人参皂苷Rg1对寡聚肽Aβ1-42增加JNK活性及诱导凋亡的影响

目的：在寡聚肽Aβ1-42诱导的神经元凋亡过程中,探讨人参皂苷Rg1的保护作用和可能机制；方法运用寡聚肽Aβ1-42来诱导原代培养的皮层神经元损害,把神经元分为空白对照组、Aβ组、sp600125与Aβ共同孵育组以及人参皂苷Rg1与 Aβ共同孵育组,然后观察 JNK、p-JNK、caspase-3活性和TUNEL细胞数的变化。结果寡聚肽 Aβ1-42作用15 min,皮层神经元的JNK磷酸化水平明显增加；经过预先孵育24 h人参皂苷Rg1(2．5~10μmol·L-1)后,再与寡聚肽Aβ1-42共同孵育15 min,JNK磷酸化水平明显降低；寡聚肽Aβ1-42孵育24 h,caspase-3活性和TUNEL数明显升高；人参皂苷Rg1(10μmol·L-1)预处理24 h后,再与Aβ1-42共孵育24 h组中caspase-3和TUNEL阳性数目明显下降。结论人参皂苷Rg1可通过JNK通路减轻寡聚肽Aβ1-42诱导的神经元凋亡。

桂皮醛对激素诱导的破骨细胞分化过程的保护作用及分子机制

目的：研究桂皮醛对激素诱导的体外破骨细胞增殖分化及骨吸收功能增强的保护作用及分子机制。方法RANKL联合M-CSF体外诱导RAW264．7细胞分化为破骨细胞,分为对照组、地塞米松处理组和不同浓度(11．6、23．2、46．4μg · L-1)桂皮醛( cinnamic alde byde, CA )干预组；TRAP染色试剂盒鉴定成熟破骨细胞；MTT法观察地塞米松和桂皮醛在不同时间点对破骨细胞增殖的抑制作用；ELISA法检测细胞培养液上清中TRACP5b的表达水平；RT-PCR分析破骨细胞相关转录因子(RANK、NFATc1)mRNA的表达状态。结果地塞米松处理后,破骨细胞的增殖分化及骨吸收功能明显增强( P<0．05)；而经不同浓度桂皮醛干预后,与地塞米松组相比,细胞增殖活性、上清液中TRACP-5b的含量以及RANK、NFATc1mRNA的表达水平随药物浓度的增加呈剂量依赖性降低( P<0．05)。结论桂皮醛可有效抑制激素诱导的破骨细胞的增殖及骨吸收功能,其作用机制可能是通过下调RANK以及下游 NFATc1基因的表达。

白藜芦醇预处理对氧糖剥夺/再复氧损伤大鼠皮质神经干细胞增殖的影响

目的：研究白藜芦醇预处理对体外氧糖剥夺/再复氧损伤大鼠皮质神经干细胞增殖的影响。方法采用悬浮培养法分离纯化新生SD大鼠大脑皮质神经干细胞。第3代贴壁培养神经干细胞氧糖剥夺150 min后,复氧培养24 h。实验分为正常组、对照组、乙醇组和不同浓度白藜芦醇预处理组。免疫荧光法鉴定细胞,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞周期及BrdU法检测细胞增殖。结果悬浮及贴壁培养细胞均高表达巢蛋白( nestin)。与对照组和乙醇组相比,不同浓度白藜芦醇预处理组(1、5、20μmol·L-1)均能明显增强细胞活力,促进细胞增殖,其中以5μmol·L-1白藜芦醇组作用强( P<0．05)。结论白藜芦醇预处理能减轻氧糖剥夺/再复氧对神经干细胞的损伤,并促进其增殖。

铁皮石斛多糖对高糖诱导的血管内皮细胞Bax、Bcl-2表达的影响

目的：优化铁皮石斛多糖提取工艺,研究其对高糖诱导的静脉血管内皮细胞( HUVEC)的保护作用机制。方法在单因素实验基础上,利用响应面法优化多糖的提取工艺；体外培养HUVEC细胞,将对数生长期的细胞分为空白对照组、正常血糖组、高糖刺激组和不同铁皮石斛多糖浓度+高糖刺激组,分别作用24和48 h后,采用MTT法检测的HU-VEC凋亡的影响,用RT-PCR法检测内皮细胞Bax、Bcl-2的表达情况。结果铁皮石斛多糖提取的优条件为：提取次数为2．8次,液(mL)料比(g)15．75∶1,提取时间2 h,在此条件下,理论计算提取率达到25．1%,实测提取率为24．9%,与模型高度拟合。与正常组相比,高糖组抑制细胞的生长,增强Bax的表达,抑制Bcl-2的表达,在高糖诱导下,铁皮石斛多糖促进细胞生长,抑制Bax的表达,增强Bcl-2的表达。结论通过响应面法优化的工艺,得率高,提取效果好。铁皮石斛多糖可通过抑制高糖诱导的血管内皮细胞Bax的表达,增强 Bcl-2的表达,从而抑制血管内皮细胞凋亡,在一定程度上可防治糖尿病血管病变。

