鲍曼不动杆菌耐药表型与外排泵基因表达水平的研究

目的 探讨鲍曼不动杆菌临床分离株对常用抗菌药物的耐药性及与外排泵adeA基因表达水平之间的关系.方法 琼脂二倍稀释法检测鲍曼不动杆菌临床分离株对17种常用抗菌药物的低抑菌浓度(MIC);PCR法扩增外排泵编码基因adeA:实时荧光定量RT-PCR(Real Time Fluorescent Quantitative RT-PCR)法检测adeA基因的mRNA表达水平.结果 药敏结果显示86株鲍曼不动杆菌对多粘菌素B全部敏感(100%),其次是美罗培南(73.2%)、亚胺培南(70.9%).耐药率高的是庆大霉素(84.9%),其次为美罗西林(83.7%)和环丙沙星(79.1%).55株菌为多重耐药株(64%),其中5株(5/86)对多粘菌素B外的所有抗菌药物耐药(5.8%).adeA的检出阳性率为84.9%(73/86),Real Time RT-PCR结果显示多重耐药菌株adeA基因的mRNA相对表达量均高于敏感菌株,其中3株相对表达量为敏感菌株平均表达水平的30倍以上.结论 鲍曼不动杆菌临床分离株耐药情况严重,其主动外排系统adeA基因表达增强在多重耐药性形成中起重要作用.

耐甲氧西林金葡菌对抗菌药物的耐药表型和基因型分析

目的 了解来自汕头和北京地区的67株耐甲氧西林金葡菌(MRSA)的耐药情况及耐药机制,并分析耐药表型与基因型的一致情况.方法 以琼脂稀释法测定24种抗菌药物对MRSA的体外抗菌活性,PCR扩增MRSA的耐药基因,nitrocefin测定细菌产β-内酰胺酶的情况.结果 67株MRSA除了对氯霉素和多西环素的耐药率较低,分别为3%和7.5%,对万古霉素、米诺环素和利凡诺100%敏感外,对利福平的耐药率为52.2%,对四环素的耐药率为77.6%,而对于其它包括青霉素、第1～4代头孢菌素、单环β-内酰胺类、碳青霉烯类、氨基糖苷类和磺胺类的耐药率均在80%～90%以上,氨苄西林加酶抑制剂以后则耐药程度有所降低.qacA/B、mecA、tetM、NorA、gyrA、aac(6')/aph(2")、aph(3')Ⅲ和β-内酰胺酶检出率分别为11.9%、95.5%、70.1%、4.5%、10.4%、82.1%、73.1%和92.5%,未检出qacC、ant(6)-I、ant(2")-I、VanA和VanB耐药基因.67株MRSA均携带有多种耐药基因:同时携带2种耐药基因的有7株,3种的有10K,4种的有11株,5种的29株,6种的10株.结论 67株MRSA耐药情况严重,并同时携带多种耐药基因.

安徽省产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌的耐药性及基因型分析

目的 了解2007年安徽地区产质粒介导AmpC酶的大肠埃希菌枪出率及产酶株基因型.方法 三维实验进行AmpC酶筛选;并行转移接合实验,PCR检测AmpC酶基因,琼脂稀释法进行药物敏感试验.结果 21株大肠埃希菌三维实验阳性,占所有临床分离菌株的5.9%(21/355),19株经PCR检测携带ampC基因,16株转移接合成功,经序列分析表明,9株CIT阳性结果,6株DHA阳性结果,3株EBC阳性结果;1株同时携带EBC及DHA基因.其中有1株EBC型新基因被枪出(序列号为FJ237369);药敏结果显示临床分离菌株及接合子对多种抗菌药物耐药,对头孢吡肟,亚胺培南,美罗培南相对较敏感.结论 安徽地区大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶以CIT型和DHA型为主,同时存在变异型,临床可选用第四代头孢菌素类抗菌药物,碳青霉烯类抗菌药物抗感染治疗.

