人肝微粒体CYP亚型在新型吲哚醌类化合物629代谢中的作用

目的 研究人肝微粒体重组体系中不同CYP亚型在丝裂霉素C(MMC)的衍生物5-氮丙啶-3-羟甲基-1-甲基吲哚-4,7-二酮[5-(aziridin-1-yl)-3-hydroxymethyl-1-methylindole-4,7-dione,简称629]代谢中的作用.方法 不同浓度629与人肝脏微粒体共孵育,给予细胞不同CYP亚型特异性抑制剂的处理,用高压液相色谱法(high pressure liquid chro-matography,HPLC)分离、检测629的消失情况.结果 HPLC检测到629在肝脏微粒体中的代谢遵循酶动力学剂量效应关系,Km值为 336 μmol·L-1.P450酶系中CYP1A2、CYP2B6和CYP2A6被抑制后,可影响629的代谢(P＜0.05),并且3者中CYP1A2的影响较大,但三者间差异无显著性(P＞0.05)；而CYP3A4、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP2D6对629的代谢无影响(P＞0.05).结论 新型吲哚醌类生物还原物629可在肝脏代谢,其中CYP1A2、CYP2B6和CYP2A6可参与629的代谢,这为新型生物还原活性物设计、开发及临床上的合理用药具有重大的意义.

AG490对肾小管上皮细胞转分化影响的实验研究

目的 探讨炎症介质的特异性阻断剂AG490在白介素-1β(interleukin-1β IL-1β)诱导的高糖培养的人肾小管上皮细胞转分化中的作用.方法 体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKCs),随机分为高糖对照组(30 mmol·L-1);高糖(30 mmol·L-1)+IL-1β(5 μg·L-1)组;高糖(30 mmol·L-1)+IL-1β(5 μg·L-1)+AG490(10 μmol·L-1)组.分别于处理后24、48、72 h收集细胞,采用免疫细胞化学染色和蛋白Western blot法检测细胞角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)水平.结果 IL-1β能使高糖培养的人肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的合成增加,而肾小管上皮细胞的标志物CK-18的表达逐渐减少;IL-1β刺激的同时加入AG490干预能减弱IL-1β对肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的诱导作用,并使CK-18的表达回升.结论 炎症因子IL-1β能促进高糖培养的HKC发生表型转化,而炎症特异性阻断剂AG490能部分阻断IL-1β的该作用.

维生素K3通过下调mTOR信号途径而诱导HeLa细胞自噬

目的 观察Vit K3(维生素K3,vitamin K3)对HeLa细胞损伤过程中的自噬相关蛋白Beclin 1、LC3-Ⅱ表达的影响.方法 以HeLa细胞为研究对象,采用MTT检测细胞存活率,用Western blot方法检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ表达的变化和蛋白激酶B(PKB,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化-Akt/mTOR表达的变化.结果 30 μmol·L-1剂量以上的Vit K3可明显抑制HeLa细胞的增殖(P<0.05).Vit K3作用12 h后增加Beclin1和LC3-Ⅱ的蛋白表达水平(P<0.05),降低磷酸化的Akt/mTOR的蛋白表达水平(P<0.05).结论 Vit K3能明显抑制HeLa细胞增殖并具有诱导HeLa细胞发生自噬的作用,其机制可能与下调mTOR信号有关.

丙泊酚抑制机械牵张诱导的肺泡上皮细胞HMGB1启动子转录激活

目的 探讨丙泊酚对机械牵张诱导肺泡上皮细胞(A549)高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein, HMGB1)启动子转录激活的影响.方法 以基因重组技术将HMGB1启动子克隆入荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Basic,得到重组质粒pGL3-HMGB1P.采用脂质体介导的细胞转染技术将pGL3-HMGB1P和空载体pGL3-Basic分别转染A549细胞,以机械牵张和机械牵张+丙泊酚分别处理转染后的A549细胞,检测并比较荧光素酶活性,分别用Western blot和RT-PCR检测细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达.结果 酶切和测序结果证实重组载体pGL3-HMGB1P构建正确,荧光素酶活性检测显示重组载体pGL3-HMGB1P在A549细胞中有效表达.与未牵张组比较,牵张组HMGB1启动子的转录活性和HMGB1表达均明显增加(P<0.05);与牵张组比较,牵张+丙泊酚组HMGB1启动子的转录活性和HMGB1表达均明显降低(P<0.05).结论 丙泊酚在转录水平通过抑制机械牵张诱导HMGB1启动子的转录激活而影响HMGB1的表达,可能是丙泊酚防治机械牵张引起炎症反应的机制之一.

