳定,去胸腺彻底,取出的胸腺组织不受损伤可供移植用.
-
肝动脉重建的小鼠原位肝移植模型建立
目的 建立稳定的肝动脉重建的小鼠原位肝移植模型.方法 以"双袖套法"小鼠肝移植为基础,将带腹主动脉的供肝肝动脉与受体腹主动脉行端侧吻合.共完成小鼠原位肝移植70例,并观察术后24 h、1周、1个月受体存活率,术后1个月肝功能及肝组织病理变化.同时设立假手术组对照.结果 受体术后24 h、1周、1个月存活率分别为94.3%、91.4%、85.7%.术后1个月肝功能ALT:(39.20±2.09)U/L AST:(75.60±3.24)U/L.与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).病理显示肝组织结构良好.结论 该方法可稳定地建立肝动脉重建的小鼠原位肝移植模型.
-
胰腺癌发生机制研究进展
胰腺癌由于解剖位置的特殊性,大多数患者就诊时已属晚期,根治性手术切除率仅为20%,术后5年生存率低于5%.随着新的化疗药物如健择,化疗方式如介入、区域化疗以及新的放射治疗如三维立体适形放射治疗(CRT)、放射粒子植入等技术的综合应用,胰腺癌临床治疗效果有所改观.但相对其他消化道肿瘤而言,胰腺癌的远期疗效仍很不满意.因此,加强对胰腺癌发生与发展分子机制的探讨对于胰腺癌的早期诊断与综合治疗尤其是生物治疗的新策略的研究具有重要意义,本文就胰腺癌发生分子机制研究及相关技术方法进展进行概述.
-
腺病毒载体介导蛋白激酶B基因转染大鼠胰岛的研究
目的 观察携带外源基因的腺病毒在体外感染胰岛及外源基因在胰岛中的表达.方法 构建表达Akt1的腺病毒载体(Ad5-Akt1).按病毒细胞比(MOI值)500感染新分离的胰岛.通过免疫印迹分析(Western blot)测定胰岛培养上清液中Akt1的表达.结果 (1)成功构建了携带Akt1基因的腺病毒载体Ad5-Akt1,所获得病毒滴度为5.3×109pfu/ml;(2)表达增强型绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad5-EGFP)和Ad5-Akt1在体外可以感染胰岛,其中Ad5-EGFP转染率可达60%～70%.在Ad5-Akt1腺病毒感染的胰岛培养上清液中检测到了Akt1蛋白的表达.结论 腺病毒在体外可以有效感染大鼠胰岛,且携带的外源基因可以在胰岛细胞中稳定表达.
-
胰腺癌黏蛋白4基因修饰的树突状细胞疫苗构建及对胰腺癌细胞的免疫效应
目的 构建含有胰腺癌相关抗原黏蛋白(MUC)4(sv12)的腺病毒载体并转染树突状细胞(DC)构建DC疫苗,观察DC疫苗对胰腺癌细胞的免疫效应.方法 NCBI获得MUC4(sv12)mRNA序列,利用片段内酶切位点和重叠聚合酶链反应(PCR)技术获得MUCA(sv12)的编码序列,编码序列克隆到腺病毒载体,构建重组腺病毒(rAd-MUC4).病毒颗粒感染树突状细胞,产生活化的MUCA特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),乳酸脱氢酶(LDH)释放法和Elispot法分别检测体外杀伤活性及干扰素(IFN)-γ的表达,同时设置空病毒(GFP)组和磷酸盐缓冲液(PBS)组作为阴性对照.结果 成功构建含有胰腺癌相关抗原MUCA(sv12)基因的重组腺病毒,LDH法检测结果:MUCA特异性CTL对HLA-A2+和MUC4+Capan-1细胞的毒性[E/T=10:1时为(13.7±6.0)%,20:1时为(21.4±4.7)%,40:时为(36.1±9.5)%],高于HLA-A2+Mcf-7细胞及MUCA+Bxpe-3细胞(P<0.05).Elispot法检测结果:E/T=20:时,Capan-1细胞的MUCA组斑点数为(139.1±23.3),高于GFP组(66.0±16.4)和PBS组(30.5±4.4),P<0.05;GFP组和PBS组差异无统计学意义.结论 腺病毒介导MUCA基因修饰的DC疫苗,可以体外诱导产生特异性CTL细胞,并获得有效的HLA限制性杀伤效应.