广州地区产IMP-9金属酶铜绿假单胞菌的再调查

目的 调查广州地区部分医院2007年10月到2008年11月的铜绿假单胞菌泛耐株,筛榆出其中产IMP-9金属酶的菌株并分析其同源性,对比2005-2007年初广州地区多家医院曾出现的产IMP-9金属酶铜绿假单胞菌的克隆株,分析近期广州地区是否还有该流行株的存在.方法 Q-PCR筛选产IMP-9金属酶的铜绿假单胞菌,ERIC-PCR对产酶株进行同源性分析.结果 从2007年10月到2008年11月收集广州7家大型医院的269株铜绿假单胞菌泛耐株,共检测出携带IMP-9金属酶的铜绿假单胞菌10株,均来自同一医院.ERIC-PCR检测,10株均为同一基因型的克隆株,但与前期曾出现的产IMP-9金属酶克隆株无同源性.结论 产IMP-9金属酶铜绿假单胞菌的院内克隆传播仍然存在,而医院间的传播在本次调查中没有发现.因此,仍需继续加强对铜绿假单胞菌定植患者的监控和加强院内感染的管理控制.

四环素及β-内酰胺耐药性基因芯片的制作及优化

目的 优化四环素及β-内酰胺耐药性基因芯片制作和杂交条件.方法 设置多组实验,逐一改变影响寡核苷酸在玻片表面固定及芯片杂交效率的实验条件,从中优化出芯片实验的佳条件.结果 得出的佳条件是:探针以30 pmol/μL的终浓度溶于50%二甲基亚砜中,在温度为20℃、湿度70%的条件下点制在基片上;荧光探针纯化后使用2×杂交液在42℃湿盒中杂交5 h.结论 优化出了耐药基冈芯片制作和杂交的佳条件,总结出芯片制作优化的方法.

Hsp90和真菌耐药性

近年来的研究发现,热休克蛋白90(Hsp90)作为一种高分子量的分子伴侣,不仅可以辅助胞内蛋白质的折叠和转运,还可以调节细胞内的信号传导,增强微牛物细胞的耐药性.本文主要就Hsp90的结构、功能、使真菌产生耐药性的作用机制,和Hsp90抑制剂的研究进展等方面进行了综述.

青霉烯类抗生素双环母核合成研究进展

本文综述了近年来青霉烯类抗生素双环母核的合成进展情况.在各种合成方法中,Wittig环合法逐步发展起来,得到各方而的改进.改进的wittig环合法在青霉烯双环母核合成中起到重要作用.该方法可以被推广使用.

高效液相色谱法测定左旋尤利沙星的含量及有关物质

目的 建立测定左旋尤利沙星含量及有关物质的高效液相色谱方法.方法 采用Diamonsil C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.2%三乙胺和0.1%庚烷磺酸钠水溶液(用磷酸调节pH 2.5)(25:75)为流动相,流速为1.0ml/min,检测波长为275nm,柱温为35℃.结果 主峰能与相邻杂质峰达基线分离,左旋尤利沙星的浓度在10～200μg/ml范围内线性关系良好,相关系数为0.9996,低检测限为0.2ng.结论 该法简便、准确,灵敏度高,专属性强,可以用于左旋尤利沙星的含量及有关物质的测定.

PLA/CoFe_2O_4载药微球的制备、表征及释药性能

采用 乳化-溶剂挥发法制备了聚乳酸(polylactie acid,PLA)载硫酸庆大霉素复合微球.通过正交设计实验优选PLA载药微球的佳实验条件.在此基础上利用微乳法制备的铁酸钴(CoFe2O4)制备了PLA/CoFe_2O_4载硫酸庆大霉素复合微球.通过透射电子显微镜(TEM)、X-射线衍射(XRD)、振动样品磁强计(VSM)对铁酸钴进行微观结构表征和性能分析.采用傅立叶变换红外光谱(FT-IR),扫描电子显微镜(SEM)、生物数码显微镜对聚乳酸载药微球和PLA/CoFe_2O_4载药微球进行了微观结构的表征和分析.结果 表明两种载药微球呈规则球形,表面光滑,分布较均匀,平均粒径约为20μm.通过体外模拟释药试验考查了PLA载药微球和PLA/CoFe_2O_4载药微球的释药性能.结果 表明聚乳酸作为药物载体具有明显的药缓控释作用,PLA/CoFe_2O_4载药微球药物释放持续的时间长.