阿魏酸对小胶质细胞炎性反应的抑制作用

目的：考察阿魏酸对脂多糖诱导的小鼠小胶质细胞炎性反应的抑制作用及其机制。方法采用脂多糖( LPS)刺激小胶质细胞( BV-2)活化,研究阿魏酸对炎症反应的抑制作用。采用硝酸还原酶法检测阿魏酸对一氧化氮( nitric ox-ide, NO)的影响,定量PCR和蛋白印迹分析阿魏酸对诱导型一氧化氮合酶( inducible nitric oxide synthase, iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)的影响,定量PCR技术和ELISA分析阿魏酸对炎性因子白细胞介素-1β( interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necro-sis factor-α, TNF-α)的影响,进而检测阿魏酸对促分裂原活化蛋白激酶( mitogen-activated protein kinases, MAPK)信号通路的影响。结果1．25~20μmol · L-1的阿魏酸对细胞活性无明显影响。阿魏酸浓度依赖性降低NO的浓度,可以明显抑制iNOS、COX-2的基因和蛋白表达,明显抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的表达,提前给予阿魏酸共同孵育对 LPS引起的ERK信号通路的磷酸化有抑制作用。结论阿魏酸具有抑制小胶质细胞活化,抑制神经性炎症的作用,其机制可能是阿魏酸通过ERK信号通路发挥对炎性分子的抑制作用。

鞘内注射LY294002缓解大鼠骨癌痛

目的：观察鞘内注射( intrathecal injection,i. t.)磷脂酰肌醇3-激酶( PI3K)抑制剂LY294002对骨癌痛大鼠疼痛行为学、脊髓背角磷酸化Akt ( p-Akt )表达的影响。方法♀SD大鼠40只,体质量180~200 g,随机分为5组(n=8)：假手术组(Ⅰ组)、假手术+LY294002组(Ⅱ组)、骨癌痛组(Ⅲ组)、骨癌痛+二甲基亚砜( DMSO )组( IV 组)、骨癌痛+LY294002(V 组),于大鼠左侧胫骨干骺端骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞构建胫骨癌痛模型。术后d 7~9鞘内连续注射浓度为2．5 g·L-1的LY29400210μL 或10μL 的5%DMSO。观测术前及术后d 7给药后每小时机械痛阈(至8 h)。术后d 9处死大鼠,取各组大鼠的L4~6脊髓组织进行免疫组化染色,检测脊髓背角PI3K 活化标志p-Akt 的表达。结果骨癌痛组大鼠(Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组)机械痛阈(MWT)明显低于假手术组(Ⅰ组)(P <0．01),V 组在给药后2~4h 痛阈明显升高(P <0．05),3 h 达到峰值(P <0．01)。与Ⅰ组比较,Ⅲ、Ⅳ组脊髓背角p-Akt 阳性细胞数明显增加,p-Akt 表达增多( P <0．01)。与Ⅲ、Ⅳ组比较,Ⅴ组鞘内注射 LY294002后能明显降低脊髓背角p-Akt 的表达(P <0．05)。结论 PI3K/ Akt 通路可能参与大鼠骨癌痛的发生。

TNF-α3′-UTR双荧光素酶报告基因系统的构建及丹参酮类药物筛选

目的：构建并鉴定pGL3-TNF-α3′端非翻译区( UTR)双荧光素酶报告基因( DLR)表达系统,以此基于调控TNF-α转录后水平对丹参酮类成分进行筛选。方法反转录人脐静脉内皮细胞HUVEC的mRNA成cDNA,以之为模板,PCR扩增含TNF-α3′-UTR的DNA片段全长,经酶切后连接至荧光素酶报告载体pGL3-control上,构建出pGL3-TNF-α3′UTR全长的荧光素酶报告基因载体并进行鉴定。将所构建的pGL3-TNF-α3′UTR与pSVRenilla质粒组成双荧光素酶报告系统共转染至单核巨噬细胞RAW264.7,经脂多糖诱导后利用该双荧光素酶报告基因表达系统判定丹参酮类成分对TNF-α转录后调控是否有影响。结果成功构建 pGL3-TNF-α3′UTR荧光素酶报告基因,克隆获得的DNA片段大小及序列与Genbank报道的一致。脂多糖( LPS )可以明显诱导转入pGL3-TNF-α3′UTR载体细胞的荧光强度。丹参酮类成分中隐丹参酮可以明显降低LPS诱导的pGL3-TNF-α3′UTR载体细胞的荧光素酶活性。结论成功构建含TNF-α3′UTR区的双荧光素酶报告基因表达系统,并以此从丹参酮类化合物中筛选出隐丹参酮,可以对TNF-α的转录后水平进行抑制调控。