-
小鼠异体Sertoli细胞诱导胰岛移植免疫耐受的作用
目的 观察小鼠Sertoli细胞是否能在异体内起到诱导局部免疫耐受、保护共移植异体胰岛的作用.方法 以糖尿病C57小鼠作移植受体,随机分4组,每组6只;以正常BALB/C小鼠为胰岛供体,正常C57小鼠和正常BALB/C小鼠各作为Serloli细胞供体.A组:单纯移植异体胰岛;B组:移植来源于C57小鼠的Sertoli细胞+BALB/C小鼠来源的胰岛;C组:移植均来源于BALB/C小鼠的Sertoli细胞及胰岛;D组:假手术组.监测各组移植受体的血糖尿糖变化,观察移植物的存活时间.结果 A组移植物平均存活时间为(6.50±2.35)d;B组为(55.67±4.84)d;C组为(51.33±5.05)d;D组未观察到血糖正常.B组及C组的移植方式均可逆转糖尿病小鼠的高血糖状态,移植物存活期均较A组有明显延长,其差异有统计学意义(P<0.05);而B组与C组的移植物存活时间差异无统计学意义(P>0.05).结论 同种异体来源的睾丸Sertoli细胞在异体内可起到诱导局部免疫耐受的效果,对共移植同种异体胰岛起到保护作用,其效果与自体睾丸Sertoli细胞相当.
-
核因子-κB在白细胞介导大鼠移植胰腺缺血再灌注损伤中的作用
目的 探讨核因子(NF)-κB在大鼠移植胰腺再灌注损伤中的作用及其可能机制.方法 应用同系大鼠异位全胰十二指肠移植模型,大鼠移植术前和术后5 min静脉注射NF-κB抑制剂脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(ProDTC)(15 mg/kg),移植术后24 h经腹主动脉取血测定大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-2浓度酶联免疫吸附试验(ELISA)、血糖、淀粉酶、脂肪酶水平.测定胰腺组织NF-κB p65蛋白含量(Western blot)、TNF-α mRNA、MIP-2 mRNA、细胞间黏附分子(ICAM)-1 mRNA表达逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、髓过氧化物酶(MPO)活性.并进行组织学观察.结果 移植后24 h ProDTC组和对照组血清中TNF-α、MIP-2水平、胰腺组织中NF-κB p65蛋白含量、TNF-α mRNA、MIP-2 mRNA、ICAM-1 mRNA表达、MPO活性均升高,而ProDTC组水平明显低于对照组(P<0.05).移植后24 h血糖、脂肪酶水平在PmDTC组[(9.1±2.8)mmoL/L,(192±26)U/L]明显低于对照组[(13.0±3.1)mmol/L,(297±31)U/L,P<0.05].ProDTC组胰小叶间质水肿和胰小叶内中性粒细胞浸润较轻.结论 移植胰腺缺血再灌注后,NF-κB活化上调了TNF-α、MIP-2、ICAM-1表达从而增加中性粒细胞浸润,外源性应用NF-κB抑制剂ProDTC可以减轻移植胰腺缺血再灌注损伤.
