氧诱导新生小鼠视网膜病变中血管新生和氧应激相关基因表达的变化

目的：建立氧诱导新生小鼠视网膜病变( oxygen-in-duced retinopathy, OIR)模型,观察视网膜血管新生情况,检测OIR病变过程中调控血管新生和氧应激相关基因表达的变化。方法新生小鼠出生后d 7,置75．5%高氧环境中饲养5 d,再返回正常氧环境继续饲养5 d,建立OIR模型。运用视网膜免疫荧光染色检测OIR小鼠视网膜中血管新生情况；运用Real-time PCR技术检测基因表达情况。结果视网膜免疫荧光染色结果显示,OIR小鼠视网膜在高氧诱导视网膜微血管消退的基础上,相对缺氧状态诱导出现明显的新生血管。 Real-time PCR结果显示OIR模型小鼠视网膜中：血管内皮细胞生长因子( vascular endothelial growth factor, VEGF)及其受体( VEGFR)家族中：VEGFA、VEGFD、VEG-FR1、VEGFR2的基因表达分别上调1．73、1．71、1．48、1．80倍；血小板衍生生长因子( platelet-derived growth factor, PDGF)及其受体( PDGFR)家族中：PDGFA、PDGFB、PDG-FRa、PDGFRb的基因表达分别上调1．29、1．71、1．42、1．42倍；基质金属蛋白酶( matrix metalloproteinases, MMPs)中的MMP2基因表达上调1．48倍；参与调控氧化应激的核转录因子Nrf2[nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2]及受其调控的下游基因包括谷氨酸-半胱氨酸连接酶( glutamate-cysteine ligase, GCL)的催化( GCLC)和调节( GCLM)亚单位的基因表达均下调,表达量分别为正常的0．28、0．76、0．49。结论 OIR小鼠视网膜病变过程中,视网膜中促进血管新生相关基因表达上调,而抗氧化相关基因表达下调。

Tuftsin衍生物TP影响肿瘤相关巨噬细胞 MIP-1α分子表达

目的：探讨TP对肿瘤相关的趋化因子巨噬细胞炎性蛋白1-α( MIP-1α)表达的影响。方法使用RT-PCR的试验方法,检测小鼠巨噬细胞Ana-1细胞和肿瘤组织中提取的巨噬细胞中MIP-1α的表达；建立小鼠S180肉瘤细胞皮下移植瘤双瘤模型,待肿瘤体积生长至约250 mm3时,将其中一侧建立术后残瘤模型,并开始以8 mg·kg-1剂量的TP给药,隔天1次,给药4次后,分离肿瘤组织,免疫组化检测MIP-1α的表达。结果不同浓度TP对小鼠TAMs的MIP-1α表达较空白对照组明显减少,并呈剂量依赖性；体内试验中,TP处理组的荷瘤小鼠的肿瘤组织MIP-1α与对照组相比表达明显降低,接近于阳性药环磷酰胺组；但是 MIP-1α在小鼠Ana-1细胞和TAMs中的 mRNA表达量差异没有统计学意义；不同浓度TP对小鼠Ana-1细胞的MIP-1α表达差异也没有统计学意义。结论 TP 不能影响小鼠 Ana-1细胞系的MIP-1α表达,但TP对肿瘤组织中的巨噬细胞MIP-1α的表达有明显影响；MIP-1α有可能是 TP抗癌作用机制的新靶点。

紫草素通过上调 Nrf2途径及干预胞内氧化还原平衡稳态诱导A549细胞凋亡

目的：探讨活性氧和Nrf2途径在紫草素诱导A549细胞凋亡过程中的作用。方法 MTT法评价紫草素对 A549细胞的细胞毒活性。采用细胞形态学和生物化学方法检测细胞凋亡。通过荧光探针对细胞内活性氧、还原型谷胱甘肽的变化进行标示,并用 GSH/GSSG比率对氧化还原态的变化进行评价。通过活性氧的清除剂分析活性氧在凋亡过程中的决定因素。通过实时荧光定量PCR和ELISA分析来确定Nrf2途径在紫草素诱导A549细胞凋亡中的作用。结果紫草素对A549细胞的IC50为3．2 mg·L-1。0~24 h时间内,随紫草素处理时间增加A549细胞内氧化还原平衡明显向氧化方向切换。3．2 mg·L-1紫草素作用A549细胞8 h, Nrf2途径相关基因表达量上调,24 h时抗凋亡基因表达量下降,促凋亡基因表达上升。抑制细胞内活性氧的产生会减轻紫草素对A549细胞增殖的抑制作用。结论紫草素诱导A549细胞产生的活性氧超过了Nrf2途径抗氧化应激的临界阈值,进而引起A549细胞凋亡。