人参总皂苷增强成骨分化的间充质干细胞促造血作用研究

目的：观察人参总皂苷( TSPG)诱导间充质干细胞向成骨细胞分化的作用,探讨TSPG增强成骨分化的间充质干细胞促造血的可能机制。方法贴壁法培养人源骨髓间充质干细胞( hMSCs),成骨细胞分化和免疫表型进行鉴定。不同剂量的TSPG联合成骨细胞条件诱导液培养hMSCs,MTT法检测细胞增殖活性,对-硝基苯磷酸盐( pNPP)法检测培养上清碱性磷酸酶含量,茜素红染色法观察钙结节数量,West-ern blot法检测成骨细胞分化转录因子-核心结合蛋白因子2(RUNX2)蛋白表达水平,Elisa法检测培养上清造血相关因子含量,造血祖细胞集落生成实验检测培养上清造血支持能力。结果 MTT和pNPP结果均显示随着TSPG剂量增加,吸光值逐渐增加,呈剂量依赖性。钙结节数量和RUNX2蛋白表达水平明显高于对照组。造血相关生长因子和造血祖细胞集落数明显高于对照组。结论 TSPG 通过上调RUNX2蛋白表达诱导hMSCs向成骨细胞分化,同时增强成骨分化的MSCs支持造血。

miR-139-5p低表达重组慢病毒的构建及其在H9c2细胞的表达验证

目的：构建miR-139-5p低表达慢病毒载体,检测其在H9c2细胞的表达效果。方法根据大鼠miR-139-5p序列,设计合成其靶点序列,并合成寡核苷酸双链,克隆入慢病毒载体pGC-LV,与pHelper 1．0和pHelper 2．0共转染293T细胞,包装病毒。收取病毒上清液,纯化后感染 H9 c2细胞。

SIRT1在丙戊酸对肝细胞毒性中的作用研究

目的：探讨沉默信息调节因子1( SIRT1)在丙戊酸对肝脏HepG2细胞毒性中的作用。方法在HepG2细胞中,丙戊酸(2 mmol·L-1)孵育6、12、24、48 h,或丙戊酸(0．5、1、2 mmol·L-1)分别孵育48 h,通过Western blot方法检测丙戊酸对SIRT1蛋白表达的影响；通过瞬时转染SIRT1表达质粒和si-SIRT1,采用SRB方法,观察对SIRT1基因进行过表达和抑制后,丙戊酸对HepG2细胞毒性的改变情况。结果丙戊酸对SIRT1的表达有抑制作用,且具有时间和剂量依赖性。过表达SIRT1后,HepG2细胞对丙戊酸的毒性敏感性下降,转染前后IC50分别为(4．025±0．47)、(10．87±1．50) mmol·L-1；而干扰 SIRT1后, HepG2细胞对丙戊酸的毒性敏感性增加,转染前后IC50分别为(1．938±0．16)、(0．663±0．05) mmol·L-1。结论丙戊酸可抑制 SIRT1的蛋白表达,并且过表达SIRT1可拮抗丙戊酸对肝细胞的毒性作用。

RNAi介导大鼠腺苷A1和A2 A受体基因沉默对乙醛诱导的肝星状细胞活化增殖的影响

目的：研究大鼠腺苷 A1受体( A1 R )和腺苷 A2 A (A2AR)受体的siRNA分别转染大鼠肝星状细胞(HSC)对乙醛诱导的 HSC 活化增殖的影响。方法采用乙醛诱导HSC-T6建立离体的大鼠酒精性肝纤维化HSC模型,设计并合成A1R和A2AR小干扰RNA( small interfering RNA, siR-NA)序列,通过脂质体 LipofectamineTM 2000瞬时转染至HSC-T6细胞内,荧光倒置显微镜观察细胞的转染效率,用四甲基偶氮唑盐( MTT )法检测 HSC-T6细胞增殖变化；利用Real-Time qPCR及Western blot法分别检测HSC-T6的A1R、A2AR、α-SMA、Collagen I mRNA及蛋白表达。结果将A1R和A2AR siRNA转染至HSC-T6细胞内,A1R和A2AR基因及蛋白的表达水平明显降低；同时α-SMA、Collagen I mRNA及蛋白表达水平亦明显降低；靶向封闭A1R或A2AR基因的表达可明显抑制HSC-T6细胞的活化增殖。结论靶向封闭A1R或A2AR基因的表达可明显抑制HSC-T6细胞的活化增殖,A1R和A2AR可能是潜在的酒精性肝纤维化的治疗靶点。