-
水通道蛋白1在急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织的表达及其意义
目的 探讨水通道蛋白1(AQP1)在急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠胰腺的表达及其意义.方法 将48只雄性SD大鼠随机分为对照组和ANP组,制模后3、6、12、18 h各时间点分别处死6只.记录腹水量,测定血清淀粉酶;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清AQP1含量;苏木素-伊红(HE)染色观察胰腺组织病理改变;伊文思兰染料(EB)血管外渗法检测胰腺组织毛细血管通透性;免疫组织化学和Westem blot法检测胰腺组织AQP1蛋白表达;荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测AQP1基因mRNA表达.结果 (1)对照组3、6、12、18 h血清淀粉酶水平分别为(1308±759)、(1077±508)、(1325±761)、(1328±762)U/L,ANP组分别为(9102±2199)、(8799±1634)、(9398±1473)、(9484±862)U/L;对照组胰腺组织EB含量分别为(205.61±32.99)、(141.46±27.18)、(96.94±26.79)、(61.43±24.82)mg/L;ANP组分别为(273.59±23.47)、(253.51±31.68)、(221.15±73.68)、(185.28±42.35)mg/L;血清AQP1含量对照组为(74.08±11.80)、(78.49±9.06)、(75.77±7.37)、(72.75±13.87)mg/L,ANP组为(73.29±9.61)、(62.85±7.28)、(62.07±4.39)、(46.33±11.91)mg/L,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01).(2)对照组3、6、12、18 h免疫组织化学灰度值分别为114.13±7.92、122.39±7.99、145.98±6.48、113.98±6.48,ANP组分别为80.07±14.89、110.54±4.45、103.77±10.48、99.18±6.95;对照组Western blot蛋白含量分别为1.19±0.33、1.02±0.25、0.90±0.33、1.06±0.20,ANP组分别为0.83±0.11、0.96±0.21、0.58±0.28、0.72±0.14.结果 均显示ANP组胰腺AQP1蛋白表达低于对照组(P<0.05);(3)对照组3、6、12、18 h荧光定量PCR检测ANP组胰腺AQP1基因mR-NA表达分别为2.13±0.63、2.02±1.40、2.07±0.86、2.49±2.47,ANP组为0.91±0.22、1.01±0.83、0.48±0.23、0.61±0.51,ANP组较对照组减弱(P<0.01).结论 ANP大鼠胰腺组织AQP1表达明显减弱,这可能在毛细血管渗漏综合征的发生中起重要作用.
-
移植物局部Th1和Th2型细胞因子在猪胰肾联合移植门脉和体静脉回流术式的表达及其意义
目的 探讨Th1和Th2型细胞因子在猪胰肾联合移植门脉(PVD)和体静脉(SVD)回流术式移植物局部表达及意义.方法 58例四川当地杂交第1代长白猪,分成假手术组(10例)、PE组(24例)和SE组(24例).假手术组行开腹术,PE组和SE组切除受者胰腺制成Ⅰ型糖尿病模型,并切除右肾.PE组门静脉与受者肠系膜上静脉吻合,SE组门静脉与受者肝下下腔静脉吻合,外分泌均采用肠道引流.术后第3、7天开腹取移植胰腺、肾脏组织,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA检测移植物局部Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子白细胞介素(IL)-4mRNA及蛋白的表达.结果 术后第3、7天,与对照组比较,移植肾和胰腺IFN-γ mRNA及蛋白在SE组和PE组均呈高表达(P<0.05),SE组高于PE组(P<0.05)(第7天,蛋白在对照组比SE组比PE组表达:移植胰腺,[(3.36±0.25)比(7.72±0.67)比(6.52±0.34)pg/mg蛋白],移植肾[(3.66±0.28)比(10.83±1.48)比(7.79±0.60)pg/mg蛋白].移植胰腺和肾IL-4 mRNA及蛋白在SE组和假手术组呈低表达,PE组呈高表达(P<0.05)(第7天,蛋白在对照组比SE组比PE组表达:移植胰腺,[(7.18±0.16)比(6.10±0.16)比(20.66±1.47)pg/mg蛋白];移植肾,[(5.74±0.48)比(10.38±0.92)比(19.66±1.57)pg/mg蛋白].结论 胰肾联合移植PVD术式移植物血流经过肝脏后可诱导,Th1细胞向Th2细胞偏离,是PVD免疫学优越性的可能机制.