一氧化氮参与非诺贝特抗高糖高胰岛素诱导的心肌肥大

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(peroxisome proliferator-activated receptor-α, PPAR-α)特异性激动剂非诺贝特(fenofibrate, FF)在高糖高胰岛素(high glucose and insulin, HGI)所致心肌细胞肥大中的作用及其与一氧化氮(nitric oxide, NO)途径的关系.方法 乳鼠心肌细胞培养,以细胞表面积、蛋白含量和心房利钠因子mRNA表达为心肌肥大反映指标,观察FF对HGI致肥大作用的影响.利用Real-time PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白水平的表达;比色法和硝酸还原法分别检测细胞培养液中一氧化氮合酶(nitric oxide ynthase, NOS)的活性和NO的浓度.结果 FF浓度依赖性地抑制HGI诱导的心肌细胞肥大(P<0.01);FF 0.3 μmol·L-1明显上调HGI导致的PPAR-α以及内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)mRNA和蛋白表达的降低(P<0.05);并增加HGI降低的NOS活性和NO浓度(P<0.01).PPAR-α阻断剂MK 886可完全取消FF的上述作用(P<0.05).L-精氨酸的作用与FF相似(P<0.01).结论 FF可能通过激活PPAR-α,从而促进eNOS的表达及NO的释放,产生抗HGI诱导心肌肥大的作用.

黄连素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞FN及p38MAPK信号通路的影响

目的 研究黄连素对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质成分纤维连接蛋白及p38MAPK信号通路的影响,进一步探讨黄连素抗糖尿病肾病的作用机制.方法 实验分组:正常对照组、甘露醇组、高糖组、高糖+SB203580组、高糖+黄连素低剂量组、高糖+黄连素高剂量组共6组,观察黄连素对高糖培养下的大鼠肾小球系膜细胞纤维连接蛋白以及p38MAPK信号通路蛋白表达的影响.结果 与高糖组相比,黄连素降低系膜细胞纤维连接蛋白的蛋白表达水平,抑制p38MAPK及其下游核转录因子CREB的磷酸化.结论 黄连素抗糖尿病肾病的作用可能与其减少细胞外基质成分FN的积聚,抑制p38MAPK信号通路激活密切相关.

油酰乙醇胺对小鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的 观察新型PPARα激动剂油酰乙醇胺(oleoylethanolamide,OEA)对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用及特点.方法 线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞模型诱导脑缺血.OEA(10、20、40 mg·kg-1)在术前3 d开始每天灌胃给药1次;或在缺血前0.5 h、1 h、再灌注同时、再灌后1 h,各单次灌胃给予OEA 40 mg·kg-1.脑缺血1.5 h,再灌注24 h后,测定小鼠神经功能缺失评分、脑梗死体积、脑水肿等评定脑缺血损伤的指标.结果 OEA(20、40 mg·kg-1)术前多次给药及OEA(40 mg·kg-1)缺血前0.5 h或再灌注同时单次给药可明显改善小鼠神经功能损伤,减小脑梗死体积和减轻脑水肿程度,且以再灌注同时单次给药效果为明显.结论 OEA剂量及时间依赖性的保护小鼠局灶性脑缺血急性损伤,有效剂量为20 mg·kg-1和40 mg·kg-1,佳治疗时间点为再灌注同时.

1,3,7,9-四甲基尿酸抗抑郁作用的实验研究

目的 探讨1,3,7,9-四甲基尿酸(theacrine,TC)的抗抑郁作用.方法 采用悬尾实验、强迫游泳实验、自主活动实验、育亨宾(yohimbine)毒性实验、利血平(reserpine)实验以及5-羟色胺酸(5-HTP)诱导小鼠甩头行为等动物模型(各组剂量分别为3、10及30 mg·kg-1,bid,连续7 d灌胃给药)来评价TC的抗实验性抑郁效果及其可能的作用机制.结果与空白对照组相比,TC能明显缩短小鼠悬尾不动时间（P<0.01）及增加强迫游泳小鼠拨动转轮旋转次数（P<0.05）,且对自主活动无影响.TC可一定程度上增强yohimbine诱发实验动物死亡率,增强5HTP导致的甩头行为（P<0.01）.此外,TC也具有明显地改善reserpine引起的小鼠体温下降（P<0.01）,运动不能（P<0.05）和眼脸下垂（P<0.01）的作用.结论 TC在多种抑郁模型上显示一定的药理活性,这些作用可能与影响单胺类神经递质有关.