对USP与BP替卡西林HPLC方法分离替卡西林差向异构体的比较

目的 研究USP与BP替卡西林HPLC方法对替卡西林差向异构体分离效应的影响.方法 考察EP流动相系统:1.3g/L的磷酸铵(用磷酸调pH7.0):甲醇=80:20及USP系统:pH4.3磷酸二氢钠缓冲液:乙腈=92:8中,替卡西林差向异构体的分离耐用情况.结果 在USP系统中,替卡西林差向异构体未完全分离或完全重合为单峰;在EP系统中,则完全分离为2个单峰.结论 离子强度对替卡西林差向异构体的分离效应影响较大,离子强度越小,分离越好,耐用性越好.

西罗莫司脂质体的制备及处方因素考察

目的 制备西罗莫司脂质体并对处方进行筛选,以期得到高包封率的脂质体制剂.方法 选用乙醇注入法制备西罗莫司脂质体,微柱离心-HPLC法测定包封率,以包封率为评价指标,考察磷脂浓度、磷脂胆固醇质量比、药脂比、水相介质pH等因素对脂质体的影响,在此基础上运用正交设计对处方进行优化.结果 正交试验结果表明磷脂浓度为4%,磷脂与胆固醇质量比例为8:1,药物磷脂质量比为1:20,水相pH为7.4为佳处方,制得的脂质体包封率为(82.11±2.13)%.结论 优选出佳处方,制得的西罗莫司脂质体包封率高,重现性好.

酒石酸泰乐菌素在多壁碳纳米管修饰电极上的电催化氧化及电化学动力学性质

目的 研究酒石酸泰乐菌素(tylosin tartrate,TT)在多壁碳纳米管修饰玻碳电极(MWCNT/GCE)上的电催化氧化及其电化学动力学性质.方法 用循环伏安法(CV)、线性扫描伏安法(LSV)、计时库仑法(CC)和计时电流法(CA)等多种电化学方法进行研究.结果 在Na2SO4底液中,TT在裸电极上无明显氧化峰,而在MWCNT/GCE上于0.90 V附近出现一不可逆氧化峰.测得TT在MWCNT/GCE上电极反应动力学参数:电荷转移系数α=0.77,扩散系数D=8.18×10~(-5)cm~2/s,电极反应速率常数K_f=2.08×10~(-3)cm/s.结论 MWCNT/GCE对TT具有明显的电催化氧化作用,据此研究结果可建立TT的电化学定量测定方法.

毛细管胶束电动色谱-紫外间接检测环胞素制剂中的有机溶剂

用毛细管胶束电动色谱-紫外间接检测环胞素软胶囊及环胞素注射液中的有机溶剂含量.采用非涂层弹性石英毛细管;操作缓冲液为含0.26mol/L十二烷基硫酸钠的0.02mol/L苯巴比妥钠溶液(pH9.0);检测波长为235nm(间接检测);电泳过程中在进样端始终外加适当的压力使基线保持稳定.以甲醇为内标物,乙醇和1,2-丙二醇均在2.6～18mg/ml范围内呈良好的线性关系.连续进样分析所得峰面积和迁移时间的相对标准偏差均不大于1.3%.环胞素软胶囊中乙醇和1,2-丙二醇含量测定方法的回收率分别为99,2%和100.7%;环胞素注射液中乙醇含量测定方法的回收率为99.5%.

铝(Ⅲ)-莫西沙星体系的荧光特性及莫西沙星片的含量测定

目的 建立表面活性剂增敏,荧光光度法测定莫西沙星(moxifloxacin,MXFX)的含量.方法 基于在pH6.0的缓冲溶液中,铝(Ⅲ)对莫西沙星的荧光强度有显著的增敏作用,建立了铝(Ⅲ)增敏,荧光光度法快速测定莫西沙星的新方法.结果 将该方法用于MXFX片剂的测定,样品平均回收率为100.84%,RSD=1.04%,检出限为7.9×10-10 mol/L.结论 该方法简便、快捷、准确.

184株肠球菌的临床分布及耐药性分析

目的 了解184株肠球菌临床分布,测定其对13种抗生素的敏感性,为临床治疗肠球菌感染提供指导.方法 用Microscan Walkaway40全自动细菌鉴定及药敏分析系统,对2005年10月～2008年8月间从我院临床标本中分离出的184株肠球菌进行鉴定及药敏试验,用WHONET5.4统计软件对数据进行统计分析.结果 184株肠球菌中粪肠球菌133株(72.3%),屎肠球菌32株(17.4%),其它种类肠球菌19株(10.3%).药敏结果显示对肠球菌敏感的是万古霉素,其次是利奈唑烷、呋喃妥因、氨苄西林、青霉素和氯霉素,耐药的则是红霉素和四环素.屎肠球菌对大多抗生素的耐药率要高于粪肠菌,但是氯霉素和四环素例外.所有肠球菌未发现耐万古霉素的菌株. 结论肠球菌是医院感染的重要病原菌,不同种类的肠球菌耐药性差别很大,我们在抗感染治疗时应根据药敏试验结果,合理选用抗生素以减少耐药菌株的产生.