多沙唑嗪对映体对大鼠肠系膜微动脉α1受体介导收缩反应的作用

目的：分析消旋多沙唑嗪[(±) DOX]、左旋多沙唑嗪[(-)DOX]和右旋多沙唑嗪[(+) DOX]对大鼠离体肠系膜微动脉α1受体介导收缩反应的阻断作用。方法采用DMT 620 M 微血管张力测定系统,记录苯肾上腺素( Phe)诱发大鼠离体肠系膜动脉第二级和第三级阻力血管的收缩反应,分析(±) DOX及其对映体对α1受体的拮抗参数。结果大鼠肠系膜动脉二级分支的血管内径为(162．5±5．3)μm(n=11),三级分支的内径为(103．1±2．3)μm(n=23)。LabChart软件的标准化程序测算的肠系膜动脉二级分支血管的标准前负荷为(2．93±0．15) mN,三级分支血管的标准前负荷为(2．64±0．10) mN,二者的标准化前负荷差异无显著性(P>0．05)。与标准前负荷相比,二级阻力血管施以5 mN前负荷时,Phe诱发的收缩未见明显改变；当标本的前负荷增加至10 mN、15 mN和20 mN时,Phe诱发的收缩反应的Emax值分别下降了12%、29%和43%(P<0．01)。大鼠肠系膜动脉二级和三级阻力血管分别给予0．001、0．01、0．1μmol ·L-1浓度的(-) DOX或(+) DOX后, Phe量效曲线均右移,Emax值不变；二级阻力血管 Schild plot 分析结果表明,(-) DOX、(+) DOX和(±) DOX非竞争性拮抗Phe诱发的血管收缩反应。3者的 pKB 值由小到大的排列顺序是：(-)DOX(7．85±0．09)、(±)DOX(8．53±0．09)、(+)DOX (8．67±0．10)；三级阻力血管 Schild plot 分析结果表明,(-) DOX和(+) DOX在三级分支血管竞争性拮抗Phe诱发的血管收缩反应；三者的 pKB 值由小到大,分别为(-) DOX(7．48±0．14)、(+) DOX (8．48±0．10)、(±) DOX (8．68±0．17)。结论在大鼠肠系膜微动脉,(-) DOX阻断α1受体的活性明显低于(+) DOX 和(±) DOX。尽管(+) DOX和(±) DOX阻断α1受体的活性差异无显著性,在血管三级分支(±) DOX的作用有增强的趋势。

OK432优化的内皮细胞疫苗抗小鼠乳腺癌作用研究

目的：探讨 OK432优化的人脐静脉内皮细胞( HU-VECs)疫苗对小鼠EAC乳腺癌的生长抑制作用。方法体外培养HUVECs,与佐剂OK432混合,制备HUVECs-OK432疫苗,以小鼠 EAC 乳腺癌皮下移植瘤模型考查 HUVECs-OK432疫苗的抗肿瘤效应,并通过ELISA、脾细胞增殖及细胞毒性T淋巴细胞( CTL)杀伤实验检测疫苗免疫后体液及细胞免疫应答水平。结果在预防性免疫中, HUVECs-OK432疫苗可以明显抑制EAC乳腺癌生长；HUVECs-OK432疫苗诱导小鼠产生了高滴度的特异性 HUVEC 抗体；HU-VECs-OK432疫苗能有效刺激免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖；HUVECs-OK432组小鼠脾细胞诱导产生了明显的靶向HU-VEC细胞的CTL杀伤作用。结论 HUVECs-OK432疫苗可以有效诱导机体产生靶向HUVEC的特异性体液及细胞免疫应答,从而有效抑制了小鼠EAC乳腺癌的生长。

牛磺酸镁对缺氧/复氧致大鼠心肌细胞钙离子通道异常的影响

目的：观察牛磺酸镁配合物( taurine magnesium coordi-nation compound,TMCC)对缺氧/复氧损伤所致大鼠心室细胞异常L-型钙电流( ICa,L )的影响,以探讨其抗心律失常作用机制。方法酶解法分离大鼠单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录低(100μmol·L-1)、中(200μmol·L-1)、高(400μmol·L-1)3个浓度的牛磺酸镁及胺碘酮(24.24μmol·L-1)对缺氧/复氧大鼠心室细胞 ICa,L的影响。结果缺氧/复氧使大鼠心室肌细胞 ICa,L峰值从(3．35±0．50) pA/pF增大到(5．69±0．25) pA/pF(n=6, P<0．01),TMCC (100、200、400μmol·L-1)可使缺氧/复氧损伤模型增大的ICa,L峰值分别恢复到(5．28±0．18) pA/pF ( n =6, P >0．05)、(4．41±0．22) pA/pF、(3．82±0．21) pA/pF(n=6, P<0．01)。24．24μmol · L-1胺碘酮使其恢复为(3．66±0．27) pA/pF (n=6, P<0．01)。与正常对照组相比,缺氧/复氧使钙激活曲线左移,激活加快,失活曲线右移,失活减慢,TMCC (200、400μmol · L-1)和胺碘酮(24．24μmol · L-1)可恢复左移的激活曲线,使激活减慢,恢复右移的失活曲线,使失活加快。结论 TMCC可通过促进钙通道的失活以及抑制钙通道的激活过程,浓度依赖性地恢复缺氧/复氧损伤引起的钙电流增大,其作用与胺碘酮相当, TMCC对钙电流的抑制作用可能是其发挥抗心律失常的机制之一。