氟比洛芬酯预处理对大鼠全脑缺血/再灌注时脑组织TXA2/PGI2的影响

目的 探讨氟比洛芬酯预处理对大鼠全脑缺血/再灌注损伤的影响.方法 72只♂SD大鼠,体重250～350g,随机分为4组（n=18）：假手术组（SH组）、模型组（Model组）、氟比洛芬酯5 mg·kg-1组（F5组）和氟比洛芬酯10mg·kg-1组（F10组）.采用夹闭双侧颈总动脉20 min合并低血压法建立全脑缺血/再灌注（I/R）模型.F5组和F10组分别于缺血前15min静注氟比洛芬酯5 mg·kg-1+空白乳剂0.5 ml·kg-1、氟比洛芬酯10 mg·kg-1.于再灌注6、24、72h时行神经功能缺陷评分（NDS）、 HE染色观察海马CA1区细胞损伤情况、放射免疫法测定额区皮质血栓素A2（TXA2）和前列环素（PGI2）含量.结果 氟比洛芬酯5 mg·kg-1组（F5组）或氟比洛芬酯10mg·kg-1组（F10组）预处理可明显减轻大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区损伤,提高神经功能缺陷评分（NDS）,降低脑组织中TXA2含量和TXA2/PGI2值,且F10组较F5组海马CA1区损伤更轻.结论 氟比洛芬酯预处理可减轻全脑缺血/再灌注损伤,其机制可能与降低TXA2值和TXA2/PGI2值有关.

氯通道阻断剂对NO诱导离体大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的 观察氯通道阻断剂SITS和DIDS对NO诱导的大鼠离体海马神经元凋亡的保护作用.方法离体培养12 d的SD大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、NO处理组、NO处理后使用氯通道阻断剂组,对各组神经元分别在相应的时间点进行Hoechst荧光染色观察凋亡细胞数和MTT实验定量检测神经元的存活率,Western blot分析凋亡信号分子Caspase-3的变化.结果 SITS和DIDS呈剂量依赖性地抑制NO诱导的神经元损伤,并能抑制损伤所引起的Caspase-3的激活,提高神经元的存活率.结论 氯通道阻断剂对NO诱导的大鼠海马神经元凋亡有一定的保护作用.

罗红霉素通过诱导型一氧化氮合酶/一氧化氮途径抑制哮喘大鼠气道炎症

目的 探讨罗红霉素对哮喘大鼠支气管诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及一氧化氮(NO)的影响.方法 24只成年哮喘大鼠随机分成对照组、哮喘组以及罗红霉素组.对支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数及嗜酸性粒细胞计数,免疫组织化学检测大鼠支气管上皮细胞iNOS蛋白表达,RT-PCR检测肺组织iNOS mRNA表达,分光光度计检测肺组织iNOS活性及NO含量.双抗体夹心法检测肺组织白细胞介素-4(IL-4)及干扰素-γ(IFN-γ).结果 哮喘组大鼠BALF细胞总数及嗜酸性粒细胞分类分别为(7.28±1.65)×108·L-1、(7.73±1.54)%,均高于对照组(3.76±0.97)×108·L-1、(1.27±0.60)%;罗红霉素组BALF细胞总数及嗜酸性粒细胞分类分别为(5.68±0.95)×108·L-1、(5.54±1.53)%,明显低于哮喘组,差异有统计学意义.哮喘组肺组织IL-4浓度、iNOS活性及NO含量高于对照组,罗红霉素组肺组织IL-4浓度、iNOS活性及NO含量低于哮喘组.哮喘组肺组织IFN-γ浓度低于对照组,罗红霉素组肺组织IFN-γ浓度高于哮喘组.哮喘大鼠支气管上皮细胞iNOS蛋白及肺组织iNOS mRNA表达分布吸光度值分别为(0.25±0.06)、(0.52±0.14),较对照组[(0.14±0.05),(0.33±0.05)]明显增强;但罗红霉素组iNOS蛋白及mRNA表达为(0.15±0.03)、(0.35±0.07),均明显较哮喘组减弱.结论 罗红霉素通过干预哮喘大鼠气道IL-4、IFN-γ以及iNOS/NO体系,抑制哮喘气道炎症反应.

云芝多糖B对巨噬细胞膜硫酸软骨素-蛋白聚糖结合氧化修饰低密度脂蛋白的影响

目的 探讨野生云芝多糖水溶性新组分CVPS-B对RAW264.7巨噬细胞膜硫酸软骨素-蛋白聚糖(CS-PGs)结合氧化修饰低密度脂蛋白(Ox-LDL)的影响.方法 分别用溴化氰活化的Sepharose CL-4B亲和层析及体外结合CS-A的方法分别测定CS/PGs与Ox-LDL的结合率;用离子交换层析提取RAW264.7巨噬细胞膜PGs;用1,9-二甲基亚甲基蓝(DMMB)分光光度法测定糖胺聚糖.结果 在17 μmol MDA·g-1 protein Ox-LDL水平,不同剂量CVPS-B(10、50及100 μg)在体外降低Ox-LDL(200 μg)与CS-A(100 μg)结合,分别降低14%、29%(P<0.05)及43%(P<0.01).不同剂量CVPS-(10、50及100 μg)在体外降低Ox-LDL(17 μmol MDA·g-1 protein)与巨噬细胞膜表面PGs结合,分别降低8%、27%(P<0.05)及38%(P<0.01).不同剂量CVPS-B可抑制Ox-LDL(50 mg·L-1,17 μmol MDA·g-1 protein)诱导泡沫细胞的形成.结论 CVPS-B可体外抑制巨噬细胞膜CS-PGs结合Ox-LDL.