-
大鼠胰腺癌微环境诱导未成熟树突状细胞功能的变化
目的 观察胰腺癌微环境对树突状细胞(DC)成熟的影响及功能变化并探讨胰腺肿瘤细胞免疫逃逸的机制.方法 培养树突状细胞,加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)40μg/L、白细胞介素(IL)-4 40μg/L,培养到第6天时得到大量的未成熟树突状细胞(imDC),加入大鼠胰腺癌细胞(AR42J cell)培养上清液诱导,流式细胞术检测DC的表面分子CD86、CD80的表达(n=6),观察能否延缓或阻断imDC的成熟及其在脂多糖(LPS)刺激后这种作用能否被逆转.并观察AR42J细胞培养上清诱导的Dc对同种异体混合淋巴细胞增殖.结果 加入胰腺癌癌细胞上清液培养的DC,与正常成熟的DC比较,CD80+CD86+阳性率由(70.88±3.60)%降至(7.15±0.71)%,LPS刺激后DC细胞的表面分子CD80+CD86+表达仍然较低(7.43±1.05)%,表明胰腺癌细胞培养上清液对DC的成熟有阻断作用.AR42J细胞上清诱导培养的imDC组刺激同种异体混合淋巴细胞增殖的强度显著低于正常培养的imDC组刺激同种异体混合淋巴细胞增殖的强度.结论 体外大鼠胰腺癌细胞培养上清液可以诱导DC处于不成熟状态,且这种不成熟状态不容易被逆转.
-
靶向Survivin的siRNA联合吉西他滨抑制胰腺癌细胞增殖
目的 构建靶向Survivin基因的siRNA真核表达载体,观察其对吉西他滨化疗抑制胰腺癌Pane-1细胞增殖的影响.方法 构建靶向Survivin基因的siRNA真核表达载体psiRNA-Survivin,行酶切和测序鉴定.用重组质粒转染Pane-1细胞并筛选稳定转染的细胞株,绘制细胞生长曲线.采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测Survivin的mRNA和蛋白表达变化.以吉西他滨分别作用于对照组和转染组Panc-1细胞24 h,噻唑蓝(MTY)比色法检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果 酶切和测序鉴定表明,成功构建了psiRNA-Survivin重组质粒.重组质粒稳定转染胰腺癌细胞株后,Survivin的mRNA和蛋白表达分别下调了79.2%和83.6%(P<0.05),生长曲线明显变平缓,并能显著增强吉西他滨对Panc-1细胞的增殖抑制[(24.6±4.5)%/(38.7±5.2)%]和凋亡诱导作用[(16.7±2.5)%/(26.8±3.4)%,P<0.05).结论 构建Survivin的siRNA表达载体可明显下调Survivin的表达,抑制Panc-1细胞增殖,并能提高细胞对吉西他滨的化疗敏感性.
-
畸胎瘤细胞源性生长因子shRNA增强胰腺癌细胞株Panc-1对健择敏感性的研究
目的 通过转染针对畸胎瘤细胞源性生长因子(PCDGF)shRNA至胰腺癌细胞株Panc-1中,观察对健择敏感性的变化,分析PCDGF因子对化疗药物敏感性的影响.方法 免疫组织化学和定量聚合酶链反应(PCR)测定PCDGF在胰腺癌组织中的表达,构建含2条shRNA的RNAi质粒,脂质体转染PCDGF shRNA至Panc-1,测定转染前后细胞对健择敏感性的变化.结果 PCDGF表达于多数胰腺癌细胞的细胞质中(阳性率为84.5%),显示胰腺癌组织PCDGF的表达明显高于胰腺囊腺瘤和胰腺炎(t=11.41,P<0.05),构建PCDGF shRNA质粒经脂质体转染后PC-DGF的表达显著受到抑制(抑制率为82.3%),在较高浓度时,健择的细胞毒作用明显增强.结论 针对PCDGF的shRNA能显著增加Panc-1对健择的敏感性.