槲皮素联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究槲皮素联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞增殖及凋亡的影响，并初步探讨其作用机制。方法采用不同浓度槲皮素与顺铂单独及联合作用MG-63细胞；倒置相差显微镜观察细胞形态变化；CCK-8法检测细胞增殖抑制率，并通过Chou-Talaly联合指数法分析两药之间相互作用；流式细胞仪检测细胞凋亡率；RT-PCR 及 Western blot 检测Bcl-2、caspase-3等凋亡相关分子在基因及蛋白水平的表达变化。结果槲皮素及顺铂均能抑制MG-63细胞增殖并诱导其凋亡，两药联合具有协同效应，并可下调Bcl-2及上调caspase-3基因及蛋白的表达。结论槲皮素联合顺铂能协同抑制MG-63细胞增殖并诱导其凋亡，其作用机制可能与下调Bcl-2及上调caspase-3等凋亡相关分子的表达有关。

胱硫醚-β-合酶/硫化氢系统在鱼藤酮诱导PC12细胞损伤中的变化

目的：动态研究胱硫醚-β-合酶/硫化氢( CBS/H2 S)系统在鱼藤酮诱导PC12细胞损伤中的变化。方法鱼藤酮诱导具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞损伤作为帕金森病(Parkinson′s disease,PD)细胞模型,免疫印迹法(Western blot)检测CBS的表达；亚甲基蓝分光光度计法检测细胞内CBS酶活性及硫化氢( hydrogen sulfide, H2 S )的生成；应用CCK-8比色法检测细胞存活率；GSH检测试剂盒检测细胞内GSH含量。结果鱼藤酮损伤6和12 h 组, PC12细胞内CBS的表达和活性升高, H2 S生成量增加；而在24和48 h 组,CBS表达和活性则明显降低, H2 S的生成量明显减少；鱼藤酮可以时间依赖性的降低细胞存活率及减少细胞内GSH的含量。结论鱼藤酮刺激引起内源性CBS的表达和活性先升高后降低, H2 S 的生成先增加后减少,这可能与PC12细胞对抗鱼藤酮诱导的氧化应激损伤有关。

PLCε对人骨肉瘤细胞迁移侵袭影响的实验研究

目的：研究磷脂酶 Cε( phospholipase C epsilon, PLCε)对人骨肉瘤细胞株U2OS迁移侵袭能力的影响。方法 siRNA干扰U2OS细胞PLCε的表达,应用CCK-8实验检测 PLCε对细胞增殖能力的影响,以划痕实验、Transwell小室模型实验测定细胞迁移能力改变情况,以明胶酶谱实验测定细胞分泌基质金属蛋白酶MMP2的变化。结果体外合成特异性 PLCε基因 siRNA 可明显抑制 U2OS 细胞中PLCε的表达；沉默 PLCε后,U2OS细胞的增殖能力无明显变化,而划痕愈合能力、迁移活力较对照组细胞明显下降,其分泌MMP2的水平也明显下降。结论沉默PLCε可致人骨肉瘤细胞U2OS的迁移和侵袭能力下降。

牛磺酸镁对缺氧/复氧致大鼠心室肌细胞钠离子通道异常的影响

目的：观察牛磺酸镁配合物( taurine-magnesium coordi-nation compound,TMCC)对缺氧/复氧损伤所导致的大鼠心肌细胞异常钠通道电流的影响。方法采用Langendorff逆行主动脉灌流酶溶液消化法,急性分离大鼠单个心肌细胞,以缺氧钠外液模拟缺氧15 min后,给予有氧钠外液5 min制备缺氧/复氧模型。应用全细胞膜片钳技术,在电压钳模式下,以胺碘酮为阳性对照药,记录不同浓度TMCC对正常细胞和缺氧复氧模型细胞钠离子通道电流INa的影响。结果与正常对照组INa峰值(56．89±2．07) pA/pF相比,缺氧/复氧使大鼠心室肌细胞INa峰值减小至(35．05±1．52) pA/pF (n=6,P<0．01),I-V曲线上移。 TMCC(100、200、400μmol ·L-1)可使减小的电流呈浓度依赖性增加,分别恢复至(35．78±1．95) pA/pF (n =6,P >0．05)、(41．52±0．86) pA/pF(n=6,P<0．01)、(48．34±0．99) pA/pF(n=6,P<0．01),24．24μmol·L-1胺碘酮使其恢复为(39．44±1．24)pA/pF(n=6,P<0．01)。 TMCC和胺碘酮均能使上移的I-V曲线下移。此外, TMCC和胺碘酮还可恢复因缺氧/复氧右移的失活曲线,使失活减慢,但对激活的影响并不明显。结论 TMCC(200、400μmol·L-1)通过抑制钠通道的失活过程以恢复缺氧/复氧损伤引起的INa峰值减小,使上移的I-V曲线下移,提示该作用可能是TMCC抗缺血性心律失常的机制之一。