自噬参与老龄大鼠对Rotenone神经毒性的易感性

目的 探讨自噬是否参与老龄SD大鼠多巴胺(DA)能神经元对Rotenone神经毒性的易感性.方法♂ SD大鼠,分别构建3、12、20 mon组,每个月龄组又随机分为自然增龄组和Rotenone处理组,以Rotenone 1.0 mg·kg-1·d-1背部皮下注射,连续给药30 d,每周停药1 d,构建SD大鼠Rotenone染毒模型.大鼠黑质连续切片,进行酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组化染色; Western blot检测黑质部位微管相关蛋白轻链-3(LC3)蛋白表达水平;透射电镜观察黑质神经元中自噬体形成和溶酶体激活.结果 在自然增龄组,大鼠黑质TH阳性细胞计数以12 mon组为高;Rotenone处理后各月龄组TH阳性细胞计数均比相应自然增龄组降低(P<0.01),且20 mon组降低为明显.Western blot结果显示,自然增龄组大鼠黑质部位LC3表达在20 mon组比3 mon组下降(P<0.01),Rotenone处理后各月龄组大鼠黑质部位LC3表达均比相应自然增龄组上调(P<0.01).透射电镜显示Rotenone处理后大鼠黑质神经元可见自噬小体和溶酶体数目增多.结论 自噬参与老龄大鼠DA能神经元对Rotenone神经毒性的易感性.

β-内啡肽在中枢吗啡预处理减轻大鼠心肌缺血后损伤中的作用

目的 观察中枢与外周β-内啡肽对缺血后心肌的影响及其在侧脑室吗啡预处理减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的含量变化,探讨β-内啡肽在中枢吗啡预处理在体大鼠缺血后心肌保护作用中的角色.方法 66只♂SD大鼠,分别建立侧脑室微量注射和心肌缺血/再灌注损伤动物模型.

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对K562细胞分化和细胞周期的影响

目的 本研究探讨新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对K562细胞株的抑制增殖和诱导分化活性并对其机制进行研究.方法 ATPR作用于K562细胞3 d后,通过MTT法检测细胞的增殖,NBT还原实验法分析细胞的分化指标,瑞氏染色法在油镜下观察加药前后细胞形态学变化,FCM检测分析细胞周期,RT-PCR法检测cyclin E、cyclin D1、CDK2、CDK4、CDK6、p21cip1、p27kip1、p57kip2和PCNA mRNA的变化情况.Western blot法检测cyclin D1和CDK4蛋白表达的改变.结果 ATPR呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖的作用.ATPR诱导分化活性表现为NBT阳性细胞率增加,油镜下观察K562细胞有分化成熟的改变,G0/G1期细胞表达量增加,S期细胞表达量减少,呈G1期阻滞.RT-PCR检测发现cyclin E、cyclin D1、CDK2、CDK4、CDK6表达减少,PCNA、P21cip1、P27kip1改变不明显,P57kip2表达增加.Western blot检测cyclin D1和CDK4蛋白表达减少.结论 ATPR有较强的抑制K562细胞增殖并诱导其分化的活性,并通过上调P57kip2的表达,抑制Cyclin-CDK激酶复合物,发挥细胞周期阻滞的作用.

黄芪多糖对糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡作用及机制的研究

目的 观察黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠血清TNF-α水平及胰岛β细胞Caspase-3表达的影响,初步探讨其作用及作用机制.方法 采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)55 mg·kg-1腹腔注射建立DM大鼠模型,实验分4组:正常组、DM组、APS低剂量组和APS高剂量组,后两组于模型成功后应用APS 200、400 mg·kg-1·d-1腹腔注射6 wk,放射免疫分析法检测血清TNF-α含量,免疫组织化学法观察胰岛β细胞Caspase-3 的表达.结果① DM组大鼠,血清TNF-α水平较正常组明显升高(P<0.05);治疗后,APS高剂量组和低剂量组血清TNF-α水平均较DM组明显降低(P<0.05).② 正常组大鼠胰岛β细胞Caspase-3表达弱阳性,DM组大鼠β细胞Caspase-3表达则呈强阳性,APS低剂量组和高剂量组大鼠β细胞Caspase-3的表达较DM组明显减少.结论 TNF-α参与DM大鼠的发病过程,APS可降低TNF-α的过高表达,减少胰岛β细胞Caspase-3的表达,抑制胰岛β细胞凋亡.