-
茶多酚通过调节Akt通路诱导胰腺癌细胞凋亡
目的 观察茶多酚主要成分没石子儿茶素没石子酸酯( EGCG)诱导人胰腺癌Panc-1细胞凋亡过程中对Akt信号途径的调节作用.方法 以不同浓度EGCG (6.3、12.5、25.0、50.0 μmol/L)处理Panc-1细胞,用噻唑蓝(MTT)比色法检测其生长抑制作用,用琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡,用Western blot技术检测细胞中Akt分子(60 x103)的变化及Bad分子(23×103)的变化.结果 EGCG以时间及剂量依赖的方式抑制Panc-1细胞增殖并诱导Panc-1细胞凋亡(P<0.05).同时ECCG剂量依赖性降低了p-Akt( ser473)和p-Bad(ser136)蛋白的含量,而Akt总蛋白和Bad总蛋白无明显改变(P<0.05).结论 EGCG可通过抑制Akt信号通路并减轻该通路对Bad蛋白的阻断作用而诱导胰腺癌细胞凋亡.
-
磷脂酶A2在重症胰腺炎肾上腺损伤中的作用
目的 观察ⅡA型分泌型磷脂酶A2(sPLA2-Ⅱ A)在重症胰腺炎肾上腺损伤的作用.方法 将90只雄性Wistar大鼠分为假手术组、模型组和sPLA2抑制剂预处理组,分别设立0、3、6、12、24 h时间点,各时间点6只.sPLA2抑制剂预处理组,重症胰腺炎造模前30min由股静脉给予sPLA2抑制剂.观察肾上腺病理及血清皮质酮变化,检测肾上腺sPLA-Ⅱ A蛋白表达和sPLA2活性.结果 重症胰腺炎造模后肾上腺损伤进行性加重,肾上腺sPLA2活性显著增加(P<0.05),至6 h达峰值(P<0.05).与模型组比较,sPLA2抑制剂预处理缓解了肾上腺损伤,增加了24 h血清皮质酮值(P<0.05),并降低了肾上腺sPLA2-Ⅱ A表达及sPLA2活性(P<0.05).结论 sPLA2-Ⅱ A在重症胰腺炎肾上腺损伤中发挥重要作用.
-
人胰腺癌干细胞差异性基因的表达
目的 分选、鉴定人胰腺癌干细胞,运用基因芯片技术分析其差异性基因的表达.方法 运用流式分选技术分选胰腺癌干细胞(CD24+CD44+ESA+),NOD/SCID鼠移植瘤试验进行肿瘤干细胞特性鉴定.采用Affymetrix U133 plus2.0人类全基因组表达谱芯片对胰腺癌干细胞和非干细胞进行差异基因筛选.结果 分选得到人胰腺癌CD24+CD44+ESA+亚群细胞,占所有细胞的0.8%;5×103个CD24+CD44+ESA+细胞就能成瘤(2/4),而阴性细胞1×105才能成瘤(1/4);CD24+CD44+ESA+具有一定的自我更新和分化能力.基因芯片杂交获得6553(11.99%)条差异基因,胰腺癌干细胞中5255(9.61%)条上调表达,1298(2.37%)条下调表达.其中差异基因涉及细胞凋亡、细胞周期、代谢、细胞线粒体结构和耐药等多个方面.结论 胰腺癌于细胞具有自身特征性基因表达谱,为进一步从干细胞层面研究胰腺癌发病机制及靶向治疗奠定基础.