BIX-01294对Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白甲基化的影响

目的：观察甲基化转移酶G9a抑制剂BIX-01294对急性T淋巴细胞白血病Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白甲基化的影响。方法 MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化；Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax、抑癌蛋白P15、DNA去甲基化酶DNMT1、组蛋白H3乙酰化、组蛋白H3K9单、双、三甲基化水平,H3K27单甲基化、双甲基化水平的变化。结果 BIX-01294可下调Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白的表达, Caspase-3表达上调,诱导细胞凋亡,浓度为0、1、2、4μmol · L-1的BIX-01294作用Molt-4细胞24 h 后,凋亡率分别为(5．54±1．35)%、(10．24±2．26)%、(32．28±3．26)%、(47．52±4．37)%(P<0．05),差异有统计学意义。 BIX-01294抑制DNMT1表达,上调P15蛋白表达,抑制细胞的增殖；BIX-01294下调组蛋白 H3K9、H3K27单甲基化和二甲基化水平,而组蛋白 H3乙酰化及H3K9三甲基化水平无明显改变。结论 BIX-01294通过抑制G9a 的活性,下调 H3K9、H3K27单甲基化、二甲基化水平,抑制DNMT1,使上调P15蛋白,终抑制Molt-4细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

激动ALDH2对抗糖尿病大鼠肝脏损伤的机制探讨

目的：观察激动线粒体乙醛脱氢酶2(aldehyde dehy-drogenase 2,ALDH2)对糖尿病大鼠肝脏损伤的保护机制,并分析JNK在其中的作用。方法健康♂ SD大鼠30只,随机分成3组：正常对照组、糖尿病组、糖尿病+线粒体乙醛脱氢酶2激动剂乙醇组。造模8周后测定空腹血糖和糖化血红蛋白水平,检测血清谷丙转氨酶(AST)、谷草转氨酶(ALT)的变化,HE染色观察肝脏病理结构改变,测定肝脏组织ALDH2、JNK、p-JNK蛋白的表达。结果与正常对照组比较,糖尿病组大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白水平明显升高,血清AST、ALT水平升高,病理切片显示,肝小叶结构异常,肝细胞边界不清,细胞索排列紊乱,细胞肿胀,大量炎症细胞浸润,肝脏组织ALDH2蛋白表达降低,p-JNK、JNK蛋白表达增加,p-JNK/JNK比值增加。乙醇干预组与糖尿病组相比,大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白水平无明显降低,血清AST、ALT水平降低,病理改变减轻,肝脏ALDH2蛋白表达增加, p-JNK、JNK蛋白表达降低,p-JNK/JNK比值降低。结论增加ALDH2的表达,可能通过抑制JNK的表达,减轻糖尿病对肝脏的损伤。

脑肠肽通过抗炎抗氧化作用发挥酒精性肝损伤的保护作用

目的：研究脑肠肽对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。方法采用4周5%酒精饲料喂饲加5 g·kg-1的高剂量酒精灌胃诱导酒精性肝损伤模型，用分光光度法检测血清中ALT、AST和肝匀浆MDA、SOD、GSH-Px含量；Real-time PCR法检测肝脏中炎症细胞因子 TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-6和MCP-1的表达。 HE染色检测肝脏病理改变。结果这种慢性酒精喂饲+单剂量大剂量酒精灌胃模式可明显诱导酒精性肝损伤，可导致明显的转氨酶升高、脂肪肝和炎症浸润。给予脑肠肽(5、10、20μg·kg-1) ip后可明显降低酒精性肝损伤小鼠增高的血清ALT、AST活性，改善酒精肝病理改变和炎症浸润；并能减少肝匀浆MDA含量，使降低的肝匀浆SOD活性升高；降低酒精性肝损伤小鼠肝脏的炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-6和MCP-1的mRNA表达。结论脑肠肽对小鼠酒精性肝损伤具保护作用，其机制与抗氧化和抑制炎症作用有关。