低分子量肝素乙酰化物的理化特性及其体外抗肿瘤活性研究

目的：合成低抗凝血性低分子量肝素乙酰化物( ALM-WH),并对其理化性质、抗肿瘤活性进行检测。方法采用高碘酸钠氧化,硼氢化钠还原法对普通肝素( UFH)进行选择性裂解,制得低抗凝血性低分子肝素( LMWH),以N,N二环己基碳二亚胺和二甲氨基吡啶( DCC/DMAP)为催化剂,对其进行乙酰化,制得ALMWH,经X线衍射( XRD)和差示扫描量热( DSC )试验,分析其构型和理化性质。以乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞为模型,检测其抗增殖、抗侵袭转移能力。利用家兔全血激活凝血时间实验( ACT)检测其抗凝血活性。结果 XRD测得ALMWH与LMWH同属无定形结构,但DSC热损失曲线和LMWH明显不同。与LMWH比较,ALMWH含有更多的结合水较低的抗凝血活性。更有意义的是,在低浓度下ALMWH即表现出较LMWH强的抗肿瘤细胞增殖、转移的活性。结论 ALMWH抗凝血活性低,具有一定的抗肿瘤增殖及侵袭转移的作用。本研究为低毒性抗肿瘤药物筛选提供了基础方法。

磷酸化蛋白EBP50通过降低ERK1/2活性抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖能力

目的：探讨磷酸化蛋白EBP50对乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖的影响及其潜在机制研究。方法使用 pGPU6/Neo载体构建稳定敲除EBP50表达的MCF-7细胞株，使用Western blot检测乳腺癌细胞中EBP50、c-myc、p-ERK1/2以及ERK1/2的表达，使用磺酰罗丹明B染色方法检测乳腺癌细胞增殖。结果使用 pGPU6/Neo 载体可以稳定地降低MCF-7细胞中EBP50的表达，敲除EBP50可以促进乳腺癌细胞增殖，同时促进c-myc的表达，上调ERK1/2的磷酸化水平，但不影响ERK1/2的表达。结论 EBP50可以通过抑制ERK1/2活性，抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖能力。

天麻素通过激活AMPK通路减少油酸诱导的HL-7702细胞脂肪蓄积

目的：研究天麻素( GSTD)对油酸( OA)诱导的 HL-7702细胞脂肪蓄积的抑制作用,并探讨其可能的细胞信号通路。方法以噻唑蓝( MTT)法测定GSTD对HL-7702细胞存活率的影响；以1 mmol·L-1的OA处理24 h诱导细胞脂肪变性,同时加入不同浓度的GSTD,油红O( ORO)染色观察细胞脂肪蓄积情况并测定细胞内三酰甘油( TG)含量；以Western blot检测GSTD处理后细胞中AMPKα和ACC的磷酸化水平；以compound C处理细胞,研究其对GSTD药效的影响。结果 GSTD浓度≤3386．5μmol·L-1时对HL-7702细胞没有明显毒性。 OA处理24 h后细胞中出现大量脂滴蓄积,TG含量明显增加,但同时加入浓度为169．3或338．7μmol·L-1的GSTD可明显抑制HL-7702细胞的脂肪蓄积,并使TG含量分别平均下降35%和43．6%(与单加OA的细胞比较P<0．01)。 GSTD处理后能时间和浓度依赖性地增加细胞中的p-AMPKα和p-ACC水平,compound C能完全阻断GSTD对AMPK通路的激活作用以及减少肝细胞TG蓄积的作用。结论 GSTD可明显抑制OA诱导的HL-7702细胞脂肪蓄积,降低TG含量,其作用依赖于细胞中AMPK通路的激活。