-
β受体在人胰腺癌细胞株中的表达及其在细胞侵袭中的作用
目的 探讨β受体在经典神经递质去甲肾上腺素(NE)诱导人胰腺癌细胞株Mia-PaCa-2侵袭能力增强过程中的作用及其机制.方法 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测人胰腺癌细胞株β受体的表达.实验分为对照组、NE干预组、普萘洛尔(Propranolol)干预组、普萘洛尔和NE共同干预组(NE&Propranolol).采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化;RT-PCR法和免疫细胞化学法分别检测细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白的表达.结果 人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2和BxPC3均表达β1和β2受体.NE组、NE&Pmpranolol组、Propranolol组和对照组穿膜细胞的吸光度值分别为0.78±0.02、0.32±0.03、0.26±0.01、0.28±0.02,NE组显著高于对照组和NE&Pmpranolol组(P<0.05),而Propranolol组穿膜细胞数与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);NE组中MMP-2、MMP-9和VEGF mRNA表达指数为0.87±0.02、1.04±0.02和0.92±0.01,蛋白表达灰度值为131.20±2.34、105.32±7.21和115.60±5.03,显著高于对照组和NE&Propranolol组(P<0.05),Propranolol组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 β受体在NE诱导胰腺癌细胞侵袭能力增强的发展过程中发挥重要作用,NE通过β受体介导上调MMP-2、MMP-9和VEGF的表达进而增强胰腺癌细胞的侵袭能力.
-
骨髓基质干细胞及其来源的产胰岛素细胞移植对受体胰岛和新生血管的影响
目的 观察骨髓基质干细胞(MSCs)及其来源的产胰岛素细胞(IPCs)移植对受体残余胰岛和其周围新生血管增殖的影响.方法 对大鼠MSCs进行体外诱导成为IPCs.对1型糖尿病大鼠随机分为胰岛素控制血糖组(对照组)、MSCs移植组及IPCs移植组3个治疗组(每组10只).至血糖开始下降至10mmoL/L,同期移除3组大鼠右肾及胰腺,分别进行PCNA、胰岛素和CD31抗体染色,观察3组大鼠肾脏和胰腺的胰岛素及血管内皮细胞表达情况.结果 MSCs诱导生成IPCs.移植物:移植侧的右肾均可见到较多的胰岛素和CD31阳性细胞.胰腺组织:(1)对照组:胰岛萎缩.(2)细胞移植组:残余胰岛增殖率:(20.84±3.48)%和(18.43±2.84)%(P>0.05),胰岛周围均有少量CD31阳性细胞.结论 MSCs及其来源的IPCs明显促进了受体残余胰岛周围新生血管的生成,进而使残余胰岛得到增殖,而MSCs在体内也可分化成IPCs和血管内皮细胞.
-
免疫增强型胰腺癌MUC1-VNTR-C144 DNA疫苗的构建
目的 构建免疫增强型胰腺癌MUC1-VNTR-C144 DNA疫苗.方法 在PeDNA 3.1-VNTR/Myc-his(+)A质粒靶基因之后插入乙型肝炎病毒核心抗原C144基因,构建MUC1-VNTR-C144 DNA疫苗.45只C57BL/6小鼠随机分3组,VC组接种PeDNA 3.1-VNTR-C144/Myc-his(+)A质粒,V组单纯接种PeDNA 3.1-VNTR/Myc-his(+)A质粒,C组单纯接种pcDNA3.1-C144/Myc-his(+)A质粒.4周后加强免疫1次.结果 VC组小鼠脾细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的特异性杀伤率(46.7±8.2)%显著高于V组(34.8±3.1)%和C组(12.9±1.2)%(E/T=80/1,P<0.01).而CTL对未经VNTR合成肽孵育的靶细胞EIA-VNTR杀伤率较低(P<0.01),VU 3C6可抑制CTL对经VNTR合成肽孵育的靶细胞EIA-VNTR+的杀伤活性(P<0.01),表明具有VC组诱生的CTL应答依然保持VNTR特异性.VC组小鼠血清抗VNTR抗体等效浓度(2810.2±308.3)mg/L高于V组(2323.5±238.3)mg/L和C组(2130.9±138.5)mg/L,差异有统计学意义(P<0.01).结论 增强型胰腺癌MUC1-VNTR-C144 DNA疫苗所诱生的VNTR特异的CTL应答和抗体应答显著增强.