氯胺酮抗惊厥的作用机制

目的 观察氯胺酮对惊厥小鼠不同脑区Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶以及NOS酶活性的影响,探讨氯胺酮抗惊厥作用的中枢机制.方法 昆明种小鼠随机分成空白组、生理盐水(NS)组、氯胺酮25 mg·kg-1(KetⅠ)和50 mg·kg-1(KetⅡ)组.空白组直接断头取脑.其余各组分别ip相应药物,5 min后ip士的宁1.5 mg·kg-1诱发惊厥,观察惊厥小鼠行为学变化,并于给士的宁30 min后断头,用分光光度计法测定皮层额、顶、枕脑区的Na+,K+-ATP 酶、Ca2+-ATP酶和NOS酶活性.结果 氯胺酮组明显降低动物死亡率,KetⅡ组惊厥持续期较KetⅠ组明显缩短.与空白组相比,NS组和KetⅠ组Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性均有降低,KetⅡ组顶、枕区Na+,K+-ATP和Ca2+-ATP酶活性维持在正常水平;KetⅡ组TNOS酶活性降低约1/3(P<0.05),各组对iNOS活性均无影响.结论 氯胺酮抗惊厥作用机制可能与增加大脑皮层顶枕区的Na+,K+-ATP和Ca2+-ATP酶活性、降低cNOS酶活性有关.

CYP51靶酶氨基酸残基Y118、S378与新型唑类药物作用机制研究

目的 研究新筛选合成的唑类化合物A1、A3、E2、E8与功能氨基酸残基Y118、S378的相互作用,阐明靶酶与新型药物的作用机制,为特异性唑类抗真菌药物的合成和筛选提供理论依据.方法 用微量液基稀释法和GC-MS法分别在细胞水平和离体酶水平研究5个化合物(氟康唑、艾迪康唑、A1、A3、E2、E8)对靶酶不同突变衍生体蛋白的MIC80值和相对抑酶活性,用Roman光谱法研究化合物与酶的结合能力.结果 不同化合物对突变体酶的抑制效应有差异,与氟康唑相比艾迪康唑、A系和E系化合物的体外抗菌效果强,Y118突变体对受试药物艾迪康唑、A3、E8的敏感性较对氟康唑的作用效应明显下降;S378残基对A3、E8化合物选择性强于氟康唑和艾迪康唑.结论 结果支持同源模建的研究结论,Y118、S378残基与化合物特定侧链的化学集团形成配位结合或其它的相互作用,增强酶与化合物的结合能力,提高了化合物的抗真菌活性.

异补骨脂素的植物雌激素作用及其机制的探讨

目的 利用雌激素受体(estrogenic receptor,ER)阳性乳腺癌T47D细胞和ER阴性乳腺癌MDA-MB231细胞观察异补骨脂素(isopsoralen)的雌激素样作用,并探讨其可能的作用靶点和机制.方法 以ER拮抗剂ICI182,780为工具药,采用MTT细胞增殖实验观察异补骨脂素对T47D和MDA-MB231细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测细胞周期分布的变化.同时,利用实时荧光定量PCR法及流式细胞术检测异补骨脂素对T47D细胞pS2 mRNA及蛋白表达情况的影响.结果 1×10-6 mol·L-1和1×10-7 mol·L-1异补骨脂素能够促进T47D细胞增殖,提高细胞分裂增殖指数,且该作用可被ICI182,780所拮抗;1×10-6 mol·L-1和1×10-7 mol·L-1异补骨脂素对MDA-MB231细胞增殖无影响.PCR及流式蛋白检测结果显示:1×10-6 mol·L-1和1×10-7 mol·L-1异补骨脂素可使pS2 mRNA和蛋白表达增加,同时加入ICI182,780可部分拮抗异补骨脂素对pS2表达的诱导和促进作用.结论 异补骨脂素具有植物雌激素作用,该效应可通过作用于靶细胞雌激素受体途径实现.

外源性LTB4对CIA小鼠Treg/Th17脾细胞分化的作用

目的 探讨外源性白三烯B4(LTB4)对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠脾细胞调节性T细胞(Treg)和Th17细胞分化的调节, 进一步阐明LTB4在类风湿关节炎(RA)发病中的作用机制.方法 建立CIA小鼠模型,取造模d 28的脾细胞,体外实验分析外源性LTB4对Treg和Th17细胞分化的影响.应用流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+细胞的数量,荧光定量PCR技术检测调控Treg和Th17细胞分化的特异性转录因子Foxp3和RORγt的mRNA的表达,酶联免疫吸附(ELISA)方法检测培养细胞上清IL-17的含量.结果 成功建立CIA小鼠模型;造模d 28分离小鼠脾细胞,体外培养加入鸡Ⅱ型胶原(CⅡ)共同孵育,随着LTB4浓度增加 (0.01、0.1、1 μmol·L-1),CD4+CD25+Foxp3+细胞数量相应减少,Foxp3 mRNA的表达相应降低;相反,IL-17的含量相应增加,RORγt mRNA的表达相应升高.结论 LTB4抑制CIA模型脾细胞Treg细胞的分化,促进Th17细胞的分化,提示LTB4在CIA发病过程中具有一定的促炎活性.