脑室给予不同剂量的Capsazepine对LPS致大鼠发热过程的影响

目的：在大鼠侧脑室内给予不同剂量的瞬时受体电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)拮抗剂Capsazepine,观察对LPS致热过程的影响。方法在侧脑室内预先给与3种剂量Capsazepine,随之腹腔给与LPS致热。在腹腔内埋植发射子遥测体温变化过程,同时应用荧光测定法检测下丘脑细胞内钙离子浓度的变化,Western blot方法检测TRPV1表达水平。结果随着Capsazepine剂量增大,LPS致大鼠发热水平升高,下丘脑细胞内钙离子浓度减少,TRPV1表达水平降低。结论 Capsazepine作用于大鼠下丘脑,可使LPS诱导的发热水平提高,此效应可能与TR-PV1的作用有关。

Bcl-2介导的芹菜素抗心肌细胞缺氧/复氧损伤作用

目的：探讨芹菜素( apigenin, Api)在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用,并阐明Api对心肌损伤的保护作用是否主要由Bcl-2介导。方法培养H9c2心肌样细胞；随机分为正常对照( Cont )组、缺氧/复氧( Anoxia/Reoxygenation, A/R)组、Api预处理组、Api+ABT-737组。 MTT法检测细胞存活率；Western blot法检测Bcl-2表达；比色法检测培养液LDH活性、细胞SOD及GSH-Px活性、MDA含量；流式细胞仪检测心肌细胞 ROS 含量、线粒体膜电位及细胞凋亡。结果 Api预处理25 h后,心肌细胞Bcl-2表达呈剂量依赖性上调( P <0．01)；细胞存活率升高,培养液 LDH 活性降低,细胞SOD、GSH-Px 活性升高, MDA 含量与 ROS 生成减少,线粒体膜电位更为稳定,细胞凋亡减少( P<0．01)；Bcl-2抑制剂ABT-737则可取消Api的上述心肌保护作用。结论Api抗心肌A/R损伤作用涉及Bcl-2信号通路,至少部分依赖于其对Bcl-2表达水平的上调。

通心络联合阿托伐他汀、阿司匹林对家兔动脉粥样硬化早期血管外膜滋养血管新生的干预作用

目的：观察通心络联合阿托伐他汀、阿司匹林对家兔动脉粥样硬化早期颈动脉外膜滋养血管新生的影响。方法72只健康♀♂各半新西兰白兔随机分为对照组、模型组、通心络(TXL)组、阿托伐他汀(ATO)组、阿司匹林(ASP)组、金三角(ATS)[1]组,各12只。对照组给予普通饲料、模型组及各用药组家兔均实施单侧颈动脉硅胶管包裹术复合高脂饲料喂养,TXL 组给予通心络超微粉混悬液0．3 g·kg-1· d-1灌胃,ATO 组给予阿托伐他汀2．5 mg·kg-1·d-1灌胃, ASP 组给予阿司匹林12 mg·kg-1·d-1灌胃,ATS 组给予通心络超微粉混悬液0．3 g·kg-1·d-1加阿托伐他汀2．5 mg ·kg-1·d-1加阿司匹林12 mg·kg-1·d-1灌胃,连续给药4周后取材,HE 染色观察颈动脉内中膜的变化；免疫组化法检测颈动脉外膜CD34表达情况；微球检测颈动脉微血管血流量的变化；RT-PCR 和Western blot 检测颈动脉组织中 VEGF、VEGFR-2基因和蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组VEGF、VEGFR-2基因和蛋白表达以及微血管血流量明显增强(P <0．01)。与模型组比较,各用药组VEGF、 VEGFR-2基因和蛋白表达以及微血管血流量明显减弱(P <0．01,P <0．05)。与其他用药组比较,ATS 组VEGF、VEGFR- 2基因和蛋白表达以及微血管血流量明显减弱(P <0．01,P <0．05)。与ASP 组比较,TXL 组、ATO 组VEGFR-2蛋白表达均明显降低(P <0．05),ATO 组微血管血流量减少明显(P <0．05)。TXL 组与ATO 组两组间比较差异无显著性(P >0．05)。VEGF、VEGFR-2基因和VEGF 蛋白表达组间比较无统计学意义(P >0．05)。各用药组颈动脉外膜CD34表达减少。结论“ATS”方案有助于减少动脉粥样硬化早期颈动脉VEGF、VEGFR-2表达,抑制血管外膜滋养血管新生,减少促炎物质进入血管中膜、内膜,延缓动脉粥样硬化进程。

杜仲提取物中五个成分血浆蛋白结合率的测定

目的：测定杜仲药材中5个成分的血浆蛋白结合率。方法采用平衡透析法测定血浆蛋白结合率，生物样本用甲醇沉淀蛋白进行处理，以葛根素为内标，利用超高效液相色谱-串联质谱仪测定血浆和缓冲溶液中的5个成分浓度。结果在所研究浓度范围内，京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷的平均蛋白结合率分别为(25．77±2．68)%、(57．54±3．79)%、(53．91±3．00)%、(24．15±4．92)%、(49．78±3．61)%。结论京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷的蛋白结合率较低，原儿茶酸、绿原酸和松脂醇单葡萄糖苷则与大鼠血浆蛋白有中等强度的结合。