Caspase-4活化参与TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡

目的：研究caspase-4在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)诱导胃癌细胞凋亡中的作用。方法采用碘化丙啶染色,流式细胞术检测TRAIL和caspase-4抑制剂( z-LEVD-fmk)单独或联合作用对胃癌细胞凋亡的影响；化学合成3条针对caspase-4基因的小干扰RNA( small interfering,siRNA),用脂质体法转染胃癌细胞,采用Western blot验证沉默效果,流式细胞术观察转染后对 TRAIL 诱导胃癌细胞凋亡的影响；Western blot检测TRAIL作用后葡萄糖调节蛋白78(78-ku glucose-regulated protein,GRP78)的表达情况,以内质网应激经典诱导剂衣霉素( tunicamycin,TM)为参照；Western blot检测TRAIL作用后caspase-3和caspase-4蛋白的表达情况。结果 z-LEVD-fmk能明显地抑制TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡( P<0．05)；与阴性对照相比,转染 caspase-4 siRNA 后caspase-4蛋白表达水平明显下降,且转染后细胞凋亡率降低(P<0．05)；和TM相比,TRAIL能诱导较低程度的内质网应激反应；在 TRAIL 处理的早期 caspase-4和 caspase-3即活化。结论 Caspase-4的活化参与了TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡,这可能与TRAIL诱导的内质网应激有关。

齐留通通过激活ERK1/2信号通路减轻大鼠脑缺血炎症反应和缺血性脑损伤

目的：研究5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)抑制剂齐留通( zileuton)是否通过激活ERK1/2信号通路减轻大鼠脑缺血诱导的炎症反应和缺血性脑损伤。方法制备大鼠脑缺血模型,随机分为对照组、溶媒组、zileuton治疗组和PD98059干预组, zileuton (50 mg · kg-1)经口服给药, PD98059经脑室内给药。对大鼠神经功能损伤进行评分,测量大鼠脑梗死体积；分析大鼠缺血性脑水肿程度；检测脑组织髓过氧物酶的含量；Western blot法检测信号通路关键蛋白p-ERK1/2、t-ERK1/2的表达变化；ELISA 法检测血浆TNF-α的分泌。结果 Zileuton治疗组能明显减轻大鼠神经功能障碍、脑梗死体积、脑水肿、MPO活性及TNF-α含量,且zileuton的这种脑保护作用和抗炎症作用被PD98059抑制。Zileuton可上调p-ERK1/2的表达,同时也被PD98059抑制。结论5-LOX抑制剂zileuton通过激活ERK1/2信号通路,减轻脑缺血诱导的炎症反应和缺血性脑损伤。

PPAR-α激动剂对PAN诱导肾小球足细胞损伤的保护作用

目的：探讨PPAR-α激动剂非诺贝特对氨基核苷嘌呤霉素( PAN )诱导肾小球足细胞损伤的作用及其机制。方法将18只8周龄SD ♀大鼠随机分为3组( n=6)。 PAN模型组和非诺贝特组1次尾静脉注射PAN 65 g·g-1,空白对照组注射生理盐水,PAN注射后d 1,非诺贝特组灌胃非诺贝特40 mg·kg-1·d-1),空白对照组和PAN模型组灌胃等体积溶剂。分别于d 0、6、10收集24 h尿样,采用Bradford法测定大鼠24 h尿蛋白含量。 PAN注射后10 d将大鼠安乐死,收集肾小球样本。利用Western blot和Real-Time PCR检测肾小球足细胞损伤标记物的表达和凋亡相关基因、骨架蛋白以及裂隙膜蛋白基因转录活性。结果注射 PAN 后 d 10,24 h 尿蛋白含量较 d 0明显上升,足细胞损伤标记物desmin基因水平和蛋白表达明显增加,线粒体凋亡通路、TGF-β/Smad通路和p38通路转录水平明显上调,足细胞骨架蛋白和裂隙膜蛋白的转录活性明显增加。非诺贝特处理能够明显降低PAN引起的尿蛋白,改善PAN对足细胞的损伤作用；明显抑制凋亡通路的转录活性；降低骨架蛋白和裂隙膜蛋白的转录活性。结论非诺贝特能够改善PAN诱导的肾小球足细胞损伤,其作用机制与抑制凋亡通路有关。