三羟异黄酮抑制大鼠脑缺血铜蓝蛋白的时相变化

目的 探讨植物性雌激素三羟异黄酮(genistein,GST)对局灶性永久性脑缺血♂大鼠的大脑皮层铜蓝蛋白(ceruloplasmin,CP)表达的影响.方法 利用免疫组织化学和Western blot法,观察颈内动脉注射GST对♂大鼠局灶性永久性脑缺血模型中大脑皮层CP表达的影响.结果 脑缺血过程中CP的表达呈时相性变化,缺血6、12、24 h低于假手术组,48、72 h高于假手术组;GST组CP的表达在不同时段均明显低于缺血组,雌激素受体阻断剂他莫昔芬(tamoxifen,TAM)可阻断此作用.结论 GST可抑制脑缺血时CP的时相性变化,提示GST可通过雌激素受体抑制脑内铁相关的氧化应激损伤,提供神经保护作用.

罗通定在人、比格犬和大鼠肝微粒体代谢转化的体外比较研究

目的 体外研究罗通定(rotundine, RTD)在大鼠、比格犬和人肝微粒体中酶代谢动力学及代谢产物差异.方法 优化3个种属肝微粒体与RTD反应体系,应用LC-MS测定RTD在3种肝微粒体中的体外代谢消除,应用LC-MS/MS分析比较RTD在3种肝微粒体中代谢产物种类和生成量的差异,计算并比较相应的活性值.结果 RTD在人肝微粒体中代谢转化慢,其相应的动力学参数为Km=2.67 μmol·L-1、Vmax=0.095 μmol·L-1·min-1、T12=298±18.0 min、CLint=14.6±0.91 ml·min-1·kg-1;大鼠中相应的动力学参数为Km=3.24 μmol·L-1、Vmax=0.122 μmol·L-1·min-1、T12=71.0±2.30 min、CLint=87.5±2.79 ml·min-1·kg-1;比格犬中相应的动力学参数为Km=5.31 μmol·L-1、Vmax=0.228 μmol·L-1·min-1、T12=62.3±0.647 min、CLint=139±1.43 ml·min-1·kg-1.RTD在3个种属肝微粒体中均代谢产生4个O-去甲基后的羟基化同分异构体产物,但4个产物的相对生成百分比在不同种属肝微粒体中有一定差异.结论 罗通定在体外人、大鼠和比格犬肝微粒体中主要的I相代谢途径相同,但是酶代谢动力学性质及代谢产物的生成量存在着一定的差异.

糖皮质激素调控哮喘大鼠气道重塑中TGF-β1/Smad信号通路的研究

目的 观察糖皮质激素对哮喘大鼠气道重塑中转换生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路的作用.方法 以卵清白蛋白(OVA)致敏与激发建立哮喘大鼠气道重塑模型.SPF级♂SD大鼠40只分为对照组(A组)、哮喘组(B组)、布地奈德组(C组)和地塞米松干预组(D组),每组10只.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中TGF-β1的浓度,免疫组化法检测肺组织TGF-β1、P-Smad 2、P-Smad 3、Smad 6和Smad 7蛋白的表达.结果 与A组比较,B组支气管壁厚度(Wat)、平滑肌厚度(Wam)、血清、BAFL中TGF-β1的浓度、P-Smad 2和P-Smad 3的蛋白表达均增高,Smad 6、Smad 7的蛋白表达低于A组,经布地奈德组和地塞米松干预后,Wat、Wam、血清、BAFL中TGF-β1的浓度、TGF-β1、P-Smad 2和P-Smad 3的蛋白表达均下降,Smad 6、Smad 7的蛋白表达增强.C组和D组Wat、Wam、血清、BAFL中TGF-β1的浓度、TGF-β1 P-Smad 2、P-Smad 3、Smad 6和Smad 7的蛋白表达比较无明显差异.免疫组化显示TGF-β1和Smad 6蛋白表达于胞质,Smad 7、P-Smad 3和P-Smad 2蛋白表达于胞质和胞核,主要表达于支气管上皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞及散在的炎性细胞.大鼠肺组织中Smad 6蛋白和Smad 7蛋白表达呈正相关,P-Smad 2蛋白和P-Smad 3蛋白表达呈正相关.结论 糖皮质激素可通过调控TGF-β1/Smad信号通路而拮抗哮喘气道重塑.