酶解法与LC-MS-MS相结合研究灯盏乙素在健康人体内的药代动力学

目的：建立β-葡萄糖醛酸苷酶解法与LC-MS-MS法相结合测定人体血浆中灯盏乙素的苷元,研究健康男性单剂量口服灯盏花素分散片的药代动力学。方法血浆样品经β-葡萄糖醛酸苷酶水解,甲醇蛋白沉淀,色谱柱为Agilent ZOR BAX SB C18(2．1 mm ×150 mm,5μm),运用乙腈-甲醇-水洗脱,多反应监测(MRM)灯盏乙素苷元([M - H]-,m/ z 285．0/136．8)和内标槲皮素([ M - H]-, m/ z 301．1/120．8)。12名健康男性单剂量口服灯盏花素分散片120 mg 后,采用该方法测定血浆中灯盏乙素苷元,使用DAS 1.0软件处理数据,计算药代动力学参数。结果灯盏乙素苷元在4．01~513．38μg·L-1范围内线性良好,日内日间精密度小于7．22%,提取回收率大于84．23%。12名健康男性单剂量口服灯盏花素分散片120 mg 后,以灯盏乙素苷元为检测对象的主要药动学参数为：Cmax (μg·L-1)：159．97±58．14； AUC(0-19)(μg·L-1·h)：1151．37±279．80；AUC(0- ∞)(μg· L-1·h)：1194．13±264．51；Tmax (h)：6．33±1．67；T1/2(h)：2．83±0．60。结论建立的酶解与LC-MS-MS 相结合分析方法准确灵敏,适用于灯盏乙素人体内的药代动力学研究。

PLCE1调控p53诱导食管癌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨磷脂酶Cε1( PLCE1)基因抑制食管癌细胞凋亡的作用机制。方法选用人食管癌细胞株OE33和CP-C作为研究对象。采用qRT-PCR、Western blot法分别检测转染PLCE1 siRNA前、后食管癌细胞OE33和CP-C中PLCE1、p53 mRNA和蛋白水平的表达；甲基化特异性PCR重亚硫酸盐法检测p53启动子区甲基化状态；流式细胞仪检测细胞凋亡。结果食管癌细胞株OE33和CP-C均高表达PLCE1,抑制PLCE1表达后食管癌细胞CP-C中p53表达上调并促进p53去甲基化,细胞凋亡明显增加。结论 PLCE1通过促进p53启动子区甲基化抑制p53的表达,从而抑制食管癌细胞凋亡。

脑源性生长因子参与疼痛-抑郁共病的研究进展

疼痛和抑郁症存在共病联系,两者之间可能存在共同的神经解剖机制及分子机制。近年来研究发现,中枢神经系统中的脑源性生长因子( brain-derived neurotrophic factor,BD-NF)在疼痛-抑郁共病过程中发挥重要作用,BDNF也逐渐成为疼痛及抑郁症的研究热点及治疗靶点。该文就BDNF参与疼痛-抑郁共病的机制及外周血BDNF在疼痛、抑郁症的诊治中的意义做论述。

认知过程中的表观遗传学机制

该文首先对什么是表观遗传学及其细胞学基础作了介绍,随后,对认知功能中的表观遗传学机制的研究进展进行了综述。各方面研究一致证明,在海马、皮层及其它脑区发生的表观遗传学改变如组蛋白的乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化、多聚( ADP-核糖)聚合酶化和DNA甲基化可稳定地改变动物的行为,包括学习、记忆、突触可塑性、抑郁、药物成瘾等。不过,在长记忆和突触可塑形成过程中,需要CREB结合蛋白CP的存在并与CREB相结合,后导致与记忆及突触可塑性有关的基因(如Zif/268,Greb,Bdnf,Reelin等)的转录和表达。相反,在衰老和神经退行性疾病脑内出现表观遗传学的异常改变,如组蛋白低甲基化、组蛋白去乙酰化转移酶活性增加等。鉴于上述,对神经退行性疾病的治疗策略是：提高组蛋白乙酰化和组蛋白、DNA甲基化,应用 HDAC抑制剂及RNA干扰( RNAi)可有效地改善记忆,提高突触可塑性和阻遏学习记忆下降。