LC-MS/MS法测定人血浆中羟基红花黄色素A的浓度

目的：建立LC-MS/MS法测定人血浆中羟基红花黄色素A( QA)的浓度。方法血浆样品中加入等体积0．2 mol ·L-1的乙酸铵后,采用固相萃取技术进行提取QA,洗脱液直接进行 LC-MS/MS分析。 QA和内标异鼠李素-3-O-新橙皮苷(SLS)通过Agilent ZORBAX SB C18(3．0 mm ×100 mm,3．5μm)色谱柱进行等度洗脱分离,流动相组成为0．2 mmol ·L-1乙酸铵水溶液/甲醇=30/70。质谱检测采用负离子模式,扫描方式为多反应检测,QA的目标离子对为m/z 611.131/490．900,SLS 的目标离子对为 m/z 623．032/298．800。结果 QA和SLS的保留时间分别2．7 min和3．9 min左右,空白血浆无干扰影响含量测定；血浆中 QA 的线性范围为8．57~4185μg·L-1( r为0．9949~0．9992),定量下限为8．570μg·L-1,日内日间精密度 RSD 均小于7%；低、中、高3个浓度下的平均介质效应分别为116．62%、119．06%和115．72%( RSD 分别为3．27%、3．42%和4．93%),平均提取回收率分别为77．75%、80．90%和80．76%( RSD分别为1．70%、1．78%和4．15%)；血浆样本于室温放置4 h、-70℃反复冻融3次及-70℃冰冻保存31 d的情况下均稳定；浓度超出定量上限的QA血浆样本经空白血浆稀释6．25倍后可准确测定。结论建立的测定血浆样本中QA浓度的LC-MS/MS分析方法简便、快速、准确灵敏,适用于QA人体药代动力学的系统研究。

姜黄素衍生物C085与Hsp90及其不同片段相互作用以及对Hsp90 ATPase活性的影响

目的：研究姜黄素衍生物C085与Hsp90的结合作用,及其对Hsp90-ATPase 活性抑制作用。方法采用荧光光谱法,研究不同浓度C085与Hsp90、NHsp90、MHsp90、CHsp90的相互作用以及293K、303K和310K下,C085与Hsp90的相互作用；实验选取280nm为激发波长,290~510 nm的波长范围内进行荧光光谱扫描。采用孔雀绿磷钼酸铵-无机磷检测法,研究 C085对 Hsp90-ATPase 活性的抑制。结果C085解离常数为(11．163±0．316)μmol · L-1；C085与Hsp90之间的主要作用力为静电作用力；C085与Hsp90的C端片段结合能力强。当ATP为1 mmol · L-1时, C085作用于Hsp90的IC50值为6．04μmol · L-1。结论经过荧光光谱分析,可以确定C085与Hsp90的结合机制,且C085能抑制Hsp90-ATPase活性。

EGCG通过抑制p75 NTR通路对APP/PS1小鼠学习记忆障碍的改善作用

目的：探讨(-)表没食子儿茶素没食子酸酯( epigal-locatechin-3-gallate, EGCG)对 APP/PS1转基因小鼠学习记忆障碍的改善作用及其对海马内p75 NTR信号通路及其介导的神经细胞凋亡的影响。方法以Morris水迷宫及被动避暗实验观察其行为学变化,TUNEL法及fluoro-Jade B法检测神经细胞凋亡及神经元退行性变,并以Western blot法检测小鼠海马p75 NTR相关蛋白的表达水平。结果 EGCG可明显改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆障碍,抑制神经细胞凋亡及退行性改变。同时, EGCG 可明显抑制 p75 NTR通路,降低其剪切产物 p75 ICD表达及 JNK2磷酸化水平,减少p53和cleaved-caspase 3蛋白表达,从而抑制神经细胞凋亡和改善学习记忆障碍,发挥神经保护作用。结论 EGCG通过抑制p75 NTR信号通路,抑制神经细胞凋亡,改善学习记忆障碍。

Kv7（KCNQ）钾离子通道对中枢单胺能神经传递的调控

KCNQ 基因编码5种 Kv7钾离子通道亚型( Kv7.1-Kv7.5)，其中4种(Kv7.2-Kv7.5)表达于中枢神经系统内。神经元Kv7通道参与突触前后神经递质的调节，激活Kv7通道能够降低神经元兴奋性，减少单胺类神经递质释放， Kv7通道开放剂为单胺类神经元过度兴奋所致疾病(如精神分裂、焦虑、药物滥用等)提供了新的治疗方案，该文将针对Kv7通道在单胺类神经系统内的表达、功能及Kv7通道开放剂在治疗神经元过度兴奋所致疾病中的作用进行总结。

自噬在心血管疾病中的作用研究进展

自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象。已有研究表明，自噬对维持细胞自身的稳定及细胞成分更新保持正常的生理状态起着至关重要的作用。近年来，研究发现自噬与生长发育、肿瘤以及心血管疾病的发生发展密切相关。进一步研究表明，自噬在不同病理环境下既能够促进血管生成，也能够抑制血管的生成。因此，阐释自噬在不同病理环境下调控血管生成的作用机制显得尤为关键。该文对自噬在心血管疾病中的作用尤其是对血管生成的作用研究进展进行综述，着重探讨自噬调控血管生成的作用机制，为后续的科学研究及指导临床提供重要参考。

单细胞网络谱分析方法及应用

单细胞网络谱分析( single cell network profiling, SCNP)无需分离细胞的情况下,可检测分析复杂组织中不同类型细胞信号通路蛋白的表达水平及蛋白间网络调节关系,其在细胞水平上,可阐明疾病发生机制、将疾病重新精确分类、提高疾病诊断准确性,并为组合用药及药物筛选提供重要且丰富的信息,促进个体化治疗的实现。