蛇毒抗补体蛋白atrase B 抑制补体活化引起的血小板聚集

目的 观察眼镜蛇毒抗补体蛋白atrase B抑制补体活化引起的血小板聚集.方法采用眼镜蛇毒因子激活补体诱导血小板聚集,观察atrase B对补体活化引起人凝胶过滤血小板聚集的影响,并采用流式细胞仪测定血小板膜P-选择素和GPⅡb/Ⅲa表达情况.结果 Atrase B能抑制补体激活引起的血小板聚集和P-选择素、GPⅡb/Ⅲa在血小板膜上的表达.结论眼镜蛇毒抗补体蛋白atrase B能有效抑制补体激活引起的血小板活化、聚集.

CYP450氧化还原酶的遗传多态对药物代谢的影响

CYP450氧化还原酶(cytochrome P450 oxidoreductase, POR)是所有肝微粒体的细胞色素P450氧化酶(cytochrome P450 monooxygenases, CYP)的唯一电子供体,其中一些CYP是I相药物代谢酶,负责临床上超过80%药物的氧化代谢.另外,POR直接介导了一些抗肿瘤前体药物的代谢.因此,POR的遗传多态引起其活性的改变,对临床药物代谢具有非常重要的临床意义.该文总结了近年来POR的遗传多态影响药物代谢的新研究进展.

PPARβ/δ在炎症中的作用

过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptors,PPARs)是配体激活的转录因子,属于核受体超家族成员.PPARs有3种亚型,即PPARα(NR1C1)、PPARβ/δ(NUC1;NR1C2) 和PPARγ(NR1C3).大量研究表明PPARs广泛参与机体的脂质代谢、糖代谢、能量代谢、血压调节、细胞生长分化及生殖过程,并在炎症过程中发挥重要的作用.近年来,PPARβ/δ在炎症发生中的作用及其调控机制日益受到人们的关注,该文对PPARβ/δ在炎症发生中的作用作一综述.

CYP3A4酶介导的人类药物代谢性别差异

药代动力学的性别差异是临床上药物疗效的重要影响因素.引起药代动力学性别差异的比较重要的分子因素包括药物代谢酶和药物转运体等.CYP3A4是人体含量丰富的酶,具有广泛的代谢底物.大部分体内、外研究表明CYP3A4底物的代谢具有明显的性别差异,女性体内的代谢快于男性.该文系统综述人肝脏CYP3A4酶介导的药物代谢性别差异的研究进展.

JNK信号级联的诱导性失活机制

MAPKKK(MEKK1或ASK1)/MAPKK(SEK1或MKK7)/JNK信号级联是介导细胞凋亡的重要信号通路,但在外界刺激下,机体也能诱导性抑制JNK激活,阻止细胞损伤.MAPK磷酸酶能直接诱导JNK去磷酸化灭活JNK;NO可使JNK的半胱氨酸残基上的巯基亚硝化灭活JNK.针对JNK上游激酶级联,SGK1或Akt可以磷酸化SEK1的Ser78灭活SEK1;c-FLIPL能够结合MKK7上活化JNK的位点,抑制其对JNK的活化.半胱氨酸转移酶 Mu 1-1结合MEKK1;TRX、半胱氨酸转移酶π1-1可以结合ASK1,灭活MAPKKK,继而导致细胞内MAPKK/JNK活性降低,阻断信号通路.JNK的失活能增强肿瘤细胞的耐药性,也能抵抗各种刺激导致的细胞损伤.该文综述了上述信号蛋白诱导性灭活JNK的机制及其介导的抗凋亡效应.

调控环磷腺苷信号通路治疗病理性疼痛

病理性疼痛是困扰人类健康的一种常见疾患,寻找合适的治疗靶点控制病理性疼痛是目前疼痛研究的一个重要方向.近年的研究发现,活化的炎细胞、神经胶质细胞在病理性疼痛中发挥重要作用.环磷腺苷是存在于多种细胞内的第二信使,有文献报道促进环磷腺苷通路能抑制炎细胞及胶质细胞活性,进而治疗病理性疼痛.该文对环磷腺苷通路抑制炎细胞及胶质细胞活化的机制,以及磷酸二酯酶抑制剂治疗病理性疼痛的研究现状做一综述.

DJ-1基因:抗帕金森病药物作用的可能新靶点

帕金森病是一种常见于中老年人群的神经系统退行性疾病,其发病与环境因素和遗传因素相关.DJ-1的基因突变和氧化损伤分别与家族性和散发性帕金森病相关.DJ-1基因突变或氧化损伤导致帕金森病的机制包括氧化应激、线粒体损伤和蛋白酶体损伤.此外,DJ-1还是散发性帕金森病的生物标记物,并且有可能成为抗帕金森病药物作用的潜在新靶点.