α-突触核蛋白与Cu2+相互作用的研究进展

帕金森病是一种慢性中枢神经系统退行性疾病,其主要的病理特征是黑质致密部多巴胺能神经元丢失,残存神经元胞质中出现路易小体,其主要成分是异常聚集的α-synu-clein蛋白(α-突触核蛋白)。α-synuclein的聚集与多种因素有关,其中金属离子与α-synuclein结合可导致蛋白构象发生变化引起蛋白发生聚集。近年的研究发现,Cu2+能够特异地结合α-synuclein蛋白,并诱导α-synuclein 的聚集。该文就Cu2+与α-synuclein相互作用的的结合位点、结合模式以及Cu2+在α-synuclein毒性形式中可能发挥的作用作一综述。

缺血性脑中风中与内质网应激相关炎症反应研究进展

内质网是机体微环境的重要组成结构和功能单位，内质网内稳态失衡导致的内质网应激成为近年来的一个研究热点。该文主要针对内质网应激在缺血性脑中风中的作用及相关信号通路的研究进展进行综述，特别对内质网应激触发脑中风炎症反应的机制进行了系统的整理和总结，以期为缺血性中风的防治提供新的研究思路。

HMGB1在呼吸系统疾病中的作用及其机制

高迁移率族蛋白 B1( high-mobility group box 1, HMGB1)是一种保守的核蛋白,对维持核小体稳定、DNA重组、复制、修复及转录有重要作用。其可由坏死的细胞被动释放,或在适宜刺激下主动分泌至胞外。近年的研究显示：HMGB1信号的活化与肺损伤、肺纤维化、肺癌等肺部疾病的发展密切相关,而阻断HMGB1信号可抑制其病理进程,说明HMGB1的抑制对这类疾病有潜在治疗价值。该文就HMGB1在呼吸系统疾病中的作用及其机制作一综述,以期为上述疾病的诊断和治疗提供新的理论依据。

编委会（Editorial Board）

中枢5-HT能系统在早发性抑郁中的作用研究

早发性抑郁的发病机制尚不明确。现仅有选择性5-HT重摄取抑制剂( selective serotonin reuptake inhibitors, SS-RIs) SSRIs批准用于临床治疗早发性抑郁,显示出五羟色胺(5-hydroxytryptamine/serotonin,5-HT)5-HT是早发性抑郁发病机制中重要的神经递质。目前有关中枢5-HT能系统在早发性抑郁中的作用研究主要集中在5-HT合成不足、5-HT运输功能障碍等方面,并与5-HT能系统较早发育成熟有关。色氨酸吸收障碍以及5-HT合成障碍都会导致5-HT合成不足；同时,5-HT转运体蛋白(5-HTT )基因多态性位点5-HT-TLPR低转录效率基因型可能会增加早发性抑郁的患病风险。为进一步理解中枢5-HT能系统在早发性抑郁中的作用,未来需要进行更广泛更深入的基础及临床研究。

雷帕霉素诱导细胞自噬在衰老相关疾病中的作用

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mammalian target of rapamy-cin, mTOR)是衰老和衰老相关疾病的一个关键调节因子。雷帕霉素( rapamycin, RAPA)可通过抑制mTOR通路,诱导和促进细胞自噬的发生。细胞自噬是维持细胞内稳态的主要方式与途径,通过降解多余的、受损的及衰老的蛋白与细胞器,为细胞重建、再生和修复提供必需原料。早老症( hutchinson-gil-ford progeria syndrome, HGPS )患者细胞中伴随早老蛋白( progerin)的异常聚集；此外,诸如亨廷顿病、帕金森病、阿尔茨海默病等神经退行性疾病细胞内同样出现异常蛋白质的聚集,而这些异常蛋白的清除正依赖于细胞的自噬作用。由此可见,雷帕霉素是潜在的抗衰老、治疗早老症及衰老相关疾病的重要药物。该文主要阐述雷帕霉素促进细胞自噬方面的功能及在HGPS、神经退行性疾病方面的应用。

《中国药理学通报》投稿与阅读须知

黄芩素对胆汁外排转运体MRP2和BSEP的影响

多药耐药相关蛋白2( MRP2/ABCC2)属于ABC转运蛋白超家族,肝脏细胞所表达的MRP2,能介导一些有机阴离子的转运,例如葡萄糖醛酸盐结合物等物质的转运[1]。胆汁酸盐输出泵转运蛋白( BSEP)是肝脏中参与胆汁外排转运的另一重要的转运体,主要介导单价胆汁酸、硫酸盐胆酸等转运过程。在肝细胞中MRP2和BSEP相互协调,可以介导胆汁的排泄,这两种转运体的表达均可以在转录和转录后两个水平上受到调节[2-3]。有文献报道,核转录因子 Nrf2可以影响MRP2底物的分泌和排泄,Nrf2能够在异物的刺激下与MRP2基因增强子近端的 ARE 元件结合而调控其表达[4]。