响应面设计优化盐霉素发酵条件

利用SAS,Minitab和Design-Expert软件,采用Placket-Burman设计和中心组合设计对盐霉素的发酵条件进行优化.并运用响应面方法对盐霉素发酵条件进行进一步的分析,根据建立的多元二次方程确定其佳水平,得到佳的培养基:糊精4.5%,玉米浆0.6%,黄豆粉0.3%,氯化钾0.3%,硝酸铵0.3%,磷酸氧二钾0.04%,豆油10%,碳酸钙0.1%.培养条件为:接种量10%,pH 7.0,摇床转速为250r/min,培养周期10d.在此优化条件下得到盐霉素发酵单位比优化前的产量提高了44%.

融合头的改变对抑制重组抗菌肽毒性的影响

为进一步完善G13结构域的原核表达系统,人工合成编码G13的基因片段,PCR扩增后克隆于原核表达载体pET28a中,构建的重组质粒pET28a-G13转化于E.coli BL21(DE3)中.另外对pET28a-G13进行突变,改变其G13片段N端上游处的融合头的电荷数,转化于E.coli BL21(DE3)中.构建pThiohisA突变体并与pET28a-G13共转化于E.coli BL21(DE3)中.用诱导剂诱导所构建的各个工程菌,然后比较A_(600)值变化及蛋白表达量,分析不同的融合头对G13毒性抑制效果,发现融合头对G13毒性抑制效果与其净负电荷数及酸性氨基酸的相对位置有关.

N-(3-甲基-1-吡咯烷基)-1-丁酮基-乙酰胺的合成研究

以BOC-L-缬氨酸羟基琥珀酰亚胺酯为原料,两步反应合成IL-1R/MyD88-TIR拟似物N-(3-甲基-1-吡咯烷基)-1-丁酮基-乙酰胺,该反应条件温和,操作方便,收率较高,产物结构经NMR和MS得到了确证.

绵羊生殖道提取物生物活性物质检测

目的 检测绵羊生殖道提取物生物活性物质.方法 以健康、新鲜、雌性绵羊生殖器官为实验材料,采用各种生物活性检测方法对绵羊生殖道提取物的活性物质进行了检测.结果 绵羊生殖道提取物具有红细胞凝集、胰蛋白酶抑制剂活性、抗菌活性、抗血浆凝固活性、抗补体活性和低溶血活性,无胰蛋白酶水解活性、局部出血活性.结论 首次证实绵羊生殖道存在抗菌活性物质和蛋白酶抑制剂活性物质.

那西肽对肉仔鸡生长性能及胴体品质的影响

本试验选用120羽1日龄健康Avian肉仔鸡,随机分成3个处理,每个处理4个重复,每个重复10羽,分别饲喂基础日粮(对照组),基础日粮+5mg/kg黄霉素(黄霉素组),基础日粮+2.5 mg/kg那西肽(那西肽组),以探讨那西肽对肉仔鸡生长性能和删体品质的影响.结果 表明:(1)黄霉素组、那西肽组日增重比对照组分别提高了2.04%(P＜0.05)、6.18%(P＜0.05),料重比分别降低了7.73%(P＜0.05)、10.82%(P＜0.05).(2)那西肽组比对照组的屠宰率提高了3.22%(P＜0.05),全净膛率提高了4.19%(P＜0.05),半净膛率提高了3.67%(P＜0.05),胸肌率提高了5.68%(P＞0.05),腿肌率提高了3.71%(P＞0.05),腹脂率降低了18.40%(P＜0.05).黄霉素组与对照组胴体各项指标之间差异不显著(P＞0.05).试验结果表明,饲料中添加那西肽可以明显促进肉仔鸡的生长,改善肉仔鸡的胴体品质,而且那西肽的效果显著优于黄霉素.

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