大黄蛰虫丸抗大鼠肺纤维化的作用及对外周血T淋巴细胞亚群的影响

大黄蛰虫丸[dahuangzhechong(DHZC)pill]是<金匮要略>治疗虚劳挟瘀的代表方.文献报道其能减轻肝纤维化,作者也曾观察到大黄蛰虫丸能减轻肺纤维化大鼠初期肺泡炎程度并抑制肺组织中TNFα的表达[1],本实验进一步观察了大黄蛰虫丸对大鼠肺纤维化形成阶段的防治作用及对外周血CD4、CD8T淋巴细胞亚群的影响,探讨其抗纤维化的作用及机制.

鞘内注射氟代柠檬酸对糖尿病大鼠神经病理性疼痛的影响

研究发现脊髓的星形胶质细胞在疼痛的发生和维持中起到十分重要作用[1～3].氟代柠檬酸(flourocltrate,FC)是星形胶质细胞的特异性抑制剂,它在脊神经损伤模型中能抑制星形胶质细胞过渡活化,减轻神经病理性疼痛[2,3].但氟代柠檬酸对糖尿病大鼠神经病理性疼痛的影响如何尚未见研究.本研究观察氟代柠檬酸对糖尿病大鼠神经病理性疼痛模型大鼠痛行为及脊髓星形胶质细胞的影响,以探讨其机制.

两面针中木脂素化合物结晶-8对致痛大鼠脑内β-内啡肽表达的影响

两面针[Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC.]又名入地金牛、蔓椒、双面针、双背针等,为芸香科花椒属藤本植物,资源丰富,主要分布在浙江、广东、广西等地.

人类UGT2B17基因缺失的多重PCR分型方法

目的 建立一种快速有效的人类UGT2B17基因缺失型的PCR分型方法.方法 针对人类基因组UGT2B17基因缺失型和外显子序列设计引物,采用多重PCR法进行分型.结果 成功建立了一种多重PCR基因分型方法,并以普通PCR法和测序法验证.对安徽皖南地区健康人群UGT2B17基因分布进行了初步分析.结论 所建立的多重PCR方法为一种有效便捷的UGT2B17基因缺失分型方法.

药源性循环免疫复合物检测方法的建立

目的 通过重组人白介素1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)的大鼠6 mon重复给药毒性试验,建立临床前安全性评价中动物体内药源性循环免疫复合物(CIC)的检测方法,为临床CIC检测提供依据.方法 从rhIL-1Ra免疫后的兔血清中纯化总IgG包被于酶标板上作为捕获抗体,SD大鼠抗rhIL-1Ra阳性血清与rhIL-1Ra以不同比例混和制成人工免疫复合物(AIC),通过双抗夹心ELISA检测AIC的效率来评价该方法有效性.定期采集连续26 wk皮下注射rhIL-1Ra的大鼠血清并以上述方法检测CIC,同时用免疫组化法显示肾小球中的免疫复合物(IC)来验证该方法.结果 双抗夹心ELISA法可显示AIC的数量差异,大鼠血清CIC显示出与给药时间一致的变化,并与肾小球中IC检测结果相印证.结论 双抗夹心ELISA法可检测出动物因长期给予外源蛋白而产生的CIC,AIC则可作为该检测体系中的阳性对照.

高度关注TNF抑制剂引起严重不良反应的风险

肿瘤坏死因子(TNF)抑制剂在对常规治疗不敏感的炎症免疫性疾病的治疗中显示出较好疗效,但在使用过程中也出现了严重的、致命性的不良反应,包括增加恶性肿瘤、白血病、银屑病和其他免疫病的发病风险等.美国食品与药品管理局近日发布消息,要求在TNF抑制剂的处方信息中加入严重警示.医务人员需高度关注TNF抑制剂引起严重不良反应的风险,注意用药安全.

消息

志苓胶囊通过激活caspase-3抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡

目的 研究志苓胶囊(ZLJN,抗癌复方Ⅱ号)对人慢性髓系白血病K562细胞株增殖及凋亡的影响.方法 将志苓胶囊按其不同中西药成分比例配制成中药、西药和复方组,与K562细胞共培养后,采用MTT法、集落形成实验分别检测细胞存活率和集落形成率;Annexin V-FITC/PI标记法、DNA倍体分析及DNA片段化分析检测细胞凋亡;流式细胞仪检测caspase-3活性;Western blot 法检测caspase-3酶原(pro-caspase-3)表达.结果不同药物组与K562细胞共培养后,细胞生长受抑制,集落形成率降低.Annexin V-FITC/PI法检测到早期凋亡细胞;DNA倍体分析可见亚二倍体峰(凋亡峰);琼脂糖电泳见典型的DNA梯状带.流式细胞检测caspase-3活性增强,Western blot 检测pro-caspase-3表达减弱.结论志苓胶囊可有效抑制K562细胞增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与caspase-3活性增强有关.