-
胰腺癌微血管壁通透性的形态学研究
目的 观察胰腺癌微血管壁的通透性相关结构,为胰腺癌药物治疗靶向性的提高提供参考.方法 选取我院切除的中分化胰腺癌10例,对肿瘤中心、边缘、瘤旁、正常/远隔胰腺4个部位进行透射电镜检测.结果 胰腺癌微血管数量和内皮窗孔数量明显少于正常胰腺组织(P<0.05),且内皮间隙和窗孔的内径并不超过正常胰腺组织.胰腺癌微血管内皮间隙内径中位数为12.8～13.2 nm,5～95百分位数为0～24.4 nm,内皮间隙存在局部扩张的现象,宽处可以达到60.3～76.4 nm.胰腺癌微血管窗孔的内径在40.0nm左右.瘤旁组织破口较多,破口内径平均516.3 mm左右.结论 与正常胰腺组织比较,胰腺癌具有一定的微血管异质性,体现为血供较少和微血管壁通透性较低等特点.
-
缺氧微环境对胰腺癌细胞发生上皮向间叶转化的诱导作用
目的 探讨胰腺癌细胞在缺氧微环境中通过发生上皮向间叶转化(EMT)从而获得侵袭性表型的可能机制.方法 在缺氧微环境下培养胰腺癌细胞Pane-1、Transwell侵袭小室对比检测细胞在缺氧微环境下侵袭能力的变化情况.Western blot、免疫荧光检测缺氧对Panc-1细胞上皮细胞标记分子E-cadherin、间叶细胞标记分子vimentin表达的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测缺氧对EMT诱导因子Snail表达的影响.将编码HIF-1α cDNA的真核表达载体pCD-NA 3.1-HIF-1α瞬时转染Panc-1细胞,Western blot检测HIF-1α对E-cadherin、vimentin表达的影响.结果 常氧组细胞每高倍镜视野穿透数为(84±3)个,缺氧组为(121±5)个,差异有统计学意义(P<0.01).Panc-1细胞在常氧、缺氧12 h、缺氧24 h、缺氧48 h条件下E-cadherin蛋白的相对值分别为(0.59±0.04、54.00±0.05、0.45±0.10、0.36±0.03);vimentin蛋白的相对值分别为:(0.36±0.05、0.41±0.04、0.48±0.06、0.58±0.05),缺氧同常氧组比较差异有统计学意义(P<0.05).缺氧微环境下Panc-1细胞Snail mRNA的表达量升高,在缺氧第3天后差异具有统计学意义(P<0.05).Panc-1细胞转染HIF-1α前后,E-cadherin蛋白的相对值分别为0.63±0.05、0.47±0.07;Vvi-mentin蛋白的相对值分别为0.47±0.07、0.32±0.04,转染前后差异有统计学意义(P<0.05).结论 缺氧微环境可能通过活化HIF-lα、Snail等转录因子,促进胰腺癌细胞发生上皮向间叶转化,产生侵袭性表型.
-
我国实验外科研究的现状与展望
随着科学技术的进步和经济的快速发展,各种新兴学科突飞猛进,人类基因组计划、遗传工程、组织工程、生物克隆技术、转基因技术、纳米技术等高新技术在广泛开展,新的研究成果不断涌现.现代外科学只有紧跟当代各种生物科学的发展方向,并不断地从这些基础学科中汲取营养并发展创新,才能在21世纪获得进一步发展的机会.实验外科是联系基础医学和临床外科的"桥梁",是外科学创新发展的基础和先导.
-
胃癌外科研究进展
胃癌的发生是一个多因素、多步骤、多基因参与的复杂病理过程,涉及到多种癌基因、抑癌基因、DNA修复基因、生长因子/受体、细胞周期调节基因、细胞黏附分子等的变化.从分子与基因水平探讨胃肿瘤的发生机制、调控规律以及诊断和治疗,是当前胃癌外科实验研究的热点.通过分子生物学、基因组学、蛋白质组学等研究平台,研究癌基因激活和抑癌基因失活、肿瘤标志物、端粒和端粒酶对肿瘤发生发展的影响、肿瘤血管形成在肿瘤生长和转移中的作用、肿瘤细胞凋亡基因调控以及基因诊断和治疗等仍将是今后研究的方向.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