甘遂与甘草合用对甘遂毒性成分甘遂萜酯A、甘遂萜酯B代谢的影响

目的：研究甘遂与甘草合用对甘遂中毒性成分甘遂萜酯A ( Kansuinine A, KA)和甘遂萜酯B ( Kansuinine B, KB)代谢的影响。方法将正常对照组、甘草组、甘遂与甘草合用组大鼠给予相应药物处理10 d后,制备肝微粒体。将甘遂的毒性成分KA、KB与各组肝微粒体进行体外共孵育,测定孵育后体系中KA、KB的浓度,用于评价KA、KB的代谢情况。另取正常大鼠肝微粒体,分别加入 CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19的抑制剂红霉素、盐酸苯海拉明、苯溴马隆、西咪替丁和氟康唑,与KA、KB进行体外共孵育,检测孵育后体系中KA、KB的浓度,阐明参与KA、KB代谢的CYP酶亚型。取正常大鼠肝微粒体,分别加入甘草酸与甘草次酸,与KA、KB体外共孵育,测定孵育后体系中KA、KB的浓度,评价甘草酸与甘草次酸对KA、KB代谢的影响。结果甘遂与甘草合用组微粒体中KA、KB的含量明显高于正常对照组和甘遂组,表明甘遂与甘草合用使甘遂中毒性成分KA、KB的代谢受到抑制。与红霉素、盐酸苯海拉明、苯溴马隆、西咪替丁和氟康唑共孵育的微粒体中KA、KB的含量均明显高于空白对照组,表明 CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19均参与了KA、KB的代谢。与甘草酸和甘草次酸共孵育,体系中KA、KB的浓度明显高于空白对照组。CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2表明甘草酸和甘草次酸能够抑制KA、KB的代谢。结论 CYP2C19均可能参与了甘遂毒性成分 KA、KB 的代谢,甘遂与甘草合用能够抑制CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2及CYP2C19的活性,而使KA、KB的代谢减慢,产生蓄积；另外,甘草中主要成分甘

黄芪和三七的主要有效成分配伍对脑缺血/再灌注小鼠NF-κB信号通路及炎性因子表达的影响

目的：从炎症反应探讨黄芪和三七主要有效成分配伍抗脑缺血/再灌注损伤的机制。方法将 C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷( AST Ⅳ)组、人参皂苷Rg1(Rg1)组、人参皂苷Rb1(Rb1)组、三七皂苷R1(R1)组、4种有效成分配伍组、ASTⅣ+Rg1组、ASTⅣ+Rb1组、ASTⅣ+R1组及阳性对照药依达拉奉组。预先给药3 d,末次给药1 h后,结扎双侧颈总动脉,造成脑缺血20 min,再灌注24 h。 RT-PCR法测定TNF-α、IL-1β、ICAM-1 mRNA表达,West-ern blot法测定脑组织p-IκBα蛋白及胞质、胞核NF-κB蛋白表达,计算NF-κB核转位率。结果①脑缺血/再灌注后,脑组织TNF-α、IL-1β、ICAM-1 mRNA表达增加。 ASTⅣ可降低TNF-α mRNA 表达, Rg1可降低 ICAM-1 mRNA 的表达, R1能同时下调 TNF-α、ICAM-1 mRNA 的表达。 AST Ⅳ与Rg1、Rb1、R1配伍对TNF-α、IL-1β、ICAM-1 mRNA的表达均有不同程度的抑制作用,且以4种有效成分配伍组和 ASTⅣ+R1组对炎性细胞因子表达的抑制效应更加明显。②脑缺血/再灌注后,脑组织p-IκBα蛋白表达明显增加,胞质NF-κB蛋白表达明显减少,而胞核NF-κB蛋白表达增加,NF-κB核转位率升高。 ASTⅣ、Rg1、R1及各有效成分配伍均能抑制IκB磷酸化,减少NF-κB核转位的发生,且配伍组的效应大于各有效成分单用,4种有效成分配伍组的效应大于ASTⅣ+Rb1和ASTⅣ+Rg1组。结论黄芪和三七的主要有效成分配伍能通过抑制缺血/再灌注后脑组织NF-κB信号通路的激活,减少炎性细胞因子的生成,从而减轻脑缺血后脑组织的继发性炎症反应,发挥对脑组织的保护作用。

敬告读者