酒精依赖综合征治疗药物的研究进展

当今社会生活中酒精滥用现象普遍存在，已成为危害人类健康与公共安全的医学和社会难题。目前研发的多种活性物质能够影响中脑边缘多巴胺神经通路以降低酒精引起的奖赏效应，从而有效改善或治疗酒精依赖综合征。该文综述了近期酒精依赖干预药物的研究进展，旨在为相关机制研究和药物开发提供参考。

矿物质的药物基因组学研究进展

矿物质和微量元素是构成人体组织和维持正常生理功能的多种元素的总称。单核苷酸多态性( SNP)能够影响矿物质和微量元素在体内的代谢、处置和效应，从而引起机体功能的变化。该篇综述将总结关于矿物质和微量元素的药物基因组学研究进展。

血管紧张素Ⅱ及其受体与类风湿关节炎

血管紧张素Ⅱ及其受体是心血管疾病的重要治疗靶点,血管紧张素Ⅱ以自分泌或旁分泌的形式与1型受体(AT1R)作用,通过刺激单核细胞趋化移行、促进T淋巴细胞活化增殖、增强Th1和Th17免疫功能、抑制关节滑膜细胞凋亡,促进了类风湿关节炎( RA)患者体内的炎症免疫损伤。血管紧张素转化酶抑制剂(ACEIs)和AT1R阻断剂分别通过限制血管紧张素Ⅱ的产生和阻断血管紧张素Ⅱ与AT1R的相互作用,进而缓解RA体内的炎症免疫反应。另外,RA及其实验动物模型体内血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)表达增高,激动AT2R可以发挥缓解佐剂性关节炎( AIA)大鼠炎症免疫反应的作用。该文就近年来血管紧张素Ⅱ及其受体在RA中致病机制和治疗作用的研究进展进行综述。

利用斑马鱼成鱼建立致幻类化合物行为评价模型

目的：利用斑马鱼这一新型模式动物,建立致幻类化合物成鱼行为测试模型,并考察模型有效性。方法利用斑马鱼行为视频跟踪分析系统自动记录动物行为参数,以栖底性、镜像反射及社会交互行为作为评测指标,采用甲基苯丙胺浓度2 mg·L-1、氯胺酮浓度20 mg·L-1,分别急性暴露30 min后进行行为测试。结果与正常组相比,在成鱼自发活动方面,甲基苯丙胺与氯胺酮急性暴露对斑马鱼的运动距离无明显影响,而使垂直方向的穿越次数明显下降；在镜像反射方面,给予不同化合物均使斑马鱼在中央区的停留时间明显增加,且在镜像区的高活动性比例明显上升,提示化合物改变了鱼对镜像区的偏爱,并在给定浓度下使鱼具有一定攻击性；急性给予两种化合物均明显降低鱼之间相互接近的持续时间,表明成鱼社会交互行为受到抑制。结论所建立的斑马鱼行为模型对于致幻性非常敏感,且在行为表现上具有特征性。

舒郁胶囊及主要组份对PMS肝气郁证大鼠海马中CACNA1 C蛋白表达和功能的影响

CACNA1C 基因编码L 型钙通道α1C 亚基,其基因多态性与多种情感障碍类疾病如精神分裂症和重度抑郁等发生有关。经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)发生的易感神经生物学因子与重度抑郁症相似,该基因与PMS 的关系如何？尚未见报道。因此,本研究从PMS 肝气郁证入手,以舒郁胶囊及主要组份进行药物干预,采用Western blot 和全细胞膜片钳技术,探索CACNA1C 与PMS 肝气郁证的关系和舒郁胶囊的干预机制。

鞘内预注右美托咪啶对脊髓缺血/再灌注损伤后脊髓水含量、小胶质细胞及基质金属蛋白酶表达的影响

既往研究发现,坐骨神经结扎前鞘内预注右美托咪啶( dexmedetomidine, DEX)能够有效减轻神经病理性疼痛,减少脊髓组织中炎性因子的产生,改善预后[1]。一些研究表明,脊髓缺血/再灌注损伤( spinal cord ischemia reperfusion injury,SCIRI)后,减轻脊髓水肿、维持血脊髓屏障( blood spi-nal cord barrier, BSCB)的完整性,可以减少SCIRI所致的神经损伤[2]。鞘内预注DEX是否通过抑制SCIRI后小胶质细胞变化和基质金属蛋白酶表达对脊髓水肿产生作用,有待深入研究。本研究采用阻断胸主动脉血流合并系统低血压建立SCIRI模型,探讨鞘内预注 DEX对 SCIRI后急性脊髓水肿、小胶质细胞、基质金属蛋白酶-9( matrix metalloproteinas-es, MMP-9)变化的影响。

HIV-1整合酶3′端加工抑制剂筛选方法的建立与优化

目的：建立与优化HIV-1整合酶3′端加工抑制剂筛选方法。方法利用荧光共振能量转移原理建立筛选方法,用DNaseⅠ切割底物 DNA确定底物检测波长,在该检测波长下,对缓冲液成分、底物浓度、酶浓度、金属离子浓度等影响整合酶活性的条件进行优化,并用阳性药物雷特格韦和杨梅黄素进行方法验证。结果检测波长为495 nm/525 nm,使用缓冲液1、底物浓度500 nmol·L-1,整合酶浓度1μmol· L-1,镁离子浓度20 mmol · L-1时整合酶3′端加工活性强。在此反应条件下雷特格韦和杨梅黄素能有效地抑制整合酶3′端加工活性。用所建立的方法筛选到2个有较强抑制整合酶3′端加工活性的抑制剂。结论该文成功建立并优化了HIV-1整合酶3′端加工抑制剂筛选方法。

讣告

P2 X受体的结构解析进展

三磷酸腺苷( adenosine triphosphate,ATP)配体门控P2X受体家族是由7个克隆亚型分别组装的同源或异源三聚体离子通道。研究显示,ATP不仅是细胞中主要的能量来源和核酸组分,在细胞间信息交流中也发挥重要作用。已证实[1-2],P2X受体为非选择性阳离子通道,存在于哺乳动物组织中并调节多种生理功能,可影响神经系统突触信号的快速传递,平滑肌细胞收缩、血小板聚集、巨噬细胞活化、细胞增殖和死亡等。 P2X受体斑马鱼P2X4受体晶体结构的发现极大地推进了对其P2 X受体分子和生理功能的理解,以及其药物靶点的预测和实验验证。本文探讨P2 X受体结构和功能的关系,并简单介绍P2 X受体选择性配体新研究成果。

肾素抑制剂阿利吉仑对低钙喂饲小鼠松质骨的作用

低钙饮食导致骨吸收增强,可诱发骨量的流失[1],严重的则可导致骨质疏松。近年来有研究发现,肾素-血管紧张素系统( RAS )存在于骨组织并参与骨代谢疾病的发病过程[2-3]。由于骨组织RAS的活性升高,其活性肽血管紧张素II(AngII)的生成增加,AngⅡ作为RAS的重要的活性物质[4]通过调控骨代谢致骨量流失[5]。阿利吉仑( Aliskiren)是一种新研制的可口服的具有直接抑制肾素活性的新型长效降压药物[6]。阿利吉仑通过抑制RAS首步肾素的活性,可以有效抑制血管紧张素原向血管紧张素I的转化[7],继而有效减少 RAS活性肽 AngII的生成[8]。本实验以肾素抑制剂阿利吉仑为研究对象,探讨其对低钙饮食小鼠松质骨的作用。

四物汤效应成分基于CYP酶的相互作用研究

目的：研究四物汤效应成分果糖、阿魏酸、芍药苷和川芎嗪及其配伍对CYP同工酶的抑制及诱导作用，为从代谢角度解释中药方剂的配伍规律提供依据。方法应用人肝微粒体体外孵育模型和探针底物代谢产物的LC-MS/MS定量方法，评价各单药及药对配伍组对 CYP 酶同工酶CYP1A2、2B6、2C9、2C19、2D6和3A4的抑制作用。应用“三明治”培养的大鼠原代肝细胞模型，评价各单药及其药对配伍组对CYP1A 和 CYP3A 的诱导作用。结果果糖、阿魏酸、芍药苷、川芎嗪及其配伍组(100μmol·L-1)，对人肝微粒体 CYP1A2、2B6、2C9和2C19的抑制率均<62%，对CYP3A4和 CYP2D6的活性无影响。各单药及配伍组对CYP3A1/2无明显的诱导作用；芍药苷及其药对和配伍(50μmol·L-1)对 CYP1A2诱导活性的提高>阳性诱导剂的40%。结论四物汤各成分及其药对配伍对6个主要CYP同工酶均无明显的抑制作用，芍药苷单药对CYP1A2有一定诱导作用，与果糖、阿魏酸和川芎嗪配伍时，诱导活性明显增强。

疾病模型动物在非临床安全性评价中应用的探讨

当前药物非临床安全性评价已高度系统化和标准化，但标准毒理学模型仍存在不足之处，需要考虑采用其他动物模型进行安全性评价。该文从科学理论、数据需求以及临床需要方面阐述了采用疾病模型动物进行安全性评价的必要性，同时从药品监管机构的认识角度探讨了使用疾病模型动物进行安全性评价的可行性、不足之处，为了尽可能准确地预测药物在临床上的不良反应，降低临床应用于患者的风险(患者获益)，降低药品研发失败的风险(制药企业获益)，研究者应该高度重视疾病模型动物在非临床安全性评价中应用。